TCNICA5 POTINEIPA5 DE FPEFAPAO E

ANLI5E DE LMINA5 HI5TOLGICA5

Llian de L. Timm
Centro Universitrio La Salle
Museu de Cincias Naturais La Salle
ltimm@lasalle.tche.br
lltimm@hotmail.com
PE5UMO
Para a anlise das microestruturas ana
tmicas dos tecidos de animais sob microsco
pia ptica e necessria a confeco de lmi
nas histolgicas. Neste artigo so abordadas
as tecnicas de coleta, fixao, incluso, micro
tomia, criomicrotomia e colorao em amos
tras de tecidos moles e as tecnicas de desgate
e descalcificao para tecidos sseos. So abor
dadas ainda, tecnicas especiais de preparao
de amostras para anlise sob microscopia ele
trnica, criofratura e fracionamento celular.
PALAVRASCHAVE: Tecnicas histolgicas, mi
crotomia, colorao, desgaste, descalcificao,
microscpios eletrnicos
INTPODUO
IsIIga e o ramo da anatomia que
estuda os tecidos animais e vegetais. Tanto a
zoologia quanto a botnica apresentam nomen
claturas especiais. Neste artigo sero aborda
dos, exclusivamente, conceitos e tecnicas de
histologia animal.
A maioria dos tecidos e formada por
celulas e matriz extracelular. Nesta categoria
se enquadram os diferentes tipos de tecidos
conjuntivos especializados cartilaginoso, adi
poso, sangneo e sseo alem dos tecidos
conjuntivo propriamente dito, muscular e ner
voso. As celulas que os constituem, possuem
formas e funes muito distintas. Contudo, to
das trabalham em conjunto na sustentao e
na manuteno do tecido. A matriz e formada
principalmente por fibras e gua que auxilia,
principalmente no transporte de substncias.
A exceo a regra est no tecido epite
lial. Embora formado por celulas epiteliais com
diferentes formas, como cbicas, pavimento
sas ou colunares, e arranjadas em diferentes
camadas simples, estratificadas ou pseudo
estratificadas, este tecido e freqentemente
caracterizado pela ausncia de matriz extrace
lular. Sua nutrio acaba sendo efetuada pelo
tecido conjuntivo vascularizado adjacente.
Maior variao ainda se encontra em
alguns tipos de tecido sseo, como o tecido
acelular dos peixes telesteos, onde h a au
sncia completa de celulas sseas. Neste caso
especial, h uma perda progressiva dos oste
citos durante o crescimento do animal, que
culmina na sua ausncia completa na matriz
calcificada do indivduo adulto Enlow e Brown,
1956.
TCNICA5 UTILIZADA5 EM
HI5TOLOGIA
Muitas so as tecnicas utilizadas em his
tologia e no seria possvel, neste momento,
abordalas detalhadamente. Deste modo, foram
selecionadas algumas tecnicas freqentemen
te utilizadas em rotinas de laboratrios que pro
porcionam a visualizao das microestruturas
dos tecidos.
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Confeco de Lm|nas H|sto|g|cas: Co-
|eta, F|xao, Inc|uso e M|crotom|a
Para a anlise sob microscopia ptica e
necessria a confeco de lminas delgadas
dos tecidos que formam os rgos. Estas lmi
nas podem ser permanentes ou provisrias.
A seguir, sero descritas as etapas de confec
o de lminas histolgicas permanentes.
Co|eta do mater|a|
Partes de rgos so retiradas com o
auxlio de um bisturi, pina ou lmina de bar
bear. No e indicada a extrao de pores
grandes, uma vez que o objetivo final e a ob
teno de uma camada fina que possa ser ana
lisada em um microscpio ptico.
F|xao do mater|a|
Esta etapa consiste na utilizao de
procedimentos fsicos ou qumicos para imo
bilizar as substncias constituintes das ce
lulas e dos tecidos, fornecendo maior resis
tncia para suportar as demais etapas. Alem
disso, os fixadores retardam os efeitos psI
mIm do tecido, mantendo sua arquitetu
ra normal. Os agentes fixadores mais utili
zados so o formol tamponado e o lquido
de Bouin. Ambos fixam as protenas evitan
do sua degradao.
O formol, por ser mais acessvel e de
uso simples, e o fixador mais utilizado nas
tecnicas histolgicas. Contudo, seus resul
tados geralmente no so satisfatrios. Por
essa razo e recomendada a dissoluo de
formol em tampo fosfatado preparado do
seguinte modo 1unqueira e 1unqueira,
1983:
Formol soluo a 37 de formaldedo
_______________________________ 100ml
Agua destilada___________________ 900ml
Fosfato de sdio monobsico _______ 4,0g
Fosfato de sdio dibsico anidro ____ 6,5g
O tempo de fixao depender do ta
manho do fragmento do tecido, podendo va
riar entre 06 e 24h. E recomendado que, sem
pre que possvel, no ultrapasse a 3mm de
espessura e se utilize, no mnimo, um volume
20 vezes maior de fixador, em relao ao te
cido a ser fixado, para que o material reaja
satisfatoriamente. Uma vez fixado, a pea deve
ser transferida para lcool 70, onde poder
permanecer indefinidamente.
O fixador de Bouin tem a seguinte fr
mula 1unqueira e 1unqueira, 1983:
Soluo aquosa saturada de cido pcrico
__________________________________ 75ml
Formol ___________________________ 25ml
Acido Acetico______________________ 5ml
Aps a fixao e fundamental a remo
o do cido pcrico dos tecidos para a pos
terior etapa de colorao. Alem disso, resdu
os deste cido podem favorecer a deteriora
o da pea com o passar do tempo. Para a
eliminao do excesso de fixador dos tecidos
e recomendado 1unqueira e 1unqueira,
1983:
1 Lavagem em gua corrente por 18h,
2 Transferncia da pea para lcool
50, durante 30min,
3 Armazenamento da pea em lcool
70.
ImpIanI. O contedo dos frascos de cido
pcrico deve ser mantido mido, pois ele e ex
plosivo quando seco 1unqueira e 1unqueira,
1983.
Inc|uso
Este procedimento consiste na impreg
nao do tecido com uma substncia de con
sistncia firme que permita, posteriormente,
seccionlo em camadas delgadas. Pelo fcil
manuseio e bons resultados, a parafina e a
mais utilizada neste procedimento. Como ela
no e miscvel em gua, a primeira etapa da
incluso compreende a ocsora1ao, quan
do ocorre a retirada da gua dos tecidos e a
sua substituio por lcool. A oa1anzao e
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a etapa seguinte, com a substituio do lco
ol, agora presente nos tecidos, por xilol. Final
mente, na mprcgnao, ltima etapa, o xilol
e substitudo por parafina fundida a 60 em
pequenos blocos. Neste momento a catalo
gao do bloco e importante para a posterior
identificao da pea.
M|crotom|a
Esta etapa Fig. 1

A consiste, basicamen
te, em utilizar um mrro1omo para obter cortes
sucessivos, delgados e uniformes, a partir dos
blocos de parafina com as peas includas. Este
aparelho Fig. 2 e formado por uma lmina fixa
ou descartvel de ao, afiada, e um brao ao
qual se prende o bloco e que se desloca verti
calmente.
Figura 1. Esquema das etapas de microtomia (A) e
distenso da fita em banho-maria (B) (Modificado de
Junqueira e Junqueira, 1983).
Figura 2. Fotografia de um micrtomo para cortes em
resina (Retirado de Junqueira e Carneiro, 1995)
E difcil obter cortes abaixo de 3 a 4
micrmetros de espessura dos materiais inclu
dos em parafina. De um modo geral, so obti
dos cortes entre 5 e 7 micrmetros.
Montagem da |m|na h|sto|g|ca
As fitas obtidas a partir do micrtomo
so transferidas para um banhomaria, com o
auxlio de uma pina, para serem distendidas
Fig. 1 B. A gua deve estar entre 3 e 8 abai
xo do ponto de fuso da parafina utilizada.
Nesta etapa, so retiradas as dobras e evita
das as bolhas abaixo da fita. Aps a distenso,
os cortes so separados individualmente ou em
grupos, conforme a convenincia, utilizando
se lminas de vidro previamente limpas com
detergente, estocadas em lcool 80 e previ
amente secas. Antes da utilizao das lminas,
e necessrio revestir suas superfcies com uma
fina camada de albumina para facilitar a ade
so da pea. Os cortes obtidos podem ser trans
feridos, inicialmente, para uma estufa onde fi
cam alguns minutos no mais que dez minu
tos para posteriormente serem colocados em
um suporte inclinado. Finalmente, os cortes
devem ser depositados em uma estufa a 60
para secagem entre uma e 24 horas.
Tecn|ca de Cr|om|crotom|a = M|crotom|a
por Conge|amentol
A tecnica descrita acima, sem dvida, e
a mais utilizada. Contudo, em alguns casos, esta
tecnica e contraindicada, como, por exemplo,
no estudo da distribuio dos lipdios, em tec
nicas histoqumicas avanadas ou quando so
(B)
(A)
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necessrios cortes urgentes, como em exames
patolgicos. Nestes casos, os tecidos so en
durecidos atraves do congelamento. Os apa
relhos utilizados para os cortes podem ser de
dois tipos: mrro1omos oc rongcIamcn1o ou
rros1a1os 1unqueira e 1unqueira, 1983.
Nos micrtomos de congelamento
Fig. 3 os tecidos so congelados tanto fixa
dos quanto frescos. O congelamento ocorre
por expanso de CO
2
no suporte apropriado
para o tecido. Assim como nos micrtomos
de parafina, estes micrtomos possuem uma
navalha. Contudo, no produzem cortes muito
finos. Suas lminas cortam acima de 10 mi
crmetros. Outro inconveniente e acertar a
temperatura ideal para corte: se estes se frag
mentam durante a passagem pela navalha, o
tecido est frio demais, se ao contrrio, se
deformam, o tecido precisa ser resfriado.
Figura 3. Fotografia de um micrtomo para cortes con-
gelados.
O criostato e um aparelho mais aperfei
oado que o anterior. Permite a obteno de
cortes muito mais finos de tecidos no fixados
ate dois micrmetros, facilitando a visualiza
o das celulas 1unqueira e 1unqueira, 1983.
Tecn|cas de Co|orao de Cortes H|sto-
|g|cos
A colorao consiste numa etapa muito
importante para a visualizao das estruturas
do tecido. Normalmente so utilizados coran
tes hidrossolveis, sendo necessrio, deste
modo, a remoo da parafina da pea que foi
preparada nas etapas descritas anteriormente
e que permanece na lmina de vidro.
Existem muitos tipos de corantes, mas
de um modo geral podem ser agrupados em
trs classes distintas Cartner e Hiatt, 1999:
Corantes que diferenciam os compo
nentes cidos e bsicos das celulas,
Corantes especializados que diferen
ciam os componentes fibrosos da matriz extra
celular,
Sais metlicos que precipitam nos te
cidos.
Os corantes mais utilizados nos proce
dimentos histolgicos so a Hematoxilina e a
Eosina HE. A Hematoxilina e uma base que
cora, preferencialmente, componentes cidos
das celulas em um tom azulado escuro. Como
os componentes cidos mais abundantes so
o DNA e o RNA, tanto o ncleo, quanto certas
partes do citoplasma, se tornam azulados. Es
ses componentes so chamados de basfilos.
A Eosina, ao contrrio, e um cido que cora as
estruturas bsicas da celula de rosa. Estas es
truturas so abundantes no citoplasma e so
chamadas de acidfilas Cartner e Hiatt, 1999.
Outros corantes so tambem utilizados
em procedimentos de rotina em laboratrios,
tais como Cartner e Hiatt, 1999:
Tricrmico de Masson cora o ncleo
de azul escuro, o citoplasma, a queratina e o
msculo de vermelho e o mucignio e o col
geno de azul claro,
Orcena cora as fibras elsticas de
marrom,
Weigert cora as fibras elsticas de
azul,
Prata cora as fibras reticulares de
preto,
Hematoxilina ferrica cora as estria
es dos msculos, os ncleos e os eritrcitos
de preto,
Acido peridico reativo de Schiff cora
as moleculas ricas em glicognio e carboidra
to de magenta,
Wright e Ciemsa especializado em
celulas sangneas, cora de rosa os eritrci
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tos e os grnulos eosinfilos, de prpura o
ncleo dos leuccitos e grnulos basfilos e
de azul o citoplasma dos moncitos e dos lin
fcitos.
Para corar peas includas em parafina
e necessria a retirada da parafina e a hidrata
o da pea. Este procedimento e realizado a
partir de uma seqncia de banhos em xilol,
lcool e gua, inversamente ao procedimento
executado na etapa de incluso. Segundo 1un
queira e 1unqueira 1983, o procedimento e
o seguinte:
1 Banho de xilol ___________________5min
2 Banho de xilol ___________________2min
3 Banho de xilol ___________________1min
Alcool 100 ______________________1min
Alcool 95 ______________________1min
Alcool 70 ______________________1min
Agua _____________________________2min
Aps a hidratao, os cortes so cora
dos de acordo com o procedimento mais apro
priado para a anlise que ser realizada pos
teriormente. Aqui sero abordadas as etapas
do metodo da hematoxilinaeosina, por ser o
mais utilizado e por ter um resultado final sa
tisfatrio.
Tecn|ca da hematox|||na-eos|na HEl
a Material necessrio para a soluo de
Hematoxilina de Harris 1unqueira e 1unquei
ra,1983:
Hematoxilina ______________________ 2,5g
Alcool 100 _____________________ 25ml
Almen de amnio ou potssio ______ 50g
Agua destilada ___________________ 500ml
Oxido vermelho de mercrio _______ 1,25g
Acido acetico _____________________ 20ml
|nicialmente, a hemotoxilina deve ser
dissolvida no lcool e o almen na gua desti
lada previamente aquecida. Posteriormente,
as duas solues devem ser misturadas e aque
cidas ate a fervura. O xido de mercrio e adi
cionado a soluo que deve ser resfriada, mer
gulhandose o frasco em gua fria. O cido
acetico e ento colocado na soluo fria para
finalmente ser filtrada.
O prazo de envelhecimento desta solu
o e entre dois e trs meses. A partir desta
data o corante perde suas propriedades e no
reage adequadamente com o tecido.
b Material necessrio para a Eosina
1unqueira e 1unqueira,1983:
Eosina solvel em gua _______________ 1g
Agua destilada ___________________ 100ml
c Procedimentos para a colorao:
Embora as etapas possam ser defini
das, o tempo em cada fase depende da quali
dade e da idade das solues dos corantes.
Deste modo, poder ser observada nas eta
pas abaixo uma variao muito grande em
relao ao tempo que pode ser ajustado du
rante o procedimento no laboratrio. De acor
do com 1unqueira e 1unqueira 1983, as eta
pas so:
1 desparafinar e hidratar os cortes,
2 corar em hematoxilina entre 5 e
15min,
3 lavar em gua corrente por 10min,
4 corar em eosina entre 1 e 10min,
5 lavar em gua e desidratar em
lcool 70 rapidamente,
6 diafanizar e montar em resina.
d Montagem Final da Lmina:
Este processo consiste em depositar
uma gota de resina lquida sobre o corte que
est aderido a lmina de vidro e cobrilo com
uma lamnula. Nesta etapa devese evitar as
bolhas de ar que se formam na resina durante
a colocao da lamnula. Finalmente a lmina
e catalogada.
A resina depois de seca garantir uma
lmina permanente que poder durar anos.
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Tecn|cas Ut|||zadas para Confeco de
Lm|nas sseas
Para a confeco de lminas sseas so
utilizadas duas tecnicas: a primeira consiste no
sgasI do osso atraves do polimento com
lixa Fig. 4. |nicialmente, e retirado um frag
mento do osso a ser analisado. Esse fragmen
to e colado com blsamo do Canad sobre uma
superfcie de madeira plana. Em um bloco de
madeira e colada uma lixa de granulometria
grossa para o primeiro polimento. O polimento
final e feito com uma lixa mais fina, com movi
mentos firmes e no mesmo sentido, ate que se
tenha obtido uma camada de osso delgada.
O osso e retirado da madeira com xilol e aderi
do a superfcie da lmina de vidro. Sobre ele e
colocada uma lamnula e fixada com resina
Amaral I aI. 1994 , Timm, 1996

a,b.
Figura 4. Confeco de lminas sseas por desgaste.
A segunda tecnica implica na ocsraIr-
1rao do osso. Este procedimento tem por
objetivo retirar o fosfato de clcio do tecido
sseo para que possa ser seccionado posteri
ormente. A descalcificao pode ser feita atra
ves da imerso em cidos ou compostos que
lantes.
Os quelantes capturam os ons metli
cos entre os quais o clcio, removendoos dos
tecidos com um mnimo de alterao. Embora
de ao mais lenta, agridem menos o tecido, e
so mais utilizados nos procedimentos histol
gicos. Uma das frmulas mais usadas, segun
do 1unqueira e 1unqueira 1983:
Etileno Diamino Tetra Acetato EDTA __ 5,5g
Agua ____________________________ 90ml
Formol ___________________________ 10ml
Aps a fixao, o material e lavado para
retirar o excesso de fixador e transferido para
um descalcificador. No e recomendado utili
zar fragmentos maiores do que 3mm de di
metro. Devese usar, no mnimo, 40 vezes o
volume do tecido, agitando o frasco vrias ve
zes ao dia e trocando o descalcificador a cada
2 ou 3 dias. Os tecidos descalcificados no
devem ser transferidos diretamente ao lcool
70, e sim, lavados em gua corrente por al
gumas horas.
Para a confeco das lminas histolgi
cas de ossos descalcificados seguemse as eta
pas rotineiras citadas anteriormente.
M|croscop|a pt|ca de A|ta Peso|uo
A microscopia ptica utiliza cortes del
gados e preparados com qualquer uma das
tecnicas descritas anteriormente, com o obje
tivo de estudar a morfologia celular. A resolu
o das estruturas pela microscopia ptica e
da ordem de 0,2 micrmetros. Na prtica his
tolgica em parafina, raramente e inferior a 0,6
micrmetros, o que mesmo assim proporcio
na um bom resultado visual Stevens e Lowe,
1995.
O microscpio ptico possui um arran
jo especfico de grupos de lentes para ampliar
a imagem do tecido. Como tem mais que uma
lente, freqentemente e conhecido como mi
croscpio composto. A fonte de luz provem de
um bulbo eletrico com um filamento de tungs
tnio, cuja luz conflui para um feixe focal atra
ves das lentes do condensador. Microscpios
mais antigos no possuem sua prpria fonte
de luz, necessitando do auxlio de uma lumin
ria que projeta a luz para um espelho situado
na base do microscpio que a reflete para o
condensador.
Em ambos os casos, o feixe de luz atra
vessa o tecido delgado fixado na lmina histo
lgica e penetra em uma das lentes objetivas.
Estas lentes esto situadas em um cilindro
mvel conhecido como canho. Normalmen
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te, existem quatro lentes objetivas que ampli
am a imagem em 4, 10 e 40 vezes e uma lente
de imerso que amplia a imagem em 100 ve
zes, onde deve ser utilizado um leo mineral.
A imagem das objetivas conflui e poste
riormente e aumentada pela lente ocular que
normalmente amplia a imagem em um mlti
plo de 10. A imagem ampliada pela objetiva
deve ser multiplicada pelo valor da ocular para
a obteno do valor de aumento total.
A focalizao da imagem e obtida atraves
do uso de parafusos que movem as lentes obje
tivas para cima e para baixo. O parafuso macro
metrico movese em intervalos maiores que o
parafuso micrometrico. A imagem projetada na
retina e invertida da direita para a esquerda e de
cima para baixo Cartner e Hiatt, 1999.
M|croscop|a E|etrn|ca
Nos microscpios pticos, as lentes fo
calizam a luz visvel feixe de ftons. Nos mi
croscpios eletrnicos, os eletromagnetos fo
calizam um feixe de eletrons. A resoluo e cer
ca de mil vezes maior do que a de um micros
cpio ptico, podendo ampliar em 150.000
vezes a imagem de um objeto, o que permite,
por exemplo, a visualizao de macromolecu
las como DNA Cartner e Hiatt, 1999.
M|croscop|a E|etrn|ca de Transm|sso
METl
A preparao de amostras de tecido para
o MET Fig. 5 envolve as mesmas etapas bsi
cas da microscopia ptica. Contudo, fixadores
especiais tm sido desenvolvidos, uma vez que
as ligaes cruzadas entre protenas devem ser
mais finas em funo da alta resoluo do apa
relho. Estes fixadores incluem solues tampo
nadas de glutaraldedo, paraformaldedo, tetr
xido de smio e permanganato de potssio que
no s atuam na preservao das ultraestrutu
ras, como tambem atuam como corantes ele
tronsdensos. Para a incluso tambem foi de
senvolvida uma resina especial, como a resinas
epxi e o bloco resultante no maior do que
1mm
3
Cartner e Hiatt, 1999. Os cortes devem
ser ultrafinos, na ordem de 0,1 micrmetro de
espessura Stevens e Lowe, 1995.
Figura 5. Fotografia de um Microscpio Eletrnico de
Transmisso (MET).
Os feixes de eletrons so produzidos
numa cmara a vcuo pelo aquecimento de
um filamento de tungstnio, o catdio. Os ele
trons so atrados para o andio, carregado
positivamente, numa placa de metal em forma
de amndoa com um orifcio central. O feixe
de eletron e focalizado no material atraves de
eletromagnetos anlogos as lentes do conden
sador do microscpio ptico.
Os tecidos so corados com metais pe
sados urnio ou chumbo que precipitam nas
membranas lipdicas, fazendo com que os ele
trons percam parte da sua energia cinetica a
medida que interagem com o tecido. Os ele
trons que deixam os tecidos esto sujeitos aos
campos magneticos de muitos eletromagne
tos adicionais, que focalizam o feixe numa pla
ca fluorescente. medida que os eletrons al
canam a placa, sua energia cinetica e con
vertida em pontos luminosos. E feito um re
gistro permanente da imagem resultante, atra
ves da substituio de um filme sensvel ao
eletron no local da placa fluorescente, com a
produo de um negativo a partir do qual pode
ser impressa uma fotomicrografia em preto e
branco Cartner e Hiatt, 1999, Stevens e Lowe,
1995.
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M|croscop|a E|etrn|ca de Varredura
MEVl
Diferentemente da MET, a Microscopia
Eletrnica de Varredura e utilizada para obser
var a superfcie de um especime slido ao in
ves de cortes, proporcionando uma imagem
tridimensional Fig. 6. O material e preparado
com uma camada de metal pesado como ouro
ou paldio, depositado na sua superfcie. Con
forme o feixe de eletrons varre a superfcie do
material, alguns se refletem eletrons de dis
perso e outros so ejetados eletrons secun
drios a partir da cobertura do metal pesado.
Estes eletrons so capturados por detectores,
interpretados, coletados e mostrados em um
monitor com uma imagem tridimensional.
A imagem pode ser fotografada ou digitalizada
Cartner e Hiatt, 1999.
Figura 6. Fotografia de um Microscpio Eletrnico de
Varredura (MEV).
Cr|ofratura
Tecidos congelados rapidamente, mas
tratados com criopreservativos, no desenvol
vem cristais de gelo durante o processo de
congelamento e, por isso, no sofrem dano
mecnico. Quando seccionado por uma nava
lha fria, o tecido sofre fratura de acordo com o
plano de clivagem, nas regies com menos
pontes moleculares. Nas celulas, a fratura ten
de a ocorrer entre as camadas interna e exter
na das membranas. A face fraturada e coberta
por platina ou carbono, formando acmulos em
apenas um dos lados da projeo, o que gera
uma replica da superfcie. O tecido e ento re
tirado e a replica e examinada ao microscpio
eletrnico de transmisso, revelando, por
exemplo, as protenas intercalares da membra
na endoplasmtica Cartner e Hiatt, 1999.
Frac|onamento Ce|u|ar
Esta tecnica permite que celulas intei
ras sejam rompidas de maneira controlada. As
diferentes partculas que resultam so separa
das para anlise funcional ou estrutural, atra
ves da centrifugao das celulas rompidas em
solues especializadas de densidade conhe
cida, a alta velocidade. Os ncleos, as mitocn
drias, os retculos endoplasmticos e os ribos
somos podem ser isolados em forma relativa
mente pura Stevens e Lowe, 1995.
INTEPFPETAO DE COPTE5
HI5TOLGICO5
Analisar uma lmina histolgica pode ser
uma tarefa difcil. O primeiro passo e entender
o que se est observando. O rgo antes tridi
mensional, agora est seccionado, preparado,
corado e fixado em uma lmina de vidro. As
estruturas, quando cortadas transversalmente,
se apresentam de modo distinto de quando
cortadas longitudinalmente. Alguns planos de
corte podem ser observados na Fig. 7.
Figura 7. Tipos de cortes que podem ser obtidos (Re-
tirado de Gartner e Hiatt, 1999).
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Me|oJos Je /s|uJo em 8|o|og|c 239
Entendido isto, basta ter ateno aos
detalhes, desenhar o que se est sendo ob
servado e acompanhar esta tarefa com um
atlas histolgico. O mundo das microestrutu
ras anatmicas Fig. 8 pode ser bem interes
sante. Visualizar a base de todo organismo
vivo, sua relao com outras celulas, sua or
ganizao em tecidos e entender que somos
um conjunto de estruturas vivas formando um
nico ser fazem parte da formao de todo
bilogo.
Figura 8. Corte histolgico da costela de Caiman
latirostris realizado pelo mtodo de desgaste. Seco
transversal. Aumento: 96x. (Retirado de Timm, 1996b).
AGPADECIMENTO
Ao tecnico administrativo Paulo Rober
to Peres Carvalho do Centro de Microscopia
Eletrnica da UFRCS CME pela permisso de
fotografar os Microscpios Eletrnicos.
PEFEPNCIA5 ILIOGPFICA5
AMARAL, Daoiz Mendoza, MENDONA, Ola
vo Valmor, LAUR|NO, Laviera B. Fato|og|a s-
sea - Fundamentos. 5o Fau|o: ByK, 1994.
ENLOW, Donald H., BROWN, Sidney O. A com
parative histological study of fossil and recent
bone tissues. Part 1. The Texas Journa| of
5c|ence, p. 405443, 1956.
CARTNER, Leslie P., H|ATT, 1ames L. Tratado de
h|sto|og|a. Rio de 1aneiro: Cuanabara Koogan,
1999.
1UNQUE|RA, L. C., CARNE|RO, 1. H|sto|og|a b-
s|ca. 8 ed. Rio de 1aneiro: Cuanabara Koogan,
1995.
1UNQUE|RA, Luis Carlos U., 1UNQUE|RA, Lui
za Maria M. S. Tecn|cas bs|cas de c|to|og|a e
h|sto|og|a. So Paulo: Santos,1983.
STEVENS, Alan, LOWE, 1ames. H|sto|og|a. So
Paulo: Manole, 1995.
T|MM, Llian de L. Preliminary data on the pa
chyostosis in rib of the ToLoLus nungus
Natterer, 1883 Mammalia: Sirenia. |n: Sesso
da Academia Brasileira de Cincias, 1996a,
Ana|s da Academ|a ras||e|ra de C|nc|as.
Porto Alegre: UFRCS/|LEA, 1996a. p. 296.
______ . Estudo pa|eo-h|sto|g|co acerca da
paqu|ostose em mesossauros.1996b. 181f.
Dissertao Mestrado em Ceocincias |nsti
tuto de Ceocincias, Universidade Federal do
Rio Crande do Sul, 1996b.
CcJe|no /c Sc||e X/ Ccnocs v2 n 1 231 239 2005