Cofactores enzimticos inorgnicos y ORGANICOS Modelo tridimensional enzima fosfatasa alcalina Un cofactor enzimtico es definido como un componente no enzimtico

que promueve el valor cataltico de una enzima, en una definicin que enfatiza la funcin ms que la estructura. Dado que casi un tercio de las enzimas requiere de metales inicos para la funcin cataltica, es evidente que los componentes inorgnicos conforman una parte substancial de los cofactores. La mayora de los metales traza tienen un comn denominador en su involucramiento ntimo con las enzimas; muchos son componentes del sitio activo que se une a los sustratos, aceptan electrones, estabilizan las estructuras terciaria y cuaternaria y an regulan el ritmo de las rutas metablicas. La historia nutricional de los elementos minerales, a diferencia de las vitaminas, tuvo poco enfoque temprano en humanos. Fue en el ganado domstico alimentndose de forraje procedente de suelos pobres en minerales que se manifestaron los sntomas de deficiencia (aunque al principio se pens que era debido a toxicidad). Signos tpicos eran el prensado de la lana en las ovejas, ruptura de aorta en cerdos y bovinos y prdida de mielina en los cerebros de corderos recin nacidos. Los sntomas disminuan marcadamente por suplementacin del pienso con sales de iones metlicos como CuSO4, Fe(NH4)2(SO4)2 y ZnCl2. El reverso de los sntomas y el restablecimiento del crecimiento ptimo del ganado proporcion la primera evidencia de los metales esenciales. Con el tiempo, los estudios bioqumicos llevaron al aislamiento de enzimas que requeran iones metlicos para funcionar, y poco despus esas enzimas especficas podan ser asociadas a los sntomas de deficiencia. Las interacciones de los iones metlicos eran vistas como detrimentales, as como valiosas para el sistema. Por ejemplo, un estudio temprano mostr que el cobre potenciaba los efectos de hierro para aliviar una condicin de anemia en ratas de laboratorio alimentadas con una dieta a base de leche; esa observacin fue repetida en pollos y cerdos, y pronto atrajo la atencin de los clnicos que adoptaron un protocolo bimetlico similar en el tratamiento de humanos anmicos. Junto con el advenimiento de dietas semipurificadas en la misma poca la ciencia de la nutricin se coloc en el umbral de importantes descubrimientos sobre los papeles de os elementos minerales esenciales. Propiedades generales Los cofactores minerales comprenden un grupo grande de substancias inorgnicas, con una mayora de iones metlicos. El dominio de iones metlicos incluye macrometales (como Na+, K+, Ca2+), iones metlicos traza (incluyendo Fe2+, Zn2+, Cu2+ y Mn2+) y metaloides (como Se, Si y B). Al buscar una razn para su necesidad, debemos entender que los iones metlicos son adecuados para la labor de ejecutar peligrosas reacciones qumicas en las superficies enzimticas, reacciones que de otra manera podran daar las cadenas orgnicas laterales ms sensibles de los aminocidos en una enzima. Por ejemplo, los metales redox tales como hierro, manganeso y cobre pueden aceptar electrones en su estructura, mantenindolos temporalmente para luego donarlos al oxgeno, formando agua como una forma para disponer de los electrones con seguridad.

En esencia, uno debe considerar que un cofactor metlico extiende el repertorio de funciones catalticas disponibles para y realizadas por enzimas. Las enzimas que dependen de los iones metlicos como cofactores caen en 2 categoras: enzimas activadas por metales y metaloenzimas. Como el nombre implica, las enzimas activadas por metales son incitadas a una mayor actividad cataltica por la presencia de un ion metlico mono o divalente en el exterior de la protena. El metal puede activar el sustrato (por ejemplo, Mg2+ con ATP), acoplar la enzima directamente o entrar en equilibrio con la enzima explotando su carga inica para producir una unin ms favorable con el sustrato o un mejor ambiente cataltico. Por lo tanto, las enzimas activadas por metales requieren que el metal est presente en exceso tal vez 2-10 veces ms que la concentracin de la enzima. Como el metal no puede unirse en una forma ms permanente, las enzimas activadas por metales tpicamente pierden actividad durante la purificacin. Un ejemplo es piruvato-quinasa, que tiene un requerimiento especfico por K+ y es inactivada por dilisis (difusin por una membrana semiporosa). Las metaloenzimas, en contraste, tienen un cofactor metlicos unido firmemente a una regin especfica en la superficie de la protena. Algunas pueden incluso requerir ms de un in metlico y en raras ocasiones podran ser 2 metales diferentes como, por ejemplo, en Cu2,Zn2-superxidodismutasa. Con algunas excepciones, los metales traza entran en el cuadro como cofactores para las metaloenzimas. Fe, Zn, Cu y Mn, referidos como metales de la primera serie de transicin, son los ms comunes. Sus contrapartes, Mg, K, Ca y Na, son no considerados traza y solamente en raras instancias estos llamados macroelementos se unen fuertemente a la superficie de enzimas. La fuerte unin imposibilita la prdida del in metlico por dilisis o prdida por agentes disociadores dbiles. Las metaloenzimas, sin embargo, pueden perder su cofactor metlico y volverse inactivas cuando son tratadas con queladores metlicos que tienen una afinidad de unin ms fuerte que la enzima y vencen a la protena enzimtica por el in metlico. Como grupos prostticos, los metales en las metaloenzimas tienen una relacin estequiomtrica (relacin in metal-protena enzimtica) representada por un integrador completo. Las metaloenzimas raramente son preparadas para una mayor actividad al agregar su in metlico conjugado a la enzima. La geometra espacial tambin es una preocupacin: los metales en la primera serie de transicin (Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn) deben adherirse a configuraciones geomtricas estrictas alrededor del sitio de unin del metal. Para los metales en la primera serie de transicin se toma nota de los orbitales 3d y 4s al asignar estados de valencia y las formas geomtricas factibles. Exceptuando aquellas con cinc, las enzimas con metales de la primera serie de transicin tienden a ser muy coloridas; por ejemplo, el color rojo de la hemoglobina (hierro) o el color azul de ceruloplasmina (cuyo nombre significa azul cielo) asociada con cobre.

Cofactores metlicos Hierro La mayora de enzimas con hierro acoplan el hierro ya sea como heme o como un arreglo especial de hierro con grupos azufre conocidos como centros hierro-azufre (FenSn). El hierro en heme muestra un enorme parecido con el in magnesio en la clorofila. Heme, que es bsicamente un sistema de anillo de porfirina con hierro posicionado en el centro, es la forma ms comn de hierro en las protenas biolgicas. En citocromo c, una protena heme comn en las mitocondrias, los ligandos axiales al hierro estn ocupados por histidina y metionina de la protena. Como componente de los centros hierro-azufre, el hierro entra en mltiples arreglos de grupo con residuos de cistena en enzimas que ofrecen un contacto ms directo con la protena. Estos centros difieren en su complejidad del simple 2Fe-2S al ms elaborado 4Fe-4S. El hierro en estos centros se une a los sustratos as como transfiere electrones y toma parte en reacciones que involucran deshidrataciones y reacomodos. Las enzimas con centros hierro-azufre incluyen xantina-oxidasa, succinato-deshidrogenasa, aconitasa y nitrogenasa. Una tercera clase, representada por ribonucletido-reductasa, tiene un grupo FeO2 con un dioxgeno como un anin perxido O22- montado entre 2 centros de hierro. Este arreglo permite a la enzima remover un tomo de hidrgeno de una unin C-H muy estable. Un no metal puede substituir al hierro en estos complejos. Las enzimas con un grupo heme generalmente son de color caf rojizo (cuyo tono depender del estado de oxidacin del hierro). El color motiv un inters inicial en estas protenas y fue el factor motivador detrs de nombrar a las protenas heme en las mitocondrias como citocromos. Aunque solamente algunas pocas enzimas solubles tienen hierro como cofactor, el hierro es especialmente prominente en las protenas unidas a membrana que comprenden rutas de transporte de electrones. Ejemplos de estas incluyen los citocromos en la mitocondria, retculo endoplsmico y fotosistemas I y II en los cloroplastos. Tal vez la protena con hierro ms inusual es la ferritina, una enorme protena subunidad de almacenamiento de hierro que tiene la capacidad de unir ms de 2,500 tomos de hierro en su estructura. La propiedad redox del hierro desempea mucha de su qumica como cofactor. El hierro est casi siempre involucrado con la transferencia de electrones y muchas veces dona los electrones a una molcula de oxgeno. Dos importantes propiedades que se adecan a ese papel son: (1) un tomo de hierro que puede fcilmente realizar cambios de valencia reversibles de Fe2+ a Fe3+, lo que permite el intercambio fcil de electrones, y (2) el par in ferroso-frrico tiene un potencial electroqumico relativamente bajo (-0.1 V), el cual permite al hierro estar en el lado alto (reductor) de una cadena de transporte de electrones. En citocromo P450 un solo tomo de oxgeno es transferido al sustrato despus de que O2 se une a Fe(II). En el mecanismo el complejo Fe(II)-O2 es convertido en FeO, el cual presenta una especie Fe(V) que atrae el sustrato e incorpora el nico tomo de oxgeno en su estructura. Aunque 3

estados ms altos de valencia tales como Fe(IV) y Fe(VI) son formados por remocin de electrones 3d adicionales, solamente en raras ocasiones estas valencias ms altas de hierro son vistas en sistemas biolgicos. Tanto catalasa como peroxidasa, dos enzimas heme, utilizan hierro para interactuar con oxidantes peligrosos. Ambas enzimas estn localizadas en el citosol y en peroxisomas, en donde ocurren las reacciones de oxidacin dainas durante el curso de los eventos metablicos normales. Tal vez la enzima conteniendo hierro ms familiar es la citocromo c-oxidasa, el aceptor de electrones terminal en la cadena mitocondrial de transporte de electrones y la enzima capaz de dividir una molcula de oxgeno para formar agua. Cinc El cinc es tal vez el ms ubicuo y verstil de todos los cofactores metlicos. Ms de 300 enzimas tienen un cofactor de cinc. Las protenas ligadas a cinc que se enganchan al DNA, las llamadas protenas dedo de cinc, atestiguan la versatilidad del cinc en los sistemas biolgicos. Aproximadamente el 3 % del genoma en los mamferos codifica para protenas dedo de cinc. Como cofactor, el cinc puede realizar funciones tanto estructurales como catalticas. En la anhidrasa carbnica, por ejemplo, el cinc entra en una unin coordinada con el sustrato CO2; en la carboxipeptidasa el cinc toma parte activa en la ruptura de la unin pptido; las enzimas multisubunidad como aspartato-transcarbamilasa utilizan cinc para coordinar las posiciones de las subunidades cataltica y reguladora, un papel estructural; la Cu2,Zn2-superxido-dismutasa requiere cinc para posicionar el tomo de cobre en el canal accesado por el sustrato HO.2, otro papel estructural; en las protenas dedo de cinc, Zn2+ contribuye a la estabilidad de la estructura de rizo que contacta los surcos mayor y menor del DNA. Estos ejemplos ilustran por qu el cinc es un importante acompaante para enzimas y protenas. El cinc es considerado un metal suave porque se comporta como un catin divalente sin preferencia geomtrica especial. Es tal vez esta suavidad lo que permite al cinc adaptarse a tantos ambientes enzimticos diferentes. El cinc existe en un estado de valencia Zn2+, y por tanto no tiene propiedades redox. El in Zn2+ est configurado como un 3d10, lo que denota un orbital 3d lleno. Por esta razn, los complejos de cinc carecen de color y el cinc en s se comporta principalmente como un catin. Zn2+ es un buen aceptor de electrones (cido de Lewis) y puede entrar en un arreglo de unin coordinado que polariza grupos a los cuales se une. Esta propiedad permite al cinc incrementar la susceptibilidad de una unin qumica a ataque; por ejemplo, Zn2+ polariza al agua, lo que hace que el agua se comporte ms como un in hidrxido y sea ms efectiva para atacar el CO2 para formar HCO-3 en la reaccin catalizada por anhidrasa carbnica. Otro ejemplo es el uso de cinc para polarizar la unin ester o amida, promoviendo as el ataque nucleoflico de agua a la unin, como en las reacciones catalizadas por carboxipeptidasa y aminopeptidasa. Cobre El cobre, como el hierro, es un metal redox. Como el hierro, el cobre existe en estados de valencia mltiples; Cu+ y Cu2+ (cuproso y cprico) son los ms comunes. 4

Las enzimas con cobre, aunque no tan numerosas como las enzimas con cinc, cumplen importantes funciones biolgicas, principalmente dentro del citosol. Muchas caen en la categora de oxidoreductasas, o ms especficamente oxidasas, lo que significa que catalizan reacciones en las cuales los electrones del sustrato son transferidos al O2. Las enzimas con cobre pueden ser simples o complejas, dependiendo del nmero de tomos Cu en la enzima. Las enzimas simples generalmente contienen un Cu por subunidad. Las enzimas ms complejas incluyen las oxidasas multicobre, que pueden tener tan pocos como 4 (ejemplo, laccasa) o tantos como 8 tomos de cobre por enzima (ejemplo, dopamina--monooxigenasa). El cobre en estas enzimas existe en 3 diferentes ambientes qumicos conocidos como sitios cobre tipo 1, tipos 2 y tipo 3. La ceruloplasmina, por ejemplo, contiene 6-7 tomos de cobre en 3 sitios distintos. El sitio cobre tipo 1 da un color azul a la ceruloplasmina y otras protenas azules con cobre. Los sitios de unin con cobre en una oxidasa multicobre forman una triada consistente de un cobre tipo 2 y dos cobres tipo 3, arreglados en un tringulo issceles. El oxgeno se une a estos dos cobres tipo 3 en la base del tringulo. Ejemplos de enzimas con cobre incluyen citocromo c-oxidasa, lisil-oxidas y ascorbato-oxidasa. Debido a su tendencia para aceptar electrones, el cobre es un poderoso oxidante en los sistemas biolgicos. Los sitios cobre en la ceruloplasmina tienen la capacidad de oxidar Fe2+ a Fe3+, lo que prepara los iones frricos para unirse a la transferrina y entregar hierro a rganos y tejidos. Esta reaccin liga al hierro con el metabolismo del cobre y podra explicar como la ausencia de cobre en la diera impide el transporte de hierro y causa anemia en los humanos. Raramente el cobre est destinado a desempear solamente un papel estructural, y muchas enzimas que poseen cobre como cofactor utilizan el metal en el sitio activo. Estudios han ligado iones de cobre con la formacin de arterias o angiognesis. Uno de los descubrimientos ms emocionantes, an por ser comprendido del todo, es que privar a un animal (humanos incluidos) de cobre retrasa o an inhibe el crecimiento de tumores cancerosos. Desde una perspectiva nutricional, esto podra significar que el cobre es esencial para el desarrollo del sistema microvascular. Manganeso Mientras que el cinc puede ser el metal de transicin ms comn en enzimas, el manganeso es tal vez el menos comn, en parte debido a que los complejos de manganeso con protenas tienden a ser dbilmente estables y se disocian con facilidad. Metaloenzimas con manganeso notables incluyen piruvato-carboxilasa y manganeso-superxido-dismutasa en las mitocondrias y arginasa en el ciclo de urea. El manganeso tambin puede funcionar como un cofactor activador de metal para muchas enzimas que requieren magnesio. Aunque el manganeso no es considerado un metal redox basado en su reactividad, puede no obstante existir en 6 estados de oxidacin (Mn2+ a Mn7+), tres de los cuales (Mn5+ a Mn7+) no se observan en sistemas biolgicos. La forma ms comn de manganeso es Mn2+. El mayor nmero

de valencias mltiples de manganeso ocurren en la enzima divisoria de agua que se encuentra en los cloroplastos de las plantas como parte del fotosistema II. Cobalto El papel del cobalto como cofactor est limitado a su presencia en la vitamina B12. El cobalto y el nquel son iones que pueden haber figurado ms prominentemente en los sistemas primitivos cuando la atmsfera contena H12 y CH4 como gases ambientales comunes; cuando los sistemas biolgicos gradualmente se adaptaron al O2 la necesidad de estos 2 metales fue menor. El cobalto puede existir en 3 estados de valencia, Co+, Co2+ y Co3+, siendo Co2+ el ms comn en 5-desoxiadenosilcobalamina, la forma familiar de la coenzima vitamina B12. El cobalto est unido por un arreglo plano cuadrado a un anillo, anlogo a heme pero con caractersticas muy especiales. A diferencia de heme, el cobalto tiene 2 ligandos axiales que estn libres de la protena, lo que permite a grupos no protenicos tener acceso al metal central por arriba y por debajo del plano. En un complejo octaedro, una posicin axial (el quinto coordinado) est normalmente ocupado por un benzimidasol y el otro por un grupo metilo (como en metilcobalamina). El arreglo es nico y permite al cobalto forman uniones carbn-metal con el potencial para 2 diferentes reactividades. El grupo metilo, por ejemplo, puede ser removido como in carbonium reteniendo ambos electrones en el cobalto, lo que luego revierte a un menos estable Co(I). Esto es tpico de la reaccin en la cual la vitamina B12 acta como un donador de metilo. En los rearreglos de posicin el cobalto retiene solamente un electrn y forma un estable Co(II) o in d7 con la liberacin de un radical libre. Los radicales libres son altamente reactivos y superan las barreras de energa que mantendran a raya a otros reactivos. As, las propiedades qumicas del cobalto transfieren grupos como iones carbonium o radicales centrados en carbn altamente reactivos. Ambos productos son posibles y explican la necesidad por cobalto como un cofactor para la reaccin que procede va un mecanismo de radical libre. Un ejemplo de este ltimo es el rearreglo intramolecular de metilmalonil-CoA a succinil-CoA, catalizado por metilmalonil-CoAmutasa. Vanadio Aunque todava debe describirse una funcin bioqumica completa para el vanadio en los animales superiores, reportes en bacterias y algas proporcionan pistas sobre la necesidad funcional de este metal en la catlisis enzimtica. Se ha encontrado que el vanadio es esencial para la actividad de bromoperoxidasa, una enzima encontrada en las algas cafs y rojas, y poco despus se caracteriz una iodoperoxidasa dependiente de vanadio. El vanadio tambin ha sido encontrado en altas concentraciones en hongos, y se ha demostrado su acumulacin abundante en ascidias, especficamente en las clulas sanguneas (vanocitos) de estos organismos. La especulacin sobre la funcin del vanadio en los microorganismos va de la accin antimicrobiana a la transferencia de electrones y el atrapar oxgeno. En los animales superiores, sin embargo, el vanadio tiene propiedades insulinomimticas y se ha demostrado que estimula la 6

proliferacin y diferenciacin celular. Se cree tambin que regula las reacciones de fosforilacin y desfosforilacin a travs del control de ATPasas, fosfatasas y adenilciclasa, lo que tiene amplios efectos en las funciones celulares. Debe notarse, sin embargo, que no se ha demostrado todava que el vanadio sea un activador o inhibidor especfico de alguna enzima en humanos. El vanadio es como el molibdeno, al ser capaz de formar tanto oxianiones como oxicationes, VO42(MoO42-), VO2+ (MoO2+, MoO2+ y MoO22+), as como centros de azufre, como VS43- (MoS42-). El vanadato difiere del molibdato al ser un agente oxidante ms fuerte, lo que puede relacionase con su funcin de transferencia de electrones en las formas de vida menores, pero con significado cuestionable en humanos. Calcio El calcio es un cofactor para un nmero limitado de importantes enzimas, adems del complejo actina-miosina en el msculo; alfa-amilasa y termolisina son 2 de las ms conocidas. Como un in libre o trabajando a travs de calmodulina, el calcio es mejor entendido como un activador de enzimas en rutas de sealizacin celular dependientes de hormonas. Las enzimas referidas como Ca-ATPasas y H+/Ca-ATPasas no deben ser consideradas como enzimas dependientes de calcio. Este es un nombre incorrecto porque Ca2+ es el objeto de la accin de la enzima ms que un cofactor para su actividad. Las ATPasas comprenden un gran grupo de enzimas unidas a membrana que bombean Ca2+ desde el citosol hacia el retculo endoplsmico o expelen calcio de la clula a travs de canales en la membrana. Como un metal del grupo IIa, el calcio est limitado a un estado de valencia 2+ y sirve primariamente como catin divalente en sus interacciones con enzimas. El papel de Ca2+ est limitado principalmente a la estabilidad estructural. Molibdeno El molibdeno est ampliamente distribuido en plantas y animales. El metal existe en 3 estados de valencia: Mo4+, Mo5+ y Mo6+. Un nmero limitado de reacciones redox explotan los estados multivalencia. Las enzimas dependientes de molibdeno se encuentran en rutas que metabolizan purinas, pirimidinas, pterinas, aldehdos y sulfitos. Se ha propuesto una estructura de cofactor para el molibdeno, llamada molibdopterrina. Las enzimas que utilizan el cofactor incluyen xantina-oxidasa, sulfito-oxidasa y aldehdo-oxidasa. En microorganismos el molibdeno es un metal clave para la fijacin de oxgeno. La xantina-oxidasa es la enzima con relevancia en el sistema mamfero.

Una preocupacin nutricional del molibdeno es su habilidad para antagonizar al cobre. El rociado indiscriminado de los suelos con molibdeno afecta el crecimiento y productividad de los rumiantes. El efecto se relaciona con la formacin de tiomolibdatos en el rumen, en donde estos interactan y se ligan al cobre evitando su absorcin. Los tiomolibdatos tienen una enorme afinidad por cobre, casi al grado de exclusin de otros iones metlicos, al grado que se han utilizado para controlar la toxicidad en la enfermedad de Wilson, una enfermedad gentica de envenenamiento de cobre en humanos. 7

Nquel Como un cofactor, el nquel aparece con poca frecuencia, reportndose en enzimas microbianas y de plantas, como ureasa del frijol Jack, frijol de soya, arroz y tomates. Hay unos 2 gramo-tomos de nquel por mol de subunidad (96,000 Da) de la enzima. Otras metaloenzimas conteniendo nquel incluyen el Factor F340 encontrado en la membrana de bacterias metanognicas, carbonomonxido-deshidrogenasa e hidrogenasas I y II. El nquel ha llamado la atencin debido a la observacin de que las concentraciones en el suero de mujeres se elevan marcadamente, inmediatamente despus del parto. Algunos consideran al nquel como el metal que fue. A medida que los biosistemas evolucionaron y cambiaron de una atmsfera sin oxgeno a una rica en oxgeno, en donde el metano y el hidrgeno tendieron a ser minimizados como sustratos para energa, los metales que formaban un cofactor importante en el ambiente anaerobio y que eran utilizados por organismos ms primitivos (como arqueobacterias) fueron substituidos por un metal o cofactor ms adecuado para el ambiente actual. As, nquel, como cobalto, pueden haber tenido su mayor era en las enzimas que catabolizaban CH4 y H2. Otros cofactores metlicos El in sodio no es considerado generalmente con un cofactor especfico pues no se ha demostrado la existencia de una enzima cuya catlisis dependa estrictamente de los iones de sodio. Las enzimas activadas por sodio responden con frecuencia a cofactores metlicos substitutos como Li+ o an cationes divalentes. El in magnesio es requerido por un gran nmero de enzimas conocidas como quinasas, enzimas que transfieren el grupo fosfato terminal de ATP a un sustrato. Las enzimas quinasas figuran prominentemente en muchas rutas bioqumicas como gliclisis (hexoquinasa, fructosa-6-fosfatoquinasa, piruvato-quinasa), respuestas hormonales mediadas por AMP cclico, sealizacin celular y regulacin de divisin celular. El in potasio es un cofactor especfico para piruvato quinasa en la ruta de gliclisis. Tanto potasio como magnesio forman enlaces no permanentes con sus respectivas enzimas y por tanto actan ms en la capacidad de activadores.

Aunque cromo, estao, arsnico y estroncio han sido postulados por algunos investigadores como esenciales para el ptimo crecimiento y salud de los organismos, as como poseedores de una influencia positiva en los sistemas biolgicos, las funciones como cofactores para sus iones no han sido asignadas porque no se han encontrado enzimas especficas que puedan requerirlos para su actividad.

Cofactores minerales no metlicos Selenio El selenio pertenece a la categora de no metales redox y est incluido en la misma clase del azufre (algunas veces referidos como metaloides), lo que implica que el selenio podra ser capaz de substituir al azufre en los complejos biolgicos. Como un congnere del azufre, el selenio se vuelve parte de la estructura de protenas como selenocisteina y selenometionina, no como un tomo de selenio ligado directamente a la protena como un grupo prosttico. Estas son los cofactores activos en las enzimas con selenio. Aunque un in selenio es claramente capaz de reacciones redox, hay poca informacin disponible sobre las funciones de selenio como cofactor. Enzimas como glutatin-peroxidasa son enzimas solubles que trasfieren electrones hacia y desde sustratos. Substituir el selenio con azufre en la enzima niega la actividad. Con solamente algunas selenoenzimas disponibles hay informacin insuficiente para precisar el papel cataltico del selenio. Se cree que glutatin-peroxidasa en la forma reducida (descanso) contiene un selenol ionizado que puede reaccionar con perxidos orgnicos o perxido de hidrgeno. Una enzima selenol podra ser un intermediario en la reaccin catalizada por 5-deiodinasa, la enzima que cataliza la remocin de iodo de la hormona tiroidea. El complejo enzima-cido selennico (Enz-SeOH) es regenerado por glutatin reducido (GSH) el cual forma un intermediario mixto (Enz-Se-S-G). Este intermediario luego reacciona con un segundo GSH para restaurar Enz-Se- y libera glutatin oxidado (GSSG) como producto. La regeneracin de Enz-SeI de 5-deiodinasa tambin requiere un agente reductor cuya identidad es incierta. Slice Existe debate sobre si slice es un cofactor, aunque es innegable su importancia en un nmero considerable de reacciones bioqumicas que llevan a la sntesis de glicoprotenas y polisacridos en la matriz extracelular del tejido conectivo. El slice como Si(OH)4 es muy abundante en suelos y minerales, siendo tan comn en los tejidos humanos como el magnesio. En las plantas, especialmente pastos, el slice es un componente importante de un esqueleto mineral y tiene una renovacin metablica cercana a la del carbono. En los humanos, las mayores concentraciones de slice aparecen en los tejidos conectivos como aorta, trquea, tendones, huesos y piel. Menores cantidades se encuentran en hgado, corazn y msculos, La epidermis y el pelo son significativamente altos en slice. El slice, como cido silcico, es requerido para la actividad mxima de prolil-hidroxilasa, la enzima que convierte los residuos de prolina a hidroxiprolina en el colgeno. Se requieren niveles elevados (0.2 a 2.0 mM) para estimular la enzima, la cual cataliza un factor determinante de tasa en la biosntesis de colgeno. 9

Boro Manipulando el contenido de boro en la dieta lleva a un amplio nmero de respuestas metablicas, lo que atestigua la importancia potencial del boro en la nutricin humana. Estudios tempranos reportaron niveles superiores de hormonas esteroides, testosterona y estradiol en los animales suplementados con boro. Estudios adicionales sugirieron que el boro tena un papel regulador en el metabolismo de otros minerales como calcio y que poda afectar el metabolismo seo. En una forma comparativa, el papel del boro ha sido bien establecido en plantas vasculares, diatomeas y flagelados algceos marinos. Los peces cebra privados de boro tienden a sufrir defectos de desarrollo. Estos datos han impulsado la investigacin sobre las funciones biolgicas del boro en los vertebrados superiores; sin embargo, pocos estudios apoyan un papel esencial del boro en los vertebrados. Comparado con el pez cebra, las ratas embarazadas alimentadas con un quinto del nivel de boro de las ratas control no presentan menor crecimiento o desarrollo fetal. Sin embargo, menos embriones de 2 clulas de las ratas deficientes alcanzaron la etapa de blastocito cuando fueron cultivadas in vitro, sugiriendo que la privacin de boro tuvo un impacto en una etapa muy temprana del desarrollo. Tal vez la reticencia a aceptar boro como esencial es la falla para definir un enlace a un compuesto de rgano boro especfico con una funcin fisiolgica. Los datos, no obstante, tienden a apoyar la nocin de que los complejos de boro con componentes biolgicos son muy inestables para ser aislados y estudiados, lo que ha limitado el impulso para precisar su funcin metablica. Los cofactores minerales pueden ser vistos como un subgrupo especial de los biominerales. Ms que contribuir a la masa esqueltica y a la homeostasis de fluidos, sin embargo, los cofactores minerales son ms sutiles y estn dedicados especficamente a enzimas. Para encontrar una razn para la existencia de los cofactores minerales, debe considerarse que para cumplir con sus obligaciones funcionales una enzima se enfrenta a muchos retos. La superficie de la protena puede ser fcilmente modificada qumicamente por interaccin con sustratos y que la enzima puede perder fcilmente su forma biolgica por desnaturalizacin. Los electrones y grupos que son transferidos hacia y desde los sustratos tienen el potencial de modificar permanentemente la enzima. Esto sucede con frecuencia y en lugar de ser reparadas las enzimas viejas son substituidas. Los cofactores minerales entran en la labor diaria de hacer que una enzima soporte el ambiente difcil en que existe. Tambin se ha demostrado que son ligadores efectivos de sustrato y que interactan con oxidantes y reductores sin dificultad. Algunos metales traza como cinc pueden aceptar pares de electrones en la formacin de unin covalente que polariza y facilita la ruptura de uniones qumicas en el sustrato. Otros metales como cobre y hierro pueden aceptar electrones del sustrato y pasarlos al oxgeno.

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La catlisis y la estabilidad estructural son las 2 funciones primarias de los metales en las enzimas. Muchos factores orgnicos sirven como agentes de captura de electrones y de transferencias de grupo, lo que sugiere que las metaloenzimas pueden respaldar enzimas con cofactores orgnicos; sin embargo, esta visin es sobresimplificada ya que hay muchas reacciones catalizadas por enzimas en donde solamente un metal podr cumplir con el papel, como en las metaloenzimas que catalizan la destruccin de radicales de oxgeno. Nos referimos a los metales esenciales en un nivel similar que las vitaminas, que son requeridas en cantidades muy pequeas para mantener el status quo en un sistema y, como las vitaminas, estn disponibles solamente a travs de la dieta. Por lo tanto, podemos concluir que los minerales esenciales y las vitaminas tienen un punto comn en las enzimas, a las cuales, literalmente, les permiten funcionar. Cofactores enzimticos orgnicos Citrato sintetasa y CoA (ADP3'-fosfato) en morado CoA(cido pantotnico) en rojoLos cofactores son importantes elementos para los procesos bioqumicos. Generalmente presentes como compuestos orgnicos pequeos o iones metlicos, los cofactores dar poder a las enzimas para la mxima funcionalidad de la efectividad cataltica o resistencia. Las coenzimas con un subgrupo de cofactores cuya estructura es en parte derivada de las vitaminas hidrosolubles del grupo B. Histricamente los cofactores han sido removidos inadvertidamente durante la purificacin y han debido ser agregados para restaurar la actividad enzimtica. En la actualidad, nos referimos a un cofactor como un componente obligatorio del mecanismo cataltico. Los compuestos que cumplen el criterio anterior son 1) molculas orgnicas pequeas que se unen directamente a la superficie de la enzima, formando un sitio activo para que se una o interacte el sustrato, o asiste en estos eventos indirectamente, o 2) iones inorgnicos que se unen a grupos especficos en la superficie de la enzima y ayudan en la unin del sustrato, catlisis, estabilizacin del estado de transicin o contribuyen a la estabilidad global de la estructura enzimtica. Hablando prcticamente, cualquier substancia en un medio de ensayo que promueve la actividad cataltica o la estabilidad de una enzima es un candidato para cofactor. Cofactores y coenzimas son trminos que se usan intercambiablemente. Es importante notar, sin embargo, que el prefijo holo se utiliza para referirse a una enzima y a su coenzima juntas como una unidad cataltica, y el prefijo apo cuando falta la coenzima. Las apoenzimas son afuncionales y no benefician al organismo. Los estudios tempranos en vitaminas encontraron que muchas, especialmente las vitaminas hidrosolubles del grupo B, formaban el ncleo de los compuestos que tomaban parte en la catlisis enzimtica. El descubrimiento estableci un puente entre nutricin y bioqumica. En efecto, muchos investigadores bioqumicos tempranos se dedicaron a aprender las funciones biolgicas de los nutrimentos esenciales, los cuales incluan a las vitaminas. Un principio general que emergi en ese entonces era que una vitamina deba ser cambiada a otro compuesto para ser metablicamente funcional. Con la dieta como la nica fuente, fue posible aprender los efectos especficos de las vitaminas individuales por estudios de omisin. Con estudios ms profundos de los procesos biolgicos, pronto se dieron cuenta de que cancelar una enzima en una ruta bioqumica crtica estaba detrs de muchas de las enfermedades por 11

deficiencia vitamnica, como beriberi, pelagra y anemia perniciosa. Esto puso un nuevo nfasis en las funciones enzimticas y en la bsqueda por enzimas que dependieran de las vitaminas para funcionar. Se considera que existen alrededor de 20 principales cofactores orgnicos involucrados en la accin enzimtica de las rutas bioqumicas en humanos.

Vitaminas especficas como cofactores Tiamina (vitamina B1) Mejor conocida como el factor anti-beriberi y llamada inicialmente simplemente vitamina B por McCollum, la tiamina est involucrada en la descarboxilacin de piruvato a acetaldehdo en la fermentacin alcohlica y fue llamada cocarboxilasa en 1932. La confirmacin de su estructura como tiamina-pirofosfato (TPP, por sus siglas en ingls) vino 5 aos despus. Su nombre significa una vitamina que contiene azufre (thios en griego). Reacciones en las que est involucrada: 1. Complejo piruvato-deshidrogenasa en mitocondrias. 2. Complejo -cetoglutarato-deshidrogenasa en mitocondrias. 3. Deshidrogenasa de cadena ramificada. 4. Reacciones de transcetolasa en la ruta de la pentosa y en la ruta reductora de pentosa en la fotosntesis. La estructura de la tiamina tiene dos anillos puenteados por un grupo metileno. La coenzima (TPP) surge va una pirofosforilacin del grupo alcohol primario dependiente de ATP. Lo que puede llamarse el sitio activo de la coenzima es el carbono en la posicin 2 (C-2) del anillo ms pequeo de tiazolio de 5 miembros. Una posicin favorable de C-2 entre tomos de nitrgeno y azufre causa que el hidrgeno en C-2 intercambie protones con agua, indicando que C-2 se puede ionizar a carbanin. Como un carbanin, C-2 es capaz de unirse a centros positivos como carbono carbonilo de cetocidos y cetoazcares. En la reaccin con piruvato, -cetoglutarato o -cetocidos de cadena ramificada de valina, leucina o isoleucina, un grupo carboxilo es expelido como CO2 y los electrones permanecen con el aldehdo activo en la posicin C-2. El ataque en el cetoazcar separa los primeros 2 carbonos como una unidad, que luego se une a C2 como un aducto glicoaldehido activo. La levadura separa el aldehdo activo como acetaldehdo ms tarde para ser reducido a etanol por alcohol-deshidrogenasa. Las bacterias convierten al aldehdo activo en acetil-fosfato. En las mitocondrias de los organismos superiores, sin embargo, el aldehdo actico es oxidado por una enzima que contiene FAD (parte del complejo piruvatodeshidrogenasa) y transferido al cido lipoico, el cual transfiere el grupo acetilo altamente energtico al grupo tiol de la coenzima A.

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Como una coenzima para transcetolasas en la ruta de la pentosa, TPP toma parte en la formacin de ribosa-5-fosfato, gliceraldehido-3-fosfato y eritrosa-4-fosfato a partir de sedohepulosa-7fosfato, xiulosa-5-fosfato y frutosa-6-fosfato, respectivamente. Cada fosfato de azcar dona un glicoaldehido activo a un aceptor de aldosa. TPP es tambin la coenzima para deshidrogenasa de cadena ramificada, la enzima que cataliza la descarboxilacin oxidante de -cetocidos derivados de leucina, isoleucina y valina, tres aminocidos esenciales. La reaccin sigue un esquema similar a la oxidacin de piruvato, aunque el esqueleto de carbono del aminocido se condensa con la coenzima A (CoA). Riboflavina (vitamina B2) La primera pista de que la vitamina B de McCollum era en realidad un complejo multifactorial surgi cuando la levadura sin actividad antineuritis retena la actividad estimuladora del crecimiento. Originalmente llamada vitamina G, la riboflavina fue renombrada vitamina B2 cuando se reconoci como parte del complejo B de la levadura. El nombre riboflavina sigui al descubrimiento en 1935 de su asociacin con el pigmento fluorescente verde del suero. En la actualidad nos referimos a riboflavina y niacina como las 2 principales vitaminas que dan lugar a coenzimas que funcionan con enzimas conocidas como oxidoreductasas. Ambas coenzimas transportan electrones hacia y desde los sustratos, formando as productos oxidados o reducidos. Las dos con conocidas como coenzimas redox (abreviatura de oxidacin-reduccin) por esta razn. La riboflavina fue identificada como el compuesto bioqumico que daba el color a la enzima amarilla de Warburg, glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (G6PDH, por sus siglas en ingls). Se not que G6PDH catalizaba la transferencia de electrones de nicotinamida adenina dinucletido fosfato (NADPH) a azul de metileno, un tinte sensible a redox que pierde el color por reduccin, sugiriendo que la riboflavina probablemente mediaba el intercambio de electrones. G6PDH es un punto clave de entrada para glucosa en la ruta de la pentosa y un colaborador importante de NADPH para la biosntesis de cidos grasos y otras grasas. Riboflavina est asociada con 2 coenzimas, mononucletido de flavina (FMN, por sus siglas en ingls) y dinucletido de flavina y adenina (FAD, por sus siglas en ingls). FMN es formado por fosforilacin del alcohol primario en la parte azcar de riboflavina, una reaccin dependiente de ATP. FAD resulta de la condensacin adicional de FMN con la parte 5 AMP del ATP. Lo que puede ser considerado el sitio activo es el anillo de isoaloxacina, que puede existir en estado oxidado o reducido, dependiendo de la ausencia o presencia de pares de electrones, respectivamente. Las enzimas que contienen FAD o FMN son referidas como flavoprotenas. FMN est limitado a las protenas de membrana del sistema de transporte de electrones en la mitocondria, mientras que FAD se encuentra tanto en las enzimas unidas a la membrana como en las solubles. El cofactor de flavina se une covalentemente a la estructura, previniendo la separacin durante los procedimientos de purificacin. Las enzimas de flavina estn diseadas para remover (y agregar) electrones hacia y desde los sustratos. En general, las coenzimas de flavina son agentes oxidantes ms fuertes que las coenzimas de pirimidina (NAD+ y NADP+) y tienden a participar en reacciones ms complejas. Tambin, las coenzimas de flavina pueden aceptar electrones nicos de un donador, formando 13

una semiquinona y permitiendo a las flavoprotenas tomar parte en reacciones que forman radicales libres. Tener un solo electrn tambin permite a las flavinas unirse a oxgeno molecular como un complejo hidroxiperoxilo. Niacina (vitamina B3, cido nicotnico, nicotinamida) La niacina resulta interesante, ya que su compuesto padre, el cido nicotnico, ha sido conocido desde 1867, mientras que su actividad como vitamina fue reconocida en 1937. Si tiamina es el factor anti-beriberi, la niacina es el factor anti-pelagra. La pelagra es una enfermedad caracterizada por dermatitis en reas de la piel expuestas a la luz solar, as como inflamacin en las piernas, desde la rodilla hacia abajo, adems de enrojecimiento doloroso y comezn. La niacina es el componente activo de la segunda mayor coenzima redox, nicotinamida adenina dinucletido y su fosfato (NAD+ y NADP+, respectivamente). Como con FMN y FAD, NAD+ y NADP+ surgen por fosforilacin y condensacin de la estructura bsica de la vitamina con ATP. NAD+ difiere de NADP+ por tener un grupo fosfato en la posicin 3 de la pentosa ms cercana a la adenina. NAD+ y NADH fueron descubiertos en extractos dializables de levadura, lo que significa que estas coenzimas se separaban fcilmente de la enzima que las una. La habilidad para unirse y separarse de la enzima es fundamental para la entrega de electrones. Con algunas excepciones, las reacciones relacionadas a redox de NAD+ y NADP+ son con enzimas deshidrogenasas, enzimas que catalizan la remocin y adicin de electrones (como iones hidruro) a sustratos. Una reaccin tpica en la cual NAD+ es el agente oxidante es la conversin de cido Llctico a piruvato. Por lo tanto, la coenzima es el principal participante en las reacciones catablicas productoras de energa. NADP+ tiene un menor papel catablico, pero su forma reducida, NADPH, es un importante reductor en las reacciones anablicas, especialmente la biosntesis de cidos grasos y otros lpidos. El sitio activo tanto de NAD+ como de NADP+ es el anillo de nicotinamida. La forma oxidada de nicotinamida tiene un nitrgeno cuaternario (4 uniones), descrito como una carga positiva. El anillo oxidado acepta 2 electrones y un protn del sustrato (literalmente un in hidruro, H-) reduciendo el anillo y aboliendo la carga positiva en el nitrgeno. Se conocen ms de 200 enzimas que catalizan reacciones en las cuales NAD+ o NADP+ aceptan un in hidruro del sustrato. Adicionalmente, hay una fuerte estereoespecificidad para esta reaccin. La adicin de un H- al anillo puede ser en el frente (tipo A) o en la espalda (tipo B), dependiendo de la enzima. Reducir el anillo debilita su unin a la enzima y causa que NADH (o NADPH) se disocie y se una a otros componentes celulares con el propsito de transferir los electrones. NAD+ es tambin una fuente de 5 adenosina-monofosfato (5AMP, por sus gilas en ingls) en una serie limitada de reacciones de activacin o inhibicin. El 5AMP transferido se vuelve un grupo que se separa para la subsecuente formacin de unin. En la DNA-ligasa en bacterias, por ejemplo, el 5AMP es transferido a una lisina en la enzima para formar un aducto fosfoamida inusual, que subsecuentemente es transferida a una de las cadenas de DNA. El ataque por el grupo 3 hidroxilo en la cadena adyacente de DNA libera el 5AMP concomitante con la formacin de una unin fosfodiester, sellando juntas las 2 cadenas de DNA.

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Una reaccin relacionada, conocida como ribosilacin-ADP resulta en la separacin del grupo nicotinamida del NAD+ y la parte ribosa forma una unin glicosilamina covalente con una protena. La ribosilacin-ADP de protenas sensibles es uno de los efectos ms mortales de las toxinas bacterianas como la toxina del clera, la de la difteria o la de la tosferina. Piridoxina (vitamina B6) La vitamina B6 fue descubierta en los 1930s y nombrada piridoxina debido a su parecido estructural con la piridina. El mayor involucramiento de la piridoxina es con una familia de enzimas conocidas colectivamente como aminotransferasas. Estas enzimas intercambian grupos amino de aminocidos a -cetocidos. Nombres familiares incluyen la glutamato-oxalato-transaminasa de suero (SGOT, por sus siglas en ingls). La coenzima, piridoxal-5-fosfato (PLP, por sus siglas en ingls), es la forma predominante y es sintetizada en una reaccin de 2 etapas que involucra la oxidacin del grupo hidroximetilo en la posicin para del anillo de piridina a un aldehdo, y la fosforilacin del grupo hidroximetilo en la posicin 5. PLP es tambin una coenzima para glicgeno-fosforilada y ornitina-descarboxilasa. Con tetrahidrofolato, PLP toma parte en la interconversin serina a glicina. En la superficie de la enzima, la especie reactiva no es un aldehdo, sino ms bien una aldamina formada por una unin base Schiff entre el aldehdo y un grupo -amino de lisina en el sitio activo. La reactividad de PLP se debe a varias caractersticas. Primero, el carbonilo (aldehdo) en el anillo est posicionado para unirse a los grupos amino de aminocidos y unir el aminocido a la enzima. A travs de una serie de rearreglos de electrones promovidos por la PLP, el nitrgeno en el sustrato aminocido es separado y el esqueleto de carbono (un -cetocido) es liberado, reteniendo el grupo amino en la coenzima (piridoxamina-5-fosfato). La enzima entonces se une a un segundo -cetocido y transfiere el grupo amino, generando un nuevo aminocido y restaurando la funcin carbonilo en la PLP. Otros cambios tambin pueden ocurrir a la estructura ligada. Un rearreglo de electrones puede resultar en la prdida de un grupo carboxilo (como CO2) o una molcula de H2O. As, las enzimas PLP pueden tambin participar en reacciones de descarboxilacin y deshidratacin. En la reaccin de glicgeno-fosforilasa, el grupo fosfato de la coenzima acta como un catalizador general, promoviendo el ataque de fosfato en la unin glicosdica del glicgeno. cido flico El cido flico fue reconocido por primera vez como el factor levadura o heptico que poda curar una anemia megaloblstica severa en pollos, monos y humanos. La prueba posterior de que la substancia activa era un factor de crecimiento para ciertas bacterias como Lactobacillus casei y Streptococcus faecalis proporcion un bioensayo rpido para el aislamiento, identificacin y eventual sntesis de la vitamina y sus coenzimas.

El nombre cido flico fue dado en 1941 en reconocimiento de su abundancia en verduras de hoja verde y su estructura fue confirmada como cido monopteroilglutmico en 1946. En la actualidad, reconocemos al cido flico como una de las coenzimas de vitaminas ms complejas, debido a su 15

presencia en muchas formas bioqumicas. A pesar de su enorme complejidad, sin embargo, el papel bioqumico del cido flico se angosta a un juego especfico de reacciones sintticas cuyo comn denominador es las unidades de un carbono. La estructura del cido flico (cido N-pteroil-L-glutmico) comprende un compuesto formado por 3 molculas unidas covalentemente: un anillo metilado de pteridina unido a un cido aminobenzoico (PABA, por sus siglas en ingles), que a su vez est unido va el grupo carboxilo al nitrgeno del cido glutmico. La forma coenzima es el tetrahidrofolato (FH4, por sus siglas en ingls) formado en los mamferos por adicin de 4 electrones y 4 hidrgenos al anillo de pteridina. La reduccin es catalizada por dihidrofolato-reductasa con NAPDH como donador de electrones. La adicin de uno o ms residuos de cido glutmico completa la estructura. En la etapa reductora, un nuevo centro asimtrico es generado en C-6 y parece ser crtico para el papel biolgico, sado que solamente un estereoismero de este centro es activo. FH4 puede tener hasta 7 residuos de cido glutmico y existir en muchas diferentes formas qumicas, la mayora de las cuales es interconvertible. Las reacciones bsicas tienen lugar en las posiciones N5 y N10 en la molcula, las que sirven como puntos de anclaje para las unidades de un carbono en trnsito. N10-formilo-FH4 y N5,N10metilenilo-FH4 son 2 formas sintticas biolgicamente activas. Los complejos de N5-formilo-FH4 (cido folnico) transfieren grupos formilo a sustratos especficos. Los derivados activos de cido flico tienen carbono en el estado de oxidacin de formato as como formaldehido (metileno), y un derivado de metilo, N5-metilo-FH4 se conoce por tomar parte en a conversin enzimtica de homocisteina a metionina. Estas observaciones revelan que la familia de coenzimas de cido flico es bastante compleja pero todas parecen involucrar la unin de un solo tomo de carbono al sustrato. Las enzimas que requieren cido flico participan en lo que se conoce como el metabolismo de un carbono. Esto toma la forma de transferencias de grupo, involucrando grupos metilo, grupos formilo, grupos formimino y grupos metileno. El cido flico no toma parte en acetilaciones o carboxilaciones. En tal vez su nico requerimiento importante como un donador de grupo metilo, N5-metilo-FH4 es necesario por la enzima homocisteina-metiltransferasa para sintetizar (regenerar) metionina a partir de homocisteina. Esta reaccin tambin utiliza un derivado metilado de la vitamina B12 para mediar la transferencia de grupo. Otra importante reaccin es la interconversin de serina y glicina; la reaccin requiere el derivado N5,N10-metilenilo-FH4. En la actualidad, la lista de reacciones catalizadas por folato es bastante larga e incluye unidades de un carbono en la sntesis de un anillo de purina en los cidos nucleicos, metilacin de DNA y RNA, la biosntesis de timidina, biosntesis de colina y S-adenosilmetionina (SAM, por sus siglas en ingls) y el catabolismo de histidina y tirosina.

Biotina

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El inters temprano en la biotina involucraba el llamado factor de dao de clara de huevo. Cuando se confirm que el dao en la clara de huevo era causado por una deficiencia y no una toxicidad, la bsqueda de la substancia faltante llev eventualmente al descubrimiento de biotina. La investigacin en la vitamina llev a un nuevo concepto en nutricin, el de las antivitaminas o sustancias capaces de detener la accin de las vitaminas antes de su uso como cofactores. En el caso de biotina, la antivitamina result ser la protena avidina, que se une a la biotina tenazmente y limita su absorcin intestinal. La biotina puede ser vista como otro cofactor de un carbono, pero para biotina este es CO2. As, las enzimas que requieren biotina catalizan reacciones de carboxilacin, descarboxilacin o transcarboxilacin. La forma activa de la biotina es la biocitina (-N-biotinilo L-lisina), formada por la unin covalente de la cadena lateral de biotina al grupo -amino de un residuo de lisina en la apoenzima, catalizada por una sintetasa especfica. La condensacin requiere ATP y procede va un intermediario biotinilo-AMP con la apoenzima catalizando la formacin de la unin amida. La estructura nica resultante combina las cadenas alifticas de biotina y lisina, permitiendo que la estructura de anillo de la biotina se extienda unos 14 de la superficie de la enzima. El sitio activo en el grupo biotinilo es uno de los N en el anillo de 5 miembros. Un derivado Ncarboxilo sirve como donador de CO2 a un aceptor de sustrato apropiado. La reaccin ocurre en 2 etapas y requiere una formacin ATP-dependiente de una carboxilo-biotinilo-enzima. Si la enzima es una carboxilasa, hay 2 tipos principales de sustrato: 1) derivados de acilo-CoA, que incluye acetil-CoA y propionilo-CoA; y 2) simples -cetocidos como el piruvato. Cada sustrato debe contener un grupo carbonilo adyacente a o conjugado con el carbn que recibe el grupo carboxilo de la carboxilo-biocitina. Tal vez las enzimas biotina-carboxilasa ms familiares en los sistemas mamferos son acetilo-CoA carboxilasa en la biosntesis de cidos grasos, propionilo-CoA-carboxilasa en el catabolismo de cidos grasos de cadena impar, piruvato-carboxilasa en gluconeognesis y -metilo-crotonilo-CoAcarboxilasa en el catabolismo de leucina. cido pantotnico El cido pantotnico fue nombrado por Williams, quien reconoci su ubicua presencia en tejidos de todos los organismos y en todas las fuentes de alimento. La forma coenzima, CoA, fue descubierta mucho antes que la vitamina; las investigaciones de la subestructura de CoA llevaron a un entendimiento de cmo la coenzima era sintetizada. La CoA era conocida como un cofactor dializable esencial para la acetilacin de sulfonilamida y colina. De hecho, la designacin A en CoA reconoca la importancia de las reacciones de acetilacin. La primera pista sobre la estructura de la vitamina surgi cuando digestos de CoA con fosfatasa intestinal y extractos de hgado mostraron contener -alanina y cido pantotnico como productos de la hidrlisis. Tratando la CoA con una 3-nucleotidasa especfica se inactiv la coenzima a un producto conteniendo pantoteno que podra ser restaurando a CoA por adenilacin con ATP. Estos estudios mostraron que el cido pantotnico era un componente esencial de CoA y que estaba ligado a la estructura de una coenzima algo compleja. 17

Como un componente importante de CoA y sus derivados, el cido pantotnico est involucrado en reacciones de acetilacin, que incluyen la sntesis de aceto-acetilo-CoA, un precursor del colesterol, y la biosntesis de citrato a partir de acetato. CoA puede participar en reacciones de tiotransferencia de acilo tales como la aceptacin de grupos acilo del cido lipoico y la formacin de acetilo-CoA, as como CoAs de acilos grasos. El pantoteno tambin se encuentra como grupo prosttico (4-pantoteno) unido a un residuo de serina de la protena transportadora de acilo (ACP, por sus siglas en ingls), que juega un importante papel en la biosntesis de cidos grasos. Cobalamina (vitamina B12) Pocas vitaminas han sido ms complicadas para los estudios de estructura-funcin que la vitamina B12. Entre sus muchas caractersticas nicas, es la nica coenzima vitamina conocida por tener un ion metal de transicin (cobalto) coordinado a su estructura. El metal permite una qumica inusual. La vitamina est presente en una variedad de alimentos, pero est casi ausente en las plantas. Aunque la vitamina puede ser sintetizada de novo por la flora intestinal, el sitio de absorcin est anatmicamente antes del sitio de sntesis en el intestino, lo que significa que poco beneficio se obtiene de la sntesis endgena. El aislamiento de la forma activa de la vitamina signific el desarrollo de un ensayo in vitro para la anemia perniciosa, una de los sntomas de deficiencia. En 1950, Shive introdujo un ensayo en el cual homocisteina era convertido a metionina en una reaccin dependiente de B12. Un segundo ensayo fue esencial para la interconversin de L-glutamato y -metilo-aspartato. El ltimo descubrimiento llev al aislamiento de 5-adenosilcobalamina, la principal forma activa de la vitamina. El ncleo de la vitamina consiste de un anillo de corrina con un tomo central de cobalto. La corrina contiene 4 anillos de pirrol unidos, lo que vagamente recuerda estructuralmente el anillo de porfirina en heme. Una forma inactiva de la vitamina contiene un grupo CN desplazable unido al cobalto; de ah el nombre temprano cianocobalamina para una de sus formas ms familiares. El tomo de cobalto en el anillo puede tener un estado de oxidacin +1, +2 o +3. La quinta valencia (debajo del plano del anillo) tiene un dimetilbencimidazol unido al cobalto y la sexta puede ser un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo 5-desoxiadenosilo, dependiendo de la reaccin o de la enzima. La forma ms comn, 5-desoxiadenosilcobalamina surge del ataque en el carbono 5 de ATP por Co+, el cual desplaza al grupo trifosfato del ATP, una rara accin en bioqumica. Las enzimas conocidas que requieren B12 entran en una de 2 categoras funcionales: aquellas que transfieren grupos metilo de la coenzima al sustrato, y aquellas que toman parte en los rearreglos posicionales de grupos vecinos en el sustrato o en reacciones de transferencia de grupo.

Las reacciones de metilacin en los sistemas mamferos que involucran B12 estn limitadas a la transferencia de grupo metilo a homocisteina para formar metionina. N5-metilo-FH4 es el donador de grupo metilo en la reaccin y B12 media la transferencia. Restaurando el grupo metilo en metionina prepara al sistema para metilacin adicional, dado que la metionina misma, 18

actuando a travs de su forma activa, S-adenosilmetionina, es un donador primario de grupos metilo a otros sustratos. Existe un inters considerable en las reacciones de la vitamina B12 que tienen radicales libres como intermediarios. Esta puede ser una de las principales ventajas de la coenzima, la habilidad para formar y retener un radical libre estable en su estructura. La estabilidad del radical libre es debida a la qumica inusual del ion cobalto.

cido ascrbico La vitamina C (cido L-ascrbico), ligada con el escorbuto, se conoce por ser un cofactor para 2 enzimas que participan en la biosntesis de colgeno, la principal protena del tejido conectivo; la formacin de residuos de hidroxiprolina e hidroxilisina, catalizada por las enzimas prolil-hidroxilasa y lisil-hidroxilasa, respectivamente. El colgeno es un componente esencial de la matriz extracelular. Como un cofactor para dopamina--monooxigenasa, el cido L-ascrbico es requerido tambin para la sntesis de adrenalina y noradrenalina en la mdula adrenal. Otro importante papel no cofactor del L-ascorbato es como un antioxidante en clulas y la sangre. Vitamina K El papel antihemorrgico de la vitamina K haba sido establecido mucho antes de darse cuenta de que la vitamina sin modificacin estructural era esencial para la biosntesis de protrombina funcional. Las 3 formas de la vitamina, filoquinona (vitamina K1), menaquinona (vitamina K2) y menadiona (vitamina K3, que es una forma sinttica) difieren solamente en la estructura de sus cadenas laterales. La vitamina K participa en una amplia serie de reacciones de carboxilacin que involucran todos los residuos de cido glutmico en la primera mitad de la protrombina, un factor de coagulacin sangunea. Los residuos de cido carboxiglutmico o gla que ocupan esta regin de la molcula de protrombina, son capaces de unirse a los iones calcio necesarios para catalizar la formacin de trombina. La carboxilacin es dependiente de oxgeno y utiliza la forma hidroquinona de la vitamina como la fuerza regidora. La warfarina, un inhibidor de la coagulacin, interfiere con la reaccin de carboxilacin, lo que explica el mecanismo bsico de este inhibidor. Un sustrato sinttico, Pro-LeuGlu-Glu-Val substituye a protrombina en la reaccin, abriendo el camino para aprender los detalles finos del mecanismo de reaccin y el papel especfico de la vitamina K. Cofactores no vitamnicos Adems de las coenzimas-vitamina, hay varios cofactores que no cumplen la categora general de cofactores derivados de vitamina. No obstante, estos cofactores orgnicos son componentes esenciales de los mecanismos catalticos de enzimas importantes o sistemas de enzimas unidos a membrana. Acido lipoico 19

El papel del cido lipoico como un factor de crecimiento para microorganismos y como un cofactor para reacciones bioqumicas en todos los organismos ha quedado claro. El cofactor fue descubierto originalmente en la conversin de piruvato a acetato y como un factor esencial para la oxidacin de piruvato. El cido lipoico es conocido por su asistencia a -cetocido-deshidrogenasas de una variedad de organismos. Est normalmente unido al grupo -amino de un residuo de lisina (anlogo a biotina), permitiendo que el cofactor se extienda lejos de la superficie de la enzima. Las reacciones que tienen lugar en el complejo piruvato-deshidrogenasa revelan mejor la funcin como cofactor del cido lipoico. Como cofactor, el cido lipoico (cido 6,8-dithiooctanoico) existe tanto en la forma oxidada (disulfuro) como en la forma reducida. La forma disulfuro oxida el acetaldehdo activo unido a TPP simultneamente con la transferencia de un producto acetato a uno de los grupos SH del cido lipoico ahora reducido. Como un tioester, el grupo acetato es subsecuentemente transferido a CoA formando acetilo-CoA y regenerando un grupo SH libre en el cido lipoico. El cido lipoico reducido, que todava contiene los electrones, es luego oxidado por una flavoprotena (FAD) restaurando el grupo disulfuro del cido lipoico por otra ronda de catlisis. Eventualmente FADH2 pasa los electrones a NAD+, que se une a la cadena de transporte de electrones de las mitocondrias. El cido lipoico es entonces un agente oxidante y un portador de acetato en la reaccin. Uno puede imaginarse el largo brazo del cofactor oscilando entre sitios en las subunidades a fin de desempear las mltiples reacciones en sincrona con los eventos catalticos que tienen lugar. Carnitina La carnitina es fcilmente sintetizada a partir de lisina. Como un cofactor, la carnitina toma parte en el sistema de enzima unido a membrana que transporta cidos grasos hacia la mitocondria para la oxidacin energtica. Dos enzimas, carnitina-acilo-transferasa I y carnitina-acilo-transferasa II, comprenden un ciclo que entrega el cido graso como un derivado de acilo-carnitina al interior de la mitocondria y regresa la carnitina al lado citoslico para transporte adicional. La estructura de la carnitina, con su c grupo hidroxilo en C-3 es idealmente adecuado para la formacin de una unin acilo con un cido graso. Coenzima Q (ubiquinona) Detectada primero en los extractos lpidos de mitocondrias e identificada como una quinona, la coenzima Q (CoQ) fue llamada as para significar su papel como cofactor en reacciones de oxidacin. Un segundo grupo de investigadores descubrieron un cofactor que tena ocurrencia ubicua en procesos oxidantes, que llamaron ubiquinona. Con el tiempo se encontr que CoQ y ubiquinona eran el mismo compuesto. Estudios tempranos en la cadena de transporte de electrones en la mitocondria mostraron al menos 3 complejos que requeran CoQ y reconocieron su papel esencial en el proceso global de transferencia de electrones. CoQ puede ser sintetizada en el hombre a partir de tirosina en una sntesis algo compleja. 20

CoQ y sus forma reducida, CoQH2, estn diseadas para manejar pares de electrones en trnsito en las reacciones de oxidacin-reduccin (redox). Una tercera forma, semiquinona (CoQH-) existe como un radical estable y es capaz de transferencia de un electrn. Debido a su habilidad para tratar con electrones en una base sencilla o en pares, CoQ participa en cadenas de transporte de electrones en donde las transferencias de 1 o 2 electrones son esenciales. Su naturaleza lpida permite al cofactor unirse firmemente a la membrana interna de la mitocondria. Adems de ser un prominente transportador de electrones en la cadena de transporte de electrones de la mitocondria, CoQ se conoce como una fuente y mediador de protones que son bombeados a travs de la membrana interna de la mitocondria para formar el gradiente de protones de alta energa asociado con la fosforilacin oxidante. Pirroloquinolina quinona (PQQ) y 6-hidroxidopa (topa) quinona Un cofactor conocido por estar presente en bacterias metilogncias y otros microorganismos, PQQ fue inicialmente considerada un cofactor para cobre-amino-oxidasas de mamferos y otras enzimas de cobre. Su naturaleza esencial llev a algunos investigadores a considerar a PQQ una vitamina sin descubrir. Esto, sin embargo, result no ser el caso y PQQ como cofactor ahora ha sido relegado al mundo de los microorganismos. Lo que al principio se pens que era PQQ en cobre-oxidasas result ser un cofactor con propiedades de quinona, derivado por modificacin de un residuo de tirosina en la enzima. La sntesis de 6-hidroxi (topa) quinona, un derivado de tirosina, requiere cobre en una reaccin aparentemente autocataltica. Aunque rara y limitada, esta reaccin bioqumica altamente inusual abre un nuevo captulo en los cofactores, mostrando que algunas enzimas tienen una capacidad limitada pero especfica para sintetizar cofactores en su superficie a travs de modificacin de las cadenas laterales de aminocidos existentes. Otros compuestos orgnicos Hay varios compuestos orgnicos naturales que no cumplen totalmente la descripcin de cofactores, aunque han sido identificados por su participacin en la estabilizacin de enzimas, o por tomar parte en una serie selecta de reacciones. Se incluyen aqu en el entendido de que algunos se pueden comportar ms como sustratos que como cofactores. Glutatin El glutatin es una tripptido de ocurrencia natural, que se sabe existe en cantidades milimolares dentro de las clulas. La forma reducida (GSH) tiene grupos SH expuestos, asociados con un residuo interno de cistena, que figura prominentemente en la estabilidad de enzimas con grupos SH en el sitio activo. Glutatin participa en muchas reacciones biolgicas como el transporte de aminocidos, transporte de metales pesados y con la actividad antioxidante. Su papel como cofactor, sin embargo, no debe ser pasado por alto, pues GSH ha demostrado activar muchas enzimas o retener su efectividad cataltica durante los ensayos, lo que hace sospechar, con justificacin, que esta podra ser una de las funciones de GSH in vivo. 21

Betana Betana (N,N,N-trimetilglicina) surge a partir de colina por una reaccin de oxidacin. La estructura es una derivado trimetilo de glicina. Betana aparece en cantidades muy pequeas en las clulas y se ha demostrado que es un donador de metilo para un nmero limitado de reacciones, en las que se destaca la sntesis de metionina a partir de homocisteina.

S-adenosilmetionina Considerar a S-adenosilmetionina (SAM, adomet) un cofactor es reconocer su papel en una multitud de reacciones que transfieren grupos metilo a los sustratos. As, SAM est involucrada en una serie extensa de reacciones de metilacin que sobrepasan las metilaciones de N5-metilo-FH4 o metilo-cobalamina combinadas. El grupo metilo transferido es el carbn terminal de metionina. Para activar el grupo metilo, metionina reacciona con ATP, agregando un grupo adenosilo al tomo de azufre y causando una especie donadora de metilo de alta energa a la forma. Aunque SAM es tal vez ms un sustrato que un cofactor, su inclusin aqu es para denotar la importancia de metionina y su forma reactiva, SAM, en una serie de reacciones biosintticas extremadamente importantes. 3-fosfoadenosina-5-fosfosulfato (PAPS, por sus siglas en ingls) PAPS es un cofactor para las reacciones de sulfatacin, un proceso confinado casi por completo a plantas y bacterias, pero que incluye una reaccin metablica importante en los humanos. PAPS sirve como un agente activo para la esterificacin de sulfato, como en la sntesis de polisacridos sulfatados como sulfato de condroitina, sulfato de queratina y heparina. De las 2 docenas de cofactores orgnicos descubiertos, las estructuras de ms de la mitad son derivadas de los ncleos de las vitaminas, primariamente las vitaminas hidrosolubles B. Como compaeros de las enzimas, los cofactores orgnicos se relacionan a todas las formas de vida. Aunque tendemos a pensar que las vitaminas son requeridas solamente por los organismos superiores, muchos factores orgnicos fueron diseados para servir exclusivamente con las enzimas, y las imperfecciones en los sistemas de enzimas que dieron a las vitaminas su carcter esencial, fueron revelados en sistemas de bacterias y levaduras mucho antes de conocerse en humanos. La permanencia de las reacciones dependientes de cofactores en microorganismos y humanos ha sido notable, una ilustracin del principio estructura-funcin de la bioqumica. Aun as, no debemos olvidar el hecho de que el estudio de cofactores ha brindado un enfoque ms agudo en el papel de los componentes dietarios en la salud y nutricin humanas. Los nutrilogos tienen el reto de conocer todas las funciones de todos los cofactores, ya que dicha informacin proporciona pistas fundamentales en el plano qumico que aplica a un amplio espectro de organismos a nivel molecular.

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