Qu Qu Qu Qu descalcificamos? Tejido seo Muestras dentales Tejidos calcificados Tejidos calcificados Qu es la descalcificaci! C"sis#e $%sica&e#e e la 'e&"ci de sales de calci" desde #e(id"s 'ic"s e es#"s c"&)"e#es * +ue s" l"s causa#es de la du'e,a * 'esis#ecia de s#"s- l" +ue i&)ide du'e,a * 'esis#ecia de s#"s- l" +ue i&)ide se' )'"cesad"s c"&" cual+uie' "#'" #e(id" )a'a c"'#e .is#"l/ic". 0id'"1ia)a#i#a Es el )'ici)al c"&)"e#e &ie'al de l"s #e(id"s calcificad"s. 2e&"ci &edia#e us" de %cid"s fue'#es #ales c"&" %c 3#'ic" " f'&ic" #ales c"&" %c 3#'ic" " f'&ic" A/e#es +uela#es 4 EDTA 5 M#"d" elec#'"l3#ic" Cuidad"s 0id'lisis de %cid"s ucleic"s 6'dida de ac#i7idad e,i&%#ica Dis&iuci de la i&u"'eac#i7idad Descalcificaci ic"&)le#a Descalcificaci ic"&)le#a Fi(aci )'"l"/ada Fi del )'"ces" Recomendaciones Fi(aci &%s la'/a La7ad" )'"l"/ad" 4 89 .'s. Mi 5 La7ad" )'"l"/ad" 4 89 .'s. Mi 5 Ca&$i" dia'i" de la s"luci C"#'"l )e'&ae#e del )'"ces". a'#e'i"la Calcificaciones patolgicas Sarcoma de Ewing El PAS-diastasa para glucgeno es necesario en los tumores de celular redondas, para distinguir el sarcoma de Ewing (PAS positivos) del neuroblastoma y del linfoma (en general, PAS negativos). La impregnacin argntica para las fibras reticulares til para distinguir el sarcoma de Ewing del linfoma, tipo especializado de tejido tipo especializado de tejido tipo especializado de tejido tipo especializado de tejido conectivo conectivo conectivo conectivo Tejido seo Tejido seo Mara Eugenia Franco Mara Eugenia Franco Mara Eugenia Franco Mara Eugenia Franco conectivo conectivo conectivo conectivo Compuesto por: Compuesto por: Compuesto por: Compuesto por: Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica (35%) (35%) (35%) (35%) Matriz inorgnica Matriz inorgnica Matriz inorgnica Matriz inorgnica Matriz inorgnica Matriz inorgnica Matriz inorgnica Matriz inorgnica (65%) (65%) (65%) (65%) Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica Matriz orgnica (35%) (35%) (35%) (35%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular de naturaleza de naturaleza de naturaleza de naturaleza Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular Matriz extracelular de naturaleza de naturaleza de naturaleza de naturaleza glicoproteica glicoproteica glicoproteica glicoproteica que proporcionan que proporcionan que proporcionan que proporcionan flexibilidad y resistencia al tejido flexibilidad y resistencia al tejido flexibilidad y resistencia al tejido flexibilidad y resistencia al tejido Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso: glicosaminoglicanos glicosaminoglicanos glicosaminoglicanos glicosaminoglicanos: : : : condroitn condroitn condroitn condroitn- -- -sulfato + sulfato + sulfato + sulfato + queratnsulfato queratnsulfato queratnsulfato queratnsulfato + cido + cido + cido + cido hialurnico hialurnico hialurnico hialurnico. . . . proteoglicanos de pequeo tamao proteoglicanos de pequeo tamao proteoglicanos de pequeo tamao proteoglicanos de pequeo tamao protenas protenas protenas protenas (no colgenas) (no colgenas) (no colgenas) (no colgenas) exclusivas del hueso: exclusivas del hueso: exclusivas del hueso: exclusivas del hueso: MEC MEC MEC MEC MEC MEC MEC MEC Osteocalcina Osteocalcina Osteocalcina Osteocalcina (2% de la matriz orgnica) (2% de la matriz orgnica) (2% de la matriz orgnica) (2% de la matriz orgnica) Osteopontina Osteopontina Osteopontina Osteopontina Sialoprotena Sialoprotena Sialoprotena Sialoprotena sea sea sea sea (BSP). (BSP). (BSP). (BSP). comportamiento comportamiento comportamiento comportamiento tintorial tintorial tintorial tintorial acidfilo acidfilo acidfilo acidfilo. .. . PAS + y dbil PAS + y dbil PAS + y dbil PAS + y dbil metacromasia metacromasia metacromasia metacromasia Principal elemento calcio, en forma de sales como el fosfato de calcio o hidroxiapatita. Estas sales, se observan al microscopio de luz como finos depsitos cristalinos.(sin teir) atriz inor!"nica (65% del peso seco) (65% del peso seco) (65% del peso seco) (65% del peso seco) como finos depsitos cristalinos.(sin teir) #os cristales de hidroxiapatita miden $ nm de espesor % hasta &' nm de lar!o, se depositan entre la matriz or!"nica. Clulas del hueso Clulas del hueso Clulas del hueso Clulas del hueso Osteoblastos Osteoblastos Osteoblastos Osteoblastos:responsables :responsables :responsables :responsables de de de de la formacin de tejido seo nuevo la formacin de tejido seo nuevo la formacin de tejido seo nuevo la formacin de tejido seo nuevo O OO Osteocitos steocitos steocitos steocitos:osteoblastos :osteoblastos :osteoblastos :osteoblastos maduros y maduros y maduros y maduros y desarrollan una actividad menor desarrollan una actividad menor desarrollan una actividad menor desarrollan una actividad menor desarrollan una actividad menor desarrollan una actividad menor desarrollan una actividad menor desarrollan una actividad menor Osteoclastos Osteoclastos Osteoclastos Osteoclastos: encargados : encargados : encargados : encargados de reabsorber de reabsorber de reabsorber de reabsorber o eliminar la o eliminar la o eliminar la o eliminar la materiasea materiasea materiasea materiasea. .. . (ual)uier fijador, condicionado al estudio )ue se va%a a realizar Tiempo de fijado, *+ hrs. como m,nimo #avar los tejidos antes de -ijacin -ijacin -ijacin -ijacin #avar los tejidos antes de colocarlos en el descalcificador uestras voluminosas se seccionan antes de fijar (se puede usar sierra) Piezas dentarias, se seccionan los "pices % .o se realizan orificios laterales TECNICAS DE DESCALCIFICACION TECNICAS DE DESCALCIFICACION Mtodos qumicos Mtodos fsicos: electrolticos Mtodos fsicos: electrolticos ultrasonido Uso del microondas Agentes cidos Orgnicos Inorgnicos Frmico Ntrico Clorhdrico Actico Ctrico Descalcificadores Descalcificadores Agentes quelantes EDTA Sulfrico Inorgnicos Ntrico Ana Morse Descalificadores Qumicos cidos Actan como un exceso de H + alterando el equilibrio inico de la hidroxiapatita: Ca 1 !"# $ % & '!#H% ( medio )cido 1Ca +( +&"# $ *+ + H ( # +a extraccin cont,nua de los iones Ca- fosfato e hidroxilo e.ita que la hidroxiapatita alcance el equilibrio- produci/ndose su disolucin0 Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Descalcificacin por agentes quelantes Un agente quelante es un componente orgnico Un agente quelante es un componente orgnico Un agente quelante es un componente orgnico Un agente quelante es un componente orgnico que es capaz de unirse a iones metlicos formando que es capaz de unirse a iones metlicos formando que es capaz de unirse a iones metlicos formando que es capaz de unirse a iones metlicos formando as un as un as un as un quelato quelato quelato quelato Los Los Los Los quelatos quelatos quelatos quelatos son componentes muy estables y no se son componentes muy estables y no se son componentes muy estables y no se son componentes muy estables y no se descomponen fcilmente para liberar el ion metlico descomponen fcilmente para liberar el ion metlico descomponen fcilmente para liberar el ion metlico descomponen fcilmente para liberar el ion metlico cido etilendiamintetractico SAL DISODICA [CH 2 N(CH2COOH) CH2COONa] 2 EDTA EDTA EDTA EDTA Accin : quelacin de la hidroia!atita a !H "#$ %rimera& '2 hora& etraccin de ca&i el ()* del calcio# E!A Se debe usar Se debe usar Se debe usar Se debe usar recipiente de plstico recipiente de plstico recipiente de plstico recipiente de plstico +,ita -ormacin de .ur.u/a& de CO 2# La di-erencia con lo& de&calci-icadore& 0cido& e& que lo& VENTAJAS de EDTA de&calci-icadore& 0cido& e& que lo& ione& H1 no /ue2an un rol en la reaccin qu3mica A&e2ura la inte2ridad de la& e&tructura& intracelulare&# Ana "orse Ana "orse Ana "orse Ana "orse Es el mejor mtodo para usar en Es el mejor mtodo para usar en Es el mejor mtodo para usar en Es el mejor mtodo para usar en rutina, rutina, rutina, rutina, (con excepciones) (con excepciones) (con excepciones) (con excepciones) Se prepara mezclando cido Se prepara mezclando cido Se prepara mezclando cido Se prepara mezclando cido Frmico al 45% y Citrato de Na al Frmico al 45% y Citrato de Na al Frmico al 45% y Citrato de Na al Frmico al 45% y Citrato de Na al 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el 20% a partes iguales en el momento de usar momento de usar momento de usar momento de usar El cido frmico disuelve el calcio El cido frmico disuelve el calcio El cido frmico disuelve el calcio El cido frmico disuelve el calcio liberndolo y el Citrato acta como liberndolo y el Citrato acta como liberndolo y el Citrato acta como liberndolo y el Citrato acta como quelante quelante quelante quelante capturndolo capturndolo capturndolo capturndolo Uso del microondas: Uso del microondas: Uso del microondas: Uso del microondas: Acelera el proceso de desmineralizacin Acelera el proceso de desmineralizacin Acelera el proceso de desmineralizacin Acelera el proceso de desmineralizacin disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces La temperatura debe fijarse en 37 a 42 C La temperatura debe fijarse en 37 a 42 C La temperatura debe fijarse en 37 a 42 C La temperatura debe fijarse en 37 a 42 C Se recomienda el uso de microondas de Se recomienda el uso de microondas de Se recomienda el uso de microondas de Se recomienda el uso de microondas de laboratorio. laboratorio. laboratorio. laboratorio. laboratorio. laboratorio. laboratorio. laboratorio. Precaucin con los vapores Precaucin con los vapores txicos que se liberan al txicos que se liberan al calentar el descalcificador calentar el descalcificador /e basa en el uso de sonicador )ue emite ondas de sonido las )ue destru%en las estructuras como fosfato de calcio, fosfato de ma!nesio % 0escalcificacin por ultrasonido 0escalcificacin por ultrasonido de calcio, fosfato de ma!nesio % carbonato de calcio Descalcificador electroltico Descalcificador electroltico 4tili5a corriente elctrica la que acelera el !roce&o de de&calci-icacin de la& &olucione& 0cida&6 7a que lo& ione& de calcio 7 otro& minerale& al &er remo,ido& !or la &olucin de&calci-icadora6 &on de&!la5ado& hacia lo& !olo& de la celda elctrica utili5ada# + ++ + - -- -- -- - %ara com!ro.ar el trmino de la de&calci-icacin 8 9ec0nicamente !ro.ando &u dure5a con lo& dedo&6 u&ar una a2u/a 6 .i&tur3 o cualquier elemento cortante Pruebas radiogrficas. Pruebas radiogrficas. Prueba qumica: Prueba qumica: Prueba qumica: Prueba qumica: Se basa en que el Se basa en que el Se basa en que el Se basa en que el oxalato de Ca oxalato de Ca oxalato de Ca oxalato de Ca es insoluble en es insoluble en es insoluble en es insoluble en H HH H 2 22 2 O y soluciones acuosas alcalinas O y soluciones acuosas alcalinas O y soluciones acuosas alcalinas O y soluciones acuosas alcalinas Ca Ca Ca Ca 2 22 2 + ++ + + + + + C CC C 2 22 2 O OO O 4 44 4 2 22 2- -- - + + + + H HH H 2 22 2 O O O O CaC CaC CaC CaC 2 22 2 O OO O 4 44 4 . H . H . H . H 2 22 2 O OO O Se Se Se Se toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de descalcificador descalcificador descalcificador descalcificador usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y Se Se Se Se toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de toman 5 ml de descalcificador descalcificador descalcificador descalcificador usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y usado (3 a 12 hrs. de uso) y se agrega hidrxido de amonio (N se agrega hidrxido de amonio (N se agrega hidrxido de amonio (N se agrega hidrxido de amonio (N 4 44 4 OH) concentrado, mezclar. OH) concentrado, mezclar. OH) concentrado, mezclar. OH) concentrado, mezclar. Agregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NH Agregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NH Agregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NH Agregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NH4 44 4) )) ) 2 22 2 C CC C 2 22 2 O OO O4 4 4 4 x H x H x H x H2 22 2O O O O acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es transparente el proceso de descalcificacin ha terminado transparente el proceso de descalcificacin ha terminado transparente el proceso de descalcificacin ha terminado transparente el proceso de descalcificacin ha terminado Esta tcnica sirve tambin para EDTA Despus de descalcificar con cidos, se recomienda pasar los cortes por Sulfato de Sodio al 5% para neutralizar !n todos los casos se recomienda la"ar profusamente en a#ua antes de comenzar la inclusi$n comenzar la inclusi$n IMPORTANTE: Cuando la muestra incluye tejido seo y tejido tumoral blando, es preciso separar un fragmento de tejido blando y tratarlo sin descalcificacin. H-E H-E VAN GIESON MASSON VIMENTINA VIMENTINA VIMENTINA VIMENTINA ALFA ALFA ALFA ALFA- -- - ACTINA ACTINA ACTINA ACTINA DESCALCIFICACION con ANA MORSE DESCALCIFICACION con ANA MORSE DESCALCIFICACION con ANA MORSE DESCALCIFICACION con ANA MORSE VIMENTINA VIMENTINA VIMENTINA VIMENTINA DESCALCIFICACION con ACIDO NITRICO DESCALCIFICACION con ACIDO NITRICO DESCALCIFICACION con ACIDO NITRICO DESCALCIFICACION con ACIDO NITRICO S SS S- -- -100 100 100 100 mellas microcalcificaciones %ara lo& te/ido& que &e cortan &in decalci-icar &e u&a como medio de inclu&in: Acr3lico :e&ina :e&ina 9todo de inclu&in !ara corte con na,a/a 9todo de inclu&in !ara corte con na,a/a (;#9# %3a (;#9# %3a Ca&telli 4# Catlica) Ca&telli 4# Catlica) 9todo de inclu&in !ara corte con na,a/a 9todo de inclu&in !ara corte con na,a/a (;#9# %3a (;#9# %3a Ca&telli 4# Catlica) Ca&telli 4# Catlica) Na,a/a : acero &<!er duro con una cara !lana (ti!o D) alemana 9todo de inclu&in: 9e5cla de metilmetacrilato de&e&ta.ili5ado con una me5cla de NaCl 7 Na OH6 e&ta.ili5ado con Hidroquinona de&e&ta.ili5ado con una me5cla de NaCl 7 Na OH6 e&ta.ili5ado con Hidroquinona De&hidratacin en Alcohol = Acetona ():()6 > cam.io& (' d3a 7 ?) Im!re2nacin 9etilmetacrilato1 %la&toid N (alemania) @ cam.io& ( ' d3a) %olimeri5ar en e&tu-a a @"A (' d3a !ara otro) (molde -ra&co de !l0&tico6 el que -inalmente &e rom!e 7 queda el molde) El hueso se estudia sin descalcificar #ara estudiar los efectos #ro$ocados #or el tratamiento con !etraciclina Se #uede calcular la edad con el estudio de los osteones En dientes% Caries de esmalte En dientes% Caries de esmalte !raslucide& radicular Interaccin de materiales E!C''''''''''' !e(idos que se #ueden estudiar !e(idos que se #ueden estudiar sin descalcificar% sin descalcificar% Cresta ilaca Cresta ilaca )ie&as dentarias )ie&as dentarias 12/06/2013 43 )ie&as dentarias )ie&as dentarias *uesos com#actos *uesos com#actos E!C E!C ;ricrmico de 9a&&on H=+ ;am.in &e !uede e&tudiar &in tincin con !olari5acin Tinciones Tinciones &in tincin con !olari5acin Utilidades Utilidades %aciente& con di0li&i& %aciente& con di0li&i& De!&ito de aluminio De!&ito de aluminio sin decalcificar Hue&o normal &in Hue&o normal &in decalci-icar decalci-icar 90quina !ara te/ido& duro& 90quina !ara te/ido& duro& PROBLEMAS PROBLEMAS La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en La zona de corte en descalcificador descalcificador descalcificador descalcificador descalcificador descalcificador descalcificador descalcificador o en o en o en o en o en o en o en o en cido cido cido cido cido cido cido cido acetilsaliclico acetilsaliclico acetilsaliclico acetilsaliclico acetilsaliclico acetilsaliclico acetilsaliclico acetilsaliclico (aspirina) (aspirina) (aspirina) (aspirina) (aspirina) (aspirina) (aspirina) (aspirina) y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el y luego se intenta el corte nuevamente corte nuevamente corte nuevamente corte nuevamente corte nuevamente corte nuevamente corte nuevamente corte nuevamente CONSEJOS CONSEJOS CONSEJOS CONSEJOS CONSEJOS CONSEJOS CONSEJOS CONSEJOS DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO 1. 1. 1. 1. Buena fijacin ( tiempo) con lavado posterior Buena fijacin ( tiempo) con lavado posterior Buena fijacin ( tiempo) con lavado posterior Buena fijacin ( tiempo) con lavado posterior 2. 2. 2. 2. Buena descalcificacin con lavado posterior Buena descalcificacin con lavado posterior Buena descalcificacin con lavado posterior Buena descalcificacin con lavado posterior 3. 3. 3. 3. Cuidar los tiempos de deshidratacin y Cuidar los tiempos de deshidratacin y Cuidar los tiempos de deshidratacin y Cuidar los tiempos de deshidratacin y aclaramiento aclaramiento aclaramiento aclaramiento, , , , reemplazar el primer reemplazar el primer reemplazar el primer reemplazar el primer xilol xilol xilol xilol por Acetato de por Acetato de por Acetato de por Acetato de Butilo Butilo Butilo Butilo (esto sirve (esto sirve (esto sirve (esto sirve para todas las muestras) para todas las muestras) para todas las muestras) para todas las muestras) 4. 4. 4. 4. Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina 5. 5. 5. 5. Enfriar bien los moldes en el refrigerador Enfriar bien los moldes en el refrigerador Enfriar bien los moldes en el refrigerador Enfriar bien los moldes en el refrigerador 5. 5. 5. 5. Enfriar bien los moldes en el refrigerador Enfriar bien los moldes en el refrigerador Enfriar bien los moldes en el refrigerador Enfriar bien los moldes en el refrigerador 6. 6. 6. 6. Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y estirar en el agua de a 42 C estirar en el agua de a 42 C estirar en el agua de a 42 C estirar en el agua de a 42 C 7. 7. 7. 7. Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el dedo o echarle aliento. dedo o echarle aliento. dedo o echarle aliento. dedo o echarle aliento. 8. 8. 8. 8. ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el freeser freeser freeser freeser hasta el otro da . hasta el otro da . hasta el otro da . hasta el otro da . EN FIN MAANA SER OTRO DA EN FIN MAANA SER OTRO DA EN FIN MAANA SER OTRO DA EN FIN MAANA SER OTRO DA