MEDIOS DE CULTIVO Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos en un laboratorio se denomina medio de cultivo.

Algunas bacterias pueden crecer bien en casi cual uier medio de cultivo! otra re uieren medios especiales " otras no pueden crecer en ninguno de los medios inertes e#istentes $asta a$ora. Los microbios ue se introducen en un medio de cultivo para ue comiencen a crecer se denominan inoculo. Los microbios ue crecen " se multiplican en un medio de cultivo se denominan cultivo. Sup%ngase ue se desea cultivar un microorganismo determinado& tal ve' los microbios provenientes de una muestra cl(nica particular. )*u+ criterios debe satis,acer el medio de cultivo- .rimero& debe contener los nutrientes adecuados para el microorganismo espec(,ico ue se desea desarrollar. Tambi+n debe contener $umedad su,iciente& un p/ a0ustado de manera apropiada " una concentraci%n conveniente de o#(geno& tal ve' ausente por completo. El medio ue se va a sembrar debe ser est+ril& es decir& en un principio no debe contener microorganismos viables& de modo ue el cultivo contenga s%lo los microbios 1" su descendencia2 ue se agreguen al medio. .or 3ltimo& el medio de cultivo sembrado debe incubarse a la temperatura correcta. Cuando se desea ue las bacterias se desarrollen sobre un medio s%lido se agrega un agente solidi,icante como el agar& ue consiste en un polisac4rido comple0o proveniente de un alga marina ue se utili'a desde $ace muc$o tiempo como espesante de alimentos como 0aleas " $elados. El agar posee algunas propiedades mu" importantes ue lo convierten en valioso para la microbiolog(a " nunca se encontr% un sustituto satis,actorio. .ocos microorganismos pueden degradar el agar& de modo ue permanece en estado s%lido. Adem4s& el agar se lic3a a una temperatura de alrededor de 566 7C 1el punto de ebullici%n del agua2 " al nivel del mar permanece l( uido $asta ue la temperatura disminu"e a cerca de 86 7C. .ara el uso en el laboratorio el agar se mantiene en ba9os de agua a :6 7C. A esta temperatura no altera a la ma"or parte de las bacterias cuando se vierte sobre ellas. Los medios con agar suelen utili'arse en tubos de ensa"o o placas de .etri. Los tubos de ensa"o se denominan tubos en pico de ,lauta o inclinados cuando el medio se solidi,ica manteniendo el tubo en un 4ngulo adecuado para lograr una gran super,icie para el crecimiento. Cuando el agar se solidi,ica en un tubo de posici%n vertical& denomina pro,undo. Los cultivos en placas de .etri& denominadas as( en $onor a su inventor& se reali'an en placas poco pro,undas con una tapa ue cubre per,ectamente la base para evitar la contaminaci%n. MEDIOS DE CULTIVO *UIMICAME;TE DE<I;IDOS .ara ,avorecer el crecimiento microbiano un medio debe proporcionar una ,uente de energ(a as( como ,uentes de carbono& nitr%geno& a'u,re& ,%s,oro " cual uier otro ,actor de crecimiento ue el organismo no pueda sinteti'ar. Un medio u(micamente de,inido es uno del ue se conoce la composici%n u(mica e#acta. En el caso de un organismo uimio$eter%tro,o& el medio u(micamente de,inido debe contener ,actores de crecimiento org4nicos ue act3en como ,uente de carbono " energ(a.

MEDIOS COMPLEJOS Los medios u(micamente de,inidos suelen reservarse para el traba0o e#perimental del laboratorio o para el crecimiento de bacterias aut%tro,as. Casi todas las bacterias $eter%tro,as " los $ongos& como a uellos con los ue se traba0a en un curso de introducci%n al laboratorio& se cultivan de modo sistem4tico en medios comple0os& compuestos por nutrientes como e#tractos de levaduras& carne o plantas o digeridos de prote(nas de estas " otras ,uentes. Entre los di,erentes lotes del medio puede $aber leves variaciones de la composici%n u(mica. En los medios comple0os los re uerimientos de energ(a& carbono& nitr%geno " a'u,re de los microorganismos son aportados sobre todo por las prote(nas. Las prote(nas son mol+culas grandes " relativamente insolubles ue s%lo la minor(a de los microoganismos pueden utili'ar de ,orma directa& si bien una digesti%n parcial por 4cidos o en'imas las reducen a cadenas m4s cortas de amino4cidos denominadas peptonas. La ma"or(a de las bacterias pueden digerir estos ,ragmentos pe ue9os " solubles. Los e#tractos de carne o de levadura le proporcionan al medio las vitaminas " otros ,actores de crecimiento org4nicos. Las vitaminas " los minerales solubles provenientes de las carnes o las levaduras se disuelven en el agua de e#tracci%n& ue luego se evapora de modo ue se produce una concentraci%n de estos ,actores! estos e#tractos tambi+n proporcionan nitr%geno& org4nico " compuestos de carbono. Los e#tractos de levadura tienen contenidos particularmente elevados de vitaminas del comple0o =. Si un medio comple0o se $alla en una ,orma l( uida se denomina caldo nutritivo. Cuando se agrega agar se denomina agar nutritivo. 1Esta terminolog(a puede generar con,usiones! recu+rdese ue el agar propiamente dic$o no es un nutriente.2 MEDIOS Y MTODOS DE CRECIMIENTO PARA ANAEROBIOS El cultivo de bacterias anaerobias plantea un problema especial. Dado ue los anaerobios podr(an morir por e#posici%n al o#(geno& deben emplearse medios especiales denominados medios reductores. Estos medios contienen ingredientes& como el tioglicolato de sodio& ue se combinan u(micamente con el o#(geno disuelto " producen una disminuci%n del o#(geno en el medio de cultivo. .ara lograr el desarrollo " el mantenimiento de cultivos puros de anaerobios estrictos los microbi%logos utili'an medios reductores ,raccionados en tubos de ensa"o comunes con tapas bien a0ustadas. Estos medios se calientan 0usto antes de su empleo para eliminar el o#(geno absorbido. Cuando se utili'an cultivos en placas de .etri para observar colonias individuales se emplean 0arras especiales para anaerobios. Las placas de cultivo se colocan en la 0arra " el o#(geno se elimina por el proceso siguiente> se coloca en la 0arra un sobre con sustancias u(micas 1bicarbonato de sodio " boro$idruro de sodio2 ue se $umedece mediante el agregado de algunos mililitros de agua " se cierra la 0arra. La reacci%n u(mica de estas sustancias u(micas con el agua produce $idr%geno " di%#ido de carbono. El catali'ador paladio agregado a la 0arra antes de su cierre combina el o#(geno presente en la 0arra con el $idr%geno

producido por la reacci%n u(mica " se ,orma agua. Como consecuencia& el o#(geno desaparece con rapide'. Adem4s& el di%#ido de carbono produciendo ,avorece el desarrollo de muc$as bacterias anaerobias. METODOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES En los procedimientos de microbiolog(a cl(nica " de salud publica con ,recuencia es necesario detectar la presencia de microorganismos& espec(,icos asociados con en,ermedad o malas condiciones $igi+nicas. .ara esta tarea se utili'an medios selectivos " di,erenciales. Los medios selectivos est4n dise9ados para suprimir el crecimiento de bacterias no deseadas " ,avorecer el crecimiento de las deseadas. .or e0emplo& el agar sul,ito de bismuto se utili'a para aislar la bacteria gram negativa ue produce la ,iebre ti,oidea& Salmonella t"p$i& de las $eces. El sul,ito de bismuto in$ibe a las bacterias gram positivas " tambi+n a la ma"or parte de las bacterias intestinales gram negativas 1distintas de S. t"p$i2. El agar dc#trosado de Sabouraud& con un p/ de :.?. se utili'a para aislar $ongos ue se desarrollan me0or ue la ma"or parte de las bacterias a este p/. Los medios di,erenciales permiten distinguir con ma"or ,acilidad las colonias del microorganismo deseado de otras colonias ue crecen en la misma placa. De manera similar& los cultivos puros de microorganismos tienen reacciones identi,icables con los medios di,erenciales& sea en tubos o en placas. El agar sangre 1 ue contiene eritrocitos2 es un medio mu" utili'ado por los microbi%logos para identi,icar especies bacterianas ue destru"en los eritrocitos. Estas especies& como la bacteria Streptococcus p"ogenes ue causa la angina estreptoc%cica& muestran un balo claro alrededor de sus colonias 1beta@$em%lisis&2 donde $an lisado los eritrocitos circundantes. En ocasiones se combinan las caracter(sticas selectivas " di,erenciales en un 3nico medio. Sup%ngase ue se desea aislar la bacteria com3n Stap$"lococcus aureus& encontrada en la v(a a+rea nasal. Este microorganismo tolera las concentraciones elevadas de cloruro de sodio! adem4s puede ,ermentar el $idrato de carbono manitol para ,ormar 4cido. El agar manitol salado contiene A&:B de cloruro de sodio& ue in$ibe el crecimiento de otros microorganismos " por ende selecciona 1,avorece el crecimiento de2 S aureus. CULTIVO DE ENRIQUECIMIENTO En ocasiones es necesario utili'ar un cultivo de enri uec(miento por ue las bacterias presentes en pe ue9a cantidad pueden no detectarse& en especial si $a" otras bacterias presentes en cantidades muc$o ma"ores. Esto sucede con ,recuencia en muestras de suelo o materia ,ecal. El medio 1medio de enri uecimiento2 para un cultivo de enri uecimiento suele ser l( uido " proporciona nutrientes " condiciones ambientales ue ,avorecen el desarrollo de un microbio particular pero no de otros. En este sentido tambi+n es un medio selectivo& pero est4 destinado a aumentar las cantidades mu" pe ue9as del microorganismo deseado $asta niveles detectables.