FAMILIA RETROVIRIDAE. VIRUSUL HIV.

ONCOGENEZA VIRALA

FAMILIA RETROVIRIDAE. VIRUSUL HIV I INFECIA HIV/SIDA

Prima descriere clinic a SIDA 1981 1983HIV a fost identificat la Paris, ins. Pasteur 1986 - propus denumirea HIV (Human Immunodeficiency Virus) 1986 a fost izolat HIV-2, Africa de Vest n prezent 40-60 mln persoane infectate cu HIV, 25 mln decedati In 2010 se estimeaza 85 mln infectati Zilnic se infecteaz 5-6 mii persoane (6 pers/sec) In RM primul caz de infectare cu HIV nregistrat n 1987 (total 8 persoane) Nr de infectai perioada 1987-2007 - 4131, n 2007 731 infectai SIDA 585 persoane, au decedat 155 persoane

Pe parcursul semestrului I al anului 2008 s-au nregistrat 371 cazuri noi de infecie HIV, inclusiv n teritoriul de Est al republicii 142 (6 luni 2007336 i 142 respectiv). Continu scderea ponderii UDI n procesul epidemic al infeciei, constituind 26,20% (2001 78,6%) i sporirea proporiei celor infectai pe cale heterosexual 72,05%. A sporit ponderea femeilor infectate cu HIV de la 26,72 % n 2001 la 44,97% n semestrul I, 2008. La 4 copii ( n 6 luni 2008) s-a confirmat diagnosticul infecia HIV perinatal.

Vrsta cea mai afectat de virusul HIV este de 2034 ani i constituie 62,31%, inclusiv n rndul utilizatorilor de droguri injectabile - 36,14% i pe cale heterosexual - 63,86%. La 38 de persoane infectate cu virusul HIV s-a diagnosticat maladia SIDA. Procesul epidemic a cuprins toate teritoriile administrative i se caracterizeaz prin extinderea infeciei HIV/SIDA att n populaia urban (64,63%), ct i rural (35,37%). Cea mai nalt rspndire a infeciei HIV are loc n mun. Bli i raioanele Basarabeasca, Cueni, Fleti, Hnceti, Rezina, Glodeni, Sngerei, tefan-Vod, iar n teritoriile de Est ale republicii n oraul Tiraspol i raionul Rbnia.

CLASIFICAREA FAM. RETROVIRIDAE

Retroviridae familie numeroas de virusuri ARN dotate cu o enzim numit transcriptaz invers (reverstranscriptaz). ARN ADNd.c Subfamilia Orthoretrovirinae Genurile: Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus (induc tumori i leucemii), Lentivirus (virusul HIV, SIV) Subfamilia Spumaretrovirinae Genul: Spumavirus (nepatogeni)

CARACTERE MORFOSTRUCTURALE GENERALE ALE FAMILIEI RETROVIRIDAE

Dimensiuni 80-130 nm Form sferic Genom dou molecule de ARN+, capacitate de integrare n nucleu sub form de ADN proviral Enzima reverstranscriptaza Capsid icosaedric Supercapsid derivat din MCP, lipidic cu GP virale nserate Ciclul replicativ este identic

VIRUSUL HIV. STRUCTURA I ORGANIZAREA GENOMULUI

HIV-1 i HIV-2 responsabili de Sindromul ImunoDeficienei Achiziionate (SIDA) HIV-1 repartiie mondial HIV-2 limitat la Africa de Vest Particule sferice, 80-120 nm Structura virusului HIV-1 Genomul: diploid 2 molecule de ARN+ identice, nu sunt utilizate n calitate de ARNm Enzime: reverstranscriptaza (RT, p66), integraza (p31), proteaza (p9) Capsida: n form de trunchi de con, constituit din 2 proteine - p24 (CA, a capsidei, major) i p7 (NP, a nucleocapsidei, asociat ARN)

Supercapsida: dublu strat lipidic de origine celular n care sunt nserate 2 GP virale 1. Gp120, de suprafa, asigur fixarea virusului de receptorul celular CD4 i de coreceptori. Regiunea V3 (variabil) induce anticorpi neutralizani specifici 2. Gp41, transmembranar, legat de gp120, responsabil de fuziunea supercapsidei cu membrana celular Proteina p17, (MA), matrice, cptuete stratul intern al supercapsidei, este asociat cu proteaza Genomul, proteinele interne (p24, p7, p17) i enzimele constituie nucleoidul (core) viral
-

Structura genomului (apr. 10 mii nucleotide) Gena gag (group antigens), codeaz proteinele structurale interne (p24, p7 i p17) Gena pol (polimerase), codeaz 3 enzime: RT (p66), integraza (p31), proteaza (p9) Gena env (enveloppe), codeaz o protein precursor gp160, clivat ulterior n gp41 i gp120 Gene regulatoare tat, rev, nef, vif, vpr i vpu (HIV-1) sau vpx (HIV-2)

Omologia dintre HIV-1 i HIV-2 este de 42%, mai nalt la nivelul genelor gag i pol (peste 50%) i redus la nivelul genelor env (39%) Se disting 3 grupe genomice ale HIV-1: M (major), O (outlier) i N (new). Grupul M comport 10 subtipuri (A-H, J i K), repartizate geografic neuniform (majoritatea n Africa, B Europa occidental i America de Nord, F, B Romnia, G Rusia, etc) Structura antigenic toate proteinele i glicoproteinele virale sunt imunogene.

Rezistena HIV HIV este sensibil la solveni lipidici i detergeni, la 56 grade C este inactivat n 30 min, n 5 minute - 0,2 % hipoclorit de Na, 70% etanol, 0,2% glutaraldehid. Labil la pH-uri extreme, radiaii UV i RX Cultivarea - Celule mononucleate de la persoane sntoase - Linii celulare din LT MT2 - Animale sensibile maimuele cimpanzei (HIV-1), Rhesus (HIV-2)

CELULELE-INT I REZERVORUL CELULAR

1. Limfocite TCD4+ (Th) (99% de replicare, ECP-sinciii) 2. CPA: monocite/macrofage tisulare (replicare redus, ECP minim), celulele dendritice (prezente n timus, tegument, mucoase, organe limfoide, SNC i snge perif.), celulele microgliei. Ele au rol de vector i rezervor de virus (adsorb HIV la suprafaa lor i-l transport n organele limfoide, unde el este prezentat celulelor CD4+ n care se replic). Se disting tulpini ale HIV cu tropism macrofagic (M, sau R5), utilizeaz coreceptorul CCR5, i tulpini cu tropism limfocitar (T, sau X4), coreceptorul CXCR4. Limfocitele T pot fi infectate cu ambele tulpini (prezint ambii receptori). n primo-infecie sue R5, n stadiu de SIDA sue X4

CICLUL DE REPLICARE

Ataarea HIV la celula-gazd prin legarea gp120 la receptorul celular CD4. Rezult o modificare conformaional a gp120, ce permite buclei V3 a acestei gp s se fixeze de coreceptorii de pe suprafaa celulei: CCR5 i CXCR4, CCR3, CCR2b .a. Penetrarea NC prin fuziunea supercapsidei (gp41) cu MCP Decapsidarea i eliberarea ARN viral asociat cu RT Retrotranscrierea ARN+ n ADN- (RT). In continuare RT (funcie de RNA-aza H) degradeaz ARN+, apoi transcrie ADN- n ADNd.c., care va fi circularizat, apoi integrat (integraza) n cromozomul celular, constituind provirusul.

Transcrierea ADNv n ARNm i ARN viral prin intermediul ARN-polimerazei II celulare Sinteza proteinelor virale sub controlul factorilor celulari i proteinelor reglatoare Poliproteina gag/pol 160 kd (p17 MA, p24 CA, p7 NC, p9 (proteaza), p66 (RT), p31 (integraza) Poliproteina env 160 kd (gp41 i gp120) Asamblarea NC Eliberarea prin nmugurire la nivelul MCP modificat prin inserarea gp virale gp120 i gp41.

1-10 mlrd de virioni/zi/o persoan infectat Variabilitatea HIV este determinat de erorile comise de RT (o eroare la fiecare 10 mii baze). Mutaiile survin n special la nivelul genei env (bucla V3 din gp120, care intervine n fixarea HIV de coreceptori, reprezint epitopul major de neutralizare). Nu exist 2 tulpini virale identice. La bolnav este prezent o populaie viral polimorf, cu genotipuri diferite Consecine: - dificultatea de a obine vaccin eficient - selecia mutantelor rezistente la antiretrovirale

Mecanismele de distrugere a limfocitelor T CD4: Liza direct a celulelor infectate (ECP) Limfocitele T CD8 elimin limfocitele T CD4 infectate Apoptoz n urma stimulrii antigenice a celulelor care au fost n contact cu Ag HIV Limfocitele infectate, acoperite cu gp120 pot provoca fixarea, fuziunea i moartea limfocitelor neinfectate Hiperstimulare celular cu dezvoltarea anergiei celulare

PATOGENEZA I CLINICA INFECIEI CU HIV

1. 2.

3.

Transmiterea: Cale sexual (hetero-, homo). Cale sangvin (toxicomani, hemofili, transfuzii de snge sau transplante de organe, manopere medicale penetrante injecii, acupunctur, tatuaj, piercing) Cale vertical (in utero n ultimele sptmni de sarcin, n timpul naterii sau n timpul alptrii)

EVOLUIA MALADIEI

Primo-infecia (perioada de timp de la infectare pn la apariia Ac). Durata 4-6-8 sptmni. Are loc multiplicarea intens i diseminarea virusului, scderea numrului de limfocite T CD4 i creterea numrului limfocitelor TCD8. Diminuarea ulterioar a arjei virale i creterea nr LT CD4 este determinat de rspunsul imun specific celular (limf TCD8) i umoral (Ac antigp120, anti-gp41, anti-p24, apar la finele primoinfectiei). Persoana infectat devine seropozitiv. Factorii care influeneaz evoluia primo-infeciei: tipul virusului, raspunsul imun al gazdei i factori genetici (homozigoii cu mutaie la nivelul genei receptorului CCR5 prezint rezisten la infecia cu HIV 1)

Evoluia poate fi asimptomatic sau simptomatic (50%): adenopatie cervical, febr, faringit, ulcere ale mucoasei bucale, oboseal, mialgie, artralgie, erupii cutanate. Durata simptomelor 7 10 zile

 Faza

asimptomatic, de laten clinic (durata variabil: 3 - 18 ani). Virusul se replic n organele limfoide, numrul LT CD4 diminueaz lent sau rmne stabil. Apar variante noi de virus care se multiplic, Sistemul Imun le recunoate i reacioneaz specific, ciclul se repet de multiple ori. Aceasta duce la diminuarea progresiv a LT CD4 i LT CD8 i epuizarea Sistemului Imun, urmat de multiplicarea necontrolat a HIV i dispariia complet a LT CD4.

Faza clinic (SIDA) Numrul LT CD4 - 500-200 celule/ml. Se manifest clinic prin febr cronic, pierdere n greutate, diaree, afeciuni ale tuturor organelor i sistemelor, tumori (sarcomul Kaposi, limfoame), infecii oportuniste cu: Parazii: Toxoplasma, Histoplasma, Leishmania Bacterii: Mycobacterium, Salmonella, enterobacterii condiionat patogene, etc Fungi: Pneumocystis carinii, Cryptococcus neoformans, Cryptosporidium, Candida, etc Virusuri: HSV, HZV, CMV

Rspunsul imun: Celular LT CD8 recunosc i elimin celulele infectate (n special LT CD4) prin citotoxicitate direct (restricie CMH I) sau prin intermediul citokinelor, chemokinelor. Imunitatea celulara este crucial pentru controlul replicrii HIV i are un impact substanial n evoluia infeciei Umoral Ac apar precoce n infecie primar, dar depistarea lor poate fi efectuat dup 6-12 sptmni de la infectare. Rolul neutralizarea virionilor, Ac anti-gp120 mpiedic fixarea HIV pe celulele-int. Eficien maxim n fazele precoce ale infeciei 5-10% din infectai sunt asimptomatici de lung durat: - arj viral redus - Numrul LT CD4 stabil (peste 500 celule/ml) - Rspuns imun celular i umoral constant - Absena semnelor clinice

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIEI HIV/SIDA

Teste indirecte de depistare Teste ELISA de depistare a Ac (dup minimum 22 zile de la contagiu) Teste combinate Ag - Ac (detectarea Ag p24 i Ac antip24 prin tehnici ELISA) Teste rapide (RA cu particule de gelatin sensibilizate cu Ag)
Teste de confirmare (n caz de reacie pozitiv) Tehnica de referin Western-blot (separarea el-for. a proteinelor virale, transferarea lor pe o band de nitroceluloz, tratarea cu serul cercetat, apoi efectuarea RIE). Pot fi detectai Ac contra tuturor Ag HIV.

Testul Western Blot

Criterii de apreciere: un ser este considerat pozitiv dac sunt prezeni Ac contra cel puin 2 Ag de suprafa (gp160, gp120, gp41), asociai cu Ac contra cel puin o protein intern (p24, p17 sau a enzimelor) Teste directe 1. Detectarea Ag p24 (marker direct al infeciei HIV) prin tehnici ELISA. Poate fi detectat n primo-infecie pn la seroconversie. Ag p24 reapare n momentul evoluiei spre SIDA.

2. Detectarea ARN-lui plasmatic sau ADNv prin teste de amplificare genic. Prezena ARNv n ser denot replicarea constant a virusului. Determinarea arjei virale este utilizat pentru monitorizarea unui pacient infectat. 3. Izolarea HIV n cultur Se realizeaz prin inocularea cu plasm sau celule mononucleate de la bolnav a unei culturi de celule mononucleate de la donatori sntoi. Replicarea este detectat prin evidenierea Ag p24, RT sau a ARNv.

Diagnosticul primo-infeciei (markerii virali) ARNv plasmatic (apare dup 8-17 zile de la contagiu) Ag p24 n ser (pn la apariia Ac anti-p24) Ac anti-HIV (dup minimum 3 sptmni de la contagiu) Monitorizarea seropozitivilor Parametrii imuno-hematologici - formula sangvin, determinarea subpopulaiilor de LT (valori absolute, raport T CD4/T CD8), dozarea Ig, microglobulinei beta2 Markerii virali - arja viral plasmatic (ARNv), Ag p24, Ac anti-p24

CHIMIOTERAPIA ANTIRETROVIRAL
1.

2.

3.

4.

5.

Dup mecanismul de aciune: Inhibitori nucleozidici i nucleotidici ai RT (Abacavir, Didanosin, Lamivudin, Stavudin, Zalcitabin, Zidovudin, Tenofovir) Inhibitori nenucleozidici ai RT (Delavirdin, Efavirenz, Nevirapin) Inhibitori ai proteazelor (Amprenavir, Indinavir, Lopinavir, Nelfinavir, Ritonavir, Sanquinavir) Inhibitorii adeziunii i penetrrii n curs de evaluare (CD4, T20) Inhibitor al asamblrii i eliberrii - Interferonul alfa

Binding to surface receptors Fusion of viral and host cell membranes Uncoating of the nucleocapsid Reverse transcription of RNA to DNA Integration of DNA provirus into the host genome Replication (Host DNA polymerase) Transcription (Host RNA polymerase II) RNA splicing in the host cell nucleus (host and viral factors) Translation of viral proteins Proteolysis of viral polyproteins) Glycosylation of gp 160 Phosphorylation of viral proteins Fatty acylation of GAG Assembly of the virus at the host cell membrane Budding Maturation of the virus particle after budding

Indicatii pentru TAR I categorie: pacientii simtpomatici, SIDA sint tratati la orice valoare a celulelor CD4 sau ARN HIV II categorie: pacientii asimptomatici sint tratati daca nivelul celulelor CD4 este < de 350 la orice valoare a ARN HIV III categorie: pacientii asimptomatici si CD4 > 350, sint tratati in functie de nivelul ARN HIV (>50000 copii/ml)

* Pentru identificarea indicatiilor pentru initierea imediata a TAR se recomanda de utilizat numarul de limfocite CD4(< de 200- 350 ) si nivelul ARN HIV(>50000 copii/ml) . De exemplu, tuberculoza pulmonara poate fi prezenta indiferent de numarul de leucocite CD4 si nivelul ARN HIV , iar celelalte criterii clinice (diareea cronica, febra persistenta si al.) pot fi induse de alte cauze care nu sunt legate cu infectia HIV.

Este indicat asocierea a 3 chimioterapice: 2 INRT + 1 IP; 2 INRT + 1 INNRT, 3 INRT, 1 INRT+1 INNRT+IP zidovudina (300 mg) + lamivudina (150 mg)+abacavir (300mg) zidovudina (300 mg) + lamivudina (150 mg) + nevirapina (200 mg) stavudina (40 mg) + lamivudina (150 mg) + nevirapina (200 mg) stavudina (30 mg) + lamivudina (150 mg) + nevirapina (200 mg) pentru pacientii cu greutatea < 60kg

Dificulti: - Durata i costul tratamentului - Toxicitatea preparatelor - Dezvoltarea rezistenei Monitorizarea terapiei antiretrovirale: - Msurarea arjei virale (copii ARNv n plasm fiecare 6 luni) - Determinarea numeric a LT CD4+ fiecare 3 luni

Persoanele infectate cu HIV i bolnave de SIDA sunt asigurate cu tratament antiretroviral gratuit. n semestrul I 2008 au iniiat tratamentul antiretroviral 59 bolnavi, inclusiv din teritoriile de Est - 4. Ctre 01 iulie curent, n total beneficiaz de tratament specific antiretroviral 585 persoane, dintre care 85 din teritoriile de est. Au primit tratament profilactic 43 femei gravide i 43 copii, inclusiv din teritoriul de est al republicii - 12 gravide i 12 copii. n scopul monitorizrii eficacitii tratamentului sau efectuat 1183 teste PCR i 11259 investigaii ale statusului imunologic prin metoda de flaucitometrie.

PROFILAXIA INFECIEI HIV/SIDA

1.

2.

3. 4.

Msuri nespecifice: prevenirea transmiterii HIV Profilaxia specific dificil!!! Existena a 2 virusuri HIV-1 i HIV-2 cu numeroase subtipuri genetice i antigenice, variabilitatea genetica Infecia natural nu este stopat de rspunsul imun, iar memoria imunologic este mediocr Nu este definitif clar rolul LT CD8+ (Tc) Lipsa unui model animal satisfctor

STRATEGII DE VACCINARE
1.

2.
3.

4.

5.
6.

Elaborarea vaccinurilor vii atenuate Elaborarea vaccinurilor inactivate Vaccinuri recombinante subunitare (numai imunitate umoral) Epitopi peptidici anti-gp 120 (numai imunitate umoral) Utilizarea vectorilor (inseria genelor env) Vaccinuri ADN

VIRUSURILE HTLV (Human T-cell Lymphotropic Virus)

Genul Deltaretrovirus Specii HTLV-1 i HTLV-2 Structura comun retrovirusurilor Transmiterea contact sexual, vertical, prin snge (cu limfocite). Puterea oncogen determinat de gena transactivatoare tax. Manifestri clinice 1-5% din persoanele infectate dezvolt peste 20-30 ani leucemie acut cu celule T. Diagnostic depistarea virusului prin ELISA i confirmarea W-B, PCR Tratament antiretrovirale, IFN

ONCOGENEZA VIRAL

1.

2.

Cancerul este consecina dereglrii procesului normal de proliferare celular. Cile de apariie a cancerului: Hiperactivitatea genelor de stimulare a creterii Blocarea genelor care inhib creterea

Virusuri cu potenial oncogen: 1. Virusuri cu genom ADN (Papovaviridae, Adenoviridae, Herpesviridae, Hepadnaviridae) 2. Virusuri cu genom ARN (Retroviridae) Caracter comun capacitatea genomului viral de a se integra n cromosomul celulei-gazd, inducnd transformarea ei. Transformarea celular modificri ale funciilor biologice ale celulei, ce duc la multiplicarea necontrolat a celulelor i capacitatea de invazie a esuturilor.

Virusurile oncogene conin gene care pot induce tumori v-onc Toate celulele conin gene omologe: protooncogene / c-onc (induc o protein care controleaz replicarea ADN i multiplicarea celular) V-onc i c-onc nu sunt identice!!! C-onc pot induce tumori numai n urma unor mutaii. Mecanismele oncogenezei: Virusul aduce n celul o oncogen Virusul activeaz proto-oncogenele celulare