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Liberación intracerebroventricular rápida de Cu-DOTA-etanercept después de la administración periférica demostrada con imágenes PET

Liberación intracerebroventricular rápida de Cu-DOTA-etanercept después de la administración periférica demostrada con imágenes PET

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ARCHIVOS DE MEDICINA
iMedPub Journals
2009Vol. 5No. 5:2
doi: 10.3823/041
Articulo Original
Liberación intracerebroventricular rápida de Cu-DOTA-etanercept después de laadministración periérica demostrada con imágenes PET.
Edward L Tobinick*
1
, Kai Chen
2
, Xiaoyuan Chen
2
1Institute or Neurological Research, grupo médico privado, inc., 100 UCLA Medical Plaza, Suites 205-210, Los Angeles, Caliornia 90095 USA.2Stanord University School o Medicine, 1201 Welch Rd, P087, Stanord, Caliornia 94305-5484 USA.Artículo Publicado en International Archives o Medicine 2009, 2:11doi:10.1186/1755-7682-2-11. Versión en ingles disponible en: http://www.intarchmed.com/content/2/1/11
AbstractAntecedentes:
Se ha demostrado que las citoquinas interleukina-1 y actor necrosis tumoral (TNF), y el bloqueador de citoquinas antagonista recep-tor de interleukina-1, entren en el líquido cealorraquídeo (LCR) después de la administración periérica. Recientes inormes de la rápida mejoría clínicade pacientes con enermedad de Alzheimer y ormas relacionadas de demencia después de administración periespinal de etanercept, antagonista del TNF, sugieren que etanercept también tiene la capacidad de llegar al LCR del cerebro.Para investigarlo se etiquetó el etanercept con un emisor de positrones para permitir la visualización de su distribución intracraneal después de laadministración periérica mediante PET en un modelo animal.
Hallazgos:
La etiqueta por radio de etanercept con el emisor PET 64Cu ue eectuada con conjugación de DOTA (1,4,7,10-tetraazadodecana-N,N’,N,N”’-ácido tetracético) de etanercept, seguida de prucación de columna y etiquetaje 64Cu. Las imágenes MicroPET revelaron la acumulación de 64Cu-DOTA etanercept dentro de los ventrículos cerebrales lateral y tercero minutos después de la adminsitración periérica perispinal en una rata normalanestesiada con isourano, con concentración dentro del plexo choroide y en el LCR.
Conclusión:
La síntesis de 64Cu-DOTA-etanercept permitió la visualización de su distribución intracraneal con imágenes microPET. Las imágenes Mi-croPET documentaron la rápida acumulación del 64Cu-DOTA-etanercept dentro del plexo choroide y el líquido cealorraquídeo dentro de los ventrí-culos cerebrales de una rata viva después de administración periérica. Más estudios de los eectos de etanercept y del TNF a nivel del plexo choroidepueden encontrar una valiosa comprensión de la patogénesis de la enermedad de Alzheimer.
Antecedentes
Se ha identicado un exceso del actor-ala necrosis tumoral (TNF)como diana terapéutica en la enermedad de Alzheimer (AD) [1].Se ha demostrado un exceso de TNF en el líquido cealorraquídeo (LCR),con concentraciones 25 veces más altas que en los controles, en AD, ypodría predecir la progresión de la enermedad [2].Etanercept es una proteína recombinante dimérica de usión que con-siste en porciones extracelulares ligandas de dos receptores humanosp75 TNF vinculados con el ragmento Fc del IgG1 humano, que uncio-na en vivo como potente terapéutico anti-TNF. Recientes inormes deuna rápida mejoría clínica en pacientes con AD y desordenes relacio-nados después de la administración periespinal de etanercept (MW =150,000) sugirieron que etanercept tenía la capacidad de penetrar enel LCR del cerebro con una concentración terapéuticamente eectiva[3,4], una capacidad que recientemente ue demostrada para otro an-tagonista de citoquina, el receptor antagonista interleukina-1 (IL1-RA)(MW = 17,000)[5].Para investigar esta posibilidad se conjugó el etanercept con 64Cu,usando un método desarrollado por uno de los autores [6].64Cu es emisor de positrones. Cuando se ata al etanercept, utilizandoel agente quelante (1,4,7,10-tetraazadodecane-N,N’,N”,N”’-ácido tetra-cético (DOTA), se produce una molécula, 64Cu-DOTA-etanercept, cuyadistribución anatómica puede ser puesta en imagen con tomograía deemisión de positrones (PET)[6]. Para examinar la distribución intracra-neal de etanercept radio-etiquetado, se eectuó una imagen microPETdel cerebro de una rata viva seguida por la administración periérica de64Cu- DOTA-etanercept.
Métodos
Se condujeron estudios en animales de acuerdo con los protocolosaplicables por el
Stanford Animal Care Committee
.Se compró Etanercept (Immmunex, Amgen) en orma de polvo. Se pre-pare el ácido 64Cu-(1,4,7,10-tetraazadodecano-N,N’,N”,N”’-tetracético(DOTA)-etanercept según descrito previamente [6]. Se inyectaron 150microlitros de solución de 64Cu-DOTA-etanercept (ca. 1 mCi) sobre laespina cervical de una rata. Sprague-Dawley de 250gr a nivel C 6–7 conuna aguja de 30 gauge en una proundidad de 6 mm mientras la rataestaba anestesiada con 2.5% isourano inhalado. Luego se colocó larata cabeza abajo suspendida del rabo durante tres minutos, inmedia-tamente seguido con una posición horizontal en la cama de un escánerde imágenes microPET (microPET R4 escáner modelo para roedores,Siemens Medical Solutions USA, Inc.) diseñado para escáneres estáti-cos de 5-minutos; se iniciaba el escáner dos minutos después de ponerla rata en la cama del escáner y se eectuó entre cinco y diez minutosdespués de administrar el etanercept. La rationale para este método deadministración periérica es liberar el etanercept en el sistema venosocerebroespinal como discutido previamente [3,4,7-9]. Se reconstruíanlas imágenes con un algoritmo máximo de 2-dimensiones de expecta-ción de subgrupos ordenados (OSEM), y no se necesitó corrección paraatenuar o corrección del scatter.
    A   c   e   p   t   a    d   o   t   r   a   s   r   e   v    i   s    i   o   n   e   x   t   e   r   n   a
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2009Vol. 5No. 5:2
doi: 10.3823/041
Resultados
Las imágenes MicroPET revelaban acumulación de 64Cu-DOTAeta-nercept dentro de los ventrículos cerebrales lateral y tercero pocosminutos después de la administración periérica perispinal, con unaconcentración en le plexo choroide y en el LCR sugerido por las imáge-nes microPET (Figura 1). Estos resultados PET no-invasivos son bastanteanálogos con los resultados de previos estudio autorradiográcos con[125I] etiquetado TNF, IL-1, y IL1-RA que demostraron una penetraciónen el LCR dentro de los ventrículos cerebrales en ratones después de laadministración periérica de cada una de estas grandes moléculas[10].El patrono es consistente con la penetración de 64Cu-DOTA-etanercepten el líquido cerebroespinal en los ventrículos lateral y tercero. Noten elrealce lineal horizontal en los ventrículos laterales que es sugestivo dela acumulación del trazador en el plexo choroide.
Discusión
La aparente capacidad de etanercept de traspasar la BCSFB y de entraren el LCR del cerebro demostrado en este experimento sugiere queetanercept se reúne con interleukina 1-RA (IL1- RA), interleukina-1 (IL-1)(MW = 17,000) y TNF (MW = 17,000 como monomero; 51,000 comotrimero soluble) como moléculas grandes que penetran en el líquidocerebroespinal del cerebro después de la entrega periérica [5,10,11].Estos hallazgos pueden tener signicativas implicaciones para el trata-miento de ciertos desordenes del cerebro, incluyendo el uso de IL1-RApara el tratamiento de inarto y el uso de etanercept para tratar la en-ermedad de Alzheimer [1,3-5,7].La rápida entrega de etanercept en el LCR dentro de los ventrículoscerebrales después de la entrega periérica ue subsiguientementeconrmada en un experimento separado, más tardío en múltiples ra-tas, eectuado en la Universidad de British Columbia en Vancouver queempezó varios meses después de haber completado este estudio he-cho en Stanord (manuscrito en preparación)[1].Estos resultados destacan las importantes dierencias uncionales entrela barrera sangre-líquido cerebroespinal (BCSFB) y la barrera sangre-cerebro (BBB)[12,13]. La BBB, ormada por uniones estrechas entre lascélulas endoteliales de las capilares del cerebro, previene el pasaje deesencialmente todas las moléculas grandes, i.e. las con un peso mole-cular (MW) mayor que aproximadamente 500 daltons [14].La BCSFB, ormada primariamente por células epiteliales del plexochoroide, aparece ser más permeable con respecto a las moléculasgrandes que la BBB[13]. Por esto es verosímil que IL1-RA, IL-1, TNF yetanercept entren en el LCR atravesando la BCSFB vía el plexo choroide[1,10,11]. El no conseguir poner en imagen los ventrículos cerebrales,o con autorradiograía, o con imágenes PET, como en el experimentopresente (Figura 1), puede haber llevado, en un estudio [15], a un alloen la detección de la entrega de las grandes moléculas en el líquidocerebroespinal y en el plexo choroide.La entrega de etanercept al plexo choroide (CP) puede tener signi-cativas implicaciones siológicas. El CP es la uente de síntesis de nu-merosas moléculas, incluyendo citoquinas y actores de crecimiento,incluyendo TNF, TGF-ala, TGF-beta, FGF2 y IGF-II [12,13,16]. Las célulasepiteliales del plexo choroide se conocen como TNF expreso [17]. Seha postulado que el CP está centralmente implicado en la patogéne-sis de AD [12,13,16]. Es posible que cuando el etanercept llegue al CPtenga eectos intrínsicos en la unción celular del PC y en la síntesisde citoquinas y del actor de crecimiento. Cuando el Etanercept llegaal PC podría tener eectos paracrinos o autocrinos sobre el PC, o po-dría potencialmente aectar a la parenquima en las regiones cerebralesperiventriculares u adicionales por el bulk ow endocrine-like del LCR[12,13]. Adicionalmente, cuando el etanercept llega al PC, el LCR podríatener eectos gliales [1]. La alteración de la modulación glial de la un-ción neuronal mediada por el TNF, empezando dentro del PC, podríapotencialmente producir generalizados eectos neuronales y corticales[1,3,4].El eecto de la entrega intracerebroventricular de cualquier biológicoanti-TNF ha sido recientemente examinada en dos modelos experimen-tales que investigaban los mecanismos de la EA [18,19]. En el primerestudio, la entrega intracerebroventricular de iniximab, un anticuer-po monoclonal anti-TNF, prevenía la inhibición del LCR en las sinapsishipocampales CA1 causada por la inyección intracerebroventicular debeta-amiloide [18]. En el segundo estudio, la entrega intracerebroven-tricular de un anticuerpo monoclonal anti-TNF prevenía la nitración deproteínas en el hipocampo y el deterioro de la memoria de reconoci-miento en ratones inducida por ragmentos beta-amiloides [19].Los resultados de estos modelos experimentales adicionales, juntoscon la conocida implicación del PC en la síntesis de citoquinas, sugie-ren que la rápida entrega de 64Cu-DOTA etanercept en el CP puedeproporcionar una potencial explicación de la rápida mejoría clínica no-tada después de la administración periespinal de etanercept en la EA[1,3,4]. Se sabe que el TNF es capaz de producir eectos sinápticos encuestión de minutos [20].Se necesitan más investigaciones respecto los mecanismos con los queetanercept entra en los ventrículos cerebrales, presumiblemente al cru-
Imagen PET, sección transversa, de un cerebro de una rata viva después de la administra-ción perispinal extratecal de 64Cu-DOTA-etanercept, imágenes 5 a 10 minutos después deadministrar etanercept.http://www.archivosdemedicina.com
 
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Recientemente se inormó de los eectos de la suspensión por el rabosobre la ultraestructura ependimal [29]. Se precisa más estudio paraconrmar esta hipótesis. El tiempo limitado de las imágenes del cere-bro, 10 minutos después de la administración de etanercept en esteestudio, no permite una denitiva declaración respecto la entrega pa-renquimal más tardía.Estudios uturos revelarán esto. Se sabe que estas sustancias que alcan-zan el líquido cealorraquídeo intraventricular a menudo llegan a lasparenquimas periventriculares del cerebro, incluyendo al hipocampo,así la eventual entrega parenquimal no puede ser excluida con estosresultados [12,13,25]. Las macromoléculas que llegan al LCR penetrande orma característica en los parenquima cerebrales periventricularesporque las “gap junctions” entre las paredes de las células ependimalesde los ventrículos “pierden”, de allí la popularidad de la entrega intrace-rebroventricular para pasar tanto la BBB, como la BCSFB[12,13,30]. Al-ternativamente, es probable que algunos de los eectos siológicos deletanercept periespinal son primariamente mediados a nivel del plexochoroide. Se necesitarán más estudios para denir los sitios de acciónde etanercept en el cerebro con EA, los eectos de etanercept sobre elplexo choroide en la EA, y de caracterizar la distribución en el paren-quimal cerebral de etanercept después de la entrega al LCR.
Abreviaciones
EA: enermedad de Alzheimer; BBB: barrera sangre-cerebro; BCSFB:barrera sangre-líquido cerebroespinal; PC: plexo choroide; LCR: líquidocealorraquídeo; DOTA: (ácido 1,4,7,10-tetraazadodecano- N,N’,N”,N”’-tetraacético); FGF2: básico actor de crecimiento broblasto2; IGF-II:actor de crecimiento insulin-like II; IL- 1: Interleukina-1; IL-1RA: Inter-leukina-1 receptor antagonista; KD: kilodalton; MW: peso molecular;PET: tomograía por emisión de positrones; TGF-alpha: actor ala decrecimiento trasormador; TGF-beta: actor beta de crecimiento trasor-mador; TNF: actor-ala de necrosis tumoral.
Intereses competentes
El autor Edward Tobinick tiene múltiples patentes emitidos y pendien-tes, asignados a TACT IP LLC, que describen el uso parenteral y peries-pinal de etanercept para tratar la enermedad de Alzheimer y otrosdesordenes neurológicos, incluyendo, pero no limitado a los patentesde los EEUU 6015557, 6177077, 6419934, 6419944, 6537549, 6982089,7214658 y de Australia 758523. Posee acciones en Amgen, el abrican-te de etanercept. Tiene, además patentes pendientes que describen eluso de la administración al sistema venoso cerebroespinal y/o peries-pinal para entregar otros agentes terapéuticos diagnósticos a cerebro,ojo, espina dorsal y otras estructuras anatómicas. Los otros autores notienen intereses competentes.
Contribuciones de los autores
 Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito nal. ET hizo elborrado del manuscrito, concibió y participó en el diseño del estudio easistió en la ejecución del estudio animal. KC participó en la ejecucióndel estudio animal, incluyendo la adquisición y el análisis de las imá-genes, y contribuyó al borrador de la versión nal del manuscrito. XCdesarrolló el método del radio-etiquetaje del etanercept utilizado en
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zar la BCSFB. Por ahora se desconoce el exacto mecanismo con lo queesto ocurre en el PC. En el PC existe, además de especícos sistemas detransporte saturable para selectas moléculas grandes, también una víade diusión paracelular menos conocida, que pueden utilizar los solu-bles hidroílicos para penetrar en el LCR, diundiendo entre las célulasepiteliales choroidales, más que a través de ellas [13].Se ha demostrado que el polisacárido inulina, intravascularmente ad-ministrada (MW = 5,500), por ejemplo, llega al LCR mediante esta vía dediusión paracelular a través de la BCSFB en el PC [13,21,22]. Alternati-vamente es posible que etanercept se trasporta activamente a travésdel epitelio del PC.Se podría postular que esto podría ocurrir vía un mecanismo “pi-ggyback”, asociado con la unión de etanercept al TNF, mientras el TNFmismo es activamente trasportado a través del epitelio del PC [10,11].Este mecanismo “piggyback” podría ser acilitado por la ocurrencia na-tural de los trimeros de TNF en circulación que presentarían más deun sitio de unión por ligando. Esta especulación requerirá más estudiopara que surjan respuestas denitivas. La literatura adicional apoya elargumento que el plexo choroide y las regiones ependimales cercanaspueden ser los puntos de entrada de las macromoléculas en el LCR, par-ticularmente después de la postura con la cabeza hacía abajo. Esta lite-ratura incluye la demostración que la postura con la cabeza hacía abajo,aunque solo sea por cinco minutos, interrumpe la barrera sangre-LCRde los conejos, permitiendo que el azul tripano penetre en el SNC [23];que las proteínas del plexo choroide estén expresadas/localizadas en lamembrana apical mirando de cara al ventrículo y que la producción deLCR choroidal está incrementada, corto después de realizar la posturacon la cabeza hacía abajo con la suspensión por las patas traseras enratas [24]; y que las macromoléculas pueden ganar acceso al cerebroy al LCR por rutas extracelulares (no-BBB) [25]. Anteriormente se ha-bía postulado que las macromoléculas, como los anticuerpos dirigidoscontra la proteína amiloide y la eritropoietina, pueden ejercer eectosdel SNC al pasar al cerebro por las vías extracelulares [25]. Etanercept esaltamente potente, y puede tener signicativos eectos siológicos conbajas concentraciones [26].Se necesitará más estudio para aclarar si la distribución de etanerceptpor vías extracelulares, en adición a los eectos en el plexo choroidey en el LCR, contribuye a los eectos siológicos observados despuésde la administración periespinal de etanercept en condiciones comocon la enermedad de Alzheimer. Con respecto a la extrapolación delos resultados del presente experimento en la EA, es necesaria una con-sideración adicional.El modelo experimental utilizado en el presente estudio incluía soloanimales normales, pero los cambios en la siología del PC y la unciónde barrera pueden acompañar tanto el envejecimiento, como la EA, yestos cambios podrían inuenciar más el paso de etanercept a travésde la BCSFB [12,13,16,27]. En los estudios clínicos del etanercept pe-riespinal en la EA, se utiliza la postura con la cabeza hacía abajo Trende-lenburg seguida por la inyección cervical periespinal, postulando queincremente el acceso de etanercept al plexo choroide vía el sistemacerebrospinal venoso [1,4,9]. Se postula que la postura con la cabezahacía abajo, al incrementar la presión venosa en el PC, puede tener elpotencial de inuenciar en el trasporte a través de la BCSFB o a travésdel ependima o con los órganos circumventriculares al parenquima pe-riventricular cerebral [1,4,23,28].
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