Universidad Autónoma de Chiapas.

Facultad de Ciencia Químicas

Campus Tapachula.

Laboratorio de Biología

Práctica No. 9

Nombre de la práctica:
“fotosíntesis 2”

Tapachula de Córdova y Ordeñes, abril de 2008, Chiapas

OBJETIVO:
Comprobar la presencia de clorofila y pigmentos accesorios en las
partes verdes de los vegetales y observar la fluorescencia como una
de las características más notables de la clorofila
MARCO TEORICO:
CLOROFILA

Vista microscópica de la clorofila presente en una hoja de planta

Las clorofilas son una familia de pigmentos que se encuentran en las
cianobacterias y en todos aquellos organismos que contienen plastos
en sus células, lo que incluye a las plantas y a los diversos grupos de
protistas que son llamados algas.

FUNCIÓN
La función de las clorofilas es la absorción de energía luminosa en la
variante de la fotosíntesis que llamamos fotosíntesis oxigénica, la que
es característica de los organismos antes enumerados.
El principal papel de las clorofilas en la fotosíntesis es la absorción de
fotones de luz con la consiguiente excitación de un electrón. Ese
electrón excitado cede su energía, volviendo al estado normal, a
algún pigmento auxiliar (a veces otras clorofilas), donde se repite el
fenómeno. Al final el electrón excitado facilita la reducción de una
molécula, quedando así completada la conversión de una pequeña
cantidad de energía luminosa en energía química, una de las
funciones esenciales de la fotosíntesis.
Además del papel citado, el de pigmento primario de la antena
fotosintética, las clorofilas abundan en los fotosistemas como
pigmentos auxiliares, los que se van transfiriendo la energía de
excitación de la manera mencionada en el párrafo anterior.

ESTRUCTURA QUÍMICA
La estructura de la molécula de clorofila tiene dos partes: un anillo de
porfirina (sustituida con pequeños grupos enlazados, sustituyentes) y
una cadena larga llamada fitol.
El anillo de porfirina es un tetrapirrol, con cuatro anillos pentagonales
de pirrol enlazados para formar un anillo mayor que es la porfirina. La
hemoglobina de la sangre y otras proteínas contienen también una
porfirina, que en ese otro caso constituye lo principal de un grupo
hemo; y también se encuentra porfirina en la estructura de la
vitamina B12. El grupo hemo contiene un átomo de hierro (Fe); la
porfirina de la clorofila lleva en lugar equivalente un átomo de
magnesio (Mg2+). La absorción de determinados picos del espectro de
radiación (ver gráfica más abajo) es una propiedad de aquellas
moléculas orgánicas que contienen dobles enlaces conjugados (dobles
enlaces alternando con enlaces simples); puede verse en las fórmulas
desarrolladas contiguas que el anillo porfirínico es rico en tales
enlaces.
El fitilo (o resto de fitol; llamamos resto o residuo a la parte de una
molécula incorporada a la estructura de otra mayor) es una cadena
hidrocarbonada con restos de metilo (-CH3) a lo largo. Tiene, como
todas las cadenas orgánicas basadas sólo en C e H, un carácter
“hidrófobo”; es decir, que repele al agua. La cadena del fitilo sirve
para anclar la molécula de clorofila en la estructura anfipática de los
complejos moleculares en que residen las clorofilas.

LOCALIZACIÓN EN LAS CÉLULAS

Las clorofilas se encuentran en las membranas de los tilacoides, que
en las cianobacterias son invaginaciones de la membrana plasmática,
y en los plastos de las célula eucarióticas son vesículas distribuidas
por su interior. Las clorofilas aparecen insertas en la membrana, a las
que se anclan por la cadena lateral constituida por un resto de fitol,
asociadas a proteínas y otros pigmentos, con los que forman los
fotosistemas.
Cada fotosistema contiene alrededor de 200 moléculas de clorofila,
además de pigmentos auxiliares, con los que constituye la llamada
antena. La antena está formada por conjuntos ordenados de
moléculas de clorofila, otros pigmentos y proteínas, que se llaman
complejos colectores de la luz. Sólo una molécula de clorofila a en
cada fotosistema convierte propiamente la energía radiante (luz) en
energía química, cuando recibe un fotón con energía suficiente desde
las moléculas de la antena, que se la van pasando.

CROMATOGRAFÍA
la cromatografía es un conjunto de técnicas basadas en el principio
de adsorción (no confundir con absorción) selectiva cuyo objetivo es
separar los distintos componentes de una mezcla y en algunos casos
identificar estos si es que no se conoce su composición.
Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas
hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido
supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase
estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un
sólido.
Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la
fase estacionaria y con la fase móvil. De este modo, los componentes
atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van
separando. Después de haber pasado los componentes por la fase
estacionaria y haberse separado pasan por un detector que genera
una señal que puede depender de la concentración y del tipo de
compuesto.

CLASIFICACIÓN
Tipos Fase móvil Fase estacionaria
LíquidoSólidoCro
matografía en Líquido Sólido
papel
Cromatografía de
gasesCromatograf Gas Sólido o líquido
ía en capa fina
Cromatografía
Líquido Sólido o líquido
líquida
(polar) (menos polar)
en fase inversa
Cromatografía Líquido
Sólido o líquido
líquida (menos
(polar)
en fase normal polar)
Cromatografía
líquida Líquido
Sólido
de intercambio (polar)
iónico
Cromatografía
líquida Líquido Sólido
de exclusión
Cromatografía
líquida Líquido Sólido
de adsorción
Cromatografía de
fluidos Líquido Sólido
supercríticos
Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo
esté dispuesta la fase estacionaria:
Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa
plana o sobre un papel. Las principales técnicas son:
Cromatografía en papel
Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una
columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:
Cromatografía de líquidos
Cromatografía de gases
Cromatografía de fluidos supercríticos
La cromatografía de gases es útil para gases o para compuestos
relativamente volátiles, lo que incluye a numerosos compuestos
orgánicos.
Dentro de la cromatografía líquida destaca la cromatografía líquida de
alta resolución (HPLC, del inglés High Perfomance Liquid
Chromatography), que es la técnica cromatográfica más empleada en
la actualidad.
Una serie eluotrópica, es un rango de sustancia de diferentes
polaridades que actúan como fase móvil y que permiten observar un
mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria.
HISTORIA
El botánico ruso Mikhail Tswett (Mikhail Semenovich Tsvett, 1872-
1919) empleó por primera vez en 1906 el término "cromatografía"
(que proviene del griego χρομα y γραφω que significan a su vez
respectivamente "color" y "escribir").

Separación de clorofilas mediante cromatografía en papel

A comienzos del año 1903, Mikhail Tswett usó columnas de adsorción
de líquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas).
Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna de vidrio
rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un material