Latar belakang klinis

Sifilis adalah infeksi klinis yang berlangsung melalui perbedaan tahapan infeksi yaitu:
primer, skunder, tersier, dan kuartener. Tahapan-tahapan ini menimbulkan gejala klinis yang
beragam, biasanya menimbulkan bisul awal yang dikenal sebagai chancres kemudian ruam
sifilis diikuti oleh periode dormansi yang panjang. infeksi yang tidak diobati akhirnya dapat
mengakibatkan masalah jantung dan neurosifilis.
Infeksi ini disebabkan oleh spiroketa, T.pallidum dan biasanya diperoleh melalui
kontak seksual, meskipun penyakit tersebut dapat ditularkan melalui transfusi darah yang
terinfeksi. infeksi intrauterin juga terjadi. Organisme ini telah terbukti hampir mustahil untuk
dikultur dalam media buatan, dan diagnosis infeksi biasanya tergantung pada demonstrasi
antibodi dalam darah, yang muncul segera setelah infeksi awal
tes untuk sifilis dibagi ke dalam empat kategori : pemeriksaan mikroskopis langsung tes
antibodi treponemal tes antibodi non - treponemal dan uji antigen langsung . !arena waktu
dormansi yang lama dan sifat non - spesifik dari tes non-treponemal , metode yang digunakan
untuk mendeteksi antibodi anti - treponemal spesifik dalam spesimen darah telah menjadi
semakin populer untuk skrining . T"#$ adalah salah satu tes tersebut .
TUJUAN PENGGUNAAN
!it ini diperuntukkan untuk digunakan oleh personel yang terlatih dan berkualitas untuk
mendeteksi antibodi terhadap Treponema pallidum dalam serum dan plasma manusia.
PRINSIP TES
kit T"#$ The %ab&' menggunakan eritrosit burung yang diawetkan yang dilapisi dengan
antigen T. pallidum ( strain )ichols* , yang akan mengikat antibodi spesifik dalam serum
pasien atau plasma . Sel tersuspensi dalam medium yang mengandung komponen untuk
menghilangkan reaksi non - spesifik . +eaksi positif ditunjukkan oleh aglutinasi dari sel ,
reaksi negatif ditunjukkan oleh pengendapan sel seperti tombol atau lingkaran kecil
tugas nim , (bayu*
bahan kontrol yang disediakan berasal dari serum manusia. -ahan tersebut telah diuji di
tingkat donor dan menemukan negatif untuk hepatitis - dan ., dan #I/ ' dan &. Namun,
bahan tersebut harus diperlakukan seolaholah mampu menularkan pen!akit"
spesimen serum manusia dan plasma harus diperlakukan sebagai mikrobiologis berbahaya,
dan ditangani sesuai dengan ketentuan yang berlaku.
tidak menggunakan kit setelah habis masa berlakunya.
tidak menggabungkan atau menukar reagen dari kit dengan nomor lot yang berbeda.
Pen!impanan
menyimpan pada &-0 1. bila tidak digunakan. botol diletakkan pada posisi tegak. tidak
dibekukan
umur simpan berlaku sampai dengan tanggal yang tercantum pada label kit.
PERALATAN #ANG $I%UTU&'AN
"ipet yag dikalibrasi dengan baik dan dipelihara mampu memberikan 2olume '1,&3,43, dan
'51 l.
5,-mikroplate yang baik (6- format yan baik*
T"#$ kit bisa secara otomatis untuk menangani cairan dan interpretasi hasil. -erbagai
sistem telah digunakan untuk ini-silahkan hubungi produsen dari kedua kit dan sistem
otomatisasi untuk rekomendasi otomatisasi.
SPESI(EN
Sampel serum atau plasma harus bebas dari sel darah dan kontaminasi mikroba. 7ereka
mungkin dapat disimpan pada suhu &-0
1
. selama 4 hari sebelum pengujian. Sampel
membutuhkan penyimpanan yang lebih lama , harus dibekukan pada suhu 8 &1
1
. atau lebih
rendah. Sampel yang beku harus dicairkan dan tecampur baik sebelum dilakukan pengujian.
6ji "rotokol (7anual*
Tempatkan semua reagen dan spesimen pada suhu kamar sebelum digunakan.
.atatan: kit kontrol positif dan negatif harus disesuaikan dengan banyaknya masing-masing
uji
6ji kualitatif
Tiga slide test yang diperlukan untuk masing-masing spesimen
)-: kit T"#$ '111 (Item )o T"#$9'11* bertujuan untuk screening specimen dalam jumlah
besar dan hanya berisi sel control dalam jumlah keci. #al ini berarti bahwa spesimen diuji
hanya menggunakan sel uji dalam contoh pertama, dan sel kontrol digunakan saat
mengulangi tes pada spesimen dan akan memberikan hasil positif ketika pertama kali diuji
'. spesimen pengenceran (' dalam &*
tambahkan '51 pengencer untuk satu slide test
tambahkan '1 spesimen ke slide test yang sama
dihomogenkan .
.atatan: kontrol positif dan negatif yang disediakan siap digunakan dan tidak memerlukan
pengenceran.
&. uji menambahkan &36% spesimen yang diencerkan dari langkah ' untuk pengujian yang
baik. menambahkan &36% spesimen yang diencerkan dari langkah ' untuk control yang baik.
resuspend tes dan suspensi kontrol sel dengan menggoyangkan botol. menguji untuk
resuspensi lengkap. tambahkan 43ul sel tes untuk pengujian yang baik, dan sel kontrol 43ul
untuk kontrol dengan baik. (finall pengenceran spesimen setelah penambahan sel adalah '
dalam 01*. aduk rata. menetaskan pada '3-:11 . pada permukaan yang bebas getaran selama
minimal ;3 menit. (,1 menit mungkin diperlukan untuk hasil optimal dengan beberapa plate
pembaca*. membaca pola pengendapan. "ola aglutinasi stabil setidaknya selama tiga jam jika
tidak terganggu.
uji kuantitatif
0 sumur yang diperlukan untuk setiap spesimen
.atatan: kit kontrol positif dan negatif harus dijalankan dengan masing-masing banyaknya uji
'. "engenceran spesimen (' dalam &1*
tambahkan '51 ul pengencer ke sumur
tambahkan '1 ul spesimen ke sumur yang sama
pastikan pencampuran menyeluruh
.atatan: kontrol positif dan negatif disediakan siap digunakan dan tidak memerlukan
pengenceran
&. titrasi
biarkan sumur pertama kosong, tambahkan &3 ul pengencer pada masing-masing sumur dari
4 sumur yang tersisa dalam deretan 0 sumur
tambahkan &3 ul dari langkah ' ke sumur pertama
tambahkan &3 ul dari langkah ' ke sumur kedua dan campurkan , maka serial encer sepanjang
urutan baik, buang kelebihan &3 ul dari sumur terakhir
)" U*i
7encampur Sel Test dengan lembut untuk memastikan resuspension menyeluruh.
Tambahkan 43 ml sel tes untuk masing-masing dengan baik ($khir berbagai spesimen
pengenceran setelah penambahan sel adalah ' 01-' di '1,&;1*.
$duk rata.
Inkubasi pada '3-:11. pada permukaan bebas-getaran selama minimal ;3 menit. (,1 menit
mungkin diperlukan untuk hasil yang optimal dengan beberapa piring-pembaca*.
-aca pola pengaturan. "ola aglutinasi stabil setidaknya selama tiga jam jika tidak terganggu.
Titer spesimen adalah kebalikan dari pengenceran tertinggi pemberian aglutinasi.
INTERPRETASI $AN +ALI$ASI ASSA#
Pengendalian (utu Internal
6ntuk hasil yang akan berlaku kontrol negatif harus memberikan hasil negatif (lihat panduan
membaca bergambar* dan kontrol positif harus memberikan titer ,;1-&3,1 (%ihat ilustrasi
untuk bimbingan pada titik akhir titrasi*.
(<ambar*.
setiap spesimen memberikan aglutinasi kurang dari yang ditampilkan seperti di atas adalah
negatif
setiap spesimen memberikan aglutinasi lebih besar daripada yang ditunjukkan seperti di atas
"erlu diperhatikan sebagai positif sementara dan prosedure tes diulang seperti di atas tetapi
dalam rangkap menambahkan sel kontrol yang diberikan kepada satu set sumur dan sel uji
yang lain. jika aglutinasi dengan sel uji lebih besar dibandingkan dengan sel kontrol spesimen
positif untuk antibodi anti-treponental dan harus dikenakan untuk lebih testsfor konfirmasi.
jika aglutinasi dengan sel kontrol lebih besar atau sama dengan yang dengan sel kontrol
rocedure di bawah ini untuk penyerapan reaksi non-spesifik harus diterapkan.
Pen!erapan Reaksi Nonspesi,ik
("rosedur yang akan digunakan jika aglutinasi terlihat di kedua Test dan Sel !ontrol*.
'. tambahkan '1 ul spesimen sampai '51 ul dari suspensi Sel .ontrol, aduk merata dan
inkubasi selama :1 menit.
&. .entrifuge untuk deposit sel minimal '311 g selama : menit.
:. tambahkan &3 ul supernatan dari langkah & ke masing-masing & sumur.
;. .ampur dengan lembut uji dan kontrol sel untuk memastikan resuspension menyeluruh.
Tambahkan 43 ul sel uji ke sumur pertama
tambahkan 43 ul sel kontrol ke sumur kedua
3. pastikan pencampuran menyeluruh dan inkubasi di +T selama minimal ;3 menit.
7embaca dan menafsirkan pola pengendapan seperti di atas.
'arakteristik kiner*a
kekhususan
dua studi independen pada &511 donor sera masing-masing menunjukkan '11= konsensus
dengan metode uji yang ada. tingkat reaktif awal adalah o, '=, dan tingkat reaktif
pengulangan adalah 1=.
sebuah studi independen pada &11 sera antenatal menunjukkan spesifisitas '11= (53=
keyakinan 50,1;-'11=*.
'epekaan
Studi dalam rumah pada ''1 spesimen positif dikenal memberikan '11= hasil positif
(tingkat kepercayaan 53= 50,1;-'11=*. Ini termasuk & spesimen negatif dengan tes T"#$
yang tersedia secara komersial tetapi positif oleh >T$ dan igm tes ?I$.
Spesimen klinis
;,4 spesimen disampaikan ke laboratorium klinis untuk pengujian yang dicurigai sifilis
diperiksa.
Table
Termasuk diobati, kasus yang tidak diobati dan neurosifilis
Sensiti-itas : 55,3= (keakuratan 53=, 54.3;-'11=*
Spesi,isitas : '11= (keakuratan 53=, 50.1;-'11=*
Spesi,isitas dengan spesimen berpotensi .rossreakti,
Tabel
Sensiti-itas analitik
!it ini telah terbukti mampu mendeteksi 1,13 I6 9 m% antibodi anti-treponemal oleh
pengenceran pengujian serum "ertama Standar Internasional ()I-S., %ondon, 6!*
Presisi dan Akurasi
6ntuk ) @ '1 tes dari sampel positif : ./ @ 0.' = $kurasi @ -&.3=