• Embed Doc
  • Copy Link
  • Readcast
  • Collections
  • CommentGo Back
Download
 
No: 62, 200762
Mustafa OSKAY, Kamuran AKTAÞ, Dilek SARI, Cem AZERÝ
Celal Bayar Üniversitesi, Fen- Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Bölümü,Muradiye Kampüsü, 45030
MANÝSA 
 Asphodelus aestivus
(Liliaceae)'un Antimikrobiyal Etkisinin Çukur ve Disk Diffüzyon Yöntemiyle KarþýlaþtýrmalýOlarak Belirlenmesi
16, 62, 62-652007
 Ekoloji
Özet
Kurutulup toz haline getirilen bitki, soxhlet cihazýnda n-bütanol ve etil alkol (60-80
o
C)'de 12 saat ekstraksiyona tabi tutulmuþ ve whatman no:4 ile filtre edildikten sonra70
o
C'de buharlaþtýrýlmýþtýr. Antimikrobiyal aktivitenin tespiti için ekstrenin farklýkonsantrasyonlarý çukur ve disk diffüzyon yöntemiyle bakterilere ve mayalara karþýdenenmiþtir.
 Asphodelus aestivus
ekstresi (çiçek, meyve ve tüm bitki)'nin ortalama 2-15 mmarasýnda deðiþen deðerlerde antimikrobiyal aktiviteye sahip olduðu belirlenmiþtir. Etilalkolle elde edilen ekstre daha yüksek inhibisyon göstermiþtir. Ayný ham ekstrekonsantrasyonlarý göz önünde bulundurulduðunda çukur diffüzyon inhibisyonsonuçlarý, disk diffüzyon yöntemi sonuçlarýndan ortalama olarak biraz daha yüksek bulunmuþtur. Ýnhibisyonun yüksek görüldüðü bazý test organizmalarýna karþý MICdeðerleri makrobroth yöntemiyle belirlenmiþ olup, 36-90 mg/mL arasýnda deðiþmektedir. Ayrýca test organizmalarýnýn ticari antibiyotiklere karþý duyarlýlýklarý belirlenerek birkarþýlaþtýrma yapýlmýþtýr.
 Anahtar kelimeler
:
 Antimikrobiyal aktivite,
 Asphodelus aestivus,
çiriþ otu.
 A Comparative Study of Antimicrobial Activity Using Well and Disk Diffusion Method on
 Asphodelus aestivus
(Liliaceae) Abstract
Plant parts were powdered, extracted in a Soxhlet extractor with n-butanol andethanol (60-80
o
C) for 12 h, filtered using Whatman filter paper no:4 and the filtrate wasthen evaporated at 70
o
C. For determination of antimicrobial activity, differentconcentrations of crude extract tested against bacteria and yeasts by both well and disk diffusion method. Results showed that the
 Asphodelus aestivus
extract (Flower, fruits and whole plant) exhibited antimicrobial activity ranging from 2 to 15 mm. Extract obtained with ethanol was showed more inhibision. According to same concentrations of crudeextract used with well diffusion method results were a bit higher than disc diffusionresults. Minimal inhibitory concentration (MIC) determined on susceptiblemicroorganisms by macrobroth dilution method, and MIC values were shown from 36to 90 mg/mL. Also some commercial antibiotics were used to determine sensitivity of thetest microorganisms and comparison.
Keywords
:
 Antimicrobial activity,
 Asphodelus aestivus,
Turkish asphodel.
GÝRÝÞ
Dünya nüfusunun büyük bir bölümü, özelliklegeliþmekte olan ülkelerde bazý hastalýklarýn tedavisiklasik yöntemlerle yapýlmaktadýr. Dünya Saðlýk Ör-gütünün verilerine göre bu oran %80 olup; hastalýk-larýn tedavisinde bitki ekstreleri ve içerikleri kulla-nýlmaktadýr (Eloff 1998). Antimikrobiyal ilaçlaraözellikle de antibiyotiklere karþý enfeksiyöz hasta-lýklara neden olan mikroorganizmalarýn dirençkazanmasý klinik bir problem haline gelmiþ, insanlar yeniden doðal antimikrobiyallere yönelmiþler ve bukonudaki çalýþmalar hýz kazanmýþtýr (Oskay ve ark.2005).Türkiye florasýnýn önemli bir özelliði oldukçazengin bir yapýya sahip olmasýdýr. Ülkemizde10.000'e yakýn bitki türü doðal olarak yetiþmesineraðmen bunlardan yeterince istifade edilememek-tedir (Ateþ ve Erdoðrul 2003).
 Asphodelus aestivus
Brot. (Liliaceae), 50-150 cmboyunda, yapraklarý kýlýç þeklinde, 35-45 cm boy, 3cm eninde olup; nisan-mayýs aylarýnda çiçek (Beyaz,6 petallý)'lenen, 7 mm büyüklüðünde bezelye þekilli yeþil meyve (6 tohumlu)'lere sahip bütün yýl boyun-ca yeþil; özellikle kuru, besince fakir, kumlu, kültüreedilmeyen topraklarda yetiþen; Afrika, Arap ülkeleri,Mýsýr, Türkiye ve Avrupa'nýn bazý kesimlerinde yayýlýþ gösteren çok yýllýk bir bitkidir (Davis 1965).Beyaz çiriþ, yalancý çiriþ, çiriþ otu gibi isimlerlede anýlan bu bitki; hemeroid, saçkýran, mafsalaðrýlarýnýn tedavisinde; maya endüstrisinde, ciltcilik 
 
 ve ayakkabýcýlýkta yapýþtýrýcý, Erzurum bölgesindeehram kumaþýna sertlik ve parlaklýk vermek amacýyla kullanýlmaktadýr (Baytop 1999). Eskidenkök, çiçeklenen gövde ve tohumlarýnýn besin olarak kullanýldýðý söylenmektedir. Ayrýca Ýtalya'da 'Rigna-no Garganico' peynirinin üretiminde yapraklarýndan yararlanýldýðýna dair bilgiler mevcuttur. Ancak bubitkinin modern týpta kullanýmýna iliþkin bir veritespit edilememiþtir (Polunin ve Huxley 1987).
 Asphodelus aestivus
'un antimikrobiyal aktivitesiyleilgili çalýþmalar oldukça sýnýrlýdýr. Bu çalýþma ile ilk kez bitkinin detaylý olarak antimikrobiyal etkisiaraþtýrýlmýþ; böylece ülkemizde doðal olarak yetiþen ve týbbi özellikleri olan bitkileri tespit etmek, yapýlacak olan çalýþmalara katkýda bulunmak amaç-lanmýþtýr.
MATERYAL VE METOTEkstraksiyon
Çalýþmada kullanýlan bitki örneði;
 Asphodelus aestivus
Brot. (Liliaceae) üniversitemiz MuradiyeKampüs alaný ve çevresinden Nisan-2004'de toplan-mýþtýr. Bitkinin çiçek, yaprak ve diðer kýsýmlarý ayrý-larak kurutulmuþtur. Çiçeklenme bittikten sonraaraziye çýkýlarak çalýþma için yeterli miktardabitkinin meyveleri toplanmýþtýr. Mekanik parçalayýcýile toz haline getirilen kuru çiçek, meyve ve tümbitki (çiçek, meyve, yaprak ve taze sürgün kýsým-larýndan 10'ar gr alýnarak, toplamda 30 gr olacak þekilde hazýrlanmýþtýr) kýsýmlarýndan ayrý ayrý olmak üzere 30'ar gr alýnarak soxhlet cihazýnda 150 mL etilalkol (%96) ile 60-80
o
C'de 12 saat ekstraksiyona tabitutulmuþ ve Whatman no: 4 ile filtre edildiktensonra 70
o
C'de buharlaþtýrýlarak ham özütleri eldeedilmiþtir. n-bütanol özütlerinin elde edilmesindeayný iþlemler uygulanmýþtýr. Her iki organik solventle elde edilen ham bitki kýsýmlarýnýn özüt-lerinin 200 mg/mL konsantrasyonlarý etil alkol (1 gretanol ham özütü +5 mL alkol ) ve n-bütanol (1 grbütanol ham özütü +5 mL alkol)'de hazýrlanarak antimikrobiyal aktivite çalýþmasý için +4
o
C'ye kaldý-rýlmýþtýr.
Test Mikroorganizmalarý
Çalýþmada kullanýlan test mikroorganizmalarý;
Staphylococcus aureus
 ATCC 6538P,
 Klebsiellapneumo-niae
CCM 2318,
 Bacillus cereus
CM 99,
 Escherichia coli, Micrococcus luteus
 ATCC 9341,
 Pseudomonas fluorescens,Salmonella typhimurium
CCM 5445
 Proteus vulgaris
 ATCC 6997,
Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae,Yarrawia lipolytica, Geotrichum penicillatum
olup EgeÜniversitesi, Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü, kültürkolleksiyonundan temin edilmiþtir.
 Antimikrobiyal Aktivitenin ve MICDeðerlerinin Belirlenmesi
 Antibakteriyal aktivite çukur (Perez ve ark. 1990) ve disk diffüzyon metotlarý kullanýlarak ölçülmüþ-tür. Antibakteriyal test için Muller Hinton Agarbesiyeri 9 cm çaplý petri kaplarýna 20 mL olacak þekilde dökülmüþtür. Tüm bakteri suþlarý MullerHinton Broth (Oxoid) içerisinde 37°C 18-24 saataktifleþtirilmiþtir. 0,5 McFarland standart yoðunlu-ðuna ayarlanmýþ aktif bakteri kültüründen 50 µL (yaklaþýk 1X10
8
colony forming unit(cfu)/mL) agarüzerine býrakýlarak cam bagetle yayma iþlemi yapýlmýþtýr. Daha sonra agar üzerinde aseptik koþullarda 6 mm çapýnda 5'er adet çukurluklar açýl-mýþ, sýrasýyla çiçek, meyve ve tüm bitki ekstre-lerinden 30'ar µL (6 mg), negatif kontrol olarak 30 µL %96'lýk etil alkol ve n-bütanol aktarýlmýþtýr. Disk diffüzyon yönteminde ise 6 mm kaðýt disklerhazýrlanmýþ ve bitkinin farklý ekstrelerinden 30'ar µL (6 mg) emdirilerek kurutulmuþlardýr. Sonrasýnda bukaðýt diskler bakteri kültürlerinin yaydýrýldýðýbesiyeri üzerine belli aralýklarla yerleþtirilmiþlerdir.Bu þekilde hazýrlanan petri kaplarý +4°C'de 2 saatbekletilip, 37°C'de 24 saat inkübasyona alýnmýþ vesonra inhibisyon zonlarý milimetrik olarak ölçülmüþtür. Mayalar ise Glukoz-Yeast EkstraktBroth içerisinde 28°C'de 48 saat büyütülerek  yoðunluðu 0.5 McFarland skalasý göz önündebulundurularak 10
7
cfu/mL olacak þekildeayarlanmýþtýr. Petri kaplarýna 20 mL Patates Dekst-roz Agar (Oxoid) dökülmüþ ve yukarýdaki iþlemlertatbik edilmiþtir. Inhibisyon zonlarý mm cinsinden27°C'de 48 saat inkübasyondan sonra ölçülmüþtür.Bitki meyvesinin etil alkolle elde edilen hamözütünün Minimum inhibisyon konsantrasyon(MIC)'u makrobroth yöntemiyle belirlenmiþtir(Nakamura ve ark. 1999). Her bir bakteri kültürü(18 saatlik)'nden 50 µL (1X10
8
cfu/mL) alýnarak 4.95mL Mueller Hinton Broth ve bir seri bitki ekstresi(2 mg/mL'den baþlayarak 100 mg/mL konsantras- yona kadar) dilusyonlarý bulunan tüpler (16X100mm)'e aktarýlmýþ ve 37°C'de 24 saat inkübe edilmiþ-tir. Mayalar için ayný iþlemler Glukoz Yeast EkstraktBroth içeren tüplere uygulanmýþ ve 28°C'de 48 saatinkübasyona býrakýlmýþtýr. Inkübasyondan sonrabüyümenin görülmediði tüplerdeki en düþük ekstrekonsantrasyonu MIC olarak belirlenmiþtir. Ayrýcabulanýklýk oluþmayan tüplerden 50 µL alýnarak uygun besiyerine ekimler yapýlarak büyüme olup
No: 62, 200763 Asphodelus aestivus (Liliaceae)'un Antimikrobiyal Etkisinin ...
 Ekoloji
 
M. OSKAY, K. AKTAÞ, D. SARI, C. AZERÝ Ekoloji
olmadýðý da kontrol edilmiþtir.Test mikroorganizmalarýnýn oxoid marka nali-diksik asit (30 µg), penisilin G (10.i.u.), novobiyosin(30 µg), imipenem (10 µg), eritromisin (15 µg),kloramfenikol (30 µg) ve nistatin (10 µg) ticariantibiyotiklerine karþý duyarlýlýklarý disk diffüzyon yöntemiyle belirlenerek bitkiyle elde edilen sonuç-larla karþýlaþtýrma yapýlmýþtýr. Tüm testler ikiþertekrarlý olarak uygulanmýþtýr.
BULGULAR VE TARTIÞMA 
 A. aestivus
'un çiçek, meyve ve tüm bitki karýþý-mýnýn %96'lýk etil alkol ve n-bütanol ile elde edilenham özütlerinin gram (+), gram (-) bakteriler ilemayalara karþý antimikrobiyal aktivitesi sonuçlarýTablo 1 ve Tablo 2'de özetlenmiþtir.Bulgularýmýza göre; bitkinin çiçek, meyve vebitki kýsýmlarýndan elde edilen özütlerinin testedilen organizmalara karþý etkili olduðu, bu etkininortalama olarak 2-15 mm inhibisyon deðerleriarasýnda deðiþtiði belirlenmiþtir. Ýkiþer tekrarlý olarak  yapýlan ve ortalama antimikrobiyal aktivite sonuçlarý verilen bu araþtýrmada bitkinin meyve ham özüt-lerinin, diðer bitki kýsýmlarýndan elde edilen hamözütlerden daha yüksek çýkmasý antimikrobiyal aktif maddenin meyvede daha yoðun olduðunu düþün-dürmektedir. Çiçek, meyve, yaprak ve sap karýþý-mýndan elde edilen özütlerde ise antimikrobiyalaktivite düþmektedir. Ayrýca araþtýrma sonuçlarýndanetil alkol özütlerinin n-bütanol özütlerindenoldukça yüksek çýktýðýný da görmekteyiz. Gr (+)bakterilerden ortalama 13 mm inhibisyonla
S. aureus
, Gr (-)'lerden
S. typhimurium
ise ortalama 9mm ile en fazla etkilenen test organizmalarýdýr.
 E. coli
'de ise ortalama 8 mm inhibisyon görülmüþtür.Bitki özütlerinin mayalara karþý en yüksek inhibisyon etkisi ortalama 11 mm ile
Y. lipolytica
üzerinedir.
C. albicans
üzerindeki antimikrobiyal etkiortalama 10 mm'dir. Bitkinin farklý kýsýmlarýnýnözütlerini elde etmek için kullandýðýmýz etil alkol(%96) ve n-bütanol'ün test organizmalarýna karþýetkilerinin yaklaþýk 1 mm olduðu gözlenmiþ, hesap-lamalarda bu deðer göz önünde bulundurulma-mýþtýr. Bu tür organik solventlerin mikroorganiz-malar üzerine etkisinin düþük olmasý uçucu olma-larýna baðlanmaktadýr (Ahmed ve Beg 2001). Ayrýca;seyreltilerek kullanýlýrlarsa saf hallerinden dahaetkili olabilecekleri ve bitki özütlerinin eldeedilmesinde en iyi organik çözücüler olduðu da vur-gulanmaktadýr (Eloff 1998).Bitki meyvesinden elde edilen ham özütünmakrobroth yöntemiyle bazý test organizmalarýnakarþý MIC deðeri hesaplanmýþ, en düþük deðer 36mg/mL ile
C. albicans
'da belirlenmiþtir.
S. aureus, K. pneumoniae
 ve
 E. coli
için MIC deðerleri sýrasýyla 42,60 ve 90 mg/mL'dir.Test edilen organizmalarýn bazý ticari antibiyo-tiklere karþý duyarlýlýklarý Tablo 3'de verilmiþ olup;.
 K. pneumoniae
, nalidiksik asit (30 µg), eritromisin (15 µg);
 B. cereus
, penisilin G (10 i.u.);
 M. luteus,
nalidiksik asit, eritromisin;
 E. coli
, eritromisin;
 P. fluorescens
, kloramfenikol (30 µg) ve
 P. vulgaris
'in nali-diksik asite karþý dirençli olduðu tespit edilmiþtir.Her ne kadar test edilen organizmalarýn bazýlarýticari antibiyotiklere karþý dirençli olsalar da,
 A. aestivus
bitkisinin meyvelerinden elde edilen etilalkol özütleri antimikrobiyal etkilerinin kayda deðernitelikte olduðunu görülmüþtür. Ilçým ve ark.
Tablo 1.
Disk diffüzyon yöntemi antimikrobiyal testsonuçlarý.
a
Bakteriler MHA, mayalar PDA ortamlarýnda test edilmiþtir. * C,çiçek; M, Meyve; T, tüm bitki ekstresi; E, %96'lýk etil alkol; B, n-bütanol.
m
Deðerler milimetre cinsinden verilmiþ olup disk çapý (6mm) dahil deðildir.
b
test organizmalarýna karþý ortalama 1 mminhibisyon gerçekleþmiþ, hesaplamalarda 0 mm olarak alýnmýþtýr.
Tablo 2
. Çukur diffüzyon antimikrobiyal test sonuçlarý.
a
Bakteriler MHA, mayalar PDA ortamlarýnda test edilmiþtir. * C,çiçek; M, Meyve; T, tüm bitki ekstresi; E, %96'lýk etil alkol; B, n-bütanol; ND, belirlenmedi.
±
Kýsmi inhibisyon.
m
Deðerlermilimetre cinsinden verilmiþ olup çukur çapý (6 mm) dahildeðildir.
b
test organizmalarýna karþý ortalama 1 mm inhibisyongerçekleþmiþ, hesaplamalarda 0 mm olarak alýnmýþtýr.
c
Bitkimeyvesi ekstresi MIC deðerleridir
No: 62, 200764
of 00

Leave a Comment

You must be to leave a comment.
Submit
Characters: ...
You must be to leave a comment.
Submit
Characters: ...