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1.- Determinación Cuantitativa de Glucosa en suero

1.- Determinación Cuantitativa de Glucosa en suero

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En el método GOD-POD, en un primer paso la glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la D-glucosa a ácido D-glucónico con formación de peróxido de hidrógeno. Éste es utilizado por la peroxidasa para oxidar a la 4-aminofenazona y al fenol, dando lugar a una quinonaimina coloreada. La intensidad de color será proporcional a la concentración de glucosa presente inicialmente. (En ocasiones se utilizan otros sustratos en lugar de 4-aminofenazona+fenol, tales como o-dianisidina, guayacol y ABTS.)
En el método GOD-POD, en un primer paso la glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la D-glucosa a ácido D-glucónico con formación de peróxido de hidrógeno. Éste es utilizado por la peroxidasa para oxidar a la 4-aminofenazona y al fenol, dando lugar a una quinonaimina coloreada. La intensidad de color será proporcional a la concentración de glucosa presente inicialmente. (En ocasiones se utilizan otros sustratos en lugar de 4-aminofenazona+fenol, tales como o-dianisidina, guayacol y ABTS.)

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03/08/2014

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1
PRÁCTICA No.1“DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE GLUCOSA EN SUERO”
INTRODUCCIÓN
La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente através de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en elmantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y elalmacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por elpáncreas.
1 
La glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al combinarlo con el oxígenode la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de lasangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotespancreáticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma deglucógeno, aminoácidos, y ácidos grasos. Cuando la glucosa en sangre está muy baja, en condicionesnormales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagón que hace lo contrario y mantiene losniveles de glucosa en sangre.
2
 Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situación se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta es la razón principal por la que se produce aumentode glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y alteraciones que también la provocan.
1
El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altasaparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia.
2
El mantenimiento de la glucemia, o concentración plasmática de glucosa, en los organismos superiores esfundamental para el funcionamiento de todos los órganos, al ser la glucosa un metabolito energético principal.La coordinación de los procesos metabólicos implicados en este cometido se lleva a cabo por la relacióninsulina/glucagón. La ingestión de glucosa o sustancias que la produzcan (almidón, fructosa, galactosa,proteínas, pero no grasas) va seguida, en las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Esteaumento origina la puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilización de glucosa (por 
glucólisis
, entre otras), aceleración de la
glucogenogénesis
y disminución de la
glucogenólisis
; todo elloocurre principalmente mediante la secreción de insulina, una hormona pancreática de tipo polipeptídico. En elcaso de que la producción de insulina esté disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las células, locual ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (
hiperglucemia
); así ocurre en las personas que sufren
diabetes
del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo 1".El diagnóstico de la diabetes dependiente de insulina es sencillo y se basa en antecedentes, síntomas clínicosy comprobación de una hiperglucemia significativa. Las determinaciones de glucemia basal permiten eldiagnóstico de la diabetes, pero constituyen valores puntuales y aislados en el tiempo que no reflejan losniveles medios de glucemia ni la duración de la misma. Por lo tanto, es necesario disponer de pruebas queindiquen el grado del control metabólico de la enfermedad a corto y medio plazo. Estas pruebas estánbasadas en el fenómeno de unión de la glucosa a diversas proteínas. Esta
glucosilación
tiene lugar por unareacción no enzimática y afecta tanto a proteínas de vida media corta (albúmina, hemoglobina, etc.) como devida media larga (colágeno, mielina, etc.). La intensidad de la glucosilación depende de varios factores, siendolos más importantes los niveles medios de glucemia, la duración de la hiperglucemia, la vida media de lasproteínas y la concentración de éstas. Como consecuencia, la medida de la glucosilación proteica constituyeun buen marcador bioquímico del grado de compensación del enfermo diabético.
 Análisis de glucosa en sangre
El análisis de la glucosa Mide la cantidad (concentración) de glucosa presente en la sangre y sobre todo serealiza para estudiar la posible presencia de una diabetes mellitus o sacarina. Como es una enfermedad muycompleja y con grandes repercusiones de salud es un análisis muy discriminativo y útil que se realiza de formabastante rutinaria. Como se ha indicado, la diabetes dependiente de insulina cursa con un aumento de laconcentración de glucosa en sangre (glucemia), que se produce de manera repentina y la hiperglucemia essevera. Una hiperglucemia superior a 140 mg/dL detectada en más de una ocasión en ayunas es un índice deposible diabetes, diagnóstico que debe confirmarse con otras pruebas. La determinación de glucosa
 
2
sanguínea es una prueba muy frecuente en bioquímica y se puede llevar a cabo tanto por métodos químicoscomo enzimáticos, siendo estos últimos los más específicos.Hay dos tipos de
métodos químicos:
a)
Reductimétricos
, que se basan en la capacidad reductora de la glucosa. Debido a la presencia en lamuestra de otros compuestos reductores, estos métodos dan cifras superiores a las correspondientes a laglucosa verdadera.b)
Furfurálicos:
se basan en la capacidad de la glucosa para formar furfural al sufrir deshidratación en unmedio ácido. Un ejemplo es el método que emplea o-toluidina.En cuanto a los
métodos enzimáticos:
 a)
Método de la hexoquinasa:
emplea las enzimas hexoquinasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa. Por cadamolécula de glucosa se forma una de NADPH, que puede medirse espectrofotométricamente a 340 nm. Es elmétodo de referencia recomendado por las organizaciones internacionales.b)
Método de glucosa oxidasa y 
peroxidasa (GOD-POD): es el que se utiliza en esta práctica para medir losniveles de glucosa sanguínea de ratas diabéticas y controles.
3
 
Técnica
Para realizar este análisis se precisa estar en ayunas al menos las 6 horas previas. Se puede realizar la tomaen un lugar apropiado (consulta, clínica, hospital) pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio delpaciente.
 
Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en general se utilizan las venassituadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la muestra utilizará guantes sanitarios,una aguja (con una jeringa o tubo de extracción) .
 
Le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas retengan más sangre yaparezcan más visibles y accesibles.
 
Limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación localizará la venaapropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor.
 
Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración (mediante la jeringa omediante la aplicación de un tubo con vacío).
 
Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodón o similar parafavorecer la coagulación y se le indicará que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con unesparadrapo durante unas horas.Problemas y riesgos:1. La obtención mediante un pinchazo de la vena puede producir cierto dolor.2. La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar lugar a varios pinchazos3. Aparición de un hematoma (moratón o cardenal) en la zona de extracción, suele deberse a que lavena no se ha cerrado bien tras la presión posterior y ha seguido saliendo sangre produciendo esteproblema. Puede aplicarse una pomada en la zona.4. Inflamación de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada, bien sea por una causa meramentefísica o por que se ha infectado. Se deberá mantener la zona relajada unos días y se puede aplicar una pomada en la zona. Si el problema persiste o aparece fiebre deberá consultarlo con su médico.
Valores normales de glucosa en la sangre:
Los valores normales son entre 70 y 105 mg por decilitro. En los niños pequeños se aceptan valores de 40 a100 mg/dl.
Los valores más bajos de 40-50 mg/dl se consideran bajos (hipoglucemia).
Los valores más altos de 128 mg/dl se consideran altos (hiperglucemia).
2
 
Factores que intervienen:
Muchas formas de estrés (traumatismos, infartos, anestesia general,..) pueden aumentar los niveles deglucosa en sangre de forma pasajera.
La cafeína también puede aumentarlos
 
3
Fármacos: algunos pueden aumentar los niveles de glucosa en sangre u orina, otros pueden disminuir losniveles en sangre y otros pueden interferir en los resultados obtenidos con las tiras reactivas para medir laglucosuria (antidepresivos, antihipertensivos, hormonas femeninas, etc...)
1
 
El alcohol y analgésicos pueden disminuirla
Los tratamientos con sueros en vena, ya que contienen dextrosa (azúcar)
Embarazo
Patologías relacionadas:
Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglucemia) en:
 
Diabetes mellitus
 
Enfermedades renales
 
Feocromocitoma
 
Hipertiroidismo
 
Glucagonoma
 
Pancreatitis aguda
 
Síndrome de Cushing
 
Tumores de páncreas
 
Otras situaciones antes explicadas (estrés,sueros, embarazo, medicamentos) 
Puede aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en:
 
Dietas excesivas
 
Enfermedades hepáticas
 
Enfermedad de Addison
 
Exceso de insulina en diabéticos
 
Hipopitituarismo
 
Hipotiroidismo
 
Insulinoma
2
 
Principio del Método de Determinación cuantitativa de glucosa IVD (Spinreact)
La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a acido glucónico. El peróxido de hidrogeno(H
2
O
2
), producido se detecta mediante un aceptor cromo génico de oxigeno, fenol-ampirona en presencia deperoxidasa (POD):
Reacción:
ß-D-Glucosa + O
2
+ H
2
O
GOD
Acido glucónico + H
2
O
2
 
H
2
O
2
 
+ Fenol + Ampirona
POD
Quinona + H
2
O
Fundamento:
En el método GOD-POD, en unprimer paso la
glucosa oxidasa
cataliza la oxidación de la D-glucosa a ácido D-glucónico conformación de peróxido dehidrógeno. Éste es utilizado por la
 peroxidasa
para oxidar a la 4-aminofenazona y al fenol, dandolugar a una quinonaiminacoloreada. La intensidad de color será proporcional a laconcentración de glucosapresente inicialmente. (Enocasiones se utilizan otrossustratos en lugar de 4-aminofenazona+fenol, tales comoo-dianisidina, guayacol y ABTS.)Esquema de la reacción:
3
Significado Clínico
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo, la insulina facilita la entrada deglucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por un déficit deinsulina.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio

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