DETERMINACIN DE LA PRESENCIA DE Leptospira interrogans MEDIANTE PCR, EN UNA POBLACIN DE ROEDORES SINANTRPICOS EN EL MUNICIPIO DE SOLEDAD ATLNTICO.

WALTER NGEL MARTNEZ DE LA ROSA. XILENE MENDOZA SNCHEZ. DEISY LILIANA PARRA CORZO.

UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE FARMACIA BARRANQUILLA 2013

DETERMINACIN DE LA PRESENCIA DE Leptospira interrogans MEDIANTE PCR, EN UNA POBLACIN DE ROEDORES SINANTRPICOS EN EL MUNICIPIO DE SOLEDAD ATLNTICO.

Trabajo de Grado presentado como requisito para optar al ttulo de: Qumico Farmacutico Director: ALFREDO LAGARES GUZMAN Qumico Farmacutico (Universidad del Atlntico). MSc. Inmunologa (Universidad de Cartagena)

Coodirector (a): LOURDES VARELA PRIETO Licenciado en Biologa y Qumica (Universidad del Atlntico). MSc. Administracin y Supervisin Educativa (Universidad Externado de Colombia)

Grupo de investigacin: Inmunologa y Biologa Molecular UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE FARMACIA BARRANQUILLA 2013
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Introduccin

Orden: Spirochaetales
Leptospira Familia: Leptospiraceae

L. biflexa

L. interrogans

Incluye ms de 60 serovares No patgena

Incluye ms de 240 serovares Patgena

Martinez, W; Mendoza, X; Parra, D.

Introduccin

Ko AI, Goarant C, Picardeau M. Leptospira: the dawn of the molecular genetics era for an emerging zoonotic pathogen. Nat Rev Microbiol. 2009 Oct;7(10):736-47.

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Introduccin

LEPTOSPIROSIS EN EL MUNDO
Tabla 1: Estudios sobre leptospirosis en otros pases REFERENCIA
Latifah et al. Malays J Pathol. 2012.

PAS
Malasia

ESTUDIO
se estim una prevalencia de 13% de Leptospiras patgenas, en una polacin de roedoes silvestres
Se aislaron e identificaron serovares de Leptospira patgena en poblacin de ratas (R. norvegicus y R. rattus) Se evalu el riesgo para los habitantes de Futuna de contraer leptospirosis, segn la composicin de la poblacin de roedores. Se identificaron los roedores como fuente principal de epidemias de leptospirosis en dos provincias de este pas .

TCNICA
PCR

Benacer et al. Am J Trop Med Hyg. 2013. Theuerkauf et al. Natur wissen schaften.2013. Li et al. BMC Microbiol.2013.

Malasia

PCR, cultivo bacteriano y MAT PCR

Francia

China

MAT

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Introduccin

LEPTOSPIROSIS EN COLOMBIA
REFERENCIA
Agudelo-Flrez et al. 2009.Am. J. Trop. Med. Hyg. Romero-Vivas et al. 2013. Am J Trop Med Hyg.

Tabla 2: Estudios sobre leptospirosis en Colombia Lugar ESTUDIO TCNICA

PCR, cultivo bacteriano y MAT. PCR, cultivo bacteriano y MAT. PCR y electrofore sis de campo pulsado (PFGE).

Medelln Se report una prevalencia de Leptospira del 25% en roedores B/quilla Se reportaron seroprevalencias de Leptospiras patgenas del 20.4%, 12.5%, y 25.0% en Mus musculus, Rattus rattus y Rattus norvegicus respectivamente,

Atlntico Se identificaron y caracterizaron Romero-Vivas serovares de Leptospira aislados et al. Crdoba de roedores, perros, cerdos y Biomdica. muestras de agua 2013;

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Introduccin

LEPTOSPIROSIS EN EL MUNDO
Figura 1: Alertas de leptospirosis reportadas a nivel mundial hasta junio de 2013

Fuente: http://www.healthmap.org/es/
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Introduccin Grfica 1: Comportamiento de la notificacin de casos de leptospirosis, Colombia 2010-2013.

LEPTOSPIROSIS EN COLOMBIA

Fuente: Sivigila, INS.

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Introduccin

LEPTOSPIROSIS EN COLOMBIA Figura 2: Notificacin de casos de leptospirosis, Colombia Semana 29, 2013.
Magdalena

Antioquia

V. Cauca Guaviare

Fuente: Sivigila, INS

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Objetivos

GENERAL

Determinar la presencia de Leptospira interrogans mediante PCR, en una poblacin de roedores sinantrpicos en el municipio de Soledad Atlntico

Identificar las especies de roedores sinantrpicos capturados en los sitios de muestreo del municipio de Soledad-Atlntico Identificar L. interrogans mediante PCR en roedores sinantrpicos capturados en los distintos sitios de muestreo en el municipio de Soledad-Atlntico.

ESPECIFICOS

Determinar la proporcin de portadores de L. interrogans en las diferentes especies de roedores sinantrpicos capturados en el municipio de Soledad-Atlntico. Determinar la proporcin de portadores de L. interrogans acorde al sexo de roedores sinantrpicos capturados en el municipio de Soledad-Atlntico.

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Departamento del Atlntico

TIPO DE ESTUDIO LUGAR DE ESTUDIO

Metodologa POBLACIN MUESTRA

Mus musculus

Rattus rattus
Especies de roedores sinantrpicos: -Mus musculus -Rattus rattus -R. norvegicus circulantes en el municipio de Soledad Atlntico Roedores capturados en los barrios Villa Carmen, La Central, Las Moras y el Centro de Soledad. En dos semanas.

Esta investigacin est enmarcada en un mbito descriptivo transversal

SoledadAtlntico

Rattus norvegicus

Fuente: maps.google.com
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Metodologa

LAS MORAS
IMGEN 1. Condiciones ambientales del barrio Las Moras.

a) Arroyo El Salao; b) Casas del barrio Las Moras; c) Cocina donde se instal una trampa Sherman para captura de roedores.

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Metodologa

VILLA CARMEN
IMGEN 2. Condiciones ambientales del barrio Villa Carmen.

a) Zona enmontada aledaa al barrio Villa Carmen; b) y c) Aguas residuales y basuras en las calles del barrio Villa Carmen.

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Metodologa

LA CENTRAL
IMAGEN 3. Condiciones ambientales del barrio La Central.

a)Calle del barrio La Central; b) Zona enmontada y depsito de basuras cercano a las casas donde se realiz la captura de roedores; c) caballo en una de las casas del barrio La Central.
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Metodologa

CENTRO
IMGEN 4. Condiciones ambientales del barrio Centro.

a)Cocina de una de las casas donde se realiz captura de roedores; b) basurero en una de las calles del barrio Centro; c), d) y e) corrientes de aguas servidas en el barrio Centro.
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Metodologa

TRAMPAS SHERMAN DISEO METODOLGICO

CAPTURA

IDENTIFICACIN

TOMA DE MUESTRA

EXTRACCIN ADN

REVELADO DEL GEL

ELECTROFORESIS
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PCR

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Resultados y Discusin
Tabla 3: distribucin de roedores capturados en Soledad-Atlntico, discriminados por especie y por sexo.

OBJETIVO 1: Identificar las especies de roedores sinantrpicos capturados en los sitios de muestreo del municipio de Soledad-Atlntico

Los Mus musculus son la especie que habita con mayor frecuencia cerca del hombre en comparacin con otras especies de roedores sinantrpico (Lobos et al. 2005. Revista Chilena De Historia Natural)

la Rattus rattus generalmente se encuentra en zonas altas y normalmente evita nadar (Pratt et al. 1977. Public Health Service for Disease Control).

la Rattus norvegicus que prefiere zonas bajas e inundadas siendo una excelente nadadora y principales habitantes de alcantarillas (Pratt et al. 1977. Public Health Service for Disease Control).

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Resultados y Discusin
Imgen 5. Electroforesis en gel de agarosa de los productos amplificados por PCR.

423 pb

Gel de agarosa al 1.5%, lnea 1) marcador de peso molecular; lnea 2) control positivo ; lnea 3) Muestra N 1: Mus musculus hembra del Barrio Villa Carmen; lnea 4) Muestra N23 : Mus musculus macho del Barrio Villa Carmen ; lnea 6) muestra N6: Mus musculus hembra del barrio Centro; lnea 7) Muestra N23 : Rattus norvegicus macho del barrio Centro y lnea 15) Control negativo.

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Resultados y Discusin

DISTRIBUCIN DE MUESTRAS POSITIVAS ACORDE AL SITIO DE MUESTREO

Tabla 4: distribucin de muestras positivas (+) para Leptospira interrogans

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Resultados y Discusin
BARRIO CENTRO BARRIO LAS MORAS

Factores de riesgo identificados

Manejo aguas residuales

OBJETIVO 2: Identificar L. interrogans mediante PCRde en Manejo basuras roedores capturados en los distintos sitios de Falta sinantrpicos de saneamiento bsico muestreo en elCARMEN municipio de Soledad-Atlntico. Control nociva BARRIO VILLA BARRIOde LA fauna CENTRAL
Comportamiento higinico Perros Contacto con animales Cerdos Caballos
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Resultados y Discusin

DISTRIBUCIN DE MUESTRAS POSITIVAS ACORDE A LA ESPECIE

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Resultados y Discusin

DISTRIBUCIN DE MUESTRAS POSITIVAS ACORDE A LA ESPECIE

Tabla 5: Estudios sobre leptospirosis en Colombia REFERENCIA
Perez et al. 2011. PLoS Negl Trop Dis

Lugar

ESTUDIO RESULTADO

Se mostr una frecuencia de Mus Nueva musculus portadores de Leptospira Caledonia interrogans, superior a la frecuencia de portadores de las especies Rattus de L. OBJETIVO 3: Determinar la proporcin de portadores rattus y Rattus norvegicus interrogans en las diferentes especies de roedores

Theuerkauf etsinantrpicos al. 2013. capturados en elamunicipio de SoledadFrancia Sealaron la especie Rattus rattus Sealaron a la especie Rattus rattus Natur wissen schaften Benacer et al. 2013Am J Trop Med Hyg. De Faria et al. 2008. Acta Trop. Arango et al. 2001. col. Austral. Krjgaard et al. 2009.pidemiol Infect.

Malasia Brasil

como la principal portadora de L. Atlntico. como la principal portadora de L. interrogans. interrogans.

Mayor nmero de Mus musculus portadores de L. interrogans

Encontraron altas prevalencias de Encontraron altas prevalencias de Argentina esta bacteria en Rattus norvegicus. esta bacteria en Rattus norvegicus Dinamarca

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Resultados y Discusin

DISTRIBUCIN DE MUESTRAS POSITIVAS ACORDE AL SEXO

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Resultados y Discusin

DISTRIBUCIN DE MUESTRAS POSITIVAS ACORDE AL SEXO

La transmisin de la infeccin entre los roedores es muy fuerte en funcin del sexo (Perez et al. PLoS Negl Trop Dis. 2011)
OBJETIVO 4: Determinar la proporcin de portadores de L. interrogans acorde al sexo de roedores sinantrpicos Los roedores sinantrpicos transmiten la Leptospira de forma capturados en el municipio de Soledad-Atlntico congnita .

Los roedores pueden tener de 3 a 8 camadas por ao, con un aproximado de 4 a 12 cras por camada (Gwinner et al .GTZ. 1996).

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Conclusin

Los resultados de este estudio mostraron una proporcin de 4/53 roedores sinantrpicos del municipio de Soledad, portadores de especies patgenas de Leptospira. Tres de los cuales eran Mus musculus, la especie de roedor que habita con mayor frecuencia cerca del hombre, en comparacin con las especies Rattus rattus y Rattus norvegicus, lo que demuestra la importancia de estos pequeos roedores como reservorios de L. interrogans.

Los hallazgos de Leptospira patgena en los roedores capturados en el municipio de Soledad-Atlntico, son la primera evidencia de la circulacin de L. interrogans en roedores de este municipio.

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Recomendaciones
Realizar investigaciones que contribuyan a la vigilancia epidemiolgica de la leptospirosis en la poblacin humana del municipio de Soledad. Realizar estudios sobre la circulacin de Leptospira interrogans en animales domsticos (gatos, perros, entre otros) del municipio de Soledad.

Investigar sobre la presencia de L. interrogans en fuentes de agua de Soledad-Atlntico

Ejecutar medidas enfocadas en el manejo y disposicin adecuada de residuos slidos y aguas servidas en el municipio de Soledad. Implementar estrategias de educacin a la comunidad soledea sobre la leptospirosis y las medidas que deben adoptar para prevenir la enfermedad.

Implementar o reajustar programas de desratizacin en el municipio de Soledad.

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Agradecimientos

Universidad de Atlntico . En especial a la vicerrectora de

investigaciones , extensin y proyeccin social., por la financiacin de esta investigacin. Dra. Claudia Romero del Laboratorio de Enfermedades Tropicales de la Universidad del Norte, por la donacin del control positivo. Dra. Virginia Rodrguez del Instituto de Investigaciones Biolgicas del Trpico , de la universidad de crdoba, por a donacin de cultivo leptospiras. Dra. Luz Miriam Moreno , por su asesoria en la etapa de muestreo. Jurado evaluador : Dr. Guillermo Cervantes . Dra. Marena Rodrguez . Dra. Aracely Garca, por el conocimiento aportado a esta investigacin. A nuestro director Alfredo lagares ya nuestra coodirectora Lourdes Varela por esta investigacin.su asesora y acompaamiento en el curso de esta investigacin.
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Agradecimientos

Quisiramos mencionar a cada persona que estuvo detrs de lo que hoy somos, a cada persona con responsabilidad sobre la realizacin de este gran sueo, pero no alcanzaran las pginas de este documento para hacer tal cosa, solo nos resta decirles que tambin es por ellos que esto ha sido posible. Para ser profesional se requiere un solo cerebro e innumerables esfuerzos Muchas gracias a todos los que aportaron a la segunda condicin para que hoy estemos a punto de optar al honorable ttulo de Qumico Farmacutico.

Walter, Xilene y Deisy.

Martinez, W; Mendoza, X; Parra, D.

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PREGUNTAS?

Martinez, W; Mendoza, X; Parra, D.

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Martinez, W; Mendoza, X; Parra, D.

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