HIBRIDACION

Apareamiento especfico que ocurre entre cadenas de cidos nucleicos con secuencias complementarias
La hibridacin Sondas Fragmentos de ADN o ARN sintetizados in vitro sustancias radiactivas fluorescentes Deteccion e identificacion de la secuencia de ADN o ARN

En biologa molecular experimentalmente se llevan a cabo dos tipos diferentes de hibridacin: Tipo Southern, para uniones ADN-ADN y tipo Northern blot, para uniones ADN-ARN.

Procedimiento experimental
1.ADN se separa mediante un proceso fsico (calor) o qumico Esto rompe los enlaces por puente de hidrgeno que mantienen unidas las dos hebras del ADN. 3.Una muestra de cadenas simples (o desnaturalizadas) se mezcla con otra muestra de cadenas simples 2.Las dos hebras complementarias se separan, el ADN se desnaturaliza.

4.La muestra combinada se enfra lentamente, las molculas sencillas se van emparejando por las zonas complementarias (ms estables termodinmicamente) hibridada

Mtodos de laboratorio
Southern: fue desarrollado para la deteccin de genes especficos en el ADN celular.

Northern blot
de secuencia semejante al ADN que se usa como sonda; a diferencia del tipo Southern que se utiliza para identificar ADN

El ARN se extrae y se fracciona en tamaos variables mediante una electroforesis en gel de poliacrilamida en unas condiciones que mantengan las cadenas de ARN en estado desnaturalizado. El proceso contina de forma semejante a la hibridacin de tipo Southern. El mtodo del Northern se utiliza muy frecuentemente para realizar ; para conocer qu genes estn activos formando ARN mensajero en qu condiciones, en qu tejidos o tipos celulares. La hibridacin de las sondas directamente sobre tejidos de material orgnico

Hibridacin in situ
Las sondas son secuencias de ADN marcadas que se unen a secuencias de ADN conocidas dentro del cromosoma