UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

EVALUACIN DE LA EFICIENCIA DE LOS MTODOS DE ESPECTROFOTOMETRA INFRARROJA Y CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN PARA CUANTIFICACIN DE TIAMINA, PIRIDOXINA Y CIANOCOBALAMINA EN SOLUCIONES INYECTABLES

MARIO YAX POLINICES SANTISTEBAN PAZ

Qumico Farmacutico

Guatemala, Noviembre de 2003

JUNTA DIRECTIVA

M.Sc. Gerardo Leonel Arroyo Cataln

Decano

Licda. Jannette Sandoval Madrid de Cardona

Secretaria

Licda. Gloria Elizabeth Navas Escobedo

Vocal I

Lic. Juan Francisco Prez Sabino

Vocal II

Dr. Federico Adolfo Richter Martnez

Vocal III

Br. Carlos Enrique Serrano

Vocal IV

Br. Claudia Luca Roca Berreondo

Vocal IV

DEDICATORIA

A esa constante presencia, razn de nuestro ser y existir

A mis Padres Gladis Argelia Paz Solrzano y Mario Augusto Santisteban Vliz, por su amor, paciencia y esfuerzo al haberme dado todo cuanto estuvo a su alcance y ms.

A mis Hermanas Bagda y Briseida por su cario, apoyo, ayuda y presencia a lo largo de mi vida.

A mi Abuela y To Ernestina Vliz quien me brindo amor y confianza; adems, con la sabidura que dan los aos fue fuente de aprendizaje. Jorge Pinzn, quien fue ejemplo de esfuerzo, lucha, amor y superacin.

AGRADECIMIENTOS

A la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, por darme los conocimientos necesarios para mi formacin profesional.

A mi asesora, Licda. Paulina Castellanos de Monroy y familia, por su cario, amistad y apoyo en la realizacin de esta tesis.

A mi coasesor Lic. lfego Rolando Lpez, gua valiosa en la realizacin de la tesis. A l y a mis dems profesores, los llevar en mi recuerdo.

Al Laboratorio Nacional de Salud, por haberme brindado la oportunidad de realizar esta tesis. Asimismo, a aquellas personas que me brindaron su amistad y apoyo, en especial a mi asesora tcnica, Licda. Millie Cruz.

NDICE
1. Resumen 2. Introduccin 3. Antecedentes 4. Justificacin 5. Objetivos 6. Hiptesis 7. Materiales y mtodos 8. Resultados 9. Discusin de resultados 10. Conclusiones 11. Recomendaciones 12. Referencias 13. Anexos 01 02 03 05 06 07 08 14 23 26 27 28 31

1.

Resumen

Mediante el presente trabajo de investigacin, se evalu la eficiencia de los mtodos de espectrofotometra infrarroja y cromatografa lquida de alta resolucin para la cuantificacin de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables; mediante la comparacin de la concordancia, reproducibilidad, costo y tiempo para la cuantificacin de las sustancias en estudio. Se analizaron 12 muestras, seleccionadas al azar, las que fueron recibidas en el Laboratorio Nacional de Salud durante un ao. Las muestras fueron analizadas por el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin y por el mtodo de espectrofotometra infrarroja propio del Laboratorio Nacional de Salud. Los resultados obtenidos fueron sometidos al siguiente anlisis estadstico: t de Student y coeficiente de correlacin de concordancia, para determinar la equivalencia de ambos mtodos y reproducibilidad de datos. Posteriormente se evalu el costo y tiempo requerido para el desarrollo del anlisis. Los resultados obtenidos demuestran que el anlisis de Tiamina y Piridoxina pueden efectuarse indistintamente por cualesquiera de los mtodos. La cuantificacin de Cianocobalamina, por no ser el mtodo de espectrofotometra infrarroja equivalente, debe llevarse a cabo por cromatografa lquida de alta resolucin. En cuanto al costo, el mtodo de espectrofotometra infrarroja es una opcin para obtener un anlisis de menor costo y menor tiempo de anlisis.

2.

INTRODUCCIN

Los medicamentos son sustancias simples o compuestas, naturales o sintticas o asociacin de ellas, destinadas a prevenir, tratar, aliviar o curar enfermedades o sntomas asociados a las mismas. Las vitaminas son sustancias medicamentosas, que contribuyen al correcto funcionamiento del organismo. Sin embargo, tanto la deficiencia de stas como el exceso son perjudiciales a la salud del ser humano. Por ello, el tratamiento con vitaminas debe ser administrado con sumo cuidado y vigilancia para evitar efectos no deseados. Es importante mencionar de igual forma que el control de estos medicamentos debe desarrollarse con seriedad, y exactitud. El complejo B, el cual se compone principalmente por tiamina (vitamina B1), piridoxina (vitamina B6) y cianocobalamina (vitamina B12), est indicado en casos de neuropatas perifricas, las cuales afectan a una buena parte de la poblacin guatemalteca . Este tipo de productos se utiliza mayormente en forma inyectable por va IM, debido a que presentan una mejor absorcin y como consecuencia un efecto rpido, por lo tanto el anlisis fisicoqumico debe garantizar que el medicamento es eficaz, confiable y de calidad. Para el control de calidad, especialmente la cuantificacin de este tipo de productos, el Laboratorio Nacional de Salud (LNS) utiliza la metodologa de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), mtodo que tiene como referencia la farmacopea estadounidense (USP XXIV). Sin embargo, el laboratorio cuenta con un mtodo alterno, Espectrofotometra Infrarroja, el cual a la fecha, no ha podido ser implementado por que se carece de datos analticos comparativos que garanticen la obtencin de resultados similares.

3.

ANTECEDENTES

Entre la informacin disponible en cuanto a la comparacin de mtodos analticos, pueden sitarse los siguientes trabajos: 1. Tesis Ad Gradum de Hctor Rosito, titulada Estudio comparativo de dos mtodos para determinar partculas extraas en inyectables de pequeo volumen envasados en recipientes plsticos de polipropileno. El trabajo de investigacin evalo la efectividad de dos mtodos especificados por la U.S.P. XXII., adems se analizaron los costos y tiempo en llevar a cabo ambos mtodos (19). 2. Determinacin del contenido y la potencia antibitica de Penicilina G, Penicilina V y Ampicilina, mediante la comparacin de los resultados obtenidos por los mtodos microbiolgico, yodomrico y cromatografa lquida de alta presin elaborada por Ligia Orozco, se compara la sensibilidad y exactitud relativas de mtodos yodomtricos, cromatografa lquida de alta presin y microbiolgico para la cuantificacin de principios activos en muestras de ampicilina sdica inyectable, Penicilina G inyectable y Penicilina V en tabletas (13). 3. Tesis Ad Gradum de Mnica Vargas, titulada Estudio comparativo de dos mtodos ( mtodo por cromatografa de gas y mtodo por electrodo selectivo de flor) para determinar flor en crema dental. busca comparar dos mtodos de anlisis para determinar flor en cremas dentales por CG (mtodo propuesto por la Comisin Guatemalteca de Normas) y el mtodo por electrodo selectivo de Flor. Concluye que un mtodo era ms preciso que el otro, sin embargo los dos presentaban valores de exactitud aceptables. Adems, calcul el costo de cada mtodo en cuanto a tiempo y enceres (24).

4. Comparacin de dos mtodos alternativos para la cuantificacin de sodio y potasio en sales de rehidratacin oral, fabricadas en el laboratorio de produccin de medicamentos LAPROMED- de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, tesis de licenciatura de Rossama Cordn, tuvo como objetivo la comparacin de dos mtodos de anlisis, la fotometra de llama y la potenciometra de electrodo selectivo de iones, para la determinacin de sodio y potasio en sales de rehidratacin oral. Se encontr que para esa determinacin la fotometra de llama y el electrodo selectivo de iones son tcnicas equivalentes (4). En cuanto a la evaluacin de mtodos de anlisis, no se encontr ms referencias bibliogrficas.

4.

JUSTIFICACIN

El presente trabajo se propone evaluar la utilizacin de un mtodo que contenga mayores ventajas que el que se utiliza ordinariamente en el Laboratorio Nacional de Salud (LNS): disminuir el tiempo de anlisis, uso de menor cantidad de reactivos, disminucin de costos y obtencin de similares resultados. Se analizar determinada cantidad de muestras, mediante el mtodo de HPLC (mtodo oficial) y por espectrofotometra infrarroja. Se calcular los costos de anlisis y reactivos empleados en el transcurso de los anlisis de cada uno de los mtodos, al igual que el tiempo empleado para la determinacin de resultados de cada uno de ellos.

5.
5.1 General:

OBJETIVOS

Comparar el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin y el mtodo de espectrofotometra infrarroja en el anlisis de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables, en cuanto a concordancia, tiempo y costo.

5.2 Especficos: Evaluar la eficiencia del mtodo de

espectrofotometra infrarroja respecto a la cromatografa lquida de alta resolucin en la cuantificacin de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables. Comparar la concordancia de los resultados obtenidos por el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin y el mtodo de espectrofotometra infrarroja. Evaluar el tiempo de anlisis de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables mediante el uso de dos mtodos diferentes para su anlisis. de evaluados. tiamina, Determinar la cantidad de reactivos en el anlisis piridoxina y cianocobalamina en soluciones inyectables en los mtodos evaluados. Evaluar costos de anlisis de tiamina, piridoxina y cianocobalamina en soluciones inyectables por los mtodos

6. HIPTESIS

El anlisis de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables por espectrofotometra infrarroja reduce el tiempo empleado en el proceso, baja los costos de operacin, disminuye la cantidad de reactivos que se utilizan en el anlisis, y genera resultados similares que el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin.

7.

MATERIALES Y MTODOS

7.1

Universo y Muestra
Muestras que ingresaron al Laboratorio Nacional de Salud durante el perodo del 1 de Enero de 2002 al 31 de Diciembre del mismo ao. Muestras que ya fueron analizadas y se present el dictamen por parte del Laboratorio. Mtodo de anlisis: Cuantificacin por Cromatografa Lquida de Alta Resolucin y Espectrofotometra Infrarroja.

7.2 RECURSOS 7.2.1

RECURSOS HUMANOS: Autor: Br. Mario Santisteban. Asesora: Licda. Paulina Castellanos de Monroy. Coasesor: Lic. Elfego Rolando Lpez.

7.2.2

RECURSOS INSTITUCIONALES: Biblioteca Central de la Universidad de San Carlos de Guatemala. Biblioteca de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia de la Universidad de San Carlos de Guatemala. Biblioteca de la Universidad del Valle de Guatemala. Centro Guatemalteco de Informacin de Medicamentos (CEGIMED). Seccin Fisicoqumico de Medicamentos del Laboratorio Nacional de Salud.

7.3

Recursos Materiales
7.3.1. Equipo: 7.3.2. Materiales: 7.3.3. Cristalera: Balones actnicos aforados de 5, 10, 50, 100 y 1000ml Beacker de 100, 1000 ml Pipetas volumtricas de 2, 3 y 5 ml Probetas de 10, 50, 500 y 1000 ml Kitazato de 1000 ml Filtros cartucho de 0.45 um. Papel Parafinado. Esptula. Membranas hidroflicas 0.45um. Jeringa. Papel Kleenex. Balanza analtica Metler Toledo. Unidad de filtracin y bomba de vaco. Cromatgrafo Liquido de alta resolucin Merck Hitachi con detector UV. Columna para vitaminas. Espectrofotmetro infrarrojo. Computadora Dell. Impresora Hewlett Packard. Ultrasonido.

7.3.4

Reactivos: Agua HPLC. Metanol HPLC. Acetonitrolo HPLC. cido actico glacial. Sal sdica de cido 1 hexanosulfnico. Acetona. Estndares de tiamina, piridoxina y cianocobalamina.

7.4. Procedimiento
7.4.1 Para la recoleccin de datos: Se seleccionaron las muestras de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables que hayan ingresado durante un ao, con valor reconocido, para el anlisis con ambos mtodos de estudio. 7.4.2. Para el anlisis de Muestras: 7.4.2.1 Mtodo USP para tiamina y piridoxina (HPLC).

Preparacin de solucin de disolucin: Preparar una mezcla de agua, acetonitrilo y cido actico glacial (94:5:1). Preparacin de fase mvil: Preparar una mezcla de agua, metanol y cido actico glacial (73:27:1) que contiene 140 mg de sal sdica de cido 1hexanosulfnico, por cada 100 mililitros. Filtrar por membrana de nylon de 0.45um y agitar 5 minutos en ultrasonido. Preparacin de la muestra de tiamina y Piridoxina:

Pipetear 2 mililitros de la muestra de complejo B y aforar a 100 mililitros con la solucin de disolucin. Agitar con magneto por 10 minutos y 5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por membrana de nylon(13mm) de 0.45um. Preparacin del estndar: Pesar 20 mg de tiamina y 10 mg de piridoxina, todas bases anhidras. Luego aforar a 100 mililitros con la solucin de disolucin, agitar con magneto durante 10 minutos y luego 5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por membrana de nylon(13mm) de 0.45um. La cuantificacin se realiza a una longitud de onda de 360nm en el detector. 7.4.2.2. Mtodo para cianocoblamina (HPLC). Preparacin de solucin de disolucin: Preparar una mezcla de agua, acetonitrilo y cido actico glacial (94:5:1). Preparacin de fase mvil : Preparar una mezcla de agua, metanol y cido actico glacial (73:27:1) que contiene 140 mg de sal sdica de cido 1hexanosulfnico, por cada 100 mililitros. Filtrar por membrana de nylon de 0.45um y agitar 5 minutos en ultrasonido. Preparacin de la muestra de Cianocobalamina: Pipetear 2 mililitros de la muestra de complejo B y aforar a 100ml con la solucin de disolucin. Agitar con magneto por 10 minutos y

5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por membrana de nylon(13mm) de 0.45um. Preparacin del estndar: Pesar 20 mg de cianocoblamina, base anhidra. Luego aforar a 100 mililitros con la solucin de disolucin, agitar con magneto durante 10 minutos y luego 5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por membrana de nylon(13mm) de 0.45um. La cuantificacin se realiza a una longitud de onda de 520nm en el detector. 7.4.2.3 Mtodo LNS para Tiamina, Piridoxina y Cianocoblamina (IR). Preparacin de la curva de calibracin: Se requiere de un mnimo de 5 diferentes concentraciones en los cuales se mezclan los estndares de Tiamina, Piridoxina y cianocobalamina en forma conjunta y mezclan con agua, en balones de 25 mililitros. Preparacin de la muestra: Las ampollas vienen por lo general de 2 o 3 mililitros, por lo que se procede a trasvasar una alcuota cuantitativamente a un baln de 25 mililitros para diluir y cambiar la concentracin original a una entre las concentraciones preparadas para la curva de calibracin que se preparo por el mtodo propuesto: El mtodo Espectrofotomtrico Infrarrojo, consta de 5 diferentes concentraciones de los estndares en cuestin. El infrarrojo calcula las diferentes concentraciones de los tres diferentes estndares al mismo tiempo, aplicndoles un mtodo estadstico.

Cuantificacin de la muestra La muestra fue analizada inmediatamente por el mtodo de espectrofotometra Infrarroja.

7.5 DISEO DE INVESTIGACIN 7.5.1 Muestreo: Se analiz las muestras de complejo B ingresadas al Laboratorio Nacional de Salud durante el perodo comprendido entre el 1 de Enero al 31 de Diciembre de 2002. Es un tipo de muestreo por conveniencia debido al elevado costo que representa un anlisis por HPLC, se analizarn un total de 10 muestras por los mtodos enunciados (HPLC e IR). 7.5.2 Diseo: El tipo de diseo es pareado, ya que a la misma muestra se le evaluarn por dos mtodos distintos. a) Anlisis de datos en este caso, por ser el nmero de muestras menor a 20, el tipo de anlisis es descriptivo, si se considera datos estadsticos como media, desviacin estndar de cada mtodo. Por ser un diseo de tipo pareado, se realizar la prueba de t de Student y el coeficiente de correlacin de concordancia (Rc)

8. Resultados
8.1 HPLC.
Cdigo A B C D E F G H I J K L

Tabla 1.1 Tabla de resultados obtenidos del anlisis de tiamina por

A Mx A Std Vol Ampolla [Conc] exp [Conc] terica 4396228 5762850 2 77.81 100 4064999 5762850 3 107.92 100 9513382 5762850 1 84.19 100 3776892 5762850 2 66.85 100 5520152 5654786 3 149.36 100 9197047 5654786 3 124.42 100 3841986 5654786 3 103.95 100 3821103 5654786 3 1 1 3 3 103.39 93.36 111.17 124.82 103.14 100 100 100 100 100 10713200 5852343 12757287 5852343 4742522 5813152 3918611 5813152

% encontrado 77.81 107.92 84.19 66.85 149.36 124.42 103.95 103.39 93.36 111.17 124.82 103.14

Tabla 1.2 Tabla de resultados obtenidos del anlisis de Piridoxina por HPLC.
Cdigo A B C D E F G H I J K L A Mx A Std Vol Ampolla [Conc] exp [Conc] terica 11712864 2609653 2 107.72 100 8474388 2609653 3 116.90 100 22022427 2609653 1 101.27 100 10458786 2609653 2 96.19 100 11434105 2567510 3 160.32 100 16483144 2567510 3 115.56 100 7653945 2567510 3 107.32 100 8277604 2567510 3 116.06 100 21995184 2666274 1 98.99 100 25463107 2666274 1 114.60 100 8695829 2556712 3 122.44 100 8615339 2556712 3 121.31 100 % encontrado 107.72 116.90 101.27 96.19 160.32 115.56 107.32 116.06 98.99 114.60 122.44 121.31

Tabla 1.3 Tabla de resultados obtenidos del anlisis de Cianocobalamina por HPLC.
Cdigo A B C D E F G H I J K L A Mx 53950 927105 166399 798023 1238357 815380 142123 579573 417487 617076 508336 272282 A Std Vol Ampolla 141290 2 141290 3 141290 1 141553 2 141553 3 141553 3 167081 3 167081 3 167081 1 167081 1 418066 3 418066 3 [Conc] exp [Conc] terica % encontrado 1.15 5 23.06 29.72 25 118.90 1.78 5 35.57 17.03 25 68.10 39.63 25 158.52 26.09 15 173.96 3.85 5 77.07 15.71 25 62.85 3.77 5 75.46 5.58 5 111.54 5.51 10 55.08 2.95 10 29.50

8.2 Tabla 2.1

Tabla de resultados obtenidos del anlisis de Tiamina por IR.

Cdigo A B C D E F G H I J K L [Mx Tiamina] IR detectado % detectado 0.6 0.42 70.0 0.399 0.43 107.8 0.6 0.51 85.0 0.6 0.41 68.3 0.399 0.59 147.9 0.399 0.48 120.3 0.399 0.42 105.3 0.399 0.41 102.8 0.6 0.56 93.3 0.6 0.67 111.7 0.399 0.5 125.3 0.399 0.41 102.8

Tabla 2.2

Tabla de resultados obtenidos del anlisis de Piridoxina por IR.

Cdigo A B C D E F G H I J K L [Mx Piridoxina] IR detectado % detectado 0.6 0.65 108.3 0.399 0.45 112.8 0.6 0.61 101.7 0.6 0.58 96.7 0.399 0.64 160.4 0.399 0.46 115.3 0.399 0.43 107.8 0.399 0.47 117.8 0.6 0.59 98.3 0.6 0.69 115.0 0.399 0.49 122.8 0.399 0.49 122.8

Tabla 2.3 Tabla de Cianocobalamina por IR.

Cdigo A B C D E F G H I J K L

resultados

obtenidos

del

anlisis

de

[Mx Cianocobalamina] IR detectado % detectado 0.03 0.009 30.0 0.099 0.13 131.3 0.03 0.012 40.0 0.15 0.109 72.7 0.099 0.156 157.6 0.06 0.102 170.0 0.0199 0.016 80.4 0.099 0.064 64.6 0.03 0.024 80.0 0.03 0.034 113.3 0.0399 0.022 55.1 0.0399 0.013 32.6

8.3 Tabla 3.1 Tabla de comparacin y anlisis estadstico para la cuantificacin de Tiamina por HPLC e Ir.

Cdigo A B C D E F G H I J K L

mg/ml Tiamina % HPLC 50 77.81 33.3 107.92 100 84.19 50 66.85 33.3 149.36 33.3 124.42 33.3 103.95 33.3 103.39 100 93.36 100 111.17 33.3 124.82 33.3 103.14

% Ir 70 107.8 85 68.3 147.9 120.3 105.3 102.8 93.3 111.7 125.3 102.8

Ho:

ir=HPLC

Tiamina Prueba t para medias de dos muestras emparejadas

% Ir % HPLC

Media Varianza Estadstico t

P(T<=t) dos colas

103.375 104.198333 511.4711364 504.280015 -1.074224612

0.305721195

Valor crtico de t (dos 2.200986273 colas) Ho no se rechaza No hay diferencia significativa

Tabla 3.2 Tabla de comparacin y anlisis estadstico para la cuantificacin de Piridoxina por HPLC e Ir.

Cdigo A B C D E F G H I J K L

Pridoxina mg/ml 50 33.3 100 50 33.3 33.3 33.3 33.3 100 100 33.3 33.3

% HPLC 107.72 116.90 101.27 96.19 160.32 115.56 107.32 116.06 98.99 114.60 122.44 121.31

% Ir 108.3 112.8 101.7 96.7 160.4 115.3 107.8 117.8 98.3 115 122.8 122.8

Piridoxina Prueba t para medias de dos muestras emparejadas

% Ir % HPLC

Media Varianza Estadstico t

P(T<=t) dos colas

114.975 114.89 280.2729545 278.614909 0.200083937

0.845065951

Valor crtico de t (dos colas) Ho no se rechaza

2.200986273 No hay diferencia significativa

Tabla 3.3 Tabla de comparacin y anlisis estadstico para la cuantificacin de Cianocobalamina por HPLC e Ir.

Cdigo A B C D E F G H I J K L

Cianocobalamina mg/ml 2.5 8.33 5 12.5 8.33 8.33 8.33 8.33 5 5 3.33 3.33

% HPLC 23.06 118.90 35.57 68.10 158.52 173.96 77.07 62.85 75.46 111.54 55.08 29.50

% Ir 30 131.3 40 72.7 157.6 170 80.4 64.6 80 113.3 55.14 32.6

Cianocobalamina Prueba t para medias de dos muestras emparejadas

% Ir % HPLC

Media Varianza Estadstico t

P(T<=t) dos colas

85.63666667 2248.769588 2.668437453

0.021854911

82.4675 2389.196802

Valor crtico de t (dos colas) Ho se rechaza

2.200986273 Si hay diferencia significativa

8.4 Anlisis estadstico de la cuantificacin de los compuestos por ambos mtodos. Tabla 4.1

Tiamina
% HPLC % Ir 77.81 107.92 84.19 66.85 149.36 124.42 103.95 103.39 93.36 111.17 124.82 103.14 Diferencia 70 7.81 107.8 0.12 85 -0.81 68.3 -1.45 147.9 1.46 120.3 105.3 102.8 93.3 111.7 125.3 102.8 4.12 -1.35 0.59 0.06 -0.53 -0.48 0.34 Varianza de las diferencias Diferencia Media Error tpico Desviacin estndar 0.82333333 0.7664443 2.65504095

Varianza de la muestra

7.04924242

Tabla 4.2 Piridoxina

% HPLC % Ir 107.72 116.90 101.27 96.19 160.32 115.56 107.32 116.06 98.99 114.60 122.44 121.31 Diferencia 108.3 -0.58 112.8 4.10 101.7 -0.43 96.7 -0.51 160.4 -0.08 115.3 107.8 117.8 98.3 115 122.8 122.8 0.26 -0.48 -1.74 0.69 -0.40 -0.36 -1.49 Diferencia Media Error tpico Desviacin estndar -0.085 0.42482171 1.47162557

Varianza de la muestra

2.16568182

Tabla 4.3

Cianocobalamina
% HPLC % Ir 23.06 118.90 35.57 68.10 158.52 173.96 77.07 .85 75.46 111.54 55.08 29.50 Diferencia 30 -6.94 131.3 -12.40 40 -4.43 72.7 -4.60 157.6 0.92 170 80.4 64.6 80 113.3 55.14 32.6 3.96 -3.33 -1.75 -4.54 -1.76 -0.06 -3.10 Diferencia Media Error tpico Desviacin estndar -3.16916667 1.18764885 4.11413629

Varianza de la muestra

16.9261174

8.5 Tabla 5.1 Coeficiente de correlacin de concordancia:

Rc= S21 + S22 S2(1-2)

S1= Varianza del mtodo HPLC S2= Varianza del mtodo IR S(1-2)= Diferencia entre varianzas Y1= Media del mtodo HPLC Y2= Media del mtodo IR Rc Tiamina Rc Piridoxina Rc Cianocobalamina 0.99990237 0.99996992 0.99997245

S21 + S22 + (1- 2)2

8.6 Tabla 6.1 Costo de anlisis de un lote de 5 muestras por HPLC Reactivos y Materiales Agua Metanol Acetonitrilo cido Actico Glacial Sal Sdica de cido Hexanosulfnico Tiamina clorhidrato Piridoxina Cianocobalamina Membrana hidroflica Filtro de cartucho .2um Costo de Reactivos Tiempo de anlisis 16 horas Tabla 6.2 Costo de anlisis de un lote de 10 muestras por IR Caractersticas tcnicas HPLC HPLC HPLC GR GR Estndar USP Estndar USP Estndar USP Cantidades 2000 ml 400 ml 100 ml 40 ml 1.4 g 20 mg 10 mg 20 mg 10 unidades 10 unidades Costo Q. -------------Q. 16.00 Q. 8.00 Q. 4.80 Q. 109.20 Q. Q. Q. Q. Q. 84.40 105.50 28.20 99.40 198.00

Q.

653.50

Reactivos y Materiales Agua Acetona Tiamina clorhidrato Piridoxina Cianocobalamina Membrana hidroflica Costo de Reactivos Tiempo de anlisis 8 horas

Caractersticas tcnicas Destilada GR Estndar USP Estndar USP Estndar USP

Cantidades 500 ml 200 ml 20 mg 10 mg 20 mg 10 unidades

Costo Q. -------------Q. 16.00 Q. 84.40 Q. 105.50 Q. 28.20 Q. 99.40

Q.

333.50

Tabla 6.3 Costos comparativos Mtodo Costo reactivo Q. 653.50 Q. 333.50 Otros costos* Q. 2783.21 Q. 1420.71 Precio del lote Q. 3437.41 (05) Q. 1754.21 (10) Precio Unitario

HPLC
IR

Q. 687.48
Q. 175.42

* Gastos propios del LNS.

9. DISCUSIN DE RESULTADOS
El objetivo fundamental de esta investigacin fue la comparacin mtodo de cromatografa infrarroja lquida en de el alta anlisis resolucin de y el mtodo Piridoxina espectrofotometra costo. Para la determinacin de la concordancia de los mtodos se efectu un anlisis estadsticos. En el cual se buscaba obtener la reproducibilidad de los datos por medio del Coeficiente de correlacin de concordancia y la equivalencia por medio de la t de Student mediante la comparacin del mtodo infrarrojo con el HPLC (mtodo reconocido por la USP). El anlisis de tiempo y costo fue determinado por el Laboratorio Nacional de Salud con base a tiempos y costos para ambos mtodos. La cuantificacin de tiamina puede desarrollarse indistintamente por cualesquiera de los mtodos, ya que el mtodo de espectrofotometra infrarroja y de cromatografa liquida de alta resolucin concuerdan, son equivalentes y no hay diferencia significativa, ya que el valor p de dos colas es de 0.305 y el valor estadstico t entra en los rangos establecidos por el valor crtico. La cuantificacin de la Piridoxina en soluciones inyectables fue evaluada y se lleg a obtener resultados para el valor p (0.845) y el valor de t dentro de los rangos permisibles por los valores crticos. Por lo anterior, al igual que la tiamina, la piridoxina puede ser cuantificada por cualesquiera de los dos mtodos en estudio. La cianocobalamina presenta sin embargo el siguiente inconveniente: el valor t (2.66) sale del valor crtico ( 2.20) a pesar que el dato de p es menor a los dos anteriores evaluados. Al obtener el anterior resultado se concluye que en Tiamina, del de y

Cianocobalamina en soluciones inyectables, en cuanto a concordancia, tiempo y

cuanto a la concordancia, el mtodo de espectrofotometra infrarroja no es similar al mtodo de HPLC, por lo que el mtodo no es del todo adecuado para la cuantificacin de la cianocobalamina. El valor t obtenido puede deberse a las pequeas cantidades de cianocobalamina que viene en la mezcla de las vitaminas en estudio y la sensibilidad del equipo no es suficiente para su adecuada lectura. A pesar de lo anterior, el mtodo de espectrofotometra infrarroja cuenta con una alta reproducibilidad (0.99997). En cuanto a los reactivos empleados con los mtodos objeto de estudio, se observ que en el mtodo de HPLC se emplean diversos reactivos (sin contar los estndares y agua) y en cantidades considerables, mientras que con el mtodo IR se emplea acetona, la cual es utilizada para la limpieza del porta muestras. No est de ms mencionar que las cantidades de reactivo son menores en el anlisis por el mtodo infrarrojo. Las cantidades de reactivos y la diversidad repercute en el costo del anlisis, se determin que para un lote de 5 muestras, su cuantificacin por HPLC tiene un costo de Q. 653.60. El costo de un lote de 10 muestras para su cuantificacin por espectrofotometra infrarroja es de Q. 333.50. Lo anterior deja de relevancia lo siguiente: se analiza el doble de muestras por IR, a un costo dos veces menor que el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin. El tiempo de anlisis para cada uno de los mtodos es diferente, sto se debe a la preparacin del equipo, preparacin de las muestras, lecturas que llevan varios minutos, la cuantificacin por HPLC lleva un tiempo efectivo total para el anlisis de las 3 vitaminas contenidas en 5 muestras de 16 horas. El mtodo IR, por la simplicidad de la preparacin de muestras y la rapidez en las lecturas permite analizar en un termino de 8 horas 10 muestras.

El costo total de la cuantificacin por ambos mtodos se ve influida por varios factores, tales como reactivos, costo de mano de obra, gastos fabriles, gastos de administracin y gastos tecnolgicos. Se calcul que para la cuantificacin de una muestra de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables, el costo por cromatografa lquida de alta resolucin es de Q 687.48 y el costo por el mtodo de espectrofotometra infrarroja es de Q 175.42. Por lo que es casi cuatro veces ms barato realizar la cuantificacin por IR que por HPLC.

10. CONCLUSIONES
10.1 El mtodo de espectrofotometra infrarroja es comparable al de

cromatografa lquida de alta resolucin en la cuantificacin de Tiamina y Piridoxina; no as en la de Cianocobalamina, donde el mtodo HPLC es el ideal para su cuantificacin. 10.2 La concordancia entre el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin y el mtodo de espectrofotometra infrarroja es satisfactoria. 10.3 El tiempo que se emplea para el anlisis mediante el mtodo infrarrojo es menor que el utilizado por el mtodo HPLC. 10.4 Se emplea mayor cantidad y diversidad de reactivos con el mtodo por HPLC que con los utilizados por el mtodo infrarrojo, lo cual repercute en aspectos como costo y tiempo. 10.5 Los costos generados por el uso del mtodo de espectrofotometra infrarroja son ms bajos que los costos generados por el mtodo de cromatografa liquida de alta resolucin.

11. Recomendaciones

11.1 A los laboratorios de control de calidad instaurar y utilizar mtodos de anlisis alternos que reduzcan el tiempo de anlisis y costos, respaldados con estudios comparativos, para establecer la validez, reproducibilidad y confiabilidad de los resultados obtenidos. 11.2 Anlisis de otras sustancias activas, mediante mtodos alternos, para optimizar el uso de equipos disponibles en el Laboratorio Nacional de Salud, en virtud que muchas veces la falta de metodologa analtica valida y confiable, imposibilita efectuar el control de calidad o el costo de anlisis resulta sumamente elevado.

12. REFERENCIAS

1. Ayres, G. Anlisis clnico cuantitativo. University of Texas. Editorial Harla S.A. Mxico. 1970. Pag. 287, 522. 2. Bernard O. Tcnicas de estadstica moderna, cuando y donde aplicarlas. Editorial Limusa-Wiley, S.A. Mxico. 1973. 3. Coates J. The analysis of aqueous solutions by infrared spectroscopy. Reprinted from European Spectroscopy News. England. 1998. 4. Cordn R. 1995. Comparacin de dos mtodos alternativos para la cuantificacin de sodio y potasio en sales de rehidratacin oral, fabricadas en el laboratorio de produccin de medicamentos (LAPROMED) de la facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. Guatemala. Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. 5. Daniels, W. Bioestadstica, base para el anlisis de la ciencia de la salud. 3ra. Edicin. Editorial Limusa. Mxico. 1990. Pag. 189196 y 221-239. 6. European Pharmacopoeia. 2001. Pp. 690-694, 1448 7. Goodman Argentina. 8. Grant, E. Richard, S. Control estadstico de calidad. Compaa editorial continental, S.A. Mxico, 1979. Pag. 5-14. 9. Martindale, 33th Ed. 2002. Pp. 1386-1389 y Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. 9a.Ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires

10.McNair H. Cromatografa lquida de alta Presin. 2a. Edicin. Editorial secretara General de la Organizacin de los Estados Americanos. USA. 1980. 11.Monografas Farmacuticas. 1998. Pp. 959-961. 12.Nickerson,C. A concordance correlation coefficient to evaluate reproducibility. Biometrics. 1997 pag. 1503-1507. 13.Orozco L. 1994. Determinacin del contenido y la potencia antibitica de Penicilina G, Penicilina V y Ampicilina, mediante la comparacin de los resultados obtenidos por los mtodos microbiolgico, yodomtrico y cromatografa lquida de alta presin. Guatemala. Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. 14.Page.Curtis.Sutter.Walker.Hoffman. Farmacologa Integrada. Ediciones Harcourt Espaa S.A. Espaa. 1999. Pp 200-202, 489. 15.Pattacini S. Infrared Spectroscopy and Computer Separation of Drug Mixtures. Perkin-Elmer Bulletin. Perkin-Elmer Corporation. England.1997. 16.Perkin-Elmer. Infrared Applications Study. USA. 1998. 17.Quant+ Users Guide. Perkin-Elmer Ltd. England. 1994. 18.Quant+. Reference Manual. Perkin-Elmer ltd. England. 1994. 19.Rosito H. 1990. Estudio comparativo de dos mtodos Para determinar partculas extraas en inyectables de pequeo volumen envasados en recipientes plsticos de polipropileno. Guatemala. Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia.

20.Skoog/Leary.

Anlisis Instrumental.

4a. Edicin. Editorial

McGraw-Hill. Espaa 1994. 21.Spragg R. Program for quantitative multicomponent analysis of complex materials. Perkin Elmer Infrared bulletin. 1990. 22.USP 24 NF 19. Pp. 1639-1641 23.USP DI. 22nd Ed. 2002. Pp. 2746-2748. 24.Vargas M. 1994. Estudio comparativo de dos mtodos (mtodo por cromatografa de gas y mtodo por electrodo selectivo de fluor) para determinar fluor en crema dental. Guatemala. Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. 25.Zeller M. The Infrared Grating Spectra of Polymers. Perkin-Elmer Bulletin. Perkin-Elmer Corporation. England. 1993.

Resumen La eficiencia de los mtodos de

IM, debido a que presentan una mejor absorcin y como consecuencia un efecto rpido, por lo tanto el anlisis fisicoqumico debe garantizar que el medicamento es eficaz, confiable y de calidad. Para el control de calidad, el Laboratorio Nacional de Salud (LNS) utiliza la metodologa de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), mtodo que tiene como referencia la farmacopea Estadounidense (USP XXIV). Sin embargo, el laboratorio cuenta con un mtodo alterno, espectrofotometra Infrarroja, el cual a la fecha, no ha podido ser implementado porque se carece de datos analticos comparativos que garanticen la fueron la y obtencin de resultados similares. Por lo que el estudio de la eficiencia del mtodo infrarrojo debe realizarse con el parmetro de referencia del mtodo apoyado por la USP. En cuanto a la evaluacin de mtodos de anlisis, no se encontr referencias bibliogrficas.

espectrofotometra infrarroja y cromatografa lquida de alta resolucin para la cuantificacin de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en

soluciones inyectables; fue evaluada en cuanto a concordancia, reproducibilidad, costo y tiempo. Se seleccionaron 12 muestras al azar, recibidas en el Laboratorio Nacional de Salud. Las muestras fueron analizadas por el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin y por el mtodo de espectrofotometra infrarroja propio del Laboratorio Nacional de Salud. Los resultados obtenidos

analizados estadsticamente para determinar equivalencia de ambos mtodos

reproducibilidad de datos. Posteriormente se evalu el costo y tiempo requerido para el desarrollo del anlisis. Los resultados demuestran que el anlisis de Tiamina y Piridoxina pueden efectuarse indistintamente por cualesquiera de los mtodos. La cuantificacin de Cianocobalamina, por no ser el mtodo de espectrofotometra llevarse a infrarroja cabo por

MATERIALES Y MTODOS Universo y Muestra Muestras que ingresaron al Laboratorio Nacional de Salud durante el perodo del 1 de Enero de 2002 al 31 de Diciembre del mismo ao. Muestras que ya fueron analizadas y se present el dictamen por parte del

equivalente,

debe

cromatografa lquida de alta resolucin. En cuanto al costo, el mtodo de espectrofotometra infrarroja es una opcin para obtener un anlisis de menor costo y menor tiempo de anlisis.

Laboratorio. Mtodo de anlisis: Cuantificacin por Cromatografa Lquida de Alta Resolucin y

INTRODUCCIN El principalmente complejo por B, compuesto piridoxina y

Espectrofotometra Infrarroja.

tiamina,

cianocobalamina, est indicado en casos de neuropatas perifricas. Este tipo de productos se utiliza mayormente en forma inyectable por va

Recursos Materiales Equipo: Elmer. Computadora Dell. Impresora Hewlett Packard. Ultrasonido. Preparacin del estndar: Pesar 20 mg de tiamina y 10 mg de piridoxina, todas bases anhidras. Luego aforar a 100 mililitros con la solucin de disolucin, agitar con magneto durante 10 minutos y luego 5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por membrana de nylon(13mm) de 0.4um. La cuantificacin se realiza a una longitud de onda de 360nm en el detector. Balanza analtica Mettler Toledo. Unidad de filtracin y bomba de vaco. Cromatgrafo Lquido de alta resolucin Preparacin de la muestra de tiamina y Piridoxina: Pipetear 2 mililitros de la muestra de complejo B y aforar a 100 mililitros con la solucin de disolucin. Agitar con magneto por 10 minutos y 5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por membrana de nylon(13mm) de Perkin 0.4um.

Merck Hitachi Columna para vitaminas. Espectrofotmetro infrarrojo

Reactivos: Agua HPLC. Metanol HPLC. Acetonitrolo HPLC. cido actico glacial. Sal sdica de cido 1 hexanosulfnico. Acetona. Estndares U.S.P. de tiamina, piridoxina

Mtodo para cianocoblamina (HPLC). Preparacin de solucin de disolucin: Preparar una mezcla de agua, acetonitrilo

y cianocobalamina.

Procedimiento Para el anlisis de Muestras:

y cido actico glacial (94:5:1).

Preparacin de fase mvil : Mtodo USP para tiamina y piridoxina (HPLC). Preparacin de solucin de disolucin: Preparar una mezcla de agua, acetonitrilo y cido actico glacial (94:5:1). Preparar una mezcla de agua, metanol y cido actico glacial (73:27:1) que contiene 140 mg de sal sdica de cido 1- hexanosulfnico, por cada 100 mililitros. Filtrar por membrana de nylon de 0.45um y agitar 5 minutos en ultrasonido. Preparacin de fase mvil: Preparar una mezcla de agua, metanol y cido actico glacial (73:27:1) que contiene 140 mg de sal sdica de cido 1-hexanosulfnico, por cada 100 mililitros. Filtrar por membrana de nylon de 0.45um y agitar 5 minutos en ultrasonido. Preparacin de la muestra de Cianocobalamina: Pipetear 2 mililitros de la muestra de complejo B y aforar a 100ml con la solucin de disolucin. Agitar con magneto por 10 minutos y

5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por membrana de nylon(13mm) de 0.4um.

Cuantificacin de la muestra La inmediatamente muestra por el fue analizada mtodo de

Preparacin del estndar: Pesar 20 mg de cianocobalamina, base anhidra. Luego aforar a 100 mililitros con la solucin de disolucin, agitar con magneto durante 10 minutos y luego 5 minutos con ultrasonido. Antes de inyectar, filtrar por

espectrofotometra Infrarroja.

DISEO DE INVESTIGACIN Diseo: El tipo de diseo es pareado, ya que a la misma muestra se le evaluarn por dos mtodos distintos.

membrana de nylon(13mm) de 0.4um. La cuantificacin se realiza a una longitud de onda de 520nm en el detector.

a)

Anlisis de datos en este caso, por ser

Mtodo

LNS

para

Tiamina,

Piridoxina

el nmero de muestras menor a 20, el tipo de anlisis es descriptivo, si se considera datos estadsticos como media, desviacin estndar de cada mtodo. Por ser un diseo de tipo pareado, se realizar la prueba de t de Student y el coeficiente de correlacin de concordancia (Rc)

Cianocobalamina (IR). Preparacin de la curva de calibracin: Se requiere de un mnimo de 5 diferentes concentraciones en los cuales se mezclan los estndares de Tiamina, Piridoxina y

cianocobalamina en forma conjunta y mezclan con agua, en balones de 25 mililitros.

Preparacin de la muestra: Las ampollas vienen por lo general de 2 o 3 mililitros, por lo que se procede a trasvasar una alcuota cuantitativamente a un baln de 25 mililitros para diluir y cambiar la concentracin original a una entre las concentraciones

preparadas para la curva de calibracin que se prepar por el mtodo propuesto: El mtodo Espectrofotomtrico

Infrarrojo, consta de 5 diferentes concentraciones de los estndares en cuestin. El infrarrojo

calcula las diferentes concentraciones de los tres diferentes estndares al mismo tiempo,

aplicndoles un mtodo estadstico.

Resultados

Resultados y anlisis estadstico para la cuantificacin de Tiamina. Cdigo A B C D E F G H I J K L mg/ml Tiamina 50 33.3 100 50 33.3 33.3 33.3 33.3 100 100 33.3 33.3 Estadstico t % HPLC % Ir P(T<=t) dos colas 77.81 70 Valor crtico de t (2 colas) 107.92 107.8 Desviacin estndar 84.19 85 Varianza de la muestra 66.85 68.3 Ho (*) no se rechaza 149.36 147.9 significativa Rc (**)Tiamina 124.42 120.3 103.95 105.3 103.39 102.8 93.36 93.3 111.17 111.7 124.82 125.3 103.14 102.8 -1.074224612 0.305721195 2.200986273 2.65504095 7.04924242 No hay diferencia 0.99990237

Resultados y anlisis estadstico para la cuantificacin de Piridoxina

Cdigo A B C D E F G H I J K L

Piridoxina mg/ml % HPLC 50 107.72 33.3 116.90 100 101.27 50 96.19 33.3 160.32 33.3 115.56 33.3 107.32 33.3 116.06 100 98.99 100 114.60 33.3 122.44 33.3 121.31

% Ir 108.3 112.8 101.7 96.7 160.4 115.3 107.8 117.8 98.3 115 122.8 122.8

Estadstico t P(T<=t) dos colas Valor crtico de t (2 colas) Desviacin estndar Varianza de la muestra Ho (*) no se rechaza significativa Rc (**)Piridoxina

0.200083937 0.845065951 2.200986273 1.47162557 2.16568182 No hay diferencia 0.99996992

*Ho= Comparacin entre el mtodo IR con el HPLC **Rc= Coeficiente de correlacin de concordancia

Resultados y anlisis estadstico para la cuantificacin de Cianocobalamina

Cdigo A B C D E F G H I J K L

Cianocobalamina mg/ml 2.5 8.33 5 12.5 8.33 8.33 8.33 8.33 5 5 3.33 3.33

% HPLC 23.06 118.90 35.57 68.10 158.52 173.96 77.07 62.85 75.46 111.54 55.08 29.50

% Ir 30 131.3 40 72.7 157.6 170 80.4 64.6 80 113.3 55.14 32.6

Estadstico t P(T<=t) dos colas Valor crtico de t (2 colas) Desviacin estndar Varianza de la muestra Ho se rechaza diferencia significativa Rc Cianocobalamina

2.668437453 0.021854911 2.200986273 4.11413629 16.9261174 Si hay 0.99997245

Costo de anlisis de un lote de 5 muestras por HPLC Reactivos y Materiales Caractersticas tcnicas Agua HPLC Metanol HPLC Acetonitrilo HPLC cido Actico GR Sal Sdica de cido Hexanosulfnico GR Tiamina clorhidrato Estndar USP Piridoxina Estndar USP Cianocobalamina Estndar USP Membrana hidroflica Filtro cartucho .2um Costo de Reactivos Tiempo de anlisis 16 horas Costo de anlisis de un lote de 10 muestras por IR Reactivos y Materiales Caractersticas tcnicas Agua Destilada Acetona GR Tiamina clorhidrato Estndar USP Piridoxina Estndar USP Cianocobalamina Estndar USP Membrana hidroflica Costo de Reactivos Tiempo de anlisis 8 horas Costos comparativos Mtodo Costo reactivo Otros costos* HPLC Q. 653.50 Q. 2783.21 IR Q. 333.50 Q. 1420.71 * Gastos propios del LNS.

Cantidades 2000 ml 400 ml 100 ml 40 ml 1.4 g 20 mg 10 mg 20 mg 10 unidades 10 unidades

Costo Q. -----Q. 16.00 Q. 8.00 Q. 4.80 Q.109.20 Q. 84.40 Q.105.50 Q. 28.20 Q. 99.40 Q.198.00 Q653.50

Cantidades 500 ml 200 ml 20 mg 10 mg 20 mg 10 unidades

Costo Q. ------Q. 16.00 Q. 84.40 Q. 105.50 Q. 28.20 Q. 99.40 Q. 333.50

Precio del lote Q. 3437.41 (05) Q. 1754.21 (10)

Precio Unitario Q. 687.48 Q. 175.42

DISCUSIN DE RESULTADOS La cuantificacin de tiamina puede desarrollarse indistintamente por

Las

cantidades

de

reactivos

la

diversidad repercute en el costo del anlisis. Se determin que para un lote de 5 muestras, su cuantificacin por HPLC tiene un costo de Q. 653.60. El costo de un lote de 10 muestras para su cuantificacin por espectrofotometra infrarroja es de Q. 333.50. Lo anterior deja de relevancia lo siguiente: se analiza el doble de muestras por IR, a un costo dos veces menor que el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin. El tiempo de anlisis para cada uno de los mtodos es diferente, sto se debe a la preparacin del equipo, preparacin de las muestras, lecturas que llevan varios minutos, la cuantificacin por HPLC lleva un tiempo efectivo total para el anlisis de las 3 vitaminas contenidas en 5

cualesquiera de los mtodos, ya que el mtodo de espectrofotometra infrarroja y de cromatografa liquida de alta resolucin concuerdan, son equivalentes y no hay diferencia significativa, ya que el valor p de dos colas es de 0.305 y el valor estadstico t entra en los rangos establecidos por el valor crtico. La cuantificacin de la Piridoxina en soluciones inyectables fue evaluada y se lleg a obtener resultados para el valor p (0.845) y el valor de t dentro de los rangos permisibles por los valores crticos. Por lo que la piridoxina puede ser tambin cuantificada por cualesquiera de los dos mtodos en estudio. La cianocobalamina presenta sin

muestras de 16 horas. El mtodo IR, por la simplicidad de la preparacin de muestras y la rapidez en las lecturas permite analizar en un termino de 8 horas, 10 muestras. El costo total de la cuantificacin por ambos mtodos se ve influida por varios factores, tales como reactivos, costo de mano de obra, gastos fabriles, gastos de administracin y gastos tecnolgicos. Se calcul que para la cuantificacin de una muestra de Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en soluciones inyectables, el costo por cromatografa lquida de alta resolucin es de Q 687.48 y el costo por el mtodo de espectrofotometra infrarroja es de Q 175.42. Por lo anterior enunciado, el mtodo de espectrofotometra infrarroja es comparable al de cromatografa lquida de alta resolucin en la cuantificacin de Tiamina y Piridoxina; no as en

embargo el siguiente inconveniente: el valor t (2.66) sale del valor crtico ( 2.20) a pesar que el dato de p es menor a los dos anteriores evaluados. Al obtener el anterior resultado se concluye que en cuanto a la concordancia, el mtodo de espectrofotometra infrarroja no es similar al mtodo de HPLC, por lo que el mtodo no es del todo adecuado para la cuantificacin de la cianocobalamina. El valor t obtenido puede deberse a las pequeas cantidades de

cianocobalamina que viene en la mezcla de las vitaminas en estudio y la sensibilidad del equipo no es suficiente para su adecuada lectura. En cuanto a los reactivos empleados con los mtodos objeto de estudio, se observ que en el mtodo de HPLC se emplean diversos reactivos y en cantidades considerables, no as con el mtodo IR.

la de Cianocobalamina, donde el mtodo HPLC es el ideal para su cuantificacin. La concordancia entre el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin y el mtodo de espectrofotometra infrarroja es satisfactoria. El tiempo que se emplea para el anlisis mediante el mtodo infrarrojo es menor que el utilizado por el mtodo HPLC. Los costos generados por el uso del mtodo de espectrofotometra infrarroja son ms bajos que los costos generados por el mtodo de

3.

Grant, E. Richard, S. Control estadstico de calidad. Compaa editorial continental, S.A. Mxico, 1979. Pag. 5-14.

4.

McNair H. Cromatografa lquida de alta Presin. 2a. Edicin. Editorial secretara General de la Organizacin de los Estados Americanos. USA. 1980.

5.

Nickerson,C. coefficient

A to

concordance evaluate

correlation

reproducibility.

Biometrics. 1997 pag. 1503-1507. 6. Page.Curtis.Sutter.Walker.Hoffman. Farmacologa Integrada. Ediciones Harcourt Espaa S.A. Espaa. 1999. Pp 200-202, 489. 7. Pattacini S. Infrared Spectroscopy and

cromatografa lquida de alta resolucin. La inquietud puesta de relevancia es la bsqueda de mtodos de anlisis alternos que reduzcan el tiempo de anlisis y costos, respaldados con estudios comparativos, para establecer la validez, reproducibilidad y confiabilidad de los resultados obtenidos. 8.

Computer Separation of Drug Mixtures. Perkin-Elmer Bulletin. Perkin-Elmer

Corporation. England.1997. Perkin-Elmer. Infrared Applications Study. USA. 1998.

AGRADECIMIENTO Al Laboratorio Nacional de Salud (LNS) por permitirme realizar este trabajo, ya que aport el equipo necesario, adems de financiarlo y un agradecimiento muy especial por su asesora tcnica a la Licda. Millie Cruz.

9.

USP 24 NF 19. Pp. 1639-1641

10. USP DI. 22nd Ed. 2002. Pp. 2746-2748.

REFERENCIAS 1. Daniels, W. Bioestadstica, base para el anlisis de la ciencia de la salud. 3ra. Edicin. Editorial Limusa. Mxico. 1990. Pag. 189196 y 221-239. 2. Goodman y Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. 9a.Ed. Editorial Argentina. Panamericana. Buenos Aires