Informe de prctica de laboratorio

Cromatografa de capa fina

Felipe Andrs Villamil Quintero 0224550
!amuel "a#id $spinel %al#n
Objetivos
Ad&uirir conocimiento teorico de la cromatografa
"iferenciar las tcnicas de cromatografa
!eparar una me'cla de colorantes por cromatografa de capa fina
Diagrama de flujo
Por medio de un plicador mecanico o por inmersin en la fase mvil
La fase estacionaria
Secar
Al ambiente
aplicar
Preparacin de las placas
Los portaobjetos a usar
Limpiar y secar
Activar
Las placas
Sembrar
En la placa activada
Colocar
Efluyente
Sellar
Cada cmara
Introducir
Las placas dentro de cada cmara
Desarrollar
El perfil cromatografico
Marco terico
Cromatografa
$s una forma de separaci(n mecnica para compuestos
comple)os basada en la retenci(n selecti#a de los compuestos a tra#s de un medio al estar
impulsados por otro medio en mo#imiento
sando una mescla de
solventes adecuados respecto
a las corridas anteriores
!odo el proceso "epetir
Los factores " Calcular
Para saturarlas de gas
Dentro de cada cmara
cromatografica
#anc$as concentradas de la
muestra y los patrones a usar
a %&' cm del borde inferior
Dejando en un $orno o
calentando en una estufa
*a cromatografa puede cumplir dos prop(sitos principales no e+clu,entes como lo son
purificar los componentes de una mescla , usarlos luego en una sntesis diferente , medir l
proporci(n de cada componente en mescla -finalidad analtica.
*a cromatografa se basa en las diferencias sutiles en el coeficiente de reparto para cada
compuesto de una mescla #s las dos fases &ue inter#ienen en la cromatografa
$s el cociente o ra'(n entre las concentraciones de esa sustancia en las dos fases de
la me'cla formada por dos disol#entes inmiscibles en e&uilibrio/ 0or tanto1 ese coeficiente
mide la solubilidad diferencial de una sustancia en esos dos disol#entes/
"onde [sustancia]
1
es la concentraci(n de la sustancia en el primer disol#ente ,1
anlogamente [sustancia]
2
es la concentraci(n de la misma sustancia en el otro disol#ente/

Cromatografa de capa fina
$s una tcnica de cromatografa en la cual la fase esttica es una capa de un material
poroso -silica1 alumina. ,
la fase m(#il es un
sol#ente l&uido1 la fase
esttica esta soportada
sobre un portaob)etos ,
generalmente la capa m(#il
flu,e gracias a la
capilaridad del material ,
al e&uilibrio generado por
la saturaci(n de la
atmosfera de traba)o con
los #apores del sol#ente o
fase m(#il/ $n esta tcnica
las interacciones entre la
fase estacionaria , la m(#il
con los componentes de la
mescla son puramente de
adsorci(n -sin reacci(n &umica. como puentes de 2idrogeno1 interacciones #an deer 3aals1
, electroestticas1 generando diferentes afinidades entre la fase m(#il1 &ue tratara de )alar el
compuesto1 , la fase esttica1 &ue tratara de mantener el compuesto en un solo lugar1 por lo
&ue se #era una diferente #elocidad a la cual flu,en los componentes durante la corrida1
estos componentes se pueden identificar usando sustancias patr(n conocidas1 , mediante la
medida de la distancia recorrida se puede determinar la identidad de cada mescla coloreada
o incolora -lu' ultra#ioleta o colorantes o reacciones &ue den color.
*a elecci(n del elu,ente generalmente es para un elu,ente poco polar ,a &ue si es mu,
polar -agua. la fase esttica podra disol#erse1 , respecto a la muestra se busca un
disol#ente &ue pueda separar selecti#amente los componentes de la mescla , &ue se puedan
definir las distancias recorridas por cada compuesto1 con el fin de compararlos con patrones
estndar1 dic2o criterio se logra empricamente despus de #arias corridas
Factor F !ratio de front"
$s un ndice &ue mide la posici(n del compuesto respecto a la posici(n final o alcan'e final
del elu,ente en la separaci(n1 de esta forma si el factor 4f de una manc2a es parecido al de
un patr(n las muestras pueden o no contener ese compuesto5 en caso de una muestra
desconocida se necesita un anlisis &umico posterior
$l 4F se define como la distancia recorrida por la manc2a desde el origen sobre la distancia
recorrida por el elu,ente desde el origen
0ara &ue el 4F sea reproducible se deben fi)ar algunos parmetros como el espesor de la
placa1 la temperatura , el flu,ente usado
$n general las muestras problema , los patrones se disol#ern en un sol#ente con un punto
de ebullici(n suficientemente ba)o de modo &ue se pueda e#aporar al aire , de)ar las
muestras
secas sobre la capa
el factor 4F es una
constante para cada
sistema compuesto6
fase esttica6
flu,ente
#atrones
usados
o$nitrofenol sudan %%% 1$!!&$!fenildia'enil"fenil"dia'enil"naftaleno$2$ol
(udan %) 76-26metil646-26metilfenildia'en,l. fenil. a'onaftalen626ol
m$nitroanilina
Datos
*os flu,entes usados en esta prctica fueron ter de
petr(leo1 tolueno , metanol
8rdenados en orden de polaridad
9ter de petroleo momento dipolar : 0/00;
<olueno = 0/>? "
@etanol momento dipolar = 71? "
Corrida con sol#ente ter de petr(leo
"istancia recorrida flu,ente 5 cm
"istancia recorrida muestra
problema
0/4 cm
"istancia recorrida patr(n 7 7/5 cm
"istancia recorrida patr(n 2 0/4 cm
"istancia recorrida patr(n > 0/2 cm
"istancia recorrida patro 4 6
Corrida con tolueno
"istancia recorrida flu,ente 5 cm
"istancia recorrida primera
manc2a muestra
2/> cm
"istancia recorrida segunda
manc2a muestra
2/?
"istancia recorrida patr(n 7 >/5 cm
"istancia recorrida patr(n 2 2/4 cm
"istancia recorrida patr(n > 2/4 cm
"istancia recorrida patr(n 4 6
Corrida con metanol
"istancia recorrida flu,ente primera
placa
5/> cm
"istancia recorrida muestra 5 cm
"istancia recorrida patr(n 7 5 cm
"istancia recorrida patr(n 2 5 cm
"istancia recorrida flu,ente segunda
placa
4/A cm
"istancia recorrida muestra 4/5 cm
"istancia recorrida patr(n > 4/5 cm
"istancia recorrida patr(n 4b 6
Corrida mescla metano tolueno 7B7
"istancia recorrida flu,ente
placa 7
4 cm
"istancia recorrida muestra >/A cm
"istancia recorrida patr(n 7 >/A cm
"istancia recorrida patr(n 2 >/A cm
"istancia recorrida flu,ente
placa 2
4/5 cm
"istancia recorrida muestra 4/> cm
"istancia recorrida patr(n > 4/> cm
"istancia recorrida patr(n 4 4/> cm
Corrida usando ter de petr(leo
"istancia recorrida
flu,ente
4/A cm
"istancia recorrida
muestra
0/> cm
"istancia recorrida
patr(n 4
7/A cm
C*lculos
RF
(eter muestra)
=
(distancia)
(distancia efluyente)
=
(0/4cm)
(5cm)
=0/0A
RF
(eter patron7)
=
(7/5cm)
(5cm)
=0/>
RF
(eter patron2)
=
(0/4cm)
(5cm)
=0/0A

RF
(eter patron>)
=
(0/2cm)
(5cm)
=0/04
RF
(toluenomuestra7)
=
( 2/>cm)
( 5cm)
=0/4?
RF
(toluenomuestra2)
=
(2/?cm)
(5cm)
=0/52
RF
(toluenopatron7)
=
(>/5cm)
(5cm)
=0/;
RF
(toluenopatron2)
=
(2/4cm)
(5cm)
=0/4A
RF
(toluenopatron>)
=
(2/4 cm)
(5cm)
=0/4A
RF
(etermuestra)
segunda corrida=
(0/>cm)
(4/Acm)
=0/0?25
RF
(eter patron4)
segunda corrida=
(7/Acm)
( 4/Acm)
=0/>;5
Discusin de resultados
!e #e &ue en la corrida usando ter1 el 4F de la muestra , en patr(n 2 coinciden
e+actamente , 2a, algCn acercamiento respecto al patr(n >1 adems &ue se puede descartar
la presencia de patr(n 7 en la muestra gracias a &ue los 4F de la muestra , dio patr(n en la
corrida con ter , tolueno son mu, distintos5 el patr(n 4 no se pudo distinguir en ninguna
de las primeras corridas a causa de su posible poca concentraci(n , de distingue en poca
medida en la segunda corrida usando ter de petr(leo5 podemos concluir &ue el patr(n 4 no
se encuentra presente en la muestra ,a &ue dic2os 4F son totalmente distintos
Vemos &ue el patr(n 7 presenta una gran afinidad por los sol#entes poco polares , no es
mu, afn a los sol#entes polares1 por tanto fue el patr(n &ue ms corri( en la corrida con
ter , con tolueno1 podemos decir &ue no es tan afn al ter como al tolueno/
$l metanol no es un buen flu,ente ,a &ue no pudo diferenciar notablemente ningCn patr(n1
todos corrieron con la misma #elocidad a tra#s del medio esttico1 incluso en la me'cla 7B7
con tolueno
$l tolueno tu#o un gran desempeDo como agente flu,ente ,a &ue se notan grandes
diferencias entre los 4F de los patrones1 adems &ue se puede obser#ar &ue 2ubo una
separaci(n de dos manc2as para la muestra5 los #alores 4F para las dos manc2as , para los
patrones 2 , > son similares1 as &ue 2a, altas probabilidades &ue la me'cla contenga patron
2 , en menor medida patr(n >
Conclusiones
*a muestra mu, probablemente contiene patr(n 2 , en menor medida patron >1 ,a &ue son
los patrones &ue presentan ma,or concordancia con los factores 4F de la muestra
!e recomienda para un me)or anlisis 2acer una corrida con una mescla &ue contenga ter
de petr(leo , tolueno1 ,a &ue se puede #er &ue el ter de petr(leo a pesar de su poca
afinidad con la muestra1 es capa' de diferenciar los patrones 2 , >1 , el tolueno se usara en
dic2o caso para aumentar dic2a diferencia
#reguntas
Qu ocurre si el flu,ente toca los puntos de siembre en la placaE
Como los compuestos pueden tener alguna solubilidad en el flu,ente1 puede pasar &ue al
2acer contacto1 los puntos de siembra se desintegren , los &ue no se desintegren1 se 2agan
irreconocibles1 ,a &ue el sol#ente con los colorantes disueltos subira a la ma,or #elocidad
posible1 por lo cual no se podra concluir nada respecto a dic2a placa cromatografica
Cul es el efecto de la polaridad en la cromatografaE
*a polaridad representa el resumen de las interacciones entre el flu,ente1 la fase esttica ,
el analito1 por lo cual podemos determinar las interacciones entre la propia fase m(#il ,
analito , la fase esttica , la m(#il1 asi la polaridad diferencial de la fase m(#il respecto a
la fase esttica 2alara con ma,or fuer'a a los analitos polares , en menor medida a los
analitos apolares1 adems &ue si la polaridad del flu,ente llega a ser mu, alta podra
disol#erse la fase esttica
Cules son las consecuencias de una columna mal empacadaE
Fna columna mal empacada causa asimetras en el grosor de la fase estacionaria1 asi &ue se
podra tener &ue una fase mas grues implica mas tiempo para &ue la muestra la atra#iese1 o
tambin podra des#iar radicalmente la muestra1 , la distancia recorrida se #eria afectada o
la muestra podra salirse de la placa
"iferencias entre cromatografa de gas , de l&uidosE
*a cromatografa de l&uido usa una fase estatica un solido por el cual flu,eun li&uido o
una me'cla de li&uidos1 por tanto las partculas &uedan enla'adas por afinidad
electroesttica1 , al aumentar la relaci(n carga tamaDo 2abr una ma,or resistencia a fluir1 o
tambin se puede tener &ue 2a,a un li&uido soportado en un solido inerte &ue 2aga de fase
estatica , otro li&uido inmiscible flu,endo a tra#s d eel1 en este caso se puede generar una
separaci(n gracias a la diferencia de solubilidades o coeficientes de reparto entre dic2os
li&uidos5 la cromatografa li&uido solido funciona me)or en la separaci(n por clases de
compuestos o para la separaci(n de compuestos isomricos en cambio la cromatografa de
li&uido gas funciona me)or con la separaci(n de 2om(logos/ *os grupos funcionales &ue
son capaces de formar enlaces de 2idr(geno fuertes se retienen muc2o en cromatografa de
li&uido solido1 ,a &ue la fase esttica suele ser polar
0rofundi'aci(n sobre fluorescencia de sustancias incoloras
*a fluorescencia es un mtodo por el cual algunas sustancias absorben lu' de una longitud
de onda dada , luego emiten lu' de una longitud de onda ma,or o sea menos energtica1 asi
toda la energa absorbida por la sustancia se disipa en forma de lu' , en forma de calor
$ste efecto suele ser mas intenos cuando se absorbe lu' de longitudes de onda corta - mu,
energtica. como los ra,os gamma1 +1 FV1 , lu' a'ul dentro del espectro #isible pero suele
ser mas notorio cuando se usa lu' FV &ue se atenuada a lu' dentro del espectro #isible
*as sustancias &ue son capaces de emitir lu' al ser e+citadas por diferentes tipos de
radiaci(n se denominan fluor(foros/
*a fluorescencia se da cuando un electron es e+citado a causa de &ue un foton de una
energa epeficia incida sobre el1 lo &ue genera &ue este electron1 &ue estaba en un orbital de
ba)a energa salte a un estado de alta ennergia en otro orbital mas alto1 para compensar esto
el atomo 2ace &ue otro electron en un orbital alto libere su energa , caiga1 el electron emite
esta energa en forma de fotones , es lo &ue percibimos como fluorescencia &ue transcurre
casi instantneamente1 el atomo puede liberar cantidades #ariables de energa dependiendo
de cuanta absorba , de donde sea la caiga del electron1 esto a causa de la comple)idad de la
estructura molecular , solida del material en cuesti(n
$sta fluorescencia se usa en muc2as aplicaciones tales como la inde+asion de cristales1
donde se e+citan atomos de cobre o Golframio , los ra,os + producidos son luego
tamisados1 para obtener una longitud de onda especifica1 , luego se redirigen al cristal para
obtener el perfil de difracci(n acorde con la le, de Hragg
@uc2os compuestos organicos como en benceno o el antraceno tambin presentan
fluorescencia gracias a los enlaces dobles deslocali'ados &ue absorben la lu'
0armetros de la cromatografa li&uida de alta eficiencia
*a cromatografa li&uida de alta eficiencia implica el bombeo de la fase flu,ente a tra#s de
la fase estatica con una bomba de alta presi(n , la fase estacionaria comnsiste en esferas de
material empacadas en la columna , dic2as esferas tienen caractersticas &umicas en su
superficie &ue propician la adsorci(n diferencial de los compuestos1 la alta #elocidad a la
&ue flu,e el flu,ente aumenta la #elocidad lineal del mismo , disminu,e su difusi(n radial
a tra#s de la columna1 me)orando la resoluci(n1 esta tcnica cromatografica puede
me)orarse segCn las necesidades cambian la polaridad de la fase estacionaria , la fase
m(#il1 usando en una una fase estacionaria poco polar , un el,ente moderadamente polar o
una fase estacionaria polar , elu,entes apolares
*os parmetros mas influ,entes sonB
$l dimetro interno5 ,a &ue el dimetro influ,e en la difusi(n radial del compuesto1
asi &ue las columnas de ma,or dimetro son menos sensibles , suelen utili'arse
para tcnicas de planta como la purificaci(n en cambio las de menor dimetro son
para fines analticos
<amaDo de particulaB las partculas &ue generan la fase estasionaria estn soportadas
en silica , tienen distintos tamaDos1 por tanto al disminuir el tamaDo aumenta el rea
de contacto , genera un me)or contacto entre las fases1 pero es generalmente mas
difcil 2acer fluir el flu,ente a tra#s de dic2as esferas tan pe&ueDas
<amaDo de poroB @uc2as fases estacionarias son porosas para proporcionar una
ma,or superficie/ *os poros pe&ueDos proporcionan una ma,or superficie mientras
&ue los poros de ma,or medida proporcionan una cintica me)or1 especialmente
para los compuestos de tamaDo ms grande5 por e)emplo1 una protena &ue sea
ligeramente ms pe&ueDa &ue el tamaDo de los poros puede entrar1 pero difcilmente
saldr con facilidad/
0resi(nB entre ma,or presi(n ma,or #elocidad de flu)o , tambin se podrn usar
partculas mas pe&ueDas1 todo esto con el fin de aumentar la sensibilidad del
proceso
+ibliografa
<cnicas de bio&umica , biologa molecular/B Iorge "a#id 4origue' @iranda/ $ditorial
4e#ert1 77/ I!HJB A4277A75/ Cap/ AB Cromatografa/
*ederer1 $dgarB Cromotografa1 re#isi(n de sus principios , aplicaciones por $dgar
*ederer , @ic2ael *ederer Huenos aires $l ateneo
Keftmann1 $ric2 B C2romatograp2, $ric2 Keftmann JeG ,orL 4ein2old
%uerrero Carlos A B guias del laboratorio de principios de &uimica organica1 editorial
Fni#ersidad Jacional