Origen fetal de la disfuncin placentaria: el caso de la RCIU

Paola Casanello MSc, PhD

(pcasane@med.puc.cl) Divisin de Obstetricia y Ginecologa Escuela de Medicina Pontificia Universidad Catlica de Chile

Se requiere una adecuada funcin placentaria para lograr un buen desarrollo y crecimiento fetal

Placenta: estructura y funcin vascular

Poston, 1997

Adamson, 1999

Kuzmina et al.,2005

Homeostatic oxygen-sensing system

Keneth et al NEJM, 2005

Efecto de la hipoxemia materna sobre la distribucin de flujos en el feto.

Cohn et al., 1974

La hipoxia genera vasoconstriccin en la placenta

Howard et al.1987

Efecto de hipoxia aguda en la respuesta vascular de la placenta

Krause et al., 2011

Restriccin del Crecimiento Intrauterino: su relacin con hipoxia

www.annegeddes.com

Restriccin del Crecimiento Intrauterino (RCIU)

Incidencia de RCIU en Chile es 3-10% (MINSAL 2009) Representa 20 - 25% de las muertes intrauterinas Mayor riesgo de morbilidad y mortalidad perinatal

Lin & Santolaya-Forgas, Obstet Gynecol. 1998 Juez et al., Rev Med Chil. 1989

Morbilidad y mortalidad perinatal en RCIU

Resnik, 2002

Diagnstico y seguimiento de fetos con RCIU

Biometra por ultrasonido es el gold standard para controlar el crecimiento fetal. Doppler de las arterias umbilicales se usa para evaluar el bienestar fetal.

Evidencia clnica de hipoxia en RCIU

PO2 in the UV = 26 - 32 mmHg %O2 in UV = 4.5 - 5.5 %

Howard 1987

Pardi et al. NEJM.1993

Relacin entre peso fetal / peso de la placenta y Doppler de arterias umbilicales

Pardi et al. Placenta 2002

Funcin vascular: Endotelio, xido Ntrico e Hipoxia

www.annegeddes.com

Funcin endotelial

VASOCONSTRICTORES PROCOAGULANTES PROLIFERACION VASODILATADORES ANTICOAGULANTES APOPTOSIS

Cines et al., Blood, 1998 Ray & Shah, Clinical Science, 2005

Ruta L-arginina-NO

Khazaei et al., Pathophysiology 2008

El principal regulador del tono vascular en la placenta es el xido ntrico

Myatt, 1992

Expresin y actividad de isoformas de NOS en la placenta

Krause et al., 2011

2.0%
Set

PROOX

T 37.0 %CO2 05.0 %H 85

RCIU

Normal

5% CO2 95% N2

Sensor O2 Conexin sensor O2 a Proox Suministro de mezcla 5% CO2/balance N2 Eliminacin de gases de desecho desde cmara Manmetros de presin (PSI)

Efecto de hipoxia sobre la captacin de L-arginina en HUVEC

3.0

Transporte de L-arginina pmol/g protena/min)

2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0

Normoxia Hipoxia

Normal

RCIU

Casanello et al., 2009

Efecto de hipoxia sobre la actividad de NOS en HUVEC

Normal

RCIU

Formacin de L-[ 3H]citrulina pmol/ g protena/30 min)

1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0

Oxgeno (%)

Casanello et al., 2009

HUVEC-Control

cDNA Microarray

Atlas cDNA Expression Array, Clontech

HUVEC-RCIU

Genes posicionamiento

Genes housekeeping

Control > RCIU RCIU > Control

N.S. Background

Algunos genes inducidos por hipoxia en HUVEC de RCIU

PKC es activada por hipoxia en HUVEC normales

Normal Normal
P~PKC 1.8 1.8

RCIU RCIU

Normal Normal

RCIU RCIU

1.2 1.2 1.0 1.0

Protena eNOS / -actina / -actina eNOS Protena arbitrarias) (unidades (unidades arbitrarias)

PKC 1.4 1.4

1.2 1.2 1.0 1.0

-Actina

0.8 0.8

0.8 0.8 Oxgeno (%) Calfostina C 0.6 0.6 0.4 0.4 0.2 0.2 0.0 0.0

0.6 0.6

5 +

2 +

5 +

2 +

0.4 0.4

0.2 0.2

Normal

RCIU

Normal

RCIU

0.0 0.0

2.0

Protena PKC / -actina (unidades arbitrarias)

1.5

* *

1.5

1.0

1.0

0.5

*
5 2 5 2 5 + 2 +

*
5 +

*
2 +

0.5

0.0

0.0

Oxgeno (%) Calfostina C

P~PKC / PKC (unidades arbitrarias)

2.0

P~eNOS / eNOS / eNOS P~eNOS arbitrarias) (unidades (unidades arbitrarias)

1.6 1.6

Casanello et al., 2009

Hypoxia IUGR
L-Arginine

IUGR

hCAT1

p~eNOS L-Arginine
p~PKC NO p~p42/44mapk Ca2+

L-Citrulline + NO hCAT-1 ? eNOS

hCAT-1 mRNA eNOS mRNA

Funcin vascular: Participacin de Arginasa-2 en la regulacin del tono vascular placentario

www.annegeddes.com

Vas metablicas de la L-arginina

Yang & Ming, 2006

Vas que compiten por el metabolismo de L-arginina en el endotelio

ORNT1

Huynh & Chin-Dusting, 2006

Expresin de Arginasa 1 y 2 en la placenta humana

Ishikawa et al Placenta 2007

Expresin de Arginasa-2 en placentas de pacientes con PE

Noris et al. Hypertension 2004

Evidencia de la regulacin inversa entre NO/Arginasas en PE

Bernardi et al., 2008

Participacin de las arginasas en la vasodilatacin dependiente de NO en vasos umbilicales de embarazos normales

Krause et al., unpublished

Papel de Arginasa en la reactividad vascular de la vena y arteria umbilical de embarazos normales y con RCIU

Maximal insulin-induced relaxation (% K+max)

Vena Umbilical

80

60

Normal IUGR

40

*#
20

*
0 Control BEC

Maximal insulin-induced relaxation (% K+max)

Arteria Umbilical

50 40 30 20 10 0 Control

Normal IUGR

*
BEC

Krause et al., unpublished

Papel de Arginasa en la reactividad vascular de arterias corinicas de embarazos con RCIU

M ax relaxation to CGRP

150

*
100 50 0 -50 #

Control BEC L-NA BEC/LNA

*
Normal

*
RCIU

p < 0.05 ANOVA, * vs control, # vs Normal control

Krause et al., unpublished

Epigentica: Mecanismo de programacin fetal

Cambios en el patrn de metilacin en islas CpG del promotor de eNOS

20

#
% Methylation
15 10 5 0 -361 -352

N-HUVEC IUGR-HUVEC

CpG eNOS promoter

40

% Methylation

30 20 10 0 -361 -352

N-PLAEC IUGR-PLAEC

CpG eNOS promoter

* p < 0.05 T-test; # p = 0.11

Cambios en patrones de expresin de protenas en endotelio umbilical de embarazos normales y RCIU

Caniuguir et al., unpublished

Caniuguir et al., unpublished

Divisin de Obstetricia y Ginecologa, Facultad de Medicina, PUC Jorge Carvajal Fernando Abarza Juan Pedro Kusanovic Laboratorio de Investigacin en Perinatologa Bernardo Krause Ernesto Muoz Andrs Caniuguir Ivo Carrasco Amanda Silva Colaboradores Nacionales Rodrigo Iturriaga Andrea Miyasaka Colaboradores Internacionales Mark Hanson (Southampton University, UK) Leslie Myatt (UTHSA, USA) Gregory Rice (U Queensland, Australia)

Cristin Belmar

Laboratorio de Fisiologa Celular y Molecular Luis Sobrevia Enrique Guzmn Andrea Leiva Carlos Salomn Fabin Pardo Pablo Arroyo Francisco Westermeier Romy Orellana Ninoska Muoz

Francisco Mardones

Ricardo Uauy

Financiamiento FONDECYT 1080543, 1110977 Anillo ACT 73 (PIA-CONICYT) VRI-PUC CONICYT- Becas Chile