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EXTRACCION DE ADN DE mosquito y sangre

EXTRACCION DE ADN DE mosquito y sangre

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Este es un trabajo en el cual hacemos extraccion de ADN de muestrs de sangre y mosquitos. Y se realiza la posterior electroforesis.
Este es un trabajo en el cual hacemos extraccion de ADN de muestrs de sangre y mosquitos. Y se realiza la posterior electroforesis.

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EXTRACCION DE ADN EN SANGRE Y EN MOSQUITO YELECTROFORESIS
Edin Arroyo, Leonardo Chamorro, José Martínez, Libardo caraballoUniversidad de Sucre. Facultad de Educación y Ciencias. Departamento deBiología. Programa de Biología. Laboratorio de parasitología molecular.
RESUMEN
El proceso de extracción del ADN geonómico sigue ciertas pautas para sucorrecta purificación que son muy diferentes a los empleados en la purificaciónde proteínas. Existen varias técnicas que se utilizan para la extracción deADN; en esta práctica se utilizó el método de altas concentraciones de salescon el fin de extraer material genético de muestras de sangre y de mosquito.Este todo consiste en la utilización de altas concentraciones de salesacetato de amonio para precipitar proteínas y posteriormente precipitar ADNcon alcohol absoluto, para comprobar los resultados de la extracción se realizoun electroforesis en la cual se visualizaron las bandas de ADN corridas en elgel de agarosa. Este método resulta ser viable para la extracción de ADN enambas muestras.
Palabras claves
: extracción de ADN, electroforesis, sangre, , mosquito,acetato de amonio, gel de agarosa.
INTRODUCCION
El ácido desoxirribonucleico,frecuentemente abreviado comoADN o DNA, del inglés
DeoxyriboNucleic Acid 
, es unamacromoléculaque forma parte detodas lascélulas. Contiene lainformacióngenéticausada en eldesarrolloy el funcionamiento de losorganismos vivosconocidos y dealgunosvirus,siendo el responsablede su transmisiónhereditaria.La extracción de ADN de unamuestra celular se basa en el hechode que los iones salinos son
 
atraídos hacia las cargas negativasdel ADN, permitiendo su disolucióny posterior extracción de la célula.Se empieza por lisar (romper) lascélulas mediante un detergente o unbuffer de lisis, vaciándose sucontenido molecular en unadisolución tampón en la que sedisuelve el ADN. En ese momento,el tampón contiene ADN y todo unsurtido de restos moleculares: ARN,carbohidratos, protnas y otrassustancias en menor proporción.Las proteínas asociadas al ADN, degran longitud, se habrán fraccionadoen cadenas más pequeñas yseparadas de él por accn delbuffer de lisis. lo queda, potanto, extraer el ADN deesa mezcla tampón y detergente,para lo cual se utiliza etanol frio.
MATERIALES Y METODOExtracción de ADN en sangre
Para la extracción de ADN se tomouna muestra de sangre (250 µL) a lacual se le adiciono 250 µL de buffer de lisis (NaCl 0,1 M; sacarosa 0,2M; EDTA 50mM, tris-HCl 100Mm pH8,25; SDS 0,05 %).A esta soluciónde le adiciono protnas K a unaconcentracn de 10mg/ml. Seincubó a 65 °C por una hora y luegode le adicionó 500 µL de acetato depotasio 8M se incubo durante 30minutos en hielo y posteriormentese centrifugo a 13000 rpm durante15 minutos. Sele adiciona 100 µLde etanol y se incubo a temperaturaambiente por 10 minutos. Se vuelvea centrifugar por 15 minutos y elprecipitado se lavo con etanol al70% dos veces. Se seca atemperatura ambiente y seresuspende en 20 µL de buffer TE.
Extracción de ADN del mosquito.
El ejemplar de mosquito fuetriturado en 50ml de tampón de lisis.Esta solución se incubo por 1hr a65°C. Se adicionaron 14µl deacetato de potasio 8M y se incubopor 30min en hielo, posteriormentese centrifugo a 13000 rpm durante15min. Y se incubo a temperaturaambiente por 10min en etanolabsoluto. Se volvió a centrifugar a13000rpm y el precipitado se lavodos veces con etanol al 70%. Seseco a temperatura ambiente y seresuspendio en 20µl de buffer TESe lacon 50L de etanol al70%, se centrifugó a 12000 rpm por 10 min y se descarto elsobrenadante. El precipitado se dejósecar a temperatura ambiente y por 
 
último se re suspende con 100 µLde agua.
ELECTROFORESIS
Después de realizar la extracción deADN, tanto del vector como de lamuestra de sangre se procedarealizar la electroforesis, la cual serealizo en gel de agarosa 1%. Lasmuestras de DNA tanto de sangrecomo de mosquito se disolvieron enun buffer de carga (Green) en unaproporción 8:2µl respectivamente.Posterior a esto se hizo la siembraen los posos y se procedió a realizar el corrido.
RESULTADOSFig.1
Corrido de las muestras deADN en el gel de agarosa.
ANALISIS DE RESULTADO
En la práctica realizada se obtuvoDNA de sangre y de mosquitomediante el método de altasconcentraciones de sales. Se utilizobuffer de lisis, cuya funcn esromper la membrana celular ynuclear, permitiendo esto laliberación del ADN. Dicho buffer,para la extracción de ADN desangre, contenía Proteinasa K, esuna proteasa que degrada lasproteínas de membrana y facilita sulisis, liberando el ADN.Químicamente la proteinasa K actúaa nivel de los péptidos en losgrupos carboxílicos alifáticos yaminoácidos aromáticos propios enlos pidos de membrana. Esteproceso de lisis de membrana fuecomplementado con el baño deMaría que a 65
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c activa de formaeficiente a la proteinasa K. Laremoción de proteína ycontaminantes se realiza pocentrifugación adicionando alcohol,obteniendo un sobrenadantecompuesto por restos demembrana, organelas celulares,protoplasma y restos dehemoglobina, esto para el caso delADN extraído de sangre, debido aque la extracción de ADN demosquito no se utilizo la proteinasaK.Después de la ruptura celular y laeliminacn del pellet de restoscelulares, se ade una sal para

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