UNIVERSIDAD RICARDO PALMA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE BIOQUMICA Y NUTRICIN
Informe de Laboratorio N 5: Digestin enzimtica del almidn

Alumno Cdigo

: Enciso Samam, lvaro Mauricio : 201011004

Profesora : Dra. Nancy Jo Vargas Grupo Perodo : 1-3 : 2012-I

 Parte experimental:
En cada tubo de ensayo se colocaron las medidas correspondientes de sustancias como muestra el cuadro: TUBO N
ALMIDON 1%; ml BUFFER FOSFATO pH 6.8:ml HCL O,3N : ml CLNa 0,9%: ml Agua dest.:ml Bao Mara 37 x 5 Amilasa Salival: ml 1 2.0 1.0 3.0 2 2.0 1.0 2.4 0.6 3 2.0 1.0 2.4 0.6 4 2.0 3.4 0.6

A. DETERMINACIN DEL SUSTRATO: TUBOS N 5 6 7 8 DIGERIDO DEL TUBO 1: ml 0.5 DIGERIDO DEL TUBO 2: ml 0.5 DIGERIDO DEL TUBO 3: ml 0.5 DIGERIDO DEL TUBO 4: ml 0.5 HCL 0.05N : ml 5 5 5 5 Sol. de Lugol: ml 0.5 0.5 0.5 0.5 Dejar en reposo por 15 minutos. Leer al fotocolormetro con filtro rojo (660nm)
5 Lectura inicial 0.015 6 0.016 7 0.261 8 0.829 BLANCO 1.757

Calculando la actividad enzimtica con la frmula: Actividad enzimtica = Lectura del blanco Lectura inicial 1) Tubo 5 : Ae= 1.757-0.015 Ae=1.742 2) Tubo 6: Ae=1.757-0.016 Ae=1.741 3) Tubo 7: Ae= 1.757-0.261 Ae=1.496 4) Tubo 8: Ae=1.757-0.829 Ae=0.928

B. DETERMINACIN DEL PRODUCTO:

TUBOS DIGERIDO DEL TUBO 1: ml DIGERIDO DEL TUBO 2: ml DIGERIDO DEL TUBO 3: ml DIGERIDO DEL TUBO 4: ml SOLUCION DE GLUCOSA 1%: ml SOLUCION BENEDICT : ml 9 0.5 2 10 0.5 2 11 0.5 2 12 0.5 2 0.5 2 13 -

Mezclar, Incubar en Bao Mara a 100C x 5 y enfriar en agua helada. Los resultados de la interpretacin se encuentran en la parte de Cuestionario.

 Cuestionario e interpretacin de resultados:

1. Determinacin del sustrato:
Tubo N1: El color que se puede apreciar en el tubo es azulado. Esto nos indica que no hubo hidrlisis, debido a que no hay presencia de la enzima amilasa. El color lo toma en base al lugol. Existe el sustrato (almidn), el pH adecuado (6.8), y el activador (HCl).

Tubo N2: El lquido queda incoloro, debido a que se dieron las condiciones ptimas, para que ocurra la reaccin, por lo tanto la hidrlisis es total. En este caso s se aadi la amilasa.

Tubo N3: Queda un color rosado plido, esto demuestra que hubo hidrlisis, pero parcial, ya que no hubo NaCl. Es necesaria una cantidad de sales, por lo tanto, no actu de manera optima.

Tubo N4: Queda un color azul, con lo cual se demuestra que no hubo reaccin, debido al medio cido en el que se encontraba por la presencia de HCl. La coloracin azul, se da por el contacto del almidn con el lugol.

3. Determinacin del producto:

Tubo N9: Nos da un color celeste, demostrando que no hubo reaccin con la solucin de Benedict, ya que este solo reacciona con azcares reductores, y tomamos muestra del tubo nmero uno en el cual no hubo hidrlisis; en dicha muestra solo hubo almidn, el cual no es un azcar reductor.

Tubo N10: El color obtenido en este procedimiento, es celeste verdoso con precipitado rojo ladrillo, con lo cual demostramos hidrlisis, debido a que el producto no fueron en su totalidad azcares reductores. An se aprecia el color base de la solucin (azul), pero disminuido.

Tubo N11: El color obtenido es verdoso con precipitado rojo ladrillo, pero se obtiene menor cantidad de precipitado, lo cual indica que s hubo hidrlisis, pero parcial.

Tubo N12: El color obtenido es celeste, demostrando que con el sustrato trabajado en la reaccion de Benedict, no hubo hidrlisis previa, manteniendo el color del reactivo de Benedict.

Tubo N13: En este procedimiento, debido a que trabajamos con glucosa (azcar reductor), se obtiene una solucin roja, con precipitado rojo ladrillo, en mayor cantidad. El precipitado que se da es CuO2, formado al reaccionar los azcares reductores con el reactivo de Benedict.

3. Grafique Actividad enzimtica vs. Tubo de ensayo

(En papel milimetrado adjunto)

4. Explique cules son las condiciones ptimas para una hidrlisis enzimtica del almidn soluble:
Fundamentalmente se necesita: Presencia de un pH ptimo (6.8) Las concentraciones de sustratos y enzimas adecuadas. Temperatura ptima, alrededor de 37.5 C. Un buffer para estabilizar el pH. Concentracin adecuada e iones (NaCl)

5. Interpretar la reaccin de Benedict:

Consiste en la reaccin de un azcar reductor (p. ej. lactosa, glucosa, maltosa) en soluciones alcalinas; en este experimento usamos la glucosa, con el reactivo de Benedict, compuesto por: Sulfato cprico Citrato de sodio Carbonato anhdrido de sodio NaOH Formando un precipitado rojo ladrillo. Pueden reducir el Cu+2, que tiene color azul, a Cu+, el cual, precipita de la solucin alcalina como Cu2O. Cu+2 Cu+