Perubahan metabolik kulit psoriasis dengan perawatan kortikosteroid topikal Abstrak Latar Belakang: spektroskopi MR biopsi utuh dapat

memberikan gambaran metabolisme jaringan untuk diselidiki. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengeksplorasi pola metabolisme kulit yang tidak terlibat tidak terlibat, kulit psoriasis, kulit psoriatik yang diobati dengan kortikosteroid. Metode: Tiga jenis sampel biopsi kulit yang dipotong dari pasien dengan psoriasis (N = 10). Lesi dievaluasi secara klinis, dan biopsi jaringan yang dipotong dan dianalisis oleh satu dimensi spektroskopi 1H MR. Tingkat relatif dihitung untuk sembilan metabolit jaringan. Selanjutnya, jumlah relatif dari epidermis, dermis dan jaringan subkutan dicetak oleh evaluasi histopatologi bagian HES bernoda. Hasil: Tujuh dari 10 pasien mengalami penurunan setidaknya 40% dalam skor klinis setelah pengobatan kortikosteroid. Biopsi jaringan dari kulit psoriasis mengandung tingkat yang lebih rendah dari metabolit myo-inositol dan glukosa, dan tingkat yang lebih tinggi kolin dan taurin dibandingkan dengan kulit tidak terlibat. Dalam kortikosteroid diobati kulit psoriasis, kadar glukosa jaringan, myo-inositol, GPC dan glisin meningkat, sedangkan kolin berkurang, pada pasien dengan efek terapi yang baik. Tingkat jaringan ini menjadi lebih mirip dengan tingkat metabolit di kulit tidak terlibat. Kesimpulan: Metode MR ini menunjukkan bahwa metabolisme pada kulit psoriatik menjadi mirip dengan kulit tidak terlibat setelah pengobatan kortikosteroid efektif. MR profiling dari lesi kulit mencerminkan perubahan metabolik yang berhubungan dengan patogenesis dan pengobatan efek. Kata kunci: Tissue, Metabolit, Kortikosteroid, pengobatan Psoriasis, spektroskopi MR

Latar Belakang Plak Psoriasis adalah penyakit kekebalan-dimediasi umum yang mempengaruhi kulit dan sendi. Penyebab penyakit ini masih belum diketahui. Banyak pasien memiliki kecenderungan genetik. Penyakit ini mempengaruhi sekitar 2-3% dari populasi di seluruh dunia. Secara klinis, plak psoriatik ditandai dengan lesi eritematosa berbatas tegas dengan sisik keperakan tebal, sering didistribusikan dalam pola simetris. Histopatologi ada

hyperproliferation sel epidermal dan infiltrasi sel radang [1]. Ada peningkatan kesadaran bahwa psoriasis adalah komorbiditas substansial multisistem, terutama penyakit

kardiovaskular dan sindrom metabolik [2]. Dalam hal ini sering kambuh yang membutuhkan pengobatan jangka panjang. Berbagai pilihan pengobatan topikal dan sistemik ada untuk lesi psoriasis. Kortikosteroid topikal tetap sebagai gold standar, baik digunakan sebagai monoterapi atau kombinasi dengan terapi lainnya. Agen ini mengerahkan anti-inflamasi dan imunosupresif efek oleh stimulasi atau penghambatan gen yang terlibat dalam jalur inflamasi, termasuk penghambatan produksi sitokin dan pengurangan mediator peradangan seperti prostaglandin dan leucotrienes, penghambatan proliferasi sel T dan kekebalan tergantung Tcell , dan penekanan oleh fibroblast dan fungsi sel endotel [3,4]. Kortikosteroid juga

memiliki efek anti-proliferasi, dengan menunda timbulnya sintesis DNA dan menurunkan tingkat mitosis [5]. Dalam studi molekuler wabah dan penyembuhan lesi psoriatik dapat memberikan wawasan dalam proses biologis yang mendasari. Genome scan asosiasi wide (GWAS) telah mengidentifikasi faktor kerentanan genetik [6], dan analisis molekuler telah mengungkapkan asosiasi psoriasis dengan jalur molekul tertentu [7,8]. Karakterisasi molekuler merinci penyakit autoimun dapat memberikan informasi tentang mekanisme yang terlibat dalam perkembangan penyakit dan tindakan obat, dan juga menyediakan biomarker untuk memprediksi dan memonitor perjalanan penyakit. Proses enzimatik seluler melibatkan metabolit molekul kecil sebagai substrat, intermediet dan produk akhir, dan metabolit tersebut sangat penting dalam perputaran energi dan sintesis membran. Studi metabolisme telah diterapkan dalam berbagai pengaturan biomedis [9], dan untuk karakterisasi contoh metabolisme jaringan kanker diharapkan dapat berkontribusi pada potret tumor yang lebih rinci dengan mendefinisikan bukti tertentu yang mencerminkan statusnya diagnostik atau memprediksi respon terapi [10].

Spektroskopi resonansi magnetik (MRS) analisis spesimen jaringan utuh dapat memberikan penjelasan rinci tentang komposisi biokimia dari jaringan, menggunakan apa yang disebut resolusi tinggi (HR) angle magic berputar (MAS) MRS. Teknologi ini membutuhkan minimal persiapan sampel, dan informasi biokimia rinci dapat diperoleh dari spesimen kecil (biasanya 20 mg). Beberapa metabolit selular dapat diukur secara bersamaan, dan sampel tetap utuh untuk analisis selanjutnya dengan teknik lain. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkarakterisasi pola metabolisme kulit tidak terlibat dan terkena utuh pada pasien psoriasis dan untuk memantau perubahan biokimia pada kulit psoriatik disertai pengobatan kortikosteroid. Sepuluh pasien dilibatkan, tiga sampel biopsi yang dipotong dari masing-masing: kulit tidak terlibat, kulit psoriasis, dan kulit psoriasis yang diobati dengan kortikoseroid, secara masing-masing. Semua sampel biopsi diselidiki oleh MAS MRS, dan spektrum yang dihasilkan dianalisa lebih lanjut dengan perhitungan luas puncak untuk mendapatkan ukuran relatif isi metabolit jaringan. Metode Subyek Sepuluh pasien dengan cahaya stabil sampai sedang dengan plak psoriasis secara sukarela berpartisipasi dalam penelitian ini. Delapan pasien adalah laki-laki dan dua perempuan (tidak hamil atau menyusui) dengan usia rata-rata 52 tahun (kisaran 28-75) tahun. Tidak ada pasien yang digunakan pengobatan sistemik untuk psoriasis. Tiga pasien pada pengobatan sistemik untuk alasan non-dermatologis: irbesartan (hipertensi) dan terbinafine (tinea unguium), aspirin dan pravastatin (hiperkolesterolemia) dan amlodipine (hipertensi). Komite Regional untuk Kedokteran dan Etika Penelitian Kesehatan, Central Norway menyetujui protokol penelitian, dan semua pasien menandatangani informed consent tertulis. Desain penelitian Dua lesi psoriasis simetris dipilih untuk setiap pasien. Lesi psoriasis yang terlokalisasi pada siku (n = 3), lutut (n = 3), punggung bagian atas (n = 1), pinggul (n = 1), panggul (n = 1) dan bokong (n = 1). Setelah setidaknya dua minggu pengobatan dengan hanya emolien (Locobase , Yamanouchi), satu plak untuk pengobatan lanjutan dengan emolien. Lesi psoriasis yang dipilih lainnya dirawat sekali sehari (waktu malam) dengan kortikosteroid yang sangat kuat clobetasol propionate salep 0,05% (dermovate , GlaxoSmtihKline). Selain itu, emolien yang digunakan baik pada lesi diobati dengan

kortikosteroid dan lesi kontrol sesuai dengan kebutuhan. Kedua lesi psoriasis dievaluasi secara klinis sebelum memulai pengobatan dan setelah empat minggu pengobatan. Skala tingkat keparahan, eritema dan infiltrasi lesi ditentukan pada skala 0-4 untuk masing-masing parameter (0 absen dan 4 parah). Setelah empat minggu, tiga biopsi punch (4 mm) diambil setelah anestesi lokal dengan lidokain dengan epinefrin: dari kulit tidak terlibat, dari kulit psoriasis dan kulit psoriasis yang diobati dengan kortikosteroid di area tubuh yang sama. Pengobatan Sampel Sampel biopsi ditempatkan di sebuah cryo-tabung dan dibekukan dalam nitrogen cair (-195,8 C) dalam waktu satu menit setelah reseksi jaringan, dan selanjutnya disimpan dalam nitrogen cair sampai analisis MR. Sampel ditimbang 21,9 mg rata-rata (kisaran 11,6-35,7 mg). MR spektroskopi Percobaan MR dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya [11]. Secara singkat, sampel dicairkan pada Iceblock untuk menyediakan lingkungan yang dingin, dan ditransfer ke 4 mm MAS rotor (total volume sampel 50 IL) yang mengandung 40 Il fosfat buffered saline dengan TSP (1 mM). Rotor itu kemudian ditempatkan dalam spektrometer Bruker avance DRX600 dilengkapi dengan probe 1H/13C MAS dengan gradien (Bruker BioSpin GmbH, Jerman). Selama akuisisi sinyal, yang dimulai dalam waktu 42 menit rata-rata setelah sampel pencairan (maksimal 1 jam dan 35 menit), sampel berputar pada 5 kHz dan disimpan pada suhu 4 C. Spektrum 1H satu dimensi dicatat, menggunakan urutan spin-echo yang menekan puncak luas dan sinyal air. Spektrum yang dihasilkan sangat diselesaikan, dengan sinyal yang relatif ditingkatkan dari metabolit kecil. Tugas spektral dilakukan berdasarkan penampilan metabolit dalam spektrum direkam sebelumnya MR jaringan manusia utuh [12,13] dan MR spektrum ekstrak dari jaringan kulit [14]. Benar-benar 17 metabolit ditugaskan. Analisis MR Analisa spektrum spektral 4,7-3,0 ppm digunakan untuk perhitungan luas puncak, yang dilakukan dengan menggunakan kurva fitting program PeakFit versi 4 (SeaSolve Inc, USA (MA)), oleh gabungan Lorenzian dan fungsi Gaussian (area Voigt) untuk estimasi

daerah kurva. Area dihitung untuk sembilan puncak yang timbul dari glukosa, laktat, myoinositol, glisin, taurin, glycerophosphocholine (GPC), fosfokolin (PCho), kolin dan creatine. Program ini menggunakan fungsi kuadrat untuk mengoptimalkan pada spektrum yang nyata, dan faktor korelasi yang menggambarkan lebih baik dari 0,95 untuk semua perhitungan area spektrum. Untuk mendapatkan ukuran semi-kuantitatif untuk setiap metabolit, area puncaknya telah dinormalisasi dengan total luas puncak dari semua sembilan metabolit untuk setiap spektrum. Beberapa analisis sampel Kruskal-Wallis diterapkan untuk perbandingan berpasangan konten metabolit dalam tiga jenis sampel kulit. Perbedaan antara metabolit jaringan kulit psoriasis kortikosteroid dirawat dan diobati dihitung untuk semua pasien. Perubahan metabolik dianggap berasal dari pengobatan kortikosteroid dibandingkan antara kelompok dengan yang buruk (N = 3) dan baik (N = 7) efek klinis menggunakan Mann-Whitney uji signifikansi. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan SPSS (SPSS 16, SPSS Inc). Histopatologi Contoh jaringan Histopatologi disimpan dalam nitrogen cair selama 20 bulan setelah analisis MRS MAS. Untuk evaluasi histologis, sampel dicairkan dan direndam dalam 4% buffer larutan formaldehida fiksatif selama 24 jam, diikuti dengan embedment dalam parafin. Dari setiap blok, satu bagian jaringan 5 pM dipotong dan diwarnai dengan hematoksilin, eritrosin dan kunyit (HES). Bagian mikroskopis difoto dengan kamera digital, dan jumlah relatif dari epidermis, dermis dan jaringan subkutan ditentukan oleh titik menghitung [15]. Secara singkat, mikrograf yang dilapis dengan titik grid diposisikan secara acak, dan jumlah titik jatuh pada masing-masing dari tiga komponen jaringan dihitung, mengingat stratum korneum sebagai bagian dari epidermis. Jumlah relatif dari titik jatuh pada satu komponen tertentu diambil sebagai perkiraan luas penampang ditempati oleh elemen jaringan masingmasing. Fraksi Daerah yang diperoleh adalah perkiraan objektif tentang fraksi volume yang sesuai dalam sampel jaringan, asalkan bagian tersebut dipilih secara acak. Hasil Pasien Semua pasien mengalami tingkat penurunan psoriatic setelah empat minggu pengobatan dengan salep kortikosteroid. Tujuh dari pasien mengalami penurunan setidaknya 40% dari nilai klinis dari kulit, yang empat pasien mengalami normalisasi hampir lengkap

dari kulit (skor kelas 1 untuk eritema dan infiltrasi, tidak dibersihkan). Tiga pasien memiliki 40% atau pengurangan kurang dari scoring kulit klinis, dan dianggap memiliki efek buruk dari pengobatan kortikosteroid. Mengenai lesi psoriasis yang tidak diobati, lima dari pasien menunjukkan tidak ada perubahan selama empat minggu, tiga mengalami kurang skala setelah penerapan emolien sedangkan pada dua pasien memburuk tercatat. Histologi Semua sampel dapat dievaluasi sehubungan dengan komposisi jaringan setelah analisis MR dan penyimpanan jangka panjang dalam nitrogen cair. Epidermis adalah tebal pada lesi psoriasis, dan terdiri dari sebagian kecil secara signifikan lebih besar dari biopsi baik dalam diobati (12%) dan kortikosteroid diobati (9%) kulit daripada di kulit tidak terlibat (3%) (p <0,05, ANOVA). Semua pasien kecuali satu memiliki fraksi epidermal rendah kortikosteroid diobati daripada di kulit psoriasis yang tidak diobati, dengan penurunan sekitar 40% pada ketebalan epitel. Satu pasien dengan ketebalan peningkatan epidermis setelah pengobatan kortikosteroid juga secara klinis dinilai sebagai menunjukkan respon yang buruk terhadap pengobatan. Metabolit The MR spektrum dari sampel kulit menunjukkan sinyal dari berbagai metabolit berat molekul kecil dan lipid (Gambar 1). Sembilan metabolit yang terdeteksi dalam semua spektrum, dan diidentifikasi sebagai blok bangunan sel (asam amino dan senyawa kolin), osmolytes (taurine) dan metabolit yang terlibat dalam konsumsi energi (glukosa dan laktat). Luas puncak dari sembilan metabolit yang dipilih dapat dihitung untuk semua sampel. Selain itu, obat bius lidokain memberikan kontribusi signifikan untuk sebagian besar spektrum, sehingga menimbulkan total tujuh puncak. Analisis statistik menunjukkan bahwa kadar glukosa jaringan, myoinositol, taurin, GPC dan kolin yang berbeda dalam tiga jenis sampel (p <0,05, Kruskal-Wali) (Gambar 2). Tingkat myo-inositol dan glukosa yang tertinggi di kulit tidak terlibat dan terendah pada kulit psoriatik, sedangkan yang dari taurin dan kolin yang tertinggi di kulit psoriasis dan terendah di kulit tidak terlibat. Tingkat GPC yang tertinggi di kulit dirawat kortikosteroid dan terendah pada kulit psoriasis. Kami mengamati tidak ada perbedaan dalam tingkat jaringan creatine, glisin, laktat atau fosfokolin antara tiga jenis sampel.

Tujuh dari pasien menunjukkan efek klinis yang baik dari pengobatan kortikosteroid topikal (pengurangan setidaknya 40% dari skor klinis), sedangkan tiga pasien memiliki efek yang buruk (penurunan kurang dari 40% dari skor klinis). Kami menemukan perubahan metabolik yang berbeda dalam kedua kelompok pasien selama lima metabolit (p <0,05, MannWhitney) (Gambar 3). Dalam sampel kulit dari pasien dengan hasil pengobatan yang baik, glukosa, myo-inositol, GPC dan glisin meningkat dengan pengobatan, sedangkan kolin menurun. Diskusi

Empat minggu pengobatan anti-psoriatik dengan kortikosteroid topikal membawa perbaikan klinis, seperti yang diharapkan. Ini tercatat sebagai pengurangan dalam skor klinis untuk eritema, infiltrasi dan scaling. Kami juga diamati oleh histopatologi bahwa ketebalan relatif dari epidermis berkurang dalam 9 dari 10 pasien sebagai akibat dari pengobatan kortikosteroid.

Kualitas spektral sebagian dipengaruhi oleh heterogenitas biopsi kulit dan oleh sinyal dari anestesi lokal. Spektroskopi MR biopsi kulit utuh memberikan informasi semi-kuantitatif tentang metabolit jaringan. Itu tidak mungkin untuk melakukan kuantifikasi mutlak, karena hal ini akan memerlukan pengukuran T2 untuk memungkinkan koreksi T2. MR protokol akuisisi sehingga tidak bisa memberikan kuantifikasi mutlak metabolit jaringan, tetapi kuantifikasi relatif memungkinkan perbandingan intersample. Kami menemukan bahwa kulit psoriasis memiliki tingkat signifikan lebih rendah dari myoinositol dan glukosa, dan tingkat yang lebih tinggi kolin daripada kulit tidak terlibat. Perbedaan-perbedaan antara jaringan yang terkena dan sehat pasien psoriatic analog dengan perbedaan yang ditemukan antara jaringan yang terkena dan sehat pada pasien kanker [10]. Kedua psoriasis dan kanker ditandai dengan tingkat proliferasi sel yang tinggi. Kesamaan profil metabolik demikian diharapkan, ketersediaan tinggi khususnya nutrisi untuk sintesis biomassa baru. Tingkat lebih rendah dari glukosa yang mungkin karena omset glukosa yang tinggi dalam sel berkembang biak dengan cepat, sedangkan peningkatan kadar kolin berhubungan dengan kebutuhan blok bangunan seluler [10]. Dalam penelitian sebelumnya oleh Kim et al. [14], ekstrak asam perklorat sampel biopsi kulit dari plak psoriasis, melanoma maligna dan kulit kontrol dianalisis dengan spektroskopi MR dan GC / MS. Beberapa rasio metabolisme dan konsentrasi yang diubah pada plak psoriasis dibandingkan dengan kulit psoriasis tidak terlibat. Sebagian besar konsentrasi metabolit lebih tinggi pada psoriasis plak. Untuk metabolit dianalisis dalam penelitian kami, Kim et al. [14] melaporkan creatine-toglisin rasio yang lebih tinggi, laktat yang lebih tinggi dan lebih rendah glisin dalam plak psoriasis dibanding pada kulit psoriatik noninvolved. Mengurangi glisin di kulit steroid diperlakukan dari responden (Gambar 3) menyerupai glisin lebih rendah pada kulit nonterlibat dilaporkan oleh Kim et al.

Tidak ada temuan metabolik lain yang serupa diamati, mungkin karena pendekatan yang berbeda dalam analisis metabolit. Kami mengamati peningkatan kadar glukosa dan myoinositol, dan penurunan tingkat kolin dalam kulit steroid diperlakukan dari responden, yang mengindikasikan bahwa profil metabolik pendekatan bahwa kulit tidak terlibat ketika pengobatan efektif. Perubahan metabolisme ini mungkin mencerminkan efek anti-proliferasi steroid, yang mengarah ke penurunan permintaan nutrisi untuk sintesis biomassa. Tingkat kolin Penurunan juga dapat mencerminkan efek anti-inflamasi pengobatan kortikosteroid, seperti kolin diketahui terakumulasi dalam proses inflamasi [16]. Dengan demikian, profil metabolisme jaringan dapat menjadi indikator molekul efek pengobatan dan memberikan wawasan tentang jalur khusus kerja obat. Ada peningkatan pemahaman perubahan proses molekuler dan seluler pada psoriasis, dan peran dan fungsi dari beberapa makromolekul ditetapkan. Metode yang digunakan dalam penelitian ini dapat menggambarkan kecil molekul organik yang substrat, intermediet dan produk akhir dalam proses seluler. Fungsi dan peran dalam psoriasi tidak dicirikan. Dalam rangka untuk memahami bagaimana narkoba

mempengaruhi jalur metabolik, jaringan analisis metabolik harus dikombinasikan dengan profil molekul [17]. Penelitian ini dilakukan pada sejumlah kecil pasien (N = 10), di mana tiga dari pasien menerima pengobatan sistematis untuk kondisi lain. Ini yang sedang berlangsung, pengobatan sistematis tidak mungkin untuk mempengaruhi pola metabolisme diamati dan perubahan di kulit. Namun, populasi yang lebih besar tanpa pasien yang menerima perawatan yang sistematis akan mengesampingkan kemungkinan bias dan menyediakan data yang lebih kuat. Studi ini menunjukkan nilai potensi profil metabolik sebagai penyedia informasi pelengkap untuk evaluasi klinis dan molekuler, termasuk informasi yang dapat memberikan penerangan baru tentang perubahan yang terjadi dengan pengobatan. Dengan memodifikasi prosedur eksperimental kita dapat memperoleh ukuran kuantitatif mutlak metabolit jaringan [18]. Selain itu, profil metabolik dapat dikombinasikan dengan analisis berikutnya profil ekspresi gen [17,19], sehingga memungkinkan informasi rinci dan kompleks pada beberapa tingkat molekuler. Meskipun menunjukkan untuk pengobatan kortikosteroid topikal, profil metabolik lesi psoriasis juga dapat diterapkan dalam beragam rejimen pengobatan psoriasis, memberikan peningkatan pemahaman tentang proses patogenesis dan pembalikan mereka karena pengobatan. Spektroskopi MR biopsi kulit juga dapat digunakan untuk memperoleh status metabolik kondisi kulit lainnya. Kesimpulan Penelitian ini menunjukkan perbedaan terdeteksi dalam metabolit jaringan antara kulit tidak terlibat, kulit psoriasis dan kulit psoriatik yang diobati dengan kortikosteroid. Kami juga menemukan bahwa perbedaan metabolik yang disebabkan oleh pengobatan kortikosteroid terkait dengan efek terapi yang sebenarnya. Penerapan spektroskopi MR dalam penelitian dermatologis memberikan informasi tentang metabolit jaringan, sehingga menyajikan pendekatan baru untuk studi patogenesis dan pengobatan efek pada kulit.