UNIVERSIDAD DE CHILE

ESCUELA DE TECNOLOGIA MEDICA

MECESUP UCH0003
ASIGNATURA BIOQUIMICA APLICADA
CINETICA ENZIMATICA EN HOJA DE CALCULO
Autor: Teresita Castillo
1

INTRODUCCIN

La cintica enzimtica es uno de los tpicos Fisicoqumico que tiene muchas

aplicaciones en las ciencias mdicas. Las enzimas son agentes qumicos que
ayudan a que los procesos bioqumicos del organismos se lleven a cabo a un
velocidad compatible con la vida. Estos niveles enzimticos en plasma se
analizan para detectar la enfermedad y llegar al diagnstico diferencial y
pronstico de la misma. Para lograr determinar la actividad de las enzimas
presente en el plasma se debe conocer los parmetros fsicos y qumicos de
las enzimas. El estudio de la cintica requiere la aplicacin de conocimientos
matemticos, los cules se pueden expresar en modelos grficos interactivos,
para lo cul se usar el programa de hoja de clculo Excel. lo que permitir
observar directamente los efecto de la manipulacin de los valores de
sustrato, velocidades y constante cinticas como Km y Vm.
2

OBJETIVOS DE APRENDIZAJES

1.- Adquirir una mayor comprensin del efecto del sustrato sobre la velocidad
de una reaccin enzimtica.
2.- Visualizador los cambios de la Km y Vm al manipular las concentraciones
de sustrato.
3.- Analizar en los grficos de Linewaever -Burk los efectos de los inhibidores
competitivos y no competitivos.
3

ACTIVIDADES DE APRENDIZAJES

1.- Cada grupo de estudiantes deber construir en el programa excel una hoja
para automatizar el clculo de los parmetros Vm y Km mediante el grfico
Linewaever- Burk
2.- Graficar la curva de Mickaelis Menten y Curva de Progreso

4
4.1

DESARROLLO
Curva de Fenol

La lectura Do y la concentracin de Fenol presenta un comportamiento lineal

entre ambos, con lo cual, conociendo la ecuacin que los une, es posible
calcular la concentracin de fenol a partir de la lectura Do conocida.
Tabla #1. Lecturas Fenol
Lect Do
0.043
0.056
0.119
0.264
0.371
0.495
0.608
0.727
0.935
1.178

mM fenol
0.04
0.05
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.8
1

Densidad
Optica, Do

Curva de Fenol
1.5

y = 1.1921x
2
R = 0.9985

1
0.5
0
0

0.5

1.5

mM Fenol, Sustrato

4.2

Actidadad Enzimtica
Lectura Ensayo en Do: se multiplica x factor obtenido curva de fenol

DO x Factor = mM /min

4.3

Curva de Michaelis-Menten

Ecuacin de M-M
V =

Vm S
Km + S

La ecuacin de M- M explica la curva que se obtiene cuando los datos de

velocidad se representan frente a la concentracin de sustrato. La curva
resultante es una hiprbola rectangular donde es difcil determinar las
constantes cinticas Vm y Km.

Tabla #2:Velocidad en funcin del Sustrato

S, mM Sustrato

V, Velocidad
(mmoles/min/ml)

0.078
0.117
0.195
0.39
0.78
1.17
1.56
1.95
2.92

0.00002277
0.00002388
0.00005666
0.00007366
0.00007677
0.00007955
0.0000908
0.0000927
0.0000944

Velocidad mmoles/min/ml

Curva de Michaelis
0.0001
0.00009
0.00008
0.00007
0.00006
0.00005
0.00004
0.00003
0.00002
0.00001
0
0

2
Sus trato m M

4.4

Grfico de Lineweaver Burk

Para determinar las constantes Vm y Km se representa la curva de Michaelis

en forma lineal, la cual se realiza linealizando la expresin de M-M de la
siguiente forma:

V =

Vm S
Km + S

1
Km + S
=
V
Vm S

1
Km 1
1
=
+
V
Vm S Vm

De esta forma, la ultima expresin representa una lnea de tipo Y =mx+C,

donde:
Y = 1/V : Variable en eje y
m = Km/Vm : Pendiente de la recta
x = 1/S : Variable en eje x
b = 1/Vm : Punto interseccin eje y
As, graficando 1/V v/s 1/S y determinando la ecuacin de la recta (m y b) se
encuentran los valores para las constantes cinticas Vm y Km.
Tabla #3. Valores linealizacin de ecuacin M-M
1/S

1/V

12.8205128
8.54700855
5.12820513
2.56410256
1.28205128
0.85470085
0.64102564
0.51282051
0.34246575

43917.4352
41876.0469
17649.1352
13575.8892
13025.9216
12570.7102
11013.2159
10787.4865
10593.2203

Linewaever-Burk
60000
1/V

40000
20000
0
-5

-20000 0

5
1/S

Igualando trminos...

10
15
y = 2936.2x + 8779.5
R2 = 0.9337

 Vm = 0.0001139 mmoles/min

1/Vm = 8779.5
Km/Vm = 2936.2

4.5

Km = 2936.2*Vm 0.334mM

Curva de Progreso

Utilizando las expresiones ya determinadas, es posible estimar la hidrlisis del

sustrato y/o las velocidades de inicio para cada tiempo.
Tabla #4: Lecturas Do para distintos tiempos
Tiempo
(min)
5
10
15
20
30
45
50

DO
0.26
0.48
0.425
0.615
0.848
0.838
1.124

Realizar:
a.- Clculo de Fenol Producido
b.- Determinar el fenol producido( mmoles)
1.1921

Pendiente curva Do v/s Fenol

Tiempo
(min)
5
10
15
20
30
45
50

DO

Fenol Poducido

0.26
0.48
0.425
0.615
0.848
0.838
1.124

0.21810251
0.40265078
0.35651372
0.51589632
0.71134972
0.70296116
0.94287392

Fenol Producido
m m oles

Curva de progreso
1.5
1
0.5
0
0

20

40

Tiempo (min)

60