TEMA 15.- MECANISMOS DEL DAO CELULAR INDUCIDO POR XENOBITICOS.

INTRODUCCIN El estudio de los mecanismos de accin de los xenobiticos a nivel bsico, molecular y celular, parte de un cierto principio de confluencia. Productos qumicos muy distintos confluyen, a nivel molecular, hacia una serie de mecanismos de accin comunes, lo cual permite una determinada sistematizacin. A ello contribuye la selectividad txica, que en rado diverso, presentan la mayora de los productos qumicos. !ran cantidad de ellos, una vez absorbidos por el or anismo, no act"an de forma indiscriminada sobre las distintas estructuras titulares y celulares, sino que presentan un determinado rado de selectividad de accin, modificando la estructura y funcin de un n"mero reducido de mol#culas, tipos celulares, etc.

INICIO DEL DAO CELULAR $na vez que los xenobiticos son absorbidos por las diferentes vas, sufre un con%unto de modificaciones cin#ticas &transporte, biotransformacin, eliminacin, etc.' que en "ltima instancia determina la dosis efectiva, es decir, la cantidad de producto que alcanzar las estructuras diana de la toxicidad. (stas pueden ser receptores titulares, enzimas, protenas transportadoras, lpidos de membranas celulares, A)*, etc. +a interaccin del txico con la diana produce lesiones moleculares que resultan en al "n tipo de alteracin en la funcionalidad celular.

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+os or anismos disponen de unos mecanismos de reparacin del A)* y protenas que pueden corre ir la mayora de dichas alteraciones. 3an solo en el caso de que la dosis efectiva sea muy elevada y el rado de alteracin molecular sobrepase, por razones muy diversas, la capacidad de reparacin natural, resulte una lesin que puede dar lu ar, despu#s de un tiempo de latencia ms o menos lar o, a un efecto clnico. El tipo de efecto que de ello se derive &efectos sobre el 4*,, hepatotoxidad, nefrotoxicidad, cncer, etc' depender de la funcin de la diana afectada &un receptor, un enzima, el A)*' y de su importancia dentro del or ani rama fisiol ico. BLANCOS CELULARES +a c#lula tiene varios componentes que deben estar en buen estado para su buen funcionamiento. +a c#lula necesita tener los si uientes caminos metablicos en buen estado5 la produccin de A3P mitocondrial, el metabolismo de calcio, la sntesis de protenas, la re ulacin del A)*, la liclisis y el ciclo del cido ctrico o ciclo de 6rebs. Estos dos "ltimos proporcionan los precursores para sntesis de aminocidos y los equivalentes reducidos cuya oxidacin enera la mayora de los A3P. +os da7os a la membrana pla m!"#$a, a la pr%&'$$#(n &e ATP m#"%$%n&r#al y al control de los n#)ele &e $al$#% #n"ra$el'lar son rutas comunes para la destruccin final de la c#lula y merecen discusin especial. LA MEMBRANA PLASM*TICA es utilizada por la c#lula para mantener los radientes inicos que a su vez re ulan el volumen celular. 4i se da7a la membrana entran #%ne Na + Ca y salen iones , &responsables de los fenmenos de polarizacin y despolarizacin de la membrana y, en definitiva, de la transmisin el#ctrica del impulso nervioso'. El a-'a + l% $l%r'r% se redistribuyen de acuerdo al radiente electroqumico y hay incremento neto intracelular del a ua. El aumento de a ua intracelular es visible al microscopio por el aumento de tama7o de la c#lula que se hincha. 4i #sto no se corri e la c#lula se puede romper. 8ay varios mecanismos que pueden inducir estos cambios, al unos e%emplos son el trauma fsico, fluidizacin de la

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membrana, peroxidacin de lpidos &tetracloruro de carbono', da7o al citoesqueleto, bloqueo de canales y ataque viral. :ndependiente de la a resin txica, la membrana plasmtica es uno de los componentes que primero responde al da7o y la p#rdida de inte ridad es el punto final del da7o. En la mayora de las c#lulas las mitocondrias son responsables de la sntesis de ATP va la respiracin aerbica. El A3P es la fuente de ener a ms importante de la c#lula, se utiliza en las reacciones biosint#ticas, y es necesario para la activacin de compuestos end enos por fosforilacin o adenilacin, para incorporarse en cofactores, para la funcionabilidad del citoesqueleto y para operar las bombas inicas de la membrana celular. LA PRODUCCIN DE ATP POR LAS MITOCONDRIAS requiere de ox eno para funcionar, as que una de las rutas para da7ar el proceso es la hipoxia &ba%a concentracin de ox eno'. El principal a ente que priva a la c#lula de ox eno es el monxido de carbono el cual se li a a la hemo lobina inhibiendo la unin de #sta con el ox eno. +a anemia &ba%a concentracin de hemo lobina en la san re' y la isquemia &ba%o flu%o arterial o del drena%e venoso', reducen la capacidad de transporte de ox eno y pueden contribuir a la deficiencia de este compuesto a nivel celular. +a produccin de A3P tambi#n se puede impedir por5 a entes que interrumpen la cadena de transportes de electrones a trav#s de inhibidores de enzimas como la rotenona &inhibe la *A)81coenzima ; reductasa' y el cianuro &inhibe la citocromo oxidasa'. por substancias que inhiben o desacoplan la fosforilacin oxidativa tales como el ))3 &inhibe la A3P sintetasa' y el arsenato &substituye al fsforo y produce intermediarios de ba%a ener a'. EL INCREMENTO DEL NI.EL DE CALCIO INTRACELULAR produce la disociacin de la actina de los microfilamentos en el citoesqueleto y la activacin de fosfolipasas y proteasas. Estos cambios producen fra mentacin del A)*, condensacin de la cromatina, ruptura de membranas y de radacin de protenas. El control de calcio se puede romper por el incremento del in reso o por la salida de este in de sus depsitos celulares. +os a entes que inducen la entrada de calcio son metilmercurio que produce poros y, el tetracloruro de carbono que rompe la membrana. +os a entes que inhiben la exportacin de calcio del citoplasma son inhibidores de la calcio1A3Pasa en la membrana celular o en el retculo endoplsmico. Al unos e%emplos de ellos son el bromobenceno, diamida, diquat y el in vanadato.

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MECANISMOS DE ACCIN +os mecanismos de accin de los xenobiticos pueden clasificarse en dos rupos5 A' En funcin del n#)el &e a/e$"a$#(n pr#mar#%. Afectacin de la e "r'$"'ra Alteracin de la membrana celular Alteracin de los or nulos subcelulares. =odificacin de la permeabilidad de la membrana =odificacin de la actividad enzimtica mediante inhibicin

Afectacin de la /'n$#(n celular

induccin. >' En funcin de los me$an# m% m%le$'lare ?eaccin covalente con macromol#culas intracelulares &metales pesados'. :nteracciones carbamatos'. :nteraccin con receptores. :nteraccin con canales inicos &insecticidas or anoclorados'. )estruccin de membranas por reacciones qumicas a resivas &?@4'. con enzimas &insecticidas or anofosforados o

CICLO CELULAR El efecto de un txico sobre las c#lulas depende del estado del $#$l% $el'lar en que se encuentren. En condiciones de divisin relativamente rpida de c#lulas de mamferos, el ciclo completo requiere de 2. a 9Ah &la fase 01, sntesis de enzimas necesarias para la replicacin, dura de B a 29hC la fase S, de replicacin del A)*, dura de . a 2-h durante las cuales las dos cadenas de A)* se separan y el A)* es especialmente vulnerable al ataque de carcin enosC y la fase 01, de sntesis de protenas implicadas en la mitosis, dura de A a Bh'. +a si uiente etapa para completar el ciclo celular es el estado mittico &M', que dura, aproximadamente, entre 2 y < horas. ,urso -./-01 P . A

+as c#lulas que no estn en divisin se mantienen en estado !- o fase !2 prolon ada en la que las dos cadenas de A)* forman una doble h#lice que limita el acceso de un carcin eno a las bases individuales. Aunque la sntesis de A)* se limita a la fase 4, la reparacin puede ocurrir en cualquier momento del ciclo.

c#lula madre

Dase de mitosis
21< horas

c#lulas hi%as

Dase post1 sntesis de )*A

A1B horas

Dase pre1sntesis de )*A

B129 horas &la ms variable en duracin'

Dase de sntesis de )*A &replicacin'

.12- horas

Dase de reposo o quiescencia &no hay divisin'

)uracin variable se "n el tipo celularC de unas horas a varios a7os, o incluso sin re reso al ciclo.

MUERTE CELULAR
El punto al cual la c#lula no se puede recuperar de las lesiones es difcil de definir. 8ay muchos pasos que se consideran reversibles y muchos que son definitivamente irreversibles. +os dos fenmenos que consistentemente estn asociados a lesiones irreversibles son la incapacidad de revertir la disfuncin mitocondrial y las distorsiones profundas de las funciones de la membrana. Cara$"er2 "#$a &e la le #%ne $el'lare reversibles P#rdida de A3P que disminuye la actividad A3P1asa en la membrana 8inchazn c#lular a uda &p#rdida del control de volumen' Aumento de la velocidad de la liclisis para compensar la p#rdida de A3P )esprendimiento de los ribosomas del retculo endoplsmico ru oso Permeabilidad incrementada de la membrana y disminucin de la actividad mitocondrial que resulta en el ampollamiento de la superficie c#lular =itocondrias normales, li eramente hinchados o condensados Cara$"er2 "#$a &e la le #%ne irreversibles Eacuolizacin severa de las mitocondrias )a7o masivo de la membrana celular ,recimiento de los lisosomas Entrada de calcio y activacin de las proteasas y fosfatasas P#rdida continua de protenas, coenzimas y A?* Eosinofilia que produce ruptura de lisosomas ,urso -./-01 P . F

 Picnosis &condensacin nuclear con a re acin de cromatina' ,arilisis &destruccin de cromatina' ,arirrexis &fra mentacin nuclear' )i estin enzimtica del citoplasma y n"cleo, fu a de compuestos intracelulares y entrada de macromol#culas extracelulares. MECANISMOS DE MUERTE CELULAR Existen dos mecanismos principales de muerte celular5 la apoptosis &del rie o apo, aparte, y ptosis, cado Gcomo cae la lluvia' y la necrosis. 1.- Ap%p"% # . En una definicin muy amplia, la apoptosis se puede considerar como una muerte celular Hpro ramadaI. +a apoptosis es un evento celular natural el cual tambi#n puede ser inducido por condiciones patol icas. ,omo e%emplo de /'n$#%ne /# #%l(-#$a n%rmale de la apoptosis podemos mencionar la re resin del "tero despu#s del parto, la muerte de c#lulas nerviosas en el desarrollo si no se establecen contactos axonales, la inmunoeliminacin de c#lulas, o la eliminacin de las reas interdi itales durante la morfo #nesis de los dedos. ,omo dato curioso, mencionaremos que los procesos de apoptosis son los responsables de que los humanos ten amos cinco dedos en cada extremidad y que su ausencia, por e%emplo, en las aves palmpedas les hace conservar su caracterstica pata palmeada. *o obstante, los procesos apoptticos pueden resultar per%udiciales, siendo responsables de diversas a/e$$#%ne . As, se presenta apoptosis excesiva en pacientes con enfermedades neurode enerativas donde se ha observado una disminucin en el n"mero de c#lulas en determinadas poblaciones neuronales, por e%emplo, en la enfermedad de Alzheimer, ParJinson y se piensa que en el 4:)A. +a apoptosis tambi#n est implicada en lesiones inducidas qumicamente. ,omo e%emplo de dro as o sustancias qumicas que inducen apoptosis se tiene los lucocorticoides &apoptosis de c#lulas linfoides' y el 3,)) &apoptosis de timocitos causando atrofia tmica'. 4e presenta apoptosis insuficiente en el desarrollo de linfoma folicular +a apoptosis se diferencia de la necrosis por sus caractersticas morfol icas. Es un evento controlado. +as c#lulas se vuelven ms condensadas consistente con el hecho de que el a ua est siendo removida de la c#lula &no es un proceso pasivo'. )urante todo el proceso la membrana celular y los or anelos permanecen intactos. El contenido celular nunca se derrama hacia el rea que la rodea lo cual hace que no se produzca reaccin inflamatoria 1.- Ne$r% # . En la necrosis el resultado final es la ruptura de la membrana celular y el derrame del contenido celular en el espacio intersticial. Esto trae como consecuencia una respuesta inflamatoria en el rea que puede ser detrimente para las c#lulas que la rodean. ,urso -./-01 P . B

MUERTE CELULAR
DI3ERENCIAS MOR3OL0ICAS ENTRE NECROSIS 4 APOPTOSIS NECROSIS APOPTOSIS +a c#lula completa :nflamacin ,ondensacin *"cleo Picnosis ,reciente ,arilisis ,ariorrexis @r nulos )e eneracin :ntactos )e eneracin celular ?uptura ,uerpos appticos :nmunorespuesta :nflamacin a uda *in una

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INDUCCIN 4 RE0ULACIN DE APOPTOSIS +os da7os en el A)*, causados por e%emplo por radiaciones ionizantes o por sustancias qumicas &como las usadas en terapias anticancer enas', pueden actuar como potentes #n&'$"%re &e ap%p"% # . ,uando se produce un da7o en el enoma, se activa el en pF< &que normalmente est inactivado'. +a pr%"e2na p55, producto del en del mismo nombre, puede actuar deteniendo el ciclo celular, para permitir la reparacin del da7o, o induciendo la entrada en apoptosis, se "n las LcircunstanciasL celulares. +as c#lulas con mutaciones en pF< pueden replicar su )*A a pesar de que lo ten an da7ado, lo cual favorece la acumulacin de ms mutaciones y la posibilidad de que la descendencia de tales c#lulas pueda volverse cancer ena. El in calcio desempe7a importantes papeles como se7alizador intracelular, de manera que su concentracin est muy re ulada. $n incremento del calcio citoslico, proveniente del medio extracelular o de depsitos intracelulares, puede conducir a la muerte celular por activacin de diferentes de enzimas &por e%emplo, en&%n'$lea a dependientes de ,a9M y = 9M, pr%"ea a o trans lutaminasas'. 3ambi#n la presencia de radicales libres oxidantes &tambi#n denominadas especies reactivas de ox eno', puede actuar como inductor de apoptosis &3ema 2B'. )entro de los re uladores de la apoptosis, los enes de la familia de B$l-1 son los que estn me%or estudiados. >cl19 es el prototipo de una ran familia de enes que codifica para una serie de protenas que pueden #n6#b#r &como las protenas mitocondriales >cl19, >cl1x+' o pr%m%)er &>ax, >aJ' la apoptosis. +a proporcin en que se expresen unas protenas respecto a otras puede determinar que la c#lula sufra apoptosis o no.

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RESPUESTA DE LOS TE7IDOS A LA P8RDIDA DE C8LULAS 4i la lesin produce que se pierdan c#lulas por necrosis o apoptosis, el resultado final depende principalmente del tipo de c#lulas que se han lesionado. +as c#lulas vecinas pueden ser capaces de responder con re eneracin produciendo c#lulas i uales a las perdidas o bien slo las reemplazan por te%ido no funcional. +as $9l'la l!b#le se estn dividiendo continuamente y en su ciclo celular no existe el estado de reposo. E%emplo de ellas son las c#lulas epiteliales, astrointestinales y hematopoy#ticas. 4i se pierden c#lulas se pueden remplazar por c#lulas del mismo tipo. +as $9l'la e "able estn prcticamente en reposo y tienen una velocidad de replicacin muy ba%a. 4u ciclo celular est normalmente en reposo pero se pueden estimular para que entren en replicacin. E%emplo de estas c#lulas son los hepatocitos y las c#lulas renales &t"bulos'. 4i ocurre al "n da7o, las c#lulas conti uas pueden re enerar la masa perdida, como sucede con el h ado despu#s de una ciru a en la que se elimina una parte. +a $9l'la permanen"e no se estn dividiendo y no pueden entrar en ciclo de replicacin. E%emplo de estas c#lulas son las neuronas del sistema nervioso central y los miocitos del corazn. 4i estas c#lulas se pierden la "nica respuesta de remplazo es a trav#s de la respuesta fibrtica. +as c#lulas son remplazadas por te%ido conectivo y se forma una cicatriz. El remplazo fibrtico tambi#n se puede dar en al unas ocasiones para c#lulas lbiles y estables

3ACTORES :UE A3ECTAN A LA TOXICIDAD +a ma nitud de la respuesta txica en un or anismo determinado depende de la exposicin &dosis, tiempo, ruta y va de exposicin' y de factores relacionados con las caractersticas del or anismo expuesto, del medio ambiente y de la sustancia misma. a; In/l'en$#a &el me&#% L%$al#<a$#(n -e%-r!/#$a. +as diferencias eo rficas son ambientales y no en#ticas. O$'pa$#(n b; In"era$$#%ne ='2m#$a . Aditivas, sin#r icas, potenciantes o anta nicas. @tra interaccin qumica de inter#s es la que resulta de las alteraciones que puede hacer una sustancia a la biotransformacin de otra. $; In/l'en$#a &el %r-an# m% re$ep"%r. +os factores relacionados con el or anismo receptor que tienen influencia sobre la toxicidad de una sustancia pueden ser en#ticos &especie, cepa, sexo, individuo' o fisiol icos &embarazo, edad, estado nutricio, estado hormonal, estado de salud'. &; 3a$"%re -en9"#$% . Por e%emploC los or anismos con niveles ba%os de colinesterasa s#rica son ms sensibles a ciertos insecticidas or anofosforados. @tro ,urso -./-01 P . 0

e%emplo es el polimorfismo de la paraoxonasa s#rica, una enzima que cataliza la hidrlisis de #steres or anofosfatados, carbamato y #steres de cidos carboxlicos aromticos. +a paraoxona es un inhibidor de la colinesterasa s#rica y es un intermediario en el metabolismo del paratin. As que, un valor alto de paraoxonasa prote e de los efectos txicos del paratin. e; 09ner%. Estas diferencias se pueden atribuir a las diferencias en la actividad de enzimas de biotransformacin que estn ba%o control hormonal. /; >eren$#a. 4e contin"a discutiendo si el cncer es una enfermedad hereditaria o no. 8ay unos cnceres que definitivamente son hereditarios y otros en los que la predisposicin %ue a un papel importante en la #nesis de varios cnceres comunes. +a inmunodeficiencia y la deficiencia en la reparacin del A)* son defectos hereditarios que favorecen el desarrollo de cncer. -; E "a&% /# #%l(-#$%. Embarazo, edad, estado hormonal, obesidad.

BIOMARCADORES
+os marcadores biol icos o biomarcadores son los $amb#% me&#ble , ya sean estos bioqumicos, fisiol icos o morfol icos que se producen en un sistema biol ico. Ese hecho se interpreta despu#s como refle%o o marcador de la exposicin a un txico. Por e%emplo, el nivel de colinesterasa en san re vara por la exposicin a pla uicidas. $n nivel anormalmente ba%o de colinesterasa es un biomarcador de la exposicin a pla uicidas or anofosforados. +os biomarcadores ms "tiles son los que se pueden obtener de la forma menos invasiva, por eso se prefieren los que se encuentran en la san re. +as caractersticas ideales de un biomarcador son las si uientes5 especificidad para un xenobitico determinado, m#todos de medida sensibles, detectable en muestras disponibles con facilidad, e%. orina, san re, pelo, aire expirado, ba%o coste de la t#cnica de determinacin. ,lasificacin. +os marcadores biol icos se clasifican, por lo eneral, en tres tipos concretos5 biomarcadores de la exposicin, del efecto y de la susceptibilidad. 2. =arcadores de la exposicin. Puede ser un compuesto ex eno &o un metabolito' que se introduce en el cuerpo, un producto interactivo entre el compuesto &o metabolito' y un componente end eno, o cualquier otro hecho relacionado con la exposicin. ,omprende5 =arcadores internos de dosis. :ndican que el txico ha entrado en el or anismo. =iden la concentracin de Nbs y sus metabolitos en los medios biol icos.

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=arcadores de dosis biol icamente efectivas. :ndican que el txico ya ha

producido da7o en el or anismo. 4on los compuestos que forma el txico o sus productos de bioactivacin con los cidos nucleicos y protenas &8b, alb"mina'. 4on "tiles cuando la vida media del compuesto es muy corta y resulta difcil medir su concentracin. 9. =arcadores del efecto. Pueden ser componentes end enos o medidas de la capacidad funcional, o cualquier otro indicador del estado del cuerpo o de un sistema or nico afectado por la exposicin. *o identifican el Nb. ,omprende5 =arcadores de respuesta biol ica. ?epresentan estados avanzados del proceso de da7o. 4on ms persistentes y a menudo representan alteraciones en#ticas. E%. mutaciones de ciertos onco enes e intercambios entre cromtidas humanas. =arcadores de enfermedades. 4on manifestaciones preclnicas o tempranas de enfermedades. <. =arcadores de susceptibilidad. 4e usan para identificar a los individuos ms susceptibles a da7os en una poblacin. E%. la actividad *1acetiltransferasa &*A3'. +os individuos con una alta actividad *A3 tienen mayor ries o si son expuestos a Nbs que son bioactivados por *A3 &como el 91aminofluoreno'. EOE=P+@4 )E >:@=A?,A)@?E4 )E +A ENP@4:,:P* @ )E+ EDE,3@ ;$E 4E E=P+EA* E* E43$):@4 ?E+A,:@*A)@4 ,@* +A 4A+$) E* E+ 3?A>AO@ =uestra =edicin Nenobitico

B#%mar$a&%re &e e?p% #$#(n 3e%ido adiposo 4an re 8ueso Aire espirado Pelo 4uero @rina B#%mar$a&%re &el e/e$"% 4an re !lbulos ro%os 4uero @rina !lbulos blancos )ioxina Plomo Alumino 3olueno =ercurio >enceno Denol ,arboxihemo lobina Qinc1protoporfirina ,olinesterasa =icro lobulinas Aductos de A)* )ioxina Plomo Alumino 3olueno =etilmercurio >enceno >enceno =onxido de carbono Plomo @r anofosforados *efrotxidos =ut enos ,urso -./-01 P . 22

?elacin entre biomarcadores y tiempo tras la exposicin al xenobitico. $na consideracin importante en el uso de biomarcadores es su relacin con el tiempo de exposicin. En parte, ello depende del xenobitico. As, compuestos muy lipoflicos tienen vida media muy lar a y se pueden detectar con t#cnicas sensibles semanas despu#s de la exposicin. En otros casos el periodo de deteccin depende ms de la vida media de la macromol#cula a la que se une. En la fi ura se muestra una hipot#tica relacin entre los diferentes biomarcadores. 4e refiere a un Nb de 29h de vida media cuyos metabolitos no se pueden detectar en orina despu#s de tres das.
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