You are on page 1of 110

CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA DE LOS EXTRACTOS DE LA SEMILLA

DEL ÁRBOL DE NEEM (Azadirachta Indica) EN EL DEPARTAMENTO DEL


CESAR

RHONAL JOSÉ OÑATE LÓPEZ


LUIS ALBERTO QUINTERO LÓPEZ

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR


FACULTAD DE INGENIERÍAS Y TECNOLÓGICAS
PROGRAMA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
VALLEDUPAR / CESAR
2008

1
CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA DE LOS EXTRACTOS DE LA SEMILLA
DEL ÁRBOL DE NEEM (Azadirachta Indica) EN EL DEPARTAMENTO DEL
CESAR

RHONAL JOSÉ OÑATE LÓPEZ


LUIS ALBERTO QUINTERO LÓPEZ

Trabajo de grado presentado como requisito para optar el titulo de Ingeniero


Agroindustrial

TILCIA STELLA DURAN IBARRA


Directora

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR


FACULTAD DE INGENIERÍAS Y TECNOLÓGICAS
PROGRAMA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
VALLEDUPAR / CESAR
2008

2
A Dios por su inmensa misericordia y amor,
A mi Papá y Mamá por su paciencia y por haberme
brindarme su apoyo incondicional,
A mis hermanos por su ayuda y fortaleza,
A todos mis Familiares, Amigos y demás personas que
siempre estuvieron dispuestas a colaborarme
en esta labor y en especial a
la directora del proyecto.

RHONAL JOSÉ OÑATE LÓPEZ

A Dios por su eterno amor, compañía y ayuda.


A mi Padre y Madre por brindarme todo su amor
e inmensa dedicación contribuyendo día a día,
sin egoísmo a que mis sueños se transformen en logros.
A mis hermanos Omar Enrique y Omar Alberto
por su compañía y apoyo incondicional.
A mis Familiares, Amigos y demás personas que
desinteresadamente han contribuido en mi
formación personal y profesional.

LUIS ALBERTO QUINTERO LÓPEZ

3
TABLA DE CONTENIDO

Pág.

LISTA DE CUADROS 7
LISTA DE FIGURAS 9
LISTA DE ANEXOS 10
RESUMEN 11
ABSTRACT 12
INTRODUCCIÓN 13
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 15
1.1. Descripción Del Problema 15
1.2. Formulación Del Problema 16
2. JUSTIFICACIÓN 17
3. OBJETIVOS 19
3.1. Objetivo General 19
4.2. Objetivos Específicos 19
4. MARCO TEÓRICO 20
4.1. Antecedentes Históricos 20
4.2. Marco Legal 23
4.3. Marco Conceptual 25
4.3.1. Árbol Del Neem 25
4.3.1.1. Principales Características Del Árbol Del Neem 26
4.3.1.1.1. Descripción Botánica 26
4.3.1.1.2. Descripción Taxonómica 26
4.3.1.1.3. Organografía 27
4.3.1.1.4. Ecología 27
4.3.1.1.5. Condiciones Para La Propagación Y Desarrollo 28
4.3.1.2. Componentes Químicos 29
4.3.1.2.1. Terpenoides 31

4
4.3.1.2.1.1. Clasificación 32
4.3.1.2.1.2. Terpenoides Con Poder Biocida Presentes En El Árbol Del Neem 35
4.3.1.2.1.2.1. Azadiractina 36
4.3.1.2.1.2.2. Meliantrol 39
4.3.1.2.1.2.3. Salannina 40
4.3.1.2.1.2.4. Nimbina Y Nimbidina 41
4.3.1.3. Procedimientos Para La Elaboración Del Insecticida Natural 41
4.3.1.3.1. Tecnología De Producción Artesanal 41
4.3.1.3.1.1. Empleo De La Semilla Entera 42
4.3.1.3.1.2. Empleo De La Hoja 43
4.3.1.3.2. Tecnología De Producción Industrial 43
4.3.1.3.2.1. Empleo Del Aceite 44
4.3.1.3.2.1.1. Métodos De Extracción Del Aceite 44
4.3.1.3.2.1.1.1. Extracción Mecánica 44
4.3.1.3.2.1.1.2. Extracción Con Solvente 46
4.3.1.3.2.2. Empleo De La Torta 48
4.3.1.4. Mecanismo De Acción Del Insecticida 49
4.3.1.5. Insectos Que Controla 51
5. METODOLOGÍA 53
5.1. Introducción Metodología 53
5.1.1. Enfoque De Investigación 53
5.1.2. Población 53
5.1.3. Selección De Variables 53
5.1.4. Diseño Experimental 56
5.1.5. Técnicas Utilizadas 58
5.2. Procedimiento Experimental 60
5.2.1. Selección De La Muestra 60
5.2.2. Acondicionamiento Del Fruto 61
5.2.3. Determinación de Características Fisicoquímicas de la Semilla Molida 61
5.2.4. Extracción De Aceite 62

5
5.2.5. Determinación de Características Fisicoquímicas del Aceite 64
5.2.6. Determinación de Características Fisicoquímicas de la Torta 64
5.2.7. Extracción del Extracto Presente en la Torta 65
5.2.8. Análisis Fisicoquímico de El Extracto de la Torta 66
6. Resultados Y Análisis 67
6.1. Caracterización Proximal De La Semilla Molida Del Árbol Del Neem 67
6.2. Extracción Y Características Fisicoquímicas Del Aceite de la Semilla Molida
Del Árbol Del Neem 69
6.3. Características Fisicoquímicas De La Semilla Desengrasada O Torta Del
Árbol Del Neem 71
6.4. Extracción Del Extracto Presente En La Torta 72
6.4.1. Análisis De Varianza Para El Diseño Unifactorial 74
6.4.2. Método De Análisis De Media 78
6.5. Análisis Fisicoquímico Del Extracto Presente En La Torta 81
6.6. Características Fisicoquímicas Del Sólido Agotado 84
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 86
BIBLIOGRAFÍA 90
ANEXOS 94

6
LISTA DE CUADROS

Pág.

Cuadro Nº 1. Tolerancia Del Neem A Factores Climáticos Y Suelo 29


Cuadro Nº 2. Cantidad De Azadiractina Obtenido Usando Distintos
Solventes 49
Cuadro Nº 3. Factores Que Se Mantienen Constantes Durante El
Proceso 56
Cuadro Nº 4. Factores Y Niveles Definitivos Utilizados En El Diseño 57
Cuadro Nº 5. Técnicas Utilizadas 58
Cuadro Nº 6. Características Dimensionales De La Semilla De Neem 67
Cuadro Nº 7. Caracterización Fisicoquímica De La Semilla Molida Del
Árbol Del Neem 68
Cuadro Nº 8. Características Fisicoquímicas Del Aceite De La Semilla
Del Árbol Del Neem 70
Cuadro Nº 9. Características Fisicoquímicas De La Semilla
Desengrasada O Torta Del Árbol El Neem 71
Cuadro Nº 10. Tratamientos A La Semilla Molida Desengrasada Del
Árbol Del Neem 72
Cuadro Nº 11. Datos Finales Del Experimento Del Porcentaje De
Extracto Presente En La Semilla Desengrasada Del Árbol Del Neem 74
Cuadro Nº 12. Análisis De Varianza Para El Porcentaje De Extracto
Presente En La Torta 75
Cuadro Nº 13. Método De La Mínima Diferencia Significativa (LSD) 76
Cuadro Nº 14. Medias Con El 95% De Confianza Entre Intervalos
LSD 79
Cuadro Nº 15. Cantidad Relativa (%) De Los Componentes Presentes
En El Extracto Etanólico De La Semilla Del Árbol Del Neem 81

7
Cuadro Nº 16. Análisis Fisicoquímicas Del Extracto Presente En La
Torta 84
Cuadro Nº 17. Características Fisicoquímicas Del Sólido Agotado 85

8
LISTA DE FIGURAS

Pág.

Figura Nº 1. Árbol Del Neem (Azadirachta Indica) 25


Figura Nº 2. Estructura Molecular Del Isopreno, La Unidad Química
De Los Terpenoides 31
Figura Nº 3. Estructura Molecular De La Azadiractina 36
Figura Nº 4. Estructura Molecular Del Meliantrol 39
Figura Nº 5. Estructura Molecular De La Salannina 40
Figura Nº 6. Estructura Molecular De Nimbina (A) Y Nimbidina (B) 41
Figura Nº 7. Elaboración Artesanal De Insecticida Natural Neem 42
Figura Nº 8. Modelo General Del Proceso De Extracción Del Extracto 54
Figura Nº 9. Mapa Del Departamento Del Cesar Con Los Sitios De
Recolección De La Muestra 60
Figura Nº 10. Montaje De Extracción De Grasa En Equipo Soxhlet 63
Figura Nº 11. Aceite Extraído De La Semilla Molida Del Árbol Del
Neem 64
Figura Nº 12. Extracción De Los Compuestos Presentes En La Torta 65
Figura Nº 13. Graficas De Las Medias Al 95% Con LDS 78
Figura Nº 14. Análisis de las medias. 80
Figura Nº 15. Cromatograma Para Extracto De Semilla Del Árbol Del
Neem Empleando El Método 2. 83

9
LISTA DE ANEXOS

Pág.

ANEXO A. Fotografías De Todo El Proceso De Caracterización De


Los Extractos De La Semilla Del Árbol Del Neem En El Departamento
Del Cesar 95
ANEXO B. Determinación De La Composición Química De Un
Extracto Etanólico, Por Cromatografía De Gases Con Detector
Selectivo De Masas (GC-MC) 100
ANEXO C. Determinación Azadiractina Del Extracto Etanólico, Por
Cromatografía Líquida De Alta Resolución HPCL 106
ANEXO D. Nombre Químico (IUPAC), Estructura, Uso Y Toxicidad
Para El Organismo Y El Medio Ambiente 110

10
RESUMEN

El árbol del Neem es conocido con el nombre botánico de Azadirachta Indica, es


un árbol nativo de la india y se encuentra diseminado en varios municipios del
departamento del Cesar. Dada la necesidad que existe de utilizar la naturaleza
como un equilibrador de la contaminación ambiental y además disminuir la
utilización de insecticidas químicos, se hace imperativo, a través de la
investigación generar bioinsecticidas que ayuden al sector agrícola en el manejo
integrado de plagas, como una opción sana. El objetivo de este trabajo fue
caracterizar fisicoquímicamente los extractos presentes en la semilla del árbol del
Neem; los cuales contienen una serie de componentes bases de insecticidas
biodegradables. Se determinaron varios parámetros fisicoquímicos de cada uno
de los extractos obtenidos en esta semilla. Se tomo como base de análisis la
semilla molida sin tratar, el aceite obtenido por solvente y la torta desengrasada
para obtener un extracto de base etanólica que presenta condiciones aptas como
insecticida natural. Tanto al aceite como al extracto etanólico, se le realizaron
pruebas fisicoquímicas volumétricas, gravimétricas y cromatrográficas, donde se
comprobó que tienen los mismos componentes activos de otras partes del mundo.
Los componentes activos (terpenoides) que contiene esta semilla son la base de
producción de insecticidas naturales utilizados por diferentes partes de
Latinoamérica. Estos análisis fisicoquímicos fueron comparados con análisis de
otros países para mirar la relación que tiene el usar estos extractos de modo que
se puedan realizar insecticidas que no afecten el medio ambiente y sean muy
eficaces para combatir insectos.

Palabras claves: Azadirachta Indica, extracción química, terpenoides,


bioinsecticidas, Neem.

11
ABSTRACT

The tree of the Neem is known by Azadirachta Indica's botanical name, is a native
tree of the indies and is spread in several municipalities of the department of the
Cesar. Given the need that exists to use the nature as an equilibrador of the
environmental pollution and in addition chemists diminish the utilization of
insecticides, becomes imperative, across the investigation (research) to generate
bioinsecticidas that help to the agricultural sector in the integrated managing of
plagues, as a healthy option. The aim of this work was to characterize Physicist-
Chemically the present extracts in the seed of the tree of the Neem; which contain
a series of components bases of biodegradable insecticides. Several
physicochemical parameters decided of each one of the extracts obtained in this
seed. I take the seed as a base of analysis ground without treating, the oil obtained
by solvent and the cake desengrasada to obtain a base extract ethanol that
presents suitable conditions as natural insecticide. Both to the oil and to the extract
ethanol, him(her) there were realized physicochemical volumetric tests(proofs),
gravimétricas and cromatrográficas, where there was verified that they have the
same active components of other parts of the world. The active components
(terpenoides) that this seed contains are the base of production of natural
insecticides used on different parts (reports) of Latin America. These
physicochemical analyses were compared with analysis of other countries to look
at the relation that has use these extracts so that there could be realized
insecticides that do not affect the environment and are very effective to attack
insects.

Key words: Azadirachta Indica, chemical extraction, terpenoides, bioinsecticidas.


Neem.

12
INTRODUCCIÓN

El árbol del Neem es conocido con el nombre botánico de Azadirachta Indica, es


un árbol nativo de la India. Entre los muchos usos y beneficios que se pueden
obtener del árbol del Neem, uno de los más importantes es su utilización en el
control de plagas de los cultivos. Las propiedades insecticidas del árbol del Neem
se han estudiado desde los años 20, pero estos trabajos fueron poco apreciados
en su momento. Aunque son muchas las plantas que pueden ser usadas para el
control de insectos, las investigaciones impulsadas por el departamento de
agricultura de Estados Unidos mostraron que el Neem es el que posee mayor
potencialidad como insecticida1.

Durante años el control de insectos se ha basado en el uso de productos químicos


de acción sistémica. Pero el uso de plaguicidas químicos sintéticos está
produciendo efectos adversos sobre los organismos benéficos y el desarrollo de
resistencias, por lo que es usual incrementar las dosis de aplicación, con riesgo
para la salud pública y al ambiente (Cisneros et al. 1995; Pascual 1996; Picanço et
al, 1999).

Además, la seguridad alimentaría y los daños ambientales causados por estos


insecticidas sintéticos, son preocupaciones que los países tienen y que por ello se
han planteado una serie de exigencias que se han protocolizado como Buenas
Prácticas Agrícolas. Estas exigencias han potenciado el desarrollo de nuevos
métodos de control que favorezcan la reducción de residuos que puedan provocar
trastornos en el hombre y el medio ambiente2.

1
NATIONAL RESEARCH COUNCIL. Neem: A Tree For Solving Global Problems. National
Academy Press. Washington DC. USA. 1992.
2
BRIMNER, T. AND G. BOLAND. A review of the non-target effects of fungi used to biologically
control plant diseases. Agriculture, ecosystems and Environment. 2003.

13
Gran parte de la literatura relacionada con la extracción de los extractos de Neem
consiste de patentes que se enfocan mayormente en la descripción de diversos
procedimientos de extracción y en la comparación de la efectividad de diferentes
solventes3. Sin embargo, en el departamento del Cesar no hay una información
concreta de las semillas del árbol Neem ni de los extractos que estas contenían.
Ante estas circunstancias se ha respondido con procesos de investigación
orientados a la búsqueda de nuevas fuentes potenciales de desarrollo para la
producción de nuevos métodos con el fin de obtener y producir insecticidas
naturales más competitivos.

Por estas razones, se buscaron alternativas viables y seguras con respecto a los
insecticidas convencionales, para así contribuir a aumentar el interés por la
producción y empleo de extractos naturales, en especial los obtenidos del árbol
del Neem.

Como aporte a estas alternativas limpias de producción, esta investigación


pretende contribuir a esclarecer las propiedades y características fisicoquímicas
de los extractos que se extraen de la semilla del árbol del Neem en el
departamento del Cesar.

3
NAGASAMPAGI et al., 1999; LARSON, 1985; SANKARAM et al., 1999; MOORTY y KUMAR,
1998; ROLAND y BLOUIN, 1996.

14
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1. Descripción Del Problema

La azadirachtina es un tetraterpenoide característico de la familia Meliaceae pero


especialmente del árbol del Neem (Azadirachta índica), originario de la india. Este
compuesto se encuentra en la corteza, hojas y frutos de este árbol pero la mayor
concentración se ubica en la semilla4. Este compuesto y otros más (salannina,
meliantriol, etc.) presentes en el árbol del Neem, muestran una acción insecticida-
impiden el crecimiento de los insectos-, afectando a un número de especies que
incluyen algunas de las plagas más mortíferas para la agricultura y la salud
humana, y además tienen un efecto fertilizante foliar.

Este árbol se usa desde tiempos prehistóricos y era utilizado sobre todo en la
parte medicinal. Se dice que es un “árbol noble” porque puede servir de: abono,
medicina, insecticida, crece con facilidad, necesita poca atención, purifica el aire,
proporciona madera y también da sombra, una de las características notables es,
que está virtualmente libre de insectos y nematodos5.

En el departamento del Cesar el árbol del Neem ha sido introducido por medio de
personas particulares que lo han sembrado de forma ornamental sin saber la
cantidad de propiedades que éste posee y los grandes usos que se le pueden dar
potencialmente en la industrialización de productos.

En este sentido, es importante explotar la oportunidad que se tiene de aprovechar


el árbol del Neem, en especial su semilla, para generar nuevos productos de uso
agrícola, pecuario y humano, lo cual aporta al mejoramiento de la calidad de vida,
4
SILVA, G., A. LAGUNES, J. C. RODRÍGUEZ Y D. RODRÍGUEZ. Insecticidas vegetales; Una
vieja-nueva alternativa en el control de plagas. Revista Manejo Integrado de Plagas (CATIE). 2002.
5
FITZPATRICK, T. The Giving Tree. Washington University. 1992.

15
al incremento del empleo, al retorno al campo y al desarrollo en general de la
región.

Estas razones son mas que suficientes para especular sobre la importancia del
tema, especialmente la posibilidad de contar con el árbol del Neem en el
departamento el Cesar y mirando que las características ambientales y de suelos
son parecidas a las de otros países, se toma la decisión de analizar si los
extractos de la semilla del árbol del Neem sembrado en el departamento del Cesar
contienen los compuestos de acción insecticida.

1.2. Formulación Del Problema

Tendido en cuenta lo anterior, este proyecto plantea la siguiente pregunta de


investigación:

¿Tienen los extractos de la semilla del árbol del Neem sembradas en el


Departamento del Cesar la composición fisicoquímica necesaria para el desarrollo
de potenciales productos agroindustriales?

16
1. JUSTIFICACIÓN

Una tercera parte de la producción de alimentos a nivel mundial se ve destruida


por pestes de los cultivos y de los productos almacenados, lo cual ha hecho
imprescindible el uso de nuevas vías para el control de plagas 6. Los productos
más usados son pesticidas de origen sintético que tienen un gran impacto en el
medio ambiente y que pueden causar trastornos en el hombre, ya que sus
diferentes compuestos tóxicos quedan impregnados en las plantas, el suelo y son
difíciles de degradar.

La industria, buscando satisfacer estas nuevas necesidades ha cambiado su


enfoque de producción, intensificando la investigación y desarrollo de nuevas
formulaciones y la reinvención de las existentes, cuyo común denominador esta
íntimamente asociada con la sustitución de ingredientes, buscando con ello
entregarle al consumidor un producto más natural, libre de posibles efectos
adversos. En el caso de los insecticidas estas circunstancias les ha devuelto un
mercado potencial a los de origen natural, convirtiéndose estos en una alternativa
a los insecticidas sintéticos, ya que además de combatir las plagas indeseables,
reducen el riesgo de la resistencia en los insectos, tiene menos consecuencias
letales para los enemigos naturales, reducen la aparición de plagas secundarias,
no ocasionan daños en el medio ambiente y no son nocivos para el hombre.

Una planta que se presenta como promisoria para la producción del insecticidas
es el árbol del Neem (Azadirachta indica), el cual según el Consejo de
Investigación Nacional de los Estados Unidos (NRC) en un informe titulado “El
Neem aporta soluciones a problemas globales”, considera este árbol como “la más

6
AHMED, S., C. MITCHELL, AND R. SAXENA. Renewable resource utilization for agriculture and
rural development and environmental protection: Use of indigenous plant material for pest control
by limited resource farmers. Planning Wkshp, Botanical pest control proyect. Int. Rice Res. Inst. Los
Baños, Philippines. 1984.

17
prometedora de todas las especies vegetales por el hecho de que puede
beneficiar eventualmente a todos los habitantes de éste planeta”7.

Trabajos relacionados con el árbol del Neem son conocidos en todo el mundo.
Luego de ciertas observaciones en África en 1959 sobre el Neem, y de otras
investigaciones publicadas en la India, a partir de la década de los 90´s, varios
cientos de investigadores comenzaron a estudiar este árbol8.

En Colombia, los estudios realizados con el árbol de Neem son muy recientes; En
el departamento del Cesar la siembra del árbol de Neem se ha venido
adelantando por su uso ornamental en perímetros urbanos, y como control
biológico de moscas y garrapatas en las zonas rurales.

En este estudio se efectuó la caracterización de los extractos presentes en las


semillas del árbol del Neem apuntando esta investigación al desarrollo de nuevos
campos de acción productiva, a través de la generación de valor agregado y el
aprovechamiento de un recurso que hasta ahora ha sido subutilizado y que podría
ser un producto primario en una industrial aun incipiente pero prometedora, lo que
en últimas es el énfasis primordial de la agroindustria.

7
CABAL, Esteban. Revista Natural: Neem, el árbol del siglo XXI. Madrid - España 2000.
8
PEREZ, R. Asesora grupo estatal alimentos, MINAZ, 01/2002. Carta agropecuaria azucarera.
Tema: El árbol del Neem. http: //www.virtualcentre.org/es/enl/keynote5/htm, en GRUPO DE
INVESTIGACIÓN YAGUA. Validación Integral del Sistema Agroforestal con árbol del Neem en la
Vereda Guabinal Cerro, Girardot- Cundinamarca. Universidad Piloto de Colombia y Universidad
Distrital Francisco José de Caldas. Bogotá, D. C., 2005.

18
3. OBJETIVOS

3.1. Objetivo General

Caracterizar fisicoquímicamente los extractos de la semilla del árbol de Neem en


el departamento del Cesar.

3.2. Objetivos Específicos

 Determinar las características fisicoquímicas de la semilla molida del árbol


del Neem.

 Establecer las propiedades fisicoquímicas presentes en el aceite y la torta o


semilla desengrasada del árbol del Neem.

 Extraer los compuestos presentes en la torta de la semilla del árbol del


Neem.

 Estudiar los potenciales usos que puedan tener los extractos de la semilla
del árbol del Neem.

19
4. MARCO TEÓRICO

4.1. Antecedentes Históricos

Las plantas han evolucionado por más de 400 millones de años y para
contrarrestar el ataque de los insectos han desarrollado mecanismos de
protección, como la repelencia y la acción insecticida. El método de control de
plagas más antiguo fueron los sacrificios humanos, pero dada su baja efectividad,
o tal vez la falta de voluntarios, se comenzaron a utilizar polvos y extractos
vegetales, de lo cual hay antecedentes incluso en la Biblia9.

El uso de extractos y plantas pulverizadas como insecticida datan de la época del


imperio romano. Existen antecedentes de que en el año 400 a.c., en tiempos del
rey Jerjes de Persia (hoy Irán), para el control de piojos se espolvoreaba la cabeza
de los niños con un polvo obtenido de flores secas de una planta conocida como
piretro (Tanacetum cinerariaefolium; Compositae). El primer insecticida natural,
propiamente como tal, apareció aproximadamente en el sigo XVII cuando se
demostró que la nicotina, obtenida de hojas de tabaco, mataba a unos
escarabajos que atacaban al ciruelo. Hacia 1850 se introdujo un nuevo insecticida
vegetal conocido como rotenona que se obtuvo de las raíces de una planta
llamada vulgarmente timbó. Hasta ese momento esta planta sólo se utilizaba para
pescar, pues los indígenas se habían dado cuenta que si lanzaban trozos de esta
raíz al agua a los pocos minutos comenzaban a flotar peces que eran muy fáciles
de atrapar. Con posterioridad se usaron plantas con propiedades irritantes como la
sabadilla, que se utilizaba para descongestionar las fosas nasales, y el incienzo
que no mataban directamente a los insectos sino que se decía que los
“espantaban”. Otras plantas, pero en la actualidad, son quasia (Quaisa amara;
Simaroubaceae) y el Neem o Margosa (A. indica) las cuales aparte de mostrar

9
ADDOR, R.W. Insecticides. In: Godfrey C.R.A. (Ed) Agrochemicals from natural products. Marcel
Dekker. 1995.

20
excelentes resultados como controladoras de insectos también han resultado ser
fuente de compuestos para combatir enfermedades como el cáncer10.

El uso masivo de estos insecticidas ha tenido un camino muy difícil pues en una
primera época las recopilaciones que hacían los investigadores, entre los
agricultores e indígenas, tenían mucho de superstición y cuando se les sometió a
pruebas con rigor científico no mostraron efecto alguno. Después de la segunda
guerra mundial las pocas plantas que mostraron resultados auspiciosos, y
alcanzaron a usarse masivamente, fueron reemplazadas por los insecticidas
sintéticos. Con la aparición en la década de los cuarenta de estos insecticidas
sintéticos se pensó que los insecticidas vegetales desaparecerían para siempre
pero problemas como la contaminación del ambiente, los residuos en los
alimentos y la resistencia por parte de los insectos han hecho que hoy en día
vuelvan a ser tomados en cuenta11.

El Neem, margoza o cinamomo, ha demostrado tener propiedades insecticidas y


farmacológicas, y ser de beneficio para la agricultura y el desarrollo rural12. Por
otra parte, puede ser utilizado de manera efectiva, en comunidades de bajo nivel
tecnológico, para reducir la dependencia de los plaguicidas sintéticos y para
generar ingresos. Este árbol, es de fácil propagación, es perenne, ocupa poco
espacio, y requiere de poco trabajo, agua, y fertilizantes; no se destruye al utilizar
material diverso de su planta; no es maleza ni hospedero de plagas, en cambio, es
ornamental y maderable; el material insecticida se extrae con relativa facilidad; los

10
ARNASON, J.T., B.J. PHILOGENE AND P. MORAND (EDS). Insecticides of plant origin.
American Chemical Society, Washington, DC. USA. 1989.
11
HEAL, R., E. ROGERS., R.T. Wallace AND O. Starnes. A survey of plants for insecticidal activity.
Lloydia. 1950.
12
SAXENA, R.C., Z.R. KHAN, Y N.B. BAJET. Reduction of tungro virus transmission by Nephotettix
virescens (homóptera: Cicadellidae) in Neem cake-treated rice seedlings. J. Econ. Entomol. 1987.

21
extractos son fáciles de procesar y formular; y proporciona seguridad a los
humanos y animales al usarlo y consumirlo en las diferentes formas y propósitos13.

Durante siglos, el mundo occidental ignoró el árbol de Neem y sus propiedades:


las prácticas de los campesinos y médicos indios no eran consideradas dignas de
atención por la mayoría de colonialistas británicos, franceses y portugueses. Pese
a ello, durante los últimos años, la creciente oposición a los productos químicos en
Occidente y, en particular, a los plaguicidas, ha hecho crecer un gran entusiasmo
por las propiedades farmacéuticas del Neem.

En el nuevo mundo fue introducido recientemente en Estados Unidos de


Norteamérica, y en varios países sudamericanos como Argentina, Brasil, y Chile;
en países centroamericanos como Nicaragua, México y Honduras; en países del
Caribe como Haití, antigua Surinam, Islas Vírgenes, Cuba y Puerto Rico, y
recientemente en Colombia14.

En Colombia, donde la palabra insecticida es sinónimo de toxicidad y


contaminación, causa mucha curiosidad el Neem, que se presenta como productor
de un insecticida vegetal que controla insectos, nemátodos, babosas, virus y
hongos en plantas y además se utiliza para alimentar el ganado, como
medicamento para combatir las lombrices intestinales en humanos y aun para
preparación de licores15. Datos empíricos señalan que el árbol de Neem ingreso al
país hace más de 30 años, con la siembra de cultivos ilícitos en los departamentos
de Santander y Antioquia: en la Zona del Magdalena Medio, Puerto Triunfo y

13
AHMED, S., C. MITCHELL, AND R. SAXENA. Renewable resource utilization for agriculture and
rural development and environmental protection: Use of indigenous plant material for pest control
by limited resource farmers. Planning Wkshp, Botanical pest control proyect. Int. Rice Res. Inst. Los
Baños, Philippines. 1984.
14
LEOS, M.J. Y R.P. SALAZAR S. El árbol insecticida neem (Azadirachta indica A. Juss) en
México. Universidad Autónoma de Nuevo León. Facultad de Agronomía. Folleto Técnico No. 3.
Marín, Nuevo León, México. 1992.
15
FIGUEROA, P. Adalberto. Ciencia al día: Universidad Nacional de Colombia. El Árbol Milagroso,
Sirve Para Todo. Palmira, Colombia. 2007.

22
Doradal específicamente y algunos otros cultivos aislados en la zona norte del
departamento del Valle del Cauca16.

En Colombia no se han desarrollado muchos trabajos con el árbol del Neem, pero
podemos nombrar cuatro en especial: el primero por parte de estudiantes de
Zootecnia de la universidad de Fusagasuga (2004), en el manejo de Neem para el
control de garrapata Labophilus sp., en el ganado de la zona; el segundo realizado
por estudiantes de Ingeniería Química de la Universidad Nacional de Colombia
(2004), para la determinación y aislamiento de más de 20 moléculas efectivas en
el control de insectos; el tercero por estudiantes de administración y gestión
ambiental de la Universidad Piloto de Colombia (2007), modelo empresarial
ecoeficiente para la transformación y comercialización de los productos derivados
del sistema agroforestal con árbol del Neem, en la vereda guabinal-cerro, Girardot-
Cundinamarca y un cuarto por el Grupo de Entomología Médica de la Universidad
de Antioquia (2002), en la evaluación de la actividad insecticida del Neem sobre la
cucaracha Periplaneta Americana.

4.2. Marco Legal

El artículo 8° de la Constitución Nacional consagra: “Es obligación del Estado y de


las personas, proteger las riquezas culturales y naturales de la Nación”.

El artículo 79 de la Constitución Nacional, establece el derecho de todas las


personas a gozar de un ambiente sano, y a la participación de la comunidad en las
decisiones que puedan afectarla. Igualmente establece para el Estado entre otros
deberes, el de proteger la diversidad e integridad del ambiente.

16
GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA. Validación Integral del Sistema Agroforestal con árbol del
Neem en la Vereda Guabinal Cerro, Girardot- Cundinamarca. Yagua. Universidad Piloto de
Colombia y Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Bogotá, D. C., 2005.

23
El artículo 80 de la Carta Política, preceptúa que le corresponde al Estado
planificar el manejo y aprovechamiento de los recursos naturales, para garantizar
su desarrollo sostenible, su conservación, restauración o sustitución, y además,
debe prevenir y controlar los factores de deterioro ambiental, imponer las
sanciones legales, y exigir la reparación de los daños causados.

El Ordenamiento Constitucional señala en su artículo 95, que toda persona está


obligada a cumplir con la Constitución y las leyes y dentro de los deberes de la
persona y el ciudadano, establece en su numeral 8º el de: “Proteger los recursos
culturales y naturales del país y velar por la conservación de un ambiente sano”.

La parte IV del Decreto – Ley 2811 de 1974 se refiere a: “De las normas de
preservación ambiental relativas a elementos ajenos a los recursos naturales” y en
el Título I: “Productos Químicos, Sustancias Tóxicas y Radioactivas”, establece:
“Artículo 32”. Para prevenir deterioro ambiental o daño en la salud del hombre y
de los demás seres vivientes se establecerán los requisitos y condiciones para la
importación, la fabricación, el transporte, el almacenamiento, la comercialización,
el manejo, el empleo o la disposición de sustancias y productos tóxicos o
peligrosos.

“En particular, en la ejecución de cualquier actividad en que se utilicen agentes


físicos tales como sustancias radioactivas o cuando se opere con equipos
productores de radiaciones, se deberán cumplir los requisitos y condiciones
establecidos para garantizar la adecuada protección del ambiente, de la salud del
hombre y demás seres vivos”.

24
4.3. Marco Conceptual

4.3.1. Árbol Del Neem

Figura Nº 1. Árbol Del Neem (Azadirachta Indica)

El árbol del Neem (Azadirachta indica), es una especie vegetal de una importancia
potencial relevante, en virtud de sus características muy distintas, las cuales se
reconocen en el mundo científico de occidente, y reconocido su uso milenario en
las culturas del viejo mundo. Esta especie arbórea, ha despertado la atención del
mundo científico biológico, por sus múltiples propiedades y usos; también se le
conoce con los nombres comunes de “cinamomo”, “acederaque”, y “margoza”, o
“la planta milagrosa”, o “la botica del pueblo” como lo llaman en la India, donde
desde hace siglos los indios recurren a este árbol para aliviar el dolor, la fiebre y
las infecciones. Por ese motivo, en los últimos años ha ido en aumento el interés
de la ciencia por esta especie, ya que dos decenios de investigación revelan
resultados prometedores en tantos campos, que esta especie pudiera aportar
enormes beneficios a la humanidad17.

17
OSUNA, L.E. Producción de plantas y establecimiento y manejo de plantaciones de neem
(Azadirachta indica A. Juss). Instituto Nacional de Investigaciones Forestales Agrícolas y
Pecuarias-INIFAP. Centro de Investigación Regional del Noroeste-CIRNO. Campo Experimental
Todos Santos-CETS. Folleto Técnico Núm. 5. México. 2000.

25
4.3.1.1. Principales Características Del Árbol Del Neem

4.3.1.1.1. Descripción Botánica

El Neem es un árbol de tamaño pequeño a mediano, con un tronco recto. Los


tallos de las ramas de 2 a 5 metros forman una corona unida, densa, redonda y en
forma ovalada. La altura total es de 15 a 25 metros, alcanzando ocasionalmente
hasta 30 m, con un diámetro de tronco que alcanza de 30 a 90 cm. El Neem está
caracterizado por un sistema de raíces laterales penetrantes, que pueden
extenderse hasta 15 m, con una cofia relativamente corta. Tiene corteza
moderadamente gruesa, con fisuras de color rojizo-castaño. Siempre está verde o
muda, dependiendo del clima, los períodos de deshoje son normalmente breves, y
ocurren durante las sequías prolongadas. Los frutos son drupáceos, oval-
oblongos, amarillos purpúreos, de 1cm de diámetro y normalmente contienen una
sola semilla. El fruto tiene una longitud de 2 cm y, cuando madura, el pericarpio
aparece amarillo y de textura rugosa. Estos empiezan a aparecer cuando el árbol
alcanza una edad de 3 a 5 años. Las hojas son alternas, imparipinnadas y
compuestas, de 10 a 38 cm. Y agrupadas al extremo de las ramas18.

4.3.1.1.2. Descripción Taxonómica

Reino: Plantae
Filo: MAGNOLIOPHYTA
Clase: Magnoliopsida
Orden: Melia
Familia: Meliaceae

18
STONEY, C. 1998. Una guía útil para los árboles de uso múltiple. Uso del Neem como agente de
Control Biológico de Plagas. Program Officer y Erin Hughes, Program Associate Winrock
International. Hoja informativa, FACT 98–04S, Junio 1998.
http://www.winrock.org/forestry/factpub/spusonim.htm. En GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA.
Validación Integral del Sistema Agroforestal con Árbol del Neem. Bogotá, D.C. 2005.

26
Género: Azadirachta
Nombre científico: Azadirachta indica A. Juss.
Sinónimos: Melia indica, Melia azadirachta
Nombres comunes: Árbol del Neem, margosa, limba, cinamomo, mimba, nimba,
kohomba y lila india.

4.3.1.1.3. Organografía

Produce flores blancas o crema, hermafroditas dispuestas en racimos de hasta 22


cm de largo. Su fecundidad depende de la cantidad de iluminación recibida, así
como de la humedad. Las hojas con foliolos son de color verde claro e intenso en
dependencia de las condiciones agroclimáticas. El fruto es una drupa suave y
carnosa en forma elipsoidal, de 1.2 a 2 cm de largo, conteniendo usualmente una
semilla; es de color verde claro durante su desarrollo, tornándose progresivamente
hasta amarillo en la madurez. La fruta madura es pulposa y posee una cutícula
fina que se desprende fácilmente19.

4.3.1.1.4. Ecología

El Neem se adapta a un extenso rango de climas y condiciones de suelos, en


elevaciones entre el nivel del mar y los 700m, sin embargo puede crecer en
altitudes de hasta 1500m, en tanto las temperaturas permanezcan moderadas, ya
que no soporta el frío o la congelación; tolera temperaturas extremadamente altas,
pero su rango normal está cerca de los 9.5ºC a 37ºC. También es altamente
tolerante de la sequía y una vez establecido, puede sobrevivir a estaciones secas
de 7 a 8 meses. Requiere tan poco como 150 mm de lluvia por año en áreas en
donde el sistema de raíz pueda acceder al agua subterránea dentro de los 9 a 12

19
Ibid. p. 94.

27
metros de la superficie; sin embargo, se desarrolla mejor en zonas que reciben de
450 a 1200 mm al año20.

Prefiere los suelos profundos, permeables y arenosos, pero puede plantarse en


una amplia variedad de tipos de suelo, incluyendo sitios difíciles donde la mayoría
de otras especies no se desarrollan bien. Puede prosperar en suelos rocosos,
secos, poco profundos e infértiles, pero no se recomienda para ciénagas barrosas
o fangosas, suelos barrosos, salinos, o donde la subsuperficie sea dura o se
hallen capas de laterita. Tampoco debe sembrarse donde los suelos se vuelvan
empapados o temporalmente inundados. Prefiere un pH de suelo en el rango de
5.2 a 7.0, pero puede crecer dentro de un rango de pH de 5.0 a 8.0. Los árboles
maduros demandan mucha luz, pero las plántulas toleran la sombra moderada
durante su primera temporada de crecimiento en sitios secos21.

4.3.1.1.5. Condiciones Para La Propagación Y Desarrollo22

El árbol Neem se propaga naturalmente por semillas; los frutos cuando están
maduros caen al suelo pudiendo germinar si las condiciones son adecuadas,
siendo su capacidad de germinación muy alta durante las primeras 4 semanas,
descendiendo luego rápidamente. Los frutos empiezan a aparecer cuando el árbol
alcanza una edad de 3 a 5 años, hasta los 10 años la producción de frutos no es
rentable.

20
STONEY, C. 1998. Una guía útil para los árboles de uso múltiple. Uso del Neem como agente de
Control Biológico de Plagas. Program Officer y Erin Hughes, Program Associate Winrock
International. Hoja informativa, FACT 98–04S, Junio 1998.
http://www.winrock.org/forestry/factpub/spusonim.htm. En GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA.
Validación Integral del Sistema Agroforestal con Árbol del Neem. Bogotá, D.C. 2005.
21
Ibid. p. 95.
22
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.

28
El desarrollo más o menos óptimo de este árbol se ve condicionado por los
siguientes factores:

- Humedad relativa.
- Tipo de suelo (acidez o basicidad).
- Edad del árbol (para descubrir a que edad el contenido de azadiractina es
mayor).

Cuadro Nº 1. Tolerancia Del Neem A Factores Climáticos Y De Suelo

Límites Intervalo Límites inferiores Óptimo Superiores

Lluvia (mm) <300 500-800 1800 2000-2500

Temp. (ºC) 4 10-20 27 40-49

Arcilla (%) <25 25-45 >45 >70

Arena (%) <50 50-75 >75 >85

Marco (m) <1,8 x 1,8 3 x 3-4 x 5 >7 x 7

Fuente: El insecticida botánico Neem, un control natural y eficaz de plagas. 1993

4.3.1.2. Componentes Químicos

El Neem contienen varios miles de componentes químicos, de especial interés son


los terpenoides, compuestos por C, H y O; la presencia del oxígeno hace esos
compuestos más solubles en agua, metanol o etanol que en hexano, gasolina u
otros solventes similares. Actualmente se conoce de la existencia de unos 100

29
terpenoides. El más activo es la azadiractina, de la que existen varios tipos que
varían desde la azadiractina A a la azadiractina K23.

Realmente, los primeros trabajos sobre la química del Neem se hicieron en la


India en los años 20, con el aislamiento de un ácido en el aceite de Neem al que
se llamó ácido margósico. Desde los primeros estudios del Dr. Siddiqui en 1942,
más de 100 componentes terpenoides, la mayoría de los tetranotriterpenoides,
diterpenoides, triterpenoides, pentanotriterpenoides, hexanotriterpenoides y
algunos compuestos no terpenoides han sido aislados de varias partes del árbol24.

Existen muchos más compuestos activos en el árbol del Neem. De las hojas se
pueden aislar varias moléculas como un flavonoide polifenólico llamado
quercetina, un β-sitosterol, el nimbosterol, nimbina y otros liminoides, como la
nimocinolida e isonimocinolida. También se han aislado un grupo de alcanos de
entre 14 y 31 carbonos, aminoácidos y ácidos grasos. De las flores se extrae un
aceite que contiene sesquiterpenos, nimbosterol y numerosos flavonoides entre
los que destacan la melicitrina y el kaempferol. Las flores producen una cera
compuesta por una mezcla compleja de ácidos grasos (araquídico, esteárico,
palmítico, oleico y linoléico). La corteza y madera del árbol del Neem son también
fuente de numerosos principios activos: nimbina, nimbidina, nimbinina,
nimbosterol, margosina, nimbineno y algunos diterpenos como la nimbinona,
nimbocilina, nimbidiol y nimbiona25.

Pero sin duda el elemento más interesante en la bioquímica del Neem son las
semillas, por su riqueza en lípidos y la presencia de moléculas con una intensa
actividad biológica. El hueso de la drupa contiene una o dos semillas y de ellas se
obtiene un aceite compuesto de ácido oleico (50-60%), palmítico (13-15%),

23
SAXENA, S.K. Y SAXENA, PURNIMA: El Neem en el control de nematodos: Estudio en el que
se demuestra la eficacia del aceite de Neem en el control de nemátodos.1995.
24
Ibid. p. 85.
25
El portal de los productos del árbol del Neem en España. http://www.neem.es/bioq.html. 2008.

30
esteárico (14-19%), linoleico (8-16%) y araquídico (1-3%), composiciones que
varían según el método de extracción.

4.3.1.2.1. Terpenoides26

Figura Nº 2. Estructura Molecular Del Isopreno, La Unidad Química De Los


Terpenoides

Los terpenoides, algunas veces referidos como isoprenoides, son una vasta y
diversa clase de compuestos orgánicos similares a los terpenos. El nombre
proviene que los primeros miembros de esta clase fueron derivados del aguarrás
“turpentine” en inglés, “terpentin” en alemán. Los terpenoides pueden verse como
formados por unidades de 5-carbono isopreno (pero el precursor es el isopentenil
difosfato), ensambladas y modificadas de muchas maneras diferentes, siempre
basadas en el esqueleto del isopentano. La mayoría de los terpenoides tiene
estructuras multicíclicas, las cuales difieren entre sí no sólo en grupo funcional
sino también en su esqueleto básico de carbono. Los monómeros generalmente
son referidos como “unidades de isopreno” porque la descomposición por calor de
muchos terpenoides da por resultado ese producto; y porque en condiciones
químicas adecuadas, se puede inducir al isopreno a polimerizarse en múltiplos de

26
R. CROTEAU, T. M. KUTCHAN, N. G. LEWIS. "Natural Products (Secondary Metabolites)". En:
Buchanan, Gruissem, Jones (editores). Biochemistry and Molecular Biology of Plants. American
Society of Plant Physiologists. Rockville, Maryland, Estados Unidos. 2000. Capítulo 24.

31
5 carbonos, generando numerosos esqueletos de terpenoides. Por eso se
relaciona a los terpenoides con el isopreno, si bien se sabe ya desde hace más de
100 años que el isopreno no es el precursor biológico de esta familia de
metabolitos.

Estos lípidos se encuentran en toda clase de seres vivos, y son biosintetizados en


las plantas, donde son importantes en numerosas interacciones bióticas (Goodwin
1971). En las plantas los terpenoides cumplen muchas funciones primarias:
algunos pigmentos carotenoides son formados por terpenoides, también forman
parte de la clorofila y las hormonas giberelina y ácido abscícico. Los terpenoides
también cumplen una función de aumentar la fijación de algunas proteínas a las
membranas celulares, lo que es conocido como isoprenilación. Los esteroides y
esteroles son producidos a partir de terpenoides precursores27.

Los terpenoides de las plantas son extensamente usados por sus cualidades
aromáticas. Juegan un rol importante en la medicina tradicional y en los remedios
herbolarios, y se están investigando sus posibles efectos antibacterianos y otros
usos farmacéuticos. Están presentes, por ejemplo, en las esencias del eucalipto,
los sabores del clavo y el jengibre. También en el citral, mentol, alcanfor, y los
cannabinoides. La biosíntesis de los terpenoides en las plantas es a través de la
vía del ácido mevalónico.

4.3.1.2.1.1. Clasificación28

Los terpenos son hidrocarburos que pueden verse como una combinación de
numerosas unidades isopreno, por lo general unidas de forma cabeza-cola, pero
también pueden darse combinaciones cabeza-cabeza y algunos compuestos
27
GOODWIN TW. Aspects of terpenoid chemistry and biochemistry. Academic Press, Londres.
1971.
28
JUDD, W. S. CAMPBELL, C. S. KELLOGG, E. A. STEVENS, P.F. DONOGHUE, M. J. Plant
systematics: a phylogenetic approach, Second Edition.Sinauer Axxoc, USA. Capítulo 4. 2002.

32
están formados por uniones cabeza-medio. Los terpenoides pueden ser
considerados como terpenos modificados donde grupos metilo han sido
reacomodados o removidos, o a los que se les han añadido átomos de oxígeno.
Algunos autores usan el término terpeno para referirse a los terpenoides.

La clasificación de los terpenoides según su estructura química, es similar a la de


los terpenos, los cuales son clasificados en base al número de unidades isopreno
presentes y en el caso de los triterpenoides, si están ciclados. Se los clasifica en:

Hemiterpenoides. Los terpenoides más pequeños, con una sola unidad de


isopreno. Poseen 5 carbonos. El hemiterpenoide más conocido es el
isopreno mismo, un producto volátil que se desprende de los tejidos
fotosintéticamente activos.

Monoterpenoides. Terpenoides de 10 carbonos. Llamados así porque los


primeros terpenoides aislados del aguarrás en los 1850s, fueron
considerados la unidad base, a partir de la cual se hizo el resto de la
nomenclatura. Los monoterpenos son mejor conocidos como componentes
de las esencias volátiles de las flores y como parte de los aceites
esenciales de hierbas y especias, en los que ellos forman parte de hasta el
5 % en peso de la planta seca.

Sesquiterpenoides. Terpenoides de 15 carbonos (es decir, terpenoides de


un monoterpenoide y medio). Como los monoterpenoides, muchos
sesquiterpenoides están presentes en los aceites esenciales. Además
muchos sesquiterpenoides actúan como fitoalexinas, compuestos
antibióticos producidos por las plantas en respuesta a la aparición de
microbios, y como inhibidores de la alimentación (“antifeedant”) de los
herbívoros oportunistas. La hormona de las plantas llamada ácido abscísico
es estructuralmente un sesquiterpeno, su precursor de 15 carbonos, la

33
xantosina, no es sintetizada directamente de 3 unidades isopreno sino
producida por un “cleavage” asimétrico de un carotenoide de 40 unidades.

Diterpenoides. Terpenoides de 20 carbonos. Entre ellos se incluye el fitol,


que es el lado hidrofóbico de la clorofila, las hormonas giberelinas, los
ácidos de las resinas de las coníferas y las especies de legumbres, las
fitoalexinas, y una serie de metabolitos farmacológicamente importantes,
incluyendo el taxol, un agente anticáncer encontrado en muy bajas
concentraciones (0,01% de peso seco) en la madera del tejo (“yew”), y
forskolina, un compuesto usado para tratar el glaucoma. Algunas
giberelinas tienen 19 átomos de carbono por lo que no son consideradas
diterpenoides porque perdieron un átomo de carbono durante una reacción
de “cleavage”.

Triterpenoides. Terpenoides de 30 carbonos. Son por lo general generados


por la unión cabeza-cabeza de dos cadenas de 15 carbonos, cada una de
ellas formada por unidades de isopreno unidas cabeza-cola. Esta gran
clase de moléculas incluye a los brassinoesteroides, componentes de la
membrana que son fitoesteroles, algunas fitoalexinas, varias toxinas y
“feeding deterrents”, y componentes de las ceras de la superficie de las
plantas, como el ácido oleanólico de las uvas.

Tetraterpenoides. Terpenoides de 40 carbonos (8 unidades de isopreno).


Los tetraterpenos más prevalentes son los pigmentos carotenoides
accesorios que cumplen funciones esenciales en la fotosíntesis.

Politerpenoides. Los politerpenoides, que contienen más de 8 unidades de


isopreno, incluyen a los “prenylated quinone electrón carriers” como la
plastoquinona y la ubiquinona, también poliprenoles de cadena larga
relacionados con las reacciones de transferencia de azúcares (por ejemplo

34
el dolicol), y también a enormemente largos polímeros como el “rubber”,
usualmente encontrado en el látex.

Meroterpenoides. Así se llama a los metabolitos secundarios de las plantas


que tienen orígenes sólo parcialmente derivados de terpenoides. Por
ejemplo, tanto las citokininas como numerosos fenilpropanoides contienen
cadenas laterales de un isoprenoide de 5 carbonos. Algunos alcaloides,
como las drogas anticáncer vincristina y vinblastina, contienen fragmentos
terpenoides en sus estructuras. Además algunas proteínas modificadas
incluyen una cadena lateral de 15 o 20 carbonos que es un terpenoide, que
es el que ancla la proteína a la membrana.

Esteroides. Triterpenos basados en el sistema de anillos


ciclopentanoperhidrofenantreno (“cyclopentane perhydro-phenanthrene ring
system”). Buchanan et al. No los consideran terpenoides.

4.3.1.2.1.2. Terpenoides Con Poder Biocida Presentes En El Árbol Del Neem

Hasta ahora, al menos nueve triterpenos del neem han demostrado una habilidad
para impedir el crecimiento en los insectos, afectando a un número de especies
que incluyen algunas de las plagas más mortíferas para la agricultura y la salud
humana. Son los componentes azadiractina, salannina, melantriol, nimbina y
nimbidina los más conocidos y por ahora al menos, parecen ser los más
significativos.

35
4.3.1.2.1.2.1. Azadiractina29

Figura Nº 3. Estructura Molecular De La Azadiractina

Es el principal agente de la planta a la hora de combatir los insectos. Normalmente


se encuentra en la semilla en proporciones del 0,1 al 0,9 %. Dosis de 30-60 g/ha
de este componente son suficientes para controlar diversos tipos de plagas
chupadoras y masticadoras.

La azadiractina está constituida por al menos nueve isómeros estrechamente


relacionados, nombrados de la A a la K. Los tipos A y B de azadiractina son los
que se presentan en mayor cuantía. Se piensa que el 83 % de la azadiractina
natural es de tipo A y el 16 % es de tipo B. El resto lo constituyen las variaciones
de C a K, por lo que al aislar la azadiractina se detectaban 4 isómeros amorfos
con actividad biológica similar.

Para muchos autores la mayoría de los efectos antihormonales y antialimentarios


del Neem son debido a la azadiractina. De hecho se considera que del 72 al 90 %
de la actividad biológica del Neem es debida al contenido en azadiractina, (William
Quarters, 1994). Es estructuralmente parecido a las ecdisonas (hormonas que se
encuentran en los insectos y que controlan el proceso de metamorfosis del insecto
desde el estado de larva hasta que llega a ser adulto).

29
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.

36
Esta materia activa no mata insectos, al menos no inmediatamente, sino que en
lugar de ello, repele y destruye su crecimiento y reproducción. Los últimos 20 años
de investigación han mostrado que es uno de los más poderosos reguladores de
crecimiento y frenador de la alimentación que se ha probado. Repele y reduce la
alimentación de muchas especies de plagas de insectos así como de algunos
nemátodos. Algunos autores demostraron una reducción en la síntesis de
ecdisona al aplicar el principio activo. Otros autores (Rembold et al., 1984),
sugieren que la azadiractina interviene en el sistema neuroendocrino para
controlar la síntesis de la hormona ecdisona y juvenil.

La azadiractina aparece por tanto como una materia activa de origen natural que
resulta bastante eficaz; de hecho, es tan potente que una simple señal de su
presencia previene a algunos insectos de incluso tocar las plantas. No obstante se
han mostrado algunas limitaciones sobre todo debido al efecto de los rayos
ultravioletas sobre esta sustancia que aceleran su degradación. El efecto residual
dura unos cinco días, aunque los efectos juvenoides, es decir sobre el crecimiento,
pierden su actividad normalmente después de uno o dos días bajo condiciones de
campo30.

Las temperaturas parecen jugar un papel de forma indirecta: temperaturas más


altas incrementan el efecto porque los insectos son más activos bajo estas
condiciones, y el efecto anticomida es conseguido más rápidamente que a bajas
temperaturas.

Se ha probado efectividad contra más de 175 especies evaluadas, a dosis de tan


solo 10 ppm. La azadiractina fue probada por primera vez en la Universidad de
Keele, por Morgan, el descubridor de tal sustancia. En Kenia, ese mismo año K.
Leuschner, trabajando en el Centro de Investigación de café en Upper Kiambu,
observó que un trozo de Neem metanólico, controló la chinche del café
(Antestiopsis orbitalis bechuana) en cuanto a su crecimiento. La mayoría de las
30
WARTHEN, J.D. Neem (Azadirachta indica A. Juss): Organisms affected. 1989.

37
ninfas tratadas con el extracto, murieron durante sucesivos estados de crecimiento
y las pocas que sobrevivieron hasta forma adulta, tenían alas y tórax malformados.
Se demostró que la azadiractina era eficaz contra el escarabajo de judía mejicano
(Epilachna viriavestis) y contra el escarabajo de la patata (Leptinotarsa
decemlineata). Se observó que casi todas las hembras pararon de poner huevos.
Algunas hembras habían sido completamente esterilizadas y el efecto era
irreversible.

La azadiractina parece que actúa bloqueando la producción de ecdisona, de esta


forma altera el delicado equilibrio hormonal de los insectos, afectando a su
metamorfosis. Las malformaciones producidas en cualquiera de los estadíos o los
daños morfogenéticos en adultos, como alas, aparato bucal mal desarrollado entre
otros, provoca que los daños que puedan producir estos insectos se reduzcan ya
que su actividad alimenticia se ve afectada, no pueden volar, son estériles,
muriendo rápidamente. Estos efectos se producen de forma combinada y con
diferente grado de acción, dependiendo de la especie de insecto, de su estado de
desarrollo, del proceso de extracción y de la concentración del preparado31.

Hay que tener en cuenta el efecto que la radiación solar produce sobre su eficacia,
ya que causa una disminución sobre su efecto anticomida, no obstante se puede
evitar si se mezcla el aceite de Neem, con aceite de angélica, ricino y cáñamo.

Por otra parte el efecto secundario anticomida también ha sido explicado como un
posible efecto de la azadiractina sobre los ecdiesteroides. No obstante también ha
quedado probado que algunos efectos reguladores del crecimiento del
azadiractina se entienden por la acción directa de esta sobre la movilidad intestinal

31
STEETS, R. AND H. SCHMUTTERER. The effect of azadirachtin on the longevity and
reproduction of Epilachna varivestis Muls. (Coleoptera: Cocinellidae). 1975. p.176.

38
en el caso de Locustidae migratoria. Esto quizás lleva a interferir en el proceso de
la metamorfosis influyendo en las diferentes etapas de esta.

La azadiractina es la materia más eficaz de las contenidas en el Neem, capaz de


garantizar el control de las plagas y de ser la alternativa a productos sintéticos, ya
que el control añadido de los insectos útiles, que no son afectados, posibilita el
reducir el número de aplicaciones tal como se ha comprobado en ensayos de
diversos cultivos en diferentes países.

4.3.1.2.1.2.2. Meliantriol32

Figura Nº 4. Estructura Molecular Del Meliantrol

Fue aislado por primera vez por Lavie en 1967. Su estructura es también muy
complicada al igual que la de la azadiractina. Este compuesto actúa también como
inhibidor de la alimentación. Hace posible que en concentrados extremadamente
bajos, los insectos cesen de comer. Además también actúa sobre el crecimiento
de los insectos y afecta también a nemátodos.

32
TOVAR, H.H. El neem. Insecticida Botánico. Los insecticidas naturales inician un cambio radical
en el control de plagas. Tecnoagro. Año 1. Núm. 2. Naucalpan, Estado de México. México. 2000.

39
La demostración de su habilidad para prevenir el mascado de las langostas en los
cultivos, fue la primera prueba científica del uso tradicional del Neem para el
control de insectos en los cultivos de La India.

4.3.1.2.1.2.3. Salannina33

Figura Nº 5. Estructura Molecular De La Salannina

Fue la tercera materia activa aislada del Neem. Estudios indican que este
compuesto inhibe también, poderosamente la alimentación, pero no influye en los
distintos cambios hasta que los insectos no llegan a ser adultos34.

Se probó su poder en laboratorio contra varios tipos de plagas, (langosta


migratoria, trepadora roja de California, el escarabajo rayado del pepino, el
escarabajo japonés y la mosca doméstica), en todos los casos se demostró su alto
poder inhibidor de la alimentación.

33
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.
34
COHEN, E., QUISTAD, G.B. Y CASIDA, J.H. 1996. Cytotoxicity of nimbolide, epoxyazadiradione
and other liminoids from neem insecticide. Life Sciences. 1996. p.1075.

40
4.3.1.2.1.2.4. Nimbina y Nimbidina

Figura Nº 6. Estructura Molecular De Nimbina (a) Y Nimbidina (b)

Estos compuestos han demostrado su actividad sobre el Virus X de la Patata,


Vaccinia virus, y sobre el virus de las enfermedades venéreas de las aves.

La Nimbidina es el componente primario de principios amargos, que se produce


cuando las semillas de Neem son sometidas a un proceso de extracción con
alcohol. Esto ocurre en cantidades bastante grandes; sobre el 2 % del núcleo.

4.3.1.3. Procedimientos Para La Elaboración Del Insecticida Natural 35

4.3.1.3.1. Tecnología De Producción Artesanal

Este sistema para la elaboración de bioinsecticidas es muy simple, pues la materia


prima (semilla y hojas) después de secadas pueden utilizarse, siendo procesadas
mediante aparatos y equipos de poca complejidad.

35
SODEPAZ, 2002. Proyecto introducción del árbol del Neem en
Cuba.http://www.sodepaz.org/nim/ en GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA. Validación Integral
del Sistema Agroforestal con árbol del Neem en la Vereda Guabinal Cerro, Girardot-
Cundinamarca. Universidad Piloto de Colombia y Universidad Distrital Francisco José de Caldas.
Bogotá, D. C., 2005.

41
Figura Nº 7. Elaboración Artesanal De Insecticida Natural Neem

4.3.1.3.1.1. Empleo De La Semilla Entera

Inicialmente se realiza la recolección de la materia prima (frutos), esta se coloca


en lechos de lavado durante un periodo de 24 horas para facilitar el
desprendimiento de la cascarilla. Luego del remojo el fruto es despulpado, este
puede ser manual o mecánico. Esta semilla obtenida se lava y luego se somete a
un proceso de secado durante una semana expuesta al sol.

42
Las semillas después de secadas hasta alcanzar entre 8 y un 10 % de humedad,
son sometidas a un proceso de molido, utilizando molinos manuales o eléctricos
en dependencia de la disponibilidad local; esta operación se regulará para lograr
un tamaño de la partícula entre 1 y 2 mm a fin de obtener un buen proceso de
extracción del principio activo cuando se elabore el extracto acuoso, que se
empleará en el control de plagas de insectos y ácaros, y en forma de polvo para el
control de los nemátodos e insectos que atacan el cogollo del maíz y el sorgo. El
producto obtenido se envasa en bolsas plásticas con capacidades de 1 y 5 Kg;
posteriormente se almacenan durante un mes o más en condiciones de ambiente
fresco.

4.3.1.3.1.2. Empleo De La Hoja

La hoja para ser utilizada como insecticida o antiparasitario durante algún tiempo,
se debe deshidratar manteniendo su color verde claro, luego se procede al molido,
envase y conservación igual que la semilla.

La hoja verde para uso emergente y limitado, puede ser aplicada en forma de
extracto acuoso en el control de plagas agrícolas y de ectoparásitos.

4.3.1.3.2. Tecnología De Producción Industrial

En este sistema de producción la materia prima se procesa a partir de métodos de


elaboración de un grado de complejidad más elevado, si se compara con los
métodos artesanales. Aquí se emplea una infraestructura compuesta por equipos,
aparatos, máquinas enmarcados dentro de un flujo tecnológico con parámetros y
sustancias aditivas especiales.

43
4.3.1.3.2.1. Empleo Del Aceite

Por esta vía, la producción de los insecticidas utiliza como materia prima la
almendra de la semilla descascarillada, la cual se somete a un proceso de
prensado donde se extrae el aceite que se filtra y luego se formula empleando
diferentes sustancias orgánicas y emulsificantes, así como otros coadyuvantes.
También con el aceite y el residuo, se puede elaborar ungüento, pasta y pomada
para emplear en el control de ectoparásitos en animales.

4.3.1.3.2.1.1. Métodos De Extracción Del Aceite

4.3.1.3.2.1.1.1. Extracción Mecánica

El uso de la extracción de aceites por medios mecánicos, presenta bajos


rendimientos en comparación con la extracción con solvente. Los procesos
mecánicos de extracción pueden reducir el aceite en el grano molido en 5% a
10% de peso, mientras que los procesos de extracción por solventes reducen el
aceite en el grano molido a menos del 1% de peso. Como el valor de la fracción
de aceite es típicamente dos o tres veces el valor de fracción del grano molido por
peso, la pérdida de rendimiento es muy costosa. El proceso de extracción
mecánica también tiene comparativamente un altísimo consumo de energía y
costos de mantenimiento por toneladas de materiales de oleaginosas procesadas.

Existen cuatro razones por las cuales el proceso mecánico de extracción es


todavía utilizado selectivamente. En primer lugar, este proceso, puede ser
proporcionado en muy pequeña escala, tan bajas como 10 toneladas por día. El
costo de capital para las pequeñas instalaciones de extracción mecánica es
considerablemente inferior a las pequeñas instalaciones de extracción por
solvente. En segundo lugar, hay un gran mercado de alto valor para los aceites

44
naturales que no hayan estado en contacto con disolventes o productos químicos,
requiriendo el uso de la extracción mecánica. En tercer lugar, la extracción
mecánica puede crear una torta de alto contenido proteico como alimento para
animales rumiantes, que se vende a un precio más alto que la torta proveniente de
la extracción con solventes. Por último, la extracción mecánica es considerada a
menudo más confiable que el disolvente en el tratamiento de la extracción de
materiales difíciles (Copra y Palm Kernel), en caliente y climas tropicales.

El equipo usado para la extracción mecánica de fracciones de aceites de las


fracciones del grano molido es la prensa de alta presión o Expeler Press
(Anderson Internacional trademark). Una expeler es un dispositivo mecánico que
utiliza un tornillo sin fin horizontal, con el aumento del diámetro de cuerpo para
impartir presión sobre los materiales oleaginosos a medida que avanza a lo largo
de la longitud del tornillo. La prensa tiene una función, para los materiales
oleaginosos de menor aceite posible. La clave de la ejecución de la prensa
consiste en aplicar la máxima presión a una fina sección transversal del material
oleaginoso para exprimir la mayor cantidad de aceite posible. Es común para la
utilización de prensas de agua fría y el agua de enfriado o refrigerado de barriles
de aceite para disipar el calor suficiente para mantener la presión y fricción interna.

Las prensas más completas son capaces de procesar de 10 a 100 toneladas de


material oleaginoso por día. A menor capacidad de llenado, las prensas pueden
obtener típicamente aceite residual inferior en la harina, a costa de consumir más
energía y costo de mantenimiento por tonelada de semilla procesada.

La fracción de aceite retirado en la prensa está cargada con finas partículas de


grano molido, normalmente en el rango de 0.5-15% en peso. Estas partículas
suelen ser removidas del aceite utilizando el método tradicional de bombeo de
aceite en un tanque de 30 a 60 minutos de tiempo de residencia para permitir que
estas, las más pesadas establecerlas y continuar dragando de la base del tanque.

45
Después de la separación gravimetríca, el aceite es entonces bombeado a través
de un screener vibrador o mediante una hoja de filtro a presión para la separación
final de partículas del grano molido. Partículas de grano molido separadas de las
del flujo de aceite limpio están saturadas con el aceite y el reciclado en el proceso
por delante de la amplia difusión por la prensa.

4.3.1.3.2.1.1.2. Extracción con solventes

El proceso de extracción por solvente tiene beneficios en los rendimientos


significativamente más alta producción de aceite que por extracción mecánica,
junto con una menor dependencia de los gastos de funcionamiento. El principal
inconveniente de la extracción por solvente es el elevado costo de capital inicial
para la construcción de una instalación. Extracción por solvente, sus instalaciones
construidas hoy son comúnmente en el rango de tamaños de 1000 a 5000
toneladas por día, con un costo de $ 15 millones a 75 millones de dólares para la
construcción.

El disolvente utilizado en la mayoría de las plantas extractoras de aceites de


semillas alrededor del mundo es el hexano comercial, que es una mezcla
generalmente de hidrocarburos, cuyo rango de ebullición de temperatura es de
65-69 ° C. La mayoría del hexano comercial disponible contiene aproximadamente
el 65% de hexano normal, con el 35% restante de la composición que consta de
ciclopentano e isómeros de hexano. Como el vapor de hexano es tres veces más
pesado que el aire y cantidades ligeras de hexano mixtos en el aire puede crear
una mezcla explosiva, debe tenerse especial cuidado en la construcción y
funcionamiento de plantas de extracción por solvente. La National Fire Protection
Agency boletín NFPA - 36 plantas de extracción con solventes es la reconocida
guía para la seguridad en la construcción y el funcionamiento de esas
instalaciones.

46
A causa de las consideraciones de seguridad, el proceso de extracción por
solvente se construye en una instalación de proceso de preparación de la semilla.
El proceso de extracción por solvente consta de cinco unidades de procesos
estrechamente relacionados entre sí: extracción por solvente, desolventización de
grano molido, secado del grano molido y la refrigeración, destilación de miscelas y
recuperación de solventes.

El extractor hace parte del equipo en los procesos de extracción por solventes,
donde la fracción del aceite vegetal del material oleaginoso es separada de la
fracción del grano molido por la disolución de la fracción de aceite en el disolvente.
Separado el material de la oleaginosa se transporta desde el proceso de
preparación de las semillas a la extracción por solvente y entra en el proceso de
extracción por solventes. El solvente de extracción transmite el material preparado
de su entrada a su salida, con tal que el material preparado resida
aproximadamente 30 a 120 minutos de tiempo. Mientras que el material está
siendo transmitido adelante, la miscela (disolvente y solución de aceite) es lavada
a través del lecho para extraer el aceite vegetal del material.

Cada lavado de la miscela disminuye la concentración de aceite vegetal. Después


de cuatro a ocho lavados de la miscela, el material se lava una vez más con un
nuevo disolvente, terminando el proceso de extracción. Antes de las salidas de los
materiales del extractor, se permite el drenaje por gravedad para reducir su
retención de disolvente. El extracto del material gastado cae en la descarga y sale
del equipo. La miscela con la mayor concentración de aceite vegetal también sale
del equipo a un tanque de depósito de miscela.

En el proceso de extracción por solvente, la miscela se difunde en la superficie del


material oleaginoso a través de las paredes de las células del cuerpo del aceite
situados dentro de las células. La miscela rápidamente entra en solución con el
cuerpo del aceite. Como la miscela continúa entrando y va en la solución, la

47
presión interna se establece dentro de la célula y concentrada la miscela, se
difunde hacia fuera de la célula. Esta miscela concentrada se difunde a través de
las paredes de las células adyacentes y, finalmente, llega a la superficie de la
partícula.

Una vez la miscela más concentrada llega y bañan al material oleaginoso de


miscela fuera del material oleaginoso, que va rápidamente en la solución con
miscela, aumentando gradualmente su concentración. Este proceso continúa
hasta que la concentración de la miscela dentro de las células del material
oleaginoso en el entra en equilibrio con la concentración de miscela fuera de
materiales oleaginosos.

Todos los materiales oleaginosos tienen poca diferencia en la estructura celular y,


por consiguiente, un tiempo de requerimiento necesario diferente para la miscela
dentro de las células del material oleaginoso para llegar en equilibrio con la
miscela a fuera del material oleaginoso.

4.3.1.3.2.2. Empleo de la torta

La torta resultante del proceso de prensado, se molina destinándose igualmente


para la elaboración de insecticida a usar como extracto acuoso para el control de
plagas de insectos y ácaros, en forma de polvo para el control de nemátodos y,
por último, como materia prima para la elaboración de insecticida industrial a base
de extracto etanólico con un contenido aproximado de 3000 a 4000 ppm (3 a 4 g/l)
de Azadiracbtina ó concentrados con contenidos superiores de ese agente activo.

48
Cuadro Nº 2. Cantidad De Azadiractina Obtenido Usando Distintos Solventes
SOLVENTE USADO AZADIRACTIN ENCONTRADO (µg/10µl)

Etanol (95%) 2,80

Metanol / agua (85:15) 2,60

Metanol 2,19

Acetona 0,74

Etil-éter 1,28

Fuente: El Insecticida Botánico Neem, Un Control Natural Y Eficaz De Plagas:


1993

4.3.1.4. Mecanismo De Acción Del Insecticida

Las propiedades del Neem vienen basadas en el parecido que presentan sus
componentes con las hormonas reales, de tal forma que los cuerpos de los
insectos absorben los componentes del Neem como si fueran hormonas reales y
estas bloquean su sistema endocrino. El comportamiento profundamente
arraigado resultante y las aberraciones psicológicas, dejan a los insectos tan
confundidos en su cuerpo y cerebro, que no pueden reproducirse y sus
poblaciones se reducen mucho36.

Los efectos precisos de varios extractos del Neem son a veces difíciles de
concretar. La complejidad de ingredientes del Neem y sus formas de mezclarlos y
de acción tan variadas, complican en gran medida su aclaración. Pero, a pesar de
las dudas en varios detalles, se sabe bastante bien y es de sobra conocido que
varios extractos del Neem actúan en diversos insectos de diferentes maneras:

36
SAXENA, S.K. Y SAXENA, PURNIMA: El Neem en el control de nematodos: Estudio en el que
se demuestra la eficacia del aceite de Neem en el control de nemátodos.1995.

49
Destruyendo e inhibiendo el desarrollo de huevos, larvas o crisálidas.
Bloqueando la metamorfosis de las larvas o ninfas.
Destruyendo su apareamiento y comunicación sexual.
Repeliendo a las larvas y adultos.
Impidiendo a larvas poner huevos.
Esterilizando adultos.
Envenenando a larvas y adultos.
Impidiendo su alimentación.
Bloqueando la habilidad para tragar (reduciendo la movilidad intestinal).
Enviando mayores errores a su metamorfosis en varios periodos de
desarrollo del insecto.
Inhibiendo la formación de quitina (material del que se compone el
esqueleto del insecto).
Impide que se realicen las mudas, necesarias para entrar en la siguiente
etapa del desarrollo, de tal forma que actúa como regulador de crecimiento
del insecto.

De todos estos efectos, se puede decir que actualmente el poder repelente es


probablemente el efecto más débil. La actividad anticomida (aunque interesante y
valiosa en gran extremo) presenta corta vida y es variable. La más importante
cualidad del Neem, es el bloqueo en el proceso de metamorfosis de la larva 37.

Otras características destacables del Neem son: difícil desarrollo de resistencia


por tratarse de una mezcla de componentes bioactivos, sistémico através de las
raíces cuando se aplican al suelo, elevada biodegradabilidad, sobre todo por la
acción de la radiación U.V., con una persistencia en campo de 4-8 días y
posibilidad de sinergismo con otros productos naturales como Bacillus thurigiensis.

37
SÁNCHEZ, R. Raúl. Zoe tecno-campo: Aceite de Neem un insecticida ecológico para la
agricultura. http://www.zoetecnocampo.com/Documentos/Neem/neem01.htm. 2007.

50
4.3.1.5. Insectos Que Controla

Se reportan más de 200 insectos que son afectados o muestran susceptibilidad al


Neem (warthem, 1989). A continuación se mencionan algunos órdenes y plagas
agrícolas que son afectadas por los productos de Neem, así como sus efectos.

Coleóptera. Las larvas de los escarabajos, especialmente fitofagos,


coccinélidos (escarabajo mexicano del haba y escarabajo del pepino);
crisomélidos (escarabajo colorado de la papa entre otros); quienes rehúsan
a comer plantas tratadas con Neem, crecen pocos y algunos mueren por
contacto.

Díptera. Muchas especies de insecto díptero, como moscas de la fruta,


mosco del cuerno y mosca doméstica, mosca del melón, zancudos, por
ejemplo; son susceptibles a los productos del Neem.

Homóptera. Afidos (de los cítricos, del algodón, caña de azúcar), psilidos,
mosquita blanca y otros homópteros son sensibles a los productos de
Neem. La ninfa de defoliadores presenta considerable efecto antialimentario
y efectos reguladores del desarrollo.

Himenóptera. En este grupo (como minador de la hoja del abedul, hormiga


de la madera, abeja mielera), el Neem provoca efectos antialimentarios y
tiene efectos reguladores del crecimiento en los estados inmaduros.

Lepidóptero. Las larvas de lepidóptero como gusano soldado, barrenador


del fruto, gusano cogollero del maíz, gusano del tabaco, presentan una alta
sensibilidad al Neem, el cual bloquea la alimentación aunque el efecto más
importante es la interrupción del crecimiento.

Orthóptera. En defoliadores como grillos y langostas, el efecto


antialimentario es el más importante, estas especies rehúsan a comer las

51
plantas tratadas con Neem. Recientemente un nuevo efecto descubierto es
el que modifica su comportamiento gregario a formas solitarias.

Thysanoptera. El Neem es muy efectivo en ninfas de trips (trips de arroz),


que están presentes en el suelo; a los adultos los obliga a salir de sus
refugios en las plantas al provocar repelencia.

Además de las arriba mencionadas, se ha probado que el Neem también es


efectivo sobre blattodea, phasmida, phtniraptera, siphonoptera y ostracodos,
arañas y nematodos, especies nocivas de lombrices y hongos, incluyendo el
productor de aflatoxina, asperguillus flavus.

Resultados obtenidos en pruebas de campo, en plantaciones de cultivos


alimentarios en países tropicales, han demostrado los beneficios del control de
plagas a base de los derivados del Neem, han aumentado así la productividad.

La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha llevado a cabo con éxito ensayos


con Neem en aguas para combatir los mosquitos de la malaria.

52
5. METODOLOGÍA

5.1. Introducción Metodológica

5.1.1. Enfoque De Investigación

Según la naturaleza de los objetivos en cuanto al nivel de conocimiento que se


desea alcanzar, este proyecto tuvo un enfoque de investigación experimental
descriptiva, con resultados que se dirigen a resolver un problema concreto, en
circunstancias y características puntuales. Los ensayos y comprobaciones se
realizaron de forma práctica, con ayuda de instrumentos claves, estudio
bibliográfico y el apoyo técnico necesario en estos casos.

5.1.2. Población

Se seleccionaron los árboles sembrados de modo ornamental situados en la zona


urbana de la ciudad de Valledupar y las zonas rurales de los municipios de La Paz
y Agustín Codazzi ubicados en el Departamento del Cesar.

5.1.3. Selección de Variables

El trabajo desarrollado se dividió en tres etapas importantes: La primera fue la


caracterización fisicoquímica de la semilla molida del árbol del Neem; La segunda
la extracción del aceite de la semilla molida caracterizada; y La tercera, la
extracción del extracto de la torta o semilla desengrasada resultante de la
extracción del aceite de la semilla molida caracterizada.

53
Fue en esta última etapa donde se centró la investigación, puesto que era en este
punto donde se mediría la cantidad de extracto obtenido por medio de un solvente
etanolico. Como resultado de la revisión bibliográfica sobre los factores que
influyen en esta etapa se determinaron las variables de entrada a modificar para
medir el efecto sobre las variables de salida; además se determinó cuáles de las
variables de entrada se mantendrían constantes y cuáles no se medirían.

Como variables de entrada para el proceso de extracción del extracto con el


solvente etanolico en el equipo soxhlet, se eligió la cantidad de ml del solvente
etanolico; y como variables de salida se determinó el porcentaje de extracto
etanólico contenido en la semilla desengrasada (torta).

% Extracto Insecticida = (PI - Po) × 100

Po = Peso del Balón Vació


PI = Peso del Balón + Extracto Insecticida
M = Peso de la Muestra

NR T

CE Extracción Del
Extracto Insecticida
%E
SMD

PA

Figura Nº 8. Modelo General Del Proceso de Extracción Del Extracto

54
Variables de Entrada:

CE = Cantidad de Etanol.

Variables de Salida:

%E = Porcentaje de Extracto.

Factores Controlables:

T = Temperatura.

NR = Número de Reflujos.

SMD = Cantidad de Semilla Desengrasada (torta).

Factores Incontrolables:

PA = Presión Atmosférica (esta es la presión del medio ambiente).

De igual manera se fijaron unos factores que no se modificaron y que permanecen


constantes dentro del proceso, estos fueron: temperatura que se mantuvo entre
78-79 ºC (temperatura de ebullición del etanol), presión (atmosférica de la ciudad
de Valledupar), número de reflujos de 5 y la cantidad de muestra que fue de 10 g.
Todo esto se fijo teniendo en cuenta la bibliografía consultada y pre-ensayos
realizados antes del proceso final.

55
Cuadro Nº 3. Factores Que Se Mantienen Constantes Durante El Proceso
FACTOR NIVELES

Temperatura (ºC) 78-79º

Número De Reflujos 5

Cantidad De Muestra (g) 10

Presión atmosférica (atm) 1

5.1.4. Diseño Experimental

Para llevar a cabo la estimación del porcentaje de extracto contenido en la semilla


desengrasada del árbol del Neem, se realizaron inicialmente pre-ensayos variando
el número de reflujos y la cantidad de muestra tratada. De estos pre-ensayos se
determinó que el número de reflujos adecuados para el proceso era de 5 y la
cantidad de muestra indicada era de 10 g; esto debido al comportamiento
presentado durante los tratamientos, puesto que fue en ese número de reflujos
donde se obtuvo la mayor extracción en la muestra con menor consumo del
solvente etanol.

Teniendo en cuenta lo anterior, para el desarrollo de la investigación se planteo un


diseño experimental unifactorial o experimento con un solo factor, con 7 niveles
del factor y tres repeticiones.

Cada uno de los tratamientos se realizó por triplicado para un total de 21


tratamientos. A cada tratamiento se le determinó el porcentaje de extracto
contenido en la semilla desengrasada del árbol del Neem, valores que fueron
registrados para realizar el diseño estadístico planteado.

56
Es claro también que las variables de interferencia como cantidad de solvente,
cantidad de muestra, etc., fueron controladas, manteniendo un procedimiento
estándar previamente determinado y cuidando que se cumplieran con las mínimas
variaciones posibles. Las muestras fueron tomadas con un muestreo estadístico
adecuado, como lo es el muestreo aleatorio el cual es una técnica utilizada
comúnmente en donde las muestras son seleccionadas de tal manera que todas
las combinaciones de unidades tienen la misma probabilidad de ser elegidas como
muestra, y mantenidas en iguales condiciones, para evitar posibles efectos
negativos en los resultados de la investigación.

Cuadro Nº 4. Factores Y Niveles Definitivos Utilizados En El Diseño


Cantidad De Etanol (ml) Número De Corrida Experimental

330 1 2 3

320 4 5 6

310 7 8 9

300 10 11 12

290 13 14 15

280 16 17 18

270 19 20 21

57
5.1.5. Técnicas Utilizadas

Para el cumplimiento de los objetivos propuestos en este proyecto se midieron los


siguientes parámetros, empleando y aplicando equipos y técnicas descritas a
continuación en el cuadro Nº 5.

Cuadro Nº 5. Técnicas Utilizadas

MEDICIÓN
PARÁMETRO MATERIALES Y
DESCRIPCIÓN MÉTODO
EQUIPO (S)

Estufa,
Contenido de agua desecador, Evaporación a
Humedad
en la muestra. balanza peso constante
%
analítica.

Contenido de Unidad de

proteína bruta digestión


Kjeldahl, Kjeldahl
Proteína presente en la
%
muestra. titulador
automático
Metrohm.

Aparato de
extracción
Soxhlet,

Contenido de balones,
% Soxhlet
Extracto etéreo grasa presente en estufa, hexano,
desecador,
la muestra.
balanza
analítica.

58
Matraz de
fondo plano de

Contenido total de 500 ml, Digestión acida


Fibra cruda % embudo,
fibra en la muestra. y básica
estufa, horno,
desecador,
balanza
analítica.

Contenido de Crisoles de
minerales totales o porcelana,
Céniza % material inorgánico Calcinación
mufla,
presente en la
desecador,
muestra. balanza
analítica.

Grado de acidez o pH Meter. Potenciometría


pH - basicidad de la
muestra

Cantidad de acido Titulador


Acidez % Titulación
presente en la automático.

muestra

Picnómetro,
Relación entre
balanza Picnometria
Masa de un cuerpo
Densidad g/ml
y el volumen que analítica.

ocupa

59
5.2. Procedimiento Experimental

5.2.1. Selección De La Muestra

Las muestras se tomaron de forma manual y de modo aleatorio del fruto del árbol
del Neem de tres zonas diferentes del departamento el Cesar:

Zona urbana de la ciudad de Valledupar.

Zona rural del municipio Agustín Codazzi.

Zona rural del municipio La Paz.

Figura Nº 9. Mapa Del Departamento Del Cesar Con Los Sitios De Recolección
De La Muestra

60
Estas muestras se tomaron de forma aleatoria, recogiendo los racimos enteros y
cortándolos desde la parte de conexión con la planta. La recolección dependió
mucho de las condiciones en las cuáles se encontraba el fruto. Se seleccionaron
aquellos frutos que no tenían daños físicos, ni signos de enfermedades, ni golpes,
ni magulladuras, con coloración externa homogénea y que se encontraran listos
para ser cosechados (los frutos que estuvieran maduros).

5.2.2. Acondicionamiento Del Fruto

En esta etapa se realizó un lavado de los frutos con agua potable para liberarlos
de residuos que afectaran o dañaran su estado físico y además se humedeció el
cuerpo carnoso o pulpa del fruto para facilitar el proceso de despulpado que se
realizó de forma manual.

Posteriormente la semilla se sometió a un proceso de secado a una temperatura


de 70ºC durante un tiempo de 6 horas, para una mejor conservación durante el
almacenamiento, así como eliminar la humedad presente y seguir con el desarrollo
de las próximas etapas. En este proceso de secado se obtuvieron porcentajes de
humedad (8 – 12%).

Esta semilla secada se sometió a molienda en un molino eléctrico y luego se


tamizo, obteniendo partículas homogéneas de un diámetro de 1 a 2 mm (Martínez
C. – Pavón).

5.2.3. Determinación De Características Fisicoquímicas De La Semilla Molida

En esta etapa, a la semilla molida, se le realizó un análisis proximal en el cual se


determinaron parámetros como: proteína, grasa, humedad, ceniza y calcio,
utilizando el método de análisis proximal de Weende; que consiste en el conjunto

61
de determinaciones que se realizan para describir la composición nutritiva de una
sustancia alimenticia que pueda reducirse al estado de harina 38. Además se
determino el pH, acidez, y la conductividad. Teniendo en cuenta las
recomendaciones reportadas por la A.O.A.C. (Association of Official Analytical
Chemists).

5.2.4. Extracción De Aceite

Una vez se determinaron las características de la semilla molida del árbol de


Neem se realizó la extracción del aceite tomando una cantidad de semilla molida
secada.

El método de extracción utilizado fue por solvente (hexano), a través de un


extractor soxhlet, esto basándonos en la teoría antes revisada (Espinosa R. y
Martínez J.).

En cuanto al montaje en el equipo soxhlet, este se fundamento en el principio de


transferencia de masa, debido a las propiedades del solvente y la muestra en
estudio, en el cuál el material oleaginoso entra en contacto con el disolvente a
través de un medio filtrante y ambas fases sólido – solvente, entran en contacto
intimo y el soluto o los solutos se difunden desde el sólido a la fase líquida, lo que
permite una separación de los componentes originales del sólido en este caso el
aceite, esto es lo que se conoce comúnmente con el nombre de lixiviación liquido-
sólido39.

Este proceso se manejo por medio de la Norma Técnica Colombia (NTC) 235 de
1998. El hexano es un reactivo de grado analítico y fue adquirido de Distrumedica
38
BERNAL, I. Análisis de alimentos. Bogotá: Guadalupe Ltda., 1994.
39
GEANKOPLIS, C. J. Procesos de Transporte y Operaciones Unitarias. 3ª Edición Compañía
Editorial Continental, S.A. de C.V. México, D.F. 1998. p. 461.

62
S.A. de marca MERCK. Este aceite fue extraído solo con fines de determinar las
características fisicoquímicas que presenta.

Para la determinación de los tiempos, la temperatura y la cantidad de reflujos se


siguió la recomendación expuesta en la tesis extracción y caracterización del
aceite crudo de higuerilla (ricino communis) hibrido variedad mamona brasilera,
cultivado en el copey - cesar, y a pre-ensayos realizados por los investigadores
en las instalaciones del Centro de Investigación para el Desarrollo de la Ingeniería
(C.I.D.I) de la Universidad Popular del Cesar.

La Figura Nº10, permite observar el montaje de extracción de grasa en el equipo


soxhlet que se empleó en el proceso.

Figura Nº 10. Montaje De Extracción De Grasa En Equipo Soxhlet

63
5.2.5. Determinación De Características Fisicoquímicas Del Aceite

Para esta fase del proyecto se determinaron las características fisicoquímicas del
aceite extraído anteriormente, realizándole análisis de densidad, color, acidez, pH
y punto de saponificación; Para estos análisis se tuvieron en cuenta las normas
NTC.336 de 1999, NTC.335 de 1998 y NTC.218 de 1999, y además las técnicas
recomendadas por la AOAC (Association of Official Analytical Chemists).

Figura Nº 11. Aceite Extraído De La Semilla Molida Del Árbol Del Neem

5.2.6. Determinación De Características Fisicoquímicas De La Torta

La semilla desengrasada o torta es el sólido restante de la extracción del aceite,


también fue analizada y los parámetros determinados fueron: pH, color, acidez,
alcalinidad, % de proteína, fibra y ceniza. El análisis de estos parámetros se
realizó como indicador de los cambios de la semilla durante todo el proceso de
extracción del extracto presente en la torta o semilla desengrasada y que tiene
propiedades como insecticida. La normalización de los parámetros fisicoquímicos
más importantes se llevo a cabo de acuerdo a las determinaciones según el
método determinado por la AOAC 981.12/90 y adaptado por Bernal 199340.

40
Ibid. p. 104-107.

64
5.2.7. Extracción Del Extracto Presente En La Torta

Después de haber extraído el aceite, de determinar sus características y las de la


torta, se procedió a extraer el extracto presente en la torta. Este procedimiento se
llevo a cabo utilizando el método propuesto por Larson (1985). Este método
plantea la utilización de un solvente (etanol) para arrastrar el extracto en el
extractor soxhlet. El montaje que se ejecuto en el equipo soxhlet es un principio de
transferencia de masa llamado lixiviación líquido-sólido. El etanol utilizado es de
grado comercial, con un porcentaje del 96% de pureza.

Se realizaron ensayos preliminares para determinar: la cantidad de muestra, la


cantidad de reflujos y la cantidad de solvente a utilizar. Buscando con esto la
optimización del proceso en cuanto a máxima extracción y bajo volumen de
solvente empleado. Estos porcentajes se determinaron llevando hasta
evaporación a Peso Constante. La Figura N° 12 permite visualizar el montaje
empleado en el proceso de Extracción Del Extracto Presente En La Torta.

Además se determinó por medio de un diseño experimental el efecto de las


variables consideradas durante el proceso de extracción.

Figura Nº 12. Extracción Del Extracto Presente En La Torta

65
Una vez se obtiene el extracto de la torta, esta queda convertida en un sólido o
bagazo al cual se llamó Sólido Agotado. A este sólido agotado, se le midieron
pH, porcentaje de fibra y de proteína.

5.2.8. Análisis Fisicoquímico Del Extracto De La Torta

Para la caracterización fisicoquímica del extracto de la torta o de la semilla


desengrasada, se empleó cromatografía de gases acoplada a masas. Este
análisis se realizó en el Laboratorio de Cromatografía de la Universidad Industrial
de Santander (UIS), utilizando la técnica de cromatografía de gases con detector
selectivo de masas (GC-MS), operando en el modo de barrido completo de radio
frecuencia (full scan).

Como complemento en la caracterización fisicoquímica, también se realizó un


análisis para determinar la cantidad de Azadiractina presente en el extracto
obtenido de la semilla desengrasada del árbol del Neem. Este análisis fue
realizado con la técnica de Cromatografía Líquida de alta resolución HPCL en la
Universidad Nacional De Colombia Sede Medellín.

Además se le realizó al extracto análisis de densidad, acidez, pH, color,


alcalinidad, teniendo en cuenta las normas técnicas recomendadas por la AOAC
(Association of Official Analytical Chemists).

66
6. RESULTADOS Y ANÁLISIS

En esta sección se presentan los resultados de la metodología llevada a cabo en


la ejecución del proyecto, y se hace un análisis de estos.

6.1. Caracterización Proximal De La Semilla Molida Del Árbol Del Neem

En el Cuadro Nº 6, se muestran los resultados de las características


dimensionales realizadas a la semilla. Cada una de las pruebas se realizó
teniendo en cuenta las respectivas técnicas.

Cuadro Nº 6. Características Dimensionales De La Semilla Del Neem

Semillas

Masa (g) Largo (cm) Ancho (cm)

Promedio 0.85 1.5 0.65

Fuente: Investigadores, 2008.

Para la caracterización de la semilla fue necesario un pretratamiento del fruto,


despulpado, secado y una posterior molienda y tamizado, para poder tener
partículas homogéneas (1 – 2 mm), lo cual permite que el contacto con el solvente
optimice la extracción.

En el Cuadro Nº 7, se muestran los resultados de la caracterización fisicoquímica


que se le realizo a la semilla Molida del árbol el Neem. Todos los análisis se
realizaron por triplicado, en el Centro de Investigación para el Desarrollo de la
Ingeniería (C.I.D.I) de la Universidad Popular del Cesar. Los análisis realizados

67
fueron: humedad, ceniza, proteína bruta, extracto etéreo, fibra cruda y calcio.
Además de esto se le realizaron otros análisis de pH, acidez y conductividad.

Cuadro Nº 7. Características Fisicoquímicas De La Semilla Molida Del Árbol Del


Neem

PARÁMETRO PROMEDIO

% Humedad 8.50

% Proteína 19.95

% Extracto Etéreo 18.02

% Ceniza 3.03

% Fibra Bruta 24.81

% Acidez (Acido
0.20
Oleico)

pH 5.66

Conductividad (µs/cm) 1730

Calcio (ppm) 1.914

Fuente: Investigadores

Los datos obtenidos en la caracterización fisicoquímica de la semilla molida del


árbol del Neem, presentaron un alto contenido de proteína y fibra bruta, resultado
que al ser comparado con otros trabajos realizados, en Venezuela por Carlos
Romero y Maritza Vargas en la Universidad de Carabobo-Venezuela, mantienen
una concordancia en las concentraciones obtenidas. De igual forma, en los demás

68
parámetros evaluados se encontraron diferencias y similitudes con los rangos
reportados en la literatura. Es así como, los porcentajes de ceniza y de extracto
etéreo, fueron más bajos, respecto a los reportados por Romero C. y Vargas M.
en 2005, lo que se atribuye a las condiciones de trópico-seco que presenta
nuestra región y a la textura del suelo. En cuanto al porcentaje de humedad, este
se disminuyo para tener mejores condiciones de trabajo durante el proceso y en el
almacenamiento.

6.2. Extracción Y Características Fisicoquímicas Del Aceite De La Semilla


Molida Del Árbol Del Neem

Para la extracción y caracterización fisicoquímica del aceite de la semilla molida


del árbol del Neem se describieron los resultados obtenidos a partir del desarrollo
experimental de este trabajo y que permitieron establecer una optimización del
proceso de extracción de aceite de la semilla molida del árbol del Neem.

Con esta extracción se pudo observar y determinar por medio de pre-ensayos y


otros trabajos realizados de extracción de aceite de semillas oleaginosas que el
número indicado de reflujos para el experimento de extracción en el equipo soxhlet
era cuatro, teniendo constante la cantidad de muestra (40 g) y la temperatura (60 -
63ºC). Para cada reflujo el tiempo de extracción fue de aproximadamente de 90
minutos; esto nos muestra la influencia en el número de reflujos en el porcentaje
de grasa extraído.

Se extrajo la cantidad necesaria de aceite para determinar cada una de las


características fisicoquímicas.

En el Cuadro Nº 8, se presenta un paralelo de comparación en el cual aparecen


registrados los análisis fisicoquímicos que se le realizaron al aceite en este estudio

69
comparándolos con los obtenidos por Romero C. y Vargas M. en la Universidad de
Carabobo-Venezuela en 2005.

Cuadro Nº 8. Características Fisicoquímicas Del Aceite De La Semilla Del Árbol


Del Neem

PROMEDIO
PROMEDIO
PARÁMETRO (Romero C. y
(Investigadores,
Vargas M. en
2008)
2005)

Densidad (g/cm3) 0.86 0.94

% Acidez (Ácido 0.44 0.22


Oleico)

Punto De 191.18 195


Saponificación

Color Amarillo Amarillo

pH 5.14 -

Se puede analizar que los resultados obtenidos tienen muchas similitudes con los
obtenidos en Venezuela por Romero C. y Vargas M. en 2005. El valor de acidez
establece la cantidad de ácidos grasos originados por la lipólisis de los triglicéridos
que forman al aceite; en este sentido, se afirma que el aceite de Neem evaluado
no ha experimentado hidrólisis acentuada, por lo que la presencia de ácidos
grasos libres es alta, lo cual está relacionado con el bajo contenido de humedad
de la semilla y del buen proceso realizado. El valor de acidez libre (0,44 g de ácido

70
oleico/100 g de aceite) estuvo dentro de los límites establecidos por la Normativa
Técnica Colombiana (NTC) para aceites vegetales. En cuanto a los valores de
punto de saponificación, densidad y color son bastante parecidos a los reportados
por la literatura sobre todo por Romero C. y Vargas M. en 2005.

6.3. Características Fisicoquímicas De La Semilla Desengrasada O Torta Del


Árbol Del Neem

Para la determinación de las características fisicoquímicas de la Torta de la


semilla del árbol del Neem se tuvieron en cuenta los parámetros más importantes,
arrojándonos que la Torta de semillas del Neem, tienen un alto porcentaje de
proteína y fibra Bruta, lo que es muy interesante ya que podría ser utilizada como
un subproducto nutritivo. Los otros parámetros analizados, observados en el
Cuadro Nº 9, nos arrojaron condiciones aceptables de la Torta o semilla
desengrasada, observando que la acidez disminuyo con relación a la semilla sin
desengrasar, esto por el hecho que ya el aceite no se encuentra presente y este
contiene altos índices de acidez. El porcentaje de ceniza aumento un poco con
relación a la semilla sin desengrasar, lo que nos indica que hay mas concentración
de minerales; por otro lado el pH disminuyo porque ya no hay aceite en la semilla
molida.

Cuadro Nº 9. Características Fisicoquímicas De La Semilla Desengrasada o


Torta Del Árbol Del Neem

PARÁMETRO PROMEDIO

% Proteína 21.70

% Fibra Bruta 32.07

71
Alcalinidad (ppm Ca) 11.71

% Cenizas 3.28

% Acidez (Ácido 0.10


Oleico)

pH 5.23

Color Marrón

Calcio (ppm) 1.886

Fuente: Investigadores, 2008.

6.4. Extracción Del Extracto Presente En La Torta

A continuación se detallan los tratamientos ejecutados a la semilla molida


desengrasada del árbol del Neem. Se mantuvieron constantes la temperatura, la
cantidad de muestra y el número de reflujos.

Cuadro Nº 10. Tratamientos A La Semilla Molida Desengrasada Del Árbol Del


Neem

Cantidad De Etanol
Secuencia Número De Corrida
(ml)

1 4 300

2 17 310

3 9 320

72
4 13 280

5 1 330

6 18 300

7 7 270

8 5 290

9 10 310

10 20 280

11 19 290

12 15 330

13 2 320

14 11 300

15 21 270

16 3 310

17 16 320

18 12 290

19 6 280

20 8 330

21 14 270

73
En el siguiente cuadro se observa cada uno de los resultados de los tratamientos
que se realizaron para la obtención del extracto presente en la semilla
desengrasada del árbol del Neem. También se observa que el mayor porcentaje
de extracto se obtiene con 300 ml de etanol.

Cuadro Nº 11. Datos Finales Del Experimento Del Porcentaje De Extracto


Presente En La Semilla Desengrasada Del Árbol Del Neem

Cantidad De Etanol Observaciones


(ml)
1 2 3 Total Promedio

330 23.97 23.92 23.91 71,80 23,9333

320 25,03 25.10 24.98 75,11 25,0367

310 26.56 26.80 26.67 80,03 26,6767

300 28.89 28.85 28.83 86,57 28,8567

290 25.68 25.78 25.70 76,16 25,72

280 23.77 23.80 23.76 71,33 23,7767

270 22.46 22.39 22.42 67,26 22,4233

528,26 25.2033

6.4.1. Análisis De Varianza Para El Diseño Unifactorial

Con la ayuda del software estadístico Statgraphics 5.1, se realizó el análisis de


varianza ANOVA para el diseño unifactorial con tres repeticiones planteado.

74
Cuadro Nº 12. Análisis De Varianza Del Porcentaje De Extracto Presente En La
Torta

Fuente Suma De Grados Media De


Fo F Tabla
De Libertad Cuadrados
Cuadrados
Variación

CE 81,5669 6 13,5945 3884,14 0,0000

Error 0,049 14 0,0035

Total 81,6159 20

Del análisis de varianza se puede observar claramente que la media de los


cuadrados entre tratamientos (13,5945) es mucho mayor que la media de
cuadrados dentro de los tratamientos (0,0035), lo que indica que es improbable
que las medias de tratamientos sean iguales, por tal razón al calcular Fo y
compararla con las F de tabla, esto es 3884,14 > 0,0000 al 5%, lo que hace
concluir que existen diferencias significativas entre las medias de las seis variables
al 95% de confiabilidad.

Para determinar exactamente cuál de ellas es diferente, se realizó una


comparación entre las medias de los tratamientos por el método de mínima
diferencia significativa, ya que es una prueba muy eficiente para detectar
diferencias verdaderas en las medias.

75
Cuadro Nº 13. Método De La Mínima Diferencia Significativa (LSD)

Método: 95,0 % LSD

% Extracto Datos Media Grupos Homogéneos

270 3 22,4233 X

280 3 23,7767 X

330 3 23,9333 X

320 3 25,0367 X

290 3 25,72 X

310 3 26,6767 X

300 3 28.8567 X

Contrastes Diferencia Limites +/-

330 – 320 *-1,10333 0,103603

330 – 310 *-2,74333 0,103603

330 – 300 *-4,92333 0,103603

330 – 290 *-1,78667 0,103603

330 – 280 *0,156667 0,103603

330 – 270 *1,51 0,103603

320 – 310 *-1,64 0,103603

320 – 300 *-3,82 0,103603

320 – 290 *-0,683333 0,103603

320 – 280 *1,26 0,103603

76
320 – 270 *2,61333 0,103603

310 – 300 *-2,18 0,103603

310 – 290 *0,956667 0,103603

310 – 280 *2,9 0,103603

310 – 270 *4,25333 0,103603

300 – 290 *3,13667 0,103603

300 – 280 *5,08 0,103603

300 – 270 *6,43333 0,103603

290 – 280 *1,94333 0,103603

290 – 270 *3,29667 0,103603

280 – 270 *1,35333 0,103603

* Denota Una Diferencia Significativa.

En el cuadro Nº 13 se muestra un procedimiento de comparación múltiple para


determinar las medias que son significativamente diferentes unas de otras. La
mitad inferior de la salida muestra la diferencia estimada entre cada par de
medias. El asterisco (*) que se encuentra al lado de los 21 pares, indica que éstos
muestran diferencias estadísticamente significativas a un nivel de confianza
95,0%. En la parte superior del cuadro, se identifican 7 grupos no homogéneos
según la alineación del signo X en la columna. El método actualmente utilizado
para discernir entre las medias es el procedimiento de las menores diferencias
significativas de Fisher (LSD). Con este método, hay un 5,0% de riesgo de
considerar cada par de medias como significativamente diferentes cuando la
diferencia real es igual a 0.

77
Figura Nº 13. Graficas De Las Medias Al 95% Con LDS

En la Anterior Figura se puede observar de una manera ilustrada que


evidentemente los porcentajes de Extracto etanólico de la semilla desengrasada
del árbol del Neem varían uno con respecto del otro. Cuando la cantidad de etanol
llega a un punto de 300ml (punto óptimo), es en donde la cantidad de extracto
soluble en etanol se satura o el solvente llega hasta la máxima capacidad de
adsorber el extracto y por ello cuando se le adiciona más cantidad de etanol este
comienza a disminuir ya que no tiene más extracto que solubilizar.

6.4.2. Método De Análisis De Media

Utilizando la tabla de medias se determino el error estándar entre estas para


conocer los límites más bajos y más altos alrededor de la media de cada
tratamiento. En el siguiente cuadro se muestra estos datos:

78
Cuadro Nº 14. Medias Con El 95% De Confianza Entre Intervalos LSD

Método: 95,0 % LSD

Error Estándar

Datos Frecuencia Media (s Agrupada) Limite Inf. Limite Sup.

330 3 23,9333 0,054292 23,851 24,0157

320 3 25,0367 0,054292 24,9543 25,119

310 3 26,6767 0,054292 26,5943 26,759

300 3 28,8567 0,054292 28,7743 28,939

290 3 25,72 0,054292 25,6377 25,8023

280 3 23,7767 0,054292 23,6943 23,859

270 3 22,5367 0,054292 22,4543 22,619

Total 21 25,2195

En este cuadro se muestra la media para cada columna de datos. También


muestra el error estándar de cada media, que es la medida de su variabilidad en la
muestra. El error estándar (s) es el resultado de dividir la desviación típica
agrupada por la raíz cuadrada del número de observaciones en cada nivel. De
esta tabla se puede observar los límites inferiores y superiores que presentan los
tratamientos de acuerdo al valor calculado alrededor de su media. Los intervalos
mostrados actualmente se basan en el procedimiento de las menores diferencias
significativas de Fisher (LSD). Se construyen de tal manera que si dos medias
son iguales, sus intervalos tendrá un intervalo de confianza del 95,0%.

79
Figura Nº 14. Análisis De Las Medias

En la Figura Nº 14 se puede observar como las medias de los tratamientos con


330ml, 320ml, 280ml y 270ml de cantidad de etanol se encuentran por debajo de
la media de las medias de los tratamientos, dejando ver de una manera mas
detallada que el tratamiento con 310ml, 300ml y 290ml de cantidad de Etanol son
los que producen un mejor resultado, estando estos distante de los otros
resultados en especial con el tratamiento de 300ml, además en las rayas rojas se
ven representados los limites máximos y mínimos de la media de las medias y aun
la media del tratamiento con 300ml es superior al limite máximo calculado (28.85 >
25.37).

Por lo tanto, teniendo en cuenta los resultados arrojados por el diseño y ensayos
realizados, se escogió trabajar con 300ml de etanol en la cámara de reflujo,
manteniendo constante la cantidad de muestra y temperatura. Al extracto obtenido
se le realizaron diferentes determinaciones fisicoquímicas y un perfil de
componentes. También se le realizo una determinación de la cantidad de
Azadiractina (Compuesto activo del Neem) por medio de cromatografía liquida de
alta resolución (HPLC).

80
6.5. Características Fisicoquímicas Del Extracto Presente En La Torta

En el análisis realizado por Cromatografía de Gases (GC) se identificaron los


compuestos presentes con base en sus espectros de masas, usando la base de
datos de NIST, Wiley y Adams. En el Cuadro Nº 10 se reportan la identificación y
la cantidad relativa (%) de los componentes presentes en el extracto etanólico de
la semilla desengrasada del árbol del Neem. Este extracto también fue analizado
en modo de barrido completo de radiofrecuencia (full scan).

Cuadro Nº 15. Cantidad Relativa (%) De Los Componentes Presentes En El


Extracto Etanólico De La Semilla Del Árbol Del Neem

Nº tR, Cantidad Relativa


Identificación
Pico min %

1 11,27 2,3 - Butanodiol 2,60

2 12,99 Furfural 2,72

3 26,29 3-Hidroxi-2,3-dihidromaltol 9,09

4 29,50 5-Hidroximetil-2-furancarboxaldehído 77,10

5 50,73 Ácido hexadecanoico 1,26

Ácido octadecanoico + hexadecanoato


6 51,46 4,26
de etilo

7 54,29 Ácido octadecenoico 2,96

81
El análisis realizado por Cromatografía Líquida de alta resolución HPCL identificó
el contenido de azadiractina expresado en porcentaje. Para esta identificación el
Laboratorio de Análisis Instrumental de la Universidad Nacional De Colombia Sede
Medellín utilizó dos metodologías. El método 1 fue tomado de la tesis de maestría
“Efecto antialimentario de los extractos de suspensiones celulares de
Azadirachta indica sobre Spodoptera frugiperda J.E. Smith en condiciones
de laboratorio” Jacqueline Capataz Tafur et al y el método 2 fue tomado del
artículo “Determinación de azadirachtina por cromatografía líquida de alta
eficiencia (HPLC) en semillas del árbol del Neem (A. indica) cultivadas en
Colombia”. Vitae. Revista de la Facultad de Química Farmacéutica. Universidad
de Antioquia. Vol 9 Número 1. Año 2002. Págs. 59-63.

De acuerdo al método 1, la Azadirachtina presente debía aparecer a los 4.8


minutos y según el método 2 ésta debía salir a los 9.14 minutos. El cromatograma
1 presento que al inicio del informe no registra un pico característico en el tiempo
estipulado. Esto debido a que no se había completado la extracción total de
Azadiractina del extracto enviado. Por consiguiente fue necesario que el
laboratorio completara la extracción utilizando como base el artículo
“Determinación de azadirachtina por cromatografía líquida de alta eficiencia
(HPLC) en semillas del árbol del Neem (A. indica) cultivadas en Colombia”.
Vitae. Revista de la Facultad de Química Farmacéutica. Universidad de Antioquia.
Vol 9 Número 1. Año 2002. Págs. 59-63. Lo anterior permitió que el cromatograma
2 mostrara un pico característico de la Azadirachtina proporcionando un
porcentaje de área de 20.1620% y un contenido de Azadirachtina expresada en un
porcentaje del metabolito activo del 0.25% (± 0.01%).

82
Figura Nº 15. Cromatograma Para Extracto De Semilla Del Árbol Del Neem
Empleando El Método 2.

El intervalo de concentración de Azadiractina en las muestras analizadas de


semilla de Neem en el departamento del Cesar es inferior si se compara con datos
reportados41 de la localidad de Girardot (0.29%), Indonesia (0.47%), Nicaragua
(0.47%), Togo (0.40%) e India (0.35%) y es superior a regiones como Nigeria
(0.15%) y Sudan (0.19%).

También se realizaron pruebas fisicoquímicas al extracto obtenido de la Torta o


semilla desengrasada de Neem. Estos resultados se muestran el siguiente cuadro:

41
Schmutterer H. Natural Pesticidas From The Neem Tree (Azadirachta Indica A. Juss) and Other
Tropical Plants. Third International Neem Conference. Nairobi, Kenya. 1986, Pag. 157 – 160.

83
Cuadro Nº 16. Características Fisicoquímicas Del Extracto Presente En La Torta

PARÁMETRO PROMEDIO

Densidad (g/cm3) 1.135

% Acidez (Ácido 3.843


Oleico)

Alcalinidad (ppm Ca) 20.94

pH 4.51

Color Vinotinto

Fuente: Investigadores

6.6. Características Fisicoquímicas Del Sólido Agotado

El sólido agotado es aquel bagazo que queda después de haber extraído el aceite
y el extracto de las semillas molidas del árbol del Neem. A este bagazo se le
realizaron una serie de análisis para determinar que se podría hacer
agroindustrialmente con él; arrojándonos que este contiene altos porcentajes de
fibra y proteína lo que nos indica que podría ser utilizado para realizar un
subproducto nutricional para la industria animal.

En cuanto al análisis de pH este se presento más alto que el de la semilla molida y


Torta, lo que es bueno ya que se puede trabajar con concentraciones de
hidrógenos que tienden más a la neutralidad. En el cuadro No. 15 se presentan
algunas características analizadas en el sólido agotado.

84
Cuadro Nº 17. Características Fisicoquímicas Del Sólido Agotado

PARÁMETRO PROMEDIO

% Fibra Bruta 42.69

% Proteína 20.3

pH 5.90

Fuente: Investigadores

85
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

En este trabajo se obtuvieron datos experimentales de las semillas del árbol


del Neem sembrados en los municipios de Valledupar, La Paz y Agustín
Codazzi del departamento del Cesar, como parte del deseo de estimular el
aprovechamiento de la naturaleza como equilibrador de ella misma,
estableciendo información previa que permita mirar la viabilidad de la
utilización de este árbol como fuente natural para el desarrollo como
biocida.

El fruto del árbol de Neem presento características dimensionales similares


a las encontradas en otras partes del mundo. El estudio realizado se
presento con el fin de conocer con claridad las diferencias que pudieran
tener estos frutos con relación a los de otras partes.

El buen tratamiento en el almacenaje de la semilla molida contribuye a


optimizar el desarrollo de la investigación, pues da una mejor confiabilidad
y exactitud en las mediciones del proceso, cuyos resultados así reflejan con
claridad la calidad de estos estudios.

Por medio de la determinación de las características fisicoquímicas de la


semilla del árbol del Neem se pudo establecer que los resultados obtenidos
se encuentran dentro de los datos reportados de C. Romero y M. Vargas en
2005, es decir, no presentaron diferencias significativas, con la excepción
de los porcentajes de extracto etéreo y cenizas. No obstante es primordial
observar que estas características fisicoquímicas dependen mucho del tipo
de suelo, medio ambiente y climatología que presente la zona de estudio.

86
Por otro lado la extracción del aceite por medio de solvente (hexano) se
realizó a través de un sistema que presenta un montaje en el equipo soxhlet
en el que se pueden controlar sin ningún problema algunas variables que
afectan este tipo de extracción (Cantidad de Muestra, Número de reflujos y
Temperatura); sin embargo, se recomienda otros sistemas en los que la
cantidad de muestra no este en contacto con el solvente (Anhídrido
Carbónico (C02) con presión) para no obtener en el aceite y la semilla
desengrasada o torta residuos de solvente.

El aceite presento características similares a los de otros trabajos de


investigación realizados, pero en cuanto a su rendimiento este disminuyo,
presentando un porcentaje de aceite del 18.02%. En comparación a
extracciones realizadas a otras semillas oleaginosas este porcentaje es
alto, lo que hace viable la utilización del aceite para el aprovechamiento
agroindustrial. El bajo rendimiento de esta semilla en la zona de estudio
puede deberse a causas climatológicas y al tipo de suelo que presenta esta
zona de nuestro país.

Se presenta el aceite del árbol del Neem, a través de las pruebas


fisicoquímicas realizadas, como una alternativa para un potencial uso en la
industria de los jabones, por el alto punto de saponificación que este aceite
presenta.

La semilla desengrasada o torta presenta altos porcentajes de proteína


(21.7%) y fibra cruda (42.69%). Se puede evaluar el incluirla en las dietas
para animales, aves y medir sus efectos en el desarrollo de estos. Es fácil
almacenarla y su calidad no se pierde en la misma, tampoco es susceptible
de ser atacado por hongos.

87
Para la extracción del extracto presente en la semilla desengrasada o torta
del árbol del Neem por medio de solvente etanólico, se presenta un sistema
sencillo en el que se pueden controlar sin ningún problema la mayoría de
variables que afectan este tipo de extracción (Cantidad de muestra,
cantidad de solvente, numero de reflujos y temperatura); sin embargo, se
recomienda otros sistemas en los que se puedan controlar de igual manera
otras variables (agitación, presión) que puedan aumentar la velocidad de
extracción y el rendimiento del extracto etanólico.

En cuanto al rendimiento del extracto etanólico obtenido de la torta por


medio del montaje en el equipo soxhlet, se pudo observar que trabajar con
cantidades de etanol al 96% de 310ml y 290ml pueden ser rentable dado
las grandes cantidades de extracto que se pueden obtener, sin embargo se
puede concluir que lo ideal para trabajar con el montaje en el equipo soxhlet
es con una cantidad de etanol al 96% de 300ml con 10g de muestra. Se
recomienda trabajar con temperaturas que no sean superiores al punto de
ebullición del etanol, ya que esto puede incurrir en daños en las sustancias
activas que el extracto presenta.

La concentración de la cantidad de Azadiractina en el departamento del


Cesar fue de 0.25%, intervalo de concentración mayor si se compara con
datos reportados en regiones como Nigeria (0.15%), y Sudan (0.19%), y es
inferior a Indonesia (0.47%), Nicaragua (0.47%), Togo (0.40%) e India
(0.35%). En Colombia – Girardot, se obtuvo una concentración del 0.29%.
Esto se debe a las condiciones climáticas y propiedades del suelo de un
nuestra región, por otro lado se recomienda que se estudie la cantidad de
Azadiractina que presentan estas semillas de otras partes del país y que se
apliquen a nivel de campo observar su efecto antialimentario sobre
diferentes insectos y plagas de cultivos.

88
Por otra parte el estado de madurez en que se recolecte el fruto es ideal
para una buena producción de Azadiractina, por eso se deben recolectar
los frutos más o menos a los 120 a 130 días después de la floración cuando
estos completen su estado de madurez fisiológica, ya que es aquí donde se
produce mayor cantidad de este compuesto activo.

En futuras investigaciones se recomienda hacer pruebas de campo, para


ver el efecto de los extractos etanolicos en condiciones reales de
aplicación. También se sugiere continuar con la búsqueda de los
compuestos químicos en extractos de las semillas de árbol del Neem
(Azadirachta indica), a fin de incluirlos en control integrado de plagas.

89
8. BIBLIOGRAFÍA

AHMED, S., C. MITCHELL, Y SAXENA R. Renewable Resource Utilization For


Agriculture And Rural Development And Environmental Protection: Use Of
Indigenous Plant Material For Pest Control By Limited Resource Farmers. Planning
Wkshp, Botanical pest control proyect. Int. Rice Res. Inst. Los Baños, Philippines.
1984.

ANGULO, M., GARDEA, A., VELEZ, R., GARCIA, R., CARRILLO, A. Y PARTIDA,
J. Contenido De Azadiractina A En Semillas De Nim (Azadirachta Indica)
Colectadas En Silanoa – México. Revista fitotecnia Mexicana, Chapingo, México.
2004.

ANÓNIMO. Azadirachta Indica-Neem [En Línea]. Dirección URL:


<http://www.geocites.com/Rain Forest/4075/ publicaciones. htm#Nim.> [Consulta:
01 agosto 2008].

BARRETO, C. Y OLIVOS, B. Validación Integral Del Sistema Agroforestal Con


Árbol Del Nim En La Vereda Guabinal Cerro, Girardot- Cundinamarca. Universidad
Piloto de Colombia y Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Bogotá, D.
C., 2005.

BERNAL DE RAMÍREZ, Inés. Análisis de Alimentos. Academia Colombiana de


Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Bogota, Colombia 1993.

BETANCOURT, A. Paraíso De La India (Azadirachta Indica Juss). Desarrollo


Alcanzado En Cuba Por Dicha Especie. Revista Baracoa. 2(3-4): 17-23. 1972.

BLUM, M. Y M. ROITBERG. Natural Insect Repellent Formula And Method Of


Making Same. U.S. Patent 5,885,600. 1999.

90
BRIMNER, T. Y G. BOLAND. A Review Of The Non-Target Effects Of Fungi Used
To Biologically Control Plant Diseases. Agriculture, Ecosystems And Environment.
2003.

CHADHA, S.S. Use Of Neem (Azadirachta Indica Juss.) Seed As A Feeding


Inhibitor Against Antigastra Catalaunalis Dupon. (Lepidoptera: Pyralidae), A
Sesame (Sesamum Indicum L.) Pest In Nigeria. East African Agricultural And
Forestry Journal. p. 257-262. 1977.

CISNEROS F. Control De Plagas Agrícolas. 1995. Disponible en


http://www.avocadosou rce.com/books/CisnerosFausto1995/CPA10PG.pdf.

DIBERT, K., CROS, E. Y J. ANDRÍEU. Solvent Extraction Of Oil And Chlorogenic


Acid From Green Coffee Part I: Equilibrium Data. Journal Of Food Engineering,
Vol. 10, No. 01, pp. 1-11.1989.

ESPINOSA, R. Y MARTÍNEZ, J. Diagramas De Equilibrio Para La Extracción Con


Solvente De Aceite E Insecticida De Semilla Molida De Nim. 2006.

LARSON, R.O. Stable Anti-Pest Neem Seed Extract. U. S. Patent 4,556,562.


1985.

MEJIA, J. Alelopatìa Y Productos Botánicos. Universidad Jorge Tadeo Lozano de


Bogotá. 2003.

NATIONAL RESEARCH COUNCIL. NEEM: A Tree For Solving Global Problems.


National Academy Press. Washington DC. USA. 1992.

OSUNA, L.E. Producción De Plantas Y Establecimiento Y Manejo De Plantaciones


De Neem (Azadirachta Indica A. Juss). Instituto Nacional de Investigaciones

91
Forestales Agrícolas y Pecuarias-INIFAP. Centro de Investigación RegionaL del
Noroeste-CIRNO. Campo Experimental Todos Santos-CETS. Folleto Técnico
Núm. 5. México.

PARROTTA, J y CHATURVEDI, A. Azadirachta Indica. A. Juss. Neem, Margoso


[en línea]. Dirección URL: < http://www.fs.fed.us/global/iitf/Azadirachtaindica.pdf>.
[Consulta: 02 agosto 2008].

PASCUAL, M. Evaluación De La Actividad Insecticida De Extractos Vegetales De


Chrysanthemum Coronarium L. Bol San Veg Plagas.1996.

PICANÇO M; A.P. FILHO; G. L. D. LEITE Y A. L. MATIOLI. Avaliação De Produtos


Não Convencionais Para O Controle De Tuta Absoluta Em Tomate. Manejo
Integrado de Plagas (Costa Rica). 1999.

RAMOS, C., GONZÁLES, V., SOTO, C., RODRÍGUEZ, D., MARK, E. Variación En
Contenido De Azadiractina En Frutos De Margosa Durante Su Desarrollo.
Sociedad Mexicana de fitogenetica. 2004. p. 81- 85.

ROLAND, M.T. Y J.J. BLOUIN. Co-extraction of Azadirachtin and Neem Oil. U. S.


Patent 5,503,837. 1996.

ROMERO C. Y VARGAS M. Extracción Del Aceite De La Semilla De Neem


(Azadirachta Indica).Departamento De Química Tecnológica, Facultad de
Ingeniería, Universidad de Carabobo. Naguanagua. Venezuela. 2005.

SAXENA, R. Neem In Sustainable Agriculture With Special Reference To Ist Role


In IPM. In Neem Applications In Agriculture, Healh Care And Environment.
Proceedings And Extended Summaries. International Conference On Neem -
Setting Goals For A Global Vision. Neem Foundation. Mumbai, India. 1-17. 1998.

92
Schmutterer, H. y R.P. Singh. List Of Insect Pest Susceptible To Neem Products.
En The Neem Three Azadirachta Indica A. Juss. And Other Meliaceous Plants, p.
326-365. 1995.

SODEPAZ. PROYECTO INTRODUCCIÓN DEL ÁRBOL DEL NIM EN CUBA.


http://www.sodepaz.org/nim/ en GRUPO DE INVESTIGACIÓN YAGUA. 2003.

STONEY, C. Una Guía Útil Para Los Árboles De Uso Múltiple. Uso Del Neem
Como Agente De Control Biológico De Plagas. Program Officer y Erin Hughes,
Program Associate Winrock Internacional.
http://www.winrock.org/forestry/factpub/spusonim.htm. Hoja Informativa,
FACT1998-045, Junio 1998.

SHIVA, V. El Nim De La India, Una Historia De Biopirateria.


http://www.revistadelsur.org.uy/revista.051/Tapa03.html. Revista del sur, diciembre
de 1995.

SELLO AMBIENTAL COLOMBIANO. http://www.minambiente.gov.co/noticias.


Noviembre 2006.

WARTHEN, J.D., JR. Azadirachta Indica: A Source Of Insect Feeding Inhibitors


And Growth Regulators. Agricultural Reviews And Manuals ARM-NE-4.
Washington, DC: U.S. Department of Agriculture. p. 21. 1979.

93
ANEXOS

94
ANEXO A. Fotografías De Todo El Proceso De Caracterización De Los
Extractos De La Semilla Del Árbol Del Neem En El Departamento Del Cesar

95
96
97
98
99
Anexo B. Determinación De La Composición Química De Un Extracto
Etanólico, Por Cromatografía De Gases Con Detector Selectivo De Masas
(GC-MC)

100
101
102
103
104
105
ANEXO C. Determinación Azadiractina Del Extracto Etanólico, Por
Cromatografía Líquida De Alta Resolución HPCL

106
107
108
109
Anexo D. Nombre Químico (IUPAC), Estructura, Uso Y Toxicidad Para El
Organismo Y El Medio Ambiente

110

You might also like