Manual de Mantenimiento para Equipos de Laboratorio

MANUAL DE MANTENIMIENTO PARA
EQUIPO DE LABORATORIO
rea de Tecnologa y Prestacin
de Servicios de Salud
Unidad de Medicamentos Esenciales, Vacunas
y Tecnologas en Salud
MANUAL DE
MANTENIMIENTO
PARA EQUIPO DE
LABORATORIO
Washington D. C., 2005
Tecnologa y Prestacin de Servicios de Salud (THS)
Medicamentos Esenciales, Vacunas y Tecnologas en Salud (EV)
La Organizacin Panamericana de la Salud dar consideracin muy favorable a las solicitudes de autoriza-
cin para reproducir o traducir, ntegramente o en parte, alguna de sus publicaciones, siempre que no sea
con fines de lucro. Las solicitudes y las peticiones de informacin debern dirigirse a la Unidad de Medica-
mentos Esenciales, Vacunas y Tecnologas en Salud de la Organizacin Panamericana de la Salud/Organi-
zacin Mundial de la Salud, 525, Twenty-third Street, N. W. Washington, D. C. 20037, EUA, que tendr su-
mo gusto en proporcionar la informacin ms reciente sobre cambios introducidos en la obra, planes de
reedicin y reimpresiones ya disponibles.
Organizacin Panamericana de la Salud, 2005
Las publicaciones de la Organizacin Panamericana de la Salud estn acogidas a la proteccin prevista por
las disposiciones sobre reproduccin de originales del Protocolo 2 de la Convencin Universal sobre Dere-
cho de Autor: Reservados todos los derechos.
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contiene no implican, por parte de la Secretara de la Organizacin Panamericana de la Salud, juicio algu-
no sobre la condicin jurdica de pases, territorios, ciudades o zonas, o de sus autoridades, ni respecto del
trazado de sus fronteras o lmites.
La mencin de determinadas sociedades mercantiles o de nombres comerciales de ciertos productos no im-
plica que la Organizacin Panamericana de la Salud apruebe o recomiende con preferencia a otros anlo-
gos. Salvo error u omisin, las denominaciones de productos patentados llevan en las publicaciones de la
OPS letra inicial mayscula.
INTRODUCCIN
Captulo primero
Analizador de ELISA
Fotografa de analizador de ELISA
Propsito del analizador de ELISA
Principios de operacin
Servicios requeridos
Rutinas de mantenimiento
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo segundo
Lavador de ELISA
Fotografa de lavador de ELISA
Propsito del lavador de ELISA
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo tercero
Analizador de pH
Propsito del equipo
Fotografas y elementos del analizador de pH
Esquema de un analizador de pH
Componentes
Circuito tpico
Procedimiento general de calibracin
Mantenimiento general del analizador de pH
Mantenimiento bsico del electrodo
Definiciones bsicas
Bibliografa
Anexo: Teora del pH
Captulo cuarto
Balanzas
Fotografas de balanzas
Propsito de la balanza
Principios de funcionamiento
Definiciones bsicas
Bibliografa
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TABLA DE CONTENIDOS
Captulo quinto
Bao de Mara
Esquema bao de Mara
Controles baos de Mara
Operacin del bao de Mara
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo sexto
Cabina de seguridad biolgica
Ilustracin cabina de seguridad biolgica
Propsitos del equipo
Seguridad biolgica
Uso de la cabina
Evaluacin funcional (alternativa)
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo sptimo
Centrfuga
Fotografa y esquema
Propsito de la centrfuga
Componentes de la centrfuga
Recomendaciones de conservacin y manejo adecuado
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo octavo
Destilador de agua
Esquema del destilador de agua
Propsito del destilador de agua
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo noveno
Diluidor
Esquema del diluidor
Propsito del diluidor
Definiciones bsicas
Bibliografa
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Captulo dcimo
Dispensador
Esquema y fotografa del dispensador
Propsito del dispensador
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo undcimo
Espectrofotmetro
Fotografas del espectrofotmetro
Propsito del equipo
Componentes del espectrofotmetro
Mantenimiento del espectrofotmetro
Buenas prcticas de uso del espectrofotmetro
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo duodcimo
Autoclave
Fotografa del autoclave
Propsito del autoclave
Funcionamiento del autoclave
Mantenimiento de componentes especializados
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo decimotercero
Estufa de secado
Fotografas de estufa de secado
Propsito de la estufa
Operacin de la estufa
Control de la estufa
Control de calidad
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo decimocuarto
Incubadora
Fotografas de incubadoras
Controles de la incubadora
Rutinas de mantenimiento y uso de la incubadora
Definiciones bsicas
Bibliografa
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Captulo decimoquinto
Microscopio
Otros nombres del equipo
Fotografas de microscopios
Propsito del equipo
Diagrama del equipo (isomtrico y corte)
Descripcin de fallas potenciales por componentes
Mantenimiento general del microscopio
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo decimosexto
Pipetas
Fotografa y esquema de pipetas
Propsito de la pipeta
Principios de operacin de la pipeta
Uso de la pipeta
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo decimosptimo
Plato caliente con agitador
Fotografa del plato caliente con agitador
Controles del plato caliente con agitador
Operacin del plato caliente con agitador
Definiciones bsicas
Bibliografa
Captulo decimoctavo
Refrigerador
Fotografa del refrigerador
Propsito del refrigerador
Circuito de control refrigerador
Operacin del refrigerador I
Operacin del refrigerador II
Encendido del refrigerador
Definiciones bsicas
Bibliografa
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Ilustracin 1: Conjunto de equipos para pruebas ELISA
Ilustracin 2: Lavador de ELISA
Ilustracin 3: Perfiles de los pozos, tcnica de ELISA
Ilustracin 4: Esquema de un analizador de pH
Ilustracin 5: Clases de electrodos
Ilustracin 6: Circuito de control analizador de pH
Ilustracin 7: Balanza de resorte
Ilustracin 8: Balanza de pesa deslizante
Ilustracin 9: Balanza analtica
Ilustracin 10: Balanza de plato superior
Ilustracin 11: Balanza de sustitucin
Ilustracin 12: Elementos de las balanzas electrnicas
Ilustracin 13: Principio fuerza de compensacin
Ilustracin 14: Clasificacin de balanzas por grupos de exactitud
Ilustracin 15: Control balanza analtica
Ilustracin 16: Bao de Mara
Ilustracin 17: Resistencias de inmersin y externa
Ilustracin 18: Control de bao de Mara
Ilustracin 19: Cabina de seguridad biolgica
Ilustracin 20: Concepto de fuerza centrfuga
Ilustracin 21: Destilador de agua
Ilustracin 22: Esquema diluidor
Ilustracin 23: Control del diluidor
Ilustracin 24: Jeringa y dispensador
Ilustracin 25: Dispensador
Ilustracin 26: Elementos dispensadores
Ilustracin 27: Interaccin de la luz con la materia
Ilustracin 28: Fenmeno de absorbancia
Ilustracin 29: Componentes del espectrofotmetro
Ilustracin 30: Reflexin de la luz
Ilustracin 31: Rejilla de difraccin
Ilustracin 32: Circuito de vapor del autoclave
Ilustracin 33: Espacios requeridos por el autoclave
Ilustracin 34: Acometida aire comprimido
Ilustracin 35: Acometida de vapor
Ilustracin 36: Generador de vapor
Ilustracin 37: Control electrnico de la estufa
Ilustracin 38: Circuito elctrico de la estufa
Ilustracin 39: Formas de transferencia de calor
Ilustracin 40: Control de incubadora
Ilustracin 41: Lente positivo (convergente)
Ilustracin 42: Funcionamiento del lente
Ilustracin 43: Corte del microscopio
Ilustracin 44: Clases de pipetas
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TABLA DE ILUSTRACIONES
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Ilustracin 45: Fases del uso de la pipeta
Ilustracin 46: Desensamble de una pipeta
Ilustracin 47: Control plato caliente con agitador
Ilustracin 48: Motor de induccin
Ilustracin 49: Circuito de refrigeracin
Ilustracin 50: Circuito de control del refrigerador
Ilustracin 51: Control Banco de sangre
Ilustracin 52: Control refrigerador ultrabaja temperatura
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204
Este manual ha sido desarrollado con el fin
de apoyar al personal que labora en los labo-
ratorios de salud, sean clnicos o de investiga-
cin, en los campos de la salud pblica, salud
animal, salud ambiental, control de alimen-
tos y control de medicamentos, en la com-
prensin de los requerimientos tcnicos rela-
cionados con la instalacin, uso y manteni-
miento de un grupo de equipos que resultan
de gran importancia para la realizacin de las
actividades diagnsticas o de investigacin.
No se pretende que los lineamientos inclui-
dos en este manual conviertan a quien lo
consulta en un experto capaz de solucionar
cualquier problema que pueda presentarse
en el equipamiento del laboratorio. El desa-
rrollo alcanzado a nivel tecnolgico y cientfi-
co ha incorporado en los equipos infinidad
de funciones y modos particulares de opera-
cin, que necesariamente conllevan a imple-
mentar programas que permitan aportar los
recursos para mantener dicho equipamiento
en las mejores condiciones de operacin.
Por la diversidad de orgenes, marcas y mode-
los, solo es posible presentar unas recomen-
daciones generales, dado que las particulares
se encuentran desarrolladas en los manuales
de uso, mantenimiento e instalacin elabora-
dos por los fabricantes y que deben ser solici-
tados y exigidos en los procesos de adquisi-
cin por las dependencias y profesionales
que tienen bajo su responsabilidad la incor-
poracin y la adquisicin de tecnologa en las
diversas instituciones.
En su desarrollo, el manual ha tomado en
cuenta los siguientes aspectos:
1. Cada clase o familia de equipo incluida ha si-
do desarrollada en un captulo diferente,
que se ha organizado en orden alfabtico,
de acuerdo con el nombre que los identifica.
2. Abarca 18 familias de equipo que han si-
do sel ecci onadas, tratando de cubri r
aquellas de mayor utilizacin en laborato-
rios de baja o media complejidad tcnica.
3. Busca apoyar a los responsables de la gestin
tcnica en la implementacin de los progra-
mas de mantenimiento y de gestin de cali-
dad en pro de la salud de la poblacin.
4. Cada equipo ha sido identificado con el
nombre que ms comnmente se lo cono-
ce. Tambin se han incluido otros nom-
bres alternos.
5. Se han introducido fotografas o ilustra-
ciones o una combinacin de ambas para
identificar, sin lugar a equivocaciones, el
tipo de equipo que se est considerando.
6. Dadas las grandes diferencias en la com-
plejidad tcnica de las marcas y modelos
existentes, cada tema ha sido desarrollado
pensando en equipos bsicos, pero, hasta
donde ha sido posible, incluyen tecnolo-
ga de desarrollo reciente.
7. Presenta una breve explicacin sobre los
principales usos o aplicaciones del equipo
en el laboratorio.
8. Contiene una descripcin bsica de los
principios con los que operan los distintos
equipos. En consecuencia, hay explicacio-
nes basadas en principios o leyes fsicas
y/o qumicas que el lector interesado pue-
de o debera profundizar por su cuenta.
9. Se incluye una descripcin de los servicios o
instalaciones que requieren los distintos
equipos para poder funcionar, poniendo n-
fasis en los aspectos elctricos y en los requi-
sitos que en cada ambiente podran facilitar
su correcta instalacin y operacin.
10. Describe las rutinas bsicas de manteni-
miento requeridas por los equipos, que se
han clasificado segn la frecuencia con
que deben realizarse: diarias, semanales,
I NTRODUCCI N
13
mensuales, semestrales, anuales y even-
tuales. Dichas rutinas se han numerado y
se presentan siguiendo un orden que tra-
ta de ajustarse a la realidad. Mayor pro-
fundidad y especificidad se pueden en-
contrar en los manuales editados por los
fabricantes.
11. Para cada equipo se ha desarrollado una
tabla que procura condensar los proble-
mas que con mayor frecuencia lo afectan,
identificando sus posibles causas y las ac-
ciones que deberan realizarse para solu-
cionar el problema.
12. En cada captulo se ha introducido una lis-
ta de definiciones bsicas que ayuda a
comprender el significado de algunos tr-
minos utilizados.
13. Al final se ha incluido la bibliografa utili-
zada para desarrollar los distintos temas.
Tambin, en el caso de algunos equipos, se
han introducido temas adicionales relaciona-
dos con la calibracin, el control de calidad o
la forma en que se encuentran diseados y
presentados los controles.
El presente manual ha sido desarrollado por
la Organizacin Panamericana de la Salud,
para apoyar los programas de mejoramiento
de la calidad que promueve en los laborato-
rios de la Regin.
14
15
ANALIZADOR DE ELISA
El analizador de ELISA es un espectrofotme-
tro especializado, diseado para efectuar la
lectura de los resultados de una tcnica que
se utiliza para determinar la presencia de an-
ticuerpos o antgenos especficos presentes
en una muestra. La tcnica se basa en la de-
teccin de un antgeno inmovilizado sobre
una fase slida, mediante anticuerpos que,
di recta o i ndi rectamente, producen una
reaccin cuyo producto puede ser ledo por
el espectrofotmetro. Se le conoce tambin
con el nombre de Lector de ELISA. La palabra
ELISA es el acrnimo de las palabras en len-
gua inglesa Enzyme-Linked Immunosorbent
Assay.
FOTOGRAFA DE ANALIZADOR DE ELISA
PROPSITO DEL ANALIZADOR DE ELISA
El analizador de ELISA se utiliza para leer el re-
sultado de las pruebas efectuadas, utilizando la
tcnica de ELISA, la cual tiene aplicacin directa
en inmunologa y en serologa; permite confir-
mar la presencia en el organismo de anticuerpos
o antgenos de un agente infeccioso, vacunal o
autoanticuerpos artritis reumatoide, por ejem-
plo, entre otras aplicaciones.
PRINCIPIOS DE OPERACIN
El analizador de ELISA es un espectrofotme-
tro especializado. A diferencia de los espec-
trofotmetros convencionales que permiten
efectuar lecturas en un rango amplio de lon-
gitudes de onda, este dispone de filtros o re-
jillas de difraccin que limitan el rango de
longitudes de onda a aquellas que se utilizan
en la tcnica ELISA, la cual generalmente se
realiza con longitudes de onda comprendidas
entre los 400 y los 750 nm nanmetros. Al-
gunos analizadores operan en el rango ultra-
violeta y pueden efectuar anlisis entre los
340 y los 700 nm. El sistema ptico utilizado
por muchos fabricantes utiliza la fibra ptica
para llevar la luz hasta los pozos de la placa,
donde se encuentra la muestra bajo anlisis.
La luz que atraviesa la muestra tiene un di-
metro que vara entre 1 y 3 mm. Un sistema
de deteccin recibe la energa lumnica, pro-
veniente de la muestra, la amplifica, determi-
na la absorbancia y, a travs de un sistema de
lectura, la convierte en datos que permiten
interpretar el resultado de la prueba. Tam-
bin hay analizadores de ELISA que emplean
sistemas lumnicos de doble haz. Las muestras
del ensayo de ELISA se colocan en placas de
diseo especial, las cuales disponen de un n-
mero definido de pozos o vasos, en los cuales
se lleva a cabo el procedimiento o ensayo.
Son comunes las placas de 8 columnas por 12
filas, con un total de 96 pozos. Tambin exis-
ten placas con un mayor nmero de pozos.
Las hay de 384 pozos y la tendencia actual
busca aumentar el nmero de pozos, y redu-
cir la cantidad de reactivos y el volumen de
las muestras requeridas. La ubicacin de los
sensores pticos en el analizador de ELISA va-
ra dependiendo de los fabricantes. Algunos
los colocan sobre la placa portamuestras,
mientras que otros los ponen directamente
bajo los pozos de la placa.
CAPTULO 1
Analizador de ELI SA
Cdigo (s) ECRI
16-979
Denominacin (es) ECRI
Lect ores de mi cropl acas f ot omt ri cos
16
En la actualidad, los analizadores de ELISA
disponen de controles regulados por micro-
procesadores, interfases de conexin a siste-
mas de informacin, programas de control de
procesos y control de calidad que, a travs del
computador, permi ten l a automati zaci n
completa de los ensayos requeridos.
Equipos requeridos para efectuar ensa-
yos de ELISA
Para desarrollar la tcnica de ELISA se requiere
disponer al menos de los siguientes equipos:
1. Un analizador de ELISA.
2. Un lavador de ELISA (captulo 2).
3. Un sistema dispensador de lquidos. (Pue-
den usarse pipetas multicanal).
4. Una incubadora especializada para las placas.
La ilustracin que se presenta a continuacin
da una idea de la forma en que se encuentran
interrelacionados los equipos mencionados.
Ilustracin 1: Conjunto de equipos para pruebas ELISA
Fases mecnicas de un ensayo utilizando
la tcnica de ELISA
Uso de equipos
Cuando se realiza una prueba de ELISA, ge-
neralmente se siguen estos pasos:
1. Utilizando el lavador de ELISA o microplacas,
se efecta un primer lavado de la placa.
2. Mediante el dispensador de lquidos o las
pipetas multicanal, se llenan los vasos o
pozos de las placas con las soluciones pre-
paradas para ser utilizadas en el ensayo.
3. A continuacin, se coloca la placa en la incu-
badora donde, a temperatura controlada, se
lleva a cabo un conjunto de reacciones.
Las etapas 1, 2 y 3 se pueden repetir varias ve-
ces dependiendo del ensayo, hasta que se lo-
gre que las muestras colocadas en las placas
hayan terminado sus reacciones.
Anal i zador de ELISA
17
4. Finalmente, cuando se han completado las
reacciones qumicas, se lleva la placa al
analizador de ELISA y se efectan las lectu-
ras que permiten emitir un diagnstico.
Fases qumicas de la tcnica de ELISA
Se presenta a continuacin un breve resumen
de cmo funciona la tcnica de ELISA, desde
el punto de vista qumico
1
.
1. Se recubren los pozos de una placa con an-
ticuerpos o antgenos.
2. Se aaden las muestras, controles y estn-
dares a los pozos de la placa y se incuban
a temperaturas que oscilan entre la tem-
peratura ambiente y 37 C, por un perodo
de tiempo determinado, segn caracters-
ticas de la prueba. Durante la incubacin,
una parte del antgeno de la muestra se
une al anticuerpo del recubrimiento de la
placa, o el anticuerpo de la muestra se une
con el antgeno ubicado en el recubri-
miento de la placa, en funcin de su pre-
sencia y cantidad en la muestra analizada.
3. Despus de la incubacin, las entidades no
unidas antgenos o anticuerpos se lavan
y se retiran de la placa, utilizando el lava-
dor de ELISA que utiliza un buffer de lava-
do adecuado.
4. A continuacin, se aade un anticuerpo se-
cundario, denominado el conjugado, el
cual tiene una enzima que reaccionar con
un sustrato para producir un cambio de
color.
5. Se inicia entonces un segundo perodo de
incubacin, durante el cual el conjugado
se unir al complejo antgeno-anticuerpo
en los pozos de la placa.
6. Despus de la incubacin, se realiza un nue-
vo lavado para retirar de los pozos de la pla-
ca cualquier vestigio del conjugado no unido.
7. Se aade un sustrato. La enzima reaccio-
nar con el sustrato y causar un cambio
de color en la solucin, brindando un me-
dio para medir la cantidad de conjugado
que a la vez dir cunto complejo antge-
no-anticuerpo est presente. Otro perodo
de incubacin permitir que esta reaccin
tenga lugar.
8. Cumplido el tiempo de incubacin, se aa-
de un reactivo para detener la reaccin
sustrato-enzima y prevenir cambios adicio-
nales de color. Generalmente este reactivo
es un cido diluido.
9. Finalmente, se efecta la lectura de la pla-
ca en el analizador de ELISA. Los valores de
los resultados se usan para determinar las
cantidades de antgeno o anticuerpo espe-
cficos presentes en la muestra.
Algunos de los pozos en la placa se destinan pa-
ra colocar estndares y controles. Los estndares
permiten definir los puntos de corte (cut off).
Los controles son cantidades conocidas que se
usan para medir el xito del ensayo, evaluando
los datos recibidos contra las concentraciones es-
tablecidas para cada control. El proceso antes
descrito es comn, aunque muchas pruebas de
ELISA tienen variantes.
SERVICIOS REQUERIDOS
Para que el analizador de ELISA opere correc-
tamente, es necesario verificar los siguientes
puntos:
1. Un ambiente limpio, libre de polvo.
2. Una mesa de trabajo estable. Lo recomen-
dable es que la misma est alejada de
equipos que generen vibraciones centr-
fugas, agitadores, que tenga un tamao
adecuado que permita ubicar, al lado del
analizador de ELISA, los equipos comple-
mentarios requeridos para efectuar la tc-
nica en mencin: lavadores, incubadora,
dispensador y computador con perifricos.
3. Una fuente de suministro elctrico de acuer-
do con las normas y estndares implemen-
tados en el pas. En los pases americanos se
1
Explicaciones ms detalladas deben ser consultadas en literatura especializada.
1
18
utilizan por lo general voltajes de 110 V y
frecuencias de 60 Hz.
Calibracin del analizador de ELISA
La calibracin de un analizador de ELISA es
un proceso especializado que debe realizar
un tcnico o ingeniero debidamente entrena-
do, siguiendo las instrucciones que para el
efecto brinda cada fabricante. Para efectuar
la calibracin se requiere disponer de un jue-
go de filtros grises, los cuales se encuentran
montados en una placa de igual geometra a
las utilizadas para efectuar los anlisis. Los fa-
bricantes suministran dichos filtros y pueden
ser utilizados para realizar calibraciones a
cualquier longitud de onda de las que utiliza
el equipo.
Los filtros de calibracin disponen de al me-
nos tres valores de densidad ptica, preesta-
blecidos dentro de los rangos de medicin;
uno bajo, uno medio y el ltimo, un valor al-
to. Para efectuar la calibracin se realiza el si-
guiente proceso:
1. Colocar el filtro de calibracin en el equipo.
2. Efectuar una lectura completa con el filtro
de calibracin. Verificar si se presentan di-
ferencias en las lecturas obtenidas de ca-
nal a canal. Si es as, invertir el filtro (180)
y repetir nuevamente la lectura para des-
cartar que las diferencias puedan ser atri-
buibles al filtro en s. Por lo general, se
acepta que el instrumento no requiere ca-
libracin, si se encuentra ajustado en dos
longitudes de onda.
3. Verificar si el lector est descalibrado. Si es
as, proceder a la calibracin, siguiendo la
rutina definida por el fabricante, verifican-
do especialmente que la linealidad de las
lecturas se mantenga lo ms rigurosamen-
te posible.
4. Si no se dispone de filtro de calibracin,
verificar la misma colocando una solucin
de color en los pozos de una placa y efec-
tuando en seguida una lectura completa.
Luego invertir la placa 180 y efectuar una
nueva lectura. Si ambas lecturas presentan
valores promedio idnticos en cada fila, el
analizador se encuentra calibrado.
5. Verificar si el desplazamiento de la placa se
encuentra calibrado, columna por columna.
Colocar una placa vaca y efectuar las lectu-
ras. Si no se observan diferencias medias en-
tre las lecturas de columna a columna de la
primera a la ltima, podra asumirse que el
avance se encuentra calibrado.
RUTINAS DE MANTENIMIENTO
Las rutinas que se describen a continuacin es-
tn enfocadas exclusivamente al analizador de
ELISA. El mantenimiento del lavador de ELISA
est tratado en el captulo correspondiente.
Mantenimiento bsico
Frecuencia: Diaria
1. Revisar que los sensores pticos de cada
canal estn limpios. Si se detecta suciedad,
limpiar con un pincel la superficie de las
ventanas de los emisores de luz y de los
sensores.
2. Confirmar que el sistema de iluminacin
est limpio.
3. Verificar que la calibracin del analizador
es adecuada. Cuando se inicien las opera-
ciones diarias, permitir que el analizador
se caliente durante 30 minutos. A conti-
nuacin, realizar una lectura en blanco y
luego leer un mdulo lleno de sustrato.
Las lecturas deben ser idnticas. Si no lo
son, invertir el mdulo y repetir la lectura,
a fin de determinar si la desviacin se ori-
gina en el mdulo o en el lector.
4. Examinar el avance automtico de la pla-
ca. El mismo debe ser suave y constante.
Mantenimiento preventivo
Frecuencia: Trimestral
1. Verificar la estabilidad de la lmpara. Usar
el filtro de calibracin, efectuando lecturas
con intervalos de 30 minutos o una misma
Anal i zador de ELISA 1
19
placa. Comparar las lecturas. No deben
existir diferencias.
2. Limpiar los sistemas pticos de los detecto-
res y los sistemas de iluminacin.
3. Limpiar el mecanismo de avance de la placa.
4. Verificar la alineacin de cada pozo con los
sistemas emisores y detectores de luz.
Tabla de solucin de problemas
El anal i zador bri nda l ect uras si n sent i do. Lmpara de i l umi naci n f uera de
servi ci o.
Reempl azar l a l mpara por ot ra de l as mi smas
caract erst i cas que l a ori gi nal .
El anal i zador present a absorbanci as
al t as.
React i vos usados y/o preparados de
f orma i ncorrect a.
Revi sar que el TMB sea i ncol oro y l a prepara-
ci n adecuada.
Cont ami naci n con ot ras muest ras. Repet i r el ensayo veri f i cando l a marcaci n, el
l avado y l a f orma de usar l a pi pet a.
Fi l t ro de l ongi t ud de onda i ncorrect o. Veri f i car l a l ongi t ud de onda recomendada
para el ensayo. Aj ust ar si es del caso.
Lavado i nsuf i ci ent e o i nef i ci ent e. Confirmar el mt odo de lavado ut ilizado. Em-
plear un ensayo de cont rol de calidad apropiado.
Ti empo de i ncubaci n muy l argo o
t emperat ura muy al t a.
Revisar t iempos y t emperat ura de incubacin.
Di l uci n de muest ras mal procesada. Revisar proceso de dilucin de muest ras.
Fal t a al gn react i vo. Verificar que el ensayo se realiza de acuerdo al
procedimient o est ablecido.
Las l ect uras del anal i zador varan de f i -
l a en f i l a.
Sensores pt i cos suci os. Li mpi ar l os sensores.
Lent es o el ement os del si st ema de i l u-
mi naci n suci os.
Li mpi ar l ent es del si st ema de i l umi naci n.
Fal t a de cal i braci n de uno o ms
canal es.
Veri f i car l a cal i braci n de cada uno de l os
canal es.
Probl emas con l os bl ancos. Ef ect uar una l ect ura en vaco y compararl a
cont ra l a l ect ura del bl anco. Si el si st ema l ee
bi en, deber encont rarse una l ect ura de den-
si dad pt i ca si mi l ar. Caso cont rari o, el anal i za-
dor est descal i brado.
El anal i zador present a absorbanci as
baj as.
Ti empo de i ncubaci n muy cort o o
t emperat ura muy baj a.
Revi sar t emperat uras y t i empos de i ncubaci n.
Los react i vos no se encuent ran a l a
t emperat ura ambi ent e.
Comprobar que l os react i vos est abi l i cen su
t emperat ura con l a del ambi ent e.
Lavado excesi vo de l a pl aca. Aj ust ar el proceso de l avado a l o i ndi cado por
el f abri cant e del ensayo.
Fi l t ro de l ongi t ud de onda i ncorrect o. Veri f i car el f i l t ro de l ongi t ud de onda sel ecci o-
nado. Ut i l i zar el recomendado para el ensayo.
React i vos usados o preparados de f or-
ma i ncorrect a.
Revi sar l os react i vos ut i l i zados. Comprobar l as
di l uci ones.
Fal t a al gn react i vo. Veri f i car que el ensayo se real i za de acuerdo
al procedi mi ent o est abl eci do.
La pl aca present a rayaduras en el f on-
do de l os pozos.
Preparar una nueva pl aca y repet i r el ensayo.
PROBLEMA CAUSA PROBABLE REMEDI O
20
Cl ase de pl aca mal sel ecci onada o pl a-
ca suci a.
Veri f i car el t i po de pl aca ut i l i zada. Preparar
una pl aca nueva y repet i r el ensayo.
El anal i zador present a vari aci ones
i nesperadas en l as l ect uras de densi -
dad pt i ca.
La l mpara del anal i zador en si t uaci n
i nest abl e.
Reempl azar l a l mpara por ot ra de l as mi smas
caract erst i cas que l a ori gi nal .
Lect uras de densi dad pt i ca muy baj as
comparadas con l os cri t eri os de l a eva-
l uaci n pt i ca del operador.
La l ect ura se est real i zando con l uz de
l ongi t ud de onda di f erent e a l a reque-
ri da por el ensayo.
Veri f i car con qu l ongi t ud de onda se est
ef ect uando l a l ect ura. Si es del caso, aj ust ar l a
l ongi t ud de onda y repet i r l a l ect ura.
Veri f i car que se ha sel ecci onado el f i l t ro de
l ongi t ud de onda recomendado.
Al t a absorbanci a del bl anco. Sust rat o cont ami nado. Revi sar que el TMB sea i ncol oro y l a prepara-
ci n adecuada.
Lavado i nsuf i ci ent e o i nef i ci ent e. Ret i rar el buf f er despus del l avado. Revi sar
que l os pozos sean l l enados y aspi rados de
manera uni f orme cuando se l avan.
La l ect ura del anal i zador present a un
aument o gradual o un decrement o de
col umna en col umna.
Cal i braci n i nadecuada del mot or de
avance de l a pl aca.
Cal i brar el avance para que en cada paso l os
pozos queden exact ament e al i neados con el
si st ema emi sor de l uz.
Los dat os no son t ransf eri dos ent re el
l ect or y el mi croprocesador.
El l ect or y el mi croprocesador t i enen
def i ni dos di f erent es caract eres.
Veri f i car cdi gos sel ecci onados.
Tasas de t ransf erenci a de i nf ormaci n
(Baud) di f erent es.
Conf irmar t asas de t ransf erencia seleccionadas.
Conf i guraci n de l as cl avi j as de t rans-
mi si n/recepci n mal sel ecci onada.
Revi sar l a conf i guraci n de l as cl avi j as. Debe
est ar conf i gurada segn parmet ros def i ni dos
por el f abri cant e.
Se han secado l os pozos de l a pl aca. Cambi ar l a f orma de l avar l a pl aca.
Pl aca mal col ocada en el l ect or o mal
sent ada.
Revi sar l a col ocaci n de l a pl aca. Repet i r l a
l ect ura.
Humedad o huel l as di gi t al es en el f on-
do ext eri or de l a pl aca.
Veri f i car que el f ondo ext eri or de l os pozos se
encuent re l i mpi o.
Cantidades residuales del buffer de lavado
en los pozos antes de aadir el sustrato.
Conf i rmar l a remoci n compl et a del buf f er de
l avado.
Las t abl et as del sust rat o no se encuen-
t ran compl et ament e di suel t as.
Veri f i car que l as t abl et as se di suel van
correct ament e.
La t abl et a del sust rat o ha si do cont a-
mi nada por humedad o pi nzas met l i -
cas o no se encuent ra compl et a.
Evi denci ar i nt egri dad y manej o de l as t abl et as
del sust rat o.
La posi ci n del pozo bl anco podra ha-
ber si do cambi ada y una cant i dad i nco-
rrect a ha si do rest ada a cada l ect ura.
Veri f i car l a carga correct a de l a pl aca.
Baj a reproduci bi l i dad. Homogenei dad de l a muest ra. Mezclar los react ivos ant es de usarlos. Permit ir
que se equilibren con la t emperat ura ambient e.
Procedi mi ent o errneo en el uso de l a
pi pet a.
Comprobar que l as punt as de l a pi pet a son
cambi adas ent re l as muest ras y que es remo-
vi do el exceso de l qui do en el ext eri or.
Lect or descal i brado. Revi sar l a cal i braci n. Usar un j uego de con-
t rol de cal i dad apropi ado.
Lect or ut i l i zado si n suf i ci ent e
cal ent ami ent o.
Esperar a que el l ect or se haya est abi l i zado en
su t emperat ura de operaci n.
React i vos venci dos. Veri f i car l as f echas de venci mi ent o de l os
react i vos.
Anal i zador de ELISA 1
21
Fal l a en l a i nt erf ase del programa de
comuni caci ones.
Ll amar al servi ci o t cni co especi al i zado.
Haz de l uz desal i neado. El anal i zador t rasl adado o movi do si n
l as debi das precauci ones.
La f uent e de l uz l mpara ha si do
cambi ada y su reempl azo no ha si do
i nst al ado y al i neado correct ament e.
Veri f i car mont aj e y al i neaci n de l a f uent e de
l uz.
El comput ador f al l a al i ndi car l os cdi -
gos de error.
El programa que cont rol a l a act i vaci n
de l as al armas y l os mensaj es de adver-
t enci a present a f al l as o no est val i da-
do por el product or.
El anal i zador present a f al l as en l a de-
t ecci n de errores.
Di versos component es del si st ema pre-
sent an f al l as, como el si st ema de de-
t ecci n del ni vel de l qui dos.
Cabl e de conexi n l ect or-mi croproce-
sador mal aj ust ado.
Revi sar conexi ones. Aj ust ar conexi ones.
Ident i f i caci n i ncorrect a de l a muest ra. Pl aca cargada de f orma i nadecuada. Revi sar proceso de i dent i f i caci n de l as mues-
t ras. Repet i r l ect ura ef ect uando l os aj ust es.
Ident i f i caci n i ncorrect a de l a muest ra
regi st rada en el anal i zador.
DEFINICIONES BSICAS
ELISA. Tcnica desarrollada para efectuar
anlisis que permiten determinar si una sus-
tancia se encuentra presente en una muestra.
Se utiliza principalmente en el rea de inmu-
nologa. La palabra ELISA es el acrnimo de
las palabras en lengua inglesa Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay.
Enzima. Protena que sirve de catalizador en
una reaccin qumica, acelerando las reacciones.
Fluorf oro. Molculas que absorben luz a
una determinada longitud de onda y emiten
luz de una longitud de onda mayor.
Lavador de ELISA. Equipo que se utiliza pa-
ra lavar las placas durante las etapas de una
prueba de ELISA, con el fin de remover aque-
llos componentes que no se han unido en las
reacciones. El lavador de ELISA utiliza buffers
especiales en los procesos de lavado.
Lector de microplacas. Nombre dado a los
analizadores de ELISA.
Placa de ELISA. Elemento de consumo que se
ha estandarizado para efectuar los anlisis me-
diante la tcnica de ELISA. Las placas tienen en
general 96 pozos en una configuracin tpica
de 8 filas por 12 columnas. Tambin hay placas
de ELISA de 384 y recientemente se han venido
imponiendo microplacas de hasta 1 536 pozos,
en centros de alta demanda, debido a las eco-
nomas logradas en insumos y reactivos.
Quimioluminiscencia. Emisin de luz que
aparece durante una reaccin qumica.
TMB. Sustrato usado con la enzima HRP.
22
Bibliografa
ELISA Automation, Hudson Control Group, AB104A, 2002. (www.hudsoncontrol.com)
Solid Phase Guide, NUNC , Brand Products, Introduction to Solid Phase Techniques.
(http://www.nuncbrand.com/PDF/Guides%20and%20Manuals/Guide%20to%20Solid%20P
hase.pdf)
Universal Medical Device Nomenclature System (UMDNS), Product Categories Thesaurus,
ECRI, 5200 Butler Pike, Plymouth Meeting, PA, USA, 2000.
Zoon, Kathryn, Recommendations to users of medical devices that test for infectious dis-
ease markers by enzyme immunoassay (EIA) test systems, Division of Blood Applications,
Bethesda, MD. (http://www.fda.gov/cber/bldmem/122094.txt)
24
suministra, a travs de agujas, la solucin
de lavado a los diferentes pozos. La cabeza
suele contar con ocho pares de agujas para
lavar y aspirar los pozos de una misma fila
de la placa de forma simultnea en la cabe-
za confluyen los subsistemas de suministro y
de extraccin. Tambin hay modelos que
disponen de doce pares de agujas y existen
versiones que efectan el proceso de lavado
de manera simultnea en todos los pozos de
la placa. Algunos lavadores brindan la posi-
bilidad de trabajar con diversas soluciones
de limpieza, efectuando los cambios de so-
lucin segn programe el operador.
Subsistema de extraccin. Requiere de
un mecanismo de vaco y de un sistema de
almacenamiento para recolectar los fluidos
y desechos retirados de los pozos de las pla-
cas. El vaco puede ser proporcionado por
bombas externas o internas. La extraccin
se realiza mediante un conjunto de agujas
montadas en la cabeza lavadora/aspirado-
ra. El nmero de agujas vara entre uno y
tres, segn el fabricante y el modelo.
Si se usa una sola aguja, las operaciones de la-
vado y extraccin se hacen a travs de esta
nica aguja. Si se utilizan dos agujas, una se
usa para el suministro de la solucin de lavado
y la otra para la extraccin. Si se utilizan tres,
la primera es para el suministro de la solucin
de lavado, la segunda para la extraccin y la
tercera para controlar extraer cualquier ex-
ceso de volumen dentro del pozo.
En general la longitud de la aguja de extrac-
cin es mayor que la longitud de la aguja de
suministro, con el fin de que pueda avanzar
verticalmente hasta una altura que oscila
entre 0,3 y 0,5 mm del fondo del pozo.
Subsistema de avance. Est compuesto
por un mecanismo que desplaza horizon-
talmente la cabeza de suministro y extrac-
cin, para poder llegar en la placa de ELI-
SA a cada uno de los pozos; cuando se ha
efectuado el desplazamiento horizontal a
la siguiente fila, se realiza un movimiento
vertical hacia los pozos, con el fin de dis-
pensar y/o extraer la solucin de lavado.
Hay lavadores que efectan estas opera-
ciones de forma simultnea.
Se presenta a continuacin una ilustracin en la
que se muestran los subsistemas mencionados.
Ilustracin 2: Lavador de ELISA
25
Lavador de ELISA 2
Proceso de lavado
El lavado es una de las etapas que se debe reali-
zar cuando se efectan anlisis, utilizando la
tcnica de ELISA. Se emplean para el efecto so-
luciones especiales. Entre las ms usadas se en-
cuentra la solucin buffer fosfatada o PBS. La so-
lucin buffer fosfatada tiene una estabilidad de
2 meses, si se la conserva a 4 C. Se estima que
para el lavado de una microplaca se requiere en-
tre 1 y 3 litros de solucin. Se estima que en ca-
da pozo se utilizan 300 l de solucin de lavado
por ciclo. El lavado es una operacin que se pue-
de realizar manualmente, pero si se tienen de-
mandas altas y si se trabaja con sustancias po-
tencialmente contaminadas, es mejor utilizar un
equipo de lavado automatizado.
Entre los procesos de lavado se destacan los
siguientes:
Aspiracin de arriba hacia abajo. Cuan-
do se inicia la fase de aspiracin, las agujas
se desplazan verticalmente y la aspiracin
se inicia de inmediato; estas entran en el l-
quido; el proceso contina hasta que las
agujas alcanzan la posicin mxima infe-
rior, muy cerca del fondo de los pozos, mo-
mento en el que se detienen para evitar
succionar aire que fluira necesariamente
sobre las paredes laterales interiores de los
pozos. Este tipo de aspiracin previene
que corrientes de aire sequen la protena
unida sobre la superficie de los pozos.
Aspiracin y dispensacin simult-
neas. En este tipo de lavado los sistemas
de lavado y aspiracin funcionan simult-
neamente, generando una turbul enci a
controlada dentro del pozo que remueve
las sustancias no unidas durante los tiem-
pos estimados de reaccin.
Aspiracin desde el f ondo de los po-
zos. En este si stema, l a aspi raci n del
fl ui do conteni do en l os pozos se efecta
posi ci onando i ni ci al mente l as agujas de
aspi raci n en una posi ci n muy cercana
al fondo, i ni ci ando en segui da un ci cl o de
succi n que general mente es control ado
por ti empo. Este si stema puede l l egar a
aspi rar ai re si hay di ferenci as en l os ni ve-
l es de l l enado de l os tanques.
Calibracin del lavador
El lavador de ELISA resulta crtico para garan-
tizar que la tcnica de ELISA funciona de for-
ma apropiada. Se presentan a continuacin
los lineamientos a tener en cuenta para que
el equipo funcione adecuadamente.
Posicin de las agujas (cabeza de sumi-
nistro y aspiracin). Se debe verificar con
cuidado el ajuste de la posicin horizontal y
vertical respecto de los pozos. Si la placa tie-
ne pozos de fondo plano, se debe verificar que
la aguja de aspiracin se encuentre ubicada
La siguiente ilustracin muestra las formas de
pozo ms comunes encontradas en las placas
de ELISA. Cada forma de pozo es adecuada
para un tipo de prueba en particular.
Ilustracin 3: Perfiles de los pozos, tcnica de ELISA
26
muy cerca a la pared del pozo; si el fondo es
redondo o en V, se debe verificar que la
aguja de succin se encuentre en el centro
del pozo y, cuando se efecta el movimien-
to vertical, se mantenga una distancia agu-
ja-fondo del pozo, comprendida entre 0,3 y
0,5 mm. Nunca se debe permitir que las
agujas toquen el fondo de los pozos, para
evitar interferencias de tipo mecnico entre
la punta de la aguja y el fondo del pozo du-
rante la funcin de aspiracin.
Tiempo de aspiracin. Ajustar el tiempo
de aspiracin de forma que resulte adecua-
do, para que la pelcula de solucin adheri-
da a la pared del pozo pueda fluir hasta el
fondo del mismo. Evitar tiempos demasiado
largos para impedir que se seque el recubri-
miento de los pozos. Verificar que las agu-
jas del sistema de succin se encuentren
limpias (libres de obstrucciones).
Volumen dispensado. Verificar que el vo-
lumen dispensado est lo ms cerca posible
del volumen mximo del pozo; confirmar
que todos los pozos se llenen de forma ho-
mognea al mismo nivel. Comprobar que
las agujas dispensadoras se encuentren lim-
pias (libres de obstrucciones).
Vaco. El sistema de succin debe estar gra-
duado de forma adecuada. Si el vaco es muy
alto, puede alterarse la prueba, pues podran
secarse los pozos y debilitar considerable-
mente la actividad de la enzima en los pozos,
alterando por completo el resultado de la
prueba. La mayora de los lavadores funcio-
nan bien con un vaco que oscila entre el 60 y
70 % de la presin atmosfrica. En algunos
lavadores, el vaco se produce en una bomba
externa que opera como un accesorio del la-
vador y su operacin es controlada desde el
lavador, lo que implica que la bomba de va-
co opera nicamente cuando se requiere.
Verificacin del proceso de lavado
Para verificar si el proceso de lavado se realiza
de acuerdo con las especificaciones exigidas por
la tcnica de ELISA, los fabricantes de pruebas
de ELISA han desarrollado procedimientos que
deben ser efectuados de forma regular. Uno de
los controles
5
se basa en la utilizacin del reac-
tivo Peroxidasa, el cual se dispensa mediante
una pipeta en los pozos de la placa para ser le-
do a 405, 450 y 492 nm. En seguida los pozos
se lavan y se les aade un sustrato incoloro
(TMB/H2O2 - Tetrameti l benzi di na/Perxi do
de hidrgeno). Cualquier residuo conjugado
hidrolizar la enzima y el cromgeno cam-
biar a color azul. Despus de detener la
reaccin con cido, el TMB se vuelve amari-
llo. La intensidad del color resultante est
directamente relacionada con la eficiencia
del proceso de lavado.
Para que el lavador de ELISA opere correcta-
mente, se necesita disponer de los siguientes
servicios:
2. Una mesa de trabajo estable. Se aconseja
que la misma est alejada de equipos que
generen vibraciones centrfugas, agitado-
res, que tenga un tamao adecuado para
que permita ubicar, al lado del lavador de
ELISA, los equipos complementarios re-
queridos para efectuar la tcnica en men-
cin: analizador, incubadora, dispensador
y computador con perifricos.
3. Una toma elctrica con polo a tierra en
buen estado, conectada a una acometida
que cumpla con las normas y estndares
elctricos implementados en el pas o el la-
boratorio. En los pases americanos se uti-
lizan generalmente voltajes de 110 V y fre-
cuencias de 60 Hz.
Las rutinas que se describen a continuacin es-
tn enfocadas exclusivamente al lavador de
ELISA. El mantenimiento del analizador de ELI-
SA est tratado en el captulo correspondiente.
5
Procedimiento desarrollado por PANBIO, ELISA Check Plus, Cat. N E-ECP01T.
27
Lavador de ELISA 2
Mantenimiento bsico
Frecuencia: Diaria
1. Verificar el volumen dispensado.
2. Comprobar la uniformidad del llenado.
3. Veri fi car l a efi ci enci a del subsi stema de
aspi raci n.
4. Confirmar la limpieza de las agujas de su-
ministro y extraccin.
5. Limpiar el lavador con agua destilada des-
pus de haberlo utilizado, para remover
cualquier vestigio de sal en los conductos
de los subsistemas de suministro y extrac-
cin. Las agujas pueden mantenerse su-
mergidas en agua destilada.
6. Verificar la limpieza del cuerpo del lava-
dor. Si es del caso, limpiar las superficies
exteriores con una pieza de tela humede-
cida, con un detergente suave.
1. Desensamblar y limpiar los conductos y co-
nectores. Verificar la integridad de los mis-
mos. Si de detectan fugas o vestigios de
corrosin, ajustar y/o reemplazar.
2. Verificar la integridad de los componentes
mecnicos. Lubricar de acuerdo con las ins-
trucciones del fabricante.
3. Comprobar el ajuste de cada uno de los
subsistemas. Calibrar de acuerdo a las re-
comendaciones del fabricante.
4. Confirmar la integridad del conector elc-
trico y el cable de interconexin.
5. Verificar la integridad del fusible, y que sus
puntos de contacto estn limpios.
Al t ermi nar el l avado quedan resi duos
de l a sol uci n ut i l i zada en l os pozos.
El si st ema de ext racci n del l avador
present a f al l as.
Veri f i car si el si st ema de vaco f unci ona a l a
presi n adecuada.
Los conduct os del si st ema de vaco son
de di met ro di f erent e al recomendado.
Comprobar el di met ro de l os conduct os que
recomi enda el f abri cant e.
La l nea de succi n present a obst ruc-
ci ones.
Veri f i car que l as l neas de vaco se encuent ren
l i mpi as.
El reci pi ent e para al macenar el desper-
di ci o se encuent ra l l eno.
Conf irmar el nivel del recipient e de desperdicio.
El f i l t ro de l a l nea se encuent ra hme-
do o bl oqueado.
Verif icar el est ado e int egridad del f ilt ro del sis-
t ema de succin.
La punt a de l a pi pet a no est col ocada
y no l l ega hast a el f ondo de l os pozos.
Exami nar l a col ocaci n de l as punt as en l a
pi pet a.
Se ut i l i z una mi cropl aca di f erent e en
el ensayo.
Verif icar el t ipo de placa que requiere el ensayo.
El l avador no ha si do purgado adecua-
dament e.
Revi sar el proceso de purga.
El operador no ha segui do l as i nst ruc-
ci ones del f abri cant e correct ament e.
Exami nar el proceso recomendado por el f a-
bri cant e. Ef ect uar l os aj ust es requeri dos.
Se col oc l a pl aca en el l avador, si n l a
al i neaci n correct a.
Revi sar l a col ocaci n de l a pl aca en el l avador.
Nota: Personal tcnico debidamente ca-
pacitado debe realizar el mantenimiento
de sistema de control. Si se requiere, debe
llamarse al fabricante o representante.
28
DEFINICIONES BSICAS
Bomba de desplazamiento positivo. Dis-
positivo conformado por un mbolo que se
desplaza a lo largo de un cilindro. El mecanis-
mo es similar al que presenta una jeringa. Es-
t dotado de un conjunto de vlvulas para
controlar los flujos hacia y desde la bomba.
Buffer. Solucin que mantiene un valor cons-
tante y conocido de pH a una temperatura
dada.
PBS. Una de las soluciones que se utiliza pa-
ra efectuar las operaciones de lavado en las
pruebas de ELISA. PBS es el acrnimo de
Phosphate Buffer Solution. Est compuesto
por las siguientes sustancias: NaCl, KCl, NaH-
PO42H2O y KH2SO4. Las casas productoras su-
ministran los boletines tcnicos que indican
las proporciones e instrucciones de cmo pre-
pararse. En general se mezcla una parte de
PBS, con 19 partes de agua desionizada.
Placa (de ELISA). Dispositivo de dimensiones
estandarizadas diseado para colocar las mues-
tras que requieren ser analizadas mediante la
tcnica de ELISA. En general existen disposicio-
nes de 96, 384 y 1 536 pozos. Se fabrican en
plsticos como poliestireno y polipropileno.
El ci cl o de l avado se desarrol l a de f or-
ma i nadecuada.
Se agot l a reserva de l a sol uci n de
l avado.
Exami nar el reci pi ent e de al macenami ent o de
l a sol uci n de l i mpi eza. Reponer el vol umen
f al t ant e.
El reci pi ent e de l avado present a creci -
mi ent o de hongos o bact eri as.
El si st ema no se usa f recuent ement e.
No se ut i l i za un procedi mi ent o de con-
t rol adecuado (desi nf ecci n).
Revi sar l os procedi mi ent os usados para i mpe-
di r el creci mi ent o de hongos o bact eri as.
Los t ubos y conect ores no se cambi an
con l a f recuenci a requeri da.
Veri f i car l a f recuenci a de cambi o sugeri da por
el f abri cant e y/o por el depart ament o t cni co.
La solucin de lavado se ha cont aminado. Conf i rmar l os procedi mi ent os ut i l i zados en l a
preparaci n y manej o de l a sol uci n de l ava-
do, a f i n de det ermi nar l a causa de l a cont ami -
naci n y el i mi narl a.
No se ha ef ect uado el mant eni mi ent o
de acuerdo a l a programaci n.
Revi sar l as f echas previ st as para ef ect uar el
mant eni mi ent o. Inf ormar a l os responsabl es.
El l avador no f ue purgado adecuada-
ment e al i ni ci o del ci cl o de t rabaj o.
Li mpi ar adecuadament e para homogenei zar
l a humedad en cada uno de sus component es
y que se el i mi nen l as burbuj as de ai re.
El volumen dispensado de solucin de la-
vado ha sido programado errneament e.
Veri f i car l os vol menes de sol uci n requeri dos
para cada t i po de prueba y cada t i po de pl aca.
La pl aca f ue col ocada de f orma i nco-
rrect a en el l avador.
Comprobar l a correct a i nst al aci n de l a pl aca
en el l avador.
La alt ura de t rabajo fue mal seleccionada. Revi sar l a al t ura de t rabaj o recomendada pa-
ra cada t i po de pl aca.
Las pl acas ut i l i zadas son di f erent es a
l as recomendadas por el f abri cant e.
Veri f i car que l as pl acas ut i l i zadas sean com-
pl et ament e compat i bl es con el l avador.
No se mant i enen l os ni vel es de f l ui do
adecuado en l os pozos.
El t ubo de sumi ni st ro de l a sol uci n de
l avado no es del di met ro ni del espe-
sor def i ni do por el f abri cant e.
Revi sar l as especi f i caci ones del f abri cant e. Co-
rregi r si es del caso.
La presi n es i nsuf i ci ent e para ent regar
l a cant i dad adecuada de sol uci n de
l avado.
Revi sar el si st ema de sumi ni st ro y l os conduc-
t os de sumi ni st ro. Puede haber una obst ruc-
ci n en l a l nea de l l enado.
29
Lavador de ELISA 2
Existen tambin placas que han recibido tra-
tamientos especiales para facilitar la realiza-
cin de pruebas.
TMB/H2O2. (Tetrametilbenzidina/Perxido de
hidrgeno). Reactivo que se emplea para ve-
rificar la calidad del lavado de los pozos utili-
zados en la tcnica ELISA.
Bibliografa
ELISA Check Plus, Panbio, Cat. N E-ECP01T, Brisbane, 2004.
(http://www.panbio.com.au/prodinfo/E-ECP01T.pdf)
Good technique for ELISA Assay, GTI, Inc.
(http://www.gtidiagnostics.com/forms %26docs/good_elisa_techniques_062304.pdf)
Solid Phase Guide, NUNC , Brand Products, Introduction to Solid Phase Techniques.
(http://www.nuncbrand.com/PDF/Guides%20and%20Manuals/Guide%20to%20Solid%20P-
hase.pdf)
Zoon, Kathryn, Recommendations to users of medical devices that test for infectious disea-
se markers by enzyme immunoassay (EIA) test systems, Division of Blood Applications, Bet-
hesda, MD. (http://www.fda.gov/cber/bldmem /122094.txt)
30
31
ANALIZADOR DE pH
El analizador de pH se utiliza para determinar la
concentracin de iones del gas hidrgeno [H
+
]
en una disolucin. Este equipo permite realizar
mediciones de la acidez de una solucin acuosa,
siempre que el mismo sea utilizado de forma
cuidadosa y se ajuste a procedimientos plena-
mente comprobados. A los analizadores de pH
se les denomina, adems, pHmetros, monitores
de pH o potencimetros.
PROPSITO DEL EQUIPO
El analizador de pH es un instrumento de uso
comn en cualquier campo de la ciencia relacio-
nado con soluciones acuosas. Se utiliza en reas
como la agricultura, el tratamiento y purifica-
cin de agua, en procesos industriales como los
petroqumicos, fabricacin de papel, alimentos,
metalmecnica, farmacia e investigacin y desa-
rrollo, entre otros. En el laboratorio de salud, las
aplicaciones del instrumento estn relacionadas
con el control de medios de cultivo, contro-
lar y/o medir la alcalinidad o acidez de caldos y
buffer. En equipos especializados de diagnstico
de laboratorio, se usan los mismos principios uti-
lizando microelectrodos para medir la acidez o
alcalinidad de los componentes lquidos de la
sangre, en donde la sustancia ms importante es
el agua que contiene gran cantidad de sales y
sustancias orgnicas disueltas. El pH del plasma
sanguneo es una de las caractersticas que per-
mite evaluar y determinar el estado de salud de
un paciente; su valor vara normalmente en el
plasma entre 7,35 y 7,45. Dicho valor est rela-
cionado con el metabolismo del paciente, pro-
ceso en el cual ocurre multitud de reacciones
que resultan inherentes al proceso vital, en las
cuales se producen y eliminan cidos y bases
que, en condiciones normales, se mantienen en
equilibrio. Los cidos liberan constantemente io-
nes [H
+
] que el organismo neutraliza o equilibra
mediante la liberacin de iones de bicarbonato
[HCO
3
]. El organismo mantiene el equilibrio

acido-bsico a travs de los riones, rganos en
los cuales se elimina cualquier exceso que se pre-
sente. Es una de las caractersticas que vara de-
pendiendo de factores como la edad o el estado
de salud del paciente. Se presentan a continua-
cin los valores tpicos de pH de algunos fluidos
corporales.
Tabla 1: Val ores de pH de al gunos f l ui dos orgni cos
FOTOGRAFAS Y ELEMENTOS DEL
ANALIZADOR DE pH
CAPTULO 3
Analizador de pH
Cdigo (s) ECRI
15-164
Medi dores de pH
FLUI DO VALOR DE pH
Bi l i s 7,8 8,6
Sal i va 6,4 6,8
Ori na 5,5 7,0
Jugo gst ri co 1,5 1,8
Sangre 7,35 7,45
Fot ograf a
Element o
Anal i zador de pH con brazo port ael ect rodo y el ect rodo
1. Brazo port ael ect rodo y el ect rodo
2. Transf ormador
3. Cont rol aj ust e t emperat ura
4. Cont rol es de cal i braci n Cal 1 y Cal 2
5. Cont rol sel ect or de f unci ones St and by, mV, pH
32
El analizador de pH mide la concentracin de
iones [H
+
], utilizando un electrodo sensible a
los iones. En condiciones ideales dicho elec-
trodo debera responder ante la presencia de
un nico tipo de in, pero en la realidad
siempre se presentan interacciones o interfe-
rencias con iones de otras clases presentes en
la solucin. Un electrodo de pH es general-
mente un electrodo combinado, en el cual se
encuentran integrados un electrodo de refe-
rencia y un electrodo de vidrio, en una misma
sonda. La parte inferior de la sonda termina
en un bulbo redondo de vidrio delgado. El
tubo interior contiene cloruro de potasio sa-
turado (KCl), invariable y una solucin 0,1 M
de cido clorhdrico (HCl). Tambin, dentro
del tubo interior, est el extremo del ctodo
del electrodo de referencia. El extremo an-
dico se envuelve as mismo en el exterior del
tubo interno y termina con el mismo tipo de
electrodo de referencia como el del tubo in-
terno. Ambos tubos, el interior y el exterior,
contienen una solucin de referencia, pero
nicamente el tubo exterior tiene contacto
con la solucin del lado externo del electrodo
de pH, a travs de un tapn poroso que acta
como un puente salino.
Dicho dispositivo se comporta como una cel-
da galvnica. El electrodo de referencia es el
tubo interno de la sonda analizadora de pH,
el cual no puede perder iones por interaccin
con el ambiente que lo rodea, pues como re-
ferencia debe permanecer esttico invaria-
ble durante la realizacin de la medida. El
tubo exterior de la sonda contiene el medio
al que se le permite mezclarse con el ambien-
te externo. Como resultado de lo anterior, es-
te tubo debe ser llenado peridicamente con
una solucin de cloruro de potasio (KCl) para
reponer la capacidad del electrodo que se in-
hibe por prdida de iones y por evaporacin.
El bulbo de vidrio en la parte inferior del
electrodo de pH que acta como elemento
de medicin est recubierto, tanto en el exte-
rior como en el interior, con una capa de gel
hidratado. Los cationes metlicos [Na
+
] se di-
funden en el gel hidratado fuera del vidrio y
dentro de la solucin, mientras que los iones
[H
+
] de la solucin se difunden dentro del gel
hidratado. El gel hidratado es el que hace
que el electrodo de pH sea un electrodo se-
lectivo de iones. El in [H
+
] no cruza a travs
de la membrana de vidrio del electrodo de
pH, es el in sodio [Na
+
] el que cruza y permi-
te un cambio de la energa libre. Cuando un
in se difunde de una regin de actividad a
otra, se presenta un cambio en la energa li-
bre y esto es lo que mide el analizador de pH.
Una breve explicacin de la teora sobre la
cual se basa el funcionamiento de los electro-
dos se incluye en el anexo ubicado al final del
captulo.
Fot ograf a
Element o
El ect rodo de pH y brazo port ael ect rodo
http://www.umd.umich.edu/casl/natsci/slc/slconline/PHM/select.html
33
Anal i zador de pH 3
COMPONENTES
Un analizador de pH dispone generalmente
de los siguientes componentes:
1. Un instrumento que contiene los cir-
cuitos, los controles, los conectores y las
pantallas o escalas de medicin. Dentro de
los componentes ms importantes del mis-
mo, se encuentran los siguientes:
a) Un interruptor de encendido/apagado.
No todos los analizadores de pH disponen
de un interruptor de encendido y apaga-
do. Algunos simplemente disponen de un
cable con un enchufe que permite conec-
tarlo a una toma elctrica adecuada.
b) Control de temperatura. Este control
permite realizar los ajustes relacionados
con la temperatura de la disolucin a la
cual se realiza la medicin del pH.
c) Controles de calibracin. Dependiendo
del diseo, los analizadores de pH pueden
disponer de uno o dos botones o diales de
calibracin. Normalmente se identifican
con las letras Cal 1 y Cal 2. Si el analizador
de pH se calibra con una sola solucin, se
utiliza el dial Cal 1 previendo que el dial
Cal 2 se encuentre graduado al 100 %. Si
el anal i zador de pH permi te el uso de ca-
l i braci ones de dos puntos, se deber di s-
poner de dos sol uci ones de pH conoci do
que abarquen el rango de pH que ser
medi do. En este caso se uti l i zan l os dos
control es (Cal 1 y Cal 2). En casos espe-
ci al es debern efectuarse cal i braci ones
de tres puntos (uti l i zando tres sol uci ones
de pH conoci do).
d) Selector de funciones. Las funciones in-
cluidas en el control en mencin, general-
mente, son:
I. Modo Stand by (0). En esta posicin los
electrodos se encuentran protegidos de co-
rrientes elctricas. Es la posicin utilizada pa-
ra mantener almacenado el equipo.
II. Modo pH. En esta posicin el equipo es-
t en capacidad de realizar las mediciones
de pH, previas a los procedimientos de ca-
libracin requeridos.
III. Modo milivoltios mV. En esta posicin el
Ilustracin 4: Esquema de un analizador de pH
ESQUEMA DE UN ANALIZADOR DE pH
34
Ilustracin 6: Circuito de control analizador de pH
equipo est en capacidad de realizar lectu-
ras de milivoltios.
IV. Modo ATC. Modo de ajuste automtico
de la temperatura cuando se mide el pH
en soluciones cuyas temperaturas varan.
Esta funcin requiere el uso de una sonda
especial. No todos los analizadores de pH
disponen de este control.
2. Un electrodo de combinacin. Este dis-
positivo debe ser almacenado en agua
destilada y permanecer conectado al ins-
trumento de medicin o metro. El electro-
do de combinacin dispone de un electro-
do de referencia conocido tambin como
electrodo calomel o calomelanos y un
electrodo activo, integrados sobre un mis-
mo cuerpo. El diseo del mismo vara de-
pendiendo del fabricante.
Ilustracin 5: Clases de electrodos
CIRCUITO TPICO
A continuacin, se incluye un circuito tpico
de los que conforman el sistema de control
de un analizador de pH. Cada fabricante dis-
pone de sus propios diseos y variantes.
35
El analizador de pH funciona mediante corrien-
te elctrica de las siguientes caractersticas:
Energa tipo: monofsica
Voltaje: 110 V o 220 V
Frecuencia: 60 Hz
Tambin existen analizadores de pH de tipo
porttil que funcionan con bateras.
PROCEDIMIENTO GENERAL
DE CALIBRACIN
Los analizadores de pH normalmente deben
ser calibrados antes de ser utilizados, a fin de
garantizar la calidad y exactitud de las lectu-
ras. Los procedimientos que se realizan son
los siguientes:
1. Calibracin de un punto. Se realiza en con-
diciones de funcionamiento y uso normal.
Utiliza una solucin de referencia de pH
conocido.
2. Calibracin de dos puntos. Se realiza si se
requiere efectuar mediciones muy preci-
sas. Utiliza dos soluciones de referencia de
pH conocido. Igualmente, si el instrumen-
to se utiliza de forma espordica y si el
mantenimiento que recibe es eventual.
Tabla 2: Descri pci n el ement os ci rcui t o de cont rol
Al i ment aci n y rect i f i caci n el ct ri ca Transf ormador 110 V/12 V AC Di sposi t i vo para convert i r el vol t aj e de red
110 V a 12 V AC
Secci n de sal i da Vol t met ro DC de baj o cost o Permi t e l a l ect ura en mi l i vol t i os. El vol t aj e l e-
do es 10 veces el vol t aj e de l a cel da, permi -
t i endo una resol uci n de 0,1 mi l i vol t i os.
La l ect ura se real i za medi ant e l a ut i l i zaci n de
el ect rodos de carbono/Qui nhi drona.
Medi ci n de pH y mi l i vol t i os Ampl i f i cador dual de modo no i nvert i -
do TL081
Resi st enci a (R1) 9,09 K (ohm) Ci rcui t o mi l i vol t i os
Resi st enci a (R2) 1 K (ohm) Ci rcui t o mi l i vol t i os
Resi st enci a (R3) 560 K (ohm) Ci rcui t o pH
Resi st enci a vari abl e (R4) 10 K (ohm) Ci rcui t o pH
Resi st enci a (R5) 30 K (ohm) Resi st enci a a t i erra
La gananci a del ci rcui t o est gobernada me-
di ant e l a si gui ent e ecuaci n:
Gananci a = 1+ (R3+ PxR4)/R5+ (1P)xR4.
Di odos rect i f i cadores 1N4002 Di odo para cont rol ar l a f orma de l a onda y ga-
rant i zar que l a mi sma es posi t i va
Condensadores el ect rol t i cos 3 300 mi -
crof aradi os (f d) (2)
Condensadores para amort i guar el vol t aj e DC
obt eni do por l os di odos
Regul adores de t res t ermi nal es (7812,
7912)
Disposit ivo para regular el volt aje result ant e de la
int eraccin ent re diodos y condensadores
Condensadores el ect rol t i cos de 0,1 mi -
crof aradi os (f d) (2)
Disposit ivos usados para lograr est abilidad en al-
t a frecuencia
Lmpara de seal 12 V DC Lmpara que indica si el equipo est prendido
SI STEMA ELEMENTO DESCRI PCI N
36
Descripcin del proceso
Frecuencia: Diaria
1. Calibrar el analizador de pH utilizando
una solucin de pH conocido (calibra-
cin de un punto).
1.1. Conectar el equipo a una toma elctrica
adecuada al voltaje del mismo.
1.2. Ajustar el selector de temperatura a la
temperatura ambiente.
1.3. Ajustar el metro.
1.4. Retirar los electrodos del recipiente de
almacenamiento. Los electrodos debe-
rn estar siempre almacenados en una
solucin adecuada. Algunos se mantie-
nen en agua destilada, pero otros en
una solucin diferente que recomienda
el fabricante del electrodo
1
. Si por algu-
na circunstancia el electrodo se seca, es
necesario dejarlo en remojo al menos 24
horas antes de volverlo a utilizar.
1.5. Enjuagar el electrodo con agua destila-
da, sobre un vaso de precipitado vaco.
1.6. Secar el electrodo con un elemento que
absorba la humedad residual superficial,
pero que no impregne el electrodo. No
frotar el electrodo. Este procedimiento de-
ber realizarse siempre que los electrodos
se utilicen en varias soluciones, para dismi-
nuir la posibilidad de contaminacin.
2. Colocar los electrodos en la solucin
de calibracin.
2.1. Sumergir el electrodo en la solucin de
estandarizacin, de forma que la parte
inferior del mismo no toque el fondo del
vaso de precipitados. Esto disminuir el
riesgo de que el electrodo se rompa con-
tra el fondo del recipiente. Si el ensayo
requiere que la solucin se mantenga en
movimiento mediante el uso de un agi-
tador magntico, cuidar que la barra de
agitacin no golpee el electrodo, pues
podra romperlo. Una solucin buffer se
usa como solucin de calibracin, debido
a que su pH es conocido y as se manten-
dr aun en el caso de que se presente
una pequea contaminacin. Por lo ge-
neral, se utiliza para este propsito una
solucin de pH = 7
2
.
3. Girar el selector de funciones de la po-
sicin Stand by a la posicin pH.
3.1. Esta accin conecta, en el analizador de
pH, el electrodo a la escala de medida de
pH para que la lectura pueda ser realizada.
3.2. Ajustar el metro para leer el pH de la so-
lucin de calibracin, utilizando el botn
marcado Cal 1, de forma que se pueda
leer el pH de la solucin de calibracin.
Por ejemplo: pH = 7. La aguja podra osci-
lar ligeramente en unidades de 0,1 pH; en
promedio la lectura debera ser de 7. Mi-
rar el metro la escala de lectura de for-
ma perpendicular, para evitar o eliminar
errores de paralelaje errores de lectura
producidos por la sombra de la aguja del
metro, visible en el espejo de la escala de
lectura. El analizador de pH se encuentra
entonces listo calibrado, para efectuar
lecturas correctas del pH.
3.3. Colocar el selector de funciones en la po-
sicin Stand by.
4. Medir el pH de una solucin
4.1. Reti rar el el ectrodo de l a sol uci n de
cal i braci n.
4.2. Enjuagar el electrodo con agua destilada
y secarlo con un elemento secante.
1
Verificar el tipo de solucin buffer que recomienda el fabricante del electrodo.
2
Verificar el tipo de de solucin de calibracin que recomienda el fabricante del electrodo.
37
4.3. Colocar el electrodo en la solucin de pH
desconocido.
4.4. Girar el selector de funciones de la posi-
cin Stand by a la posicin pH.
4.5. Leer el pH de la solucin bajo anlisis, en
la escala del metro o la pantalla del ana-
lizador de pH. Registrar la lectura obte-
nida en la hoja de control.
4.6. Girar de nuevo el selector de funciones a
la posicin Stand by.
Si se requiere medir el pH de ms de una solu-
cin, repetir los procedimientos anteriormen-
te descritos. Cuando son numerosas las solu-
ciones a las cuales se les mide el pH, se debe
calibrar el analizador de pH de forma frecuen-
te, siguiendo los lineamientos presentados.
5. Apagar el analizador de pH.
5.1. Remover el electrodo de la ltima solu-
cin analizada.
5.2. Enjuagar el electrodo con agua destilada
y secarlo con un elemento secante que
no lo impregne.
5.3. Colocar el electrodo en el recipiente de
almacenamiento.
5.4. Verificar que el selector de funciones es-
t en la posicin Stand by.
5.5. Accionar el interruptor de apagado o
desconectar el cable de alimentacin, si
carece de este control.
5.6. Limpiar el rea de trabajo.
MANTENIMIENTO GENERAL DEL
ANALIZADOR DE pH
Los analizadores de pH disponen de dos pro-
cedimientos generales de mantenimiento: los
dirigidos al cuerpo del analizador y los dirigi-
dos a la sonda detectora de pH (electrodos).
Procedimientos generales de manteni-
miento al cuerpo del analizador de pH
Frecuencia: Cada seis meses
1. Examinar el exterior del equipo y evaluar su
condicin fsica general. Verificar la limpieza
de las cubiertas y el ajuste de las mismas.
2. Probar el cable de conexin y su sistema de
acoples. Comprobar que se encuentran en
buenas condiciones y que estn limpios.
3. Examinar los controles del equipo. Verifi-
car que se encuentran en buen estado y
que se pueden accionar sin dificultad.
4. Verificar que el metro se encuentra en
buen estado. Para esta verificacin el ins-
trumento debe estar desconectado de la l-
nea de alimentacin elctrica. Ajustar la
aguja indicadora a cero (0), utilizando el
tornillo de graduacin que generalmente
se encuentra bajo el pivote de la aguja in-
dicadora. Si el equipo dispone de pantalla
indicadora, comprobar su funcionamiento
normal.
5. Confirmar que el indicador de encendido
bombillo o diodo opere normalmente.
6. Verificar el estado de brazo portaelectro-
do. Examinar el mecanismo de montaje y
fijacin del electrodo, a fin de prever que
el electrodo no se suelte. Comprobar que
el ajuste de alturas opere correctamente.
7. Revisar las bateras si aplica; cambiar si
es necesario.
8. Efectuar una prueba de funcionamiento
midiendo el pH de una solucin conocida.
9. Inspeccionar las corrientes de fuga y la co-
nexin a tierra.
MANTENIMIENTO BSICO DEL ELECTRODO
Frecuencia: Cada cuatro meses
El el ectrodo detector requi ere manteni -
miento peridico de la solucin conductora,
para que pueda obtener lecturas precisas.
38
Los procesos recomendados para reponer la
solucin electroltica son los siguientes:
1. Retirar el electrodo detector de la solucin
buffer de almacenamiento.
2. Enjuagar el electrodo detector con abun-
dante agua destilada.
3. Retirar la cubierta superior del electrodo
detector.
4. Llenar el electrodo detector con una solu-
cin saturada de cloruro de potasio (KCl).
Utilizar la jeringa o aplicador que acompa-
a la solucin de KCl. El llenado se efecta
a travs del conducto que protege la tapa
superior del electrodo. Verificar que la
punta de la jeringa no toque el interior del
electrodo.
5. Envolver una pequea parte de la tapa su-
perior del electrodo para cubrir la apertu-
ra superior del mismo.
6. Usar la punta de la aguja de la jeringa pa-
ra perforar el rea de la tapa que cubre la
abertura, a fin de permitir que exista un
equilibrio de presiones entre el interior y
el exterior del electrodo.
7. Enjuagar el electrodo con agua destilada.
8. Mantener el electrodo dentro de la solu-
cin buffer de almacenamiento, siempre
que no est en uso.
Limpieza del electrodo
La clase de limpieza requerida por el electro-
do depende del tipo de contaminante que lo
haya podido afectar. Se resumen a continua-
cin los procedimientos ms comunes.
9. Limpieza general. Remojar el electrodo de
pH en una solucin 0,1 M de cido clorh-
drico (HCl) o 0,1 M de HNO3, durante 20
minutos. Enjuagar con agua corriente an-
tes de usar.
10. Remocin de depsitos y bacterias. Remo-
jar el electrodo de pH en una disolucin
1:10 de blanquedor domstico, durante
10 minutos. Enjuagar con agua abundan-
te antes de usar.
11. Limpieza de aceite y grasa. Enjuagar el
electrodo de pH con un detergente medio
o con metil alcohol. Enjuagar con agua
antes de usar.
12. Limpieza de depsitos de protenas. Re-
mojar el electrodo de pH en pepsina al 1 %
en cido clorhdrico 0,1 M, durante 5 mi-
nutos. Enjuagar con agua antes de usar.
Despus de realizar cualquier operacin de
limpieza, es conveniente enjuagar con agua
desionizada y rellenar el electrodo de refe-
rencia antes de usar.
Otros cuidados
13. No golpear el electrodo. Dado que su es-
tructura generalmente es de vidrio y este
material es muy frgil se rompe antes de
que se deforme, es necesario manipular-
lo de forma cuidadosa, evitando que sufra
golpes, choques o cadas.
14. Recordar que el electrodo es un elemento de
consumo y que tiene una vida til limitada.
15. Mientras no est en uso, mantener el
electrodo dentro de la solucin buffer de
almacenamiento.
39
DEFINICIONES BSICAS
Buffer. Solucin que mantiene un valor constan-
te y conocido de pH a una temperatura dada.
pH. Medida de la concentracin del in hi-
drgeno (H
+
) dada en moles (M) por litro en
una disolucin. El concepto de pH fue pro-
puesto por Srensen y Lindstrm-Lang en
1909, con el fin de facilitar el manejo de la
expresin de concentraciones de iones que
resultan muy bajas. Se define mediante la si-
guiente ecuacin:
pH = Log[H
+
] [H
+
] = 10
pH
Es una medida de la acidez de la disolucin.
Ejemplo: en el agua la concentracin de [H
+
] es
1,0 x 10
7
M, siendo en consecuencia el pH = 7.
Esto permiti expresar el rango de concen-
traciones de 1 a 10
14
M, simplemente como
de cero (0) a 14. Existen diversos sistemas pa-
ra medir la acidez de una solucin. Una sus-
tancia es cida cuando, disuelta en agua, la
misma es capaz de producir iones H
+
; una
sustancia es bsica cuando, disuelta en agua,
es capaz de producir iones [OH
] (hidrxidos).
Una sustancia cida tiene una mayor canti-
dad de iones [H
+
] que la que presenta el agua
pura; una sustancia bsica presenta mayor
cantidad de iones [OH
] que los que presenta

el agua pura. La concentracin de las sustan-
cias se expresa en moles (M).
En el agua pura se sabe que la concentracin
de iones [H
+
] y [OH
] es de 1,0 x 10
7
M, por lo
que la misma se considera una sustancia neu-
tra. En realidad es un electrolito dbil que se
disocia segn la ecuacin:
H
2
O [H
+
] [OH
]
En toda disolucin acuosa existe un equilibrio
que puede expresarse como:
Si la disolucin es diluida, la concentracin
del agua no disociada puede considerarse
constante y por ello,
[H
+
] [OH
] = [H
2
O]K = Ka
El anal i zador de pH present a l ect uras
i nest abl es.
Burbuj as de ai re en el el ect rodo. Remojar el elect rodo para eliminar las burbujas.
La respuest a del el ect rodo es l ent a. El ect rodo suci o o grasoso. Li mpi ar el el ect rodo y recal i brar.
La pant al l a present a mensaj e de error. Operaci n i ncorrect a o sel ecci n err-
nea del modo de operaci n.
Veri f i car modo de operaci n sel ecci onado. Se-
l ecci onar una operaci n vl i da.
Anal i zador de pH encendi do, pero no
hay seal en l a pant al l a (* ).
Bat eras mal i nst al adas. Veri f i car pol ari dad de l as bat eras.
Bat eras agot adas. Reempl azar bat eras.
La pant al l a present a mensaj e de cal i -
braci n o error.
Error de cal i braci n. Recal i brar anal i zador de pH.
Indi cador de bat eras cent el l ea (* ). Bat eras agot adas. Reempl azar bat eras.
(* ) Causa probabl e en equi pos que f unci onan con bat eras.
Valor de buf f er errneo en la calibracin. Veri f i car l os val ores del buf f er ut i l i zado.
El ect rodo suci o. Li mpi ar el ect rodo y cal i brar.
El ect rodo suci o. Li mpi ar el el ect rodo y recal i brar.
El ect rodo rot o. Reempl azar el el ect rodo.
El ect rodo muy superf i ci al . Veri f i car que l a muest ra cubre perf ect ament e
l a punt a del el ect rodo.
[H
+
] [OH
]
= K
H
2
O
40
La nueva constante Ka se denomina constan-
te de disociacin o producto inico del agua
y su valor es 1,0x10
14
, a 25 C.
[H
+
] [OH
] = 1,0 x 10
-14
X x X = 1,0 x 10
-14
X
2
= 1,0 x 10
-14
X = 1,0 x 10
-7
En el agua pura las concentraciones de H
+
y OH
son de 1,0 x 10
7
M, concentracin que es muy
pequea, si se tiene en cuenta que la concentra-
cin molar del agua es de 55,4 mol/litro.
Disociacin. Fenmeno por el cual se pre-
senta un rompimiento de las molculas como
resultado de la disolucin de una sustancia
en otra y que produce partculas cargadas
elctricamente (iones).
Disolucin. Mezcla homognea de propie-
dades uniformes de dos o ms sustancias. Se
caracteriza por no existir interaccin qumica
entre los componentes de la mezcla. El com-
ponente que existe en mayor proporcin y
que generalmente se encuentra en estado l-
quido se denomina disolvente y el que se en-
cuentra en menor cantidad, soluto.
Electrodo sensitivo a los iones. Dispositivo
que produce una diferencia de potencial que es
proporcional a la concentracin de un analito.
Electrodo calomel. El ectrodo de referen-
ci a que se uti l i za, junto con el el ectrodo ac-
ti vo, en l a determi naci n del pH de una so-
l uci n. Di cho el ectrodo est construi do con
base en mercuri o (Hg), una capa de di mer-
curi o (Hg2Cl 2) y una di sol uci n de cl oruro de
potasi o (KCl ) de concentraci n 0,1 M. Se re-
presenta as : Cl 2[Hg2Cl 2, KCl ]Hg.
Electrolito. Solutos que producen soluciones
conductoras tales como el NaCl cloruro de
sodio y el NH4OH.
Gel. Tipo de mezcla en la cual un lquido se
encuentra disperso a travs de un slido.
Ejemplos: jaleas, gelatinas.
In. Cuando un tomo neutro gana o pierde
un electrn, forma una partcula a la que se
conoce con el nombre de in. Si el tomo
pierde un electrn, se convierte en un in de
carga positiva y se le denomina catin. Si el
tomo gana o captura un electrn, se con-
vierte en un in de carga negativa y se le de-
nomina anin.
Mol. Cantidad de cualquier sustancia cuya
masa, expresada en gramos, es numricamen-
te igual a la masa atmica de dicha sustancia.
Molaridad. Como el nmero de moles (M)
de una sustancia en un litro de solucin. (N-
mero de moles de soluto en un litro (l) de so-
lucin). El parntesis cuadrado alrededor del
smbolo del in indica que se trata de una
concentracin molar.
Solucin. Mezcla fsicamente homognea
de dos o ms sustancias, cuyas partes son muy
pequeas para diferenciarlas a simple vista o
aun con el microscopio. La composicin y de-
ms propiedades de la solucin son iguales
en todas sus partes.
41
Bibliografa
Aston, R., Principles of Biomedical Instrumentation and Measurement, Merrill Publishing
Company, 1990.
Basic Ph Meter PH-20, Operation Manual, Sartorius, Publication N WPB6001-e00062.
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Castellanos, J., Medidor de pH en sangre, Fondo Nacional Hospitalario, Divisin de Ingenie-
ra y Mantenimiento, 1989.
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Ram S., Lamba, De La Cutara, R., Locally Produced Low Cost Equipment Project, UNESCO-
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Restrepo, F., Vargas L., Qumica bsica, Medelln, Editorial Bedout.
Sienko, M., Plane R., Qumica, Madrid, Aguilar S.A. de Ediciones, 1971.
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Potts, R., The pH Meter, Science learning Center, University of Michigan - Dearborn.
(http://www.umd.umich.edu/casl/natsci/slc/slconline/PHM/ph-home.htm)
The pH Meter. (www.wikipedia.org)
42
Los electrodos de pH idealmente se comportan como una celda electroqumica y reaccionan a la
concentracin de iones [H
+
]. Esto genera una fuerza electromotriz (FEM) que, de acuerdo con la
ley de Nernst, se plantea segn la siguiente ecuacin:
Si se tiene en cuenta que:
pH = -log a
H
L donde a es la concentracin efectiva de iones (Actividad)
Si n = 1, la ecuacin entonces se reescribe as:
E es una constante dependiente de la temperatura. Si se sustituye E por ET, la calibracin re-
sulta ms sencilla. Los electrodos reales no siempre siguen la pendiente de la ecuacin de Nernst.
Si se introduce el concepto de sensibilidad (s), la ecuacin puede reescribirse as:
Los valores de E y s se encuentran midiendo la FEM en dos soluciones con pH conocido. S es la
pendiente de E versus pH, mientras que E se encuentra de la interseccin con el eje y. Cuando E
y s son conocidas, la ecuacin puede reescribirse y el pH puede calcularse as:
E = E+ lna
H
L
RT
nF
Anexo: Teora del pH
E = E- pH
RT
F
E = ET - s pH
RT
F
ET - E
RT
F
s
pH =
43
BALANZAS
La balanza es un instrumento que mide la
masa de un cuerpo o sustancia, utilizando co-
mo medio de comparacin la fuerza de la
gravedad que acta sobre el cuerpo. La pala-
bra proviene de los trminos latinos bis que
significa dos y linx, plato. Se debe tener en
cuenta que el peso es la fuerza que el campo
gravitacional ejerce sobre la masa de un
cuerpo, siendo tal fuerza el producto de la
masa por la aceleracin local de la gravedad.
[F = m x g]. El trmino local se incluye para
destacar que la aceleracin depende de fac-
tores como la latitud geogrfica, la altura so-
bre el nivel del mar y la densidad de la tierra,
en el lugar donde se efecta la medicin. Di-
cha fuerza se mide en Newton. La balanza
tiene otros nombres, entre los que destacan
bscula y pesa.
FOTOGRAFAS DE BALANZAS
1
PROPSITO DE LA BALANZA
La balanza se utiliza para medir la masa de un
cuerpo o sustancia o tambin el peso de los mis-
mos, dado que entre masa y peso existe una re-
lacin bien definida. En el laboratorio se utiliza
la balanza para efectuar actividades de control
de calidad con dispositivos como las pipetas,
para preparar mezclas de componentes en pro-
porciones predefinidas y para determinar densi-
dades o pesos especficos.
PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO
Las balanzas se diferencian entre s por el di-
seo, los principios utilizados y los criterios de
metrologa que utilizan. En la actualidad po-
dra considerarse que existen dos grandes
grupos: las balanzas mecnicas y las balanzas
electrnicas.
CAPTULO 4
Balanzas
Cdigo (s) ECRI
10-261
Bal anzas
10-263 Bal anzas el ect rni cas
18-449 Bal anzas el ect rni cas anal t i cas
18-451 Bal anzas mi croel ect rni cas, mi croanal t i cas
Balanza mecnica
Balanza elect rnica
1
http://www.ohaus.com/input/media/picture_s/EP64C_s.jpg /http://www.ohaus.com/products/ind/mechanical.asp
44
Balanzas mecnicas
Algunas de las ms comunes son las siguientes:
1. Balanza de resorte. Su funcionamiento
est basado en una propiedad mecnica de
los resortes, que consiste en que la fuerza
que ejerce un resorte es proporcional a la
constante de elasticidad del resorte [k]
multiplicada por la elongacin del mismo
[x] [F = -kx]. Lo anterior implica que mien-
tras ms grande sea la masa [m] que se co-
loca en el platillo de la balanza, mayor ser
la elongacin, siendo la misma proporcio-
nal a la masa y a la constante del resorte. La
calibracin de una balanza de resorte de-
pende de la fuerza de gravedad que acta
sobre el objeto, por lo que deben calibrarse
en el lugar de empleo. Se utilizan si no se
requiere gran precisin.
2. Balanza de pesa deslizante. Dispone de
dos masas conocidas que se pueden des-
plazar sobre escalas una con una gradua-
cin macro y la otra con una graduacin
micro; al colocar una sustancia de masa
desconocida sobre la bandeja, se determi-
na su peso deslizando las masas sobre las
escalas mencionadas hasta que se obtenga
la posicin de equilibrio. En dicho momen-
to se toma la lectura sumando las cantida-
des indicadas por la posicin de las masas
sobre las escalas mencionadas.
3. Balanza analtica. Funciona mediante la
comparacin de masas de peso conocido con
la masa de una sustancia de peso desconoci-
do. Est construida con base en una barra o
palanca simtrica que se apoya mediante un
soporte tipo cuchilla en un punto central de-
nominado fulcro. En sus extremos existen
unos estribos o casquillos que tambin estn
soportados mediante unas cuchillas que les
permiten oscilar suavemente. De all se en-
cuentran suspendidos dos platillos. En uno se
colocan las masas o pesas certificadas y en el
otro aquellas que es necesario analizar. Todo
el conjunto dispone de un sistema de ase-
guramiento o bloqueo que permite a la pa-
lanca principal reposar de forma estable
cuando no es utilizada o cuando se requie-
ren modificar los contrapesos. Dispone de
una caja externa que protege la balanza de
las interferencias, como corrientes de aire,
que pudieran presentarse en el lugar donde
se encuentra instalada. En la actualidad, se
considera que una balanza analtica es aque-
lla que puede pesar diez milsimas de gramo
(0,0001 g) o cien milsimas de gramo (0,00001 g);
tienen una capacidad que alcanza general-
mente hasta los 200 gramos.
Ilustracin 7: Balanza de resorte
Bandeja
Escala macro
Pesa deslizante micro
Escala micro
Pesa deslizante macro
Ilustracin 8: Balanza de pesa deslizante
Ilustracin 9: Balanza analtica
45
Bal anzas 4
Para utilizarlas se requiere disponer de un
juego de masas certificadas, el cual dispo-
ne de piezas con masa de diversa magni-
tud. El juego est por lo general compues-
to por las siguientes piezas:
4. Balanza de plato superior. Este tipo de
balanza dispone de un platillo de carga co-
locado en la parte superior, el cual es so-
portado por una columna que se mantiene
en posicin vertical por dos pares de guas
que tienen acoples flexibles. El efecto de la
fuerza, producido por la masa, es transmi-
tido desde algn punto de la columna ver-
tical o bien directamente o mediante al-
gn mecanismo a la celda de carga. La exi-
gencia de este tipo de mecanismo consiste
en mantener el paralelismo de las guas
con una exactitud de hasta 1 m. Las
desviaciones de paralelismo causan un
error conocido como de carga lateral que
se presenta cuando la masa que est sien-
do pesada muestra diferencias, si la lectu-
ra se toma en el centro del platillo o en
uno de sus extremos. El esquema que se in-
cluye a continuacin explica el principio de
operacin, el cual algunos fabricantes han
introducido a las balanzas electrnicas.
5. Balanza de sustitucin. Es una balanza
de platillo nico. Se coloca sobre el platillo
de pesaje una masa desconocida que se
equilibra al retirar, del lado del contrape-
so, masas de magnitud conocida, utilizan-
do un sistema mecnico de levas hasta que
se alcance una posicin de equilibrio. El
fulcro generalmente est descentrado con
relacin a la longitud de la viga de carga y
colocado cerca del frente de la balanza.
Cuando se coloca una masa sobre el plati-
llo de pesaje y se libera la balanza del me-
canismo de bloqueo, el movimiento de la
viga de carga se proyecta mediante un sis-
tema ptico a una pantalla localizada en
la parte frontal del instrumento.
Verif icacin de operacin
A continuacin, se describe el procedimiento
utilizado para verificar el funcionamiento de
una balanza mecnica tpica. La descripcin del
proceso se basa en la balanza de sustitucin.
1. Verificar que la balanza est nivelada. La ni-
velacin se logra mediante mecanismos de
ajuste roscado, ubicados en la base de la ba-
lanza. El nivel se logra centrando una burbu-
ja sobre una escala visible en la parte frontal
de la base de la balanza.
2. Comprobar el punto cero. Colocar en cero los
controles y liberar la balanza. Si la escala de
lectura no se mantiene en cero, es necesario
Tipo de masa
Pi ezas si mpl es
Capacidad
2
1 g, 2 g, 5 g, 10 g, 20 g, 50 g,
100 g, 200 g y 500 g
Pi ezas f racci onal es 2 mg, 5 mg, 10 mg, 20 mg, 50 mg,
100 mg, 200 mg y 500 mg
2
Manual of Basic Techniques for a Health Laboratory, Geneve, World Health Organization, 2nd. Edition, 2003.
Ilustracin 10: Balanza de plato superior
Ilustracin 11: Balanza de sustitucin
46
ajustar el mecanismo de ajuste de cero que es
un tornillo estriado ubicado en posicin hori-
zontal cerca al fulcro. Para esto es necesario
bloquear la balanza y ajustar suavemente el
citado mecanismo. El proceso contina hasta
que el cero ajuste correctamente en la escala
de lectura.
3. Verificar y ajustar la sensibilidad. Esta se reajus-
ta siempre que se haya efectuado algn ajus-
te interno. Se efecta con una pesa patrn co-
nocida y se procede siguiendo estos pasos:
a) Bloquear la balanza.
b) Colocar un peso patrn en el platillo, equi-
valente al rango de la escala ptica.
c) Colocar la graduacin de la dcada de pe-
so inferior en uno (1).
d) Liberar la balanza.
e) Ajustar el punto cero.
f) Colocar nuevamente la graduacin de la d-
cada de peso inferior en cero (0). La balanza
deber marcar 100. Si la escala marca menos
o ms que 100, se debe ajustar el control de
sensibilidad. Esto supone bloquear la balan-
za, levantar la cubierta superior y girar el tor-
nillo de sensibilidad: si la escala marca ms de
100, girar el tornillo en el sentido de las agujas
del reloj, es decir, hacia abajo. Si la escala mar-
ca menos de 100, es necesario desenroscar el
tornillo. Luego se repite el proceso hasta que
quede ajustada la balanza (ajustar en cero y la
sensibilidad).
4. Confirmar el freno del platillo. Este se en-
cuentra montado sobre un eje roscado que,
cuando est bloqueada la balanza, toca el
platillo para evitar que oscile. En caso de de-
sajuste se debe rotar suavemente el eje, has-
ta que la distancia entre el freno y el platillo
sea cero cuando la balanza est bloqueada.
Mantenimiento de la balanza mecnica
El mantenimiento de las balanzas mecnicas es-
t limitado a las siguientes rutinas:
Frecuencia: Diaria
1. Verificar el nivel.
2. Verificar la graduacin de cero.
3. Verificar el ajuste de sensibilidad.
4. Limpiar el platillo de pesaje.
Frecuencia: Anual
1. Calibrar la balanza y documentar el proceso.
2. Desensamblar y limpiar los componentes in-
ternos. Se debe seguir el proceso definido
por el fabricante, o contratarse una firma es-
pecializada para el efecto.
Balanzas electrnicas
Las balanzas electrnicas involucran tres ele-
mentos bsicos
3
:
1. El objeto a ser pesado que se coloca sobre el
platillo de pesaje ejerce una presin que est
distribuida de forma aleatoria sobre la super-
ficie del platillo. De all, mediante un meca-
nismo de transferencia palancas, apoyos,
guas, se concentra la carga del peso en
una fuerza simple [F] que puede ser medida.
[F = Pa] La integral de la presin sobre el
rea permite calcular la fuerza.
2. Un transductor de medida, conocido con el
nombre de celda de carga, produce una seal
de salida proporcional a la fuerza de carga, en
forma de cambios en el voltaje o de frecuencia.
3. Un circuito electrnico anlogo digital que fi-
nalmente presenta el resultado del pesaje en
forma digital.
Ilustracin 12: Elementos de las balanzas
electrnicas
3
Kupper, W., Balances and Weighing, Mettler Instrument Corp., Princeton-Hightstown, NJ.
47
Bal anzas 4
Las balanzas de laboratorio operan de acuerdo al
principio de compensacin de fuerza electromag-
ntica, aplicable a desplazamientos o torques don-
de se combina la exactitud de los componentes me-
cnicos con los sistemas automticos de lectura.
Funcionamiento. Las partes mviles (platillo
de pesaje, columna de soporte [a], bobina, indi-
cador de posicin y carga [G] objeto en proce-
so de pesaje) son mantenidas en equilibrio en
flotacin por una fuerza de compensacin [F]
que es igual al peso. La fuerza de compensacin
es generada por el flujo de una corriente elctri-
ca, a travs de una bobina ubicada en el espacio
de aire existente en un electroimn magneto
cilndrico. La fuerza F es calculada mediante la
ecuacin [F = I x l x B], donde: I = corriente
elctrica, l = longitud total del alambre de la
bobina y B = intensidad de flujo magntico
en el espacio de aire del electroimn.
Con cualquier cambio en la carga peso/masa,
el sistema mvil mecnico responde, despla-
zndose verticalmente una fraccin de distan-
cia, detectada por un fotosensor [e], que como
resultado enva una seal elctrica al servoam-
plificador [f] que cambia el flujo de corriente
elctrica que pasa por la bobina del magneto
[c], de forma que el sistema mvil retorne a la
posicin de equilibrio al ajustarse el flujo mag-
ntico en el electroimn. En consecuencia, el pe-
so de la masa G se puede medir de forma indi-
recta, a partir del flujo de corriente elctrica que
pasa por el circuito midiendo el voltaje [V], a tra-
vs de una resistencia de precisin [R]. [V = I x R].
A la fecha han sido desarrollados muchos siste-
mas que utilizan la electrnica para efectuar
mediciones muy exactas de masa y peso. El es-
quema que se presenta a continuacin explica la
forma en que funciona la balanza electrnica.
Sistema de procesamiento de la seal
El sistema de procesamiento de la seal est
compuesto por el circuito que transforma la
seal elctrica, emitida por el transductor de
medida en datos numricos que pueden ser
ledos en una pantalla. El proceso de la seal
comprende las siguientes funciones:
1. Tara. Se utiliza para colocar en cero el va-
lor de la lectura, con cualquier carga den-
tro del rango de capacidad de la balanza.
Se controla con un botn ubicado general-
mente en el frente de la balanza.
2. Control para ajuste del tiempo de integra-
cin. Los valores de peso son promediados
durante un perodo predefinido de tiem-
po. Dicha funcin es muy til cuando se re-
quiere efectuar operaciones de pesaje en
condiciones inestables. Por ejemplo: pre-
sencia de corrientes de aire o vibraciones.
3. Redondeo del resultado. En general las ba-
lanzas electrnicas procesan datos interna-
mente de mayor resolucin que aquellos
que se presentan en la pantalla. De esta
forma se logra centrar exactamente la ba-
lanza en el punto cero, cuando la balanza
es tarada. El valor interno neto se redon-
dea en la pantalla.
4. Detector de estabilidad. Se utiliza en ope-
raciones de pesaje secuencial y permite
comparar los resultados entre s. Cuando
el resultado se mantiene, es liberado y
puesto en pantalla, aspecto que se detecta
al encenderse el smbolo de la unidad de
peso seleccionada.
5. El procesamiento electrnico de las seales
permite disponer de otras funciones tales co-
mo conteo de partes, valor porcentual, valor
objetivo, entre otras. Dichos clculos son rea-
lizados por el microprocesador, de acuerdo
con las instrucciones que el operador ingresa
a travs del teclado de la balanza.
Clasificacin de balanzas
La Organizacin Internacional de Metrologa
Legal (OIML) ha clasificado las balanzas en
cuatro grupos:
Ilustracin 13: Principio fuerza de
compensacin
49
Bal anzas 4
De este esquema es necesari o destacar l o
si gui ente:
1. Las funciones incorporadas pueden llegar
a ser numerosas.
2. Se pueden seleccionar diversas unidades
de medida.
3. Es posible conocer la fecha y la hora en las
cuales se realizan las mediciones.
4. Se pueden imprimir y documentar los pro-
cedimientos realizados.
5. Es posible seleccionar el idioma.
Para instalar y utilizar satisfactoriamente una
balanza, se requiere lo siguiente:
1. Disponer de un ambiente que no presente
corrientes de aire, cambios bruscos de
temperatura y que est libre de polvo.
2. Tener un mesn perfectamente nivelado.
Es ideal una plataforma de alta inercia, ais-
lada de las estructuras ubicadas en la ve-
cindad, para reducir el efecto de las vibra-
ciones que emiten ciertos equipos como
centrfugas y refrigeradores. La misma de-
be tener un rea suficiente para instalar la
balanza y aquel equipo auxiliar con el que
se interacta en los procesos de pesaje. De
igual manera se debe prever el espacio re-
querido por los cables de interconexin,
corriente elctrica, conexin al sistema de
informacin, a la impresora, etc.
3. Evitar que en la vecindad se encuentren
instalados equipos que produzcan campos
magnticos elevados o vibraciones como
centrfugas, motores elctricos, compreso-
res y generadores.
4. Evitar que se encuentre bajo la influencia
directa de los sistemas de aire acondicio-
nado corrientes de aire y de la luz solar.
5. Disponer de una toma elctrica en buen esta-
do, dotada con polo a tierra provista de inte-
rruptores, que cumpla con la normatividad
elctrica vigente en el pas o el laboratorio.
Operacin de la balanza electrnica
La operacin de una balanza electrnica mo-
derna est claramente definida en el manual
de operacin que suministran los fabrican-
tes. En general se debe cumplir el siguiente
procedimiento:
1. Permitir que la balanza equilibre sus condi-
ciones con las del ambiente donde de en-
cuentra instalada.
2. Permitir que la balanza se precaliente antes
de iniciar las actividades. Normalmente basta
que la misma se encuentre conectada al siste-
ma de alimentacin elctrico. Algunos fabri-
cantes sugieren que se deje transcurrir un pe-
rodo de tiempo de al menos 20 minutos,
desde el momento en que se energiza hasta
el momento en que se inicia la utilizacin de
la misma. Las balanzas analticas Clase I re-
quieren al menos 2 horas antes de iniciar su
utilizacin.
3. Verificar que la balanza se encuentre calibra-
da. Las balanzas electrnicas por lo general
disponen de una calibracin hecha en fbrica,
almacenada en la memoria, la cual puede uti-
lizarse si no se dispone de masas de calibra-
cin. Si se requiere realizar la calibracin, se
debe disponer de masas calibradas para poder
efectuar el procedimiento que indique el fa-
bricante. Las masas calibradas utilizadas deben
cumplir o exceder las tolerancias ASTM. Como
informacin general se incluye a continuacin
una tabla que presenta las tolerancias acepta-
das para las masas ASTM Clase 1
5
.
5
Field Services Handbook for High Precision Scales, IES Corporation, Portland, Oregon, 2004.
Peso (gramos)
100
Lmite superior (g)
100,0003
Lmite inferior (g)
99,9998
200 200,0005 199,9995
300 300,0008 299,9993
500 500,0013 499,9988
1 000 1000,0025 999,9975
2 000 2000,0050 1999,9950
3 000 3000,0075 2999,9925
5 000 5000,0125 4999,9875
50
4. Seguir las instrucciones que indica el fabri-
cante en el manual de operacin.
Calibracin de las balanzas
El proceso de calibracin de balanzas debe
ser realizado por personal capacitado espec-
ficamente en esta actividad. Como aspecto
fundamental se destaca que la calibracin se de-
be realizar con base en los lineamientos de la
OIML o de otra entidad equivalente como puede
ser la Sociedad Americana para Ensayo de Mate-
riales (ASTM), instituciones que han desarrollado
metodologas para clasificar las pesas o masas pa-
trn, utilizadas en los procesos mencionados. A
continuacin, se incluye la tabla de clasificacin
de pesas de referencia que utiliza la OIML.
Cualquier proceso de calibracin debe reali-
zarse utilizando un peso patrn, y los resulta-
dos obtenidos se analizarn para determinar
si se encuentran dentro de las tolerancias
aceptables. Se deben seleccionar los pesos
patrn, dependiendo de la capacidad de la
balanza. La tabla que se muestra a continua-
cin complementa la anterior y es una gua
que ayuda a determinar el tipo de peso pa-
trn que debe utilizarse en los procesos de
calibracin de una balanza en funcin de su
capacidad.
Tabla de clasificacin de pesos de referencia OIML
6
E1
CLASE
Pesas de acero i noxi dabl e si n marcas o cma-
ra de aj ust e
DESCRI PCI N
0,5 ppm en 1 kg
TOLERANCI A
1/3 de l a
t ol eranci a
INCERTIDUM-
BRE PERMITIDA
2 aos
F1 Pesas de acero i noxi dabl e con bot n roscado
para prot eger cmara de aj ust e
5 ppm en 1 kg 1/5 de l a
t ol eranci a
1 ao
M1 Pesas de bronce que no se corroan o man-
chen o de f undi ci n de hi erro con t ermi nado
en pi nt ura de buena cal i dad
t ol eranci a
1 ao
M2 Pesas de bronce o f undi ci n de hi erro (pesas
de comerci o)
t ol eranci a
1 ao
E2 Pesas de acero i noxi dabl e si n marcas o cma-
ra de aj ust e
1,5 ppm en 1 kg 1/3 de l a
t ol eranci a
2 aos
F2 Pesas de bronce pl at eado 15 ppm en 1 kg 1/5 de l a
t ol eranci a
1 ao
FRECUENCIA DE
RECALIBRACIN
6
Guidelines for calibration in laboratories, Drinking Water Inspectorate By LGC (Teddington) Ltd., December 2000.
Tabla de pesos patrn a utilizar segn capacidad de la balanza
Hast a 200 g
CAPACI DAD
-
RESOLUCI N
200 g a 1 kg -
1 kg a 30 kg M2
30 kg a 100 kg M2
Ms de 100 kg M2
-
-
M2
M1
M1/F2
-
M1
M1
F2
F1
M1
M1
F2
F1
E2
M1
F2
E2
E2
-
F2
F1/E2
E2
-
-
F1
E2
E2
-
-
E2
E2
-
-
-
100 g 10 g 1 g 100 mg 10 mg 1 mg 0,1 mg 0,01 mg
51
Bal anzas 4
La balanza se caracteriza por ser un instru-
mento de alta precisin. Por tal motivo las ru-
tinas de mantenimiento a cargo del operador
son mnimas y se encuentran limitadas a las
siguientes:
Actividades diarias
1. Limpiar el platillo de pesaje, para que este
se encuentre libre de polvo o suciedad. La
limpieza se efecta con una pieza de tela
limpia que puede estar humedecida con
agua destilada. Si es necesario retirar algu-
na mancha, se puede aplicar un detergen-
te suave. Tambin se puede usar un pincel
de pelo suave para remover las partculas
o el polvo que se hubiesen depositado so-
bre el platillo de pesaje.
2. Limpiar externa e internamente la cmara
de pesaje. Verificar que los vidrios estn li-
bres de polvo.
3. Verificar que los mecanismos de ajuste de
la puerta frontal de la cmara de pesaje
funcionen adecuadamente.
Muy importante: Nunca lubricar una balanza
a menos que el fabricante lo indique expresa-
mente. Cualquier sustancia que interfiera con
los mecanismos de la balanza retardan su res-
puesta o alteran definitivamente la medida.
Tabla de solucin de problemas (balanza electrnica)
La bal anza no enci ende. Cabl e de i nt erconexi n desconect ado o
mal aj ust ado en l a bal anza.
Revi sar conexi n. Aj ust ar cabl e conect or si es
del caso.
La t oma el ct ri ca desenergi zada. Veri f i car al i ment aci n el ct ri ca.
La bal anza no muest ra en pant al l a l as
uni dades deseadas de medi da.
Uni dades mal sel ecci onadas. Revisar el procedimiento definido por el fabrican-
te para seleccionar la unidad de medida requerida.
No se puede cambi ar l a conf i guraci n
del men de l a bal anza.
El men puede est ar bl oqueado. Veri f i car si el i nt errupt or de bl oqueo est act i -
vado. Desact i var si es del caso.
La l ect ura de l a bal anza es i nest abl e. Vi braci n en l a superf i ci e del mesn. Colocar la balanza sobre una superficie est able.
Puert a f ront al de l a bal anza abi ert a. Cerrar l a puert a f ront al para ef ect uar l a
medi ci n.
La bal anza es i ncapaz de guardar l as
sel ecci ones o cambi os.
No se ha opri mi do l a t ecl a Fi n, para t er-
mi nar el proceso.
Veri f i car l a f orma en que se real i zan l os cam-
bi os o sel ecci ones, de acuerdo con el manual
del f abri cant e. Repet i r l a sel ecci n o cambi o.
Apagar, esperar un moment o y encender
nuevament e.
La uni dad requeri da no habi l i t ada. Habi l i t ar l a uni dad de medi da de acuerdo al
procedi mi ent o def i ni do por el f abri cant e.
La l ect ura del peso es i ncorrect a. La bal anza no f ue puest a en cero ant es
de l a l ect ura.
Col ocar en cero l a bal anza; repet i r l a medi da.
La bal anza mal cal i brada. Cal i brar de acuerdo con el procedi mi ent o re-
comendado por el f abri cant e.
La bal anza desni vel ada. Ni vel ar l a bal anza.
Nota: Por lo general, el fabricante o el re-
presentante en instalaciones especializadas
realiza el mantenimiento de las balanzas,
siguiendo procedimientos que varan de-
pendiendo del tipo y modelo de balanza.
52
DEFINICIONES BSICAS
ASTM. Sociedad Americana de Ensayo de
Materiales (American Society for Testing and
Materials).
Calibracin. Determinacin del valor correc-
to de la lectura de un instrumento, por medi-
cin o comparacin de la misma contra un es-
tndar o patrn. Una balanza se calibra me-
diante la utilizacin de pesas patrn.
Carga lateral. Habilidad de una balanza pa-
ra leer de forma consistente el valor de las
masas, sin importar la posicin de las mismas
sobre el platillo de pesaje. En ingls se deno-
mina cornerload.
Error de carga lateral. Desviacin que se pre-
senta en los resultados cuando se pesa un ob-
jeto, colocndolo en diferentes posiciones del
platillo de pesaje. Por ejemplo: entre el centro
del platillo y luego en uno de sus bordes.
Error de linealidad. Diferencia que se pre-
senta cuando la balanza se carga de manera
sucesiva, incrementando la cantidad de peso
en igual magnitud hasta lograr su mxima ca-
pacidad, para luego descargarla siguiendo un
proceso anlogo al mencionado. Las diferen-
cias que se presentan entre las lecturas obte-
nidas y los valores aritmticos, correspon-
dientes a las pesas utilizadas, se interpretan
como la no-linealidad.
La i nt erf ase RS232 no f unci ona. Cabl e de i nt erconexi n mal aj ust ado. Verificar la conexin del cable de int erconexin.
La pant al l a present a l ect uras i ncompl e-
t as o se encuent ra bl oqueada.
Mi croprocesador bl oqueado. Apagar la balanza y un moment o despus en-
cenderla. Si la sit uacin persist e, solicit ar servicio
t cnico al represent ant e.
La pant al l a present a un cdi go de
error.
Verificar los cdigos de error en el manual de la
balanza.
Tabla de errores funcionales y sus posibles causas
Lect uras no reproduci bl es (hi st resi s).
ERROR FUNCI ONAL
Suci edad en l a cel da de medi ci n.
La cel da de medi ci n mal ensambl ada.
Lect ura di gi t al avanza cont i nuament e en una di recci n. Si st ema el ect rni co def ect uoso.
Cambi a l a t emperat ura del ambi ent e.
La bal anza no puede cal i brarse. Bat era de cal i braci n def ect uosa.
Si st ema el ect rni co def ect uoso.
Cel da de medi ci n ensambl ada de f orma i ncorrect a.
La pant al l a di gi t al en bl anco o muest ra si gnos si n sent i do. Si st ema el ect rni co def ect uoso.
La pant al l a i ndi ca condi ci n de sobrecarga o carga negat i va
si n que exi st a carga apl i cada.
Cel da de medi ci n daada por sobrecarga.
Cel da de medi ci n ensambl ada de f orma errnea.
Lect uras no l i neal es. Si st ema el ect rni co def ect uoso.
Si st ema mecni co en mal as condi ci ones.
La l ect ura di gi t al avanza y ret rocede cont i nuament e. Cel da de medi ci n suci a.
Si st ema el ect rni co def ect uoso.
Probl emas ambi ent al es como corri ent es de ai re, el ect ri ci dad
est t i ca o vi braci ones.
CAUSA PROBABLE
53
Bal anzas 4
Error de sensibilidad. Desviacin constante
a travs del rango de pesaje o capacidad de
una balanza.
Exactitud. Suma de todos los errores de la
balanza. Se le denomina banda tota de error.
Histresis. Diferencia que se presenta en los
resultados cuando se aumenta o disminuye la
carga en la balanza.
Linealidad. Concepto que aplica a la capacidad
o habilidad de una balanza para lograr lecturas
exactas de peso de masas menores a la de su ca-
pacidad total. Si se dibujara una grfica entre
peso, comparado con la indicacin de peso en
una balanza perfectamente lineal, el resultado
final sera una lnea recta. Para determinar el
error de linealidad de una balanza, se deben uti-
lizar masas certificadas. El procedimiento que
permite calcular las diferencias de linealidad
consiste en efectuar lecturas con masas certifica-
das la misma masa con y sin precarga. La dife-
rencia entre las dos lecturas permite calcular el
error de linealidad.
Masa. Propiedad de la materia que se manifies-
ta a travs de fenmenos tales como la atrac-
cin de los cuerpos, mediante la fuerza de gra-
vedad o mediante la inercia resistencia a cam-
biar el estado de reposo o movimiento bajo. La
unidad fundamental para expresar el concepto
de masa es el kilogramo [kg].
Masas certificadas. Masas que cumplen con
las tolerancias definidas por los entes de certifi-
cacin. Los estndares ASTM clases 1 a 4 son de
amplia utilizacin y son referencia obligada pa-
ra realizar las rutinas de calibracin.
OIML. Oficina Internacional de Metrologa
Legal.
Sensibilidad. Masa ms pequea que puede
ser detectada por la balanza. Tambin se en-
tiende como la masa ms pequea que la ba-
lanza medir correctamente.
Trazabilidad. Posibilidad de relacionar el
grupo de medidas de un instrumento con un
estndar definido.
54
Bibliografa
Explorer Pro. Instruction Manual, Ohaus Corporation, Part N 80250955, 2003.
(www.ohaus.com)
Field Services Handbook for High Precision Scales, IES Corporation, Portland, Oregon, 2004.
Guidelines for calibration in laboratories, Drinking Water Inspectorate By LGC (Teddington)
Ltd., December 2000.
(http://www.dwi.gov.uk/regs/crypto/..%5Ccrypto%5Cpdf%5CCalibration%20guidelines.pdf)
Kupper, W., Balances and Weighing, Mettler Instrument Corp., Princeton-Hightstown, NJ.
Mantenimiento y reparacin del equipo de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Organizacin Mundial de la Salud, 1996.
Manual of Basic Techniques for a Health Laboratory, Geneve, World Health Organization,
2nd. Edition, 2003.
Voyager Pro
, Instruction Manual, Ohaus Corporation, Part N 80251000, 2003.

(www.ohaus.com)
55
BAO DE MARA
El bao de Mara es un equipo que se utiliza
en el laboratorio para realizar pruebas sero-
l gi cas y procedi mi entos de i ncubaci n,
aglutinacin, inactivacin, biomdicos, far-
macuticos y hasta industriales. Por lo gene-
ral, se utilizan con agua, pero tambin per-
miten trabajar con aceite. Los rangos de
temperatura en los cuales normalmente son
utilizados estn entre la temperatura am-
biente y los 60 C. Tambin se pueden selec-
cionar temperaturas de 100 C, utilizando
una tapa de caractersticas especiales. Los
baos de Mara son fabricados con cmaras
cuya capacidad puede seleccionarse entre
los 2 y los 30 litros.
ESQUEMA BAO DE MARA
Se presenta a continuacin un esquema bsico
de un bao de Mara. En el mismo es posible
diferenciar el control electrnico, la pantalla,
la cubierta que es un accesorio opcional y el
tanque. No se muestran algunos componentes
que pueden instalarse en estos equipos como
el termmetro y la unidad de agitacin, para
mantener uniforme la temperatura.
CAPTULO 5
Bao de M ara
Cdigo (s) ECRI
15-108
Baos de Mara
16-772 Baos de Mara, con agi t ador
Ilustracin 16: Bao de Mara
56
Los baos de Mara estn constituidos por un
tanque fabricado en material inoxidable, el
cual tiene montado en la parte inferior del
mismo un conjunto de resistencias elctricas,
mediante las cuales se transfiere calor a un
medio como agua o aceite, que se mantiene
a una temperatura preseleccionada a travs
de un dispositivo de control termo par, ter-
mostato, termistor o similar que permite se-
leccionar la temperatura requerida por los di-
versos tipos de anlisis o pruebas. Dispone de
un cuerpo externo donde se encuentran ubi-
cados los controles mencionados, el cual se
fabrica en acero y se recubre generalmente
con pintura electrosttica de alta adherencia
y resistencia a las condiciones ambientales
propias de un laboratorio. Las resistencias
pueden ser las siguientes:
De inmersin. Se caracterizan por estar
instaladas dentro de un tubo sellado. Es-
tn ubicadas en la parte inferior del reci-
piente y se encuentran en contacto directo
con el medio a calentar.
Externas. Se encuentran ubicadas en la
parte inferior pero son externas al tanque;
estn protegidas por un material aislante
que evita prdidas de calor. Este tipo de
resistencias transfiere el calor al fondo del
tanque por medio de conduccin trmica.
Dependiendo del tipo de bao, algunos dis-
ponen de una serie de accesorios como siste-
mas de agitacin, que imprimen al medio ca-
l efactor un movi mi ento cui dadosamente
controlado para mantener la temperatura lo
ms uniforme posible. Se muestra a continua-
cin una tabla que describe los principales ti-
pos de baos de Mara.
Ilustracin 17: Resistencias de inmersin y externa
Tipos de baos de Mara
Baj a t emperat ura
CLASE
Temperat ura ambi ent e hast a 60 C
Isot rmi cos Temperat ura ambi ent e hast a 100 C con accesori os y/o si st emas de agi t aci n (con agua)
Al t a t emperat ura Temperat ura ambi ent e hast a 275 C. Cuando se requi ere l ograr t emperat uras superi ores a
l os 100 C, es i ndi spensabl e ut i l i zar f l ui dos di f erent es al agua, debi do a que el punt o de
ebul l i ci n de l a mi sma a condi ci ones normal es es de 100 C.
Est e t i po de baos ut i l i za general ment e acei t es cuyos punt os de ebul l i ci n son mucho ms
el evados.
Temperat ura ambi ent e hast a 100 C con cubi ert a
RANGO DE TEMPERATURA
58
tiene componentes elementos resistivos
que podran causar quemaduras si se to-
can desprevenidamente, incluso despus
de transcurrido un perodo de tiempo con-
siderable despus de apagar el equipo.
5. Trabajar las sustancias que generan humos
colocando el bao de Mara dentro de una
cabina extractora de humos o en un lugar
muy bien ventilado.
6. Recordar que los lquidos que se trabajan
dentro del recipiente del bao de Mara pue-
den producir quemaduras si inadvertidamen-
te se coloca la mano dentro del mismo.
7. Tener en cuenta que el bao de Mara es-
t diseado para ser utilizado con un lqui-
do en el interior del recipiente. Si el mismo
se seca, la temperatura del recipiente pue-
de llegar a ser muy alta. Utilizar siempre la
bandeja difusora para colocar los recipien-
tes dentro del tanque del bao de Mara.
Esta ha sido diseada para distribuir la
temperatura de forma uniforme.
8. Evitar utilizar el bao de Mara si alguno
de los controles falla: el de temperatura o
el de lmite.
Uso del bao de Mara
Antes de usar el bao de Mara, se debe veri-
ficar que el mismo se encuentra limpio y que
se encuentran instalados los accesorios que
van a utilizarse. Los pasos que normalmente
se siguen son estos:
1. Llenar el bao de Mara con el fluido que ha-
br de utilizarse para mantener uniforme la
temperatura agua o aceite. Verificar que,
colocados los recipientes que van a calentar-
se, el nivel del mismo se encuentre entre 4 y
5 cm del borde superior del tanque.
2. Instalar los instrumentos de control que,
como termmetros y agitadores, puedan
ser requeridos. Utilizar los aditamentos de
montaje que, para el efecto, suministran
los fabricantes. Verificar la posicin del
bulbo del termmetro o de la sonda tr-
mica, para asegurar que las lecturas sean
correctas.
3. Si se utiliza agua como fluido de calenta-
miento, verificar que la misma sea limpia. Al-
gunos fabricantes recomiendan aadir pro-
ductos que eviten la formacin de algas.
4. Colocar el interruptor principal N 1
1
en la
posicin de encendido. Algunos fabrican-
tes han incorporado controles con micro-
procesadores que inician rutinas de auto-
verificacin, una vez que se acciona el in-
terruptor de encendido.
5. Seleccionar la temperatura de operacin.
Se utilizan el botn de Men N 2 y los bo-
tones para ajuste de parmetros.
6. Seleccionar la temperatura de corte en
aquellos baos que disponen de este con-
trol. Este es un control de seguridad que
corta el suministro elctrico, si se sobrepa-
sa la temperatura seleccionada. Esta se se-
lecciona tambin a travs del botn de
Men y se controla con los botones de
ajuste de parmetros.
7. Evitar utilizar el bao de Mara con sustan-
cias como las que se indican a continuacin
2
:
a) Blanqueadores.
b) Lquidos con alto contenido de cloro.
c) Soluciones salinas dbiles como cloruro
de sodio, cloruro de calcio o compuestos
de cromo.
d) Concentraciones fuertes de cualquier
cido.
e) Concentraciones fuertes de cualquier sal.
f) Concentraciones dbiles de cidos hidro-
clrico, hidrobrmico, hidroidico, sulfri-
co o crmico.
g) Agua desi oni zada, pues causa corro-
si n y tambi n perforaci ones en el acero
i noxi dabl e.
1
Los nmeros que identifican los controles corresponden exactamente a los mostrados en el esquema de los baos de Mara.
2
Fisher Isotemp
economy water baths, Instructions: Fisher Scientific, Part N 103412, Rev. E., 2004.
59
Bao de Mara 5
Mantenimiento
Los baos de Mara son equipos que no son
muy exigentes desde el punto de vista de
mantenimiento. Las rutinas recomendadas
estn principalmente enfocadas a la limpieza
de los componentes externos. A continua-
cin, se sealan las rutinas ms comunes.
Limpieza
Frecuencia: Mensual
1. Apagar y desconectar el equipo. Esperar a
que el mismo se enfre para evitar riesgos
de quemaduras accidentales.
2. Extraer el fluido utilizado para el calenta-
miento. Si es agua, puede verterse a un si-
fn. Si es aceite, recolectar en un recipien-
te con capacidad volumen adecuada.
3. Retirar la rejilla de difusin trmica que se
encuentra ubicada en el fondo del tanque.
4. Limpiar el interior del tanque con un de-
tergente suave. Si se presentan indicios de
corrosin, existen en el mercado sustancias
para limpiar el acero inoxidable. Frotar
suavemente con esponjas sintticas o equi-
valentes. Evitar la utilizacin de lana de
acero para remover manchas de xido, de-
bido a que las mismas dejan partculas de
acero que podran acelerar la corrosin.
5. Evitar doblar o golpear el tubo capilar del
control de temperatura que generalmen-
te se encuentra ubicado en el fondo del
tanque.
6. Limpiar con agua limpia el exterior y el in-
terior del bao de Mara.
Lubricacin
Frecuencia: Diaria
Esta actividad es para baos de Mara que
disponen de unidad o sistema de agitacin.
Lubricar el eje del motor elctrico del agita-
dor. Colocar una gota de aceite mineral en el
eje, para que se mantenga una buena condi-
cin de lubricacin entre los rodamientos del
motor y el eje del mismo.
Advertencia: Antes de efectuar cualquier
actividad de mantenimiento, desconectar
el equipo de la toma de alimentacin
elctrica.
No hay energa el ct ri ca. Bao de Mara desconect ado. Conect ar bao de mara.
Int errupt or def ect uoso. Cambi ar i nt errupt or.
Fusi bl e def ect uoso. Sust i t ui r f usi bl e.
La t emperat ura es superi or a l a
sel ecci onada.
Cont rol de t emperat ura def ect uoso. Cambi ar cont rol de t emperat ura.
Veri f i car sel ecci n de parmet ros.
El bao de Mara no cal i ent a. Cont rol de t emperat ura desgraduado. Graduar cont rol de t emperat ura.
Resi st enci a(s) def ect uosa(s). Cambi ar resi st enci a(s).
Cont rol l mi t e desgraduado. Graduar cont rol l mi t e.
Las muest ras se cal i ent an l ent ament e. Tanque vaco o con muy poco f l ui do. Ll enar t anque hast a el ni vel recomendado.
La t emperat ura aument a muy
l ent ament e.
Resi st enci a(s) def ect uosa(s). Cambi ar resi st enci a(s).
Cont rol de t emperat ura def ect uoso. Sust i t ui r cont rol de t emperat ura.
60
DEFINICIONES BSICAS
Agitador. Dispositivo diseado para aadir
energa cintica a un fluido contenido en un
recipiente, con el fin de mantener homog-
neas sus propiedades; por ejemplo: tempera-
tura, color, densidad.
Bandeja dif usora. Dispositivo que se coloca
en el fondo de los baos de Mara, con el fin
de soportar los recipientes que se colocan
dentro del tanque; adems, permite que las
corrientes de conveccin trmica, que se ge-
neran en el fluido que contiene el tanque,
circulen de arriba - abajo - arriba, mantenien-
do la temperatura de forma homognea en
los niveles seleccionados por el operador. Por
lo general, la bandeja difusora es de acero
inoxidable.
Fusible. Dispositivo de seguridad que prote-
ge los circuitos elctricos de los excesos de co-
rriente. Se fabrican con materiales cuyas di-
mensiones y propiedades los habilitan para
trabajar bien dentro de unas condiciones pre-
definidas. Si por alguna razn se extralimitan
los parmetros de diseo, se funde el mate-
rial y se interrumpe el paso de corriente.
Pintura electrosttica. Procedimiento me-
diante el cual se genera una gran diferencia
de potencial (80-150 kw) entre la pieza que
se quiere pintar y la unidad de atomizacin
que suministra la pintura, en forma de part-
culas finamente pulverizadas. Las partculas
de pintura se cargan elctricamente y se de-
positan por atraccin de las cargas elctricas,
sobre la pieza que quiere pintar, cubrindola
completamente. Se introduce entonces la
pieza cubierta de partculas de pintura en un
horno elctrico que funde las partculas de
pintura, haciendo que las mismas se adhieran
con gran fortaleza sobre la pieza.
Resistencia (elctrica). Propiedad que tie-
nen las diferentes sustancias o materiales, en
virtud de la cual se impide en mayor o menor
grado el paso de la corriente elctrica. En los
textos se identifica la resistencia con la letra
[R]. Para un cuerpo de seccin uniforme, por
ejemplo: un alambre, la resistencia [R] es una
magnitud directamente proporcional a la
longitud [l] e inversamente proporcional al
rea seccional [a]. La resistencia se represen-
ta mediante la siguiente ecuacin:
donde:
k = constante que depende de las unidades
empleadas
l = longitud del conductor
a = rea seccional del conductor
La unidad de resistencia es el ohmio y se re-
presenta normalmente por la letra griega .
Resistencia de inmersin. Resistencia elc-
trica que se encuentra instalada dentro de un
tubo sellado. Se utilizan generalmente para
calentar fluidos como agua o aceite.
l
R = k x
a
Bibliografa
Fisher Isotemp
economy water baths, Instructions: Fisher Scientific, Part N 103412, Rev. E.,
2004. (http://www.fisherlabequipment.com/productinfo.htm)
Fisher Isotemp
water baths, Instructions: Fisher Scientific, Part N 102370, Rev. K., 2004.
(http://www.fisherlabequipment.com/productinfo.htm)
Venegas, J., Texto de fsica, Fono-foto y electrologa, Cali, Colombia, Editorial Norma.
61
1
HEPA: High Efficiency Particulate Air
CAPTULO 6
Cabina de seguridad biolgica
Cdigo (s) ECRI
15-148
Campanas mi crobi ol gi cas
CABINA DE SEGURIDAD BIOLGICA
Es un equipo diseado para controlar los ae-
rosoles y micropartculas asociados al manejo
del material biolgico, potencialmente txi-
cos o infecciosos, que se generan en los labo-
ratorios como resultado de actividades como
la agitacin y centrifugacin, el uso y manejo
de pipetas, la apertura de recipientes con
presiones internas diferentes a la atmosfri-
ca, utilizando condiciones apropiadas de ven-
tilacin. Las cabinas se han diseado para
proteger al usuario, al ambiente y la muestra
con la que se trabaja. Se las conoce tambin
como Cabinas de flujo laminar y/o gabinetes
de bioseguridad.
ILUSTRACIN CABINA DE SEGURIDAD
BIOLGICA
PROPSITOS DEL EQUIPO
La cabina de seguridad biolgica se utiliza
con estos fines:
1. Proteger al trabajador de los riesgos aso-
ciados al manejo de material biolgico po-
tencialmente infeccioso.
2. Proteger la muestra que se est analizan-
do para que no se contamine.
3. Proteger el medio ambiente.
Las cabinas se utilizan para el trabajo rutina-
rio relacionado con patgenos parsitos,
bacterias, virus, hongos, el cultivo de clulas
y, bajo condiciones muy precisas, el manejo
de los agentes txicos.
La cabina de seguridad biolgica es una cmara
construida generalmente en acero, que dispone
de una ventana frontal en vidrio, de altura va-
riable que posee un sistema de ventilacin con-
formado por un motor elctrico, un ventilador y
un conjunto de ductos que, al estar funcionan-
do, generan una condicin de presin negativa
en el interior de la cabina comparada con la pre-
sin del ambiente en el laboratorio, condicin
que produce que el aire fluya dentro de la cabi-
na a travs de la abertura frontal, generando
una cortina de aire que protege al operador. In-
ternamente, el aire es conducido a travs de una
serie de rejillas y ductos, para finalmente ser tra-
tado mediante filtros HEPA
1
. Dependiendo del
diseo de la cabina, el aire es reciclado dentro
del laboratorio o extrado y renovado en diver-
sas proporciones. El aire que en las cabinas Cla-
se II fluye desde el filtro hacia la superficie de
trabajo es de tipo laminar. A continuacin, se
presenta un resumen del tipo de cabinas exis-
tentes y sus principales caractersticas.
Ilustracin 19: Cabina de seguridad biolgica
62
Resumen cabinas de seguridad biolgica
Cl ase I
Ti po A
TI PO DE
CABI NA
I LUSTRACI N
1. Prot ecci n of reci da: al operador y al
ambi ent e.
2. Vel oci dad del ai re al i ngresar a l a cabi -
na: 38 cm/s.
3. Adecuada para t rabaj ar con agent es
cl asi f i cados con ni vel de bi oseguri dad
2
1, 2 3.
4. Si st ema de f i l t raci n: HEPA, col ocado
en l a ext racci n. Puede est ar o no aco-
pl ado a un si st ema de ext racci n co-
nect ado al ext eri or.
5. Desvent aj a: No prot ege el product o
con el cual se t rabaj a.
Cl ase II
Ti po B1
1. Prot eccin ofrecida: al operador, al pro-
duct o y al ambient e.
2. Velocidad del aire al ingresar a la cabina:
50,8 cm/s.
3. Adecuada para t rabajar con agent es cla-
sificados con nivel de bioseguridad 1, 2
3.
4. Sist ema de filt racin: dos filt ros HEPA. Ex-
t rae mediant e un duct o el aire pot encial-
ment e cont aminado (70 %) y recicla den-
t ro de la cabina despus de filt rarlo el ai-
re t omado del ext erior, a t ravs de la reji-
lla front al (30 %).
5. Todos los duct os biolgicament e cont a-
minados presurizados negat ivament e.
6. Permit e t rabajar cant idades mnimas de
qumicos t xicos y radionucleidos.
Cl ase II
Ti po A
1. Prot ecci n of reci da: al operador, al pro-
duct o y al ambi ent e.
na: 38 cm/s.
1, 2 3.
4. Si st ema de f i l t raci n: dos f i l t ros HEPA,
uno col ocado sobre l a superf i ci e de t ra-
baj o; el segundo en el si st ema de ex-
t racci n de l a cabi na, el cual puede es-
t ar o no acopl ado a un si st ema de ex-
t racci n conect ado al ext eri or. Si se
acopl an al ext eri or, ut i l i za un acopl e t i -
po campana.
5. Reci cl an aproxi madament e el 70 % del
vol umen de ai re y renuevan un 30 %.
CARACTER STI CAS
2
Ver clasificacin de niveles de bioseguridad de los agentes en el subttulo Seguridad biolgica, ubicado a continuacin
del resumen de las cabinas.
63
Cabi na de seguri dad bi ol gi ca 6
Cl ase II
Ti po B2
TI PO DE
CABI NA
I LUSTRACI N
na: 50,8 cm/s.
1, 2 3.
4. Si st ema de f i l t raci n: dos f i l t ros HEPA.
Se l e conoce como cabi na de ext rac-
ci n t ot al . No t i enen ni ngn t i po de
reci rcul aci n.
5. Todos los duct os biolgicament e cont a-
minados presurizados negat ivament e.
6. Di spone de duct o de ext racci n; per-
mi t e t rabaj ar con qumi cos t xi cos y
radi onucl ei dos.
Cl ase III 1. Prot ecci n of reci da: al operador, al pro-
2. Si st ema de f i l t raci n: dos f i l t ros HEPA
en seri e en l a ext racci n y un f i l t ro HE-
PA en l a admi si n.
cl asi f i cados con ni vel de bi oseguri dad 4.
4. Cabi na t ot al ment e sel l ada. El i ngreso y
ext racci n de el ement os se ef ect an a
t ravs de una caj a de paso de dobl e
puert a. La mani pul aci n de l os mat e-
ri al es l os real i za el i nvest i gador, a t ra-
vs de guant es sel l ados en el f rent e de
l a cabi na.
Cl ase II
Ti po B3 o A/B3
na: 50,8 cm/s.
1, 2 3.
4. Si st ema de f i l t raci n: dos f i l t ros HEPA.
5. Todos l os duct os bi ol gi cament e cont a-
mi nados presuri zados negat i vament e.
6. Se l e conoce como cabi na combi nada.
Puede conect arse medi ant e un duct o y
se l a denomi na como de Ti po B3. Si ca-
rece del mi smo, es una Ti po A. Reci cl a el
70 % del vol umen dent ro de l a cabi na.
CARACTER STI CAS
64
SEGURIDAD BIOLGICA
3
Los microorganismos, con base en el anlisis
de factores como la patogenicidad, la dosis
infecciosa, los modos de transmisin, la varie-
dad de huspedes que pueden utilizar, la dis-
ponibilidad de medidas preventivas y trata-
mientos efectivos, han sido clasificados en
cuatro categoras:
1. Nivel de riesgo 1. Lo conforman agentes
biolgicos que es muy improbable que cau-
sen enfermedades en humanos sanos o ani-
males. (Bajo riesgo individual y comunitario).
2. Nivel de riesgo 2. Lo conforman patge-
nos que pueden causar enfermedades a
los humanos o animales; pero en circuns-
tancias normales es improbable que sean
peligrosos para trabajadores de los labora-
torios, la comunidad, los animales doms-
ticos o el ambiente. Las exposiciones en el
laboratorio raramente producen enferme-
dades graves; hay disponibles medidas
preventivas y tratamientos efectivos y el
riesgo de diseminacin es limitado. (Ries-
go individual moderado, riesgo comunita-
rio limitado).
3. Nivel de riesgo 3. Son patgenos que
usualmente causan enfermedades graves a
los seres humanos y a los animales, y pro-
ducen un impacto econmico serio; sin
embargo, no es comn su contagio por
contacto casual de un individuo a otro. Las
enfermedades que producen son tratables
por agentes antimicrobiales o antiparasi-
tarios. (Alto riesgo individual, bajo riesgo
comunitario).
4. Nivel de riesgo 4. Son patgenos que
usualmente producen enfermedades muy
graves para los seres humanos o los anima-
les, las cuales a menudo no disponen de
tratamientos y se contagian fcilmente de
un individuo a otro o de animal a humano
o viceversa, directa o indirectamente o por
contacto casual. (Alto riesgo individual, al-
to riesgo comunitario).
Entre los servicios que se requieren para que
una cabina funcione adecuadamente, se en-
cuentran los siguientes:
1. Un rea dentro del laboratorio protegida
de las corrientes de aire que provienen de
ventanas o sistemas de aire acondiciona-
do. Igualmente la cabina debe ubicarse
alejada de las zonas de circulacin del la-
boratorio, para evitar que las corrientes de
aire producidas por el paso de personas
pudiera llegar a afectar la cortina de aire
dentro de la cabina. Tambin se debe veri-
ficar que la cabina no se instale al lado de
otro tipo de cabinas, como las utilizadas
para extraer vapores qumicos.
2. Una acometida elctrica, dotada de los
respectivos elementos de control y seguri-
dad; una toma elctrica con polo a tierra.
3. Una mesa firme y bien nivelada, diseada
para soportar el peso de la cabina y permi-
tir al operador trabajar con comodidad.
Debe disponer de espacio libre para colo-
car los pies y su altura debe ser adecuada.
4. El piso del lugar debe ser plano y estar
bien nivelado.
5. Deben respetarse las reas libres que reco-
mienda el fabricante alrededor de la cabi-
na. Asimismo debe verificarse que la altu-
ra piso - techo del sitio donde se instala
sea la recomendada, para que pueda fun-
cionar sin inconvenientes.
6. Las cabinas tipo B requieren necesaria-
mente un ducto de extraccin, el cual de-
be estar dotado de los dispositivos de con-
trol requeridos: vlvulas reguladoras que
permitan aislar o regular el flujo de aire.
7. Las acometidas de gases deben encontrar-
se en la vecindad inmediata de la cabina, a
fin de facilitar la conexin a las vlvulas de
servicio.
3
The Laboratory Biosafety Guidelines, 3rd. Edition-Draft, Health Canada, 2001.
65
8. La cabina debe certificarse anualmente
para verificar el cumplimiento de los re-
quisitos establecidos en la Norma NSF 49.
USO DE LA CABINA
La correcta utilizacin de la cabina de segu-
ridad biolgica se logra al cumplir las si-
guientes indicaciones:
1. Planificar con anticipacin el trabajo que
se realizar en la cabina de seguridad bio-
lgica. Determinar qu procedimientos y
equipos sern utilizados. Coordinar con
los dems profesionales del laboratorio el
tiempo de utilizacin de la cabina, a fin
de evitar interrupciones o trfico indesea-
do mientras la misma est en uso.
2. Encender la cabina. Apagar la lmpara UV
si la misma se encuentra encendida. En-
cender la lmpara de luz fluorescente y el
ventilador de la cabina. Verificar que las
rejillas, delantera y trasera, se encuentran
libres de obstrucciones. Preparar el rea
de trabajo. Permitir que la cabina funcio-
ne libremente por al menos 15 minutos.
3. Lavar las manos y antebrazos con jabn
germicida. Vestir los elementos de protec-
cin personal: bata/gabacha de manga lar-
ga con puos ajustados, anteojos protec-
tores y mscara, si la situacin lo amerita.
Preparar las superficies interiores de la ca-
bina aplicando etanol al 70 % o un desin-
fectante adecuado. Permitir que estas se
sequen por la accin del flujo del aire.
4. Cargar e instalar nicamente los materia-
les y equipos requeridos por la prueba o
ensayo. Diferenciar las reas limpias de las
reas sucias. Colocar el material de forma
que no se crucen los materiales sucios con
los materiales limpios, ni se impida la libre
circulacin del aire interno a travs de las
rejillas delanteras o traseras. Colocar una
bolsa de bioseguridad para almacenar los
materiales desechados, un recipiente con
desinfectante para las pipetas y un reci-
piente para guardar los elementos puntia-
gudos. Evitar colocar objetos muy grandes,
cerca uno de otro, dentro de la cabina.
Al finalizar la colocacin de los elementos,
se debe permitir que el flujo de aire barra
la cabina durante aproximadamente 3 5
minutos, para eliminar cualquier partcula
que se hubiera producido o liberado du-
rante la carga de materiales y equipos.
5. Iniciar las actividades. Introducir lentamen-
te las manos en el rea de trabajo. Realizar
los procesos y tareas de forma metdica y
cuidadosa; de las reas limpias a las reas
potencialmente contaminadas. Mantener
los elementos al menos 10 cm detrs de la
rejilla frontal; procurar realizar las activida-
des que pudieran resultar ms contami-
nantes o riesgosas hacia el fondo del rea
de trabajo de la cabina. Evitar el uso de lla-
mas abiertas como las de los mecheros,
pues rompen el patrn de flujo laminar y
se corre el riesgo de quemar el filtro. Evitar
retirar las manos del rea de trabajo hasta
que todos los procedimientos programa-
dos hayan sido realizados y el material po-
tencialmente peligroso haya sido dispuesto
en la bolsa de bioseguridad o en los reci-
pientes dispuestos para las pipetas y los ob-
jetos cortopunzantes.
6. Limpiar la cabina, permitiendo que el aire
fluya libremente por 3 5 minutos al ter-
minar todos los procedimientos.
7. Descontami nar l a superfi ci e de todos
aquellos materiales y equipos que hayan
estado en contacto con el material biol-
gicamente contaminado. Aplicar etanol al
70 % o un desinfectante adecuado y per-
mitir que el mismo se seque. Levantar los
equipos y materiales y desinfectar el rea
ubicada debajo de los mismos. Cubrir los
recipientes abiertos antes de ser removi-
dos del rea de trabajo. Remover los ma-
teriales segn corresponda (a la incubado-
ra, al autoclave).
8. Descartar los guantes y dems elementos
de proteccin personal. Disponerlos de la
forma establecida en el laboratorio. Lavar
las manos con agua y jabn abundantes.
9. Apagar el ventilador, la lmpara fluores-
cente; cerrar la abertura frontal y encen-
der la lmpara ultravioleta.
66
Nota: En caso de que se presente un derrame
dentro de la cabina mientras la misma est en
uso, esta debe mantenerse en operacin y to-
dos los objetos o equipos que resulten invo-
lucrados deben recibir un proceso de descon-
taminacin de superficie. Esto evitar que se
liberen contaminantes desde la cabina.
Descontaminacin de la cabina
La descontaminacin de la cabina de seguri-
dad biolgica es una actividad que debe rea-
lizarse de forma previa a la realizacin de
trabajos de mantenimiento que impliquen
apertura de sus superficies o componentes
internos. Siempre que se requiera efectuar
alguno de los procesos que se indican a con-
tinuacin, previamente debe descontaminar-
se la cabina.
1. Cambio de filtros.
2. Realizacin de pruebas que requieran ac-
ceder a las superficies interiores o expues-
tas de la cabina.
3. Antes de realizar pruebas de certificacin
cuando la cabina haya sido utilizada con
agentes clasificados como de riesgo biol-
gico de nivel 2 3.
4. Antes de trasladar la cabina a una localiza-
cin diferente.
5. Cuando se hayan presentado derrames de
sustancias con agentes de alto riesgo.
El procedimiento de descontaminacin ms
adecuado debe definirlo el profesional res-
ponsable de la seguridad industrial y riesgos
profesionales. En el anexo G del Estndar NSF
49, se encuentra descrito el procedimiento
para descontaminar las cabinas utilizando Pa-
raformaldehdo despolimerizado. Exclusiva-
mente profesionales que hayan recibido la
capacitacin correspondiente deben realizar
dicho procedimiento.
El mantenimiento general requerido por la
cabina de seguridad biolgica es, en general,
sencillo de realizar. Las rutinas y las frecuen-
cias se muestran a continuacin.
Frecuencia: Semanal
1. Descontaminar la superficie de trabajo y
las superficies interiores de la cabina con
etanol al 70 %.
2. Limpiar el cristal de la puerta frontal y la
superficie de la lmpara ultravioleta, utili-
zando una solucin limpiadora domstica.
3. Verificar la lectura del manmetro de pre-
sin que permite conocer la magnitud de
la cada de presin del aire, que fluye a
travs del filtro HEPA. Registrar la fecha y
la lectura en la bitcora de la cabina.
Frecuencia: Mensual
1. Limpiar las superficies exteriores, en espe-
cial, el frente y la parte superior utilizando
una pieza de tela hmeda, a fin de retirar
el polvo.
2. Desinfectar y remover la superficie de tra-
bajo con etanol al 70 % o una solucin de-
sinfectante adecuada.
3. Desinfectar la superficie del comparti-
miento inferior con etanol al 70 % o una
solucin desinfectante adecuada.
4. Verificar el estado de las vlvulas de servicio.
5. Realizar las tareas de frecuencia semanal.
Advertencia: El mantenimiento de los
componentes internos solo debe ser reali-
zado por personal entrenado y debida-
mente certificado. Para efectuar el mante-
nimiento de los componentes internos,
previamente debe efectuarse una descon-
taminacin. Para realizar las rutinas, deben
usarse elementos de proteccin personal.
67
Frecuencia: Anual
1. Efectuar el proceso de certificacin segn li-
neamientos establecidos en la Norma NSF 49.
2. Verificar con un radimetro la intensidad
de la lmpara UV
4
. Sustituir si es del caso.
3. Comprobar el estado de la lmpara fluo-
rescente. Sustituir si es del caso.
4. Realizar las tareas de frecuencia mensual.
Remocin de la superficie de trabajo
Para la remocin de la superficie de trabajo,
se requiere realizar lo siguiente:
1. Descontami nar l a superf i ci e antes de
removerl a.
2. Aflojar y remover los tornillos de fijacin
ubicados en la parte delantera de la super-
ficie de trabajo.
3. Aflojar pero no retirar los tornillos de fija-
cin ubicados en la parte trasera.
4. Levantar del borde frontal y retirar halan-
do hacia la parte frontal de la cabina.
5. Descontaminar la parte interior de la su-
perficie de trabajo.
6. Al ensamblar, realizar en orden inverso las ac-
tividades descritas en los numerales 2, 3 y 4.
Cambio de la lmpara ultravioleta
Para cambi ar l a l mpara ul travi ol eta, de-
ben segui rse l as i ndi caci ones del fabri can-
te. Por l o general , se efectan l os si gui en-
tes procedi mi entos:
1. Encender la cabina y dejarla funcionar du-
rante cinco minutos.
2. Levantar la ventana frontal a su mxima
posicin.
3. Descontaminar las superficies interiores y
la lmpara UV.
4. Desconectar la alimentacin elctrica a la
cabina.
5. Desencajar el tubo UV de sus conectores
girndolo 90 grados; a continuacin, insta-
lar un repuesto de las mismas caractersti-
cas del original. Algunos fabricantes han
instalado las lmparas sobre una placa lo-
calizada en el frente de la cabina, que es
necesario destornillar y levantar para que
quede a la vista el montaje de la lmpara.
Una vez hecho esto, se puede sustituir la
lmpara como se indic al inicio de este
numeral.
Mantenimiento especializado
Eventualmente, la cabina podra requerir
mantenimiento especializado. Se indican a
continuacin algunos procedimientos que
tendran que ser contratados con firmas es-
pecializadas cuando se requiera y que ten-
dran que realizarse siguiendo las indicacio-
nes que los productores han consignado en
sus manuales de servicio tcnico.
1. Certificacin anual de acuerdo a los linea-
mientos de la Norma NSF 49.
2. Cambio de motores. Generalmente, utili-
zan rodamientos sellados libres de mante-
nimiento y funcionan por induccin me-
diante control de frecuencia, por lo que
carecen de escobillas. Pueden trabajar
aos(*)
5
.
3. Cambio de ventiladores. (*)
4. Cambio de filtro HEPA. (*). La frecuencia de
cambio depende de la intensidad de uso de
la cabina y del sistema de control ambien-
tal que se tenga instalado en el laboratorio.
4
La vida til de las lmparas UV es de aproximadamente 7 500 horas. Algunos fabricantes sugieren sustituirla anualmente.
5
(*) Requieren procedimientos especializados de descontaminacin previa.
68
Si hay un buen control de aspectos como el
polvo, el filtro podra llegar a durar mu-
chos aos.
5. Reparacin del sistema electrnico de con-
trol: alarmas de control de flujo, posicin
de la ventana, controles de velocidad.
6. Reparacin /limpieza de vlvulas regulado-
ras de flujo, ajuste de acoples tipo campana.
Certificacin de la cabina
El proceso de certificacin de las cabinas de se-
guridad biolgica est reglamentado por el
Estndar NSF 49, el cual aplica a todas las cabi-
nas Clase II. El mismo define materiales, crite-
rios de diseo y construccin, parmetros de
operacin y pruebas que permiten garantizar
que la cabina es segura y adecuada para los
trabajos que se realizan en ella. Se presenta a
continuacin la lista de pruebas que incluye el
estndar mencionado. Detalles de los mismos
deben consultarse en el Estndar. El proceso
de certificacin incluye las siguientes pruebas:
1. Prueba de estanqueidad. Se realiza sobre
las superficies exteriores. Determina si
uniones, empaques, penetraciones y solda-
duras estn libres de fugas.
2. Prueba de f ugas de los f iltros HEPA. De-
termina la integridad de los filtros HEPA
de suministro y extraccin, sus alojamien-
tos y marcos de montaje.
3. Prueba de aumento de temperatura.
Determina cul es el aumento mximo de
temperatura en la cabina, cuando en la
misma se encuentran en operacin el ven-
tilador y las luces.
4. Prueba de ruido. Determina cul es el ni-
vel de ruido producido por la cabina.
5. Prueba de intensidad luminosa. Deter-
mina cul es la intensidad luminosa en la
superficie de trabajo de la cabina.
6. Prueba de vibraciones. Determina la canti-
dad de vibracin presente en la cabina, cuan-
do la misma se encuentra funcionando.
7. Prueba de proteccin al personal, al pro-
ducto y ensayos biolgicos de contamina-
cin cruzada. La prueba determina si los
aerosoles son contenidos por la cabina, si
los contaminantes externos alcanzan la zo-
na de la mesa de trabajo y si los aerosoles
son reducidos por la cabina.
8. Prueba de estabilidad. Determina si la ca-
bina tiene estabilidad estructural. Analiza
la resistencia al volcamiento, a la distor-
sin por el efecto de fuerzas aplicadas, a la
deflexin de la superficie de trabajo some-
tida a condiciones de carga y la resistencia
al ladeo de la superficie de trabajo bajo
condiciones de carga.
9. Prueba de velocidad del flujo vertical. De-
termina la velocidad del aire que se desplaza
verticalmente hacia la superficie de trabajo.
10.Prueba de velocidad del f lujo de ingre-
so. Determina la velocidad a la que ingre-
sa el flujo a la cabina, a travs de la aber-
tura frontal, y el volumen de extraccin de
la cabina.
11.Prueba de patrones de humo. Determi-
na si el flujo del aire, a lo largo de todo el
permetro de la abertura frontal, va hacia
la cabina y si el flujo vertical va hacia aba-
jo, no presenta puntos muertos o reflujos
sobre la superficie de trabajo.
12.Prueba de f ugas del drenaje. Define la
capacidad de contencin de derrames ba-
jo la superficie de trabajo.
13.Prueba de f uncionamiento del sistema
motor/ventilador. Determina si el siste-
ma brinda la presin esttica requerida.
14.Prueba del sistema elctrico. Determina
si existen riesgos potenciales de descargas
elctricas. Mide las corrientes de fuga, la
polaridad, el funcionamiento del sistema
de proteccin de fallas de tierra y la resis-
tencia del circuito a tierra.
69
EVALUACIN FUNCIONAL (ALTERNATIVA)
En caso de que se dispongan cabinas de segu-
ridad biolgica en el laboratorio, pero no se
encuentren en la zona de ubicacin del labo-
ratorio de servicios autorizados de certifica-
cin, el personal responsable de manteni-
miento tiene la alternativa de efectuar proce-
dimientos de revisin anuales basados en el
Estndar NSF 49 que, debidamente documen-
tados, permitiran identificar con bajos nive-
les de incertidumbre si la cabina se encuentra
en buen estado y su operacin es normal
6
.
Como actividades a realizar se destacan las
siguientes:
1. Evaluacin de instalacin. Verifica que
las condiciones de instalacin de la cabina
estn de acuerdo con las recomendaciones
que al respecto ha definido el fabricante.
2. Evaluacin operacional. Comprueba que
la cabina funciona de acuerdo con sus ca-
ractersticas de diseo y fabricacin.
3. Evaluacin de desempeo. Verifica la ca-
pacidad de la cabina para brindar un espa-
cio adecuado de trabajo en condiciones de
operacin normales y crticas.
En la tabla que se incluye a continuacin se
sealan los parmetros a tener en cuenta en
la evaluacin funcional, los cuales por lo ge-
neral se incluyen en la planilla
7
de inspeccin
que se disea para el efecto.
6
La evaluacin funcional se fundamenta necesariamente en la disponibilidad institucional o zonal de tcnicos
e ingenieros debidamente capacitados y experimentados.
7
Cada institucin disea sus propios formatos para el registro administrativo y tcnico de mantenimiento.
Tabla de evaluacin funcional de cabinas de seguridad biolgica
Ident i f i caci n i nst i t uci onal de l a cabi na
PARMETROS
Marca, model o, t i po, seri e, ubi caci n, cdi go de i nvent ari o, f echa.
Vol t aj e Medi ci n de vol t aj e. Requi ere vol t met ro.
Mot or/vent i l ador Veri f i caci n de t emperat ura de operaci n. Veri f i car ni vel de rui do y vi braci n.
Tomas el ct ri cas Revi si n de i nt egri dad, cal i dad del cont act o y vol t aj es di sponi bl es.
Int egri dad cabl es y conect ores Veri f i caci n vi sual .
Int errupt ores Cont rol de est ado e i nt egri dad.
Al armas Comprobaci n de est ado y cal i braci n.
Amperaj e Medi ci n de amperaj e. Requi ere vol t met ro o pi nza amperi mt ri ca.
Il umi naci n - Fl uorescent e
- Ul t ravi ol et a
Conf i rmaci n del nmero de horas de operaci n de l as l mparas y de su i nt en-
si dad l umni ca. Requi ere radi met ro.
Elct ricos
Acabados i nt ernos/ext ernos Veri f i caci n vi sual .
Empaques y sel l os Veri f i caci n vi sual . No deben exi st i r f ugas.
Est ado f i l t ros y pref i l t ros Verificacin visual. No deben exist ir fugas ni en el mat erial filt rant e ni en los sellos.
Vent ana desl i zant e Verificacin visual. Debe poder moverse suavemente y conservar las posiciones seleccionadas.
Fsicos
Vel oci dad del f l uj o Control de velocidades de acuerdo con la clase y tipo de cabina. Requiere anemmetro.
Di f erenci al de presi n en el f i l t ro HEPA Tomar l ect ura del manmet ro de l a cabi na.
Ni vel de rui do Requi ere sonmet ro.
Operacionales
OBSERVACI N
70
PARMETROS
Cont eo de part cul as Mt odo def i ni do en l os Federal St andard 209D, E. Requi ere generador de DOP,
f ot met ro y cont ador de part cul as.
Desempeo
Temperat ura Requi ere t ermmet ro: aproxi mada de 20-22 C.
Li mpi eza Debe ser adecuada.
Humedad Requi ere hi grmet ro: aproxi mada de 45-55 %.
Corri ent es de ai re No debe haber corri ent es que af ect en el f unci onami ent o de l a cabi na.
Condiciones del rea de inst alacin
OBSERVACI N
8
No enci enden l a l uz ni el si st ema de
vent i l aci n de l a cabi na.
Cabi na desconect ada de l a t oma
el ct ri ca.
Veri f i car que l a cabi na est conect ada a una
t oma el ct ri ca y que el cabl e est bi en conec-
t ado en l a caj a el ct ri ca de l a cabi na.
El vent ilador no gira pero la luz enciende. Vent ana f ront al cerrada. Abri r l a vent ana hast a l a posi ci n de t rabaj o.
Mot or del vent i l ador def ect uoso. Reempl azar el conj unt o mot or-vent i l ador.
Mot or del vent i l ador desconect ado. Revi sar l as conexi ones del mot or.
No hay al i ment aci n el ct ri ca en l a
acomet i da.
Conf i rmar que l a t oma el ct ri ca est energi za-
da y que el di syunt or no est desact i vado
prot ecci n t ermomagnt i ca. Ini ci al i zar nue-
vament e l os i nt errupt ores.
El vent i l ador de l a cabi na f unci ona, pe-
ro l a l mpara no enci ende.
Lmpara def ect uosa. Reempl azar l a l mpara. Ut i l i zar una de l as
mi smas caract erst i cas de l a ori gi nal .
El manmet ro i ndi ca un aument o en l a
cada de presi n a t ravs del f i l t ro.
La ret enci n de part cul as en el f i l t ro
HEPA ha aument ado.
Proceso normal durant e l a vi da t i l del f i l t ro.
Bl oqueo en l as rej i l l as o ranuras de
ret orno.
Veri f i car que l as rej i l l as no se encuent ren obs-
t rui das con al gn equi po o mat eri al .
Obst rucci n en el conduct o de
ext racci n.
Comprobar que no exi st an bl oqueos o rest ri c-
ci ones en el conduct o de ext racci n.
Bl oqueo o rest ri cci n baj o l a superf i ci e
de t rabaj o.
Veri f i car que el conduct o baj o l a superf i ci e de
t rabaj o se encuent re l i bre de obst rucci ones.
Lmpara mal conect ada. Revi sar l a conexi n de l a l mpara. Aj ust ar a l a
posi ci n correct a.
Prot ecci n t ermomagnt i ca del di syun-
t or act i vada.
Reconect ar el di syunt or.
Alambrado de la lmpara desconect ado. Revi sar al ambrado de l a l mpara.
Bal ast o de l a l mpara def ect uoso. Reempl azar bal ast o.
8
Purifier
Delta
Series, Biological Safety Cabinets, Users Manual, Kansas City, Labconco Corporation, Part
N 36960-20, Rev. A ECO B296.
71
DEFINICIONES BSICAS
Aerosol. Suspensin de partculas diminutas
slidas o lquidas que se dispersan en un gas.
El dimetro medio de las mismas oscila entre
10
-4
y 10
-7
cm.
Aire de suministro. Aire que entra a la ca-
bina a travs de la abertura frontal o de tra-
bajo y que reemplaza el aire extrado de la
cabina.
Cabina de seguridad biolgica. Equipo
diseado para controlar aerosoles y micro-
partculas, asociados al manejo de material
biolgico potencialmente infeccioso que se
generan en los laboratorios como resultado
de actividades como agitacin y centrifuga-
cin, uso y manejo de pipetas, apertura de
recipientes con presiones internas diferentes
a la atmosfrica, entre otros, utilizando con-
di ci ones apropi adas de venti l aci n, para
proteger al usuario, al ambiente y la mues-
tra con la que se trabaja.
Certif icacin. Procedimiento mediante el
cual se establece que el funcionamiento de
una cabina de seguridad biolgica cumple
con los criterios y requerimientos mnimos
para poder operar con seguridad. El Estndar
NSF 49 aplica a las cabinas Clase II, Tipo A, B1,
B2 y B3.
Descontaminacin. Remocin o destruc-
cin de agentes infecciosos; remocin o neu-
tralizacin de agentes txicos.
Filtro HEPA. Fi l tro que ti ene l a capaci dad
de remover part cul as cuyo di metro medi o
es de 0,3 mcon una efi ci enci a del 99,97 %.
Estn construidas de microfibras de boro sili-
cato que han sido unidas con un pegante re-
sistente al agua. El medio filtrante se encuen-
tra plegado dentro de un marco, con el fin de
incrementar el rea de filtracin.
Flujo laminar. Fenmeno de la mecnica de
los fluidos, en el cual cada punto de un flui-
do se mueve con velocidad uniforme a lo lar-
go de lneas paralelas entre s. Se presenta
cuando el nmero de Reynolds [Re] es menor
a 3 000.
Luz ultravioleta. (UV). Radiacin electro-
magntica cuya longitud de onda se encuen-
tra comprendida entre los 200 y los 390 nm.
Se utiliza en las cabinas de seguridad biolgi-
ca porque tiene propiedades bactericidas.
NSF. Acrnimo de National Sanitation Foun-
dation, organizacin sin nimo de lucro dedi-
cada a la investigacin, educacin y el servi-
cio, que busca resolver problemas que rela-
cionan al ser humano y su entorno. Su misin
es promover la salud y el enriquecimiento de
la calidad de vida, a travs de la conservacin
y el mejoramiento del ambiente. Los estnda-
res de la NSF suministran los criterios bsicos
para promover la salubridad y la proteccin
de la salud pblica.
Superf icie de trabajo. Superficie que se uti-
liza cuando se realiza algn trabajo, opera-
cin o actividad dentro de la cabina de segu-
ridad biolgica.
Txico. Sustancia que tiene un efecto fisiol-
gico adverso sobre los sistemas biolgicos.
Se present a cont ami naci n en l as
muest ras que se t rabaj an en l a cabi na.
Procedi mi ent os de t rabaj o i nadecuados. Revi sar que l a cabi na se ut i l i za de acuerdo a
l os procedi mi ent os y a l as buenas prct i cas.
Rest ri cci ones en l as ranuras de ret orno
o bl oqueo del duct o de ext racci n.
Comprobar que el ret orno y el sist ema de ext rac-
cin se encuent ren libres de obst rucciones.
Fact ores ext ernos a l a cabi na af ect an
l os pat rones de f l uj o dent ro de l a mi s-
ma y causan cont ami naci n.
Verificar la inst alacin de la cabina y los procedi-
mient os que se est n realizando.
Fi l t ro HEPA def ect uoso. Sust it uir filt ro HEPA y cert ificar la cabina.
72
Bibliografa
Cabinas de Seguridad Biolgica. Uso, Desinfeccin y Mantenimiento, Washington D. C., Or-
ganizacin Panamericana de la Salud, 2002.
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binets, Washington D. C., U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Di-
sease Control and Prevention and National Institutes of Health, 2nd. Edition, 2000.
Purifier
Delta
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The Laboratory Biosafety Guidelines, 3rd. Edition-Draft, Health Canada, 2001.
(www.Hc-sc.gc.ca/hpb/lcdc/biosafety)
75
Cent rf uga 7
COMPONENTES DE LA CENTRFUGA
Los componentes ms importantes de una
centrfuga son los siguientes
5
:
El control elctrico/electrnico que dispone
generalmente de los siguientes elementos:
1. Control de encendido y apagado, control
de tiempo de operacin temporizador,
control de velocidad de rotacin en algu-
nas centrfugas, control de temperatura
en centrfugas refrigeradas, control de
vibraciones mecanismo de seguridad y
sistema de freno.
2. Sistema de refrigeracin, en las centrfu-
gas refrigeradas.
3. Sistema de vaco, en ultracentrfugas. (No
consta en la ilustracin).
4. Base.
5. Tapa.
6. Carcaza.
7. Motor elctrico.
8. Rotor. Existen rotores de diverso tipo, los
ms comunes son los de ngulo fijo, los de
cubo pivotante, los de tubo vertical y los
de tubo casi vertical, los cuales se explican
a continuacin.
Tipos de rotores
Las centrfugas utilizan diversas clases de ro-
tores. Dentro de los ms utilizados estn los
siguientes:
5
Los nmeros que identifican cada componente corresponden a los indicados en el esquema.
Tipos de rotores
Rot ores de ngul o f i j o
TI PO DE ROTOR
Son rot ores de propsi t o general . Mant i enen l os
t ubos en un ngul o f i j o [ ] que por di seo est
especi f i cado ent re l os 20 y l os 45 grados. Se ut i l i -
zan para sedi ment ar part cul as subcel ul ares. El
ngul o acort a l a t rayect ori a de l as part cul as y l os
t i empos de cent ri f ugado, si se comparan con l os
rot ores de cubo pi vot ant es.
CARACTER STI CAS
Rot ores de t ubo vert i cal Est e t i po de rot or mant i ene l os t ubos paral el os al
ej e de rot aci n. As se l ogran obt ener bandas se-
paradas, a t ravs del di met ro de t ubo y no l a l on-
gi t ud del t ubo. Est os rot ores se usan para real i zar
est udi os i sopcni cos y en al gunos casos separaci o-
nes de t asa zonal , donde l a reducci n del t i empo
de cent ri f ugado es i mport ant e. Est os rot ores ut i l i -
zan t ubos de di seo especi al .
Rot ores de cubo
pi vot ant e
Se ut i l i zan para real i zar est udi os i sopcni cos se-
paraci ones como una f unci n de l a densi dad y
est udi os de t asa zonal separaci ones como una
f unci n de l os coef i ci ent es de sedi ment aci n,
donde se requi ere mxi ma resol uci n de zonas de
l a muest ra.
ESQUEMA CORTE TRANSVERSAL
77
Cent rf uga 7
3. Si la centrfuga es refrigerada, requiere de
un espacio libre en el lado del condensa-
dor, para que pueda haber una transferen-
cia de calor adecuada.
4. Un mueble en el cual puedan guardarse
los accesorios que, como los rotores alter-
nos, complementan la dotacin de las
centrfugas.
Las rutinas de mantenimiento que requiere
una centrfuga dependen de mltiples facto-
res, tales como la tecnologa incorporada, la
intensidad de uso, la capacitacin de los
usuarios, la calidad de la alimentacin elctri-
ca y las condiciones del ambiente donde se
encuentra instalada. A continuacin, se pre-
sentan las recomendaciones generales para la
adecuada utilizacin y las rutinas de mante-
nimiento ms comunes para garantizar una
correcta operacin. Las rutinas o reparacio-
nes especializadas dependern de las reco-
mendaciones que, para cada marca y modelo,
establezcan los fabricantes.
Recomendacin prioritaria: Verificar que
nicamente el personal que haya recibido y
aprobado la capacitacin de manejo, uso,
cuidado y riesgos de la centrfuga la opere. Es
responsabilidad de los directores de los labo-
ratorios vigilar y tomar las precauciones que
consideren oportunas para que el personal
que las opera entienda las implicaciones de
trabajar esta clase de equipo.
RECOMENDACIONES DE CONSERVACIN
Y MANEJO ADECUADO
6
Rotores
1. Regi strar l a fecha de compra de cada
uno de l os rotores, i ncl uyendo i nforma-
ci n rel aci onada con el nmero de seri e
y model o.
2. Leer y entender l os manual es de l os ro-
tores, equi po y tubos, antes de que l os
mi smos sean uti l i zados. Cumplir con las
indicaciones de uso y cuidado que especifi-
ca el fabricante.
3. Utilizar los rotores nicamente en las cen-
trfugas para las cuales han sido fabrica-
dos. No intercambiar rotores sin verificar
la compatibilidad con la centrfuga en la
cual se instala.
4. Registrar los parmetros de operacin pa-
ra cada rotor en una bitcora, para poder
determinar su vida til remanente y ges-
tionar a tiempo la adquisicin de los
reemplazos.
5. Utilizar las recomendaciones de velocidad
mxima y densidad de las muestras que re-
comienda el fabricante. Cada rotor est di-
seado para soportar un mximo nivel de
esfuerzo; dichas especificaciones deben ser
respetadas rigurosamente.
6. Acatar las recomendaciones relativas a re-
ducir la velocidad de operacin cuando se
trabaja con soluciones de alta densidad,
con tubos de acero inoxidable o adaptado-
res plsticos. Los fabricantes suministran la
informacin correspondiente.
7. Utilizar rotores de titanio si se trabaja con
soluciones salinas frecuentemente.
8. Proteger el recubrimiento de los rotores
para evitar que se deteriore el metal base.
No utilizar detergentes alcalinos o solucio-
nes limpiadoras que pudieran remover la
pelcula protectora. Los rotores, general-
mente fabricados de aluminio [Al], estn
recubiertos por una pelcula de aluminio
anodizado que protege la estructura del
metal.
9. Utilizar cepillos plsticos en las actividades
de limpieza de los rotores. Los cepillos me-
tlicos rayan el recubrimiento protector y
esto genera fuentes de futura corrosin,
que se aceleran bajo las condiciones de
operacin que acortan la vida til rema-
nente del rotor.
6
http://www.sunysb.edu/facilities/ehs/lab/cs.shtml
78
10. Lavar el rotor inmediatamente en el caso
de que se presenten derrames de sustan-
cias corrosivas.
11. Secar el rotor con aire seco, siempre que
haya si do l i mpi ado y enjuagado con
agua.
12. Almacenar los rotores de tubo vertical o
tubo casi vertical, con el lado superior ha-
cia abajo y sin las respectivas tapas.
13. Almacenar los rotores en ambientes se-
cos. Evitar dejarlos en la centrfuga.
14. Almacenar los rotores de cubo pivotante
sin las tapas de los compartimentos.
15. Lubri car l as roscas y l os ani l l os ti po O,
de acuerdo con l as recomendaci ones del
fabri cante.
16. Observar las recomendaciones relaciona-
das con tiempos de garanta y vida til de
cada tipo de rotor.
17. Evitar utilizar rotores a los cuales se les ha
terminado el perodo de vida til.
18. Utilizar blindajes si se usa la centrfuga
con material radiactivo.
19. Cargar o descargar los rotores dentro de
una cabina de seguridad biolgica, si se
trabaja con materiales clasificados como
de bioriesgo de nivel II o superior.
20. Nunca tratar de abrir la tapa de una cen-
trfuga que est funcionando y nunca in-
tentar detener el rotor con la mano.
Tubos
El cuidado de los tubos abarca aspectos como
el llenado del tubo, la seleccin adecuada de
temperatura, las limitaciones de velocidad de
centrifugacin, el lavado y la esterilizacin. Las
principales recomendaciones en relacin con
los aspectos mencionados son las siguientes:
1. Lavar los tubos, adaptadores y dems acce-
sorios a mano, utilizando un detergente
suave, diluido en una relacin de 1:10 en
agua y un cepillo de textura suave no me-
tlico. Evitar usar lavaplatos automticos.
2. Evitar el uso de alcohol y acetona, pues di-
chos materiales afectan la estructura de
los tubos. Los fabricantes recomiendan el
tipo de solvente que debe utilizarse con
cada tipo de material con que se fabrican
los tubos de centrifugacin.
3. Evitar secar los tubos en un horno de secado.
Secar siempre con un chorro de aire seco.
4. Verificar si los tubos utilizados son reutili-
zables o no. Si son desechables, utilizarlos
solo una vez.
5. Para esterilizar, previamente es necesario
verificar el tipo de material del tubo, pues
no todos soportan la esterilizacin por ca-
lor. La cristalera se esteriliza normalmente
con vapor a 121 C durante 30 minutos.
6. Almacenar los tubos y las botellas en un lu-
gar seco, oscuro y fresco, alejado de fuen-
tes de vapores qumicos o fuentes de ra-
diacin ultravioleta.
7. Verificar los niveles de llenado y el selle en
los tubos de pared delgada, para evitar su
colapso dentro del rotor por accin de la
fuerza centrfuga. Cumplir las recomenda-
ciones de los fabricantes.
Las rutinas de mantenimiento ms importan-
tes que se le efectan a una centrfuga son
estas:
Frecuencia: Mensual
1. Verificar que los componentes externos de
la centrfuga se encuentren libres de polvo
Advert encia: Nunca ef ectuar una i n-
tervenci n tcni ca en una centr f uga,
si l a mi sma no ha si do previ amente
descontami nada.
79
Cent rf uga 7
y de manchas. Evitar que el rotor se afecte
por derrames. Limpiar el compartimiento
del rotor, utilizando un detergente suave.
2. Comprobar que el mecanismo de acople y
ajuste de los rotores se encuentre en buen
estado. Mantener lubricados los puntos
que recomienda el fabricante.
3. Verificar el estado del mecanismo de cierre
/ seguridad de la tapa de la centrfuga,
pues es fundamental para garantizar la se-
guridad de los operadores. El mecanismo
mantiene cerrada la tapa de la centrfuga,
mientras el rotor se encuentra girando.
4. Confirmar la lubricacin de los elementos
que recomienda el fabricante, como sellos
tipo O. Utilizar siempre lubricantes de
acuerdo con las recomendaciones del fa-
bricante frecuencia y tipo de lubrican-
tes. En centrfugas de fabricacin recien-
te se usan rodamientos sellados que no re-
quieren lubricacin.
5. Verificar el estado de los empaques y jun-
tas de estanqueidad.
Frecuencia: Anual
1. Verificar que las tarjetas electrnicas se en-
cuentren limpias y bien conectadas.
2. Comprobar el grupo de control, el cual dis-
pone de selectores de velocidad, tiempo
de centrifugado, temperatura de opera-
cin, alarmas e instrumentos anlogos o
digitales para registrar los parmetros de
operacin de la centrfuga.
3. Verificar el cumplimiento de normas elc-
tricas. Utilizar un analizador de seguridad
elctrica: pruebas de resistencia a tierra,
corrientes de fuga.
4. Si la centrfuga es refrigerada, comprobar
la temperatura mediante el termmetro
electrnico. La temperatura no debe va-
riar ms de 3 C.
5. Examinar la exactitud de los controles de
tiempo. Utilizar un cronmetro. El tiempo
medido no debe variar ms de 10 % del
tiempo programado.
6. Verificar la velocidad de rotacin real con-
tra la seleccionada, utilizando una carga
normal. La comprobacin se efecta con
un tacmetro o un fototacmetro. Si la
compuerta no es transparente, debe se-
guirse el procedimiento que para el efecto
indique el fabricante.
7. Confirmar el funcionamiento del sistema
de freno.
8. Verificar el funcionamiento del sistema de
refrigeracin; solo en centrfugas refrige-
radas. Las actividades ms importantes son
las siguientes:
a) Controlar que las temperaturas seleccio-
nadas no difieran ms de 3 C, de las
temperaturas medidas con el termme-
tro digital.
b) Verificar el estado del filtro de la toma de
aire. Si es filtro se encuentra obstruido,
limpiar o sustituir por un equivalente.
c) Efectuar una limpieza detallada de las
aletas difusoras del condensador, para
eliminar la suciedad que se deposita so-
bre ellas. Esto mantiene las tasas de
transferencia de calor, segn las especifi-
caciones de diseo. Si se detecta un fun-
cionamiento anormal, solicitar servicio
tcnico especializado.
d) Verificar el estado de las escobillas del
motor, si la centrfuga dispone de motor
con escobillas. Sustituir por nuevas de la
misma especificacin original, en caso
de ser requerido. Realizar esta rutina ca-
da seis meses.
Nota: Evitar derrames de lquidos sobre el
teclado de control. Los teclados de mem-
brana deben operarse con la yema de los
dedos. Evitar que el operador utilice la
punta de la ua, pues termina perforando
la membrana de proteccin.
80
Herramientas e instrumentacin requerida
Para poder realizar las inspecciones de man-
tenimiento requeridas normalmente por una
centrfuga, son necesarios los siguientes ins-
trumentos o herramientas:
1. Una llave para apretar o aflojar la tuerca
del rotor.
2. Un analizador de seguridad elctrica o un
instrumento para medir corrientes de fuga
3. Un cronmetro.
4. Un termmetro electrnico con exactitud
de 0,5 C para centrfugas refrigeradas
nicamente.
5. Un tacmetro o fototacmetro.
7
Rotors and Tubes for Beckman Coulter J 2, J 6 and Avanti
J series centrifuges, Users Manual, Palo Alto, California,

The Spinco Business Center of Beckman Coulter, 2001.
Rotores
7
Vi braci n severa. Rot or desbal anceado. Bal ancear l a carga del rot or. Ll enar t odos l os
t ubos opuest os con el mi smo ni vel de l qui do
de l a mi sma densi dad.
Tapas de l os rot ores, cani st er o cubos
di f ci l es de af l oj ar despus de l a
cent ri f ugaci n.
Producci n de vaco durant e l a
cent ri f ugaci n.
Abri r el conduct o de vent i l aci n en l a part e su-
peri or del rot or o cubo, para el i mi nar el vaco.
Roscas cont ami nadas con suci edad, l u-
bri cant es secos o part cul as met l i cas.
Ef ect uar l i mpi eza rut i nari a a l as roscas y l ubri -
car. Ut i l i zar i nsumos recomendados por l os
f abri cant es.
Vel oci dad sel ecci onada cerca del rango
de vel oci dad crt i ca del rot or.
Rot or mal mont ado.
Sel ecci onar una vel oci dad de rot aci n f uera
del rango de vel oci dad crt i ca.
Veri f i car el mont aj e del rot or. Comprobar que
se encuent re bi en aj ust ado.
Fal t a l ubri caci n en l os suport es de l os
rot ores de cubo pi vot ant e.
Lubri car l os ej es de pi vot e segn recomenda-
ci n del f abri cant e. Por ej . cada 250 procedi -
mi ent os de cent ri f ugado.
Di st ri bui r si mt ri cament e el peso de t ubos
opuest os.
Cargar l os rot ores de ngul o f i j o o de t ubo
vert i cal de f orma si mt ri ca.
Tubos
Los t ubos present an f ugas. Tapas mal aseguradas. Aj ust ar l as t apas.
Tubos demasi ado l l enos. El meni sco deber est ar ms baj o para preve-
ni r l as f ugas.
En t ubos si n t apa, se ha excedi do el ni -
vel mxi mo recomendado.
Veri f i car l as recomendaci ones de vol umen y l a
vel oci dad de cent ri f ugado recomendada.
En t ubos de sel l o rpi do, se presume un
sel l ado def i ci ent e.
Presi onar suavement e, despus de sel l ar en
cal i ent e sol o si no se af ect a el cont eni do. Si
se present an f ugas, sel l ar de nuevo.
81
Cent rf uga 7
DEFINICIONES BSICAS
Densidad. Masa de un cuerpo por unidad de
volumen.
Se expresa generalmente en
gramos por cm
3
.
Escobilla. Dispositivo mediante el cual se efec-
ta la transmisin de la energa elctrica, entre
la acometida externa cables en estado estti-
co y los componentes internos en rotacin
de un motor. Por lo general, las escobillas son
fabricadas en grafito de textura muy blanda
y son un insumo que debe cambiarse con re-
gularidad (cada seis meses) en los motores
que las utilizan.
Fuerza centrfuga. Fuerza que acta sobre
una partcula y trata de alejarla del centro de
rotacin; se entiende tambin como la ten-
dencia que tiene todo slido en rotacin a ale-
jarse del eje. Es uno de los componentes del
vector de inercia que equilibra el conjunto de
Sistemas varios
El i nt errupt or pri nci pal est en posi ci n
de encendi do pero l a cent rf uga no
f unci ona.
No hay energa el ct ri ca. Veri f i car sumi ni st ro de energa el ct ri ca.
El i ndi cador de bal anceo se act i va. Carga a cent ri f ugar desbal anceada. Bal ancear l a carga a cent ri f ugar.
Exi st en f l uct uaci ones en l a vel oci dad
de rot aci n.
Correas de t ransmisin en mal est ado (* ). Apagar l a cent rf uga. Veri f i car l a condi ci n y
est ado de l as correas. Las correas deben est ar
t empl adas.
La cmara est fra pero el rot or calient e.
* Procedi mi ent o vl i do en cent rf ugas, con si st ema de t ransmi si n de pot enci a por correas.
Seleccin incorrect a de la t emperat ura. Veri f i car sel ecci n de l a t emperat ura.
El t est i go de est ado de escobi l l as est
encendi do.
Escobillas en mal est ado. Apagar l a cent rf uga. Veri f i car est ado. Sust i t ui r
escobi l l as por ot ras de i gual especi f i caci n.
La vel oci dad de rot aci n no l l ega a l a
vel oci dad sel ecci onada.
Escobi l l as def ect uosas. Apagar l a cent rf uga. Veri f i car el est ado de l as
escobi l l as. Sust i t ui r si es del caso por ot ras de
l a mi sma especi f i caci n de l as ori gi nal es.
Cal i braci n del cont rol de vel oci dad
desaj ust ado.
Aj ust ar cal i braci n del cont rol de vel oci dad.
Cent rf uga desni vel ada. Ni vel ar l a cent rf uga.
La t apa de l a cent rf uga no abre. Cent rf uga apagada. Encender l a cent rf uga. Presi onar l a mani j a y
abri r l a t apa.
Exi st e vi braci n a baj a vel oci dad. Mecani smo de aj ust e del rot or f l oj o. Aj ust ar correct ament e el si st ema de f i j aci n.
Carga desbal anceada. Veri f i car el bal anceo de l a carga a cent ri f ugar.
Vel oci dad sel ecci onada cercana al pun-
t o de resonanci a del rot or.
Sel ecci onar una vel oci dad de rot aci n ms
el evada o ut i l i zar un t i po de rot or di f erent e.
Los t ubos se raj an o rompen. Los t ubos pueden romperse o vol verse
f rgi l es si se usan por debaj o del l mi t e
de l a t emperat ura recomendada.
Cal ent ar hast a 2 C, si l a muest ra est conge-
l ada, ant es de cent ri f ugar. Eval uar ant es de
cent ri f ugar el comport ami ent o de l os t ubos a
baj a t emperat ura.
Los t ubos se vuel ven f rgi l es con l a
edad y el uso.
Desechar t ubos venci dos, ut i l i zar nuevos.
[D = ]
m
V
83
Cent rf uga 7
Bibliografa
Mantenimiento y reparacin de equipos de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Suiza, Organizacin Mundial de la Salud, 1996.
Manual de operacin y cuidados del equipo del laboratorio clnico, Proyecto de manteni-
miento hospitalario, San Salvador, El Salvador, GTZ-Ministerio de Salud Pblica, 1998, 5-7.
(http://www.gruposaludgtz.org/proyecto/mspas-gtz/Downloads/Laboratorio-Clinico.pdf)
Rotors and Tubes for Beckman Coulter J 2, J 6 and Avanti
J series centrifuges, Users Manual,

Palo Alto, California, The Spinco Business Center of Beckman Coulter, 2001.
(http://arcturi.swmed.edu/cue/centrifuges/JR%26T.pdf)
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MAX and MAX C, Users Manual, Palo Alto, California, The Spinco Business Center of Beck-
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SERO-FUGE Centrifuge, Mod 0521 and 0522, Operator manual, Clay Adams, Division of Bec-
ton Dickinson and company.
(http://web.princeton.edu/sites/ehs/labsafetymanual/sec7i.htm)
84
85
DESTILADOR DE AGUA
La palabra destilador proviene de la palabra
latina distillare que significa vaporizar los l-
quidos por medio del calor. El destilador de
agua que se usa en el laboratorio purifica el
agua corriente, mediante procesos controla-
dos de vaporizacin y enfriamiento. Al aplicar
energa trmica al agua en fase lquida, luego
de un proceso de calentamiento, se convierte
en vapor de agua. Esto permite separar las
molculas de agua, de las molculas de otras
sustancias o elementos que se encuentran
mezclados o diluidos. El vapor de agua se re-
colecta y se lleva a travs de un condensador,
donde el vapor se enfra y vuelve a la fase l-
quida. Entonces, el condensado se recoge en
un tanque de almacenamiento diferente. El
agua destilada presenta mejores caractersti-
cas de pureza comparada con el agua co-
rriente; prcticamente se encuentra libre de
sustancias que la contaminen.
PROPSITO DEL DESTILADOR DE AGUA
El destilador permite obtener agua de gran
pureza, a partir del agua potable como la su-
ministrada normalmente por los servicios de
acueducto de los centros urbanos. El agua
destilada se caracteriza por carecer de slidos
en suspensin y es utilizada en mltiples apli-
caciones en los centros para la prestacin de
servicios de salud, especialmente en las uni-
dades de laboratorio, lavado y esterilizacin,
y diettica. En el laboratorio el nivel de pure-
za ser mayor mientras ms especializados
sean los procedimientos. Por ejemplo: la pre-
paracin de reactivos o de material biolgico
requiere agua de la ms alta calidad y la des-
tilacin es uno de los procesos fundamenta-
les para lograrlo. (Aunque no el nico que
CAPTULO 8
Dest ilador de agua
Cdigo (s) ECRI
15-136
Uni dades de dest i l aci n
Ilustracin 21: Destilador de agua
ESQUEMA DEL DESTILADOR DE AGUA
86
pudiera ser requerido). El agua utilizada en
los laboratorios debe estar libre de pirge-
nos, con una concentracin de slidos totales
no mayor de 1 ppm, cuyos valores de pH es-
tn comprendidos entre 5,4 y 7,2 y su resis-
tencia elctrica sea no menor de 3 x 105
ohm/cm a 25 C
1
.
El funcionamiento de un destilador est ba-
sado en un fenmeno que se presenta libre-
mente en la naturaleza y es conocido como el
ciclo del agua. La energa proveniente del sol
calienta el agua de los mares y transforma
parte de la misma en vapor de agua. Dicho
vapor se concentra en nubes que, cuando las
condiciones atmosfricas son adecuadas, se
enfra y condensa, volviendo a la superficie
en forma de lluvia.
Funcionamiento del destilador de agua
El destilador de agua reproduce el fenmeno
natural. Su configuracin y diseo varan de-
pendiendo de los volmenes de agua reque-
ridos. Se presenta a continuacin una explica-
cin general de las partes que integran un
destilador y se describe cmo funcionan.
1. Generador de vapor. Tambin se le cono-
ce como tanque de ebullicin. Este compo-
nente es el recipiente en el cual se almace-
na el agua que va a ser destilada. Por lo ge-
neral, dispone de una acometida hidrulica
que permite reponer el agua que se evapo-
ra y destila. Se fabrica generalmente en vi-
drio en pequeos destiladores o en acero
inoxidable, cobre recubierto con estao o
titanio en mquinas de gran capacidad.
Puede disponer de controles de nivel, flujo
y calidad del agua de alimentacin, que
protegen el destilador en caso de que se
presente alguna irregularidad en el sumi-
nistro de agua. Como fuente de energa se
utiliza el vapor de agua proveniente de
una caldera o generador de vapor, o la
energa trmica generada mediante resis-
tencias elctricas de inmersin, que trans-
miten, mediante conduccin directa, ener-
ga trmica al agua. Esto hace que la tem-
peratura del agua aumente, hasta que, a
condiciones normales (presin atmosfrica
igual a una atmsfera, y aceleracin de la
gravedad igual a 9,80665 m/s
2
), el agua en
fase lquida se transforma en agua en fase
vapor a 100 C.
2. Nivel de agua. Es un dispositivo que permi-
te regular la cantidad de agua dentro del ge-
nerador de vapor. Se encuentra conectado
directamente a la acometida que suministra
el agua que utiliza el destilador. Cuando la
cantidad de agua en fase lquida contenida
en el tanque de ebullicin disminuye, el dis-
positivo permite recuperar la cantidad de l-
quido que se ha evaporado.
3. Vlvula de control. Es un dispositivo me-
cnico o electromecnico que permite re-
gular el flujo de agua hacia el tanque del
generador de vapor.
4. Acometida hidrulica. Es la red que su-
ministra el agua en fase lquida al tanque
del generador de vapor.
5. Agua en f ase lquida. Es el agua que se
encuentra dentro del tanque del genera-
dor de vapor. Recibe la energa trmica
que transfieren las resistencias de inmer-
sin y se convierte a fase vapor, cuando se
cumplen las condiciones de presin y tem-
peratura requeridas.
6. Resistencias de inmersin. Son disposi-
tivos que generan calor cuando a travs de
los mismos circula una corriente elctrica.
Se encuentran aisladas por una capa de ce-
rmica y protegidas del ambiente externo
por una coraza metlica.
7. Salida del agua de ref rigeracin. Es la
lnea que conduce el agua que se ha utili-
zado para condensar el vapor de agua, re-
tirando al mismo energa trmica.
1
Warming cabinets, sterilizers, and associated equipment, Division 11 - Equipment, USACE/NAVFAC/AFCESA,
UFGS-11710, July 2003.
87
Dest i l ador de agua 8
8. Condensador. Es un dispositivo en el
cual el vapor pierde energa trmica, se
enfra y vuelve a la fase lquida. Para ace-
lerar el proceso se utilizan mtodos de
conveccin forzada, mediante la circula-
cin de fluidos aire o agua a baja tem-
peratura alrededor del conducto, a travs
del cual fluye el vapor.
9. Filtro. Los destiladores disponen de fil-
tros de carbn activado que se colocan a
la salida del condensador o a la salida del
colector, con el fin de eliminar sabores o
partculas que pudieran estar presentes
en el vapor que se condensa.
10. Depsito de agua destilada. Es un dis-
positivo en el cual se recolecta el fluido
que se ha sometido al proceso de destila-
cin. El agua destilada debe almacenarse
en recipientes especiales fabricados prin-
cipalmente en materiales plsticos, para
evitar que se presente contaminacin i-
nica. Se utilizan para el efecto recipientes
de polietileno, polipropileno o politetra-
fluoruroetileno
2
.
Dependiendo del diseo, la capacidad y el ti-
po de destilador, los servicios requeridos po-
dran variar. Los servicios ms comunes son
los siguientes:
1. Ambiente bien ventilado donde pueda insta-
larse el equipo. Es necesario debido a que el
destilador transfiere calor a un fluido y esto
aumenta la temperatura del lugar donde se
instale. Es necesario dejar espacios libres alre-
dedor del destilador de forma que se facilite
el flujo de aire. Dado que algunos destila-
dores se encuentran montados dentro de
una caja metlica, esta normalmente re-
quiere ser instalada sobre un soporte que
facilita la circulacin del aire desde la par-
te inferior del destilador.
2. Acometida hidrulica de agua potable. Es
tpico encontrar que la acometida hidruli-
ca requerida tiene un dimetro de 1/2" .
Sin embargo, para asegurar una operacin
sin inconvenientes, debe evaluarse la cali-
dad del agua con la que se alimenta el des-
tilador y determinar si es necesario instalar
un sistema de tratamiento
3
que evite la
presencia de incrustaciones o sedimentos
dentro del tanque del generador de vapor
y sobre las resistencias de inmersin. El
agua potable se utiliza para alimentar el
generador de vapor y para refrigerar el
condensador
4
.
3. Acometida hidrulica de agua destilada. El
agua destilada que se produce es recolec-
tada inicialmente en un tanque de almace-
namiento. En equipos de gran capacidad
se distribuye desde el mismo, mediante
una red, a los puntos de consumo. En equi-
pos pequeos o medianos, se transfiere a
recipientes desde los cuales se utiliza en
los puntos de consumo.
4. Acometi da hi drul i ca sani tari a. Se uti l i za
para drenar l a acumul aci n de i mpure-
zas que pueden acumul arse en el tanque
del generador de vapor. Impl i ca uti l i zar
un si fn que debe estar ubi cado cerca al
desti l ador.
5. Acometida elctrica. Debe estar dotada de
los dispositivos de control y seguridad,
cumplir con las normas elctricas naciona-
les o internacionales que utilice el labora-
torio, y estar dimensionada a la potencia
de los elementos resistivos que utiliza el
destilador. Por lo general, el voltaje es de
220 V, 60 Hz o de 240 V, 60 Hz.
2
Mantenimiento y reparacin de equipos de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital, Ginebra, Organizacin
Mundial de la Salud, 1996.
3
Los sistemas de tratamiento de agua han sido diseados para retirar las sustancias que normalmente se encuentran
presentes en el agua, debido a la gran capacidad solvente de la misma. Las sustancias son por lo general iones inor-
gnicos aniones y cationes, entre los que se encuentran bicarbonatos, sulfitos, cloruros, calcio, magnesio, sodio,
potasio, hierro manganeso, nitratos y trazas de muchos otros.
4
Algunos fabricantes refrigeran el condensador mediante la utilizacin de ventiladores, los cuales hacen circular aire
sobre las aletas del condensador, generando procesos de transferencia de calor mediante conveccin forzada desde
la superficie de difusin al medio ambiente.
88
Las rutinas de mantenimiento dependen del di-
seo y la capacidad del destilador. Las rutinas
que se describen en el presente manual han sido
enfocadas tomando un destilador dotado con
un tanque generador de vapor fabricado en ace-
ro inoxidable que opera con resistencias de in-
mersin y cuyo condensador es refrigerado me-
diante un ventilador que impulsa aire, sobre o a
travs de las aletas difusoras del condensador.
Inspeccin y limpieza del tanque genera-
dor de vapor
Frecuencia: Mensual
1. Retirar el panel de proteccin o abrir la
puerta que permite acceder al tanque de
ebullicin o generador de vapor.
2. Retirar la tapa del tanque de ebullicin.
3. Verificar visualmente si las paredes interio-
res o las resistencias de inmersin presentan
depsitos de slidos o sedimentos alrededor
de la superficie. La cantidad de depsitos
presentes depender de la calidad del agua
con la que se alimente el destilador. Si se
comprueba la acumulacin de dichos sedi-
mentos, debe limpiarse para evitar que se
daen las resistencias de inmersin
5
.
4. Limpiar los depsitos acumulados. Por lo
general, el proceso de limpieza requiere
la utilizacin de un producto qumico, di-
seado especialmente para remover los
depsitos formados. Dicho producto debe
seleccionarse de acuerdo con las caracte-
rsticas del agua que est siendo utilizada
y que se determinan mediante un anlisis
qumico del agua.
5. Drenar la cantidad de agua contenida en el
tanque de generacin hasta que su nivel es-
t aproximadamente 10 cm por encima del
sitio de ubicacin de la sonda de nivel o de la
resistencia de inmersin verificar que se en-
cuentre ubicado a ms altura sobre el fondo
del tanque, para asegurar que todos estos
elementos queden sumergidos en el agua.
6. Aadir el producto qumico recomendado,
en funcin de las caractersticas del agua.
7. Mezclar bien.
8. Permitir que el qumico opere durante to-
da la noche. El fabricante del producto
utilizado recomienda los tiempos para re-
mover los sedimentos.
9. Drenar el contenido del tanque, a la ma-
ana siguiente.
10. Aadir agua limpia, lavar y drenar hasta
estar seguros de que el qumico utilizado
haya sido completamente removido, jun-
to con los residuos minerales removidos
de las superficies afectadas.
11. Reinstalar la tapa.
12. Colocar los paneles frontales o ajustar la
puerta.
13. Operar normalmente el equipo.
5
Los minerales que se depositan sobre el recubrimiento de las resistencias de inmersin tienen la particularidad de ser
muy malos conductores del calor, por lo que impiden una eficiente transferencia de calor entre la resistencia de in-
mersin y el agua en proceso de destilacin. Esto hace que la temperatura de la resistencia aumente por encima de
aquella que normalmente alcanzara en condiciones normales de operacin, deteriorando su estado e integridad.
Nota: Verificar siempre las recomendacio-
nes de instalacin del fabricante del equi-
po, para asegurar que el destilador opera-
r de acuerdo a los parmetros de diseo.
Advertencia: Antes de realizar cualquier
inspeccin o rutina de mantenimiento, veri-
ficar que el destilador se encuentra apagado
y desconectado de la acometida elctrica.
Advertencia: Bajo ninguna circunstancia
destilar la solucin utilizada para remover
los sedimentos.
89
Cambio del f iltro de carbn activado
Frecuencia: Cada tres meses
Normalmente, el filtro de carbn activado se
instala aguas abajo del sistema dispensador,
que proviene del tanque de almacenamiento
de agua destilada. Se encuentra montado en
una carcaza instalada sobre la lnea de distri-
bucin del agua destilada. Por lo general, es
un dispositivo de fcil sustitucin. El proceso
que generalmente se realiza es el siguiente:
1. Desenroscar la tapa del filtro.
2. Retirar el elemento filtrante usado.
3. Instalar un nuevo elemento filtrante de las
mismas caractersticas del original.
4. Reinstalar la tapa del filtro.
Limpieza del condensador
Frecuencia: Anual
1. Para la limpieza del condensador, es necesa-
rio retirar los paneles protectores o abrir la
puerta que permite acceder al condensador.
2. Verificar que el destilador de encuentre
desconectado de la acometida elctrica.
3. Remover el conjunto del condensador. Desco-
nectar el sistema de acople para ingreso de vapor
y el acople que conecta el condensador al tan-
que de almacenamiento del producto destilado.
4. Remover los tornillos que ajustan y ensam-
blan el conjunto del ventilador con el con-
densador. Desconectar los terminales del
ventilador de sus puntos de conexin.
5. Retirar el ventilador y limpiar la suciedad
que se haya acumulado en la superficie de
los labes. Lubricar el sistema de roda-
miento con aceite mineral (dos gotas).
6. Retirar el condensador. Aspirar la sucie-
dad, polvo y pelusa, acumulada sobre la
superficie de las aletas difusoras. (Tambin
puede utilizarse aire comprimido o una
brocha humedecida con agua y jabn).
7. Enjuagar el conjunto.
8. Secar.
9. Ensamblar nuevamente siguiendo un or-
den contrario al descrito.
Esterilizacin del tanque de
almacenamiento de agua destilada
Frecuencia: Ocasional
Antes de i ni ci ar l a operaci n de un nuevo
desti l ador de agua, se recomi enda veri fi car
que el tanque de al macenami ento del agua
desti l ada se encuentre estri l y l i mpi o. Para
efectuar l a esteri l i zaci n, se recomi enda
uti l i zar un proceso de ti po qu mi co usando
un bl anqueador domsti co a base de cl oro.
El procedi mi ento a segui r se presenta a
conti nuaci n:
1. Verificar que el interruptor general se en-
cuentre apagado.
2. Abrir el panel frontal para acceder al tan-
que de al macenami ento del producto
destilado.
3. Reti rar el fi l tro de carbn acti vado del
al ojami ento.
4. Preparar una solucin de blanqueador de
cloro hasta que se obtenga una concentra-
cin de 200 ppm y aadirla al tanque de
almacenamiento.
5. Permitir que la solucin interacte con el
tanque, por al menos tres horas.
6. Vaciar el tanque de almacenamiento utili-
zando la lnea de drenaje.
7. Encender el destilador y dejar que el tan-
que de almacenamiento se llene con agua
destilada.
Advertencia: El elemento filtrante ajusta
dentro de la carcaza del filtro, mediante
sellos tipo anillo o ringsque deben ser ins-
talados con cuidado en las ranuras para
evitar fugas de agua destilada.
90
8. Drenar nuevamente el tanque de almacenamiento.
9. Colocar el filtro de carbn activado en su
alojamiento.
10. Permitir que el destilador llene el tanque
de almacenamiento con agua destilada.
El filtro de carbn activado remover
cualquier remanente del blanqueador de
cloro utilizado.
El dest i l ador no produce agua dest i l ada. No hay sumi ni st ro de energa. Veri f i car que el conect or el ct ri co est bi en
aj ust ado en l a t oma el ct ri ca.
El dest i l ador present a agua a su
al rededor.
El dest i l ador o al guno de sus compo-
nent es mal i nst al ado.
Comprobar que el f i l t ro de carbn act i vado se
encuent re bi en i nst al ado y que el agua f l uya a
t ravs de l .
El agua dest i l ada t i ene sabor. Fi l t ro de carbn act i vado agot ado. Reempl azar el f i l t ro de carbn act i vado.
El dest i l ador present a vapor a su
al rededor.
Vent i l aci n i nadecuada del dest i l ador. Veri f i car que el dest i l ador di spone de espaci os
l i bres a su al rededor. Tambi n que di spone de
espaci o l i bre en l a part e t rasera. (Adems, que
no est pegado a l a pared).
El vent ilador de refrigeracin no funciona. Veri f i car el est ado del vent i l ador. Si est energi -
zado y no f unci ona, sust i t ui r el vent i l ador por
ot ro de l as mi smas caract erst i cas del ori gi nal .
Comprobar que no haya obj et os que i nt erf i e-
ran el f l uj o l i bre del ai re haci a el dest i l ador.
Remover cual qui er obj et o que af ect e el l i bre
f l uj o.
Veri f i car que el t anque col ect or de condensa-
do se encuent re bi en ubi cado.
Conf i rmar que l as i nst al aci ones de drenaj e no
present an f ugas.
Resi st enci a de i nmersi n quemada. Veri f i car l a i nt egri dad de l a resi st enci a de i n-
mersi n. Medi r cont i nui dad el ct ri ca o resi s-
t enci a en ohmi os del cal ef act or. Sust i t ui r por
ot ra de l as mi smas caract erst i cas del ori gi nal .
Conf i rmar que haya energa el ct ri ca en el ci r-
cui t o que al i ment a el dest i l ador.
Veri f i car que el i nt errupt or pri nci pal est en l a
posi ci n encendi do.
Comprobar que haya agua en el generador de
vapor o cmara de ebul l i ci n.
91
DEFINICIONES BSICAS
Destilacin. Proceso mediante el cual se ca-
lienta un fluido en fase lquida hasta que se
transforma en fase vapor, posteriormente se
enfra y se condensa nuevamente a fase lqui-
da. El proceso de destilacin se utiliza para
separar sustancias que se encuentran mezcla-
das, aprovechando las diferencias en volatili-
dad de las sustancias involucradas. Tambin
se utiliza la destilacin para obtener la sus-
tancia ms voltil en forma ms pura. Para
obtener sustancias muy puras se recurre a
procesos de destilacin consecutivos, a fin de
eliminar progresivamente sustancias con la
que se encuentran mezclados. En el caso del
agua, esta se encuentra mezclada con diver-
sos elementos qumicos.
Disolucin. Mezcla homognea de propie-
dades uniformes de dos o ms sustancias. Se
caracteriza por no existir interaccin qumica
entre los componentes de la mezcla. El com-
ponente que existe en mayor proporcin y
que generalmente se encuentra en estado l-
quido se denomina disolvente y el que se en-
cuentra en menor cantidad, soluto.
Dureza. Caracterstica qumica del agua de-
terminada por el contenido de carbonatos,
bicarbonatos, cloruros, sulfatos y ocasional-
mente nitratos de calcio y magnesio. La dure-
za es indeseable en algunos procesos. Existen
dos tipos de dureza:
Dureza temporal. Est determinada por
el contenido de carbonatos y bicarbona-
tos de calcio y magnesio. Puede ser elimi-
nada por ebullicin del agua y posterior
eliminacin de precipitados formados por
filtracin; tambin se le conoce como du-
reza de carbonatos.
Dureza permanente. Est determinada
por todas las sales de calcio y magnesio,
excepto carbonatos y bicarbonatos. No
puede ser eliminada por ebullicin del
agua y tambin se le conoce como dureza
de no carbonatos.
Interpretacin de la dureza:
Dureza como CaCO3 Interpretacin
0-75 agua suave
75-150 agua poco dura
150-300 agua dura
> 300 agua muy dura
_____________________________________
En agua potable, el lmite mximo permi-
sible es de 300 mg /l de dureza.
En agua para cal de ras, e l l mi te e s de
0 mg / l de dure za.
Dureza clcica (DCa
++
). Cantidad de calcio
presente en el agua.
Dureza magnsica (DMg
++
). Cantidad de
magnesio presente en el agua.
Dureza total [Dt]. Cantidad en solucin de
calcio [Ca] y magnesio [Mg] como cationes,
sin tener en cuenta la naturaleza de los anio-
nes presentes en el agua. Se expresa como
ppm (partes por milln) de carbonato de cal-
cio. Su frmula es: CaCo3.
Incrustacin. Denominacin que se otorga a
los slidos en suspensin que se depositan en
forma de capas sobre la superficie de los reci-
pientes que los contienen.
92
Bibliografa
American Society for Testing and Materials, Annual book of Standards 1994, Determinacin
de dureza en agua, Mtodo ASTM D 1126-92.
(http://members.tripod.com/Arturobola/dureza.htm#Bibliografa)
AquaSource
ADWS6, Owners Manual, By Apollo by Midmark, Versailles, Ohio, AMI5000,

Rev. 12/03. (http://www.documark.com/Documents/a/ami50000.pdf)
AquaSource
ADWS50, Owners Manual, By Apollo by Midmark, Versai l l es, Ohi o,

AMI50010, Rev. 4/99. (http://www.documark.com/Documents/a/ami50010.pdf)
AquaSource
, Water Distillation Systems: Apollo Dental Products Inc. Clovis, CA 93612

AMM60014, Rev. 4/00. (http://www.documark.com/Documents/a/amm60014.pdf)
Mantenimiento y reparacin de equipos de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Organizacin Mundial de la Salud, 1996.
Warming cabinets, sterilizers, and associated equipment, Division 11 - Equipment, USACE
/NAVFAC/AFCESA, UFGS-11710, July 2003.
(http://www.ccb.org/online/docs/ufgshome/pdf/11710.pdf))
93
DILUIDOR
El diluidor se utiliza para diluir. Diluir provie-
ne de la palabra latina diluere y significa aa-
dir lquido a una disolucin. Disolver es pene-
trar y dividir las molculas de un cuerpo sli-
do. Disolucin es la fragmentacin de una
sustancia en molculas o iones dispersos ho-
mogneamente en un lquido, por lo gene-
ral, agua. Tambin se definen las disoluciones
como mezclas homogneas de dos o ms
componentes y pueden ser gaseosas, lquidas
o slidas. El diluidor es un equipo de labora-
torio que permite preparar mezclas general-
mente lquidas hasta que se cumpla una rela-
cin o proporcin concentracin entre los
elementos que constituyen la mezcla, para
que puedan ser utilizados en distintos tipos
de procesos diagnsticos. La identificacin de
este equipo est generalizada mediante el
uso de la palabra inglesa dilutor.
PROPSITO DEL DILUIDOR
El propsito del diluidor es preparar mezclas de
sustancias, para lograr concentraciones y vol-
menes determinados de una solucin o sustan-
cia, tal como se hace con una pipeta, con la ven-
taja de que el proceso puede ser automtico o
programado. Los diluidores varan en tamao y
complejidad. Su capacidad depende del fabri-
cante, pero es comn encontrar que pueden
controlar volmenes comprendidos entre 25 l
(microlitros) y 25 ml (mililitros).
El diluidor tiene varios componentes que inte-
ractan coordinadamente para manejar y mez-
clar volmenes de lquidos con gran precisin, lo
que permite preparar disoluciones comprendi-
das entre 1 l y 25 ml. El diluidor tiene, por lo
general, los siguientes componentes:
1. Un sistema propulsor
2. Un sistema de control
3. Un sistema dispensador
CAPTULO 9
Diluidor
Cdigo (s) ECRI
15-133
Di l ui dores
Ilustracin 22: Esquema diluidor
ESQUEMA DEL DILUIDOR
94
Sistema propulsor
Generalmente est conformado por sistemas
de desplazamiento positivo como los que tie-
nen una jeringa. En el diluidor se utiliza una
o ms jeringas seleccionables de diversa ca-
pacidad para controlar los volmenes a mez-
clar o diluir. Los pistones de las mencionadas
jeringas son propulsados por un mecanismo
que controla su posicin. Los volmenes aspi-
rados o entregados se calculan mediante la
ecuacin:
V =Al
donde:
V = fraccin de volumen entregada por la
jeringa cuando el pistn tiene un
desplazamiento l.
A = rea del pistn.
El volumen total aspirado o entregado es la
integral correspondiente.
Controlando de manera exacta el desplaza-
miento del pistn, se puede lograr un buen
control sobre los volmenes manipulados. El
sistema de desplazamiento es accionado me-
diante un motor elctrico que mueve un sis-
tema de tuerca y tornillo de gran precisin,
que al desplazarse en uno u otro sentido
cambia la posicin del pistn. Complementan
las jeringas y sus sistemas de desplazamiento
un conjunto de vlvulas que controlan los
procesos de aspiracin y suministro. La confi-
guracin del diluidor depende de los tipos y
modelos de los diversos fabricantes.
Sistema de control
Los diluidores modernos tienen un sistema de
control que puede ser automtico o controla-
do por microprocesadores. Estos ltimos per-
miten seleccionar y controlar lo siguiente:
1. Procesos de mezcla y/o disolucin de sus-
tancias (programables)
2. Suministro de volmenes predefinidos
3. Velocidades de succin o suministro
4. Nmero de ciclos requeridos
5. Tamao o volumen de las jeringas seleccionadas
6. Tiempos
7. Ciclos de cebado y limpieza
8. Procedimientos de verificacin de la calidad
Para dar una mejor idea de la complejidad tc-
nica alcanzada, se incluye a continuacin un
esquema del sistema de control, basado en un
microprocesador que presenta algunas de las
funciones que incluye un diluidor. Los contro-
les de este tipo de dispositivos, en general, son
simtricos si se manejan dos inyectores.
Ilustracin 23: Control del diluidor
l
1
l
o
V =A l
95
Di l ui dor 9
Sistema dispensador
El sistema dispensador est compuesto por un
conjunto de jeringas de alta precisin y de dis-
positivos denominados dispensadores, median-
te los cuales se suministran los fluidos segn vo-
lmenes y velocidades seleccionadas. Dichas je-
ringas se seleccionan e instalan en el diluidor,
dependiendo de las densidades y viscosidades, y
los volmenes de los fluidos objeto de manipu-
lacin. Los fluidos son transportados a travs de
conductos flexibles, cuyas caractersticas di-
metros, longitudes, compatibilidad qumica
han sido igualmente tenidas en cuenta en el
proceso de diseo y fabricacin, para que re-
sulten adecuadas con la actividad seleccionada.
Dichos conductos se interconectan utilizando
acoples que es posible ajustar mediante mani-
pulacin manual. Normalmente, las jeringas se
encuentran clasificadas de acuerdo con el uso
jeringas para reactivos, diluyentes, muestras,
y el volumen que es necesario manipular. La ta-
bla que se presenta a continuacin muestra un
ejemplo de la forma en que se encuentran cla-
sificadas de acuerdo con su tamao y volme-
nes procesados.
A continuacin, se incluye un esquema en el
que es posible ver los componentes del siste-
ma dispensador (jeringa y dispensador).
El diluidor debe ser instalado en un mesn o
superficie de trabajo limpia, bien nivelada, se-
ca y alejada de lugares donde pueda haber va-
pores que puedan afectar su funcionamiento.
Se debe disponer de un rea libre alrededor
del equipo para facilitar la ventilacin y el pa-
so de los cables y lneas de interconexin, con
otros dispositivos como depsitos de solven-
te, computadores o sistemas de suministro.
Se estima que el espacio libre alrededor del
diluidor es de aproximadamente 10 cm.
Tabla de tamaos de jeringa/volmenes manejados
Df Df 25 l 2,5-25 l 18 18
Df Df 50 l 5-50 l 18 18
Df Df 100 l 10-100 l 18 18
Df Df 250 l 25-250 l 18 18
Df Df 500 l 50-500 l 18 18
Df Df 1 l 100-1 000 l 18 18
Df Df 2,5 ml 250-2 500 l 18 12
Df Df 5 ml 500-5 000 l 12 12
Df Df 10 ml 1 000-10 000 l 12 12
Df Df 25 ml 2 500-25 000 l 12 12
Part e N
(Depende del
fabricant e)
Modelo
(Depende del
fabricant e)
Tamao
jeringa
Rango
(Volumen
procesado)
Tamao duct os
1
Soluciones
acuosas
Lquidos
viscosos
1
Tabla 2.4, Microlab 501A, 503A, 504A, Users Manual, Hamilton Company.
Ilustracin 24: Jeringa y dispensador
96
Debe haber una toma elctrica en buen esta-
do con polo a tierra, de 115 V, 60 Hz. Tambin
existen fabricantes que producen diluidores
que operan a 220 V, 60 Hz.
Las rutinas estn enfocadas principalmente a
eliminar los contaminantes que puedan de-
positarse sobre las superficies interiores de
los mecanismos y/o conductos que utiliza el
fluido durante su desplazamiento. Las rutinas
ms comunes son las siguientes:
Limpieza de superficies exteriores
Frecuencia: Diaria
1. Limpiar las superficies exteriores, utilizan-
do un trapo limpio humedecido con un de-
tergente suave mezclado con agua.
2. Frotar suavemente las superficies del dilui-
dor y de los accesorios.
3. Secar las superficies tratadas.
Limpieza de jeringas, mangueras o
conductos
Frecuencia: Diaria
1. Cebar el sistema con una solucin de limpie-
za. Consultar al fabricante para definir exac-
tamente cul utilizar. Verificar que la totali-
dad de los elementos del sistema entren en
contacto con dicha solucin y que se hayan
eliminado las burbujas de aire que pudieran
existir. Este proceso se conoce en ingls como
Prime. Para cebar el sistema se conecta el di-
luidor a un recipiente en el cual se encuentra
la citada solucin y se hace funcionar, recolec-
tando la solucin utilizada en otro recipiente
para su disposicin final.
2. Limpiar el sistema. Para efectuar la limpie-
za, se hace circular un fluido complemento
de la solucin limpiadora utilizada. (Con-
sultar las recomendaciones del fabricante).
Es comn utilizar agua desionizada como
fluido de limpieza. Dependiendo de las
sustancias procesadas en el diluidor, tam-
bin pueden utilizarse otros agentes de
limpieza como etanol, urea, o una solu-
cin de blanqueador a base de cloro di-
suelto en agua desionizada con una con-
centracin del 10 %.
Limpieza del sistema de conduccin
de fluidos
Frecuencia: Antes de colocar en servicio por
primera vez
1. Preparar un recipiente con solucin de lim-
pieza y colocar el tubo de llenado dentro
del mismo. (Los fabricantes recomiendan
utilizar agentes de limpieza compatibles
con los materiales de diluidor).
2. Col ocar l a sonda de mano dentro del re-
ci pi ente de l a sol uci n de l i mpi eza o
dentro del reci pi ente para recol ectar el
desperdi ci o.
3. Seleccionar un ciclo de cebado o imprima-
cin hasta que la trayectoria que recorre el
fluido quede limpia.
4. Retirar el tubo de llenado de la solucin
limpiadora y colocarlo dentro de un reci-
piente con agua desionizada. Iniciar nue-
vamente un ciclo de cebado o imprima-
cin, hasta que la trayectoria del fluido
quede libre de solucin limpiadora. Des-
cargar el fluido de enjuague dentro del re-
cipiente de desperdicio.
5. Suspender el ciclo de cebado.
Advertencia: Desconectar el diluidor de la
toma de alimentacin elctrica, antes de
iniciar los procesos de limpieza externa.
Advertencia: Evi tar que l a humedad
inunde el compartimiento de los compo-
nentes elctricos o electrnicos.
Advertencia: Si el diluidor ha estado en con-
tacto con sustancias peligrosas, se deben res-
petar los procedimientos de seguridad y pre-
vencin implementados en el laboratorio.
97
Di l ui dor 9
6. Colocar el sistema propulsor del fluido en
la posicin de descanso.
7. Utilizar el sistema, pues se encuentra lim-
pio y listo.
Procedimiento para almacenar el
diluidor
Frecuencia: Cuando se almacene por un pe-
rodo de tiempo prolongado
1. Purgar e imprimar el sistema utilizando
metanol (facilita el secado).
2. Remover los tubos y las jeringas.
3. Almacenar las jeringas en sus empaques
originales.
4. Cubrir el cuerpo del diluidor para prote-
gerlo de partculas de polvo.
5. Almacenar.
Control de calidad
El control de calidad de los diluidores es simi-
lar al de las pipetas. Para resolver las inquie-
tudes, se solicita ver la explicacin que al res-
pecto se ha efectuado en el captulo corres-
pondiente a las pipetas.
El di l ui dor no enci ende. Fal l a en l a al i ment aci n el ct ri ca. Revi sar acomet i da el ct ri ca.
El di l ui dor no aspi ra o di spensa. Tubos de l os si st emas hi drul i cos de-
f ect uosos o bl oqueados.
Veri f i car que l os t ubos, j eri ngas y conect ores
est n l i bres de bl oqueos. Li mpi ar o sust i t ui r.
Conexi ones i ncorrect as de t ubos o
j eri ngas.
Comprobar que los t ubos, uniones, acoples y je-
ringas ut ilizadas se encuent ran bien ajust ados.
Si st ema propul sor def ect uoso. Llamar al servicio t cnico del fabricant e.
Vl vul as def ect uosas. Remover l as vl vul as. Veri f i car el sel l o de l as
mi smas, l i mpi ar y rei nst al ar. Sust i t ui r por una
vl vul a equi val ent e en caso de ser requeri do.
El di l ui dor opera bi en, pero no hay
mensaj es o i ndi caci ones en l a pant al l a.
Posi bl e dao en l a pant al l a LCD o en
l os di odos emi sores de l uz LED.
Veri f i car que el cont rol est bi en conect ado al
si st ema propul sor.
Las t ecl as del cont rol no f unci onan. El di l ui dor est en modo Pausa. Presi onar el bot n Marcha/Fi n para f i nal i zar l a
carrera del pi st n.
Ll amar al servi ci o t cni co del f abri cant e.
El di l ui dor est at ascado. Fal l a i nt erna. Presi onar el bot n Marcha/Fi n para f i nal i zar l a
carrera del pi st n y rei ni ci ar el ci cl o.
Ll amar al servi ci o t cni co del f abri cant e, si l a
f al l a persi st e.
Cabl e de al i ment aci n el ct ri ca
desconect ado.
Conect ar cabl e de al i ment aci n el ct ri ca.
Fusi bl e de prot ecci n abi ert o. Revi sar f usi bl e de prot ecci n. Sust i t ui r por un
equi val ent e si el mi smo se encuent ra abi ert o.
98
DEFINICIONES BSICAS
Cavitacin. Fenmeno que se presenta en
los fluidos cuando alcanzan condiciones de
alto vaco. (La presin disminuye hasta que se
alcanza la presin de vapor del fluido). Esto
produce diversos fenmenos como la vapori-
zacin de los gases disueltos en el lquido o,
en el caso del agua, la formacin de burbujas
de vapor que colapsan tras un lapso de tiem-
po infinitesimal, horadando las superficies de
los conductos en los puntos localizados en la
vecindad inmediata del lugar de ocurrencia
del fenmeno. En los diluidores se presenta
cuando se utilizan jeringas de gran capaci-
dad, con velocidades elevadas de propulsin.
Concentracin. Medida de la cantidad de so-
luto presente en una disolucin, desde el punto
de vista de la qumica. El concepto se aplica con
mayor frecuencia a las soluciones y se expresa
como la cantidad de un soluto que se encuentra
disuelto en un solvente. La concentracin se ex-
presa de diversas formas; las ms comunes son:
molaridad [M], molalidad [m], normalidad [N],
tanto por ciento de soluto.
Diluir. Reducir la concentracin de soluto en
una mezcla, aadiendo otro fluido. El fluido
que se aade se conoce como diluyente.
Disolucin. Estado que se presenta como re-
sultado del proceso de intercalar totalmente
las molculas de una sustancia slida, con las
El diluidor produce result ados imprecisos. Exi st e ai re en el ci rcui t o del f l ui do. Veri f i car que l os t ubos de aspi raci n se en-
cuent ren compl et ament e sumergi dos dent ro
de l os reci pi ent es que cont i enen l os react i vos.
Aparece un pequeo espaci o de ai re en
l a punt a de l a sonda despus de l a as-
pi raci n f i nal .
Tubo de aspi raci n suci o. Cambi ar o l i mpi ar el t ubo de aspi raci n.
El di l ui dor se recal i ent a. Vent i l aci n i nadecuada. Revi sar l a vent i l aci n.
Temperat ura del ambi ent e demasi ado
al t a.
Revi sar el si st ema de acondi ci onami ent o de
ai re del ambi ent e.
Ci cl o de t rabaj o muy i nt enso. Ut i l i zar el di l ui dor con menor i nt ensi dad.
Exi st e presenci a de ai re en f orma per-
si st ent e o f ugas const ant es en l a t ra-
yect ori a del f l ui do.
Se present a cavi t aci n en el si st ema. La
vel oci dad de aspi raci n es muy al t a.
Reducir la velocidad del sist ema propulsor. Recor-
dar que, mient ras ms viscosos sean los fluidos,
deben manipularse a menor velocidad.
Acopl es f l oj os, gast ados o def ect uosos. Aj ust ar l os acopl es con l a mano. Sust i t ui r l os
t ubos por ot ros de di mensi n acorde al f l ui do
procesado.
Pi st n def ect uoso o j eri nga daada. Reempl azar el pi st n o l a j eri nga.
Vl vul a def ect uosa. Reempl azar l a vl vul a.
Modo de aspi raci n i ncorrect o. Reduci r l a vel oci dad de aspi raci n.
Tubo de descarga mal sel ecci onado en
rel aci n con l a capaci dad de l a j eri nga.
Veri f i car el t amao recomendado del t ubo ut i -
l i zado y l os acopl es del mi smo. Para vol me-
nes pequeos ut i l i zar l as di mensi ones reco-
mendadas por el f abri cant e.
Conf i rmar que l os di versos conect ores se en-
cuent ran aj ust ados.
Veri f i car que l as j eri ngas se encuent ren co-
rrect ament e i nst al adas y no present an f ugas.
Comprobar que l os t ubos o vl vul as no pre-
sent an f ugas.
Reduci r l a vel oci dad de operaci n de l a j eri n-
ga para el i mi nar probl emas de cavi t aci n.
99
Di l ui dor 9
molculas de una sustancia lquida, o las mol-
culas de una sustancia lquida con las molcu-
las de otra sustancia lquida. El componente
ms abundante se llama solvente o disolvente
y el menos abundante, soluto. Para determinar
una disolucin de volumen V2 y concentracin
C2 a partir de una disolucin concentrada de
concentracin C1, se calcula el volumen V1 me-
diante la siguiente ecuacin:
Dispensador. Dispositivo utilizado para dis-
tribuir lquidos.
Dispensar. Distribuir un fluido; puede hacer-
se a volumen constante o de forma progresiva.
Equivalente gramo [Eq]. Masa en gramos de
soluto, dividido por su peso equivalente [PE]:
Mol. Peso molecular (PM) del soluto expresa-
do en gramos:
Molalidad [m]. Nmero de moles de una
sustancia dada, por cada 1 000 g de solvente.
As una solucin m molal se obtiene al aadir
m moles de la sustancia a 1 000 g de agua.
Molaridad [M] (de un soluto). Nmero de mo-
les de soluto por cada litro de disolucin final.
Una solucin N Molar de un cido se obtiene al
aadir N moles del cido al agua hasta obtener
un (1) litro de solucin. Normalmente, la fr-
mula empleada es la siguiente:
Normalidad [N] (de un soluto). Nmero de
equivalentes de soluto, por cada litro de diso-
lucin final:
Peso equivalente [PE] (de una sustancia).
Resultado de dividir el peso molecular [PM]
de la sustancia por su valencia:
Peso/Volumen. Relacin muy utilizada en
bioqumica clnica. Expresa la masa del soluto
en gramos o submltiplos de este, por unidad
de volumen en litros o submltiplos de litro.
Por ejemplo: g/l, mg/ml.
Solucin. Mezcla homognea de una o ms
sustancias disueltas en otra sustancia. A la
sustancia disuelta se le da el nombre de solu-
to, mientras que la sustancia que disuelve se
llama solvente. El solvente existe en mayor
cantidad que el soluto en una solucin.
V
1
=
V
2
C
2
C
1
N =
Eq
Vol (L)
PE =
PM (g)
Valencia
Eq =
masa(g)
PE(g)
moles =
masa(g)
PM
M =
moles
Vol (L)
Nota: Para medir concentraciones extre-
madamente bajas, se utiliza otro tipo de
notacin, conocida como notacin "parte
por-unidad". Por ejempl o: partes por mi -
l l n (ppm) si gni fi ca que exi ste una par-
t cul a de una sustanci a dada por cada
999 999 part cul as de otras sustanci as.
100
Bibliografa
Salgado, J., Hover., R., Biologa molecular y celular, Curso 2003-2004.
Sienko, M., Plane, R., Qumica, Madrid, Mc Graw Hill Co., 1971.
The Microlab
500 Series: Microlab 501A, Microlab 503A, and Microlab 504A, Users Ma-
nual, Hamilton, Part Number 69175, Rev. D.
The Microlab
500 Series: Microlab 510B, 530B, and 540B, and Microlab 511C, 531C, and
541C, Users Manual, Hamilton, Part Number 69176, Rev. D.
101
DISPENSADOR
El dispensador es un equipo de la familia de
las pipetas y los diluidores. La palabra dispen-
sar proviene de la preposicin inseparable dis
que implica privacin, y de la palabra latina
pensumque significa tarea. En el laboratorio
se encuentran diversas clases de dispensado-
res, los hay para atender las necesidades del
rea de qumica, pero tambin modelos que
efectan una labor anloga, aunque varan
en diseo como los utilizados en microbiolo-
ga, bacteriologa, inmunologa y farmacolo-
ga. Finalmente hay unidades de dispensa-
cin automatizadas, controladas mediante
programas de computador, que se utilizan en
instituciones de gran demanda de servicios
en donde se han automatizado los procedi-
mientos. Este captulo presenta los dispensa-
dores de tipo porttil por considerar que son
los ms comunes.
CAPTULO 10
Dispensador
Cdigo (s) ECRI
16-274
Di spensadores de l qui dos para l aborat ori o
Ilustracin 25: Dispensador
ESQUEMA Y FOTOGRAFA DEL DISPENSADOR
Esquema Fot ograf a
102
PROPSITO DEL DISPENSADOR
El dispensador es un equipo multipropsito
que puede utilizarse en el laboratorio para
realizar las siguientes actividades:
1. Aspirar y dispensar volmenes de lquidos
o soluciones que no requieren mayor
exactitud.
2. Distribuir un volumen de lquido o solu-
cin almacenado en un recipiente conte-
nedor en volmenes parciales predefini-
dos, mediante un dispositivo de suministro
(dispensaciones repetitivas con volumen fi-
nal constante).
3. Mezclar una solucin mediante operacio-
nes sucesivas de aspiracin y dispensacin,
utilizando un dispositivo de aspiracin y
suministro.
4. Titular. Determinar la concentracin de
una solucin, midiendo exactamente los
vol menes di spensados (di spensaci ones
consecutivas hasta lograr el punto final).
5. Diluir. Reducir la concentracin de una so-
l uci n, uti l i zando mezcl as control adas.
(Adicin de dos reactivos a un vial frasco
comn).
6. Utilizar como una pipeta (aspirar un volu-
men y luego dispensarlo).
7. Distribuir medios de cultivo en placas Petri.
Generalmente para esta funcin se utilizan
dispensadores automatizados, dotados de
accesorios para mover las placas de Petri y
almacenarlas una vez dispensado el medio
de cultivo. Para aplicaciones puntuales pe-
quea escala, la distribucin de medios de
cultivo se efecta utilizando jeringas plsti-
cas desechables con agujas N 16
1
.
Di chas acti vi dades normal mente pueden
programarse en el dispensador, siguiendo
las instrucciones que para el efecto brinda el
fabricante.
Los dispensadores modernos, por lo general,
estn controlados por microprocesadores y
disponen de los siguientes componentes
2
:
1. Selector de volumen. Grada el volumen
que se requiere dispensar. La seleccin he-
cha se muestra directamente en la panta-
lla del dispensador.
2. Pantalla digital. Presenta los datos relacio-
nados con la funcin seleccionada, tales
como volumen seleccionado, tipo de pun-
ta colocada y la informacin relacionada
con los mensajes de alarma o error que
puedan generarse durante la operacin.
Ejemplo: batera baja o punta mal selec-
cionada para el volumen seleccionado.
3. Palanca de dosificacin. Permite efectuar
la dosificacin accionando un mbolo que
se encuentra acoplado a una bomba de
desplazamiento positivo tipo jeringa, en el
cual acciona un pistn a lo largo de un ci-
lindro para desplazar un volumen.
4. Palanca de llenado. Dispositivo mecnico que
acciona el mbolo de la bomba de desplaza-
miento positivo para aspirar los volmenes.
5. Botn de expulsin. Mecanismo que libera
el elemento de dispensacin de la cabeza
de dosificacin.
6. Acople del dispensador. Es el vstago me-
diante el cual el elemento dosificador se
acopla a la cabeza dispensadora, contiene
un sistema de sellos y guas para asegurar
su ajuste adecuado.
7. Escala de dosificacin. Permite conocer el
volumen mximo que puede dispensar con
el elemento de dosificacin seleccionado.
En algunos casos, tambin permite saber
cul es el volumen remanente.
8. El emento de di spensaci n. Depsi to que
conti ene l a sol uci n que se aspi ra o se
1
Product Information Sheet. 3cc Syringes. For dispensing and plating Methocult
.
http://www.stemcell.com/technical/28230_28240-PIS.pdf
2
La numeracin de la descripcin corresponde a la utilizada en la ilustracin.
103
Di spensador 10
sumi ni stra en ci cl os de di spensaci n. Hay
una gran variedad, dependiendo del mo-
delo. Los hay sencillos y combinados (con
varias puntas de dispensacin).
9. Punta de dispensacin. Permite suministrar
o succionar las soluciones con las cuales se
trabaja. La punta constituye un elemento
indispensable para la correcta operacin
del dispensador, y se encuentra ubicada en
el elemento de dispensacin. Sin esta es
imposible utilizar el dispensador.
10.Un interruptor de encendido/apagado.
(No mostrado en la ilustracin).
11. Depsito de bateras. (No mostrado en la
ilustracin).
Componentes de dispensacin
Para que el dispensador realice las operaciones
arriba mencionadas, se requiere utilizar una se-
rie de accesorios que han sido diseados para
realizar tareas especficas. En la ilustracin que
se presenta a continuacin, se muestran algunos
de los modelos disponibles.
Volmenes utilizados
Los dispensadores han sido desarrollados pa-
ra trabajar con rangos predefi ni dos de vol u-
men. Cuando se requi era uti l i zarl os deber
consi derarse el ti po de sol uci n que se pre-
tende trabajar y l os vol menes a di spensar.
Los fabri cantes ofrecen di versos model os.
Se presenta una tabl a con rangos t pi cos de
trabajo.
Ilustracin 26: Elementos dispensadores
Capacidad element o
dispensador
0,1 ml
Rango volmenes
dispensados
1-20 l
0,2 ml 2-40 l
1 ml 10-100 l
5 ml 50-500 l
10 ml 100 l a 2 ml
25 ml 250 l a 5 ml
104
Dependiendo del tipo de dosificador, se re-
quiere contar con unas condiciones mnimas,
entre las que se destacan las siguientes:
1. Verificar que el dispensador haya sido disea-
do para trabajar con las soluciones que se
pretenden utilizar. Verificar la compatibilidad
de los materiales en el manual de uso y ope-
racin que suministra el fabricante.
2. Un ambiente limpio, dotado de puestos de
trabajo bien dimensionados y de una bue-
na ventilacin e iluminacin.
3. Verificar que la temperatura del ambiente
donde se utiliza sea estable, con un rango
de variacin de 0,5 C, que se encuentre
entre los 4 y los 40 C, es ptima una tem-
peratura de 20 C.
4. Utilizar los elementos de proteccin ade-
cuados, si se trabaja con materiales txicos
o que conlleven riesgo biolgico.
5. Utilizar las puntas que el fabricante ha di-
seado para cada aplicacin en particular.
El mantenimiento del dispensador es sencillo.
Las rutinas detalladas a continuacin desta-
can las actividades ms importantes:
Frecuencia: Diaria
1. Limpiar el dispensador con una pieza de
tela humedecida con un detergente suave.
2. Desinfectar el dispensador utilizando iso-
propanol al 60 %.
3. Evitar que la humedad inunde el interior
del control electrnico y/o los mecanismos.
Cambio de batera
1. Abrir el compartimiento de la batera. Por
lo general, solo debe deslizarse una tapa
de la posicin "cerrada" a la posicin
"abierta".
2. Retirar la batera agotada. Procesar como
desecho siguiendo las recomendaciones.
3. Instalar una batera con iguales caracters-
ticas de la original. Verificar la polaridad
elctrica para que quede bien instalada.
Antes de colocarla en su alojamiento, lim-
piar la superficie de contacto con una pie-
za de tela limpia.
4. Cerrar y ajustar la tapa.
No es posi bl e i nst al ar l os component es
di spensadores en l a cabeza de
dosi f i caci n.
Component e def ect uoso. Sol i ci t ar servi ci o t cni co especi al i zado.
La punt a del di sposi t i vo di spensador
got ea.
Punt a def ect uosa. Sust i t ui r punt a di spensadora.
Di sposi t i vo di spensador no puede ser
ret i rado de l a cabeza de dosi f i caci n.
Fal l a en el si st ema el ect rni co. Rei ni ci ar equi po. (Apagar y encender). Sel ec-
ci onar opci n de ext racci n manual .
Fal l a en el mecani smo de aj ust e. Veri f i car si el pi st n se despl aza haci a adel an-
t e y at rs. Ret i rar el ci l i ndro sobre un reci pi en-
t e para ret ener desperdi ci os.
Component e di spensador cont ami nado. Observar si exi st e al gn t i po de obst rucci n.
Li mpi ar si es necesari o. Sol i ci t ar servi ci o t cni -
co especi al i zado.
105
Di spensador 10
DEFINICIONES BSICAS
Disco Petri. Plato de poca profundidad ela-
borado en vidrio o plstico que se usa para
efectuar cultivos de microorganismos en el
laboratorio.
Elemento dispensador. Dispositivos utili-
zados con una cabeza dispensadora para
transferir una solucin a la placa o recipien-
te donde ser examinado o almacenado. Las
caractersticas de los elementos dispensado-
res varan de acuerdo con la magnitud de los
volmenes a dispensar y de las caractersticas
de la solucin.
Medio de cultivo. Material lquido o slido
desarrollado con propsitos mdicos para
cultivar e identificar microorganismos capa-
ces de producir enfermedades (patgenos).
Mezclar. Agregar sustancias sin que exista
reaccin qumica entre las mismas. En una
mezcla homognea, la composicin y el as-
pecto deben ser iguales en todas las partes de
la misma.
Di sposi t i vo di spensador t i po pi pet a
got ea.
Punt a di spensadora mal aj ust ada. Li berar l a punt a di spensadora del cono de
aj ust e. Aj ust ar f i rmement e.
La pant al l a present a l a seal de bat era
baj a.
Bat era agot ada. Reempl azar bat era.
La pant al l a present a error de vol umen
compl et o.
Se ha t rat ado de aspi rar ms l qui do
del que puede reci bi r el reci pi ent e de
al macenami ent o o l a punt a ut i l i zada.
Di spensar. Revi sar l a operaci n que t rat a de
hacerse.
La pant al l a present a error de l l enado. Lqui do i nsuf i ci ent e para di spensar. Veri f i car que el vol umen di sponi bl e para di s-
pensar sea adecuado. Si no l o es, cargar o as-
pi rar un vol umen que resul t e adecuado a l a
cant i dad que se qui ere di spensar.
La pant al l a present a seal es de error. Sol i ci t ar servi ci o t cni co especi al i zado.
La pant al l a no present a ni nguna seal . Bat era agot ada. Reempl azar bat era.
Si st ema el ect rni co def ect uoso. Sol i ci t ar servi ci o t cni co especi al i zado.
Punt a di spensadora mal sel ecci onada. Verificar el tipo de punta definida por el fabricante.
La pant al l a present a error de punt a
sel ecci onada.
La punt a i nst al ada en el equi po no es-
t di seada para real i zar l a operaci n
que se pret ende.
Veri f i car qu t i po de punt a est di seada pa-
ra real i zar l a operaci n. Sust i t ui r l a punt a.
Punt a def ect uosa. Col ocar punt a nueva, con l as mi smas especi f i -
caci ones de l a ori gi nal .
Pi st n o sel l o del pi st n daados. Reempl azar el pi st n y l os sel l os. Ut i l i zar re-
puest os sumi ni st rados por el f abri cant e.
106
Bibliografa
Dilutors and dispensers, Hamilton Company. (www.hamiltoncompany.com)
Manual de Instruccin, Dispensador Eppendorf
5222, Hamburg, Eppendorf AG. B 5522

900.028-01/0301.
Multipette Pro
Instruction manual, Hamburg, Eppendorf AG. B 4985 900.014-02/1103.

(http://www.eppendorf.com/script/cms-newspic.php)
Multipette
R Plus, Instruction manual, Hamburg, Eppendorf AG B 4981 900.010-09/0904.

(http://www.eppendorf.com/script/cms-newspic.php)
Product Information Sheet, 3cc Syringes, For dispensing and plating Methocult
.
(http://www.stemcell.com/technical/28230_28240-PIS.pdf)
107
ESPECTROFOTMETRO
La palabra espectrofotmetrose deriva de la pa-
labra latina spectrum, que significa imagen, y de
la palabra griega phos o photos, que significa
luz. El espectrofotmetro, construido mediante
procesos avanzados de fabricacin, es uno de los
principales instrumentos diagnsticos y de inves-
tigacin desarrollados por el ser humano. Utili-
za las propiedades de la luz y su interaccin con
otras sustancias, para determinar la naturaleza
de las mismas. En general, la luz de una lmpa-
ra de caractersticas especiales es guiada a travs
de un dispositivo que selecciona y separa luz de
una determinada longitud de onda y la hace pa-
sar por una muestra. La intensidad de la luz que
sale de la muestra es captada y comparada con
la intensidad de la luz que incidi en la muestra
y a partir de esto se calcula la transmitancia de
la muestra, que depende de factores como la
concentracin de la sustancia.
FOTOGRAFAS DEL ESPECTROFOTMETRO
PROPSITO DEL EQUIPO
El espectrofotmetro se usa en el laboratorio
con el fin de determinar la concentracin de
una sustancia en una solucin, permitiendo
as la realizacin de anlisis cuantitativos.
Como principio bsico se considera que la luz
es una forma de energa electromagntica,
que en el vaco tiene una velocidad constan-
te [C] y universal de aproximadamente 3 x 10
8
m/s. En cualquier otro medio (transparente)
por el que pase la luz, su velocidad ser lige-
ramente inferior y podr calcularse mediante
la siguiente ecuacin:
CAPTULO 11
Espect rof ot met ro
Cdigo (s) ECRI
15-083
Espect rof ot met ros de l uz vi si bl e/ul t ravi ol et a
15-082 Espect rof ot met ros de ul t ravi ol et a
15-084 Espect rofot met ros de luz visible
Espect rof ot met ro clsico
ht t p://ekoi neko.nucl eo.pl /en/spekt of ot omet ry.ht ml #
Espect rof ot met ro moderno
http://www.biochrom.co.uk/images/spectro/ultro100pro_white.jpg
v
0
=
C
n
108
donde:
v = velocidad a travs del medio por el
que pasa la luz
n = ndice de refraccin del medio, cuyo
valor oscila, por lo general, entre 1,0
y 2,5
La energa electromagntica dispone de una
muy amplia gama de longitudes de onda. Al-
gunos ejemplos se muestran en la siguiente
tabla
1
:
La luz, al pasar o interactuar con diversos me-
dios, presenta una serie de fenmenos, entre
los que destacan la reflexin, refraccin, di-
fraccin, absorcin, difusin, polarizacin y
otros que son utilizados en diversos instru-
mentos y dispositivos. La siguiente tabla
muestra los rangos de longitud de onda en
donde se utiliza el espectro luminoso para
realizar pruebas de espectrofotometra.
Con respecto a la interaccin de la luz con la
materia, el siguiente esquema ayuda a enten-
der la complejidad de los fenmenos que
ocurren:
1
Lobkowicz, F., Melissinos, A., Physics for Scientists and Engineers, vol. II, Philadelphia, WB SAUNDERS CO., 1975.
Tipo de energa
elect romagnt ica
Ondas de radi o
Rango de la longit ud
de onda
De pocos met ros a pocos ki l met ros
Ondas de radar De 1 a 10 cm
Ondas i nf rarroj as De 1 a 10 mi cras (10
-6
m)
Luz vi si bl e De 300 a 700 nm (nanmet ros)
Rayos X De 0,1 a 0,5 (ngst rom)
Rayos gama Aprox. 0,0012 (ngst rom)
Regin del
espect ro luminoso
Ul t ravi ol et a
Rango de la longit ud de onda
10-200 nm (nanmet ros)
Ul t ravi ol et a cercano 200-280 nm
Luz vi si bl e 380-780 nm
Inf rarroj o cercano 780-3 000 nm
Inf rarroj o medi o 3 000-20 000 nm
Inf rarroj o l ej ano 30 000-300 000 nm
Ilustracin 27: Interaccin de la luz con la materia
109
Espect rof ot met ro 11
El esquema muestra que la radiacin incidente
[Io] sufre una serie de transformaciones. Parte
de la misma se refleja [Ir], parte se transmite [It],
parte se difunde [Id] y parte se absorbe e incide
directamente en fenmenos como la fluores-
cencia [If]. Los fenmenos en los que se basa la
espectrofotometra son principalmente la absor-
cin y la transmisin. Para entender cmo se uti-
lizan, es necesario adicionalmente tener en
cuenta la ley de Beer Lambert.
Ley de Beer Lambert. Se conoce tambin co-
mo ley de Beer o de Beer Lambert Bouguer e
identifica la relacin existente entre la concen-
tracin de la muestra y la intensidad de la luz
transmitida a travs de la misma. Con relacin a
la ley en mencin hay implcitos dos conceptos:
transmitancia [T] y absorbancia [A].
La transmitancia [T] es la fraccin de la luz inci-
dente que a una determinada longitud de onda
pasa a travs de la muestra. Se define por la si-
guiente relacin:
donde:
It = intensidad de la radiacin transmitida
Io = intensidad de la radiacin incidente
El porcentaje de transmitancia [%T] puede ex-
presarse por la siguiente ecuacin:
La concentracin de molculas absorbentes de
luz en la muestra es proporcional a la absorban-
cia [A] de la muestra. Matemticamente se ex-
presa as:
A = x l x c
donde:
A = absorbancia medida
= coeficiente de absortividad molar
[litros/moles/cm]
l = distancia de la trayectoria recorrida
por la luz dentro de la muestra
c= concentracin de la muestra [moles/litros]
La absorbancia [A] se relaciona con la transmi-
tancia [T] mediante la siguiente ecuacin:
El siguiente esquema explica el fenmeno de la
absorbancia A:
Las curvas que se presentan a continuacin
muestran cmo vara la absorbancia [A] y la
transmitancia [T] en funcin de la concentracin
[C], de acuerdo con la ley de Beer Lambert, en la
que se basa la espectrofotometra
2
.
Grfica transmitancia
T =
It
Io
%T = x 100
It
Io
A =Log
10
=Log
10
=Log
10
10
x c x l
= x c x l
1
T
I
o
I
T
Ilustracin 28: Fenmeno de absorbancia
2
Instruction Manual, Spectrophotometer, SmartSpec 3000, Catalog N 170-2501.
A =Log
1
T
111
Fuente luminosa
Dependiendo del tipo de espectrofotometra, la
fuente luminosa puede ser una lmpara con fi-
lamento de tungsteno para luz visible, o una
lmpara de arco de deuterio para luz ultraviole-
ta. Algunos fabricantes han diseado espectro-
fotmetros con lmparas intermitentes de xe-
nn de alta duracin que emiten luz en el ran-
go de la luz visible y ultravioleta. La lmpara o
lmparas vienen montadas de fbrica en una
base que permite asegurar una determinada
posicin, para que se mantengan las condicio-
nes de ajuste ptico y enfoque cuando est en
operacin o se requiere reemplazarla. La ener-
ga radiante tpica que emite una lmpara de
tungsteno est entre los 2 600 y los 3 000 K
(grados Kelvin).
Monocromador
Est compuesto por un conjunto de elementos.
En general, dispone de una rendija o ranura de
entrada que limita la radiacin lumnica produ-
cida por la fuente y la confina en un rea de-
terminada, un conjunto de espejos para pasar
la luz a travs del sistema ptico, un elemento
para separar las longitudes de onda de la ra-
diacin lumnica, que puede ser un prisma o
una rejilla de difraccin, y una rendija de salida
para seleccionar la longitud de onda con la
cual se desea iluminar la muestra. Las rejillas de
difraccin tienen la ventaja de eliminar la dis-
persin no lineal y son insensibles a los cambios
de temperatura.
Portador de muestras
Est diseado para sostener la muestra que se
quiere analizar dentro del rayo de luz de longi-
tud de onda determinada por el monocromador.
El elemento que contiene la muestra es una cel-
da o cubeta, por lo general, rectangular. Las cel-
das o cubetas se fabrican de vidrio, si se requie-
ren efectuar estudios en el rango de los 340 a los
1 000 nm y de slice, si el anlisis est en el rango
comprendido entre los 220 y los 340 nm. Tam-
bin hay celdas en materiales plsticos como es-
tireno o poliestireno. El portador de muestras lo
disean los fabricantes de acuerdo al tipo de es-
pectrofotmetro y de muestra a analizar, por
ello se encuentran portadores de muestra con
microceldas, aunque tambin tubos de ensayo y
otras variantes como las celdas de flujo continuo.
Sistema detector
El sistema de deteccin puede estar diseado
con fotoceldas, fototubos, fotodiodos o foto-
multiplicadores. Esto depende de los rangos de
longitud de onda, de la sensibilidad y de la velo-
cidad de respuesta requeridas. El sistema de de-
teccin recibe la energa lumnica proveniente
de la muestra y la convierte en una seal elctri-
ca proporcional a la energa recibida. La seal
elctrica puede ser procesada y amplificada, pa-
ra que pueda interpretarse a travs del sistema
de lectura. En la tabla que se incluye a continua-
cin, se presenta un resumen de las ventajas y
desventajas de los dispositivos normalmente
usados en los sistemas de deteccin.
Tabla de ventajas y desventajas dispositivos de deteccin
Fot ocel das
ELEMENTO
Econmi cas
VENTAJAS
Longi t ud de onda l i mi t ada ent re 400 y 750 nm.
Fot ot ubos Se f abri can para que sean sensi bl es ent re l os
190 y l os 650 nm. Tambi n ent re l os 600 y l os
1 000 nm.
Requi eren cal i braci ones, dependi endo de l a
t emperat ura del ambi ent e en que se encuen-
t ra i nst al ado el equi po.
Se agot an con al t os ni vel es de i l umi naci n.
Pequeas Baj a sensi bi l i dad.
Robust as Respuest a l ent a a cambi o de i nt ensi dad
l umni ca.
No requi eren f uent es de energa ni ampl i f i ca-
dores de seal .
Agot ami ent o.
La seal es muy dependient e de la t emperat ura.
DESVENTAJAS
112
Sistema de lectura
La seal que sale del detector recibe diversas
transformaciones. Se amplifica y se transforma
para que su intensidad resulte proporcional al
porcentaje de transmitancia/absorbancia. Existen
sistemas de lectura de tipo anlogo (muestra la
magnitud leda sobre una escala de lectura) o di-
gital (muestra la magnitud leda en una pantalla).
Los indicadores de tipo anlogo reciben tradicio-
nalmente el nombre de metros. Su exactitud de-
pende, entre otros factores, de la longitud de la
escala y del nmero de divisiones que tenga.
(Mientras ms divisiones, ms exacto). Su princi-
pal desventaja es que pueden ser mal ledos, por
la fatiga de los operadores o errores, cuando dis-
ponen de varias escalas, al tratar de identificar
las escalas sobre las que deben realizar la lectura.
Los indicadores digitales usualmente presentan los
resultados en una pantalla, en forma de caracteres
alfanumricos luminosos. Esto los hace menos pro-
pensos a que se cometan errores de lectura.
Para el funcionamiento de un espectrofot-
metro se requiere lo siguiente:
1. Una fuente de suministro elctrico de
acuerdo con las normas y estndares im-
plementados en el pas. En los pases ame-
ricanos se utilizan, por lo general, voltajes
de 110 V y frecuencias de 60 Hz.
3. Una mesa de trabajo estable, que est ale-
jada de equipos que generen vibraciones
(centrfugas, agitadores).
MANTENIMIENTO DEL
ESPECTROFOTMETRO
Los espectrofotmetros, en general, son equi-
pos muy especializados y costosos. Su conserva-
cin depende en gran medida de la forma de
instalacin y utilizacin. El medio ambiente
que los rodea y la calidad de los servicios de
electricidad constituyen factores de primordial
importancia, para que los equipos puedan
prestar los servicios de acuerdo con las especifi-
caciones para los que fueron fabricados. Las ru-
tinas de mantenimiento que pueden llegar a
requerir varan en complejidad, van desde la
limpieza cuidadosa de sus componentes hasta
procedimientos especializados, que solo deben
realizar tcnicos o ingenieros que hayan recibi-
do la capacitacin correspondiente y dispon-
gan de la informacin tcnica desarrollada por
los fabricantes y que se ajustan a los distintos
Fot odi odos
ELEMENTO
Carecen de part es mecni cas mvi l es.
VENTAJAS
Fot omul t i pl i cadores Son ms sensi bl es que l os f ot ot ubos y l as
f ot ocel das.
Pueden quemarse, si l a l uz di urna penet ra
cuando est n t rabaj ando.
Trabaj an en rangos ms ampl i os de l ongi t udes
de onda.
Son cost osos.
Ti enen respuest as ms rpi das a l os cambi os
de i nt ensi dad l umi nosa.
Necesi t an f uent e de al t o vol t aj e.
No se agot an como l as f ot ocel das. Se usan solo en espectrofotmetros especializados.
Pueden ser f abri cados con sensi bi l i dad a l a l uz
en t odo el rango de l a l uz ul t ravi ol et a y vi si bl e.
(Desde 190 hast a 900 nm).
Adquieren datos espectrales de forma simultnea.
Di sponen de un rango di nmi co ampl i o.
Bri ndan excel ent e reproduci bi l i dad de l a l ongi -
t ud de onda.
DESVENTAJAS
114
1. Revisar que la estructura de la mesa de tra-
bajo, donde se encuentra instalado el es-
pectrofotmetro, est en buen estado.
2. Comprobar la estructura general del es-
pectrofotmetro. Verificar que los boto-
nes o interruptores de control, los cierres
mecnicos, estn montados firmemente y
su sealacin o identificacin sea clara.
3. Controlar que los accesorios estn limpios,
no presenten grietas y su estado funcional
sea ptimo.
4. Confirmar que los elementos mecnicos de
ajuste tuercas, torni l l os, abrazaderas,
etc. se encuentren ajustados y en buen
estado.
5. Revisar que los conectores elctricos no
presenten grietas o rupturas. Comprobar
que estn unidos correctamente a la lnea.
6. Verificar que los cables no presenten em-
palmes ni aislantes rados o gastados.
7. Revisar que los cables, abrazaderas y ter-
minales estn libres de polvo, suciedad o
corrosin. Tampoco deben presentar des-
gastes o seales de mal estado.
8. Examinar que el sistema de puesta a tierra
interno y externo sea estandarizado, de
un tipo aprobado, sea funcional y est ins-
talado correctamente.
9. Controlar que los conmutadores o inte-
rruptores de circuito, los portafusibles y los
indicadores, se encuentren libres de polvo,
suciedad o corrosin.
10.Comprobar que los componentes elctricos
externos funcionen sin sobrecalentamientos.
Mantenimiento general
Limpieza de derrames. En caso de que se
produzca un derrame en el sistema porta-
muestras, debe limpiarse el derrame median-
te el siguiente procedimiento:
1. Apagar el espectrofotmetro y desconec-
tar el cable de alimentacin elctrica.
2. Usar una jeringa para limpiar el porta-
muestras. Absorber la mayor cantidad de
lquido que pueda extraerse.
3. Secar el portamuestras con un hisopo de
algodn tipo medicinal.
4. Utilizar papel especial para la limpieza de
lentes o un trozo de tela limpia de textura
suave, libre de hilazas, para limpiar la ven-
tana de la fotocelda.
5. Limpiar el exterior del instrumento con
una pieza de tela humedecida con agua
destilada. Incluir la pantalla, los controles
y el teclado.
Limpieza de cubetas de cuarzo. Para man-
tener en buenas condiciones las cubetas de
cuarzo, se recomienda realizar el siguiente
procedimiento:
1. Lavar las cubetas utilizando una solucin
alcalina diluida como NaOH, 0,1 M y un
cido diluido tal como HCl, 0,1 M.
2. Enjuagar l as cubetas vari as veces con
agua destilada. Usar siempre cubetas lim-
pias cuando se requiere tomar medidas
de absorbancia.
3. Efectuar procedimientos de limpieza rigu-
rosos y cuidadosos a las cubetas, siempre
que se utilicen muestras que pudieran de-
positar pelculas. Algunos fabricantes reco-
miendan utilizar detergentes especiales
para limpiar las cubetas.
Cambio de bateras. Diversas clases de es-
pectrofotmetros utilizan bateras para man-
tener en memoria datos asociados a los an-
lisis como fecha y horas. El procedimiento es
similar en las diversas clases de equipo. Se re-
comienda seguir este procedimiento:
1. Verificar que en la pantalla del instrumen-
to aparezca la indicacin de batera baja.
115
2. Apagar el espectrofotmetro.
3. Desconectar el cabl e de al i mentaci n
el ctri ca.
4. Abrir el compartimiento de las bateras y
retirar las bateras agotadas.
5. Limpiar los puntos de contacto elctrico.
6. Instalar bateras nuevas, con las mismas es-
pecificaciones de las originales.
7. Cerrar de nuevo el compartimiento.
8. Reconectar el equipo.
9. Ajustar nuevamente los datos de fecha y
hora.
Cambio de bombillo/lmpara. El bombillo
es un elemento de consumo, por tanto su vi-
da til es limitada y debe preverse que en al-
gn momento ser necesario sustituirlo, bien
porque se quem, o porque ha sufrido proce-
sos de evaporacin y metalizacin interna, y
la luz emitida ya no cumple con las especifi-
caciones requeridas para ser utilizada en pro-
cesos de espectrofotometra. El proceso de
cada modelo difiere y deben siempre seguir-
se las indicaciones del fabricante del equipo.
Los procesos comunes a seguir se presentan a
continuacin.
1. Verificar que el bombillo no funciona o
existe alguna seal o indicacin de que
tiene una falla. En equipos modernos apa-
recer una seal en la pantalla o un cdi-
go de error. En equipos antiguos se ver
que el bombillo no encendi.
2. Apagar el espectrofotmetro.
3. Desconectar el cable de alimentacin.
4. Desajustar los tornillos que aseguran la ta-
pa del compartimiento de la lmpara.
5. Desajustar los tornillos que fijan el meca-
nismo que sujeta la lmpara.
6. Desajustar los tornillos que fijan los cables
de la conexin elctrica a la lmpara. (En
algunos equipos podra no ser necesario,
pues la base de montaje dispone de meca-
nismos de contacto directos a los termina-
les de contacto de la lmpara).
7. Instalar una lmpara nueva con las mis-
mas caractersticas de la original. Usar
guantes para evitar impregnar con huellas
digitales la superficie de la lmpara.
8. Reconectar los cables de alimentacin
elctrica a la lmpara.
9. Ajustar nuevamente los tornillos que suje-
tan la lmpara.
10. Ajustar nuevamente los tornillos que ase-
guran la tapa del compartimiento de la
lmpara.
11. Reconectar el espectrofotmetro.
12. Encender el equipo y realizar el procedi-
miento de recalibracin del equipo esti-
pulado por el fabricante.
El mantenimiento preventivo del espectro-
fotmetro debe responder a las rutinas y
frecuencias recomendadas por el fabricante.
A continuacin, se presenta un grupo de ru-
tinas bsicas que puede ser realizada en el
laboratorio.
1. Limpiar externamente el espectrofotme-
tro, incluyendo los controles, pantallas o
metros de medicin. Esto se puede reali-
zar con una pieza de tela fina similar a la
textura de los pauelos humedecida con
agua destilada.
2. Inspeccionar y limpiar el cable de alimen-
tacin elctrica.
3. Verificar que la lmpara est limpia y en
buen estado. Si no funciona, instalar una
nueva, con las mismas especificaciones de
la original. En los espectrofotmetros mo-
dernos, el estado de la lmpara es detecta-
do automticamente mediante el software
116
que controla el estado y el funcionamien-
to del equipo, por lo que es fcil determi-
nar en qu momento es necesario cambiar
la lmpara. Efectuar el cambio de la lm-
para y realizar el ajuste posterior siguien-
do el procedimiento recomendado por el
fabricante.
4. Revisar el fusible de proteccin. Antes de
abrir el alojamiento del fusible, compro-
bar que el espectrofotmetro est apaga-
do y que sus contactos se encuentren lim-
pios y en buen estado. Si es necesario
reemplazarlo, colocar uno nuevo con las
mismas caractersticas del recomendado
por el fabricante.
5. Colocar el instrumento en la configura-
cin operacional.
6. Accionar el interruptor de encendido para
permitir un funcionamiento por cinco (5)
minutos. Verificar lo siguiente:
a) Si l as l mparas o i ndi cadores pi l oto
funci onan.
b) Si el indicador de lectura permanece en
cero (0).
c) Si la luz de la fuente funciona.
7. Realizar una prueba de corriente de fuga
en las posiciones de encendido y apagado.
a) Verificar el polo a tierra y la polaridad
correcta.
b) Verificar la polaridad correcta sin polo a
tierra.
c) Verificar la polaridad inversa sin polo a
tierra.
8. Calibrar el panel frontal del espectrofo-
tmetro siguiendo las instrucciones del
fabricante.
9. Medir la sensibilidad del equipo.
10. Realizar una prueba siguiendo la ley de
Beer.
11. Regresar el espectrofotmetro a la confi-
guracin inicial, si la calibracin se ha
efectuado con xito.
BUENAS PRCTICAS DE USO
DEL ESPECTROFOTMETRO
1. Efectuar la calibracin del espectrofot-
metro, cada vez que se realiza el anlisis
de un grupo de muestras.
2. Mantener cerrada la tapa del portamues-
tras durante el proceso de medicin, para
asegurar una lectura adecuada.
3. Evitar reutilizar las cubetas desechables.
4. Utilizar nicamente cubetas de cuarzo,
para efectuar anlisis por debajo de los
310 nm.
5. Evitar el uso de cubetas plsticas, si se uti-
lizan solventes orgnicos.
6. Utilizar cristalera de boro silicato de alta
calidad para preparar los estndares. Evi-
tar el uso de cristalera de sodio xido de
sodio siempre que sea posible, debido a
que el contacto prolongado con los estn-
dares puede permearla y, en consecuen-
cia, producir resultados errneos.
7. Limpiar cuidadosamente las cubetas de vi-
dri o despus de uti l i zarl as. Desechar
aquellas que presenten rayones en la su-
perficie pulida.
8. Utilizar en lo posible reactivos de alta ca-
lidad. Reactivos de baja calidad pueden
causar contaminacin incluso en concen-
traciones muy bajas. Los diluyentes utili-
zados agua o solventes debern estar li-
bres de impurezas.
9. Verificar que las muestras o estndares no
se han desgasificado dentro de las cube-
tas. Este fenmeno produce burbujas so-
bre la superficie interna de las cubetas y
errores en las lecturas.
10. Tener en cuenta, cuando se pretenda uti-
lizar nuevos procedimientos, que no todas
las sustancias cumplen con la ley de Beer.
Efectuar pruebas de linealidad sobre el
rango de concentraciones a ser utilizadas.
Se recomienda preparar un grupo de solu-
ciones fuertes conocidas y verificar los
117
resultados. Los fenmenos que afectan la
ley de Beer son los siguientes:
a) Las altas concentraciones por asociacin
molecular de especies inicas.
b) Variaciones en la hidratacin a bajas
concentraciones producen cambios en la
naturaleza de los iones complejos.
c) Absorciones que no obedezcan la ley re-
quieren dibujar una grfica de estndares
conocidos, que indicar lectura versus con-
centracin, de forma que la lectura de las
incgnitas pueda ser relacionada a las con-
centraciones desde la grfica.
Espectrofotmetro automatizado
4
El espect rof ot met ro no se energi za. Int errupt or de encendi do/apagado est
en posi ci n apagado.
Mover el i nt errupt or a l a posi ci n encendi do.
Puert o seri al RS 232 no responde. Ini ci al i zaci n i ncompl et a del equi po
durant e el arranque.
Apagar el equi po y encenderl o nuevament e.
La cubet a no ent ra en el compart i mi en-
t o port amuest ras.
Cubet a de t amao equi vocado. Usar cubet as del t amao especi f i cado por el
f abri cant e.
Mecani smo de aj ust e de l a cubet a mal
l ocal i zado.
Corregi r posi ci n del mecani smo de aj ust e.
Impresora at ascada. Papel t rmi no arrugado ent re l a cabeza
de i mpresi n y l a pl aca t rmi ca al mo-
ment o de rasgar/cort ar el papel .
Remover el exceso de papel con unas pi nzas
de punt a f i na.
Apagar el equi po, ret i rar el papel y rei nst al ar
nuevament e.
Pant al l a LCD di f ci l de l eer. Cont rol de cont rast e desaj ust ado. Aj ust ar cont rast e.
El papel de l a i mpresora no se aut oal i -
ment a o avanza.
Pap el d e l a i mp r eso r a i n st al ad o
er r n eamen t e.
Apagar el equi po, rei nst al ar rol l o de papel .
Borde del ant ero del papel no al i neado
o dobl ado.
Apagar equi po. Rei nst al ar rol l o de papel . Cor-
t ar borde del ant ero y al i near nuevament e en
el si st ema de al i ment aci n.
Cont rol de al i ment aci n de papel no
responde.
Ll amar al represent ant e.
Sistema de iluminacin de fondo quemado. Ll amar al represent ant e.
Cabl e de i nt erconexi n mal conect ado. Veri f i car conexi n.
Los bot ones del t ecl ado no responden. Ini ci al i zaci n i ncompl et a del equi po
Apagar el equi po y encenderl o nuevament e.
Act i vaci n de un comando equi vocado
No hay energa el ct ri ca en l a t oma de
al i ment aci n.
Verificar aliment acin elct rica general. Compro-
bar que no se haya disparado alguna seguridad.
Mal conect ado el cabl e de al i ment a-
ci n el ct ri ca.
Conect ar firmement e el cable de aliment acin.
4
Instruction Manual, Spectrophotometer, SmartSpecTM 3000, Catalog N 170-2501, BIO-RAD Laboratories.
118
5
Seminario Taller Operacin y Mantenimiento de Espectrofotmetros, Proyecto Subregional de Mantenimiento,
Convenio RE-HS-02, OPS/OMS.
La l ect ura present a f l uct uaci ones. Hay i nt erf erenci as en el recorri do de l a
l uz.
Veri f i car que l a cubet a no present e rayones.
La l ect ura present a val ores negat i vos.
No hay l ect ura de absorbanci a.
No hay muest ra. Aadi r una muest ra a l a sol uci n.
Col ocaci n i ncorrect a de l a cubet a. Ver i f i car l a or i ent aci n de l a vent ana de l a
cubet a.
Seleccin errnea de la longit ud de onda. Aj ust ar l a l ongi t ud de onda al rango compat i -
bl e con el anl i si s.
Equi po cal i brado errneament e con
una muest ra en l ugar de una sol uci n
est ndar.
Cal i brar con una sol uci n est ndar o con agua
dest i l ada.
Veri f i car que no hay part cul as f l ot ando en l a
cubet a.
Frot ar l as paredes de l a cubet a con una pi eza
de t el a l i mpi a.
Veri f i car que el rango sel ecci onado de t rabaj o
es adecuado para l a muest ra baj o anl i si s.
Espectrofotmetro no automatizado
5
Lmpara exci t adora no enci ende. Fi l ament o rot o. Reempl azar l mpara.
Indi caci n i nest abl e del medi dor. Di odo Zener est abi l i zador def ect uoso. Reempl azar di odo Zener.
Lect uras baj as en el met ro o gal van-
met ro.
Lmpara exci t adora def ect uosa. Reempl azar l mpara.
Fot ocel da suci a o def ect uosa. Li mpi ar o reempl azar f ot ocel da.
Ci rcui t o ampl i f i cador def ect uoso. Cambi ar o reparar ci rcui t o ampl i f i cador.
Baj o vol t aj e en l a l mpara exci t adora. Aj ust ar vol t aj e.
Fusi bl e de seguri dad quemado. Reempl azar f usi bl e.
Resist encia en el filament o de la lmpara. Reempl azar l mpara.
Vol t aj e errneo. Revisar volt aje. Revisar fuent e de aliment acin.
DEFINICIONES BSICAS
Absorcin. Fenmeno que se presenta cuan-
do los tomos o molculas de una sustancia
absorben luz. La energa incidente interacta
con la estructura de la materia, transfirindo-
le energa que la lleva a un estado energti-
co superior. (Los electrones de la sustancia
son promovidos a rbitas de mayor nivel
energtico). Dependiendo de la longitud de
onda de la luz incidente, se producen efectos
distintos. Por ejemplo: la luz ultravioleta pro-
mueve los electrones a rbitas de mayor nivel
energtico; la luz infrarroja produce vibra-
cin atmica y las microondas, rotacin at-
mica. La energa absorbida se pierde por ca-
lor o radiacin.
ngstrom. Unidad de longitud que equivale
a 10
-10
m. Su smbolo es []. Se utiliza para
realizar mediciones a nivel de radiacin X o
gama.
120
Bibliografa
Castellanos, J., Sistema de capacitacin tcnica, Mantenimiento de equipo mdico, Mdu-
lo Laboratorio Clnico, submdulo 2, espectrofotmetro, Bogot, Colombia, Fondo Nacio-
nal Hospitalario, Divisin de Ingeniera y Mantenimiento, 1989.
DR/2010 Spectrophotometer, Instrument Manual, Loveland, Colorado, Hach Company,
1999.
Instruction Manual, SmartSpec Tm 3000 Spectrophotometer, Catalog N 170-2501:BIO-RAD
Laboratorios, 4006168 Rev. D.
J enway Spectrophotometer, model 6305, UV/VISIBLE range, Operating Manual, Gransmore
Green, Felsted, Dunmow, Essex, England, Jenway Company, 1999.
Lobkowicz, F., Melissinos A., Physics for Scientist and Engineers, vol. 2, Philadelphia. W. B.
Saunders Company, 1975.
Seminario Taller Operacin y Mantenimiento de Espectrofotmetros, Proyecto Subregional
de Mantenimiento, convenio RE-HS-02 OPS/OMS, 1992.
(http://www.biochrom.co.uk/images/spectro/ultro100pro_white.jpg)
(http://elchem.kaist.ac.kr/vt/chem-ed/spec/spectros.htm)
(http://en.wikipedia.org/wiki/Spectrophotometer)
= diferencia en la longitud de onda de dos
ranuras adyacentes
Ilustracin 31: Rejilla de difraccin
128
Control de calidad
Para que un producto pueda considerarse es-
tril, es necesario verificar que todas las eta-
pas que conforman el proceso de esteriliza-
cin se hayan realizado correctamente. Para
verificar el cumplimiento de todas las condi-
ciones, se ha desarrollado una serie de prue-
bas que evalan las caractersticas del proce-
so y su influencia sobre la actividad de los mi-
croorganismos. Hay evaluaciones sobre la
temperatura, la presin, el tiempo, la hume-
dad y el comportamiento general del equipo,
a fin de certificar que cumpla y funcione de
acuerdo con procedimientos que han demos-
trado su validez y confiabilidad. Existen tam-
bin pruebas o indicadores que permiten
certificar la muerte de los microorganismos.
Para certificar la calidad de los procesos de
esterilizacin, se ha desarrollado una serie
de pruebas de distinta categora, entre las
que se destacan las siguientes:
1. Indicadores del proceso de esteriliza-
cin. Estn diseados para supervisar el
funcionamiento de los autoclaves. Inclu-
yen instrumentos que controlan parme-
tros como temperatura, tiempo y presin
termmetros, manmetros y cronme-
tros y registran el desarrollo del proceso.
Los sistemas de registro de los autoclaves
modernos microprocesador registran to-
dos los parmetros del ciclo de esteriliza-
cin e inclusive rechazan el ciclo, en caso
de presentarse alguna anomala. Final-
mente, en esta categora se encuentra una
prueba denominada test de Bowie-Dick,
que evala la eficiencia de la bomba de va-
co, utilizando una hoja que cambia de co-
lor de forma uniforme, si el proceso se ha
realizado a satisfaccin. Caso contrario, el
color en la hoja es desigual.
2. Indicadores qumicos. Son pruebas de
tipo qumico que cambian de color o de
estado cuando se exponen a las diversas
4
CI CLO N
Lqui dos en reci pi ent es
abiert os o semicerrados.*
* Los t i empos dependen
del vol umen de l a carga.
No h ay vac o en el
en f r i ami en t o.
MATERI ALES
121
TEMP. C
1,1
PRESI N
kg/ cm
2
Convenci ones: A: Pret rat ami ent o. Ci cl os de vaco e i nyecci n de vapor al t ernados. (Procesos 1, 2, 3).
Proceso 4: Est eri l i zaci n
C: Post rat ami ent o (Proceso 5: vaco y secado)
D: Homol ogaci n de presi ones i nt ernas y ext ernas
Not a: El proceso de l qui dos no t i ene vaco a cont i nuaci n de l a est eri l i zaci n. El en-
f ri ami ent o es nat ural .
GRFI CA T PI CA
Nota: Los tiempos de los ciclos de esterilizacin se ajustan a la altura sobre el nivel del mar del lu-
gar donde se encuentra ubicado el autoclave. Los fabricantes suministran las tablas de la compen-
sacin a tener en cuenta. Por lo general, mientras ms alto est ubicado el equipo, ms prolonga-
do ser el tiempo de esterilizacin.
130
2. Acometida elctrica, dimensionada a los
consumos del equipo. Si el autoclave es au-
tnomo, es decir, dispone de su propio ge-
nerador de vapor, la acometida elctrica
debe estudiarse en detalle, pues la poten-
cia requerida podra ser significativamente
alta. Son tpicas demandas de potencia de
21 kw, 38 kw, 48 kw y superiores, para que
funcione el generador de vapor. La acome-
tida deber contar con las seguridades y
protecciones requeridas. Los voltajes tpi-
cos requeridos por los autoclaves son 220 V,
60 Hz, o 380 V, 60 Hz trifsico.
3. Acometida de agua, dimensionada a los
consumos del equipo en volumen y pre-
sin. Mientras ms grande el equipo, ma-
yor consumo. El agua que consume el auto-
clave debe haber recibido los tratamientos
requeridos para eliminar los slidos en sus-
pensin, que puedan afectar negativamen-
te el funcionamiento de las electrovlvulas
y dems dispositivos electrohidrulicos.
4. Al gunos esteri l i zadores requi eren ai re
comprimido, pues sus controles son co-
mandados mediante presin neumtica.
Por lo general, la presin requerida vara
de 5x10
5
Pa a 9,9x10
5
Pa. El esquema ad-
junto muestra los requerimientos mnimos
de la instalacin (vlvula de corte, filtro y
manmetro).
5. Sistema de desage diseado para recolec-
tar agua caliente.
6. Acometida de vapor. Si el autoclave no dis-
pone de su propio generador de vapor, de-
be ser alimentado desde el sistema gene-
rador de vapor de la institucin (sala de
mquinas, caldera). La instalacin de sumi-
nistro debe cumplir con requisitos como
vlvula de corte, filtro, manmetro e insta-
lacin, para recolectar el condensado con
filtro y trampa de vapor, como se indica en
el esquema adjunto.
Ilustracin 33: Espacios requeridos
por el autoclave
Ilustracin 34: Acometida aire
comprimido
Ilustracin 35: Acometida de vapor
131
Aut ocl ave 12
7. El autoclave debe ser operado exclusiva-
mente por personal que haya recibido y
aprobado capacitacin especializada en
este tipo de procesos.
El autocl ave es un equi po que demanda su-
pervi si n y manteni mi ento preventi vo per-
manente, debi do a l a gran canti dad de
componentes y tecnol og as que l o i ntegran.
Se enfoca el manteni mi ento haci a aquel l as
ruti nas bsi cas que pueden real i zar l os ope-
radores del equi po. Para real i zar el mante-
ni mi ento detal l ado, debern segui rse l as
i nstrucci ones defi ni das en l os manual es de
servi ci o de l os fabri cantes.
Verificaciones diarias
Antes de iniciar los procesos de esterilizacin,
debern realizarse las siguientes verificaciones:
1. Colocar una nueva plantilla o carta en el
dispositivo de registro, para documentar
el desarrollo del ciclo de esterilizacin.
2. Controlar que las plumillas registradoras
disponen de tinta.
3. Asegurar que las vlvulas de suministro de
agua fra, aire comprimido y vapor estn
abiertas.
4. Accionar el interruptor que permite calentar
la camisa del autoclave. Este control, al acti-
varse, permite el ingreso de vapor a la cami-
sa de la cmara de esterilizacin. Al ingresar
el vapor, empieza el proceso de calentamien-
to de la cmara de esterilizacin. Mantener
la puerta del autoclave cerrada hasta el mo-
mento que se coloque la carga a esterilizar,
para evitar prdidas de calor.
5. Verificar que la presin de la lnea de su-
ministro de vapor sea de al menos 2,5 bar.
6. Comprobar el estado de los manmetros y
de los termmetros.
7. Controlar que no se presenten fugas de
vapor en ninguno de los sistemas que ope-
ran en el autoclave.
8. Limpiar con un trapo hmedo el frente del
autoclave: controles, indicadores, manijas.
Mantenimiento semanal
Responsable: Operador del equipo
1. Limpiar el filtro del drenaje de la cmara
de esterilizacin. Retirar cualquier residuo
retenido en l.
2. Limpiar internamente la cmara de esteri-
lizacin, utilizando productos de limpieza
que no contengan cloro. Incluir en la lim-
pieza las guas de las canastas usadas para
colocar los paquetes.
3. Limpiar con una solucin acetificada, si se
esterilizan soluciones con cloro. El cloro
causa corrosin incluso en implementos de
acero inoxidable. Lavar a continuacin con
agua abundante.
4. Limpiar las superficies externas inoxidables
con un detergente suave. Eventualmente,
podra utilizarse un solvente como el cloro
etileno, procurando que este no entre en
contacto con superficies que tengan recu-
brimientos de pintura, sealizaciones o cu-
biertas plsticas.
5. En autoclaves con puerta de accionamien-
to manual, verificar que los mecanismos
ajustan bien y que su operacin es suave.
6. Drenar el generador de vapor (en equipos
que disponen de este accesorio). Para esto
se abre una vlvula, ubicada en la parte in-
ferior del generador, que permite extraer
su contenido. Por lo general, se hace al fi-
nalizar las actividades de la semana. Seguir
las recomendaciones que para este prop-
sito indica el fabricante del equipo.
7. Nunca utilizar lana de acero para limpiar
internamente la cmara de esterilizacin.
133
Aut ocl ave 12
Mantenimiento anual
Responsable: Tcnico del autoclave
1. Limpiar todos los filtros.
2. Comprobar y ajustar el nivel del tanque de
alimentacin de agua, para que se en-
cuentre dentro de los 20 mm del mximo
nivel.
3. Verificar y ajustar la tensin de los resortes
de las vlvulas de diafragma.
4. Desmontar, limpiar y ajustar las vlvulas de
seguridad.
5. Cambiar el filtro de aire.
6. Efectuar un proceso general de esteriliza-
cin comprobando en detalle: presin,
temperatura, ti empos requeri dos para
completar cada fase del ciclo, estado de las
lmparas de sealizacin del proceso, fun-
cionamiento del sistema de registro. Veri-
ficar que el funcionamiento se encuentre
dentro de las tolerancias definidas por el
fabricante.
7. Efectuar, adicionalmente, las mismas ruti-
nas recomendadas cada tres meses.
MANTENIMIENTO DE COMPONENTES
ESPECIALIZADOS
Se incluyen, a continuacin, algunas rutinas
especializadas que se aplican a componentes
del equipo cuando requieren servicio tcnico.
Dado que los autoclaves disponen de mlti-
ples alternativas y diseos, las rutinas aqu es-
tipuladas podran ser aplicables solo a deter-
minados equipos.
Mantenimiento de vlvulas solenoides
1. Verificar el sonido que emiten las bobinas o
solenoides (humming en lengua inglesa). El
ruido excesivo es una advertencia de sobreca-
lentamiento, debido a corrientes elctricas
anormalmente altas a travs del solenoide.
La corriente alterna aumenta cuando la im-
pedancia [Z] del circuito disminuye, esto suce-
de cuando el solenoide no se encuentra ade-
cuadamente rodeado por un circuito cerrado
de hierro. Un espacio de aire en el circuito
magntico puede ser causado por suciedad,
que evita que la armadura alcance su posi-
cin final cuando el solenoide est energiza-
do. Limpiar cuidadosamente los alojamientos
de la bobina y su ncleo, para no interferir al
pistn en su desplazamiento por alguna cla-
se de suciedad.
Ilustracin 36: Generador de vapor
134
2. Reemplazar los sellos tipo anillo o rings
existentes entre el solenoide y el cuerpo
de la vlvula, cuando estos elementos ha-
yan sido desensamblados.
3. Antes de realizar cualquier desensamblaje,
comprobar cul es la posicin en que se
encuentra instalada la vlvula solenoide.
Algunas poseen indicaciones claras sobre
cmo van instaladas, pero otras carecen de
tal informacin.
4. Cuando se desmonta una vlvula solenoi-
de servoasistida, controlar en qu posicin
se encuentran los orificios que la comuni-
can con el medio de trabajo, para poder
ensamblar de nuevo cuando se efecte el
ensamble de la vlvula.
Limpieza del f iltro de vapor
1. Alojar la tapa.
2. Retirar la malla.
3. Limpiar cuidadosamente.
4. Reinstalar la malla.
5. Colocar nuevamente la tapa.
All se incluyen los problemas ms comunes.
Dada la diversidad de marcas, modelos y tec-
nologa disponibles, es conveniente que los
usuarios sigan las instrucciones contenidas en
los manuales de uso de los autoclaves instala-
dos en el servicio.
El t est i go de est er i l i zaci n no i ndi c
l a f i nal i zaci n exi t osa del ci cl o de
est er i l i zaci n.
Cmara de est eri l i zaci n mal cargada o
cargada en exceso.
Revi sar di st ri buci n de l a carga. Revi sar cant i -
dad de carga. Aj ust ar de acuerdo a l as reco-
mendaci ones del f abri cant e.
Se i nt errumpe el ci cl o de est eri l i zaci n
si n razn aparent e.
Presi ones de vapor, agua o ai re i nade-
cuadas. En consecuenci a, no se acci o-
nan l os di sposi t i vos de regul aci n y
cont rol servoasi st i dos.
Revi sar presi ones de al i ment aci n de vapor,
agua o ai re. Aj ust ar si st emas de regul aci n.
Trampa de vapor def ect uosa. Revi sar t rampa de vapor.
Reparar o sust i t ui r.
Ti empo de est eri l i zaci n i nadecuado. Revi sar t i empo de est eri l i zaci n. Aj ust ar al t i -
po de ci cl o.
Penet raci n de vapor i nsuf i ci ent e. Reduci r l a cant i dad de paquet es a ser est eri l i -
zados; est o permi t e un mej or f l uj o del vapor.
Pret rat amient o def ect uoso. Ha quedado
demasiado aire dent ro de la cmara.
Sol i ci t ar servi ci o t cni co especi al i zado para
revi sar el si st ema de vaco.
Indi cador bi ol gi co mal sel ecci onado
para el ci cl o real i zado.
Revi sar especi f i caci ones de uso del i ndi cador
bi ol gi co. Repet i r el ci cl o de est eri l i zaci n.
No se al canz l a t emperat ura y l a pre-
si n de est eri l i zaci n sel ecci onada.
Revisar seleccin de t emperat ura. Revisar presin
de vapor correspondient e al ciclo seleccionado.
Revisar posibles fugas de vapor en la puert a em-
paque o en los disposit ivos de cont rol de paso.
Advertencia: Antes de desensamblar el fil-
tro de vapor, disipar la presin de vapor en el
sistema.
135
Aut ocl ave 12
DEFINICIONES BSICAS
Asepsia. Conjunto de procedimientos para
lograr la ausencia de microorganismos.
Atmsf era. Antigua unidad de presin que
equivale a 101 325 Pa (pascales) o a 14,69 li-
bras por pulgada cuadrada.
Calidad. Propiedad termodinmica que, por
lo general, se identifica con la letra [X] y se
define como la relacin existente entre la
masa de vapor y la masa total de la sustancia
en condiciones de saturacin.
Calor hmedo. Mtodo de esterilizacin
que elimina microorganismos por desnatura-
lizacin de las protenas, que se acelera por la
presencia de agua (vapor).
Cmara de esterilizacin. Espacio donde se
colocan los objetos que requieren ser esterili-
zados. Cuando se efecta el proceso de este-
rilizacin la cmara se llena de vapor a pre-
sin, alcanzando temperaturas directamente
relacionadas con las presiones seleccionadas.
Dispone de una puerta que la sella durante el
ciclo de esterilizacin y, mediante un sistema
de seguridades, solo es posible abrirla una
vez que haya terminado el proceso de esteri-
lizacin y se haya homogenizado la presin
interna con la atmosfrica.
Camisa. Espacio ubicado alrededor de la cma-
ra de esterilizacin, a travs del cual circula va-
por. Su funcin es transferir calor a la cmara de
esterilizacin, en las etapas de pretratamiento
(remocin de aire) y postratamiento (secado del
material esterilizado).
Bar. Unidad de presin que equivale a 10
5
Pa
(Pascales).
Descontaminacin. Procedimiento que tie-
ne el propsito de disminuir la cantidad de
microorganismos de un objeto o artculo, pa-
ra que sea segura su manipulacin. El trmi-
no cubre aquellos objetos que se utilizan en
los procedimientos de atencin a un paciente
y que puedan ser afectados por fluidos, sus-
tancias corporales o materia orgnica.
Desinfeccin. Proceso que utiliza medios fsi-
cos o qumicos, mediante el cual se destruyen
de los objetos inanimados formas de vida en
estado vegetativo. (Se excluyen las esporas).
Esterilizacin. Conjunto de acciones me-
diante las cuales se destruye toda forma de
vida, incluyendo esporas de objetos inanima-
dos, con procedimientos fsicos, qumicos y
gaseosos.
Inspeccin. Evaluacin visual de los artculos la-
vados en bsqueda de desperfectos o suciedad
Mat eri al est eri l i zado sal e hmedo. Trampa de vapor def ect uosa. Revi sar/ l i mpi ar t rampa de vapor. Sust i t ui r
t rampa.
El i ndi cador bi ol gi co es posi t i vo. Indi cador bi ol gi co mal sel ecci onado. Ut ilizar un indicador biolgico de ot ro lot e o fabri-
cant e. Regist rar cuidadosament e los parmet ros.
Presi n de vapor excesi va. Aut ocl ave demasi ado cargado con ma-
t eri al t ext i l .
Reducir la carga del autoclave.
Aut ocl ave descal i brado. Calibrar el autoclave.
Presi n de vapor demasi ado baj a. Empaque de l a puert a def ect uoso. Revi sar el empaque; reempl azar el empaque.
Fuga de vapor i nt erna en ot ro di sposi -
t i vo del aut ocl ave.
Revi sar t rampas, el ect rovl vul as, et c.
Drenaj e de l a cmara de est eri l i zaci n
obst rui do.
Revi sar si st ema de drenaj e. Li mpi ar.
Aut ocl ave demasi ado cargado. Reduci r l a cant i dad de carga en l a cmara. Re-
pet i r el ci cl o de est eri l i zaci n.
El aut ocl ave no est bi en ni vel ado. Ni vel ar el aut ocl ave.
136
que pudieran interferir en los procesos de es-
terilizacin. Es un proceso de gran responsa-
bilidad y debe realizarse utilizando ayudas
como lupas para precisar pequeos detalles.
Limpieza. Remocin mecnica de toda mate-
ria extraa ubicada en las superficies de obje-
tos inanimados; por lo general, comprende la
utilizacin de agua limpia combinada con al-
gn detergente. Es un procedimiento bsico
que se efecta antes de que los objetos sean
sometidos al proceso de esterilizacin propia-
mente dicho. La limpieza puede realizarse
utilizando mtodos manuales o automticos,
pero debe entenderse que no es un procedi-
miento que destruye microorganismos, sino
que nicamente disminuye la cantidad de
microorganismos.
Pascal (Pa). Unidad de presin del Sistema
Internacional, que corresponde a la fuerza de
un newton (N) que acta sobre un (1) metro
cuadrado Pa = 1N /m
2
.
Testigo de esterilizacin. Indicadores de ti-
po qumico o biolgico que permiten verifi-
car si un objeto o material fue sometido a
procesos de esterilizacin. Los ms conocidos
son la cinta de enmascarar termosensible
cambia de color cuando se alcanzan deter-
minadas condiciones de temperatura y las
esporas del B. Stearothermophilus.
Trampa de vapor. Dispositivo diseado para
restringir el paso de vapor y permitir el paso
del condensado.
Vlvulas servoasistidas. Tipo de vlvulas
solenoides que dependen de la presin del
medio en el que trabajan para cerrar o abrir.
Por lo general, disponen de membranas con
pequeos orificios a travs de los cuales sumi-
nistran el medio de trabajo.
Vlvula solenoides. Dispositivos electro-
magnticos de control que se utilizan en ml-
tiples aplicaciones. Se conocen tambin con
el nombre de electrovlvulas. Mediante una
bobina que se energiza o desenergiza, se
controla la posicin de un pistn que permi-
te o impide el paso de un fluido dentro de un
circuito determinado. Se utilizan en circuitos
hidrulicos, neumticos, vapor, vaco. Los fa-
bricantes han desarrollado un gran nmero
de diseos para aplicaciones especializadas.
137
Aut ocl ave 12
Bibliografa
Autoclave GE-660, Control Unit A2, Getingeverken N 660 A2 8301.
Ginesta, N., "La nueva generacin de miniclaves: Un pequeo esterilizador de vapor con las
prestaciones de los grandes", Antonio Matachana, Barcelona. XIII Congreso Internacional
del CEDEST, en El autoclave, Revista del Club Espaol de Esterilizacin, ao 14, N 2, 2002.
Instrucciones funcionamiento Autoclave 80L-1, Antonio Matachana, IM-001.81.
Manual de Esterilizacin y Desinfeccin, Santiago de Chile, Unidad de Infecciones Intrahos-
pitalarias de la Red de la Divisin Asistencial, Ministerio de Salud.
(http://odontologia.uchile.cl/catedras/operator/operato/manualfinal.pdf)
Manual de operacin para equipos esterilizadores y destiladores, San Salvador, Proyecto de
Mantenimiento Hospitalario, Ministerio de Salud - GTZ, 1998.
Manual de operacin de autoclave, San Salvador, Proyecto de Mantenimiento Hospitalario,
Ministerio de Salud - GTZ, 1997.
Sentry "220" Sterilizer, Straightline and Cylindrical, MA-2, Service Manual, Rochester, N.Y.,
Castle Sybron Corporation.
Sterilisateur vapeur, UltraClave M9/M11
, Manuel dinstallation et dutilisation, Midmark

Corporation, N 03-0920-02 Rev. B, 1998.
138
139
ESTUFA DE SECADO
La estufa de secado es un equipo que se uti-
liza para secar y esterilizar recipientes de vi-
drio y metal en el laboratorio. Se identifica
tambin con el nombre Horno de secado. Los
fabricantes han desarrollado bsicamente
dos tipos de estufa: las que operan mediante
conveccin natural y las que operan median-
te conveccin forzada. Las estufas operan,
por lo general, entre la temperatura ambien-
te y los 350 C. Se conocen tambin con el
nombre de Poupinel o pupinel.
FOTOGRAFAS DE ESTUFA DE SECADO
1
PROPSITO DE LA ESTUFA
La estufa de secado se emplea para esterilizar
o secar el material de vidrio y metal utilizado
en los exmenes o pruebas, que realiza el la-
boratorio y que proviene de la seccin de la-
vado, donde se enva luego de ser usado en
algn procedimiento. La esterilizacin que se
efecta en la estufa se denomina de calor se-
co y se realiza a 180 C durante 2 horas; la
cristalera, al ser calentada por aire a alta
temperatura, absorbe la humedad y elimina
la posibilidad de que se mantenga cualquier
actividad biolgica debido a las elevadas
temperaturas y a los tiempos utilizados.
Las estufas de secado constan, por lo general,
de dos cmaras: una interna y una externa. La
cmara interna se fabrica en aluminio o en ma-
terial inoxidable, con muy buenas propiedades
CAPTULO 13
Est uf a de secado
Cdigo (s) ECRI
14-410
Horno de secado
1
http://www.precisionsci.com/lab/products/ov_t160.htm
140
para transmitir el calor; dispone de un conjun-
to de estantes o anaqueles fabricados en
alambre de acero inoxidable, para que el aire
circule libremente, all se colocan los elemen-
tos que requieren ser secados o esterilizados
mediante calor seco. Se encuentra ai sl ada de
l a cmara externa por un materi al ai sl ante
que manti ene i nternamente l as condi ci ones
de al ta temperatura y retarda l a transferen-
ci a de cal or al exteri or. La cmara externa
est fabri cada en l mi na de acero, recubi er-
ta con una pel cul a protectora de pi ntura
el ectrostti ca. El cal or i nterno es generado
medi ante conjuntos de resi stenci as el ctri -
cas, que transfi eren l a energ a trmi ca a l a
cmara i nterna. Di chas resi stenci as se ubi -
can en l a parte i nferi or de l a estufa. El cal or
dentro de l a cmara i nterna se transfi ere y
di stri buye medi ante convecci n natural o
convecci n forzada (estufa con venti l adores
i nternos).
La potencia energa por unidad de tiempo
disipada por una resistencia elctrica puede
ser calculada mediante la siguiente ecuacin:
P =I
2
R
donde:
I = intensidad de la corriente elctrica
medida en amperios [A]
R = resistencia elctrica medida en ohmios
[]
Dado que la energa no se crea ni se destruye,
sino que se transforma, es posible calcular la
energa trmica equivalente de los elementos
resistivos. Para el caso de un alambre resistivo,
la cantidad de calor [q] que disipa puede cal-
cularse mediante la siguiente ecuacin
2
:
I
2
R =qr
0
2
L
donde:
R = resistencia del alambre resistivo
I = intensidad de la corriente elctrica
r
0
= radio exterior del alambre
La resistencia [R] puede ser calculada con la
siguiente ecuacin:
donde:
= resistividad del material de la resistencia
L = longitud del alambre de la resistencia
A = rea de alambre de la resistencia
La estufa tiene una puerta metlica que tam-
bin dispone de su aislamiento trmico y est
dotada de una manija fabricada igualmente en
material aislante, para evitar que el calor del
interior llegue a ser una amenaza para las ma-
nos del operador. La puerta est instalada so-
bre la parte frontal del cuerpo de la estufa, me-
diante un conjunto de bisagras que permiten
su apertura logrando ngulos hasta de 180.
La estufa moderna se controla mediante un
mdulo con microprocesadores desde el cual es
posible seleccionar los parmetros de opera-
cin del equipo y sus alarmas, y programar la
realizacin de ciclos o procesos trmicos, me-
diante los cuales se controlan no solo las tem-
peraturas, sino tambin la forma como las mis-
mas deben variar en el tiempo, a travs de fa-
ses o etapas de calentamiento/enfriamiento
natural o sostenimiento de la temperatura
dentro de ciertos lmites de tiempo. Las estufas
operan normalmente desde condiciones de
temperatura ambiente hasta los 350 C. Algu-
nos fabricantes disponen de modelos con ran-
gos no tan amplios de operacin.
Las estufas antiguas disponen simplemente
de un conjunto de resistencias cuya opera-
cin es controlada mediante un termostato.
En la tabla que se incluye a continuacin, se
muestra la relacin de temperatura/tiempo
requerida para efectuar procesos de esterili-
zacin con calor seco, como los que se pue-
den lograr en las estufas de secado.
2
Se ha colocado el ejemplo correspondiente de la transferencia de calor de una resistencia tipo alambre de geome-
tra circular. Para otras geometras deben efectuarse los ajustes correspondientes.
R =
L
A
141
Est uf a de secado 13
Tabla de temperatura/tiempo de
esterilizacin por calor seco
3
Para poder ser utilizada, la estufa de secado
requiere lo siguiente:
1. Disponer de un mesn de trabajo de con-
textura fuerte y bien nivelado.
2. Acondicionar alrededor de la estufa un es-
pacio libre de al menos 5 cm y de un espa-
cio para colocar el material que deber ser
procesado en el equipo.
3. Instalar una toma elctrica en buen estado
con polo a tierra debidamente dimensiona-
da, para suministrar la potencia elctrica que
consume la estufa, que deber cumplir con la
normativa elctrica nacional o internacional
que utilice el laboratorio y no deber estar a
ms de 1 m del equipo. El voltaje tpico utili-
zado es de 110 V o 220 V/60 Hz.
4. Verificar que el circuito elctrico disponga
de los dispositivos de proteccin requeri-
dos para garantizar una adecuada alimen-
tacin elctrica.
OPERACIN DE LA ESTUFA
La operacin de la estufa requiere tener en
cuenta una serie de precauciones para su co-
rrecta operacin. Entre las ms importantes
se encuentran las siguientes:
1. No usar en la estufa materiales o sustan-
cias que sean inflamables o explosivas.
2. Evitar derrames interiores de soluciones
cidas o que formen vapores corrosivos,
para evitar la corrosin de las superficies y
estantes interiores.
3. Utilizar elementos de proteccin personal
(guantes aislados, anteojos de seguridad y
pinzas para colocar o retirar sustancias o
elementos dentro de la estufa de secado).
Rutina de operacin
Por l o ge ne ral , se re al i za e l si gui e nte
proce di mi e nto:
1. Activar el interruptor general, presionan-
do el botn identificado habitualmente
con una [I].
2. Presi onar l a tecl a i denti f i cada como
Programa.
3. Seleccionar la temperatura de operacin.
Para ello se presiona la tecla marcada con el
signo (+), hasta obtener en la pantalla la
temperatura seleccionada. La estufa empe-
zar el proceso de calentamiento hasta que
se alcance la temperatura seleccionada.
4. Si la estufa es programable, se deben se-
guir las instrucciones que para cada caso
particular defina el fabricante y que per-
miten definir parmetros adicionales co-
mo tiempos, formas de calentamiento y
alarmas.
CONTROL DE LA ESTUFA
A continuacin, se presenta un esquema de
uno de los controles que utilizan las estufas
de secado modernas.
Temperat ura C
180
Tiempo (minut os)
4
30
160 120
140 180
170 60
150 150
121 360
3
Manual de Esterilizacin y Desinfeccin, Santiago de Chile, Ministerio de Salud.
4
Los tiempos se cuentan solo desde el momento que se alcanza la temperatura correspondiente.
143
De la ilustracin del circuito se destacan los si-
guientes elementos:
1. Interruptor general. Energiza o desenergi-
za la estufa.
2. Control. Permite controlar las funciones de
la estufa (temperatura, tiempos, formas
de calentamiento o enfriamiento, modos
de operacin seleccionados en el laborato-
rio, tales como precalentamiento, esterili-
zacin, deshidratacin, acondicionamien-
to, secado e inclusive horneado).
3. Resistencias. Elementos calefactores que
transforman la energa elctrica en ener-
ga trmica.
4. Sistemas indicadores. Di sposi ti vos que
complementan el control general. Permi-
ten conocer si la estufa est energizada, si
se encuentra en operacin.
CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad en las estufas es un po-
co difcil de realizar, por cuanto la tcnica de
esterilizacin por calor seco tiene como par-
metros crticos la temperatura y el tiempo.
Por lo general, se usan como indicadores bio-
lgicos esporas de Bacillus subtilis, variedad
Nger, que deben incubarse por varias horas
despus del proceso de esterilizacin. La car-
ga inicial de esporas del indicador biolgico
oscila entre 5 x 10
5
y 1 x 10
6
. Su efectividad
depende de la difusin del calor, la cantidad
de calor disponible y la prdida de calor. La
accin microbicida est condicionada por la
presencia de materia orgnica o suciedad en
el artculo. La esterilizacin por calor seco de-
be limitarse a materiales que no puedan este-
rilizarse en autoclaves.
El mantenimiento que requiere una estufa de
secado no es complicado, ni precisa rutinas
peridicas de mantenimiento de complejidad
tcnica avanzada. Se presentan, a continua-
cin, rutinas generales de mantenimiento
que deben efectuarse cuando se requieran.
Los procedi mi entos pueden vari ar depen-
di endo del ti po de estufa y l as parti cul ari -
dades de di seo i ncl ui das por l os di versos
fabri cantes.
Acceso a los componentes electrnicos
Frecuencia: Cuando se requiera
Los componentes electrnicos de la estufa se
encuentran usualmente en la parte inferior
de esta. Para poder revisarlos se requiere pro-
ceder como se explica a continuacin:
1. Desconectar la estufa de la toma de ali-
mentacin elctrica.
2. Desplazar la estufa hacia adelante hasta
que la parte frontal de la base se encuen-
tre alineada con el borde de la superficie
de trabajo.
3. Colocar dos cuas de aproximadamente 3
cm de espesor bajo cada uno de los sopor-
tes frontales. Esto elevar la parte delante-
ra de la estufa y facilitar la inspeccin de
los elementos electrnicos una vez que se
retire la tapa inferior.
4. Retirar los tornillos que aseguran la tapa
inferior y levantarla. Entonces, pueden re-
visarse los componentes del control elec-
trnico. Por lo general, se ubican en este
compartimiento los siguientes elementos:
a) El control programable
b) Un relevo de seguridad
c) El interruptor general y el disyuntor
(breaker) estn combinados en un mismo
dispositivo.
5. Rei nstal ar l a tapa una vez termi nada l a
revi si n.
Advertencia: Antes de efectuar cualquier
rutina de mantenimiento en la estufa, ve-
rificar que esta se encuentra a temperatu-
ra ambiente y se ha desconectado la toma
de alimentacin elctrica.
144
Cambio de las resistencias calefactoras
El procedimiento que se explica a continua-
cin deber realizarlo personal que disponga
de buenos conocimientos de electricidad.
1. Desconectar la estufa de la toma de ali-
mentacin elctrica.
2. Desmontar el termmetro del alojamiento
ubicado en la parte superior de la cmara.
3. Abrir la puerta y retirar los estantes.
4. Desconectar la sonda del termmetro.
5. Retirar los tornillos que aseguran el panel
inferior.
6. Retirar el panel inferior fuera de la cmara.
7. Retirar los tornillos que aseguran los ca-
bles de alimentacin elctrica de las resis-
tencias y desconectar los terminales que
los fijan a las resistencias.
8. Retirar los tornillos que aseguran las resis-
tencias y las resistencias fuera de la estufa.
9. Instalar resistencias nuevas de las mismas
caractersticas de las originales.
10.Reinstalar los elementos retirados y reco-
nectar los componentes elctricos.
Cambio del ventilador de enfriamiento
Para cambiar el ventilador de enfriamiento,
que se encuentra generalmente en la parte
inferior, se sigue el procedimiento que se ex-
plica a continuacin:
1. Proceder tal como se ha explicado para abrir el
compartimiento de elementos electrnicos.
2. Desconectar los terminales de la alimenta-
cin elctrica del ventilador.
3. Desmontar l os torni l l os de fi jaci n del
venti l ador.
4. Instal ar un venti l ador de l as mi smas espe-
ci fi caci ones del ori gi nal ; conectar l os ca-
bl es que al i mentan el venti l ador a l os
termi nal es.
5. Reinstalar la cubierta de proteccin.
Cambio del empaque de la puerta
El empaque de l a puerta usual mente es de
si l i cona.
1. Apagar la estufa y abrir la puerta.
2. Af l oj ar l os se guros que re ti e ne n e l
e mpaque .
3. Retirar el empaque utilizando un destorni-
llador para desencajarlo de la gua de re-
tencin. Evitar esfuerzos excesivos que
puedan deformar el alojamiento.
4. Instalar el empaque de repuesto iniciando
la labor por la parte superior. A continua-
cin, desplazar el resto del empaque hacia
los lados, asegurndolo con los elementos
de montaje que lo fijan a la puerta. Termi-
nar el procedimiento en la parte inferior
de la puerta, tal como se hizo en la parte
superior.
Cambio del termo par
1. Abri r el comparti mi ento del control
el ectrni co.
2. Retirar los cables conectores del termo par
de sus puntos de conexin en la tarjeta del
controlador.
3. Aflojar el montaje del termo par de la par-
te superior de la estufa y retirarlo hacia la
parte delantera hasta dejar expuesta una
longitud libre del cable conector de por lo
menos 15 cm.
4. Cortar el cable del termo par, para poder
retirar la envoltura del termo par.
145
5. Asegurar los extremos cortados del termo
par defectuoso, con los cables del termo
par de reemplazo. Utilizar cinta para evi-
tar que se suelten.
6. Halar suavemente el termo par defectuoso
fuera del comparti mi ento el ectrni co,
mientras se guan los cables del nuevo,
atados a los del viejo, hasta el lugar que
les corresponde dentro del compartimien-
to electrnico.
7. Conectar los cables del termo par nuevo a
los terminales de conexin que les corres-
ponde. Verificar que se mantiene la polari-
dad original.
8. Reensamblar la cubierta protectora.
Cambio de las bisagras de la puerta
Para cambiar las bisagras de la puerta, se pro-
cede como se explica a continuacin:
1. Abrir la puerta y levantarla de las bisagras.
2. Retirar los tornillos de montaje de la bisa-
gra defectuosa.
3. Retirar la bisagra defectuosa.
4. Colocar la bisagra nueva y asegurarla con
los tornillos de montaje.
5. Reinstalar la puerta.
No hay energa. La est uf a no est conect ada. Conect ar est uf a a t oma el ct ri ca.
La est uf a present a f al l as de cal ent a-
mi ent o.
Se sel ecci on una t emperat ura i nf eri or
a l a act ual .
Cambi ar l a sel ecci n de l a t emperat ura. Espe-
rar a que est a desci enda por debaj o de l a t em-
perat ura sel ecci onada.
Termo par def ect uoso. Sust i t ui r el t ermo par.
Resi st enci a cal ef act ora def ect uosa. Sust i t ui r resi st enci a cal ef act ora.
Rel evo def ect uoso. Sust i t ui r rel evo.
Cont rol ador def ect uoso. Reempl azar cont rol ador.
Temperat ura errt i ca el evada. Termo par def ect uoso. Sust i t ui r t ermo par.
La pant al l a de dat os act ual es muest ra
el mensaj e " abi ert o" .
Ci rcui t o del t ermo par abi ert o. Veri f i car conexi n del t ermo par o sust i t ui r el
t ermo par.
Cont rol ador def ect uoso. Sust i t ui r cont rol ador.
El i nt errupt or de encendi do se encuen-
t ra apagado.
Acci onar el i nt errupt or de encendi do.
Di syunt or def ect uoso. Cambi ar el di syunt or.
Tarj et a de cont rol def ect uosa. Sust i t ui r t arj et a de cont rol .
Cabl e conect or abi ert o. Revi sar/reparar cabl es conect ores.
146
DEFINICIONES BSICAS
Calor. Forma de energa que es transferida, a
travs del lmite de un sistema a una tempe-
ratura dada, a otro sistema o vecindario a
una menor temperatura, por la diferencia de
temperatura entre los dos sistemas. Cuando
un sistema de gran masa [M] se pone en con-
tacto con otro sistema de pequea masa [m],
que est a temperatura diferente del prime-
ro, la temperatura resultante final se encuen-
tra cerca de la temperatura inicial del sistema
de mayor masa. Se dice, entonces, que una
cantidad de calor Q ha sido transferida del
sistema de mayor temperatura al sistema de
menor temperatura. La cantidad de calor Q
es proporcional al cambio en temperatura
T. La constante de proporcionalidad [C], lla-
mada la capacidad calrica del sistema, permi-
te establecer la siguiente relacin Q = CT,
de la cual se infiere que una de las conse-
cuencias del cambio de temperatura en un
sistema es la transferencia de calor.
Disyuntor. Dispositivo de control elctrico
que permite energizar o desenergizar un
equipo o dispositivo. Se denomina tambin
interruptor. En lengua inglesa se identifica
como breaker.
Par termoelctrico. Componente formado
por dos materiales diferentes, unidos por los
extremos, que generan una corriente elctri-
ca cuando una de las uniones est a mayor
temperatura que la otra. Este fenmeno se
conoce como efecto Seebeck, en honor a su
descubridor, el fsico alemn Thomas Seebeck.
Resistencia. Propiedad que tienen las dife-
rentes sustancias o materiales, en virtud de la
cual se impide en mayor o menor grado el pa-
so de la corriente elctrica. En los textos se
identifica la resistencia con la letra [R]. Para
un cuerpo de seccin uniforme; por ejemplo:
un alambre, la resistencia [R] es una magni-
tud directamente proporcional a la longitud
[l] e inversamente proporcional al rea sec-
cional [a]. La resistencia se representa me-
diante la siguiente ecuacin:
donde:
empleadas
presenta normalmente por la letra griega .
Termostato. Dispositivo que regula la tem-
peratura de un sistema. Opera usualmente
mediante la expansin de uno de sus compo-
nentes, que mecnicamente acciona otro ele-
mento como, por ejemplo, un interruptor
que controla alguna funcin.
R =k x
l
a
147
Bibliografa
Fisher Series 100 Isotemp
Gravity Convected Ovens, Instructions N 0-0812-10/1166, 1980.

Holman, J., Heat transfer, New York, Mc Graw Hill Co., 1972.
Isotemp
Programmable Ovens 800 Series, Instruction Manual, Fisher Scientific Company,

Part N 104502, 2003.
Manual de Esterilizacin y Desinfeccin, Santiago de Chile, Unidad de Infecciones Intrahos-
pitalarias de la Red de la Divisin Asistencial, Ministerio de Salud.
(http://odontologia.uchile.cl/catedras/operator/operato/manualfinal.pdf)
Melissinos, A., Lobkowicz, F., Physics for Scientists and Engineers, vol. I, Philadelphia, W. B.
Saunders Co., 1975.
Operating and services procedures for series Fisher Series 200 Isotemp
Gravity Convected
Ovens, Model 215 G, Part N 43853, 0-0812-07/1182.
148
149
INCUBADORA
La palabra incubadora proviene de la palabra
latina incubare que significa empollar. Es un
equipo diseado para mantener una cmara
a temperatura, atmsfera y humedad contro-
ladas, con el fin de conservar organismos vi-
vos en un entorno que resulte adecuado pa-
ra su crecimiento. Entre las aplicaciones ms
comunes, se citan las siguientes: incubacin
de cultivos bacteriolgicos, virales, micolgi-
cos, celulares, determinacin de la demanda
biolgica de oxgeno (DBO) y conservacin
de biolgicos. Las i ncubadoras var an en
compl eji dad y di seo. Al gunas ni camente
control an l a temperatura, mi entras que
otras, adems, control an l a composi ci n
atmosfri ca.
Finalmente, algunas disponen incluso de la
capacidad para lograr condiciones de tempe-
ratura por debajo de la temperatura ambien-
te y, en consecuencia, incluyen sistemas de re-
frigeracin. Se infiere de lo anterior que, de-
pendiendo del diseo y las especificaciones
requeridas, pueden encontrarse en el merca-
do incubadoras que controlan temperaturas
desde los 10 C y van hasta los 75 C o un po-
co ms. Con relacin al control atmosfrico,
algunas incubadoras disponen de inyeccin
de CO2 para lograr condiciones especiales de
atmsfera, bajo las cuales se incrementa el
crecimiento de diversas especies de organis-
mos y clulas.
FOTOGRAFAS DE INCUBADORAS
CAPTULO 14
I ncubadoras
Cdigo (s) ECRI
15-151
Incubadora aerbi ca
15-152 Incubadora anaerbi ca
I ncubadora est ndar
ht t p://w w w.f i sherl abequi pment .com/i ncubat or.ht m
I ncubadora de baja t emperat ura
ht t p://w w w.f i sherl abequi pment .com/i ncubat or.ht m
150
La i ncubadora es un equi po que uti l i za di -
versos medi os de transferenci a de cal or y
control ambi ental , para obtener unas con-
di ci ones bajo l as cual es se puedan efectuar
procedi mi entos especi al i zados de l aborato-
ri o. En general , di sponen de un si stema de
resi stenci as el ctri cas que se control an me-
di ante di sposi ti vos como termostatos o
control es mi croprocesados. En cuanto a l os
si stemas de transferenci a de cal or, l as i ncu-
badoras uti l i zan bsi camente l a conducci n
y l a convecci n natural o forzada.
Conduccin trmica
En las incubadoras que funcionan por con-
duccin trmica, el conjunto de resistencias
elctricas transfiere directamente el calor a
las paredes de la cmara, donde se incuban
las muestras. Las resistencias constituyen una
regin de alta temperatura, mientras que la
cmara es una regin de menor temperatura.
La transferencia de energa trmica se pre-
senta siempre desde la regin de mayor tem-
peratura hacia la regin de menor tempera-
tura, segn la siguiente ecuacin
1
:
donde:
q = cantidad de calor trasferido por con-
duccin
k = conductividad trmica del material
A = rea de transferencia de calor
gradiente de temperatura en la direc-
cin del flujo de calor
El signo menos () se introduce en la ecua-
cin para que se cumpla la segunda ley de la
termodinmica.
Conveccin trmica
En las incubadoras que funcionan mediante
conveccin trmica, el calor generado por el
sistema de resistencias es transferido a un
fluido aire que circula en la cmara de in-
cubacin, transfiriendo el calor a las mues-
tras; la eficiencia de este proceso depende de
los patrones de flujo del mismo. En general el
aire ingresa a la incubadora por la parte infe-
rior y es calentado en un compartimiento,
desde el cual fluye a la cmara de incubacin,
siguiendo patrones uniformes de flujo, para
finalmente salir al exterior a travs de un
conducto ubicado en la parte superior de la
incubadora.
La ecuacin bsica que explica el comporta-
miento es
2
:
q =hA(T
W
- T
)
donde:
q = cantidad de calor transferido por conveccin
h = coeficiente de conveccin de transferen-
cia de calor
A = rea a travs de la cual se realiza la trans-
ferencia de calor
T
W
=temperatura en l a superfi ci e de l a
resistencia
T
= temperatura del fluido

Algunas incubadoras disponen tambin de
ventiladores que hacen circular el aire, por lo
que el proceso de conveccin es forzado. En
el esquema que se presenta a continuacin se
muestran tres criterios de diseo utilizados
en las incubadoras: conduccin trmica, con-
veccin natural y conveccin forzada.
q =-kA
T
x
T
x
=
1
Ecuacin bsica de transferencia de calor, deducida por el fsico y matemtico francs Joseph Fourier.
2
Ecuacin de transferencia de calor por conveccin, desarrollada por Isaac Newton (ley de enfriamiento).
151
Incubadoras 14
Cuando se requiere obtener temperaturas en
la cmara de incubacin inferiores a la tem-
peratura ambiente [Ta], es necesario instalar
en la incubadora un sistema de refrigeracin
que le permita extraer cantidades de calor
adicionales, de forma que la temperatura en
la cmara de incubacin sea ms baja que la
temperatura del ambiente. Dicho sistema es
operado mediante el sistema de control de
temperatura de la incubadora.
Al gunos fabri cantes han i ncorporado en sus
di seos cmaras de agua que rodean l a c-
mara de i ncubaci n. El agua en estado l -
qui do es una sustanci a que ti ene mayor ca-
paci dad de absorci n y retenci n trmi ca.
Este di seo es parti cul armente ti l cuando
se requi eren garanti zar condi ci ones muy es-
tabl es de temperatura dentro de l a cmara
de i ncubaci n.
Cuando se necesitan atmsferas especiales, se
han diseado incubadoras que inyectan gases
como dixido de carbono (CO2) y mantienen
concentraciones del mismo en la cmara de
incubacin que varan entre el 3 % y el 5 %.
Los sistemas de control de temperatura se ba-
san en la utilizacin de termostatos bimet-
licos o de expansin de fluidos o de pares
termoelctricos o termistores, o diversos ele-
mentos semiconductores que utilizando cir-
cuitos electrnicos permiten, mediante el uso
de microprocesadores, controlar la temperatura
y dems funciones de la incubadora. Cada pro-
ductor ha desarrollado sus propios diseos.
Los datos relacionados con los niveles de tem-
peratura programados o alcanzados y dems
informacin son presentados en pantallas
construidas con base en diodos emisores de
luz (LED).
Para que una incubadora regule adecuada-
mente la temperatura, debe existir una dife-
rencia entre la temperatura de la cmara
[Tc] y la temperatura ambiente [Ta] de al
menos 5 C. Si la temperatura de la cmara
[Tc] debe ser inferior a la temperatura am-
biente [Ta], se requiere que la incubadora
sea de baja temperatura, es decir, que dis-
ponga de un sistema de refrigeracin, me-
diante el cual sea posible reducir la tempe-
ratura de la cmara [Tc] a una temperatura
inferior a la del ambiente [Ta].
Resumen: Si Tc>Ta, la incubadora no requie-
re sistema de refrigeracin. Si Tc<Ta, la incu-
badora es de baja temperatura y requiere de
sistema de refrigeracin.
En consecuencia la adquisicin de incubado-
ras depende del tipo de procedimientos que
realiza el laboratorio. Entonces, las especifi-
caciones tcnicas deben ser estudiadas y defi-
nidas cuidadosamente, para que la adquisi-
cin responda a las necesidades reales de ca-
da laboratorio.
Ilustracin 39: Formas de transferencia de calor
152
1. Un interruptor general para encender o
apagar el equipo. Algunos productores in-
cluyen en el mismo un breaker de protec-
cin. El interruptor dispone de dos posicio-
nes. En la posicin [I], se energiza la incu-
badora. En la posicin [O], se desconecta la
incubadora.
2. Una pantalla que permite ver los parme-
tros seleccionados. Por ejemplo: tempera-
tura seleccionada, temperatura de alarma
(mximo y mnima).
3. Dos botones de control que normalmente
se identifican con las palabras Men y Se-
leccin o Set en ingls. Estos permiten pro-
gramar la operacin de las incubadoras y
determinar los niveles de alarma.
4. Dos botones de seleccin que permiten
aumentar o disminuir las temperaturas re-
queridas. Los botones de seleccin se utili-
zan en combinacin con los botones de
control.
5. Un conjunto de di odos emi sores de l uz o
LED que i nforman sobre el estado de
operaci n. Si el sistema calefactor est en
operacin, se enciende el LED identificado
como Calor; si se est programando la in-
cubadora, se enciende el LED identificado
como Programa.
6. El teclado corresponde a la zona del con-
trol, donde se encuentran ubicados los bo-
tones de seleccin y de control.
Cada fabricante utiliza controles ajustados al
diseo de incubadora, pero en general todos
disponen de los controles a los que se ha he-
cho mencin. La secuencia de accionamiento
de los mismos normalmente se explica en los
manuales de uso de los fabricantes.
En general con el botn denominado Men,
se elige el parmetro con el que se quiere tra-
bajar y, al presionar los botones de seleccin,
se aumentan o disminuyen hasta el punto en
donde lo requiere el operador. A continua-
cin, se confirma la seleccin realizada en el
botn Seleccin o Set en ingls.
CONTROLES DE LA INCUBADORA
El esquema que se muestra a continuacin da
una idea del tipo de controles que normalmen-
te es posible encontrar en una incubadora de
fabricacin reciente. Los nmeros que identifi-
can cada elemento en el esquema se explican a
continuacin.
Ilustracin 40: Control de incubadora
153
Incubadoras 14
Las incubadoras requieren para su funciona-
miento las siguientes condiciones:
1. Una acometida elctrica dimensionada de
acuerdo con los estndares elctricos utili-
zados en el pas. La toma elctrica que ali-
menta la incubadora no debe estar a ms
de 1,5 m del lugar seleccionado para la ins-
talacin de la incubadora. La acometida
elctrica normalmente debe suministrar
un voltaje de 120 V, 60 Hz o de 220-240 V,
50/60 Hz y disponer de su respectiva aco-
metida a tierra.
2. Un espacio libre a los lados de la incubado-
ra y tambin en la parte trasera del equi-
po, con el fin de permitir el paso de los ca-
bles y la ventilacin requerida por la incu-
badora para su funcionamiento normal.
Dicho espacio se estima entre 5 y 10 cm.
3. Un lugar del laboratorio donde la varia-
cin de temperatura sea mnima.
4. Una estantera o mesn, firme y nivelado,
capaz de sostener el peso de la incubado-
ra. El peso de una incubadora de tres es-
tantes se estima entre 60 y 80 kg.
5. Reguladores de presin, mangueras y aco-
ples, para las incubadoras que utilizan di-
xido de carbono (CO2). Adems, anclajes
que permitan asegurar el cilindro de alta
presin que contiene el CO2.
RUTINAS DE MANTENIMIENTO Y
USO DE LA INCUBADORA
Se presentan a continuacin las rutinas genera-
les de operacin y mantenimiento que puede
llegar a requerir una incubadora. Los procedi-
mientos especficos deben realizarse siguiendo
las recomendaciones de cada fabricante.
Recomendaciones de uso
1. No utilizar una incubadora en presencia
de materiales inflamables o combustibles,
debido a que en el interior del equipo
existen componentes que en operacin
podran actuar como fuentes de ignicin.
2. Evitar el derrame de soluciones cidas en
el interior de la incubadora. Estas deterio-
ran los materiales internos de la cmara
de incubacin. Procurar manejar sustan-
cias cuyo pH sea neutro en lo posible. Evi-
tar incubar sustancias que generen humos
corrosivos.
3. Evitar colocar recipientes sobre la cubierta
inferior que protege los elementos cale-
factores resistivos.
4. Emplear elementos de proteccin perso-
nal cuando se utiliza la incubadora: an-
teojos de seguridad, guantes, pinzas para
colocar y retirar recipientes.
5. Evitar permanecer frente a una incubado-
ra que se encuentre con la puerta abierta.
Algunas sustancias emiten humos o vapo-
res no recomendables para respirar.
6. Calibrar la incubadora en el lugar de ins-
talacin para constatar su uniformidad y
estabilidad.
7. Verificar la temperatura de operacin de
la incubadora en horas matutinas y ves-
pertinas, con instrumentos certificados:
termmetro, termo par, etc.
8. Registrar cada inconformidad detectada
en la bitcora de la incubadora. Explicar si
se tomaron acciones correctivas.
9. Verificar que la temperatura de la incuba-
dora no vare ms de un grado centgrado
(+/ 1 C).
10. Aadir un agente inhibidor microbiano
de carcter no voltil, si se requiere insta-
lar dentro de la incubadora un recipiente
con agua para mantener una determina-
da cantidad de humedad.
Recomendaciones de limpieza
1. Desconectar la incubadora antes de iniciar
los procesos de limpieza.
155
Incubadoras 14
Normalmente, las situaciones comunes que
se presentan en la siguiente tabla debe reali-
zarlas personal que haya recibido y aprobado
capacitacin especializada en operacin y
mantenimiento de incubadoras. Casos espe-
cializados deben atenderse siguiendo las re-
comendaciones de los fabricantes.
Incubadora normal
La i ncubadora no enci ende. No hay energa en l a red de al i ment a-
ci n el ct ri ca.
Revi sar el est ado de l a acomet i da el ct ri ca.
Al arma permanece encendi da y l a t em-
perat ura es mayor que l a sel ecci onada.
La t emperat ura sel ecci onada ha si do
cambi ada a un val or menor que el l mi -
t e mxi mo def i ni do para l a al arma.
Esperar a que l a t emperat ura act ual di smi nu-
ya hast a l a t emperat ura sel ecci onada.
La pant al l a muest ra cont i nuament e
una seal de f al l a. Usual ment e l os LED
muest ran l as l et ras EEE.
El di odo de al arma cent el l ea. Permi t i r que l a i ncubadora se enf re hast a que
se est abi l i ce en l a t emperat ura sel ecci onada
de operaci n.
El di odo de al arma cent el l ea. Permi t i r que l a i ncubadora se enf re hast a que
se est abi l i ce en l a t emperat ura sel ecci onada
de operaci n.
El control de temperatura est defectuoso. Sust i t ui r cont rol de t emperat ura.
El relevo de estado slido est defectuoso. Sust i t ui r rel evo.
La i ncubadora present a f al l as de cal en-
t ami ent o.
El cont rol de t emperat ura est defect uoso. Revisar y ajustar o sustituir control de temperatura.
La resistencia calefactora est defectuosa. Sust i t ui r resi st enci a. Col ocar repuest o con l as
mi smas caract erst i cas del ori gi nal .
La conexi n de l a resi st enci a cal ef act o-
ra est def ect uosa.
Limpiar punt os de conexin. Ajust ar la conexin.
El empaque(s) de l a puert a est def ec-
t uoso(s).
Cambi ar empaque(s) de l a puert a.
El par t ermoel ct ri co est def ect uoso. Reempl azar par t ermoel ct ri co.
La t emperat ura sel ecci onada es menor
que l a t emperat ura ambi ent e.
Revi sar especi f i caci n de l a i ncubadora. Sol o
l as i ncubadoras ref ri geradas pueden operar
en est e t i po de condi ci ones. En condi ci ones
normal es l a t emperat ura ambi ent e es menor
que l a t emperat ura de l a i ncubadora.
El rel evo est def ect uoso. Sust i t ui r rel evo.
El i nt errupt or de encendi do/apagado
est en l a posi ci n apagado.
Colocar el int errupt or en la posicin encendido.
El cabl e de al i ment aci n el ct ri ca est
def ect uoso.
Revi sar cabl e o sust i t ui rl o.
156
DEFINICIONES BSICAS
Conduccin trmica. Forma de transferen-
cia de calor dentro de una sustancia, en la
cual el calor fluye del punto de mayor tempe-
ratura al punto de menor temperatura.
Conveccin trmica. Forma de transferen-
cia de calor a travs del movimiento de un
fluido.
DBO. Demanda biolgica de oxgeno. Indica-
dor de la contaminacin de un efluente. Se
mide mediante el consumo de oxgeno di-
suelto por parte de microorganismos que
descomponen la materia orgnica presente
en el propio efluente. La DBO se mide como
la masa en miligramos de oxgeno utilizado
por un litro de muestra del efluente, cuando
se incuba a 20 C durante 5 das.
LED. Diodo emisor de luz, en ingls light emi-
sion diode. Dispositivo electrnico muy utili-
zado para presentar datos en pantallas.
Par termoelctrico. Componente formado
por dos materiales diferentes unidos por los
extremos que generan una corriente elctri-
ca, cuando una de las uniones est a mayor
temperatura. Este fenmeno se conoce como
efecto Seebeck en honor a su descubridor, el
fsico alemn Thomas Seebeck.
Resistencia. Propiedad de las diferentes sus-
tancias o materiales, en virtud de la cual se
impide en mayor o menor grado el paso de la
corriente elctrica. En los textos se identifica
la resistencia con la letra [R]. Para un cuerpo
de seccin uniforme; por ejemplo: un alam-
bre, la resistencia [R] es una magnitud direc-
tamente proporcional a la longitud [l] e in-
versamente proporcional al rea seccional
[a]. La resistencia se representa mediante la
ecuacin siguiente:
Incubadora de baja temperatura
El cont rol de la incubadora no f unciona. El i nt errupt or est apagado. Encender el i nt errupt or pri nci pal .
Temperatura uniforme en la cmara de in-
cubacin, pero superior a la seleccionada.
Hay acumul aci n de escarcha al rede-
dor del evaporador.
Descongel ar segn proceso def i ni do por el
f abri cant e.
Temperatura superior o inferior a la selec-
cionada.
El cont rol de t emperat ura podra re-
queri r cal i braci n.
Cal i brar segn procedi mi ent o def i ni do por el
f abri cant e.
El compresor no f unci ona, aunque el
LED de enf ri ami ent o est encendi do.
El prot ect or t rmi co del compresor est
abi ert o.
Veri f i car el vol t aj e de l nea, est e no debe va-
ri ar ms del 5 % del vol t aj e especi f i cado en l a
pl aca.
Lect uras de t emperat ura superi ores a
l as sel ecci onadas y di sparo de al arma
por enci ma de l os 40 C.
El relevo de enfriamient o est defect uoso. Sust i t ui r rel evo de enf ri ami ent o.
El compresor est def ect uoso. Sust i t ui r compresor. Cargar ref ri gerant e y cal i -
brar. (Procedi mi ent o especi al i zado que requi e-
re herrami ent as especi al es).
El f l uj o i nt eri or de ai re est bl oqueado
por cont enedores de muest ras.
Reorgani zar l os cont enedores para permi t i r el
f l uj o de ai re.
Lect uras de t emperat ura errt i cas (su-
peri ores o i nf eri ores a l a especi f i cada).
Hay acumul aci n de escarcha al rede-
dor del evaporador.
Descongel ar segn pr oceso def i ni do por el
f abr i cant e.
El cont rol se desconect a est ando en
operaci n.
El vol t aj e de l nea es i nadecuado. Verificar el volt aje de lnea, est e no debe variar
ms del 5 % del volt aje especificado en la placa.
Acomet ida elct rica fuera de norma.
Reduci r l a t emperat ura de enf ri ami ent o.
No hay al i ment aci n el ct ri ca. Veri f i car ci rcui t o de al i ment aci n el ct ri ca.
R =k x
l
a
157
Incubadoras 14
donde:
empleadas
presenta usualmente por la letra griega .
Termistor. Componente electrnico cuya resis-
tencia vara con la temperatura. Son dispositivos
de bajo costo que se utilizan en diversas aplica-
ciones, una de las ms comunes es el control de
temperatura.
Termostato. Dispositivo que regula la tem-
peratura de un sistema. Por lo general, opera
mediante la expansin de uno de sus compo-
nentes que mecnicamente acciona otro ele-
mento como, por ejemplo, un interruptor
que controla alguna funcin.
Bibliografa
Holman, J., Heat Transfer, New York, Mc Graw Hill Co., 1972.
Isotemp
Standar Incubator 600 Series, Instruction manual, Fisher Scientific, Part N 95587,
Rev. K, 2003.
Isotemp
Forced Air Incubator 600 Series, Instruction manual, Fisher Scientific, Part N
102886, Rev. D, 2003.
Isotemp
Large Capacity Refrigerated Incubator, Model 304 & 304R, Fisher Scientific, Cat.
11-679-304 & 11-679-304R.
Low Temperature Incubator, Model 307A, Operating and Service Instructions, Fisher
Scientific, Part N 88732, 1993.
Millipore Laboratory Incubator, User Guide, Millipore Corporation, P36008, Rev. A., 2000.
158
160
En la ilustracin es posible identificar el foco
[F] lugar donde se concentran los rayos lumi-
nosos y la forma en que es refractada la luz
al atravesar el lente. La distancia entre el len-
te y el foco [D] se conoce universalmente co-
mo distancia focal.
La ilustracin que se muestra a continuacin
resume los conceptos relacionados con el
funcionamiento de los lentes, los cuales se
aplican en el diseo y fabricacin de los ele-
mentos pticos del microscopio.
PROPSITO DEL EQUIPO
El microscopio es un instrumento de precisin
conformado por subsistemas pticos lentes,
filtros, prismas, condensadores; mecnicos
elementos para controlar la posicin de la
muestra en el espacio tridimensional X, Y, Z;
elctricos transformadores y sistemas de ilu-
minacin, y electrnicos cmaras, sistemas
de televisin, etc., que interactan entre s
para amplificar y controlar la formacin de
imgenes de objetos de tamao reducido, cu-
yas caractersticas no alcanzan a ser detecta-
das por el ojo humano.
Por lo general, para observar las muestras se
requiere que estas hayan sido preparadas de
acuerdo con tcnicas que permiten resaltar los
detalles a observar. El microscopio constituye
una ayuda diagnstica de primer orden en el
rea de salud, en especialidades como hema-
tologa, bacteriologa, parasitologa y la for-
macin de recursos humanos. (Existen micros-
copios con aditamentos especializados para
que los estudiantes efecten las observacio-
nes, dirigidos por un profesor). El desarrollo
tecnolgico de estos equipos ha permitido fa-
bricar una enorme cantidad de modelos de
aplicacin especializada en la industria y la
academia, y ha sido fundamental para el desa-
rrollo del conocimiento humano y para enten-
der el funcionamiento de la naturaleza.
El microscopio ha sido construido utilizando
las propiedades fsicas de los lentes al interac-
tuar con la luz. Un lente es un elemento p-
tico, fabricado por lo general en vidrio, que
tiene la propiedad de refractar la luz. Es de
dimensiones calculadas con superficies gene-
ralmente parablicas o esfricas. Si los rayos
de luz que inciden sobre una de las superfi-
cies del lente convergen al salir del mismo en
un punto F, el lente se conoce como positivo
o convergente; si el lente dispersa los rayos
luminosos que lo atraviesan, se denomina di-
vergente o negativo. Los lentes positivos
(convergentes), como el que se presenta a
continuacin, constituyen la base sobre la
cual se fabrican los microscopios.
Ilustracin 41: Lente positivo (convergente)
161
Mi croscopi o 15
Explicacin. Cuando un objeto bien ilumina-
do [h] se coloca a una distancia [a] a la iz-
quierda de un lente convergente, los rayos de
luz que provienen del mismo son refractados
al cruzarlo. El rayo que proviene de la parte
superior del objeto, que cruza el eje ptico
del lente en el punto focal [F], es refractado
por las dos superficies del mismo y sale en
una direccin paralela al eje ptico. El rayo
que parte paralelo al eje ptico y cruza el len-
te en la parte superior es refractado y cruza,
a travs del punto focal [F] del lado de la ima-
gen hasta que se cruza con el primer rayo a
una distancia [b] del lente, donde se forma la
imagen. En el caso presentado, la distancia
[a] es mayor que la distancia focal [f], por lo
que se forma una imagen real e invertida a
una distancia [b] a la derecha del lente. La
distancia focal [F] est relacionada a las dis-
tancias [a] y [b] por la ecuacin:
La magnificacin [M] de un lente est defini-
da por la relacin que existe entre el tamao
del objeto y el tamao de la imagen y se re-
presenta por la ecuacin:
donde:
[h] y [h] corresponden respectivamente a las
dimensiones de la imagen y del objeto, y [a] y
[b] a las distancias existentes entre el lente y el
punto donde se forma la imagen, y entre el
lente y el punto donde se encuentra el objeto.
Ilustracin 42: Funcionamiento del lente
Un objeto [h], ubicado a una distancia [a] del lente, produce una imagen [h], a una distancia [b],
donde [h>h].
Relaciones matemticas que gobiernan la construccin de lentes:
1/f = 1/a+1/b, donde:
f = distancia al foco. (Lugar donde se concentran las ondas luminosas); [a] = distancia del lente al
objeto y [b] = distancia del lente a la imagen. La magnificacin [M] de un lente se define como
[M] = h/h = b/a.
=
1
F
+
1
a
1
b
M = =
h
h
b
a
162
DIAGRAMA DEL EQUIPO (ISOMTRICO Y CORTE)
1
1
La numeracin corresponde a la descripcin de componentes que se presenta a continuacin.
Ilustracin 43: Corte del microscopio
163
Mi croscopi o 15
Normalmente, los microscopios utilizan ener-
ga elctrica de 110 V/60 Hz o 220 V/60 Hz. Al-
gunos disponen de una fuente regulada que
permite variar la intensidad lumnica. Tam-
bin existen microscopios que, en lugar de
bombillos, disponen de un espejo, mediante
el cual se dirige la luz hacia la placa ubicada
en la plataforma. Dichos microscopios son de
mxima utilidad en regiones alejadas de los
centros urbanos, donde no existen lneas de
interconexin elctricas y se utilizan en briga-
das de salud. Otras clases de microscopios re-
quieren de preinstalaciones especiales. Un mi-
croscopio de fluorescencia necesita una cabina
oscura para poder efectuar las observaciones.
Componentes
Los componentes principales de los subsistemas son los siguientes:
1
N
Cabeza bi nocul ar
SI STEMA
1
N
Ocul ares
2 Revl ver port aobj et i vos
* Ver ubi caci n de component es en l a i l ust raci n 43.
4 Revl ver port aobj et i vos
4 Il umi nador 10 Cri st al de ci erre con port af i l t ros
11 Pal anca de graduaci n del campo l umi noso del di af ragma
12 Espej o cncavo
13 Lmpara i ncandescent e
14 Port al mpara con ani l l o de aj ust e
15 Lent e col ect or
16 Espej o
3 Pl at af orma, pl at i na o carro por-
t amuest ras y condensador
6 Condensador
5 Cuerpo del mi croscopi o 17 Transf ormador i nt erno
18 Rest at o de cont rol
19 Cabl e de al i ment aci n
20 Cont rol de aj ust e macro/mi cromt ri co
22 Brazo del mi croscopi o
24 Base
7 Di af ragma de apert ura
8 Port af i l t ros
9 Lent e de campo ampl i o
21 Cont rol de al t ura del condensador
23 Pl at af orma, pl at i na o carro port amuest ras
5 Obj et i vos
2 Tubo bi nocul ar
3 Cabeza bi nocul ar
COMPONENTES
164
enfoque y se vuelve a ensamblar. Si los lentes
del ocular presentan roturas debido a circuns-
tancias fuera de control golpes por cada, uso
indebido, debe cambiarse el ocular.
Cabeza binocular
El estado de la cabeza binocular tiene un efec-
to directo sobre la calidad de la imagen del mi-
croscopio. Cualquier suciedad adherida a los
componentes pticos de la cabeza afecta la ca-
lidad de la imagen. Este componente puede
llegar a ensuciarse debido a situaciones deriva-
das del trabajo normal en el laboratorio como
las generadas en el cambio de oculares, la ins-
talacin de accesorios como cmaras fotogr-
ficas o el simple olvido de colocar los tapones
cuando no est en uso el microscopio. Sus
componentes ms importantes son prismas y
espejos.
Prismas. Tienen una superficie reflectora
plateada que puede oxidarse con el tiempo
y perder capacidad reflectiva. Algunos pris-
mas solamente disponen de una capa de
pintura reflectora aplicada sobre la superfi-
cie de sus caras, a travs de la cual la luz en-
tra y sale.
En el caso de daos en la superficie reflec-
tora, el prisma puede ser removido, limpia-
do, replateado o repintado, instalado y ali-
neado en la cabeza binocular. Esta clase de
mantenimiento es altamente complejo y
solo lo realizan laboratorios especializados
o empresas que brindan servicios de mante-
nimiento especializado. La remocin de
prismas, sin el entrenamiento y la herra-
mienta adecuada, puede producir graves
desajustes en la calidad de la imagen e in-
clusive la rotura del componente.
Espejos. Tienen sus superficies reflectoras
directamente expuestas y son susceptibles a
la oxidacin. Si es necesario repararlos, se
desmonta y se retira el espejo de la cabeza
binocular y se sustituye por uno nuevo, que
se corta, cementa y alinea directamente en
el sitio de montaje.
DESCRIPCIN DE FALLAS POTENCIALES
POR COMPONENTES
Cabeza binocular
Oculares
El problema ms frecuente que afecta los ocu-
lares es la presencia de polvo o suciedad, la
cual puede ser externa en las superficies exte-
riores o interna en las superficies interiores.
Dicha suciedad o polvo produce sombras que
interfieren con la muestra bajo anlisis, espe-
cialmente cuando se usan objetivos de alto po-
der (40X-100X). Si la suciedad es externa, la re-
paracin se realiza limpiando las superficies de
los lentes y, si es interna, desensamblando el
objetivo, limpiando las superficies internas,
reensamblando y verificando el estado final.
Tambin los lentes de los oculares se ven afec-
tados por rayones, especialmente en aquellos
que ya tienen largo tiempo de servicio. Los
mismos se producen por descuidos en los pro-
cedimientos de limpieza y por uso de elemen-
tos inadecuados en dichos procesos. Los rayo-
nes producen sombras en el campo visual del
ocular, similares a los de una telaraa. Desa-
fortunadamente, este tipo de defecto obliga a
cambiar el ocular. Algunos disponen de meca-
nismos de enfoque que a veces se traban. Pa-
ra reparar se desensambla el ocular, se aplica
solvente a la rosca, se limpia el mecanismo de
1. Ocular
2. Tubo binocular
3. Cabeza binocular (prismas, lentes y espejos)
Descripcin
165
Mi croscopi o 15
Iluminador
Es un elemento fundamental para la utilizacin
del microscopio. Si el sistema de iluminacin no
funciona bien, el microscopio puede quedar fue-
ra de uso, dado que la intensidad luminosa y el
contraste son fundamentales para la identifica-
cin y observacin de la muestra estudiada. Di-
versos factores afectan el sistema de iluminacin;
los ms comunes son la suciedad o deterioro de
los componentes pticos como espejos y lentes,
fallas en los voltajes de alimentacin o la utiliza-
cin de bombillos diferentes a los recomendados
por los fabricantes. Las anomalas mencionadas
producen pequeas sombras en el campo de vi-
sin, intensidad de luz insuficiente o falta de ho-
mogeneidad en la iluminacin.
Suciedad interna
Aparece debido a que los sistemas de iluminacin
no estn sellados para impedir el ingreso de polvo
y partculas. El polvo que ingresa al sistema produ-
ce difusin y disminucin en la cantidad de luz
proyectada sobre la muestra. Las partculas gran-
des producen sombras que dificultan la observa-
cin. Para corregir el problema, se desensambla el
iluminador, se limpian sus componentes, se en-
samblan y alinean de nuevo sus componentes.
Espejos
Los espejos se caracterizan por tener una su-
perficie reflectiva directa, aplicada sobre el
cuerpo del espejo. En microscopios de fabri-
cacin reciente, generalmente se encuentra
protegida por un recubrimiento. En equipos
antiguos, la capa reflectora no dispona de
tales recubrimientos, por lo que estaba ex-
puesta a la oxidacin.
Bombillo incandescente
El bombillo es un componente de consumo. Tie-
ne una determinada vida til y por esto se debe
planificar su adquisicin de forma que siempre
est disponible un repuesto en el laboratorio o
en la institucin donde se encuentra instalado el
equipo. La instalacin del bombillo se realiza si-
guiendo las instrucciones del fabricante. Algu-
nos equipos, como los microscopios pticos de
fluorescencia, utilizan bombillos especiales
lmparas de mercurio o xenn que requieren
procedimientos de montaje y calibracin que,
aunque sencillos, se deben efectuar segn las re-
comendaciones de los fabricantes. El voltaje su-
ministrado al microscopio debe corresponder al
especificado por el fabricante. De lo contrario,
se corren riesgos innecesarios que afectan la ca-
lidad de la iluminacin. Algunos microscopios
utilizan transformadores internos o externos y
sistemas de regulacin de voltaje.
Plataforma, platina o carro
portamuestras y condensador
10.Cristal de cierre con portafiltros
11.Palanca de graduacin del campo luminoso
del diafragma
12.Espejo cncavo
13.Lmpara incandescente
14.Portalmpara con anillo de ajuste
15.Lente colector
16.Espejo
Descripcin
6. Condensador
7. Diafragma de apertura
8. Portafiltros
9. Lente de campo amplio
21.Control de altura del condensador
23.Platina, plataforma o carro portamuestras
Component es
166
Condensador
El condensador controla la forma en que la
luz se concentra o contrasta sobre la muestra
bajo observacin. Est compuesto por ele-
mentos pticos y mecnicos. Los elementos
pticos estn constituidos por lentes; los ele-
mentos mecnicos, por dispositivos que per-
miten controlar la posicin de los elementos
pticos y la cantidad de luz que llega a la
muestra mediante un diafragma mecnico.
Normalmente, los componentes pticos son
afectados por la presencia de polvo. El mismo
debe ser limpiado de forma similar a la utili-
zada con los sistemas de lentes. Se limpian
con un pincel fino de pelo de camello, con el
cual se remueve el polvo que se haya deposi-
tado sobre sus superficies. Los componentes
mecnicos requieren, para su ajuste, de herra-
mientas de caractersticas especiales. Cada fa-
bricante dispone de sus propios diseos. Las
rutinas habitualmente estn enfocadas a pro-
cedimientos de limpieza, ajuste y lubricacin.
Platina o carro portamuestras
La platina o carro portamuestras est consti-
tuido por una serie de componentes que in-
teractan entre s y que tienen como prop-
sito controlar la posicin de la muestra bajo
anlisis. El carro dispone de movimientos de
translacin en sentidos X/Y, que el operador
controla a travs de botones macro/microm-
tricos independientes; adems, el carro dispo-
ne de dispositivos de tensin que permiten
graduar la suavidad de los movimientos y
unas guas tipo "cola de milano" que normal-
mente se lubrican. En la parte superior estn
instaladas las platinas o uas de sujecin de
las lminas portamuestras. El mantenimiento
busca mantener limpios, lubricados y bien
ajustados estos mecanismos.
Revlver portaobjetivos
El mantenimiento del revlver portaobjetivos es
sencillo. Internamente dispone de un trinquete
que permite alinear cada uno de los objetivos
con el tren ptico del microscopio. Simplemen-
te, se gira con suavidad hasta que el mecanismo
del trinquete ajusta la posicin correcta del si-
guiente objetivo. Cada fabricante define el n-
mero de objetivos que pueden ser montados en
el revlver; lo comn es encontrar revlveres
que aceptan desde tres hasta cinco objetivos. El
mantenimiento busca mantener limpio, lubrica-
do y bien ajustado el mecanismo rotatorio.
Los objetivos reciben rutinas de limpieza de sus
superficies pticas externas. Los de inmersin re-
quieren que, cada vez que se termine de utilizar
el objetivo, se limpie el aceite para evitar que,
por capilaridad, este invada la estructura ptica
interna del objetivo.
Cuerpo del microscopio
4. Revlver portaobjetivos
5. Objetivos
Component es
17. Transformador interno
18. Restato de control
19. Cable de alimentacin
20. Control ajuste macro/micromtrico
22. Brazo del microscopio
Component es
167
Mi croscopi o 15
El cuerpo del microscopio est diseado para
recibir y soportar los componentes ya descritos
cabeza binocular, carro portamuestras, con-
densador y revlver portaobjetivos y algunos
otros como el transformador y dems elemen-
tos elctricos/electrnicos que forman parte
del sistema de iluminacin del microscopio.
El mantenimiento del cuerpo del microscopio
consiste bsicamente en mantener limpia la su-
perficie, removiendo la grasa, suciedad o elemen-
tos que hayan podido afectar su presentacin y
estado. Es necesario tener especial cuidado con
sustancias qumicas que pueden ser corrosivas y
los tintes que se utilizan en los laboratorios para
teir las placas portamuestra.
MANTENIMIENTO GENERAL
DEL MICROSCOPIO
Ante todo es necesario enfatizar que el mi-
croscopio es un equipo de alta precisin. La
integridad de sus componentes pticos, me-
cnicos y elctricos debe ser observada, a fin
de conservarlo en las mejores condiciones.
Cada elemento del microscopio ha sido de-
sarrollado utilizando las ms avanzadas tc-
nicas de fabricacin. El ensamble de sus
componentes y su ajuste se realiza en fbri-
ca, utilizando equipos especializados que,
mediante tcnicas de medicin avanzadas,
controlan las tolerancias requeridas entre
los diversos componentes del equipo. La lim-
pieza del ambiente en el que se utiliza, su
instalacin y uso cuidadoso resultan funda-
mentales para lograr una larga vida til.
La humedad, el polvo y las malas condicio-
nes de alimentacin elctrica, el mal uso o
instalacin inadecuada resultan contrapro-
ducentes para su correcta conservacin. El
mantenimiento del microscopio implica mu-
cho cuidado, paciencia y dedicacin. Debe
ser efectuado nicamente por personal que
haya recibido capacitacin en el equipo y
que disponga de la herramienta especializa-
da que se requiere para intervenir. Se pre-
sentan a continuacin las recomendaciones
generales para la instalacin y el manteni-
miento necesarios para mantener un micros-
copio en buen estado de funcionamiento y
que estn al alcance del microscopista.
Instalacin y almacenamiento
1. Asegurarse que el ambiente o rea en que
se instale el microscopio est protegido o
protegida del polvo y la humedad. El am-
biente ideal debe disponer de un sistema
de aire acondicionado que garantice aire
libre de polvo o partculas, control de hu-
medad y control de temperatura de ma-
nera permanente.
2. Verificar que el ambiente o rea en que se
instale el microscopio disponga de seguri-
dad: puerta con cerradura para evitar su
sustraccin no autorizada.
3. Confirmar que el lugar seleccionado para
ubicar el microscopio est alejado de lu-
gares como pocetas de agua o donde se
trabajen sustancias qumicas, para evitar
que el equipo resulte afectado por un de-
rrame o salpicadura. Tambin deben evi-
tarse sitios que tengan luz solar directa.
4. Verificar que el lugar seleccionado cuente
con una toma elctrica en buen estado, cu-
yo voltaje est ajustado en magnitud y fre-
cuencia con los cdigos y normas elctricas,
y que resulte compatible con el del sistema
de iluminacin del microscopio. En caso de
que el microscopio utilice espejo, debe es-
tar ubicado cerca de una ventana que per-
mita una buena iluminacin, pero sin estar
directamente expuesto a la luz solar.
5. Instalar el microscopio sobre una superfi-
cie nivelada de estructura rgida, bajo la
cual exista espacio suficiente para que el
usuario microscopista coloque sus pier-
nas y como consecuencia pueda acercar el
cuerpo hacia el microscopio y la cabeza
hacia los oculares, sin forzar la columna
vertebral: cuello y espalda.
6. Para facilitar la colocacin del microsco-
pista, proporcionar una silla de altura va-
riable, que le brinde un buen soporte
lumbar; si es del caso, tambin proveer un
apoyo para los pies, situado al frente del
sitio de trabajo, no en la silla. El propsito
es lograr que la columna vertebral est lo
ms recta posible y se reduzca la flexin
de los hombros y el cuello.
168
7. Evitar que en sitios cercanos al lugar de
instalacin del microcopio haya equipos
que produzcan vibraciones como centrfu-
gas o refrigeradores.
8. Procurar no mover el microscopio de su si-
tio de instalacin y con mayor razn si el
mismo se utiliza intensamente cada da.
9. Cubrir el microscopio con un protector de
polvo si no se usa por perodos de tiempo
largos; tomar precauciones para que no lo
afecten excesos de humedad. Mientras ms
seco el ambiente, menos probabilidad de
que se presente crecimiento de hongos. El
protector puede ser de plstico o de tela si-
milar en calidad a la utilizada en la fabrica-
cin de pauelos, que no suelte pelusa.
10. En zonas de humedad alta, guardar el mi-
croscopio durante la noche, en una cabina
provista de un bombillo de mximo 40 W.
Esto ayuda a mantener seco el entorno y re-
duce la probabilidad de que se presente for-
macin de hongos. Si se utiliza esta alterna-
tiva, verificar que disponga de orificios que
permitan la ventilacin del interior.
Procedimientos de limpieza
La limpieza del microscopio es una de las ru-
tinas ms importantes y debe considerarse un
procedimiento rutinario. Para realizar la ruti-
na de limpieza se requiere lo siguiente:
Materiales:
1. Una pieza de tela limpia, de textura simi-
lar a la de los pauelos.
2. Una botella de lquido para limpieza de len-
tes. Se consigue en las pticas. Normalmente
no afecta los recubrimientos de los lentes y
tampoco afecta los pegantes o cementos utili-
zados para el montaje de los mismos. Entre los
lquidos de limpieza ms utilizados se encuen-
tran el etil ter, el xileno y la gasolina blanca.
3. Papel para limpieza de lentes. Se consigue
normalmente en las pticas. Si no es posi-
ble conseguir este material, se puede susti-
tuir con papel absorbente suave o con al-
godn tipo medicinal. Tambin puede uti-
lizarse un trozo de seda suave.
4. Una pieza de gamuza muy fina. Se puede
conseguir en peleteras.
5. Una pera de caucho para soplar aire. Se
puede fabricar en el laboratorio un dispo-
sitivo con este propsito, acoplando una
pipeta tipo Pasteur, con la pera de caucho.
6. Una cubierta plstica. Se utiliza para pro-
teger el microscopio del ambiente externo
cuando no est en uso. Tambin podra
utilizarse una bolsa de tela de textura simi-
lar a la de los pauelos.
7. Un pincel suave de pelo de camello o un
pincel fino para pintura. Lo importante es
que el pelo del pincel sea natural, de longi-
tud uniforme, textura muy suave, est seco
y libre de grasa. En los almacenes que dis-
tribuyen artculos de fotografa, es posible
conseguir este accesorio. Tambin es posi-
ble encontrar un equivalente en tiendas es-
pecializadas en suministro de cosmticos.
8. Un paquete 250 g de material desecante
(silica gel). Este material se utiliza para
mantener controlada la humedad en la ca-
ja de almacenamiento del microscopio, si
la misma es hermtica. Este material cam-
bia de color cuando se encuentra saturado
de humedad, aspecto que permite detec-
tar si requiere ser sustituido o renovado.
Cuando est en buen estado, por lo gene-
ral, es de color azul; cuando se encuentra
saturado de humedad, es de color rosado.
9. Bombillos y fusibles de repuesto. De la clase
instalada por el fabricante o un equivalente
de las mismas caractersticas del original.
Precaucin: Algunos fabricantes recomien-
dan no utilizar alcoholes o acetonas, debido
a que pueden afectar disolver los cemen-
tos o pegantes utilizados para fijar los lentes.
Nota: Todos l os materi al es requeri dos
para efectuar l a l i mpi eza deben mante-
nerse l i mpi os y guardados en recipientes
que los protejan del entorno externo.
169
Mi croscopi o 15
Limpieza de los elementos pticos
En un microscopio se encuentran dos tipos de
elementos pticos: los externos, que estn en
contacto con el ambiente que rodea el equipo,
y los internos, que se encuentran dentro del
cuerpo del microscopio las partes internas de
los objetivos, oculares, espejos, prismas, con-
densador, iluminador, etc. y que no tienen un
contacto directo con el ambiente que rodea el
equipo. Los procedimientos de limpieza, aun-
que similares, difieren en cuanto al cuidado y
precauciones que deben preverse.
1. Los el ementos pti cos externos de l os
ocul ares, l os objeti vos, el condensador y
el i l umi nador se l i mpi an frotando suave-
mente l a superfi ci e de l os mi smos, con el
pi ncel de pel o de camel l o. Esto remueve
l as part cul as de pol vo que hayan podi do
encontrarse deposi tadas sobre l a super-
fi ci e de l os mi smos. A conti nuaci n, se
uti l i za l a pera para sopl ar chorros de ai -
re sobre l a superfi ci e de l os l entes y ase-
gurar que l os mi smos quedan l i bres de
pol vo. Si el pol vo se encuentra adheri do
a l a superfi ci e pti ca, se uti l i za l a pi eza
de tel a l i mpi a y de forma muy suave se
efecta un pequeo movi mi ento ci rcu-
l ar, si n ejercer mayor presi n sobre l a su-
perfi ci e del l ente. Con l a pera se sopl a
nuevamente l a superfi ci e del l ente. Esto
reti ra l as part cul as adheri das. Podr a
tambi n uti l i zarse una pi eza de gamuza
fi na. En este caso se i nstal a l a pi eza de
gamuza en l a punta de un pequeo ci l i n-
dro de di metro l i geramente i nferi or al
del l ente y, si n ejercer mayor presi n, se
efecta una rotaci n de l a mi sma sobre
l a superfi ci e del l ente. Fi nal mente, con
l a pera, se sopl a ai re sobre l a superfi ci e
del l ente. Esto basta para l i mpi ar l as su-
perfi ci es externas. La pi eza de gamuza
puede humedecerse con agua desti l ada.
2. En condiciones adecuadas de instalacin,
las superficies interiores de los elementos
pticos no deben resultar afectadas por la
presencia de polvo o partculas. Si por al-
guna circunstancia aparecen partculas so-
bre la superficie interior de los lentes, se
necesita abrirlos para efectuar la limpieza.
Nunca debe abrirse un ocular u objetivo, si
no se cuenta con un ambiente limpio en el
cual realizar el procedimiento de limpieza.
Las superficies pticas interiores se limpian
con el pincel de pelo de camello y con la
pera para soplar aire, siguiendo un proce-
dimiento anlogo al anteriormente expli-
cado; se recomienda no desmontar por
ningn motivo los elementos pticos para
no alterar las tolerancias de ensamble del
fabricante. Si se desmontan, sera necesa-
rio alinear nuevamente los elementos y es-
to solo es factible siguiendo instrucciones
precisas del fabricante. La limpieza de los
objetivos se limitar a conservar limpios
los lentes frontal y posterior.
3. Si se detectan residuos de aceite de inmer-
sin en la superficie de los lentes, este de-
be removerse utilizando papel especial
para limpieza de lentes o algodn tipo
medicinal. A continuacin, la superficie
del lente debe limpiarse con una solucin
compuesta de 80 % ter petroleum y 20 %
2-Propanol
2
.
Limpieza del cuerpo del microscopio
1. El cuerpo del microscopio puede ser lim-
piado con una solucin jabonosa que re-
sulta til para remover la suciedad exter-
na. La solucin jabonosa corta la grasa y el
aceite. La misma puede aplicarse con un
cepillo pequeo. Despus de que la grasa
y la suciedad hayan sido removidas, debe
limpiarse el cuerpo del microscopio con
una solucin 50/50 de agua destilada y
etanol al 95 %.
2. Las partes mecnicas, integradas por los
mecanismos de ajuste macro/micromtrico
ajuste grueso y fino, el mecanismo de
ajuste del condensador y los mecanismos
2
Manual of Techniques for a Health Laboratory, World Health Organization, 53-66, Geneva, 2nd. Edition, 2003.
Nota: Esta solucin no es adecuada para
limpiar las superficies pticas.
170
del carro portamuestras o plataforma, de-
ben ser lubricados de forma peridica con
aceite fino de mquina, para permitir su
desplazamiento suave.
Mantenimiento del microscopio
Entre las rutinas ms importantes para mante-
ner un microscopio en condiciones adecuadas
de operacin, se encuentran las siguientes:
1. Verificar el ajuste de la plataforma mec-
nica. La misma debe desplazarse suave-
mente, en todas las direcciones (X-Y) y de-
be mantener la posicin que selecciona o
define el microscopista.
2. Comprobar el ajuste del mecanismo de en-
foque. El enfoque que selecciona el micros-
copista debe mantenerse. No debe variar la
altura asignada por el microscopista.
3. Verificar el funcionamiento del diafragma.
4. Limpiar todos los componentes mecnicos.
5. Lubricar el microscopio de acuerdo con las
recomendaciones del fabricante.
6. Confirmar el ajuste de la ua fijalminas.
7. Verificar el alineamiento ptico.
Precauciones
1. Evitar limpiar los componentes pticos
con etanol, debido a que estos lquidos
afectan los elementos pticos. Tampoco
limpiar la base o la plataforma con xileno
o acetona.
2. No utilizar papel ordinario para limpiar los len-
tes, dado que en sus componentes constituti-
vos podra haber elementos de alta dureza
que podran rayar la superficie de los lentes.
3. No tocar los lentes con los dedos, para evi-
tar las huellas digitales.
4. No limpiar el interior de los lentes de ocu-
lares u objetivos con telas o papel, ya que
los barnices de recubrimiento de los ele-
mentos pticos podran deteriorarse. Lim-
piar estas superficies con un pincel de pe-
lo de camello o una pera para soplar aire.
5. Evitar dejar el microscopio sin los oculares.
Colocar los tapones si requiere retirar los
oculares para evitar el ingreso de polvo o
partculas a la cabeza binocular.
6. No dejar el microscopio guardado en una
caja, en ambientes hmedos.
7. Evitar presionar los objetivos contra las
"Placas", puesto que se podran producir
daos en la laminilla o el lente frontal del
objetivo. Enfocar el microscopio de forma
lenta y cuidadosa.
8. Mantener limpia la plataforma o carro
portamuestras.
9. No desensamblar los componentes pti-
cos, pues se pueden producir desalinea-
mientos. Las superficies pticas deben lim-
piarse en primera instancia con un pincel
de pelo de camello; a continuacin, con
gamuza o papel especial para lentes.
10. Utilizar las dos manos para levantar el mi-
croscopio. Con una mano sostenerlo por
el brazo, y con la otra sostener su base.
11. Evitar tocar con los dedos la superficie de la
bombilla cuando se la cambia. Las huellas
digitales disminuyen la intensidad lumnica.
12. Verificar que el voltaje de alimentacin es
el correcto para prolongar la vida til de
la bombilla; siempre que sea posible, utili-
zar la menor intensidad luminosa que re-
sulte til para realizar las observaciones.
13. Conectar el microscopio a travs de un es-
tabilizador de voltaje, si el voltaje de ali-
mentacin no es estable.
Cuidados especiales en climas clidos
Tanto en climas clidos como en secos el prin-
cipal problema que afecta al microscopio es el
polvo, ya que afecta las partes mecnicas y a
171
Mi croscopi o 15
los sistemas pticos. Dicho problema se puede
controlar mediante los siguientes procesos:
1. Proteger siempre el microscopio con una
cubierta plstica, cuando no est en uso.
2. Limpiar el microscopio con aire, utilizando una
pera de caucho, al finalizar el turno laboral.
3. Limpiar los lentes con un pincel de pelo de
camello o con un cepillo de aire. Si el pol-
vo permanece unido a la superficie ptica,
intentar removerlo con papel especial pa-
ra lentes, pero frotando la superficie de
forma muy suave, para evitar rayones.
Cuidados especiales para climas
hmedos
En climas hmedos, por lo general calurosos,
los microscopios suelen ser afectados por
hongos, que se forman principalmente sobre
la superficie de los lentes, en las ranuras de
los tornillos y bajo la pintura protectora. En
caso de no protegerse el equipo de forma
adecuada, podra quedar inservible en muy
corto plazo. Los cuidados que se detallan a
continuacin ayudan a prevenir la formacin
de hongos:
1. Almacenar el microscopio durante la no-
che en una caja dotada de un bombillo
elctrico que no exceda los 40 W de poten-
cia. El bombillo debe estar instalado en la
parte superior de la caja, cerca de la cabe-
za binocular y debe estar encendido du-
rante toda la noche. La caja debe disponer
de orificios para permitir la circulacin del
aire. Se debe evitar que la temperatura del
interior de la caja no exceda los 50 C, pa-
ra que no se afecten las propiedades de los
lubricantes del microscopio.
2. Si no es posible utilizar la caja con el bom-
billo elctrico, como alternativa se puede
utilizar un material desecante como silica
gel o arroz. Cuando use el agente desecan-
te, verificar que el microscopio est guar-
dado en una caja o protegido con una cu-
bierta protectora que puede ser fabricada
en tela de caractersticas similares a la de
los pauelos. Ve ri f i car que e l age nte
de se cante e st e n bue nas condi ci one s;
caso contrario, sustituirlo o regenerarlo.
3. Limpiar el microscopio de forma peridica.
Usar guantes de ltex si tiene que tocar los
lentes. Esto evita que las huellas digitales
de adhieran a la superficie y disminuye los
riesgos o probabilidad de crecimiento de
hongos donde quedaron impresas las hue-
llas digitales.
4. Si ninguna de las alternativas menciona-
das es factible, ubicar el microscopio en un
lugar que tenga buena circulacin de aire.
Cuando el microscopio no est en uso, po-
dra colocarse bajo la luz solar de forma di-
recta, por perodos cortos de tiempo. Esto
reduce la humedad y el riesgo de que crez-
can hongos en las superficies del equipo.
5. El aire acondicionado control de tempe-
ratura y humedad evita significativamen-
te el crecimiento de los hongos en los mi-
croscopios. Sin embargo, esta no es una
opcin que disponga una gran cantidad
de laboratorios. Si el servicio de aire acon-
dicionado no es continuo en el rea donde
se encuentra instalado el microscopio, se
deben tomar precauciones para controlar
la humedad.
Remocin de la pelcula de hongos
1. Revisar y limpiar con frecuencia el micros-
copio, utilizando los procedimientos men-
cionados en el presente captulo. Contro-
lar las condiciones de humedad donde se
usa y almacena el microscopio. Si se man-
tiene una ventilacin adecuada, disminuye
la posibilidad de que se inicie la formacin
de hongos en el microscopio.
2. Si se detecta un crecimiento de hongos, uti-
lizar una mota de algodn humedecida en
una solucin limpiadora de hongos que
normalmente es ter o xilol. Frotar suave-
mente siguiendo un movimiento circular, a
lo largo de toda la superficie del lente.
Tambin puede realizar un movimiento os-
cilatorio, hacia adelante y hacia atrs o iz-
quierda-derecha-izquierda, ejerciendo so-
bre la superficie del lente una presin muy
172
moderada. Si es necesario, repetir el proce-
dimiento con una nueva mota de algodn.
3. Cuando se termine la remocin de la pel-
cula de hongos, limpiar con una mota de
algodn limpio.
Cuidado del microscopio
Frecuencia: Diaria (despus del uso)
1. Limpiar el aceite de inmersin del objetivo
100X. Usar papel para limpieza de lentes o
en su defecto algodn tipo medicinal.
2. Limpiar el carro portamuestras.
3. Limpiar el condensador.
4. Colocar el restato de control de intensi-
dad luminosa en la posicin mnima y lue-
go apagar completamente el sistema de
iluminacin.
5. Cubrir el microscopio con una funda protec-
tora plstica o de tela. Asegurar que que-
da ubicado en un lugar bien ventilado, en
el cual estn controlados la humedad y la
temperatura. Si se dispone de caja de alma-
cenamiento ventilada dotada con bombillo
para control de humedad, colocar all el mi-
croscopio, encender la lmpara y cerrar la
puerta de la misma.
Frecuencia: Cada mes
1. Remover las partculas de polvo que pueda
tener el cuerpo del microscopio. Usar una pie-
za de tela humedecida con agua destilada.
2. Retirar las partculas de polvo de los ocula-
res, objetivos y del condensador. Utilizar la
pera para soplar aire. A continuacin, lim-
piar la superficie de los lentes con solucin
limpiadora de lentes. No aplicar directa-
mente esta solucin a los lentes, sino en
papel para limpiar lentes y luego frotar
suavemente la superficie de los mismos
con el papel mencionado.
3. Retirar el mecanismo de sujecin de las
placas portamuestras; limpiar cuidadosa-
mente y reinstalar.
Frecuencia: Cada seis meses
Como complemento a las rutinas mensuales de
mantenimiento se recomienda lo siguiente:
1. Efectuar una inspeccin visual general del
microscopio. Verificar que cada componen-
te se encuentre en buen estado, est lim-
pio y est bien ajustado mecnicamente.
2. Verificar que en el lugar de instalacin se
conserven las condiciones de buena venti-
lacin, control de humedad y temperatura.
3. Comprobar la calidad del sistema elctrico
que alimenta el microscopio. Verificar la
integridad de los conectores, los fusibles y
la lmpara incandescente.
Nota: Los hongos solo pueden ser remo-
vidos cuando su crecimiento se limita a la
superficie de los lentes. Si dicho creci-
miento no se atiende a tiempo, el hongo
puede penetrar el cuerpo del lente. Si es-
te es el caso, el lente se pierde, all ya es
imposible removerlo.
Atencin: Si el microscopio se utiliza con
elementos potencialmente contaminados,
debe ser limpiado con mayor frecuencia.
173
Mi croscopi o 15
Tabla para la solucin de problemas
Sistema de iluminacin
El si st ema de i l umi naci n no enci ende.
El si st ema de i l umi naci n no produce
l uz uni f orme.
El cabl e de al i ment aci n el ct ri ca est
desconect ado.
Conect ar el cabl e de al i ment aci n el ct ri ca.
La muest ra no es i l umi nada de f orma
uni f orme.
La muest ra es i l umi nada def ect uosa-
ment e.
La f uent e de l uz no est cent rada. Rect i f i car el al i neami ent o del condensador.
Hay excesi vo cont rast e en l a i magen. El i ri s del di af ragma del condenador
est casi cerrado.
Abri r un poco el i ri s del di af ragma.
La i magen es poco cl ara y con bri l l o. El i ri s del di af ragma del condensador
est muy abi ert o.
Cerrar un poco el i ri s del di af ragma.
El objet ivo no se encuent ra bien cent rado. Gi rar l ent ament e el revl ver port aobj et i vos
hast a que suene el t ri nquet e de aj ust e.
El i ri s del di af ragma est casi cerrado. Abri r el i ri s del di af ragma hast a que l a i l umi -
naci n sea adecuada.
El condensador est muy al ej ado (muy
baj o).
Acercar el condensador.
Los l ent es del condensador present an
pol vo o creci mi ent o de hongos.
Li mpi ar el condensador. Ret i rar el pol vo con
pi ncel . Remover el hongo con sol uci n para
l i mpi eza de l ent es.
El f usi bl e de prot ecci n est quemado. Reempl azar el f usi bl e de prot ecci n.
El bombi l l o est quemado. Reempl azar el bombi l l o de i l umi naci n. Ase-
gurar que el mi smo quede bi en al i neado.
El conect or del mi croscopi o a l a t oma
de pared est f l oj o.
Conect ar bi en el enchuf e a l a t oma. Si al guno
de l os el ement os est def ect uoso, sust i t ui rl o.
El bombi l l o est mal i nst al ado y no
hace buen cont act o.
Rei nst al ar el bombi l l o.
El bombi l l o present a met al i zado o pun-
t os negros sobre su superf i ci e.
Sust i t ui r el bombi l l o de i l umi naci n.
El si st ema el ct ri co present a f al l as de
vol t aj e.
Revi sar y reparar el si st ema el ct ri co. Conec-
t ar el mi croscopi o medi ant e un est abi l i zador
de vol t aj e.
El interruptor de encendido est defectuoso. Reempl azar el i nt errupt or de encendi do.
Sistema mecnico
La pl at af orma port amuest ras no man-
t i ene su posi ci n y l a i magen se desen-
f oca cont i nuament e.
La t ensi n de aj ust e de l a pl at af orma
port amuest ras est f l oj a.
Aj ust ar el mecani smo de t ensi n de l a pl at a-
f orma.
La pl at af orma port amuest ras no puede
ser l evant ada a su l mi t e superi or.
La pl at af orma mecni ca est bl oquea-
da muy baj o.
Af l oj ar el mecani smo de bl oqueo de l a pl at a-
f orma. Aj ust ar a l a al t ura deseada. Reaj ust ar
el mecani smo de bl oqueo.
174
DEFINICIONES BSICAS
Acetona. Lquido incoloro, oloroso, miscible
en agua de excelente capacidad, disolvente
de gran nmero de sustancias orgnicas. Pun-
to de ebullicin: 56 C. Frmula qumica:
CH
3
- CO - CH
3
Apertura numrica. Medida de la habilidad
que tiene un objetivo para concentrar la luz y
distinguir pequeos detalles de un objeto.
Normalmente, el valor de la apertura num-
rica se encuentra grabado en el costado del
cuerpo del objetivo. Mayores val ores de
apertura numrica permiten que un mayor
nmero de rayos oblicuos de luz pase por los
lentes frontales del objetivo, produciendo
una resolucin ms alta de la imagen. Mate-
mticamente se expresa as:
NA =nSen()
donde:
NA =apertura numrica
n = ndice de refraccin (n = 1 aire; n = 1,52
aceite de inmersin)
= ngulo de apertura. A mayor ngulo, ma-
yor apertura numrica, mayor aumento.
Sistema ptico
Mal a cal i dad de l a i magen en el obj et i -
vo 40X.
Los l ent es present an hongos. Remover l os hongos ut i l i zando una sol uci n
l i mpi adora. Segui r l as i nst rucci ones del f abri -
cant e del di sposi t i vo.
Pol vo o suci edad vi si bl e en el campo de
vi si n.
Pol vo sobre el l ent e col ect or de l a f uen-
t e de i l umi naci n.
Ret i rar l as part cul as de pol vo con un pi ncel
de pel o de camel l o.
Pol vo sobre el l ent e superi or del con-
densador.
Ret i rar l as part cul as de pol vo con un pi ncel
Pol vo en el ocul ar. Ret i rar l as part cul as de pol vo con un pi ncel
El obj et i vo de i nmersi n no bri nda i m-
genes cl aras.
El obj et i vo est si endo usado si n acei t e
de i nmersi n.
Col ocar acei t e de i nmersi n sobre l a pl aca.
El acei t e de i nmersi n es de baj o ndi ce
de ref racci n.
Ut i l i zar acei t e de buena cal i dad.
El acei t e de i nmersi n ha i nvadi do el
i nt eri or del obj et i vo.
Li mpi ar l os l ent es con papel especi al para l i m-
pi ar l ent es. Si l a l i mpi eza ext erna no es sol u-
ci n, envi ar el obj et i vo a un l aborat ori o espe-
ci al i zado para su reparaci n. (Desmont e de
l ent es, l i mpi eza, cambi o de sel l os, cement a-
ci n, real i neaci n y ensambl e).
Lent es daados. Revi sar el obj et i vo. Veri f i car si l os l ent es pre-
sent an rayones, pi caduras o muescas. Reem-
pl azar el obj et i vo.
Lent es acci dent al ment e unt ados con
acei t e de i nmersi n.
Remover cui dadosament e el acei t e con papel
para l i mpi eza de l ent es.
175
Mi croscopi o 15
Campo de visin. Dimetro del campo de
visin en milmetros, medido en el plano in-
termedio de la imagen. El dimetro del cam-
po en un microscopio ptico se expresa por el
nmero del campo de visin, o sencillamente
como nmero de campo.
Diaf ragma. Dispositivo que controla el flujo
de luz a travs del microscopio. Hay diafrag-
mas de dos tipos: el diafragma de apertura
que ajusta el ngulo de apertura en el mi-
croscopio, y el diafragma de campo que regu-
la el tamao de la imagen del instrumento. El
propsito de los diafragmas en los microsco-
pios pticos es prevenir que lleguen, a los
planos de formacin de imgenes, rayos de
luz con aberraciones severas y asegurar una
adecuada distribucin de luz, tanto en la
muestra como en el espacio de la imagen.
Etanol. Lquido incoloro de olor agradable y
sabor quemante. Se le conoce tambin como
alcohol etlico. Disolvente de amplio uso in-
dustrial. Se usa en la industria farmacutica.
Su densidad es 0,806 g/cm
3
. Su punto de ebu-
llicin es de 78,3 C. Frmula qumica:
CH
3
- CH
2
OH
ter. Sustancia lquida derivada de los alco-
holes por eliminacin de una molcula de
agua, entre dos molculas de alcohol. Es un
disolvente excelente, poco soluble en agua,
muy voltil e inflamable. Punto de ebullicin:
35 C. Frmula qumica:
CH
3
- CH
2
- O - CH
2
- CH
3
Foco. Lugar donde, como resultado de la re-
fraccin de la luz, se concentran los rayos que
atraviesan un lente. Si los rayos de luz conver-
gen en un punto, el lente es positivo y el fo-
co real; si los rayos de luz divergen, el lente es
negativo y el foco virtual.
ndice de ref raccin. Valor que se calcula
comparando la velocidad de la luz en el va-
co, con la velocidad de la luz en un segundo
medio de mayor densidad. Se representa nor-
malmente por la letra [n] o [n], en la litera-
tura tcnica o en las ecuaciones matemticas.
Ocular. Conjunto de lentes diseado para
proyectar una imagen real o virtual, depen-
diendo de las relaciones que existan con
otros conjuntos de lentes del microscopio.
Como su nombre lo indica, a travs del mis-
mo, el microscopista observa la imagen.
Prof undidad de campo. Grosor del espci-
men o muestra que es razonablemente claro
a un determinado nivel de enfoque.
Prof undidad de f oco. Rango sobre el cual
el plano de la imagen puede ser movido,
manteniendo una claridad estable.
Rango til de magnif icacin. [RUM] de
una combi naci n objeti vo/ocul ar se defi ne
por l a apertura numri ca del si stema. Para
perci bi r l os detal l es de una i magen, se re-
qui ere de una magni fi caci n m ni ma, l a
cual tradi ci onal mente est comprendi da
entre 500 y 1 000 veces l a apertura num-
ri ca [AN] del objeti vo. {Aceptabl es desde
RUM= (500) x [AN] hasta (1 000) x [AN]}.
Apert ura numrica Expresin mat emt ica
NA = n x Sen
0,27= 1 x Sen(16)
Magni f i caci n
aprox. 10X
NA = n x Sen
0,68= 1 x Sen(43)
Magni f i caci n
aprox. 40X
NA = n x Sen
0,42= 1 x Sen(25)
Magni f i caci n
aprox. 20X
176
Resolucin. Habilidad para distinguir los de-
talles finos de una placa o muestra particular.
Entre los factores que ms influyen para lograr
una buena resolucin, se encuentran la aper-
tura numrica, la clase de muestra, la ilumina-
cin, la correccin de aberraciones y el tipo de
contraste utilizado. Es una de las caractersti-
cas ms importantes de un microscopio.
Revlver portaobjetivos. Dispositivo mec-
nico diseado para montar los objetivos y
permitir su intercambio rpido, a travs de
un movimiento rotatorio. Su capacidad de-
pende del tipo de microscopio. En general va-
ra entre tres y cinco objetivos.
Xileno. Ismero del etilbenceno que se ob-
tiene del alquitrn de hulla. Se emplea como
disolvente y tambin en la preparacin de co-
lorantes y lacas. Punto de ebullicin: 138 C /
Propanol. Se conoce tambin como alcohol
isoproplico. Se prepara por hidratacin del
propeno. Se emplea como disolvente y en la
preparacin de acetona. Punto de ebullicin:
CH
3
- CHOH - CH
3
C
6
H
4
CH
3
CH
3
Bibliografa
Devore, G., Muoz, E., Qumica Orgnica, Mxico D. F., Publicaciones Cultural S.A., 1969.
Manual of Basic Techniques for a Health Laboratory, World Health Organization, Geneve,
2nd. Edition, 2003.
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Office for South-East Asia, 1999.
Venegas, J., Texto de Fsica. Fono-foto y electrologa, Cali, Colombia, Editorial Norma.
Nikon: (http://www.microscopyu.com/articles/formulas/formulasfieldofview.html)
Definiciones y procesos:
(http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/methods/microscopy/microscopy.html)
Historia, Galileo:
(http://www.twingroves.district96.k12.il.us/Renaissance/University/Inventions/Microscope)
177
PIPETAS
Las pipetas son dispositivos que se utilizan pa-
ra medir o transvasar pequeos volmenes de
lquido de un recipiente a otro, con gran exac-
titud; se caracterizan por carecer de un dep-
sito. Las pipetas tienen gran diversidad de mo-
delos. Inicialmente, se fabricaron en vidrio; en
la actualidad, existe una amplia gama de op-
ciones. Se destacan las pipetas de volumen fijo
y las de volumen variable, las cuales en gene-
ral disponen de controles mecnicos. Tambin
se han introducido recientemente en el merca-
do pipetas que disponen de controles de tipo
electrnico. En el presente captulo se tratan
los aspectos referentes al mantenimiento y ca-
libracin
1
de las pipetas mecnicas, las cuales
se conocen como pipetas tipo Gilson.
FOTOGRAFA Y ESQUEMA DE PIPETAS
PROPSITO DE LA PIPETA
Las pipetas son dispositivos de amplia utiliza-
cin en los laboratorios clnicos y de investi-
gacin. Se utilizan para suministrar cantida-
des muy exactas de fluidos.
PRINCIPIOS DE OPERACIN DE LA PIPETA
La pipeta mecnica o de pistn funciona ge-
neralmente transmitiendo la fuerza que un
operador, de forma manual, ejerce sobre un
mbolo que se encuentra unido a un pistn
mediante un eje que lo desplaza a lo largo de
un cilindro de longitud fija, forzando un volu-
men predefinido de lquido fuera de la pipeta.
CAPTULO 16
Pipet as
Cdigo (s) ECRI
15-166
Pi pet as
1
La calibracin debe ser realizada exclusivamente por personal capacitado, siguiendo estndares internacionales como
el BS ES ISO 8655-6:2002. Los instrumentos de trabajo deben estar debidamente calibrados por instituciones nacionales
o internacionales, responsables de verificar el cumplimiento de los estndares internacionales de medicin.
Fot ograf a pipet a mult icanal
Esquema pipet a monocanal
178
Las pipetas de desplazamiento de aire tienen
la ventaja de presentar menos riesgos de con-
taminacin cuando se usan continuamente,
pero no son tan exactas como las de despla-
zamiento positivo, cuando se trabaja con vo-
lmenes muy pequeos de lquido, debido a
la compresibilidad del aire. Todas las pipetas
de pistn disponen de puntas desechables,
para minimizar los riesgos de contaminacin;
se recomienda utilizar siempre las puntas su-
ministradas por el fabricante, para garantizar
el ajuste de las mismas al cuerpo de la pipeta,
as como los volmenes a dispensar. Para faci-
litar la identificacin de estos volmenes, los
fabricantes han adoptado un cdigo de color
que facilita la identificacin de los volme-
nes a dispensar. La tabla que se incluye a con-
tinuacin muestra la convencin de color
mencionada.
Tabla de convencin de color
en las pipetas
Las pipetas a pistn en general son de dos ti-
pos: las de volumen fijo que dispensan un vo-
lumen predeterminado de lquido, el cual es
conocido como volumen nominal [Vn], y las de
volumen variable, las cuales permiten ajustar
el volumen a ser dispensado dentro de un
rango determinado en las especificaciones de
la pipeta. La variacin en el volumen se logra
modificando la longitud de la carrera del pis-
tn dentro del mbolo. En estas, el volumen
nominal es el lmite superior del rango de vo-
lumen de la pipeta, de acuerdo con las especi-
ficaciones dadas por el fabricante.
Cada uno de los tipos mencionados pipetas
de volumen fijo y pipetas de volumen varia-
ble puede ser subdividido en dos subtipos: A
y B. Las pipetas del subtipo A se denominan
pipetas de desplazamiento por aire, debido a
que existe un volumen de aire entre la cabe-
za del pistn y el lquido en el cilindro. (Ver
pipeta N 1). A las pipetas del subtipo B se les
denomina pipetas de desplazamiento positi-
vo o de desplazamiento directo, debido a
que el pistn se encuentra en contacto direc-
to con el lquido. (Ver pipeta N 2). El esque-
ma que se incluye a continuacin permite di-
ferenciar los tipos de pipetas mencionados.
Ilustracin 44: Clases de pipetas
Volumen dispensado por la
pipet a. Rango en
microlit ros l
Color caract erst ico
ut ilizado para ident if icarla
0,1-2,5 l Negro
2,0-20 l Gri s/Amari l l o
0,5-10 l Gri s
50-200 l Amari l l o
500-2 500 l Roj o
100-1 000 l Azul
10-100 l Amari l l o
179
Pi pet as 16
Para utilizar una pipeta se requiere que el la-
boratorio brinde unas condiciones adecuadas
de comodidad, limpieza e iluminacin. Las
condiciones generales son las siguientes:
1. Verificar que la temperatura del ambiente
donde se utiliza sea estable, con un rango
de variacin de 0,5 C, que se encuentre
entre los 15 C y los 30 C, siendo ptima
una temperatura de 20 C.
2. Confirmar que la humedad relativa del
ambiente sea superior al 50 %. Las pipetas
y muestras o materiales con los que se tra-
baja deben estar estabilizados a las condi-
ciones del laboratorio, por lo que se reco-
mienda que se encuentren en el mismo
con dos o tres horas de anticipacin al mo-
mento en que se realiza el trabajo.
3. Evitar trabajar con las pipetas bajo la in-
fluencia de la luz solar directa.
4. Utilizar los elementos de proteccin ade-
cuados, si se trabaja con materiales txicos
o que conlleven riesgo biolgico.
USO DE LA PIPETA
Para obtener resultados exactos, precisos y
sobre todo confiables, es necesario que los
operadores de pipetas conozcan en detalle
los procedimientos relacionados con su utili-
zacin. Esto se logra mediante capacitacin y
seguimiento detallado del uso de las pipetas.
Se presentan a continuacin lineamientos ge-
nerales para el uso adecuado de los dispositi-
vos en mencin.
Recomendaciones generales
1. Verificar que la pipeta se encuentra en po-
sicin vertical, cuando se requiera aspirar
un lquido. La posicin vertical garantiza
que no se presente incertidumbre por va-
riaciones mnimas en la cabeza del lquido.
2. Confirmar la recomendacin que efecta
el fabricante de la pipeta con relacin a la
profundidad mnima de inmersin de la
punta de la pipeta, cuando se requiere as-
pirar lquidos. Las profundidades varan de
acuerdo con el tipo y capacidad de la pipe-
ta. Una gua general se muestra en la si-
guiente tabla
2
:
Tabla de profundidad de inmersin de
la punta de la pipeta segn volumen
3. Humedecer previamente las puntas de las
pipetas que funcionan por desplazamien-
to de aire para mejorar la exactitud. Para
lograr la humidificacin mencionada, se
opera varias veces la pipeta con la solucin
de trabajo, dispensando el contenido en el
recipiente de desperdicio. Esto reduce la
posibilidad de que se aspiren burbujas de
aire, cuando se aspiran lquidos de densi-
dad elevada o lquidos con propiedades hi-
drofbicas. El proceso mencionado permi-
te homogeneizar la humedad en la cma-
ra de aire de la pipeta volumen de aire
entre la cabeza del pistn y la superficie
del lquido. No es necesaria la prehumidi-
ficacin en pipetas que dispensan volme-
nes inferiores a 10 l. Tampoco es necesa-
ria la humidificacin previa en las pipetas
a pistn de desplazamiento positivo.
2
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipette, UK, National Physical Laboratory, Teddington,
Middlesex, 2004, pg. 6. (www.npl.co.uk)
Volumen de la pipet a
(l)
Profundidad de la inmersin
(mm)
1-100 2-3
1 000-5 000 2-5
100-1 000 2-4
Advertencia: Antes de utilizar una pipe-
ta, verificar que la misma se encuentra de-
bidamente calibrada y que es adecuada
para realizar el trabajo que se requiere
desarrollar.
180
1. Colocar una punta nueva, ajustada a las
especificaciones de la pipeta, en el porta-
puntas de la pipeta. Evitar contaminar la
punta con otras sustancias. Verificar que la
misma queda bien ajustada.
2. Presionar el mbolo suavemente hasta el
primer tope. Hasta este momento la punta
de la pipeta no debe estar sumergida en el
lquido.
3. Sumergir la punta de la pipeta en el lqui-
do. Verificar la profundidad recomendada
en la tabla incluida en el numeral 2 de las
recomendaciones generales o utilizar la
recomendacin que suministre el fabrican-
te. Confirmar que la pipeta se encuentra
en posicin vertical. Este proceso corres-
ponde al mostrado en la posicin 1B (pri-
mera a la izquierda).
4. Liberar el mbolo de forma suave para
que la pipeta absorba el lquido (posicin
2A). Verificar que el mbolo se desplace
hasta la posicin del lmite superior. Espe-
rar al menos dos segundos, antes de retirar
la punta de la pipeta del lquido.
5. Colocar la punta de la pipeta contra la pa-
red del recipiente en el cual ser dispensado
4. Remover, despus de llenar la pipeta, cual-
quier gota que se adhiera a la punta de la
pipeta. El procedimiento que se sigue con-
siste en tocar, con la punta de la pipeta,
suavemente la pared del recipiente que
contiene el lquido aspirado. Podra reque-
rirse un material absorbente, teniendo cui-
dado de no tocar el orificio de la punta de
la pipeta y tomando las precauciones del
caso, si el material presenta algn tipo de
contaminacin.
5. Dispensar el lquido contenido en la pipe-
ta tocando con la punta de esta la pared
del recipiente receptor. La punta de la pi-
peta debe formar un ngulo con la pared
del recipiente que vara entre los 30 y los
45, y estar ubicada entre 8 y 10 mm sobre
la superficie del lquido contenido.
Mtodo convencional de uso
Se describen a continuacin las actividades ge-
nerales requeridas para utilizar una pipeta me-
cnica por desplazamiento de aire. El operador
debe tener en cuenta las recomendaciones es-
pecficas del fabricante, observacin que tam-
bin debe acatarse cuando se utilicen pipetas
controladas electrnicamente. El esquema que
se incluye muestra la descripcin de los proce-
sos que se explican a continuacin.
Ilustracin 45: Fases del uso de la pipeta
181
Pi pet as 16
el lquido. Verificar que el ngulo formado
entre la punta de la pipeta y la pared del ele-
mento receptor est entre los 30 y los 45. Si
el recipiente receptor ya tiene algn nivel de
lquido, evitar que la punta de la pipeta que-
de sumergida en el mismo (posicin 3A).
6. Dispensar el contenido de la pipeta presio-
nando el mbolo de forma suave pero firme,
hasta el primer tope (posicin 4B). Mantener
en todo momento el contacto entre la punta
de la pipeta y la pared del recipiente recep-
tor. Frotar la punta de la pipeta contra la pa-
red de 8 a 10 mm, para asegurar que no que-
de ninguna gota de lquido pegado a la pun-
ta de la pipeta.
7. Presionar el mbolo suavemente hasta que
alcance el segundo tope en la carrera del pis-
tn (posicin 5C). Esto expulsa cualquier frac-
cin de lquido que hubiera podido quedar
en la punta de la pipeta, al forzar el aire de
la cmara a travs del orificio de la punta de
la pipeta. Mantener el mbolo presionado en
el segundo tope, mientras se retira la pipeta
del recipiente receptor. Una vez retirada la
pipeta, liberar suavemente el mbolo hasta
la posicin lmite superior.
8. Desechar la punta de la pipeta. Para esto ac-
cionar el botn del mecanismo de expulsin
(posicin 6).
Se sealan a continuacin los lineamientos ge-
nerales de las rutinas de mantenimiento re-
queridas por las pipetas mecnicas. Se deben
realizar rutinas especficas de los diversos mo-
delos, de acuerdo con las instrucciones de los
manuales suministrados por los fabricantes.
Inspeccin
Frecuencia: Diaria
Las pipetas son dispositivos que requieren ins-
pecciones frecuentes para detectar desgastes
anormales o daos y/o verificar que las mismas
se encuentran en buenas condiciones de funcio-
namiento. La inspeccin debe cubrir los siguien-
tes aspectos:
1. Verificar la integridad y ajuste de los meca-
nismos. Los mismos deben poder moverse
de forma suave. El pistn debe desplazar-
se suavemente.
2. Confirmar que el portapuntas no presente
distorsiones o marcas de desgaste, dado que
es esencial para la exactitud de las medidas.
Verificar el ajuste de las puntas.
3. Colocar una punta y llenarla con agua desti-
lada. La pipeta no debe presentar ningn ti-
po de fuga.
Limpieza y descontaminacin
1. Verificar cada da que la pipeta se encuentra
limpia, en sus superficies interiores y exterio-
res. Si se detecta suciedad, la misma debe lim-
piarse utilizando un solvente adecuado o una
solucin jabonosa. Revisar las recomendacio-
nes del fabricante relativas a la compatibili-
dad que tienen los materiales con que est
fabricada la pipeta para seleccionar aquellos
solventes que no produzcan efectos dainos
a la integridad de los componentes.
2. Esterilizar la pipeta siguiendo las indicaciones
de los fabricantes. Algunas pipetas se pue-
den esterilizar en un autoclave, utilizando un
ciclo de 121 C y un tiempo estimado de 20
minutos; algunas requieren ser desensambla-
das para que el vapor est en contacto con
3
Las pipetas que se pueden esterilizar con vapor disponen de una marca que permite identificarlas; el fabricante proporcio-
na los requerimientos de desensamble.
Nota: Si se utiliza una pipeta de volumen va-
riable, primero se debe seleccionar el volu-
men que necesita ser dispensado. Para esto
deben seguirse las instrucciones que al res-
pecto indique el fabricante. Normalmente,
los controles de volumen se encuentran ubi-
cados en la parte superior de la pipeta y es
necesario que el operador aprenda a enten-
der y diferenciar las escalas.
182
sus componentes internos
3
. El desensamble
consiste en liberar o desenroscar el cuerpo
central de la pipeta, siguiendo los procedi-
mientos indicados por los fabricantes. Para de-
sensamblar o ensamblar algunas pipetas, se
requiere utilizar un conjunto de herramientas
llaves que normalmente proporcionan los
fabricantes, junto con la pipeta en el momen-
to de la venta. La pipeta solo debe ensamblar-
se de nuevo, cuando el ciclo de esterilizacin
haya terminado y la temperatura se haya esta-
bilizado con la del ambiente. En ese momento
se verifica que los componentes se encuentren
secos y se procede al ensamble. Algunos fabri-
cantes recomiendan esterilizar la pipeta, utili-
zando una solucin de isopropanol al 60 % y,
a continuacin, lavar los componentes con
agua destilada, secar y ensamblar.
3. Si una pipeta ha sido utilizada con sustancias
peligrosas para la salud, es responsabilidad
del usuario asegurar que est completamen-
te descontaminada, antes de que la misma
sea utilizada en otros procedimientos o sea
retirada del laboratorio. Es conveniente dili-
genciar un reporte que indique su marca,
modelo, nmero de serie, sustancias con las
que trabaj y sustancias o procedimientos
con las que fue tratada o limpiada.
Mantenimiento
Frecuencia: Semestral
Una pipeta que se utiliza diariamente debe ser
sometida a los siguientes procedimientos para
garantizar su correcto funcionamiento:
1. Desensamblar la pipeta. Seguir el procedi-
miento que para el efecto describe el fabrican-
te, en el manual de uso y mantenimiento de la
pipeta. (El procedimiento vara dependiendo
de la marca, tipo y modelo). Normalmente, se
desensambla el cuerpo principal de la pipeta
del sistema eyector de puntas, desenroscando
el cuerpo de la pipeta del cilindro.
2. Limpiar los anillos en O, el mbolo y las pa-
redes interiores del cilindro antes de lubricar.
Si los componentes interiores fueron conta-
minados accidentalmente, todas las superfi-
cies debern ser limpiadas con un detergen-
te y luego con agua destilada. Si los anillos o
sellos en O requieren ser cambiados, debern
ser sustituidos por repuestos de las mismas
caractersticas de los originales. Debe tenerse
en cuenta que este tipo de sellos vara depen-
diendo de la marca, tipo y modelo.
3. Lubricar el mbolo y el pistn con grasa sili-
conada especial
4
para pipetas. La grasa men-
cionada ha sido especialmente desarrollada
para ser utilizada en las pipetas. Utilizar siem-
pre la recomendada por el fabricante. Retirar
cualquier exceso de lubricante con un papel
absorbente.
4. Ensamblar siguiendo un proceso inverso al
utilizado para desensamblar.
4
La grasa siliconada existe en diversas especificaciones. Por lo tanto, debe utilizarse la recomendada por el fabricante de las pipetas.
5
Despiece basado en el Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Single Channel, Variable models, Rev. 2 /
121199.
Ilustracin 46: Desensamble de una
pipeta
5
183
Pi pet as 16
Conceptos de calibracin de pipetas
La calibracin de las pipetas se realiza utilizando
procedimientos completamente estandarizados y
cuya eleccin depende principalmente del volu-
men de las muestras obtenidas para efectuar la
calibracin. Mientras ms pequeo sea el volu-
men, ms exigente y costoso el proceso de calibra-
cin. En este captulo se realiza una breve descrip-
cin del proceso gravimtrico, el cual se utiliza con
pipetas que dispensan volmenes comprendidos
entre los 20 l (microlitros) y 1 ml (mililitro).
Elementos y equipos
6
requeridos
1. Una balanza analtica
2. Un termmetro de tipo electrnico con reso-
lucin de 0,1 C o mejor, capaz de medir en
el rango de temperatura en el cual se realiza
el ensayo, cuya sonda pueda ser sumergida
en el lquido bajo anlisis.
3. Un higrmetro con una incertidumbre es-
tndar de 10 % o mejor
4. Un barmetro con una incertidumbre estn-
dar de 0,5 kPa o mejor
5. Un cronmetro
6. Micropipetas de varios volmenes
7. Puntas desechables de varios volmenes
8. Viales de fondo plano
9. Agua bi o tridestilada y desgasificada
10. Recurso humano entrenado
Principio
El procedimiento se basa en medir el volumen
de una muestra de agua, a partir de la masa de
agua que dispensa una pipeta de capacidad co-
nocida. (Dividiendo la masa de agua dispensada
por la densidad del agua). En la prctica se rea-
liza un grupo de mediciones, a las que se aplican
correcciones que compensen cualquier variacin
que las aparten de las condiciones estndar de
temperatura y presin atmosfrica y cualquier
evaporacin que resulte importante durante el
tiempo que duren los ensayos. Este tipo de en-
sayo permite las siguientes actividades:
1. Comparar diversos tipos de pipetas entre s
para detectar si hay diferencias entre ellas.
2. Controlar la precisin y la exactitud de una
pipeta.
3. Controlar la exactitud y la precisin de un lo-
te de pipetas.
4. Controlar factores atribuibles a la utilizacin
de una pipeta por diversos usuarios.
Procedimiento
7
El procedimiento que se explica a continuacin es
vlido para las pipetas que funcionan por despla-
zamiento de aire. Comprende los siguientes pasos:
1. Instalar una punta nueva en la pipeta.
2. Succionar con la pipeta agua destilada del
recipiente de almacenamiento y desecharla
en el recipiente de desperdicio al menos 5
veces, para estabilizar la humedad del volu-
men de aire en el interior de la pipeta.
3. Aadir agua al recipiente que se utilizar pa-
ra pesar, hasta que se obtenga una altura del
lquido de al menos 3 mm.
4. Registrar la temperatura del agua, la presin
ambiental y la humedad relativa.
5. Reemplazar la tapa del recipiente de pesa-
do, si aplica.
6. Registrar el peso que presenta la balanza o
efectuar la tara para que la lectura de la mis-
ma quede en cero (0).
6
Los equipos a utilizar en la calibracin de la pipeta deben estar certificados por un laboratorio de calibracin acreditado.
7
El procedimiento presentado es una gua general. Para detalles completos, consultar estndares como el BS ES ISO 8655-
6:2002.
184
7. Llenar la pipeta con agua del recipiente de
almacenamiento y dispensarla en el reci-
piente de pesado. Expulsar la totalidad del
agua. (Tal y como se ha descrito en el nume-
ral 7 del Mtodo convencional de uso). El
trabajo se realiza de la misma forma que se
utiliza la pipeta de forma cotidiana.
8. Registrar el nuevo peso detectado por la balanza.
9. Repetir los pasos 7 y 8 por nueve (9) veces
adicionales, registrando al final de cada ciclo
el peso que registra la balanza.
10. Registrar la temperatura del lquido en el re-
cipiente de pesado, al final del dcimo ciclo
y medir el tiempo transcurrido desde el inicio
de las mediciones.
11. Evaluar si la evaporacin ha sido significa-
tiva, (caso crtico cuando se trabaja con pi-
petas de volumen muy pequeo). Si as se
estima, se debe permitir que trascurra un
perodo de tiempo adicional [Ta], igual al
utilizado durante las diez mediciones, y
cuando se complete, efectuar una nueva
lectura del peso que registra la balanza.
12. Dividir la masa de agua perdida por evapo-
racin en el tiempo adicional [Ta] por el n-
mero total de muestras analizadas (diez). Es-
to dar un indicativo promedio de la masa
de lquido perdida, debido a evaporacin
por ciclo, cifra que debe aadirse a cada una
de las lecturas de masa realizadas.
Clculos
Para efectuar los clculos se procede como se
describe a continuacin:
1. Calcular la masa del agua dispensada por la
pipeta en cada ciclo. Restar la lectura registra-
da correspondiente al final del ciclo anterior
de la registrada en el presente ciclo y conti-
nuar as hasta el final. Si se considera adecua-
do, sumar la masa promedio correspondiente
a la evaporacin calculada por ciclo.
2. Convertir cada valor de masa a volumen a 20 C,
dividiendo la masa para la densidad del agua
ajustada a la mencionada temperatura.
3. Calcular el volumen promedio de los volme-
nes calculados en el numeral 2. (Suma de los
volmenes, dividido para el nmero de
muestras). Aplicar los ajustes por fenmenos
tales como el empuje del aire sobre la masa
flotacin. Para esto se multiplica cada ma-
sa por un factor de correccin [Z].
X =V
i
n x Z
4. Calcular la desviacin estndar de la muestra.
5. Calcular el coeficiente de variacin.
A continuacin, se muestra una tabla que con-
tiene el resumen de las frmulas matemticas
mencionadas.
Frmulas
V
i
=
M
i
D
[Cv] CV(%) = x 100
S
X
AV
1
n - 1
x (X
i
- X
AV
)
2
[S] S =
8
Los valores de Z dependen de la temperatura y la presin para el agua destilada. Deben consultarse en publicacio-
nes especializadas como el Estndar BS EN ISO 8655-6:2002, Anexo A.
E
s
=X - V
n
Cv(%) = x 100
S
X
AV
D(%) =
X
AV
- X
Nom
X
Nom
1
n-1
x (X
i
-X
AV
)
2
S =
n
i =1
V
i
=
M
i
D
Convenciones:
X = valor promedio del volumen
S = desviacin est ndar
Z = fact or de ajust e en
(l / mg)
8
Convenciones:
Cv(%) = coeficient e de
variacin
D(%) = inexact it ud
X = V
i
n x Z
n
i =1
185
Pi pet as 16
La pi pet a present a f ugas. Punt a col ocada de f orma i ncorrect a en
l a pi pet a.
Inst al ar l a punt a de acuerdo a procedi mi ent o
def i ni do por el f abri cant e.
Got as vi si bl es dent ro de l a punt a de l a
pi pet a.
Humi di f i caci n no homognea de l a
pared pl st i ca.
Inst al ar una punt a nueva en l a pi pet a.
La pi pet a present a i nexact i t udes con
det ermi nados l qui dos.
Cal i braci n i nadecuada. Recal i brar l a pi pet a ut i l i zando procedi mi ent o
est andari zado.
Aj ust ar l a cal i braci n si se ut i l i zan l qui dos de
vi scosi dad al t a.
La pi pet a present a i nexact i t udes. Operaci n i ncorrect a de l a pi pet a. Revi sar l os procedi mi ent os de uso y corregi r
errores det ect ados.
El bot n de cont rol no se mueve suave-
ment e o present a al t a resi st enci a al
acci onarl o.
Pi st n cont ami nado. Li mpi ar y l ubri car l i gerament e.
Sel l o cont ami nado. Desensambl ar l a pi pet a, l i mpi ar t odos l os se-
l l os o reempl azarl os si es necesari o. Lubri car
l i gerament e.
Pi st n daado. Reempl azar el pi st n y l os sel l os del pi st n.
Lubri car l i gerament e.
Vapores de sol vent e han ent rado en l a
pi pet a.
Desenroscar l a uni n cent ral de l a pi pet a. Ven-
t i l ar, l i mpi ar el pi st n y l ubri car l i gerament e.
Cuerpos ext raos baj o el bot n de
acci onami ent o.
Li mpi ar el mont aj e del bot n.
Punt a de l a pi pet a mal i nst al ada. Revi sar el mont aj e de l a punt a de l a pi pet a.
Inst al ar una punt a di f erent e, adecuada a l as
especi f i caci ones de l a pi pet a.
Int erf erenci a en l a cal i braci n. Recal i brar de acuerdo a procedi mi ent o est an-
dari zado. Revi sar procedi mi ent o de uso.
Punt a cont ami nada. Inst al ar una punt a nueva.
Cuerpos ext raos ent re l a punt a y su
cono de aj ust e.
Li mpi ar acopl e. Ret i rar l a punt a y l i mpi ar el
cono de aj ust e. Inst al ar una punt a nueva.
Cuerpos ext raos ent re el pi st n y el
ani l l o/sel l o en O al oj ado en el ci l i ndro.
Desensambl ar y l i mpi ar el conj unt o ci l i ndro-
/pi st n. Lubri car y ensambl ar.
Lubri cant e i nsuf i ci ent e en el pi st n y o
el sel l o en O.
Desensambl ar y l ubri car adecuadament e.
Sel l o en O dobl ado o daado. Reempl azar sel l o en O. Desensambl ar, l i mpi ar,
reempl azar sel l o, l ubri car y ensambl ar.
Pi st n cont ami nado. Li mpi ar el pi st n y l ubri car l i gerament e.
Cono i nf eri or f l oj o. Aj ust ar el cono i nf eri or.
186
DEFINICIONES BSICAS
Coef iciente de variacin [CV]. Parmetro
estadstico que representa la fraccin de la
desviacin tpica con respecto a la media.
Densidad. Relacin que existe entre la masa de
un cuerpo y el volumen que el mismo ocupa. La
densidad promedio de un objeto es igual a su
masa total dividida por su volumen total. Se
identifica mediante la letra griega Ro []. En el
Sistema Internacional de Unidades, la densidad
se mide en kilogramos por metro cbico [kg/m
3
].
Desviacin estndar [S]. Parmetro esta-
dstico que se utiliza para determinar el error
global de una muestra.
Error (de una medida). Di ferenci a que se
presenta entre el val or medi do y el val or
correcto.
Exactitud. Concepto relacionado con los
errores que presentan las medidas. Se dice
que un instrumento es exacto cuando los va-
lores de un grupo de mediciones se acercan
bastante al valor real.
Masa. Propiedad fsica de los cuerpos relacio-
nada con la cantidad de materia que estos
contienen. En fsica hay dos cantidades a las
que se denomina masa. La masa gravitacional
que es una medida de la forma en que un
cuerpo interacta con el campo gravitacio-
nal. (Si la masa del cuerpo es pequea, el
cuerpo experimenta una fuerza menor que la
que experimentara si su masa fuera mayor).
Por otra parte, la masa inercial se entiende
como la resistencia a cambiar el estado de
movimiento, cuando se le aplica una fuerza a
un objeto. (Un objeto, con una masa inercial
pequea, cambia su estado de movimiento
con mayor facilidad que uno que tenga una
mayor masa inercial, cuando se les aplica una
misma fuerza).
Microgramo [g]. Unidad de peso que equi-
vale a 1 x 10
-6
gramos (g).
Miligramo [mg]. Unidad de peso que equi-
vale a 1 x 10
-3
gramos (g).
Microlitro [l]. Unidad de capacidad que
equivale a 1 x 10
-6
litros (l). Un (1) l de agua
pesa exactamente un (1) mg y tiene un volu-
men de 1 mm
3
.
Mililitro [ml]. Unidad de capacidad que
equivale a 1 x 10
-3
litros (l). Un (1) ml de agua
pesa exactamente 1 g y tiene un volumen de
1 cm
3
.
Precisin. Concepto relacionado con los
errores que presentan las medidas. Se dice
que un instrumento o mtodo es preciso
cuando en ensayos independientes, al repetir
una medida, se obtienen resultados similares.
Rango. Diferencia entre el mximo y el mni-
mo valor que lee o mide un instrumento.
Volumen. Cantidad de espacio fsico que
ocupa la masa. Se calcula dividiendo la masa
por la densidad promedio.
187
Pi pet as 16
Bibliografa
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipettes, National Physi-
cal Laboratory, Teddington, Middlesex, UK, 2004. (www.npl.co.uk)
Digital pipette, Guide to Justor 100 series pipettes, Nichiryo Co., LTD.
Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Rev. 2/121199.
Mantenimiento y reparacin del equipo de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Organizacin Mundial de la Salud, 1996, 52-55.
Manual de instrucciones, Eppendorf Serie 2000.
(http://www.brinkmann.com/pdf/bs-manuals/ReferenceSeries2000.pdf)
Standard Operating Procedure for Pipettes, Brinkmann /Eppendorf
SOP. 5101-201C,
Brinkmann Instruments Inc, 2001. (http://www.brinkmann.com/pdf/5101-C201.pdf)
The Finnpipette, Instructions for Use, Labsystems, Helsinki, Finland.
188
191
Pl at o cal i ent e con agi t ador 17
9. Evitar colocar materiales combustibles cer-
ca del equipo.
10.Evitar colocar recipientes cuyo peso exceda
la capacidad definida por el fabricante.
El plato caliente con agitador es un equipo
diseado para trabajar en condiciones nor-
males, sin que presente mayores exigencias
de mantenimiento. Este equipo bien instala-
do y operado funciona sin problemas duran-
te muchos aos. En este documento se expo-
nen las rutinas generales de mantenimiento
que recomiendan los fabricantes. Procedi-
mientos especializados deben realizarse si-
guiendo cuidadosamente las recomendacio-
nes de los fabricantes.
Limpieza
Frecuencia: Mensual
1. Limpiar el equipo en una posicin vertical,
para evitar que los agentes de limpieza lle-
guen a los componentes internos.
2. Utilizar un detergente suave. Aplicarlo so-
bre las superficies externas, utilizando una
pieza de tela de calidad similar a la de los
pauelos.
3. Verificar que el equipo se encuentre com-
pletamente seco antes de volver a conectar.
Reemplazo de superficies cermicas
A continuacin, se presentan las recomenda-
ciones generales aplicables a la sustitucin de
las superficies cermicas.
1. Verificar que el plato caliente se encuentre
desconectado y fro. Esto evita el riesgo de
que se produzca un choque elctrico o se
presente una quemadura.
2. Manejar con extremo cuidado el equipo,
pues una superficie cermica rota tiene
bordes cortantes muy peligrosos.
3. Colocar la unidad con la superficie calefac-
tora hacia abajo.
4. Retirar los tornillos que fijan la tapa infe-
rior y removerla.
5. Ubicar y desconectar los cables que ali-
mentan las resistencias elctricas (en mo-
delos que utilizan estos elementos).
6. Desconectar los cables existentes entre el
control del equipo y las resistencias.
7. Retirar los tornillos que fijan la cubierta supe-
rior a la base. Verificar que no se afecten las
conexiones a las resistencias calefactoras.
8. Orientar la nueva superficie cermica, tal
como se encuentra montada la superficie
cermica a cambiar.
9. Observar cmo se encuentran colocados los
seguros de la cubierta cermica daada. Re-
tirar dichos seguros y colocar los elementos
calefactores y aislantes dentro de la nueva
superficie, conservando la misma alineacin
y distribucin que tena en la cubierta origi-
nal. Colocar los nuevos seguros.
10.Reconectar los siguientes componentes en
un proceso inverso al arriba descrito.
Reemplazo de fusibles
Si el plato est conectado y el interruptor prin-
cipal en la posicin de encendido, pero no hay
efecto calefactor, es posible que sea necesario
sustituir el fusible. El proceso es el siguiente:
1. Colocar el interruptor principal en la posi-
cin apagado y desconectar el cable de ali-
mentacin elctrica.
2. Retirar, con un destornillador de pala, la
tapa del compartimiento del fusible.
3. Reemplazar el fusible por uno nuevo de
las mismas especificaciones del original.
4. Colocar la cubierta del compartimiento del
fusible.
193
Pl at o cal i ent e con agi t ador 17
Bibliografa
Fitzgerald, A., Kingsley, C., Kusko, A., Electric Machinery, Mc Graw Hill Co., 1971.
Instructions for replacement on ceramic top on Fisher 11-500 series, Hotplates and Stirrers,
Part N 103177, 1998.
Instruction manual for Fisher Isotemp
Digital, Instructions Part N 104612, Rev. A. Pitts-

burg, Fisher Scientific, 2001.
Instruction manual for Fisher Scientific Stirrers, Hotplates and Stirring Hotplates, Pittsburg,
Fisher Scientific.
(http://www.mastrad.com/hotplate1.jpg)
194
198
Aislamiento trmico. Es un conjunto de
materiales que tiene la propiedad de retar-
dar la transferencia de calor. Su funcin con-
siste en evitar que la energa trmica del me-
dio ambiente pueda llegar al entorno que se
pretende refrigerar, con la misma rapidez
que el sistema de refrigeracin extrae la
energa trmica del interior. Todo equipo de
refrigeracin dispone del aislamiento trmico
adecuado, para lograr que la temperatura in-
terior sea inferior a la temperatura del medio
ambiente. El mejor aislante trmico es el va-
co. En los refrigeradores se utilizan diversos
materiales; entre los ms comunes y usados,
se encuentran el poliuretano en forma de es-
puma y la lana de vidrio. Asimismo, se acos-
tumbra fabricar las superficies interiores en
materiales como plstico ABS.
Vlvulas de servicio. Son dispositivos que se
utilizan para cargar el circuito de refrigeracin
con el fluido refrigerante. A travs de las mis-
mas, se conectan los sistemas de vaco y de car-
ga de refrigerante requeridos, para que el re-
frigerador opere de acuerdo con las condicio-
nes de diseo establecidas por el fabricante.
Normalmente, su utilizacin est limitada al fa-
bricante y a personal tcnico especializado. (No
se indican en el esquema de refrigeracin).
Protector trmico. Es un dispositivo de pro-
teccin que debe activarse y desconectar el
compresor, en caso de que ocurran sobrecar-
gas o sobrecalentamientos que afecten las
bobinas de campo del compresor. (Pertenece
al sistema elctrico y no se indica en el siste-
ma de refrigeracin).
Para su funcionamiento, los refrigeradores
requieren las siguientes previsiones:
1. Acometida elctrica con polo a tierra ade-
cuada a los requerimientos de voltaje y
frecuencia del equipo. En general los refri-
geradores, dependiendo de su capacidad,
pueden conseguirse en versiones que fun-
cionan con 115 V, 60 Hz; 208/230 V, 60 Hz.
Debe preverse que las acometidas elctri-
cas cumplan con las normativas elctricas
nacionales o internaciones que utilice el
laboratorio.
2. Si se instala ms de un refrigerador que
dependa de un mismo circuito elctrico, se
debe verificar que la capacidad potencia
elctrica y las seguridades del mismo sean
adecuadas para suministrar la potencia
que demandan los refrigeradores.
3. Conectar directamente el refrigerador a la
toma elctrica. Nunca instalar un refrige-
rador en una toma elctrica sobrecargada
o que presente deficiencias de voltaje. En
lo posible, evitar el uso de extensiones
elctricas. La toma elctrica no debe estar
a ms de 2 m del lugar seleccionado para
instalar el refrigerador.
4. Instalar el refrigerador sobre una superfi-
cie nivelada, previendo que se disponga
de un espacio libre alrededor del equipo.
Los refrigeradores en la base disponen de
un sistema de nivelacin que permite ajus-
tar las pequeas diferencias de nivel que
pudiera tener el piso. Se acostumbra dejar
un espacio libre de 15 cm a los lados, y en
la parte trasera para facilitar la ventilacin
del condensador.
5. Evitar instalar el refrigerador bajo la luz
solar directa o cerca de fuentes de calor
como radiadores o calentadores. Recordar
que mientras mayor sea la diferencia de
temperatura entre el ambiente y el con-
densador, la transferencia de calor ser
ms eficiente.
Nota: Tanto el evaporador como el condensa-
dor estn fabricados con materiales que pre-
sentan muy buenas propiedades de conduc-
cin trmica como aluminio [Al] y cobre [Cu].
Para mejorar la transferencia de calor, se han
incorporado, en los condensadores y evapora-
dores, sistemas de ventilacin que inducen
procesos de conveccin forzada. Para lograr
las diferentes temperaturas de refrigera-
cin que se requieren en los laboratorios o
en la industria en general, los fabricantes han
desarrollado diversidad de diseos y de flui-
dos refrigerantes, los cuales utilizan depen-
diendo de los resultados esperados.
201
Ref ri gerador 18
Se aprecian en el esquema los siguientes controles:
1. Un interruptor general, accionado por llave
2. Indicadores de puerta abierta, batera ba-
ja, condicin tcnica anormal
3. Botones para aumentar o disminuir par-
metros
4. Pantalla indicadora
Los refrigeradores son equipos que en general
no son muy exigentes desde la perspectiva de
mantenimiento, aunque s son exigentes con
relacin a la calidad de los sistemas de alimen-
tacin elctrica. Si se conectan a circuitos elc-
tricos de buena calidad y se verifica que ten-
gan buena ventilacin alrededor del equipo,
pueden funcionar aos sin demandar servicios
tcnicos especializados. El circuito de refrige-
racin es sellado en fbrica y no dispone de
componentes que puedan requerir manteni-
miento rutinario. Se describen a continuacin
las rutinas de mantenimiento ms comunes.
Refrigeradores de conservacin
Limpieza interior
1. Verificar que los estantes interiores del re-
frigerador se encuentran limpios. General-
mente se fabrican en malla metlica, a la
cual se le aplica un recubrimiento para evi-
tar la corrosin. Para limpiarlos debe reti-
rarse del refrigerador cualquier material
que pudiera interferir la labor de limpieza.
Mover los estantes vacos hacia adelante.
Aplicar un detergente suave con un trapo
hmedo, frotar suavemente, las superfi-
cies superiores e inferiores. Secar y reubi-
car en la posicin original.
2. Si el refrigerador dispone de cajones, la la-
bor de limpieza es similar. Desocupar los
cajones y desmontarlos de los dispositivos
de ajuste. Retirarlos del refrigerador.
3. Una vez desmontados los estantes o cajones,
limpiar las paredes interiores del refrigera-
dor, utilizando un detergente suave. Secar
antes de montar los accesorios interiores.
4. Apl i car a l os cajones un detergente suave
con un trapo hmedo. Frotar con cui da-
do. Secar l os cajones y rei nstal arl os en l os
di sposi ti vos de montaje di sponi bl es en el
refri gerador.
Frecuencia: Cada 6 meses
1. Desconectar el cable de alimentacin elctrica.
2. Verificar la posicin donde se encuentra
instalado el condensador. Los fabricantes
lo colocan principalmente en la parte infe-
rior y en la parte trasera del equipo. Algu-
nos refrigeradores lo tienen instalado en
la parte superior.
3. Retirar la rejilla de proteccin y el filtro de
proteccin del condensador (No todos los
fabricantes proveen filtro).
4. Retirar la suciedad y el polvo depositados
sobre la superficie del condensador. Utili-
zar una aspiradora dotada de un cepillo de
succin. Recorrer toda la superficie del
condensador para retirar la suciedad o el
polvo acumulado. Verificar que tanto la
superficie de los tubos como la superficie
de las aletas conductoras de calor queden
limpias. Aspirar tambin el filtro (si se dis-
pone de este elemento).
5. Reinstalar la cubierta.
6. Conectar el refrigerador a la acometida
elctrica.
Advertencia: Evitar el uso de lana de ace-
ro u otros abrasivos para efectuar la lim-
pieza de los estantes o los cajones. Evitar
el uso de gasolina, nafta o adelgazantes,
porque estos daan los plsticos, el empa-
que o la pintura de las superficies.
202
Empaque de la puerta
El empaque de la puerta es un componente
que debe permanecer en buen estado para
que el refrigerador opere correctamente. Pa-
ra verificar su estado se procede como se ex-
plica a continuacin.
1. Abrir la puerta.
2. Insertar una tira de papel de unos 5 cm de
ancho, entre el empaque de la puerta y el
reborde del cuerpo del refrigerador donde
se aloja el empaque.
3. Cerrar la puerta.
4. Halar suavemente el papel desde el exterior.
El papel debe presentar una resistencia a ser
desplazado hacia afuera. Si el papel puede
retirarse sin presentar resistencia, el empa-
que debe ser sustituido. Efectuar este proce-
dimiento cada 10 cm alrededor de todo el
permetro sobre el cual acta el empaque.
1. Permite el ingreso de humedad, que se con-
densa y congela en el interior del evaporador.
2. Incrementa el tiempo de operacin del
compresor para mantener la temperatura
seleccionada.
3. Afecta la conservacin de la temperatura.
4. Incrementa los costos de operacin.
Descongelar
Muchos refrigeradores modernos disponen
de ciclos automticos para descongelar el
evaporador, a fin de evitar que se presenten
acumulaciones de escarcha. Normalmente,
dichos ciclos se realizan mediante la activa-
cin de un conjunto de resistencias elctricas
que de forma rpida eliminan la escarcha
presente. Algunos fabricantes prefieren que
este ciclo se realice bajo el criterio de quien
opera el refrigerador y su accionamiento es
manual. Se presenta a continuacin el proce-
dimiento recomendado para descongelar.
1. Verificar que el espesor de la escarcha sea
superior a 8 mm.
2. Retirar el contenido de los compartimientos.
3. Desconectar el refrigerador.
4. Dejar la puerta abierta.
5. Retirar el agua a medida que esta se acu-
mula en los compartimientos. Utilizar una
esponja o una pieza de tela absorbente.
6. Colocar una toalla para evitar que el agua
descongelada moje la parte frontal e infe-
rior del refrigerador.
Advertencia: Nunca utilizar elementos
cortopunzantes para retirar el hielo o la
escarcha del evaporador. Tal accin puede
perforar la pared del evaporador y permi-
tir la fuga del fluido refrigerante, causan-
do una falla grave que solo puede ser re-
parada en un taller especializado.
Advertencia: Si el condensador no se lim-
pia, se interfiere el proceso de transferencia
de calor y el refrigerador podra "calentarse"
o funcionar con temperaturas diferentes a
las seleccionadas.
Advertencia: Un empaque en malas con-
diciones produce varios inconvenientes en
el funcionamiento del refrigerador:
203
Ref ri gerador 18
OPERACIN DEL REFRIGERADOR II
Caso II: Refrigerador de ultrabaja
temperatura
La operacin de los refrigeradores de ultra-
baja temperatura implica seguir un procedi-
miento recomendado por los fabricantes, pa-
ra lograr las condiciones de trabajo estipula-
das en el diseo del equipo. Se destacan las
siguientes recomendaciones comunes a cual-
quier refrigerador:
1. Conectar el refrigerador a una toma elctri-
ca con polo a tierra de dedicacin exclusiva,
en buen estado de operacin y que est di-
mensionada para brindar la potencia elc-
trica requerida por el refrigerador, que
cumpla con las normas elctricas nacionales
o internacionales. El voltaje no debe variar
ms de +10 % o 5 % del voltaje de placa.
Hay refrigeradores que demandan poten-
cias de aproximadamente 12 kw, por lo
que es indispensable una acometida elc-
trica dimensionada a tales cargas.
2. Seleccionar un lugar que disponga de piso
firme, bien nivelado en todos los senti-
dos y ventilado y libre de la influencia de
la luz solar directa o de la influencia de
fuentes de calor. Algunos fabricantes esti-
pulan la temperatura ambiente adecuada
entre los 10 C y los 32 C. El espacio libre
a los costados y en la parte trasera debe
ser de al menos 15 cm. La puerta se debe
poder abrir libremente hasta un ngulo
de 90. Normalmente, los fabricantes in-
cluyen aditamentos para la nivelacin del
El ref ri gerador no f unci ona. Equi po desconect ado. Veri f i car conexi n del ref ri gerador.
El ref ri gerador present a f l uct uaci ones
de t emperat ura.
Cont rol de t emperat ura descal i brado. Cal i brar l a t emperat ura de operaci n segn
procedi mi ent o def i ni do por el f abri cant e.
Al operar el ref ri gerador se escuchan
soni dos si mi l ares a un cl i c.
El prot ect or t rmi co ha desconect ado
el compresor.
Veri f i car si el vol t aj e de al i ment aci n es el
correct o.
El ref ri gerador present a t emperat ura
al t a.
Puert a abi ert a. Veri f i car que l a puert a est bi en aj ust ada.
Fal l a en l a al i ment aci n el ct ri ca. Conf i rmar que l a acomet i da el ct ri ca f unci ona
correct ament e.
Se coloc una carga a t emperat ura alt a (l-
quidos o slidos) dent ro del refrigerador.
Esperar a que el ref ri gerador ret i re el cal or de
l a carga.
El compresor f unci ona, pero hay hi el o
en el evaporador.
Veri f i car si f unci onan l os vent i l adores del
evaporador.
El compresor f unci ona, no hay hi el o en
el evaporador y f unci onan bi en l os ven-
t i l adores del evaporador.
Se requi ere una veri f i caci n compl et a del si s-
t ema de ref ri geraci n. Ll amar al servi ci o t cni -
co especi al i zado.
El compresor no f unci ona. Veri f i car f unci onami ent o del compresor.
Comprobar si est encendida una de las alarmas.
Condensador suci o. Li mpi ar condensador, de acuerdo a procedi -
mi ent o ci t ado en rut i nas de mant eni mi ent o.
El ref ri gerador f unci ona de f orma con-
t i nua si n ef ect o f ri gorf i co.
Termost at o ajust ado a alt a t emperat ura. Conf i rmar aj ust e del t ermost at o.
Ref rigerador congelado. Aj ust ar el t ermost at o a una t emperat ura me-
nos baj a.
Descongel ar el ref ri gerador.
No hay el ect ri ci dad en ci rcui t o de al i -
ment aci n.
Comprobar acomet i da el ct ri ca.
Veri f i car el i nt errupt or general (breaker).
204
Procedimientos
1. Conectar el cable de alimentacin elctrica
a la toma de suministro elctrico.
2. Girar la llave, a la posicin de encendido.
La pantalla debe iluminarse indicando la
temperatura del gabinete y un diodo emi-
sor de luz indicar que el refrigerador se
encuentra energizado. Esta accin pondr
en marcha el compresor y los ventiladores
del evaporador y del condensador.
3. Seleccionar la temperatura de operacin del
refrigerador, por lo general, se accionan va-
rios botones de forma simultnea; el botn
correspondiente al control de temperatura y
los botones para incrementar o disminuir la
temperatura. Una vez seleccionada la tem-
peratura deseada, se liberan los controles.
La pantalla mostrar la temperatura de
operacin seleccionada. Esperar un tiempo
adecuado para que el refrigerador alcance la
temperatura seleccionada.
4. Seleccionar las temperaturas lmite a las que
debern accionarse las alarmas. General-
mente, las temperaturas lmites superiores e
inferiores no varan ms de un 10 % de la
temperatura de operacin. Las alarmas, por
lo general, se ajustan cuando ya el refrigera-
dor ha obtenido una temperatura cercana a
su punto de operacin. El procedimiento
consiste en activar el control de alarmas y se-
leccionar las temperaturas lmites superiores
e inferiores, de forma que se active la alarma
si por algn motivo se exceden dichos lmi-
tes. Se debe seguir el procedimiento que re-
comienda el fabricante. Usualmente, el con-
trol dispone de un botn que permite desac-
tivar las alarmas y tambin de la opcin para
probar el funcionamiento de las mismas.
refrigerador, ubicados en la base, junto con
los soportes o rodamientos de sustentacin.
ENCENDIDO DEL REFRIGERADOR
Para entender los procedimientos de opera-
cin del refrigerador, se ha preparado un es-
quema de un tablero de control similar a los
que utilizan los refrigeradores en mencin. El
esquema es de tipo general, por lo que segu-
ramente se encontrarn diferencias con los
controles que utilizan los diversos fabrican-
tes. El mismo se incluye a continuacin y es
bsico para entender los procedimientos de
operacin que se explican en seguida.
Ilustracin 52: Control refrigerador ultrabaja temperatura
205
Ref ri gerador 18
5. Los refrigeradores de ultrabaja temperatura
disponen de otra serie de alarmas que avi-
san a los operadores sobre la ocurrencia de
eventos que pudieran afectar el adecuado
funcionamiento del refrigerador. Entre los
mismos se encuentran los siguientes:
Falla en la alimentacin elctrica
Bajo voltaje
Temperatura ambiente demasiado alta
Temperatura de lmite superior superada
Temperatura de lmite inferior superada
Las rutinas de mantenimiento de los refrige-
radores de baja temperatura se encuentran
enfocadas a los siguientes aspectos:
Frecuencia: Cada 6 meses
1. Retirar la rejilla protectora.
2. Retirar y limpiar el filtro. Si est demasia-
do obstruido, sustituir por otro de las mis-
mas caractersticas del original.
3. Verificar el funcionamiento del ventilador.
4. Aspirar el condensador y sus aletas difusoras.
5. Reinstalar la rejilla protectora y el filtro.
Integridad del sello de la puerta
Se recomienda que, de forma peridica, se
verifique la integridad del sello de la puerta.
El mismo debe permanecer en buen estado y
no presentar roturas, pinchazos o rasgaduras.
Descongelar
Cuando sea necesario descongelar el refrigera-
dor, debe procederse de la siguiente manera:
1. Trasladar los productos que se mantienen
refrigerados a otro refrigerador de carac-
tersticas similares de operacin.
2. Apagar el refrigerador y permitir que el interior
del mismo alcance la temperatura ambiente.
3. Retirar el hielo y el agua acumulada en el
interior del refrigerador.
4. Si se presentan olores extraos, lavar el in-
terior del refrigerador con bicarbonato de
sodio y agua tibia.
5. Limpiar el exterior con un detergente suave,
secar y luego aplicar una cera protectora.
Mantenimiento de la batera del
sistema de alarma
Frecuencia: Aproximadamente cada dos o tres aos
Usualmente, la batera del sistema de alarma
debe cambiarse una vez que haya completa-
do su ciclo de vida til. Para sustituirla se pro-
cede como se describe a continuacin.
1. Remover la tapa frontal. Por lo general,
la(s) batera(s) se encuentra(n) inmediata-
mente detrs de la misma.
2. Desconectar los terminales de conexin.
3. Retirar la batera agotada.
4. Instalar una batera de las mismas caracte-
rsticas de la original.
5. Conectar los terminales.
6. Reinstalar la tapa.
Advertencia: Nunca utilizar elementos corto-
punzantes para retirar el hielo o la escarcha del
evaporador. Tal accin puede perforar la pared
del evaporador y permitir la fuga del fluido re-
frigerante, causando una falla grave que solo
puede ser reparada en un taller especializado.
Advertencia: Si el condensador no se limpia, se
interfiere el proceso de transferencia de calor y
el refrigerador podra "calentarse" o funcionar
con temperaturas diferentes a las seleccionadas.
206
DEFINICIONES BSICAS
BTU. Unidad para determinar la transferencia
de calor en el Sistema Ingls. BTU es el acr-
nimo de British Thermal Unit. Un BTU es la
cantidad de calor que debe ser transferido
para aumentar la temperatura de una libra
de agua de 63 F a 64 F.
Calor. Forma de energa transferida, a travs
del lmite de un sistema a una temperatura da-
da, a otro sistema o vecindario a una menor
temperatura, por virtud de la diferencia de tem-
peratura entre los dos sistemas. Cuando un sis-
tema de gran masa [M] es puesto en contacto
con otro sistema de pequea masa [m] que se
encuentra a temperatura diferente del primero,
se observa que la temperatura resultante final
se encuentra cerca de la temperatura inicial del
sistema de mayor masa. Se dice entonces que
una cantidad de calor Qha sido transferida del
sistema de mayor temperatura al sistema de me-
nor temperatura. La cantidad de calor Q es
proporcional al cambio en temperatura T. La
constante de proporcionalidad [C], llamada la
capacidad calrica del sistema, permite estable-
cer la siguiente relacin Q=CT , de la cual se
infiere que una de las consecuencias del cambio
de temperatura en un sistema es la transferen-
cia de calor.
Calora. Cantidad de calor que debe ser
transferida a un gramo de agua, para que su
temperatura aumente 1 C. Esta definicin
aplica exactamente cuando, a condiciones
normales (presin atmosfrica igual a 760
mm Hg, aceleracin de la gravedad igual a
9,81 m/s
2
), la temperatura del gramo de agua
aumenta de 14,5 a 15,5 C.
Calor especf ico. Cantidad de calor requeri-
da para aumentar en un grado la unidad de
masa.
Calor latente. Cantidad de energa trmica
requerida para que en una sustancia ocurra
un cambio de fase. Por ejemplo: de fase lqui-
da a fase vapor.
Calor sensible. Cantidad de energa reque-
rida para aumentar la temperatura del fluido
refrigerante, al absorber calor. Por ejemplo:
cantidad de calor requerida para aumentar la
temperatura de 15 a 20 C, o de 30 a 40 C.
Indi cador de baj o vol t aj e encendi do. Vol t aj e i nadecuado en l a t oma de al i -
ment aci n el ct ri ca.
Veri f i car el vol t aj e de al i ment aci n. Compro-
bar l a acomet i da y l os si st emas de prot ecci n
de l a mi sma.
Indi cador de bat era baj a encendi do. Bat era agot ada. Sust i t ui r bat era por ot ra de l as mi smas espe-
ci f i caci ones de l a ori gi nal .
El ref ri gerador f unci ona de f orma
cont i nua.
Temperat ura de operaci n sel ecci ona-
da a un punt o muy baj o.
Di smi nui r l a t emperat ura sel ecci onada.
El ref ri gerador f unci ona de f orma con-
t i nua si n ef ect o f ri gorf i co.
Condensador suci o. Li mpi ar condensador.
Vent i l aci n i nadecuada. Veri f i car y corregi r l a vent i l aci n.
Equi po congel ado. Descongel ar el ref ri gerador.
Indi cador de f i l t ro suci o encendi do. Veri f i car l i mpi eza del f i l t ro. Li mpi ar el f i l t ro de prot ecci n del condensa-
dor. Si el mi smo est sat urado de suci edad,
sust i t ui r por ot ro de l as mi smas caract erst i cas
del ori gi nal .
El ref ri gerador no f unci ona. Equi po desconect ado. Conect ar el equi po a l a t oma de al i ment aci n
el ct ri ca.
Fusi bl e quemado. Sust i t ui r f usi bl e por ot ro de l as mi smas carac-
t erst i cas del ori gi nal .
Ot ros procedi mi ent os adi ci onal es de mant eni mi ent o requi eren de herrami ent a e i nst rument aci n especi al i zada.
207
Ref ri gerador 18
Entropa. Propiedad del estado de un siste-
ma de mltiples partculas. Los cambios dife-
renciales de entropa se expresan mediante la
ecuacin siguiente:
donde:
dQ: calor absorbido de una reserva a tempe-
ratura T durante un cambio infinitesimal
reversible del estado
T: temperatura de la reserva
Para cualquier ciclo reversible se cumple la si-
guiente ecuacin:
Si el ciclo es irreversible, se tiene que:
Fluido ref rigerante. Sustancia que se utiliza
como medio en los procesos de absorcin de
calor.
Mquina trmica. Dispositivo que opera
en un ciclo termodinmico y realiza una
cierta cantidad positiva de trabajo como re-
sultado de la transferencia de calor entre un
cuerpo a alta temperatura a un cuerpo a ba-
ja temperatura.
Proceso adiabtico. Proceso en el cual no
hay transferencia de calor. Implica que Q =0.
dS =
dQ
T
S =dS =
=0
dQ
T
S =
<0
dQ
T
Bibliografa
General purpose laboratory refrigerator/freezer, Instruction Manual, Pittsburgh, Fisher
Scientific, Part N 102778, Rev. D, 2002.
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sa, 1973.
Instruction Manual, Fisher Scientific Isotemp
Laboratory Freezers, Part N 102999, Rev. H.

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(http://www.revco-sci.com/support/manuals/labfrz2.pdf)
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SAUNDERS CO., 1975.
208

Manual de Mantenimiento para Equipos de Laboratorio

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MANUAL DE MANTENIMIENTO PARA

]. El organismo mantiene el equilibrio

] que los que presenta

, Instruction Manual, Ohaus Corporation, Part N 80251000, 2003.

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