UNIVERSIDAD DE CHILE

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y PECUARIAS

DEPARTAMENTO FOMENTO DE LA PRODUCCION ANIMAL
UNIDAD DE REPRODUCCION
CICLO ESTRAL DE LA HEMBRA BOVINA
Dr. Mario Duchens; Dra. Mnica De los Reyes
La produccin bovina, tanto de carne como de leche, depende fuertemente de
la actividad reproductiva, y por lo tanto los problemas reproductivos tienen un
gran impacto econmico. En este apartado docente se presentarn los
principales eventos fisiolgicos y endocrinos que estn asociados con el inicio
de la maduracin sexual o pubertad, y la fisiologa del ciclo estral, y se
discutirn algunos aspectos clnicos y de manejo del ciclo.
INICIO DE LA MADRACI!N SE"AL O #BERTAD
El mejoramiento de la eficiencia reproductiva en bovinos depende en forma
importante de la introduccin en su momento adecuado de las hembras de
reemplao, o vaquillas, al reba!o. Las vaquillas debieran tener su primer parto
alrededor de los dos a!os de edad. Esto implica que la gestacin debe iniciarse
a los "# meses de edad. En los sistemas de bovinos para produccin de carne,
en que por raones de manejo los encastes y los partos se concentran en
determinadas $pocas del a!o, se debe maximiar la proporcin de vaquillas que
paren temprano en la estacin de modo de tener terneros de mayor edad, y por
lo tanto de mayor peso, al llegar la fecha del destete. Esto permite adems,
reencastarlas ms temprano en la siguiente temporada. %on esto aumenta la
permanencia de los animales en el reba!o, ya que es menos probable su
eliminacin por causas reproductivas. En bovinos para produccin de leche, las
hembras de reemplao tambi$n deben parir, e iniciar la produccin de leche, a
los dos a!os. &ara lograr esta meta se requiere un desarrollo corporal
adecuado de las vaquillas y un inicio preco de la pubertad y de la primera
gestacin.
En animales dom$sticos, la pubertad se define en t$rminos generales como la
presentacin del primer estro asociado a una ovulacin potencialmente f$rtil,
que es seguida por una fase luteal de duracin normal y el inicio del primer ciclo
sexual. En primates y humanos, primero ocurre una serie de ciclos
anovulatorios antes de alcanarse la plena fertilidad. El bovino se encontrara
en una situacin intermedia, ya que la primera ovulacin no va acompa!ada de
signos de celo y es seguida de un ciclo estral de corta duracin. 'dems se
describe que en un "( a ))* de las vaquillas prep+beres ocurre un celo
anovulatorio que precede el primer ciclo normal, presentndose
aproximadamente ( meses antes de la pubertad, y se denomina estro no
puberal.
La pubertad representa solamente el inicio de la maduracin sexual, la que en
realidad no se completa hasta que la hembra alcana la madure caracterstica
de su raa. Esta idea se ilustra ms claramente en especies de parto m+ltiple
como los cerdos, en que la tasa de ovulacin va aumentando en ciclos estrales
sucesivos, y se considera que han alcanado la madure sexual cuando se
alcana la mxima tasa de ovulacin o tama!o de la camada. Este hecho tiene
implicancias prcticas al momento de decidir el momento en el cual comenar a
cubrir las hembras. La incidencia de pubertad, as como la de estro no puberal,
est influenciada por varios factores entre ellos la edad, genotipo, estacin del
a!o, peso corporal, nutricin, y ambiente social en la criana.
$ISIOLO%&A DEL CICLO ESTRAL
%enerali'a'es
,na ve que se logra la pubertad, los ciclos estrales se presentan a intervalos
regulares y sin interrupcin, a menos que se inicie una gestacin o que las
condiciones nutricionales sean muy malas. -o se ha demostrado un efecto de
la estacin del a!o sobre la actividad cclica en bovinos. &or estas raones se
clasifica a la hembra bovina como (oli)s*rica *+(ica. El ciclo estral en la
hembra bovina tiene una duracin de aproximadamente )" das, pero
normalmente puede variar de ". a )# das. El periodo de estro vara de ) a #/
horas, pero promedia ") a "0 horas en la mayora de las condiciones. En vacas
lecheras en manejo intensivo, se describe una duracin promedio del celo de
aproximadamente . horas. La ovulacin es espontnea, es decir ocurre
independiente de la existencia de una monta, y se presenta aproximadamente
)1 a (/ horas despu$s del inicio del celo. 2eneralmente es un solo ovocito el
que ovula3 las ovulaciones dobles 4y por lo tanto la probabilidad de gestacin de
mellios5 son poco frecuentes. Los primeros signos de celo generalmente
coinciden con el inicio del ala preovulatoria de las hormonas luteiniante 4L65 y
folculo estimulante 47865. La duracin del ciclo estral es generalmente " a )
das menor en vaquillas que en vacas. La temperatura ambiental alta no parece
alterar la duracin del ciclo estral, pero puede reducir la duracin e intensidad
del celo, y reducir el flujo de sangre al tracto reproductivo y alterando las
concentraciones de algunas hormonas reproductivas.
El ciclo estral se divide tradicionalmente en 1 fases9
- estro 4da /5
- metaestro 4das " a (5
- diestro o fase luteal 4das 1 a 05
- proestro o fase folicular 4da ": hasta el inicio del siguiente celo5
El es*ro o celo se caracteria por la receptividad sexual de la hembra 4se deja
montar5 a un toro o a la actividad de monta de otras hembras, adems del
crecimiento de un folculo y su preparacin para la ovulacin. El ,e*aes*ro
comprende las fases finales de la maduracin folicular y la ovulacin, la
formacin del cuerpo l+teo y el inicio de la secrecin de progesterona. ,na ve
que se observan concentraciones significativas de progesterona 4 " ng mL
;"
5
en la sangre, es el comieno de la -ase lu*eal o 'ies*ro, la que contin+a hasta
que el cuerpo l+teo comiena a regresar al inicio de la luteolisis. En la medida
que las concentraciones de progesterona en sangre comienan a declinar
rpidamente producto de la lisis luteal, se inicia el (roes*ro o -ase -olicular,
llevando al crecimiento de una onda folicular y la seleccin de un folculo
ovulatorio.
#ATRONES ENDOCRINOS DRANTE EL CICLO
&ara propsitos de describir mejor las interacciones entre las hormonas de
hipotlamo, hipfisis, ovarios y +tero, que estn asociadas al comportamiento
sexual y la endocrinologa normal del ciclo estral, la mayora de los autores
prefiere considerar que el ciclo se inicia cuando comiena a crecer el folculo
que se selecciona para ovular. <e esta manera, el ciclo se divide en ( periodos
endocrinos9 4"5 antes del pea= de gonadotrofinas, que es posterior a la luteolisis
y que corresponde a la fase de crecimiento del folculo ovulatorio, 4)5 ala
preovulatoria de gonadotrofinas, y 4(5 fase luteal.
.. #re/io al al0a 'e 1ona'o*ro-inas
Este periodo comiena con la lisis del cuerpo l+teo y finalia con el pea=
preovulatorio de 786 y L6, el que inicia el proceso ovulatorio de un folculo
maduro )1 a (/ horas ms tarde. 'l final de este periodo adems se inicia la
manifestacin del celo. <urante este tiempo, las concentraciones de
progesterona declinan rpidamente y las de estradiol comienan a aumentar
paralelo al rpido crecimiento de un folculo preovulatorio. En la medida que la
progesterona disminuye, las concentraciones basales de L6 aumentan, y la
frecuencia de pulsos de L6 se incrementa desde aproximadamente un pulso
cada 1 a > horas, a un pulso cada " hora. 8in embargo, la amplitud de estos
pulsos disminuye debido a la reduccin del feedbac= negativo de los esteroides
ovricos sobre el hipotlamo y la hipfisis. La esteroidog$nesis folicular es
producto de la actividad de c$lulas de la teca externa y de la granulosa.
'unque el crecimiento folicular puede ser estimulado por 786 sola, la mxima
sntesis de estradiol in vitro es inducida por una combinacin de 786 y L6.
Las mismas se!ales endocrinas que estimulan el crecimiento y maduracin de
los folculos son las que inician la involucin del endometrio y las glndulas
uterinas. En la vaca, y las otras especies dom$sticas, no hay signos evidentes
de este proceso que puedan compararse a la menstruacin en primates y
humanos, pero estudios histolgicos muestran cambios importantes en el +tero.
El aumento en los pulsos de L6 y en los ttulos de estradiol, sumado a la
presencia de concentraciones basales de progesterona 47igura "5, culminan
eventualmente en el inicio del celo, con el pea= de estradiol desencadenando el
pea= preovulatorio de 786 y L6 47igura )5. Este pea= es precedido por la
descarga masiva de 2n?6 desde el hipotlamo. @tro importante efecto del
estradiol a nivel central es desencadenar el cambio en el comportamiento
conocido como celo. El signo ms importante de la ocurrencia de estro, y el
ms fcil de reconocer, es la actitud de la hembra de dejarse montar por un toro
o por otra vaca. 8e considera iniciado el celo cuando la hembra se deja montar
por primera ve. La interaccin entre macho y hembra es reforada por la
secrecin de feromonas desde la regin perineal de la hembra, proceso que
tambi$n est regulado por el estradiol. El estradiol adems estimula cambios en
el tracto reproductivo que permitirn la ocurrencia de la monta y fecundacin.
8e produce secrecin seromucosa en la vagina y vulva, con edema de la vulva
y el c$rvix. Esto asegura la lubricacin del tracto reproductivo para permitir la
monta y ayudar al avance de los espermatooides a trav$s de la unin +tero;
cervical. En el +tero y oviductos, el predominio de los estrgenos induce un
aumento de la contractibilidad del miometrio, la que es esencial para permitir el
transporte de los espermatooides hacia el sitio de fecundacin. Los estrgenos
adems estimulan la inmunidad local del +tero a trav$s de la llegada masiva de
linfocitos. Esto protege al tracto reproductivo de infecciones y promueve la
absorcin de espermatooides y restos seminales despu$s de la monta.
El estradiol induce el pea= de L6 aumentando la frecuencia de pulsos en la
secrecin de 2n?6 por el hipotlamo y aumentando la sensibilidad de la
hipfisis a los pulsos de 2n?6. 8i se inhibe este aumento de estradiol, ya sea
por medios qumicos o inmunolgicos, se puede bloquear el pea= de
gonadotrofinas. 'dems, para que el estradiol pueda inducir el ala de
gonadotrofinas, las concentraciones de progesterona deben estar bajas, ya que
la administracin de progesterona durante el periodo previo al pea= puede
bloquear esta ala. El pea= de 786 y L6 generalmente dura 0 a "/ horas
47igura )5. La disminucin del pea= preovulatorio ocurrira por refractariedad de
la hipfisis a la 2n?6, por una disminucin en los receptores de 2n?6 en las
c$lulas gonadotrficas, y adems por el t$rmino del pool disponible de
gonadotrofinas en la hipfisis. Esta hiptesis se sostiene en dos observaciones9
4"5 cuando vaquillas son ovariectomiadas inmediatamente despu$s del inicio
del celo y el pea= de gonadotrofinas preovulatorio, se observa un retraso en el
aumento de L6 que ocurre post castracin, y 4)5 las inyecciones de 2n?6
luego de ") a "> horas desde el inicio del pea= producen liberacin solo de
cantidades marginales de gonadotrofinas.
2. Al0a (reo/ula*oria 'e 1ona'o*ro-inas
Este periodo se caracteria por presentar concentraciones sanguneas de
estradiol en declinacin 47igura "5, despu$s de su pea= al inicio del celo,
paralelo al comieno de la luteiniacin del folculo. La respuesta inmediata al
ala de L6 es una marcada disminucin en la sntesis de estradiol, debido a
una baja en la disponibilidad de andrgenos yAo una reduccin en la actividad
de aromatiacin. <espu$s del pea= se inicia la luteiniacin de las c$lulas
foliculares, comenando la produccin de progesterona
&osterior al ala de gonadotrofinas el folculo colapsa y se libera el ovocito
maduro hacia la fimbria. En el proceso de ovulacin ocurren cambios
bioqumicos y vasculares similares a los que ocurren en una reaccin
inflamatoria. La ruptura folicular es regulada por una serie de mediadores
intrafoliculares como prostaglandinas. La ruptura de la membrana basal y
capilares lleva a extravasacin al folculo vaco y la formacin del cuerpo
hemorrgico. El folculo roto tambi$n es invadido por c$lulas tecales. El
contenido de estradiol en el folculo declina rpidamente y el contenido de
progesterona comiena a aumentar, debido a que las c$lulas de la teca y de la
granulosa se diferencian hacia c$lulas luteales para formar el cuerpo l+teo. Las
c$lulas tecales se desarrollan a c$lulas de menor dimetro, conocidas como
c$lulas luteales peque!as, y las c$lulas de granulosa se convierten en las
c$lulas luteales grandes.
En la ovulacin, el ovocito se libera rodeado de varias capas de c$lulas de
granulosa, formndose el c+mulo oforo, y este complejo ovocito;c+mulo 4%@%5
es enviado hacia el extremo del oviducto ayudado por la actividad ciliar de la
fimbria. La motilidad de los cilios y las contracciones de la musculatura lisa del
oviducto transportan el %@% hacia el sitio de fecundacin.
El periodo restante del llamado metaestro 4das " a (5 se caracteria por
presentar concentraciones bajas de L6. El estradiol se encuentra tambi$n bajo,
y las concentraciones de progesterona comienan a mostrar un aumento, que
sin embargo no es significativo 47iguras " y )5. ,n ala secundaria en 786, de
menor magnitud que el observado durante el pea= de L6 ocurre justo antes de
la ovulacin o alrededor de )1 a (/ horas despu$s del inicio del pea=
preovulatorio 47igura "5. Esta ala secundaria puede ser una consecuencia de
la disminucin en la produccin de inhibina durante el periodo ovulatorio. Este
aumento en 786 probablemente estara relacionado con el BrecruitmentC de la
primera onda de folculos antrales.
3. $ase lu*eal
La fase luteal se extiende entre los das 1 y "0 del ciclo, y comiena cuando el
cuerpo l+teo secreta concentraciones significativa de progesterona, las que
generalmente sobrepasan "ng mL
;"
4aprox (,) nmol L
;"
5 hacia el da 1 del ciclo
47igura "5. Dientras persista el cuerpo l+teo y se mantengan niveles altos de
progesterona en circulacin, no hay manifestacin de estro. %uando la
progesterona pasa a ser nuevamente la hormona dominante, favoreciendo el
feedbac= negativo para gonadotrofinas en la fase luteal, los patrones de
secrecin de L6 se modifican nuevamente hacia una baja frecuencia 4un pulso
cada 1 a > horas5 pero con pulsos de mayor amplitud. La progesterona alcana
concentraciones mximas en los das 0 a "/ 47igura "5, lo que es casi
coincidente con el peso y tama!o mximos del %L en desarrollo.
La dominancia de la progesterona en esta fase, causa hipertrofia y un aumento
en la vasculariacin y secrecin del endometrio. En la vaca y otros rumiantes,
esta vasculariacin es especialmente importante en las car+nculas del
endometrio, ya que estas reas formarn el componente materno de la placenta
en caso de haber gestacin. @tro efecto de la progesterona es la inhibicin de
la contractibilidad del miometrio. Eodas estas acciones tienen por objeto crear
un ambiente apropiado para la implantacin y desarrollo embrionario.
Las c$lulas del cuerpo l+teo secretan progesterona, pero las c$lulas luteales
peque!as parecen tener casi todos los receptores a L6. En estudios in vitro, su
respuesta a la accin de L6, medida como secrecin de progesterona, es
mucho mayor que la de las c$lulas luteales grandes. Las c$lulas luteales
peque!as representan alrededor del )/ a )#* de la poblacin celular total y
contribuyen con alrededor del "#* de la progesterona secretada por el cuerpo
l+teo, mientras la secrecin esteroidal restante se deriva de las c$lulas luteales
grandes. &or otro lado, las c$lulas grandes tienen los receptores para
prostaglandina E) 4&2E)5 y prostaglandina 7) alfa 4&27)
5. Las concentraciones
y la afinidad de receptores a &27)
en el cuerpo l+teo bovino son similares en
los das ), 1, > y "/ del ciclo estral, por lo cual esto no explica la falta de
repuesta luteoltica del cuerpo l+teo a la administracin de &27)
que ocurre
antes del da # o > del ciclo. Las c$lulas luteales grandes tambi$n producen
neurofisina y ocitocina.
'l principio de la pre!e, alrededor de )/ das despu$s de la concepcin, las
c$lulas grandes originales desaparecen y dejan a las c$lulas luteales peque!as,
algunas de las cuales se expanden hacia c$lulas de mayor tama!o. 8e cree
que la principal luteotrofina en bovinos es la L6, ya que si se administra suero
anti L6 durante la fase luteal ocurre regresin del cuerpo l+teo.
La funcin luteal no significa una supresin total del crecimiento folicular en los
ovarios. El patrn de liberacin de gonadotrofinas en esta fase permite el
desarrollo de ondas de crecimiento folicular. La primera onda se inicia por el
ala secundaria de 786 que sigue al pea= preovulatorio de L6 47igura "5, y es
visualiada por ecografa en los das siguientes. Los niveles altos de
progesterona inhiben el feedbac= positivo de estrgenos sobre L6, evitando as
la ovulacin, y produci$ndose regresin y atresia folicular, apareciendo una
nueva onda. Las siguientes ondas tambi$n se inician por aumentos en 786 de
corta duracin. %uando los folculos crecen, y uno se hace dominante, se
observa un aumento en las concentraciones de estradiol. <ebido a la formacin
regular de ondas foliculares, en cualquier estado del ciclo siempre est presente
al menos un folculo dominante 4pudiendo haber en algunos casos folculos
dominantes5 en uno de los ovarios. Este fenmeno hace que sea difcil hacer
una prediccin exacta del estado del ciclo o de la ocurrencia del celo solamente
a trav$s de la palpacin de los ovarios por va rectal, a+n cuando se identifique
un cuerpo l+teo. ' esto se suma que el diagnstico exacto de un cuerpo l+teo
funcional a trav$s de palpacin rectal es difcil.
La funcin luteal y por lo tanto el ciclo estral se prolongan por un periodo de
tiempo suficiente como para que, si eventualmente ha ocurrido la monta y
concepcin, el embrin pueda activar los mecanismos de reconocimiento
materno de la pre!e, evitndose as la luteolisis. 8i no hay monta o no hay
concepcin, es fundamental para el animal regresar de este estado programado
para gestar, a un estado de proestro. Esto se logra porque al final de la fase
luteal ocurren pulsos marcados de &27)
, secretada por el +tero, causando
regresin o lisis del cuerpo l+teo, terminndose as la fase luteal. <espu$s de
alrededor de "1 das bajo la influencia de la secrecin de progesterona, el
endometrio secreta pulsos de &27)
de duracin aproximada de > horas cada
uno 47igura 5, por un total de aproximadamente (> horas. La &27)
produce
una disminucin inmediata de los niveles de progesterona y oxitocina, en la
circulacin perif$rica y en el cuerpo l+teo, a niveles basales dentro de > a "/
horas. El rol del +tero en el proceso de luteolisis se basa en la persistencia
prolongada del cuerpo l+teo cuando se extrae el +tero a vacas en fase luteal.
'dems, bovinos con una ausencia cong$nita del cuerno uterino, ipsilateral al
ovario que lleva el cuerpo l+teo, tienen ciclos estrales prolongados con una
extensin de la fase luteal. Eales observaciones, as como experimentos en
ovejas, han entregado evidencia de un control local utero;ovrico de la vida
media luteal. <iversos ensayos sugieren que la &27)
producida por el cuerno
uterino adyacente al ovario que lleva el cuerpo l+teo, se transfiere desde el flujo
venoso uterino hacia la arteria ovrica va un mecanismo de transferencia por
contracorrenteo.
6ay alguna controversia con relacin a los mecanismos por los cuales la &27)
induce la luteolisis. 8e cree que los efectos luteolticos de la &27)
ocurren, en
parte, a trav$s de una intervencin directa con las c$lulas luteales e
indirectamente va una reduccin en el flujo sanguneo luteal. 'unque la &27)
tiene propiedades vasoconstrictoras, no se ha determinado claramente si el
descenso marcado en el flujo sanguneo ovrico o luteal, o ambos, que ocurren
en la luteolisis, espontnea o inducida, es una causa o una consecuencia de la
luteolisis. 8e ha estudiado que la ocitocina luteal est involucrada en la
luteolisis, a trav$s de su efecto estimulador de la secrecin de &27)
desde el
endometrio cuando el cuerpo l+teo comiena a regresar y se libera ocitocina
durante la lisis luteal. La administracin de oxitocina en los das # a 0 del ciclo
produce regresin del cuerpo l+teo, solamente si el +tero est presente, y si
$ste ha sido sensibiliado previamente mediante estrgenos.
8e cree que el estradiol producido por el folculo dominante al final del ciclo es
el que inicia el proceso de luteolisis al inducir la produccin de &27)
uterina. El
estradiol induce receptores endometriales para oxitocina, los que cuando se
unen a la oxitocina, activan la fosfolipasa ') y liberan cido araquidnico y la
cascada araquidnica, estimulando tambi$n la &27 sintetasa, y llevando
finalmente a la produccin de &27) uterina y a la eventual luteolisis. La
administracin de estrgenos inicia la luteolisis y puede estimular la produccin
uterina de &27)
. &or otro lado, la remocin de folculos ovricos despu$s del
da "/ del ciclo extiende la funcin luteal por varios das ms all de la duracin
de un ciclo normal. El proceso de la luteolisis y las acciones de la &27)
pueden
monitorearse midiendo el principal metabolito estable de &27)
, "#;=eto;"(,"1;
dihidro;&27)
4&27D5. Los pulsos luteolticos de &27)
4evidenciado como
&27D perif$rica5 se observan junto a aumentos simultneos de estradiol y
concentraciones de progesterona en descenso.
S#RESI!N DE LA ACTIVIDAD ESTRAL C&CLICA
En vacas normales no pre!adas, la actividad cclica se mantiene regularmente y
sin interrupciones. <urante la gestacin se suprimen los ciclos y no se observa
celo y ovulacin, a+n cuando la funcin ovrica no se inhibe completamente, ya
que ondas de crecimiento folicular y atresia aparecen a intervalos regulares y se
mantienen hasta al menos los > meses de pre!e. Fnmediatamente despu$s del
parto, la vaca sufre un periodo variable de aciclia antes del reinicio de la
actividad ovrica y la primera ovulacin. ,no de los principales factores que
retrasa el reinicio de la actividad ovrica post parto es el amamantamiento de la
cra, ms que la lactancia per se. Gacas que amamantan un ternero tienen un
periodo de anestro ms prolongado que el de vacas que son orde!adas. @tro
factor relacionado con aciclia post parto es la alimentacin. El inicio de la
lactancia, sumado a una depresin en el consumo de alimentos lleva a un
estado de balance energ$tico negativo, que se mantiene por un periodo
variable de tiempo. La magnitud y duracin de este desbalance estn
fuertemente relacionados con el tiempo que transcurre desde el parto a la
primera ovulacin. 7inalmente, el stress, es decir la activacin de la m$dula
adrenal y liberacin de '%E6, puede deprimir, e incluso suprimir, la actividad de
las gonadotrofinas. 8ituaciones como mala alimentacin, enfermedades, mala
calidad del alojamiento, alta densidad de animales, maltrato, ambiente social
adverso, y en general malas condiciones de manejo, afectan la fertilidad.
&roveer de buenas condiciones a los animales permite la plena expresin de su
potencial reproductivo.
7igura )9 -iveles de estradiol y L6 4HEE5 en plasma en vaquillas 4nI05, medidos
cada " hora alrededor del momento del pea= de L6. La barra horiontal
representa el promedio de duracin del celo 4fuente9 <ieleman et al., ":0>5
RE$ERENCIAS
- <ieleman, 8.J.3 Kevers, D.D.3 Gan Eol, 6.E.D.3 Lillemse, '.6. ":0>.
&eripheral plasma concentrations of oestradiol, cortisol, L6 and prolactin
during the oestrous cycle in the coM, Mith emphasis on the peri;oestrous
period. 'nimal ?eproduction 8cience "/9 ).#;):)
- 7oxcroft, 2.?. "::(. 7emale reproduction. In4 Ning, 2.J. 4Ed.5 ?eproduction
in <omesticated 'nimals. Elsevier, 'msterdam, Ehe -etherlands, pp "):;
"1..
- Narsch, 7.J.3 Doenter, 8.D.3 %araty, '. "::). Ehe neuroendocrine signal for
ovulation. 'nimal ?eproduction 8cience )09 ():;(1".
- &ate, J.L. "::1. %ellular components involved in luteolysis. Journal of 'nimal
8cience .)9 "001;"0:/.
- 8tevenson, J.8. "::.. %linical reproductive physiology of the coM. In4
Ooungquist, ?.8. 4Ed.5 %urrent Eherapy in Large 'nimal Eheriogenology.
L.K. 8aunders %ompany, &hiladelphia, ,8'. pp. )#.;)>..
- Lalters, <.L.3 8chams, <.3 8challenberger, E. ":01. &ulsatile secretion of
gonadotrophins, ovarian steroids and ovarian oxytocin during the luteal
phase of the oestrous cycle in the coM. Journal of ?eproduction and 7ertility
."9 1.:;1:".