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Liceo Andrés Bello (A-94)Unidad Técnico- PedagógicaAsignatura: Célula, Genoma y OrganismoProfesor: Carlos Contreras G.
Células Troncales y su aplicación en medicina
Nombre CompletoFecha___/___/______Puntaje Total30Puntaje Logrado% Obtenido %Criterio ObtenidoL: 100% a 80 %ML: 79% a 40%NL: 39% a 0%
Objetivo:
Conocer las distintas técnicas empleadas en terapia genética e identificar y comprender los distintosconceptos empleados en esta tecnología.
Terapia Genética
La
terapia genética
es la técnica que permite la
localización exacta los posibles genesdefectuosos de los cromosomas y su sustitución por otros correctos
, con el fin de curar las llamadas
«enfermedades genéticas»
, entre las que se encuentran muchos tipos de cáncer.El desarrollo de la
terapia genética
se ha apoyado en los avances científicos experimentados por determinadas ramas de la biología, como
la genética, la biología molecular, la virología o la bioquímica.
Elresultado es una técnica que permite la curación de casi cualquier patología de carácter genético.En el desarrollo de dicha terapia hay que tener en cuenta diversos factores. Por un lado, es necesario saber cuál es
"tejido diana"
,
es decir, el que va a recibir la terapia
. En segundo lugar, conocer si es posible tratar 
in situ el tejido afectado
. Igualmente importante resulta determinar el que facilita el
traspaso de un genexógeno a la célula
, es decir, qué
vector 
se ha de elegir para el desarrollo del nuevo material genético queposteriormente se introduce el tejido. Finalmente, es preciso estudiar al máximo
la eficacia del gen nuevo
ysaber que
respuesta tendrá el órgano o tejido «hospedador»
, con la entrada del gen modificado.
Los inicios de la terapia génica
Los primeros trabajos en terapia génica se realizaron con
ratones,
mediante técnica del
ADN recombinante
,que consiste en introduci
el ADN extraño en los embriones
, de forma que dicho
ADN se expresa luegocompletamente, a medida que desarrolla el organismo
. El material genético introducido se denomina
transgén
; los individuos a los que se les aplica esta técnica reciben el nombre de
transgénicos
. Con laintroducción de estos
transgenes
se puede lograr la identificación de zonas concretas del material genéticopara llevar a cabo su clonación, con el fin de que solo se vean afectadas un tipo específico de células.
Terapia génica en seres humanos
Esta terapia está destinada al tratamiento
de enfermedades infecciosas y auto inmunes
, Las estrategiasse basan en la
eliminación de poblaciones de células infectadas con virus
, como el HIV, mediante
administración directa de moléculas de ácidos nucleicos
o a través del desarrollo de
vacunas
. En la terapiacontra el
cáncer,
se puede actuar con diferentes objetivos. Si se opera sobre las
células del sistemainmunitario
, se manipulan ex vivo las
células efectoras antitumorales del sistema inmune
. Estas célulasson
modificadas
genéticamente y
reimplantadas
con el fin de
liberar 
dentro del tumor el
producto de losgenes exógenos
, como las
citoquinas
. Sobre las células hematopoyéticas o formadoras de sangre se actúaincorporando los llamados
genes MDR,
que confieren mayor resistencia a las altas aplicaciones de
quimioterapia
en el paciente. Si se actúa directamente sobre las células tumorales, se
introducen factoresgenéticos
que provoquen la muerte o
apoptosis
de las células tumorales o aumenten la respuesta del
sistemainmunitario
antitumoral del paciente
.
Vectores
Los
vectores virales agrupan cuatro tipos de virus: retrovirus, adenovirus, virus adenoasociados yherpes virus;
existen también vectores
no virales
, como el
bombardeo con partículas
, la
inyección directade ADN
, los
liposomas catiónicos
y la
transferencia de genes mediante receptores
.
Vectores virales
Los retrovirus
comprenden una clase de virus cuyo
material genético es una cadena sencilla de ARN
;durante su ciclo vital, el virus se transcribe en una molécula bicatenaria de ADN, gracias a la acción de laenzima
transcriptas inversa
, que se integra en el
genoma
de la
célula huésped
sin aparente daño para ella.La mayor parte de los
retrovirus
a excepción del HIV, sólo se
pueden integrar en células con capacidadpara replicarse, lo cual restringe su uso
.
Sin embargo, se pueden desarrollar en grandes cantidades y suexpresión en la célula hospedadora se realiza durante largos periodos de tiempo
.
Los adenovirus
son un
 
Liceo Andrés Bello (A-94)Unidad Técnico- PedagógicaAsignatura: Célula, Genoma y OrganismoProfesor: Carlos Contreras G.
conjunto de
virus con ADN lineal de cadena doble
. Los v
ectores de adenovirus son más grandes ycomplejos que los retrovirus,
pues en su construcción solamente se elimina una pequeña región del
materialgenético vírico
. Su
ciclo de infección
, que comprende de
32 a 36 horas.
En un cultivo celular conlleva enprimer lugar la síntesis de ADN de la célula y, posteriormente la síntesis y ensamblaje del ADN y las proteínasvíricas. Las infecciones de estos virus en seres humanos están asociadas a
enfermedades benignas
, como la
conjuntivitis.
 
La Principal ventaja de su utilización en la terapia génica es que se pueden producir en grandescantidades y transfieren de forma muy eficaz el material genético a un número elevado de células ytejidos, aunque el hospedador parece limitar la duración de la expresión del nuevo material genético.
Los
virus adenoasociados
 
son muy pequeños, no autónomos y con ADN lineal de cadena sencilla
. Parala replicación de estos virus es necesaria la confección con
adenovirus
. La inserción del material genético delos
adenovirus asociados
se suele producir en regiones del
cromosoma 19
. Los
vectores
que se forman coneste tipo de
virus son muy simples
, no pueden exceder en mucho la longitud del ADN viral, aproximadamente
4.680 nucleótidos
, y son capaces de expresarse a largo plazo en las
células que no se dividen
; sin embargo,la
respuesta que producen en la célula hospedadora es menor 
que la que se ocasiona con el tratamiento.con
adenovirus
y es
difícil la producción
 
de este vector en
 
grandes cantidad
es. Los
herpes virus
poseenun material genético compuesto por 
ADN
 
de doble cadena lineal
, con un tamaño aproximado de 100 a 250 Kb.En la clase de los
gamma-herpesvirus
como el virus de
Epstein-Barr 
, se pueden producir infecciones latentesen
células en división
, de modo que el material genético que lleva insertado el virus se replica conjuntamentea la división celular y
se hereda en toda la nueva progenie de células
. El
inconveniente
que presentan estosvirus es que están asociados a
daños linfoproliferativos
, con lo cual, para su uso como vectores es necesarioidentificar 
estos genes y eliminarlos
, manteniendo únicamente aquellos que permitan la replicación del virus yel mantenimiento del plásmido viral. Hasta la fecha, el uso fundamental de los
herpes virus
en la terapia génicase limita al empleo in vivo del
herpes simples (HSV)
Vectores no virales
El
bombardeo de partículas
constituye una técnica efectiva de
transferir genes tanto
in vitro
como invivo.
En este
método físico el plásmido
o porción de ADN es recubierto en su superficie por 
gotas de oro otungsteno
, de 1 a 3 micras de diámetro. Estas partículas,
aceleradas por una descarga eléctrica
de unaparato o por un
pulso de gas
son
«disparadas»
hacia el tejido. El éxito de esta técnica puede estar asegurado en los
procesos de vacunación
. Otra alternativa es la
inyección directa del ADN o ARN
 
purocircular y cerrado covalentemente
, dentro del tejido deseado. Este
método es económico
, y unprocedimiento
no tóxico
, si se compara con la
entrega mediante virus
. Como
desventaja
fundamental hayque señalar que los niveles y
persistencia de la expresión de genes dura un corto periodo de tiempo.
Estatecnología puede tener potencial como un procedimiento de
vacunación
. Los
liposomas catiónicos
consistenen la mezcla de un
lípido catiónico
de
carga positiva
y varias
moléculas de ADN
con
carga negativa
debidoa los fosfatos de la doble hélice. Este tipo de vectores se han usado en el tratamiento de la
fibrosis quística
yen las
enfermedades vasculares
. Se pueden realizar transferencias de estos vía catéter, aunque su uso eslimitado, debido a la
baja eficacia
de transfección del
material genético
contenido en este complejo a la
célulahospedadora
y a su
relativa toxicidad
. Un
problema
que se plantea con las técnicas anteriores es que elvector alcance realmente su
objetivo
y no quede
diseminado por el organismo
. Por ello existe unprocedimiento que consiste en introducir, junto al material genético que queremos transferir,
moléculas quepuedan ser reconocidas por los receptores de la célula diana
. Estas moléculas pueden ser azucares,péptidos, hormonas, etc. y
su ventaja
respecto a otros modelos es que se establece una interacción muyespecífica, como la
interacción transportador/célula
, y no muy inespecífica como la que se verifica entre lascargas iónicas.
Glosario Genético
ADN recombinante
definición:
Es el término que agrupa una gran variedad de técnicas empleadas en el laboratorio para manipular las moléculas de ADN con el fin de estudiarlas.ADN recombinante describe una gran variedad de técnicas que los biólogos moleculares utilizan para manipular las moléculas de ADN. El proceso consiste en tomar una molécula de ADN de un organismo, sea un virus, unaplanta o una bacteria y llevarla al laboratorio para manipularla y ponerla de nuevo dentro de otro organismo. Estose puede hacer para estudiar la expresión de un gen e incluso en algunos casos, para tratar una enfermedadgenética humana.
Transgénico
definición:
Un organismo producido experimentalmente, en el cual se introduce e incorpora artificialmente ADNa la línea germinal del organismo. Generalmente se inyecta el ADN extraño dentro del núcleo de unembrión fertilizado.
 
Liceo Andrés Bello (A-94)Unidad Técnico- PedagógicaAsignatura: Célula, Genoma y OrganismoProfesor: Carlos Contreras G.
Apoptosis
definición:
Muerte celular programada. Es el método fisiológico que emplean muchos organismos paradesechar las células dañadas, indeseadas o innecesarias.
Genoma
definición:
Todo el ADN contenido en un organismo o célula, que incluye tanto los cromosomas dentro del núcleocomo el ADN en las mitocondrias.
MDR Gene
definición:
Los genes responsables de resistencia a múltiples fármacos derivados de su sobreexpresión encélulas de mamíferos. La resistencia a múltiples fármacos humano 1; (MDR1); gen responde al estrés ambiental,incluidos varios agentes anticancerosos. Es un factor determinante en el desarrollo de resistencia a un grannúmero de agentes de quimioterapia del cáncer.
Síndromes Linfoproliferativos
Existen numerosas evidencias epidemiológicas que asocian la infección por el VEB con tumores malignos,particularmente linfomas, algunos de los cuales ocurren en pacientes inmunodeprimidos.
I.
Luego de leer atentamente el texto anterior contesta en tu cuaderno las siguientes preguntas:1. ¿La terapia getica a que tipo de enfermedades esenfocada?
Esta terapia está destinada al tratamiento de enfermedades infecciosas, auto inmune y algunos tiposde cáncer.
2.¿Cles de las técnica estudiadas resulta ser la más económica y menos tóxica?
Otra alternativa es la inyección directa del ADN o ARN puro circular y cerrado covalentemente, dentrodel tejido deseado. Este método es económico, y un procedimiento no tóxico, si se compara con laentrega mediante virus.
3.¿Cuál de las técnicas empleadas de vectores no virales resulta ser más segura y efectiva?
Bombardeo de partículas
4. ¿Qué ramas de la bioloa esn involucradas en el desarrollo esta tecnoloa?
La genética, la biología molecular, la virología o la bioquímica.
5. ¿Cuáles son los principales tipos de vectores no virales que se emplean en terapia genética?
Bombardeo de partículas, inyección directa del ADN o ARN
 
puro circular y cerrado covalentemente,liposomas catiónicos.
6.
¿Si tuvieras que elegir uno de los siguientes vectores, un retrovirus o un adenovirus, de acuerdo altiempo de duración de la expresión genética deseada, cual elegirías y por qué?
Los retrovirus.
7.
¿Cuál o cuales de las técnicas estudiadas en esta guía, poda ser utilizada en programas devacunación?
Bombardeo de partículas y la
 
inyección directa del ADN o ARN
 
puro circular y cerrado covalentemente.
8.¿Cuáles son los principales tipos de vectores virales que se emplean en terapia genética?
Retrovirus, adenovirus, virus adenoasociados y herpes virus
9. ¿Cles son las principales desventajas de un adenovirus asociado?
La respuesta que producen en la célula hospedadora es menor que la que se ocasiona con eltratamiento, con adenovirus y es difícil la producción de este vector en grandes cantidades.
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