Claudiafiloni Felideos Selvagens Patogenos

CLAUDIA FILONI
Exposio de feldeos selvagens a agentes

infecciosos selecionados
So Paulo
2006
CLAUDIA FILONI
Exposio de feldeos selvagens a agentes
infecciosos selecionados
Tese apresentada ao Programa de Ps-graduao
em Patologia Experimental e Comparada da
Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia
da Universidade de So Paulo para obteno do
ttulo de Doutor em Cincias
Departamento:
Patologia
rea de concentrao:
Patologia Experimental e Comparada
Orientador:
Prof. Dr. Jos Luiz Cato-Dias
So Paulo
2006
Autorizo a reproduo parcial ou total desta obra, para fins acadmicos, desde que citada a fonte.
DADOS INTERNACIONAIS DE CATALOGAO-NA-PUBLICAO
(Biblioteca Virginie Buff Dpice da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade de So Paulo)
T.1729 Filoni, Claudia
FMVZ Exposio de feldeos selvagens a agentes infecciosos selecionados /
Claudia Filoni. So Paulo: C. Filoni, 2006.
126 f. : il.
Tese (doutorado) - Universidade de So Paulo. Faculdade de Medicina
Veterinria e Zootecnia. Departamento de Patologia, 2006.
Programa de Ps-graduao: Patologia Experimental e Comparada.
rea de concentrao: Patologia Experimental e Comparada.
Orientador: Prof. Dr. Jos Luiz Cato-Dias.
1. Felidae. 2. Doenas infecciosas. 3. Bactrias. 4. Piroplasmida.
5. Vrus. I. Ttulo.
FOLHA DE AVALIAO
Nome: FILONI, Claudia
Ttulo: Exposio de feldeos selvagens a agentes infecciosos selecionados
Tese apresentada ao Programa de Ps-graduao
em Patologia Experimental e Comparada da
Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia
da Universidade de So Paulo para obteno do
ttulo de Doutor em Cincias
Data: ___/___/_____
Banca Examinadora
Prof. Dr. ______________________________
Assinatura: ____________________________
Instituio: _______________________
Julgamento: ______________________
Prof. Dr. ______________________________
Assinatura: ____________________________
Instituio: _______________________
Julgamento: ______________________
Prof. Dr. ______________________________
Assinatura: ____________________________
Instituio: _______________________
Julgamento: ______________________
Prof. Dr. ______________________________
Assinatura: ____________________________
Instituio: _______________________
Julgamento: ______________________
Prof. Dr. ______________________________
Assinatura: ____________________________
Instituio: _______________________
Julgamento: ______________________
Aos meus filhotes, as lindas meninas
Luciana, de sete anos e
Marcela, de seis anos
natureza brasileira em toda sua
diversidade
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
- ao Prof. Cato, no apenas como Diretor Tcnico-Cientfico da FPZSP e pelo livre acesso
sua sala na FMVZ-USP durante todo o perodo do doutorado mas, principalmente, por
sua orientao serena e competente que me descortinou o mundo cientfico e que me iniciou
na arte de escrever cientificamente, pelo que sou profundamente grata;
- Regina Hofmann-Lehmann e Hans Lutz que se interessaram pelo projeto, confiaram em
mim e no mediram esforos para que todos os complexos trmites referentes minha viagem
e ao transporte das amostras Vetsuisse Faculty, University of Zurich se efetivassem;
- minha me Maria Fernanda, meu pai Luiz Carlos e minha av Anna que tambm no
mediram esforos para que eu dispusesse de tempo e dos mnimos recursos para trabalhar
no meu projeto de tese e de vida.
AGRADECIMENTOS
Registrar agradecimentos a todas as pessoas que colaboraram na execuo de um
trabalho de quatro anos uma tarefa gratificante, mas essencialmente propensa a omisses
involuntrias, pois foram muitas as pessoas e instituies com quem travei contato neste
perodo, muitas das quais tambm tm o objetivo de contribuir para o processo
conservacionista. Assim, correndo o risco de omitir algum que deveria figurar nesta lista,
agradeo:
- a todos que foram muito solcitos na Fundao Parque Zoolgico de So Paulo (FPZSP),
como Dr. Paulo Magalhes Bressan, Dr. Joo Batista Cruz, Maria Jos Caldeirane , Jos
Daniel Luzes Fedullo, Sandra Helena Ramiro Corra, Rodrigo Hidalgo Friciello Teixeira
(atualmente de volta ao Zo de Sorocaba), Ariela Priscila Setzer, Mara Cristina Marques,
Ktia Cassaro, Denise Martins Sanches e Haroldo Soares Barbosa;
- todos os que conheci em com quem trabalhei no Clinical Laboratory, Vetsuisse Faculty,
University of Zurich, como Gert Bay, Valentino Cattori, Marina Meli, Ravi Tandon,
Yousef Ahmed, Maria Alice Gomes-Keller, E. Gnczi, T. Meili Prodan, Elisabeth e Edith,
pela amizade e pela excelente assistncia tcnica.
- o CENAPIBAMA e a todos os pesquisadores que colheram e depositaram as amostras
utilizadas em seus projetos de campo por todo o Pas. Em especial, Rose Lilian Gasparini
Morato e Otvio Borges Maia pela pronta disposio em ajudar na conduo de todas as
licenas internacionais requeridas, Ronaldo Gonalves Morato, Rogrio Cunha de Paula e
Rodrigo Silva Pinto Jorge pelo auxlio e prontido em providenciar amostras de material de
feldeos de vida livre e em sanar diversas dvidas ao longo deste projeto;
- Cristina Harumi Adania, Claudia Yumi Hashimoto e a todos da Associao Mata Ciliar
pela cesso das amostras de feldeos neotropicais mantidos em diversas regies do Pas, pela
disponibilidade em fornecer as informaes requeridas sobre as amostras e confiana dada
para a execuo deste projeto;
- o Prof. Edison Luiz Durigon que permitiu a utilizao de seu laboratrio e materiais para
o processamento de amostras durante os dois anos iniciais do projeto e continua mostrando-
se disposto a apoiar novas pesquisas na rea;
- o Prof. Dr. Jean Carlos Ramos Silva, Maria Fernanda Vianna Marvulo, caros amigos e
Prof. Dr. Jos Soares Neto pela concordncia na utilizao de parte das amostras de
feldeos selvagens mantidos em cativeiro no Brasil colhidas previamente em seus trabalhos;
- as instituies Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior CAPES,
Pr-Reitoria de Ps-Graduao da Universidade de So Paulo e ao International Relations
Office, University of Zurich, Switzerland.
- as pessoas vinculadas FMVZ-USP pelo seu apoio, como minha querida amiga agora
recm Profa. Dra. Llian Rose Marques de S, to perspicaz, lcida e prestativa em suas
muitas sugestes; o Prof. Dr. Marcelo Alcindo B. V. Guimares pelas nossas conversas na
lanchonete e nas filas do cafezinho nos eventos da Faculdade, onde j tivemos boas idias
que gostaramos de concretizar; Sandra Freiberger Affonso pela amizade desde nosso
ingresso no Programa de Doutorado, em que sempre compartilhamos dificuldades nas nossas
pesquisas; o Prof. Dr. Arthur Gruber, sincero e atencioso quando procurado por mim para
solicitao de opinies sobre minha pesquisa; Silvia Sochiarelli, Dayse M. A. Flexa e
Cludia Lima pela ajuda nos trmites burocrticos da Ps-Graduao; Elza M. R. B.
Faquim, Maria Ins Chiarelli de Camargo e Elena A. Tanganini pelo auxlio na recuperao
de informao bibliogrfica e disposio do trabalho dentro das diretrizes adotadas pela
Faculdade;
- todos do Instituto Brasileiro para Medicina da Conservao TRADE, que apiam seus
membros que precisam se afastar temporariamente das atividades do Instituto para
conclurem seus trabalhos acadmicos;
- o amigo Carlos Yamashita pelas muitas digresses sobre evoluo;
- a carssima amiga de infncia, a policial militar Clia Regina Modollo Custdio pelo
auxlio e incentivo na poca de concluso desta tese;
- o Jeep Clube do Brasil, por ter disponibilizado as instalaes de sua sede rural para a
redao da tese; e especialmente o Sr. Andr e famlia.
EPGRAFES
A histria chegou tarde a praticamente todos os encontros entre o homem e a
vida selvagem. Quando Colombo fez a primeira vistoria da costa antilhana, mais de dez mil
anos de ocupao humana j a haviam transformado de maneira incomensurvel at para os
mais dedicados esforos arqueolgicos. Apesar disso, de todos os continentes tropicais, a
Amrica do Sul foi o ltimo a ser invadido pelo homem, e o domnio humano de suas
florestas foi muito menos intenso e duradouro que o da sia, frica e Austrlia. Por isso, os
europeus em seu Novo Mundo encontraram uma natureza mais pura que a de outros pontos
dos trpicos e, assim, uma parte muito maior do processo de degradao ocorreu em uma era
de registros escritos. A Amrica do Sul , portanto, o campo de batalha mais recente para o
historiador florestal, no qual todos os que tombaram ainda jazem insepultos e os vencedores
ainda vagueiam por toda parte, saquando e incendiando o entulho.
A histria florestal corretamente entendida , em todo o planeta, uma histria
de explorao e destruio. O homem reduz o mundo natural a entornos domesticados,
aparados e moldados para se adequarem a algum uso prtico ou esttica convencional (...).
As intervenes humanas quase nunca realizam as expectativas humanas. Seus campos se
empobrecem, seus pastos se tornam magros e lenhosos, suas cidades entram em colapso. O
mundo natural, simplificado, em desacordo, com os desejos humanos, mas em resposta a seus
atos, converte-se em uma enorme macega cosmopolita de luto. (...)
A preservao de florestas deve (...) basear-se em algo alm do argumento do
auto-interesse cultural, ambiental ou econmico; talvez em uma concepo de interesse que
apenas se poderia definir por um autoconhecimento mais perspicaz e uma compreenso mais
profunda e filosfica do mundo natural. Muitos prevem, com mal-estar, a iminente
extino das florestas tropicais do planeta.
Warren Dean
O especismo um pr-conceito ou uma atitude pr-concebida a favor dos interesses dos
membros da sua prpria espcie e desfavorvel em relao aos membros de outras espcies. Os
racistas violam o princpio de igualdade quando, ao surgir um conflito entre seus interesses e
os dos representantes de uma outra raa, atribuem mais peso aos interesses dos
representantes da prpria raa. Os sexistas violam o princpio de igualdade ao privilegiar os
interesses de pessoas do mesmo sexo que eles. Da mesma forma, os especistas permitem que os
interesses de sua prpria espcie sobrepujem os maiores interesses dos membros de outras
espcies. Nos trs casos, trata-se do mesmo tipo de comportamento.
Paul Singer
Enquanto o programa dos ecologistas profundos assenta por inteiro na rejeio do
antropocentrismo cartesiano ou utilitarista em nome dos direitos da ecosfera, a lgica de sua
prpria postura leva-os a recair numa das mais extravagantes formas de antropomorfismo
(...) No so eles mesmos antropocentristas quando pretendem saber qual o melhor para o
meio ambiente natural? Ao imaginarem que o bem est inscrito no ser das coisas, eles
acabam esquecendo que toda valorizao , inclusive a da natureza, obra dos homens, e que,
por conseguinte, toda tica normativa , de algum modo, humanista e antropocentrista. (...)
O projeto de uma tica normativa anti-humanista uma contradio em si. (...) Quereriam
conservar a idia de valor e suprimir suas condies de possibilidade: esquecem, de passagem,
que so eles, enquanto seres humanos, quem valoriza a natureza e no o inverso, que
impossvel fazer abstrao deste momento subjetivo ou humanista para projetar no prprio
universo um valor intrnseco qualquer. (...) nessa operao pela qual pretende abstrair a
subjetividade que a filosofia da natureza cede s iluses do antropomorfismo. (...)
Luc Ferry
RESUMO
FILONI, C. Exposio de feldeos selvagens a agentes infecciosos selecionados. [ Exposure
of wild felids to selected infectious agents]. 2006. 127 f. Tese (Doutorado em Cincias)
Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia, Universidade de So Paulo, So Paulo, 2006.
Este estudo avaliou a exposio de 12 espcies de feldeos selvagens de vida livre (n=22) e
mantidas em cativeiro (n=210) no Brasil a 16 agentes potencialmente patognicos para
membros da famlia Felidae, como herpesvrus felino 1 (FHV 1), calicivrus felino (FCV),
parvovrus felino (FPV), coronavrus felino (FCoV), vrus da leucemia felina (FeLV), vrus
da imunodeficincia felina (FIV), lentivrus de puma (PLV), vrus da cinomose canina
(CDV), Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Anaplasma phagocytophilum, Mycoplasma
haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum, Candidatus Mycoplasma turicensis,
Theileria sp e Cytauxzoon sp, atravs do emprego de IFA, Western blot, ELISA e TaqMan
PCR e RT-PCR em amostras de soro, sangue, fezes e suabes orais, conforme as amostras
disponveis para cada animal. A deteco direta de patgenos ou de anticorpos demonstrou
que populaes de feldeos selvagens no Brasil esto expostas pelo menos ao FHV 1, FCV,
FPV, FCoV, FeLV e lentivrus felinos, Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Mycoplasma
haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum e Cytauxzoon sp, ou agentes
relacionados, quais provavelmente contribuem em quadros no diagnosticados de morbidade
e/ou mortalidade das populaes de feldeos selvagens no Pas. A presena de patgenos
comuns de carnvoros domsticos em feldeos selvagens aponta para a necessidade de
cuidadoso monitoramento destas infeces atravs de uma abordagem integrada e
multidisciplinar.
Palavras-chave: Felidae; Doenas Infecciosas; Vrus; Bactrias; Piroplasmida
ABSTRACT
.
FILONI, C. Exposure of wild felids to selected infectious agents. [Exposio de feldeos
selvagens a agentes infecciosos selecionados]. 2006. 127 f. Tese (Doutorado em Cincias)
Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia, Universidade de So Paulo, So Paulo, 2006.
This study evaluated exposure of 12 nondomestic felid species, both free-ranging (n=22) and
captive (n=210) in Brazil to 16 potential pathogenic agents for members of Felid family, as
feline herpesvirus 1 (FHV 1), feline calicivirus (FCV), feline parvovirus (FPV), feline
coronavirus (FCoV), feline leukemia virus (FeLV), feline immunodeficiency virus (FIV),
puma lentivirus (PLV), canine distemper virus (CDV), Bartonella henselae, Ehrlichia canis,
Anaplasma phagocytophilum, Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma
haemominutum, Candidatus Mycoplasma turicensis, Theileria sp, and Cytauxzoon sp, using
IFA, Western blot, ELISA, and TaqMan PCR and RT-PCR in serum, blood, feces and oral
swabs, according to available samples for each animal. The antibody or agents detection
demonstrated that Brazilian wild felid populations are exposed to at least FHV 1, FCV, FPV,
FCoV, FeLV, puma lentivirus (PLV), Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Mycoplasma
haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum, and Cytauxzoon sp, related agents,
which probably contribute to undiagnosed morbidity and/or mortality scenarios for the
Brazilian populations of wild felids. The presence of common domestic carnivore pathogens
in wild felids address the need of close monitoring of such infections throughout an
integrative and multidisciplinary approach.
Key words: Felidae; Infectious Diseases; Virus; Bacteria; Piroplasmida
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Mapa mostrando as reas geogrficas no Brasil em que as amostras
dos 22 feldeos de vida livre foram colhidas. So Paulo,
2004.................................................................................................... 47
Figura 2 - As amostras de cidos nuclicos (DNA e TNA) dos feldeos de
cativeiro foram agrupadas utilizando um equipamento robotizado
MagNAPure LC (Roche, Rotkreuz, Sua) de acordo com os
esquemas de pipetagem explicitados nas figuras 2a e 2b para
realizao dos testes conforme demonstrado na figura 2c. So Paulo,
2004........................................................................................................ 57
Figura 3 - Representao grfica do percentual em que foram detectados
anticorpos para FHV 1 (28,57%), FCV (28,57%), FCoV (4,76%),
Ehrlichia canis (4,76%), Anaplasma phagocytophilum (0) e
Bartonella henselae (95,0%), atravs de testes de imunofluorescncia
indireta (IFA), nas 21 amostras de soro provenientes de feldeos de
vida livre no Brasil. So Paulo, 2004..................................................... 61
FPV (69,84%), Ehrlichia canis (0,47%) e Bartonella henselae
(48,29%), atravs de testes de imunofluorescncia indireta (IFA),
nas amostras de soro provenientes de feldeos mantidos em cativeiro
no Brasil, tomadas em conjunto. So Paulo, 2004............................... 61
anticorpos para FCoV (72,10%), Ehrlichia canis (0) e Bartonella
henselae (48,29%), atravs de testes de imunofluorescncia indireta
(IFA), nas 147 amostras de soro provenientes de feldeos mantidos
na Fundao Parque Zoolgico de So Paulo (FPZSP). Tambm
esto representados os resultados para o espcime de Oncifelis
colocolo, CAD 28505, que ainda no havia sido vacinado por
ocasio da colheita de material, o qual tambm se apresentou
soronegativo para FHV 1, FCV e FPV. So Paulo, 2004.................... 62
FPV (70,96%) e Ehrlichia canis (1,61%), atravs de testes de
imunofluorescncia indireta (IFA), em 62 amostras de soro de
feldeos provenientes de diversos zos no Brasil cedidas pela
Associao Mata Ciliar (AMC). So Paulo, 2004............................... 62
LISTA DE QUADROS
Quadro - 1 Testes realizados para 11 patgenos em amostras de material biolgico
dos feldeos de vida livre. So Paulo, 2004............................................. 48
Quadro 2 - Testes realizados para 14 patgenos em amostras de material biolgico
dos feldeos mantidos na Fundao Parque Zoolgico de So Paulo
(FPZSP). So Paulo, 2004....................................................................... 49
Quadro 3 Testes realizados para seis patgenos em amostras de material
biolgico dos feldeos mantidos em cativeiro cedidas pela Associao
Mata Ciliar (AMC). So Paulo, 2004...................................................... 50
Quadro 4 Testes TaqMan PCR e RT-PCR realizados para 11 patgenos em
amostras de material biolgico de seis feldeos de vida livre. So
Paulo, 2004............................................................................................... 56
LISTA DE TABELAS
Tabela - 1 Nmero amostral e instituies cedentes de amostras de feldeos
selvagens mantidos em cativeiro e de vida livre. So Paulo,
2004........................................................................................................ 46
Tabela 2 - Resultados dos testes sorolgicos realizados para as amostras de
feldeos de vida livre, distribudos em funo dos mtodos
empregados e dos patgenos pesquisados. So Paulo,
2004........................................................................................................ 59
Tabela 3 Resultados dos testes sorolgicos realizados nas amostras
provenientes dos feldeos da Fundao Parque Zoolgico de So
Paulo (FPZSP), distribudos em funo dos mtodos empregados e
dos patgenos pesquisados. So Paulo, 2004....................................... 59
Tabela 4 Resultados dos testes sorolgicos realizados nas amostras de feldeos
cedidas pela Associao Mata Ciliar (AMC), distribudos em funo
dos mtodos empregados e dos patgenos pesquisados. So Paulo,
2004....................................................................................................... 60
Tabela 5 Resultados dos testes TaqMan PCR e RT-PCR realizados para seis
amostras de feldeos de vida livre, distribudos em funo das
amostras utilizadas e dos patgenos pesquisados. So Paulo, 2004...... 60
Tabela 6 - Resultados dos testes TaqMan PCR e RT-PCR para FeLV nos
jaguarundis (Herpailurus yaguarondi) mantidos na Fundao Parque
Zoolgico de So Paulo (FPZSP), distribudos em funo das provas
efetuadas e das amostras utilizadas. So Paulo, 2004............................ 63
Tabela 7 Resultados dos testes TaqMan PCR para bactrias e protozorios
piroplasmas realizados em amostras de sangue de 109 feldeos
mantidos na Fundao Parque Zoolgico de So Paulo (FPZSP). So
Paulo, 2004............................................................................................. 64
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Instituies e organizaes
AMC Associao Mata Ciliar
CENAP Centro Nacional de Pesquisas para Conservao de Predadores Naturais
CGEN Conselho de Gesto do Patrimnio Gentico
CITES Convention on International Trade in Endangered Species - Conveno
sobre o Comrcio Internacional de Espcies da Flora e Fauna Selvagens em
Perigo de Extino
FMVZ Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia
FPZSP Fundao Parque Zoolgico de So Paulo
IATA International Air Transport Association Associao Internacional de
Transporte Areo
PI 650 diagnostic specimen amostra diagnstica
IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis
IUCN International Union for the Conservation of Nature Unio Internacional
para a Conservao da Natureza
LAPCOM Laboratrio de Patologia Comparada
ONG organizao no-governamental
SZB Sociedade de Zoolgicos do Brasil
USP Universidade de So Paulo
VPT Departamento de Patologia
Agentes patognicos, amostras, unidades de medida e outras substncias
empregadas nos testes diagnsticos
l microlitro
16S subunidade de RNA
CAD nmero de cadastro individual dos animais na FPZSP
CDV canine distemper virus - vrus da cinomose canina
CrFK crandell feline kidney cells - clulas de rim felino de Crandell
DNA cido desoxirribonuclico
EDTA cido dietilenodiaminotetractico
ELISA enzyme linked immunosorbent assay
FCoV feline coronavirus coronavrus felino
FCV feline calicivirus calicivrus felino
FeLV feline leukemia virus vrus da leucemia felina
FHV 1 feline herpesvirus 1 herpesvrus felino 1
FITC isotiocianato de fluorescena
FIV feline immunodeficiency virus vrus da imunodeficincia felina
FPV feline parvovirus parvovrus felino
gp70 glicoprotena de peso molecular 70
IFA imunofluorescncia indireta
IM intramuscular
kg quilograma
MEM meio mnimo de Eagle
mg miligrama
min. minutos
n nmero amostral
p12 protena de peso molecular 12
PBS phosphate buffered saline solution - soluo salina fosfatada
tamponada
PCR polymerase chain reaction - reao de polimerizao em cadeia
FECV coronavrus entrico felino
FIPV vrus da peritonite infecciosa felina
PIF peritonite infecciosa felina
PLV puma lentivirus lentivrus de puma
RNA ribonucleic acid - cido ribonuclico
rRNA ribossomic ribonucleic acid - cido ribonuclico ribossmico
RT-PCR reverse transcriptase polymerase chain raction reao de
polimerizao em cadeia submetida ao da transcriptase reversa
SB studbook registro individual internacional
TGEV transmissible gastroenteritis virus -vrus da gastroenterite transmissvel
TNA total nucleic acids - cidos nuclicos totais
PD - 5 linhagem de clulas de rim suno
G gammaglobulin - imunoglobulina tipo gama
H+L high pesada e light - leve
Unidades da Federao Brasileira e outras unidades geopolticas
AC Acre
AM Amazonas
CA California - Califrnia
DF Distrito Federal
EUA Estados Unidos da Amrica
GO Gois
MG Minas Gerais
MS Mato Grosso do Sul
MT Mato Grosso
PA Par
PE Pernambuco
PR Paran
RJ Rio de Janeiro
RO Rondnia
RS Rio Grande do Sul
SC Santa Catarina
SP So Paulo
UK United Kingdom - Reino Unido
USA United States of America - Estados Unidos da Amrica
WA Washington
LISTA DE SMBOLOS
C graus Celsius
marca registrada
Trade mark
+ adio
: diviso
maior ou igual
% percentagem
APRESENTAO
Os ideais que embasaram esta tese foram constitudos nas ltimas dcadas do sculo
XX, enquanto as questes ligadas conservao da natureza tomavam vulto. Entretanto, o
sculo XXI se iniciou gerando um grande ceticismo de que a natureza viesse a ser mais
respeitada e admirada que meramente espoliada.
Agravaram-se a devastao, o descaso e a displicncia dispensados natureza.
Aqueles que dirigem pases ainda no investem ou pensam em sustentabilidade scio-
ambiental, mas concordam em modificar cruelmente os ambientes naturais em nome de
interesses econmicos progressistas, acreditam erroneamente que a melhora da qualidade de
vida humana est ligada explorao ilimitada dos chamados recursos naturais, no
enxergam os problemas ligados ao crescimento urbano, e sequer se incomodam com o ritmo
de destruio dos ecossistemas e do cerceamento de todas as reas selvagens da Terra.
Quisera a sobrevivncia humana viesse a ser pautada pela lgica da sustentabilidade
planetria, e no mais pela arbitrariedade econmica. Que os custos ambientais estivessem
sempre presentes nas transaes comerciais. Que a humanidade, que foi capaz de realizar
um salto tecnolgico to significativo em to poucas dcadas, qui fosse tambm capaz de
voltar seu olhar para os demais componentes da natureza, ou, pelo menos, olhar para si
mesma a longo prazo.

Apesar deste panorama, existem pessoas dispostas a trabalhar em prol da
conservao, como muitas daquelas que auxiliaram na execuo deste projeto. Assim,
acredito que este trabalho seja til e interessante aos profissionais veterinrios e de reas
afins que se interessam pela metodologia tcnico-cientfica empregada e pela problemtica
que envolve a questo da preservao e conservao dos feldeos selvagens em seu meio
natural e no cativeiro.
SUMRIO
1 INTRODUO........................................................................................ 22
2 OBJETIVOS............................................................................................. 24
2.1 OBJETIVOS GERAIS............................................................................... 24
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS..................................................................... 24
2 REVISO DE LITERATURA............................................................... 26
2.1 A FAMLIA FELIDAE.............................................................................. 26
2.2 DOENAS E CONSERVAO............................................................... 27
2.3 AGENTES VIRAIS................................................................................... 29
2.3.1 Herpesvrus felino 1 (FHV 1) e calicivrus felino (FCV)...................... 30
2.3.2 Parvovrus felino (FPV)........................................................................... 32
2.3.3 Coronavrus felino (FCoV)...................................................................... 33
2.3.4 Vrus da leucemia felina (FeLV), vrus da imunodeficincia felina
(FIV) e lentivrus de puma (PLV)...........................................................
34
2.3.5 Vrus da cinomose canina (CDV)............................................................ 36
2.4 AGENTES BACTERIANOS..................................................................... 38
2.4.1 Bartonella henselae................................................................................... 38
2.4.2 Ehrlichia canis e Anaplasma phagocytophilum...................................... 39
2.4.3 Hemoplasmas: Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma
haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis.................... 40
2.5 PROTOZORIOS PIROPLASMAS: Theileria sp E Cytauxzoon sp........ 41
2.6 AS TCNICAS LABORATORIAIS......................................................... 42
3 MATERIAIS E MTODOS.................................................................... 44
3.1 ANIMAIS E OBTENO DAS AMOSTRAS......................................... 44
3.2 PATGENOS PESQUISADOS................................................................ 48
3.3 TESTES DIAGNSTICOS....................................................................... 50
3.3.1 Testes sorolgicos..................................................................................... 51
3.3.1.1 Reaes de imunofluorescncia indireta (IFA).......................................... 51
3.3.1.1.1 Controle de qualidade das lminas para IFA............................................ 52
3.3.1.2 Ensaios imunoenzimticos......................................................................... 52
3.3.1.3 Western blot................................................................................................ 55
3.3.2 Testes TaqMan PCR e RT-PCR.......................................................... 55
4 RESULTADOS......................................................................................... 58
5 DISCUSSO............................................................................................. 65
5.1 AMOSTRAGEM....................................................................................... 65
5.2 ANLISE DOS RESULTADOS OBTIDOS PARA FELDEOS DE
VIDA LIVRE.............................................................................................
67
5.3 ANLISE DOS RESULTADOS OBTIDOS PARA FELDEOS
MANTIDOS EM CATIVEIRO.................................................................
71
5.4 CONSIDERAES FINAIS .................................................................... 73
6 CONCLUSES........................................................................................ 76
7 REFERNCIAS....................................................................................... 78
APNDICES............................................................................................. 92

22
1 INTRODUO
O estudo do papel das doenas constitui um eixo importante das estratgias para a
conservao dos animais selvagens, seja em ambiente natural ou de cativeiro. Estudos
ecolgicos reconhecem as doenas como fatores regulatrios de populaes naturais, embora
os fatores envolvidos nestas cadeias regulatrias raramente sejam conhecidos. Animais
mantidos em cativeiro so acometidos freqentemente por doenas de causa nem sempre
elucidada, o que geralmente requer um diagnstico etiolgico para que medidas teraputicas
e profilticas possam ser tomadas. Finalmente, as doenas que acometem animais selvagens
tambm podem ser causadas por agentes zoonticos, que devem ser identificados para que
medidas preventivas adequadas possam ser tomadas pelas pessoas que lidam diretamente
com os animais ou amostras de seus materiais clnicos.
Considerando-se que toda a famlia Felidae encontra-se ameaada (NOWEL;
JACKSON, 1996), que os hbitats reduzem-se progressivamente e que h um nmero
considervel de feldeos mantidos em cativeiro, torna-se necessrio conhecimento acumulado
e aplicabilidade imediata deste conhecimento para resolver questes referentes sade desta
famlia de carnvoros para sua conservao. Embora j exista de fato conhecimento
acumulado na literatura cientfica, tais dados ou relatos no so extensivos o suficiente para
cobrir as diversas populaes ou permitir uma correta avaliao clnica em caso de doenas.
Tratados individualmente ou como populaes, a abordagem clnica ou teraputica dos
animais deve se fundamentar em dados epidemiolgicos e laboratoriais.
Os feldeos selvagens so animais carnvoros de topo de cadeia alimentar que em
ambiente natural percorrem extensos territrios em busca de alimentao e abrigo.
Conseqentemente, esto expostos a uma ampla gama de patgenos presentes no ambiente ou
provenientes de seus contactantes, sejam estes presas, outros competidores, elementos de sua
prpria espcie e, muito recentemente em termos biogeogrficos e evolutivos, tambm a
animais domsticos.
Este estudo objetivou avaliar a exposio de 12 espcies de feldeos selvagens, tanto
de vida livre quanto mantidas em cativeiro, a determinados agentes potencialmente
patognicos para membros da famlia Felidae, atravs do emprego de um repertrio de
tcnicas diagnsticas laboratoriais. O nmero amostral da populao de vida livre (n=22)
analisada neste estudo foi menor que o de cativeiro (n=210) e as espcies de feldeos
avaliadas, entre neotropicais e exticas, diversificadas. As variaes se estendem para as
23
idades dos animais, procedncias, estados clnicos e outras. Porm, a amostragem refletiu de
forma consistente o universo populacional de feldeos selvagens disponvel no Brasil para
acesso cientfico.
Foram utilizadas tcnicas diagnsticas baseadas em deteco indireta e direta de
patgenos. Foram utilizadas tcnicas indiretas sorolgicas, capazes de indicar se as amostras
testadas apresentavam anticorpos especficos contra substncias antignicas constituintes de
determinados patgenos, revelando desta forma se os animais haviam sido, em algum
momento de suas vidas, expostos a tais substncias. Entre as tcnicas de deteco direta,
foram utilizados procedimentos sorolgicos diretos, direcionados para deteco de
substncias antignicas constituintes dos patgenos e por fim, tcnicas moleculares capazes
de detectar fragmentos especficos de cidos nuclicos (DNA ou RNA) dos patgenos nas
amostras.
Um total de 16 agentes infecciosos foram pesquisados, entre os quais os agentes virais
herpesvrus felino 1 (FHV 1), calicivrus felino (FCV), parvovrus felino (FPV), coronavrus
felino (FCoV), vrus da leucemia felina (FeLV), os seguintes lentivrus: vrus da
imunodeficincia felina (FIV) e lentivrus de puma (PLV), o vrus da cinomose canina
(CDV); os agentes bacterianos: Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Anaplasma
phagocytophilum, os hemoplasmas Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma
haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis; assim como os protozorios
piroplasmas: Theileria sp e Cytauxzoon sp.
24
2 OBJETIVOS
2.1 OBJETIVOS GERAIS
Constituram objetivos gerais deste trabalho:
1) avaliar a exposio de feldeos selvagens de vida livre ou mantidos em cativeiro no Brasil,
mediante tcnicas diagnsticas laboratoriais adequadas, a 16 potenciais patgenos:
a) virais: herpesvrus felino 1 (FHV 1), calicivrus felino (FCV), parvovrus felino
(FPV), coronavrus felino (FCoV), vrus da leucemia felina (FeLV), os seguintes
lentivrus: vrus da imunodeficincia felina (FIV) e lentivrus de puma (PLV), o
vrus da cinomose canina (CDV);
b) bacterianos: Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Anaplasma phagocytophilum,
os hemoplasmas Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma
haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis;
c) protozorios piroplasmas: Theileria sp e Cytauxzoon sp;
2) fornecer parmetros para a adoo de protocolos preventivos para o manejo de feldeos
selvagens no Pas.
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
Constituram objetivos especficos deste trabalho:
25
1) investigar se doenas infecciosas causadas pelos patgenos pesquisados podem contribuir
nos quadros de morbidade e/ou mortalidade das populaes de feldeos selvagens no Pas;
2) verificar se patgenos associados a carnvoros domsticos circulam em populaes de
feldeos selvagens;
3) verificar se as populaes de feldeos selvagens no Pas representam risco para transmisso
de zoonoses
4) identificar patgenos que devem ser investigados durante procedimentos/situaes tais
como translocaes, quarentenas, manuteno e monitoramento de feldeos selvagens.
26
2 REVISO DE LITERATURA
Neste captulo, sero apresentadas a famlia Felidae, questes ligadas doenas e
conservao e os agentes patognicos e princpios gerais das tcnicas diagnsticas utilizadas.
2.1 A FAMLIA FELIDAE
A famlia Felidae pertence Ordem Carnivora e seus membros apresentam entre 1,3 a
mais de 300 kg de massa corporal. A taxonomia do grupo tem sido debatida, ilustrando as
inconsistncias filogenticas no resolvidas sobre o aspecto evolucionrio da famlia
(NOWAK, 1999; WERDELIN, 1996). Estudos recentes utilizando anlises morfolgicas e
moleculares esclareceram muitos aspectos dos relacionamentos evolucionrios dos feldeos,
mas ainda no foram incorporados em novos esquemas taxonmicos (OLIVEIRA et al.,
2001). Desta forma, o esquema taxonmico proposto por Wozencraft (1993) foi considerado
por Werdelin (1996) o que melhor refletia a variao entre as espcies, tendo sido adotado
pela Unio Internacional para a Conservao da Natureza (International Union for the
Conservation of Nature IUCN) e tambm adotado no presente trabalho para referir-se s
espcies de feldeos.
As espcies selvagens que compem a famlia Felidae distribuem-se por cinco das
seis regies zoogeogrficas da Terra, apenas no tendo ocupado naturalmente a Regio
Australiana, determinados arquiplagos e Antrtica. As regies zoogeogrficas so divises
da biosfera terrestre baseadas nas reas de distribuio geogrfica e relacionamentos
filogenticos dos animais e so consideradas limites naturais para o estabelecimento de
estudos regionais (DARLINGTON, 1957). A Amrica do Sul, Amrica Central (incluindo
Antilhas) e parte tropical do Mxico compem a Regio Neotropical. A fauna neotropical de
feldeos consiste de 10 espcies: ona-pintada (Panthera onca), suuarana ou puma (Puma
concolor), jaguatirica (Leopardus pardalis), gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus),
gato-maracaj (Leopardus wiedii), jaguarundi ou gato-mourisco (Herpailurus yaguarondi),
gato-do-mato-grande (Oncifelis geoffroyi), gato-palheiro ou gato-dos-pampas (Oncifelis
colocolo), kodkod (Oncifelis guigna) e gato-andino (Oreailurus jacobitus), sendo que apenas
27
estas duas ltimas espcies listadas no ocorrem naturalmente no Brasil. Contudo, apesar de
amplamente distribudas, todas as espcies selvagens de feldeos encontram-se em algum
grau ameaadas (NOWAK, 1999; NOWELL; JACKSON, 1996; OLIVEIRA; CASSARO,
1997) e portanto, considera-se que todas devam ser alvo de medidas conservacionistas. Entre
as 37 espcies de feldeos reconhecidas, apenas para o gato domstico (Felis catus), aspectos
clnicos e padres fisiopatolgicos de doenas infecciosas so relativamente bem
compreendidos. Por este motivo, o gato domstico, que apresenta evidncias de descender de
uma subespcie de gato-selvagem africano e do sudoeste asitico (Felis silvestris lybica) e
que posteriormente se miscigenou com o gato-selvagem europeu (Felis silvestris silvestris)
(NOWAK, 1999) utilizado como parmetro para o estudo das enfermidades que podem
acometem os membros selvagens da famlia.
2.2 DOENAS E CONSERVAO
Entre os principais fatores causais de ameaa aos feldeos de todo o mundo, esto a
perda de hbitat, perseguio direta em forma de caa e reduo ou eliminao de suas presas
naturais. No entanto, com a deteriorao ambiental, a ocorrncia de doenas tem emergido
como um problema central na conservao de carnvoros (FUNK et al., 2001; NOWELL E
JACKSON, 1996). As doenas infecciosas so tambm particularmente relevantes para a
conservao de carnvoros porque muitas espcies ou populaes j esto seriamente
ameaadas pela perda de hbitats e perseguio, e desta forma mesmo aquelas menos severas
podem apresentar efeitos devastadores se ocorrerem em populaes j pequenas ou em
declnio. Os efeitos das doenas podem ser agravados quando interagem com outros fatores
comuns em populaes ameaadas, como m nutrio, estresse e endogamia (MURRAY et
al., 1999). Conclui-se que a ocorrncia de doenas infecciosas em populaes naturais tende a
aumentar medida que os hbitats diminuem e os animais se concentram em parques e
reservas (DOBSON; GRENFELL, 1995).
A maioria das doenas que exercem impacto negativo em populaes ameaadas tm
origem infecciosa (MUNSON, 2000). Os patgenos causadores destas doenas podem
ameaar de extino as populaes de hospedeiros de duas formas: ameaando diretamente a
populao em funo de elevada mortalidade ou reduzindo sua resilincia ao induzir doenas
28
crnicas e persistentes que podem causar declnios atravs de efeitos negativos na
fecundidade e recrutamento (CLEAVELAND et. al, 2003). No primeiro caso, situam-se as
doenas infecciosas causadas por patgenos com perodos infecciosos curtos, que geralmente
se disseminam atravs de contgio direto e que, se no forem letais, tendem a induzir em seus
hospedeiros imunidade de longa durao contra reinfeces; persistem apenas em populaes
grandes e estruturadas de hospedeiros, que oferecem continuamente novos indivduos
susceptveis atravs dos nascimentos para a manuteno do ciclo. No segundo caso, situam-se
as doenas infecciosas causadas por patgenos que induzem doenas de decurso crnico, que
se valem de diversas estratgias indiretas para disseminao e normalmente so causadas por
patgenos mais complexos com grande variabilidade antignica que desta forma tendem a
inibir a imunidade duradoura de seus hospedeiros. Tais patgenos no necessitam
necessariamente de grandes populaes para persistirem, pois podem permanecer viveis no
ambiente por longos perodos e repetidamente reinfectar os hospedeiros (DIAMOND, 1999).
Conseqentemente ao fato de que os patgenos que causam alta mortalidade no
podem ser mantidos em populaes pequenas de hospedeiros, as populaes de feldeos
ameaadas, tipicamente pequenas e isoladas, no so capazes de manter tais patgenos.
Porm, estes podem atingir as espcies ameaadas se so mantidos em populaes mais
comuns e numerosas, como populaes de carnvoros domsticos, que agem como potenciais
reservatrios. O rpido crescimento populacional humano e a crescente mobilizao de
humanos e animais domsticos no apenas ameaam diretamente os hbitats e as espcies
vulnerveis, como tambm favorecem a disseminao e persistncia de doenas infecciosas.
(CLEAVELAND et. al., 2003).
Devido ao mecanismo de transmisso inter-especfica, os patgenos que apresentam
risco maior para as espcies ameaadas so os generalistas, que podem infectar diversas
espcies diferentes, e no aqueles mais especficos. (CLEAVELAND et al, 2003). O contato
com gado (Bos sp), ces (Canis familiaris), gatos e outros animais domsticos abrem
possibilidades de transmisso inter-especfica de agentes infecciosos (DASZAK et al., 2000;
FIORELLO et al., 2004; MENDES-DE-ALMEIDA et al., 2003; MURRAY et al., 1999).
Considera-se, a priori, que todas as espcies da famlia Felidae sejam susceptveis
aos mesmos patgenos (FOWLER, 1986), ainda que muitos aspectos reprodutivos,
hematolgicos e outros padres fisiolgicos ainda no sejam inteiramente conhecidos para
todas as espcies de feldeos. problemtica, portanto, a considerao de que as populaes
mantidas em cativeiro sejam particularmente afetadas de forma indesejada em funo disto,
29
pois so potencialmente expostas a uma grande variedade de patgenos, generalistas e
especficos, uma vez que no ambiente de cativeiro feldeos das mais diversas origens
geogrficas so mantidos prximos, em alta densidade populacional, comumente sob estresse
(CLUBB; MASON, 2003) e em muitos casos em contato ocasional com gatos domsticos.
Em situao de vida livre, a invaso dos hbitats por carnvoros domsticos, como ces e
gatos, favorecem a disseminao e persistncia de patgenos nestas populaes, seja
mediante contato direto, como por predao (JESSUP et al., 1993) ou contaminao
ambiental.
Apesar das implicaes das infeces na conservao de espcies selvagens serem
difcieis de serem acessadas, amplamente aceito que o monitoramento destas infeces seja
uma importante ferramenta de manejo para populaes ameaadas (DASZAK et al., 2000;
MUNSON, 2000; MURRAY et al., 1999). O conhecimento sobre doenas infecciosas em
feldeos neotropicais muito pequeno, e o impacto de qualquer infeco nestas espcies
desconhecido. Entre os feldeos neotropicais, as onas-pintadas, suuaranas e jaguatiricas de
vida livre so melhor representadas em projetos de campo que lidam com carnvoros no
Brasil; mas ainda assim h grande falta de informaes referentes ocorrncia de doenas
nos animais monitorados (BRASIL, 2004). A obteno de informaes sobre a exposio de
feldeos de vida livre a potenciais agentes infecciosos deve auxiliar projetos ecolgicos e
conservacionistas, assim como fornecer informaes para programas de manejo in situ e ex
situ. Na dcada de 1990, o Grupo de Trabalho Especial idealizou o Plano de Manejo
Integrado para Pequenos Felinos Brasileiros (BRASIL, 1995), quando se iniciaram estudos
sistemticos com felinos neotropicais mantidos em cativeiro. Foi verificado que muitas
enfermidades relacionadas com feldeos neotropicais cativos em zos e criadouros no Brasil
eram associadas com manejo, como condies sanitrias inadequadas e deficincias
nutricionais (ADANIA et al., 1998; OLIVEIRA et al. 2001); entretanto, o estudo de doenas
infecciosas nestas populaes ainda incipiente.
2.3 AGENTES VIRAIS
Os agentes virais tm sido implicados como a causa de diversos declnios em
populaes de carnvoros. Vrus comuns em carnvoros domsticos foram relatados
30
infectando feldeos selvagens de vida livre e mantidos em cativeiro na frica, Europa,
Amrica do Norte e Japo (ARTOIS e REMOND, 1994; DANIELS et al., 1999; FROMONT
et al., 2000; HOFMANN-LEHMANN et al., 1996; LEUTENEGGER et al., 1999a;
MOCHIZUKI et al., 1990; NISHIMURA et al., 1999; OLMSTED et al., 1992; OSTROWSKI
et al., 2003; PAUL-MURPHY et al., 1994; ROELKE-PARKER et al., 1996). Dados
referentes a infeces virais em feldeos neotropicais brasileiros so esparsos e se concentram
principalmente em retrovrus felinos. Os vrus mais importantes que infectam gatos
domsticos e feldeos selvagens so: herpesvirus felino 1 (FHV 1), calicivirus felino (FCV),
parvovrus felino (FPV), coronavirus felino (FCoV), virus da leucemia felina (FeLV) e virus
da imunodeficincia felina (FIV) (HOFMANN-LEHMANN et al., 1996). Feldeos selvagens
tambm podem ser susceptveis ao vrus da cinomose canina (CDV) (ROELKE et al., 1996).
2.3.1 Herpesvrus felino 1 (FHV 1) e calicivrus felino (FCV)
Os principais vrus implicados no desenvolvimento de doenas respiratrias em
feldeos so o FHV e o FCV. Apesar de pertencerem a diferentes famlias (FHV:
Herpesviridae e genoma de DNA; FCV: Caliciviridae, genoma de RNA), determinam, em
seus hospedeiros, sinais clnicos semelhantes, que incluem pirexia, depresso, espirros,
hipersalivao, descargas oculares e nasais, conjuntivite, dispnia, e tosse, traquete,
anorexia, letargia. Ocasioalmente, pode ocorrer pneumonia viral primria ou doena
generalizada, particularmente em animais jovens e debilitados. Manifestaes mais raras
incluem doena ocular, como ceratite intersticial e ulcerativa. lceras cutneas j foram
descritas em gatos domsticos e em guepardos. Estudos experimentais sugeriram que os
abortos, quando ocorrem, so resultado da natureza sistmica severa da infeco, e no de um
efeito direto do vrus. (GASKELL; WILLOUGHBY, 1999). Salivao excessiva e lceras na
crnea sugerem infeco por FHV 1, enquanto lceras na lngua, plato e faringe so mais
comumente encontradas em infeces por FCV.
O FHV 1 infecta apenas membros da famlia Felidae. O principal hospedeiro o gato
domstico, mas foram obtidos isolados de feldeos selvagens, como os guepardos (Acinonyx
jubatus)e h crescente evidncia sorolgica de infeco disseminada em feldeos de vida livre
em diversas partes do mundo. (GASKELL; WILLOUGHBY, 1999) Estudos sorolgicos tm
31
indicado que o FHV se encontra disseminado em populaes de vida livre de lees, pumas e
guepardos (PAUL-MURPHY et al., 1994). Igualmente, o vrus acomete populaes de
feldeos mantidas em cativeiro. Cerca de metade dos gatos que apresentam doena
respiratria tem infeco pelo FHV 1 e outra metade apresenta infeco pelo calicivrus
felino. Investigaes tm demonstrado que a presena de anticorpos para FHV 1 em colnias
de gatos cerca de 70%, enquanto que para gatos domiciliados de menos de 50%.
(GASKELL; WILLOUGHBY, 1999)
O FHV 1 lbil no ambiente, so bastante sensveis desinfeco e no so
conhecidos reservatrios que no os felinos. A disseminao horizontal, atravs de contato
direto, fmites ou aerossis a partir de animais com infeco aguda ou mesmo de carreadores
assintomticos. (GASKELL; WILLOUGHBY, 1999; MAGGS, 2005) Todos os herpesvrus
so capazes de permanecer latentes em seus hospedeiros naturais; seus genomas latentes
retm a capacidade de replicao e de causar doena quando reativados. A latncia difere da
infeco crnica, uma vez que prognie no est presente. A capacidade de reativao
diferencia a latncia da infeco abortiva. Em muitos animais, pode ocorrer recrudescncia
dos sinais clnicos. O FHV 1 se replica rapidamente nas clulas epiteliais das membranas
mucosas, especialmente na conjuntiva, e ascende por axnios dos neurnios sensoriais para
estabelecer latncia nos gnglios trigmeos. (MAGGS, 2005), embora DNA viral
eventualmente seja detectado em outros stios (neurolgicos, turbinados nasais, crnea,
conjuntiva, cavidade oral, glndulas salivares e lacrimais, tonsilas e linfonodos sub-
mandibulares). O estado de carreador caracterizado pela latncia, com episdios
intermitentes de eliminao viral, situaes em que o animal representa uma fonte de
infeco. A reativao pode ocorrer em qualquer momento, mas mais provvel que ocorra
durante perodos de estresse, podendo ocorrer transmisso para novos hospedeiros
susceptveis, sejam eles a populao residente no novo ambiente ou a nova gerao de
filhotes. (GASKELL; WILLOUGHBY, 1999) A latncia permite que os herpesvrus sejam
perpetuados at mesmo em pequenos grupos isolados de hospedeiros. Os testes diagnsticos
laboratoriais baseiam-se na demonstrao de uma resposta imunolgica ao organismo ou
deteco direta do agente. (MAGGS, 2005) Antigenicamente, todos os isolados so muito
similares e constituem um nico sorotipo (GASKELL; WILLOUGHBY, 1999). O
entendimento da patognese por FHV 1 estabelece um paradoxo com relao ao diagnstico.
Gatos com infeco primria eliminam vrus em quantidades suficientes para a deteco
viral. Entretanto, os sinais clnicos nesta fase so caractersticos e auto-limitantes, de forma
32
que neste caso o diagnstico definitivo menos impotante. Em contraste, nas sndromes
crnicas associadas ao FHV 1, a presena de vrus elusiva, dificultando o diagnstico.
Finalmente, gatos absolutamente normais podem eliminar grandes quantidades de vrus a
qualquer momento. Isto tudo faz com que o diagnstico individual de FHV 1 seja um desafio
no manejo das doenas crnicas relacionadas ao FHV 1. (MAGGS, 2005)
O FCV ocorre mundialmente e todos os feldeos so susceptveis. Supe-se que a
infeco por FCV em feldeos selvagens seja epidemiologicamente similar que ocorre em
gatos domsticos. A transmisso natural ocorre via aerossol e fmites. Os vrus so liberados
pelos gatos infectados em grandes quantidades; gatos convalescentes continuam a liberar
vrus por muitos meses. O estresse pode precipitar a recrudescncia da doena e a liberao
continuada. Linhagens diferentes de FCV variam em virulncia; algumas linhagens esto
associadas principalmente com infeces brandas ou doena do trato respiratrio anterior;
linhagens altamente virulentas regularmente produzem pneumonia, especialmente em
filhotes. (HURLEY; SYKES, 2003)
2.3.2 Parvovrus felino (FPV)
Todos os feldeos so susceptveis infeco pelo FPV (BARKER; PARRISH, 2001;
STEINEL et al., 2001; WACK, 2003). Levantamentos sorolgicos tm indicado a presena
de FPV em pumas e bobcats (Lynx rufus) de vida livre nos Estados Unidos da Amrica
(EUA), e em lees na frica do Sul. (BARKER; PARRISH, 2001). Entretanto, a maioria dos
relatos de doena clnica associada a FPV em feldeos selvagens refere-se a animais mantidos
em cativeiro.
Freqentemente, ocorre uma gastroenterite aguda com diarria e linfopenia. Casos de
FPV ocorrem eventualmente em instituies que mantm feldeos selvagens em cativeiro no
Brasil, mas geralmente realizado apenas o diagnstico clnico presuntivo. A transmisso
ocorre principalmente pela rota fecal-oral, atravs da ingesto de vrus presentes no ambiente
e em fmites. A dose infectante baixa e as quantidades de vrus nas fezes de animais
eliminando os vrus so muito grandes. Vrus so eliminados atravs de todas as excrees de
animais infectados, permitindo tambm a transmisso direta. A transmisso vertical tambm
pode ocorrer (BARKER; PARRISH, 2001; GREENE, 1998). Para feldeos selvagens na
33
natureza, a transmisso do FPV atravs de stios contaminados seria a principal forma de
disseminao dos vrus, devido aos hbitos solitrios e densidades populacionais
caracteristicamente baixas. O FPV tambm pode acometer outros carnvoros (BARKER;
PARRISH, 2001).
O FPV apresenta tropismo por clulas em diviso (ASTELL, 1999; PARRISH, 1999).
Sendo assim, as doenas causadas pelos parvovrus envolvem citotoxicidade em tecidos com
alta taxa mittica. Aps infeco oronasal, a replicao viral ocorre em clulas da orofaringe
e tonsilas, linfonodos, timo, bao e Placas de Peyer em todo o intestino. Ocorre linfocitlise e
depleo celular, com regenerao destes tecidos em animais que sobrevivem. Grande
quantidade de vrus eliminada pelas fezes. (BARKER; PARRISH, 2001; PARRISH, 1999;
STEINEL et al., 2001) Os sinais clnicos envolvem pirexia, anorexia, depresso, letargia,
diarria, vmitos, desidratao, desequilbrio eletroltico e hipoproteinemia. Tipicamente,
ocorre linfopenia ou panleucopenia. (BARKER; PARRISH, 2001) Porm, as infeces por
parvovrus em carnvoros freqentemente so assintomticas ou os sinais so brandos. Pode
ocorrer morte por desidratao ou endotoxemia ou na ausncia de qualquer sinal. (ASTELL,
1999; PARRISH, 1999) Em gatos domsticos, existe uma forma hiperaguda da doena
seguida de morte em menos de 12 horas, mimetizando intoxicao (HAGIWARA; ELIAS,
2003). A eliminao dos vrus pelas fezes suprimida quando se desenvolve uma resposta
imune; nestes casos geralmente no persistem seqelas, mas extensivo dano intestinal pode
determinar diarria crnica (PARRISH, 1999).
Uma pequena proporo das infeces por parvovrus em gatos refere-se parvovrus
caninos (CPV-2a e CPV-2b); seqncias genmicas destes parvovrus caninos j foram
detectadas em guepardos, em bobcats e em um tigre-siberiano (P.tigris altaica) apresentando
sinais clnicos (BARKER; PARRISH, 2001; STEINEL et al., 2001).
2.3.3 Coronavrus felino (FCoV)
O FCoV, que pertence famlia Coronaviridae, um importante patgeno de feldeos
domsticos e selvagens. O FCoV ubiqitrio e endmico onde h maior densidade
populacional de susceptveis. (BENETKA et al., 2004) No Brasil, suuaranas, ona-pintadas,
34
gatos-maracaj e um gato-palheiro mantidos em cativeiro, assim como uma jaguatirica de
vida livre apresentaram-se soropositivas para FCoV (SCHMITT et al., 2003).
Os efeitos da infeco podem ser inaparentes ou pode haver um perodo transitrio de
diarria ou acometimento respiratrio, podendo ocorrer tambm episdios severos de vmitos
ou diarria, levando perda de peso ou ainda culminar com a peritonite infecciosa felina
(PIF), responsvel por alta taxa de mortalidade (EVERMANN; BENFIELD, 2001). A PIF
uma doena imunomediada e fatal que acomete feldeos ocasionada pelo FCoV. So
conhecidos duas variantes biolgicas de FCoVs: o vrus da peritonite infecciosa felina (FIPV)
e o coronavrus entrico felino (FECV). Estudos sugerem que o FIPV se originou de uma
mutao do FECV (BENETKA et al., 2004). O FCoV apresenta tambm dois sorotipos (I e
II) baseados em caractersticas de replicao em cultura de clulas e antigenicidade; o
sorotipo II associa-se mais freqentemente com sinais clnicos e desenvolvimento de PIF
(KUMMROW et al., 2005)
H fortes evidncias da existncia carreadores assintomticos que podem excretar o
vrus por meses ou anos. Tais animais representam reservatrios para o vrus, constituindo
um problema na preveno de FIP em ambientes de alta densidade de gatos. (BENETKA et
al., 2004) Entre 5 a 10% dos gatos soropositivos desenvolvem FIP, mas h maior incidncia
em guepardos e determinadas raas e linhagens de gatos domsticos, sugerindo uma
predisposio gentica para a doena. (BENETKA et al., 2004)
2.3.4 Vrus da leucemia felina (FeLV), vrus da imunodeficincia felina (FIV) e
lentivrus de puma (PLV)
O FeLV quanto e os demais lentivrus felinos, como o FIV e PLV, pertencem
famlia Retroviridae; associam-se com uma variedade de sndromes, envolvendo tumores
malignos de longa latncia, doenas de emagrecimento progressivo, desordens neurolgicas e
imunodeficincias, e determinam altos coeficientes de morbidade e mortalidade em gatos
domsticos no mundo todo (WORLEY, 2001).
Na maioria dos estudos sobre FIV em feldeos selvagens, no foi relatada
patogenicidade aparente atribuda ao vrus. No entanto, estudos recentes envolvendo lees
mantidos em cativeiro concluem que, de maneira similar aos gatos domsticos, esses animais
35
atravessam um perodo assintomtico, sucedendo-se ento disfunes linfocitrias,
imunolgicas e neurolgicas (KENNEDY-STOSKOPF, 1999).
Acredita-se que exclusivamente para o gato-selvagem-europeu (F. silvestris
silvestris), em que o FeLV consistentemente encontrado em populaes de vida livre, o
vrus no apresenta alta patogenicidade. A alta prevalncia gatos-selvagens-europeus
soropositivos sugere que o vrus mantido nestas populaes. A possibilidade de que a
infeco por FeLV seja constantemente adquirida atravs de contato com gato domstico
pouco provvel, uma vez que a prevalncia em gatos-selvagens-europeus constantemente
maior que aquelas para gatos domsticos nas respectivas regies estudadas (HOFMANN-
LEHMANN, comunicao pessoal; DANIELS et al., 1999; FROMONT et. al., 2000;
LEUTENEGGER et. al. 1999a). Entretanto, o FeLV foi tambm associado com doena
severa em um espcime de puma (JESSUP et al., 1993) e de guepardo (MARKER et al.,
2003). Apesar de ser raramente encontrado infectando outros feldeos selvagens que no o
gato-selvagem-europeu, se estabelecido nestas populaes, pode ter efeitos devastadores
(ARTOIS; REMOND, 1994; WORLEY, 2001).
Os retrovrus apresentam a capacidade de de se integrar no genoma das clulas
hospedeiras, no ser detectados pela vigilncia imunolgica celular e humoral e desta forma
estabelecendo infeces persistentes. Incorporados nas clulas hospedeiras, em forma de
DNA, so chamados provrus. As partculas virais infecciosas so chamadas exgenas; so
transmitidos vertical e horizontalmente, direta ou indiretamente, mas no atravs de clulas
germinativas. So muito lbeis no ambiente, sendo mantidos na natureza porque hospedeiros
infectados podem viver e liberar vrus por anos. A transmisso do FeLV ocorre
principalmente atravs da ingesto de partculas virais, na saliva e secrees nasais. A
replicao viral inicial ocorre em linfcitos e macrfagos na orofaringe e linfonodos
regionais. Nesta fase de viremia, uma resposta imune eficiente pode eliminar a infeco. Caso
contrrio, o vrus se dissemina para a medula ssea e infecta clulas progenitoras mielides e
eritrides, macrfagos e linfcitos circulantes. A inabilidade do sistema imunitrio em inibir
a replicao inicial do FeLV leva ao estabelecimento de uma viremia persistente,
caracterizada pela presena tanto de vrus livres quanto associados a clulas no sangue,
quando o animal torna-se fonte de infeco. Tal estado geralmente progride para alguma
doena relacionada a FeLV. Neste caso, a replicao contnua em tecidos hemolinfticos leva
a um estado progressivo de imunossupresso. Outros animais, porm, contm a replicao
viral atravs de resposta imune adequada. Alguns gatos tornam-se resistentes e conseguem
36
extinguir a infeco. No entanto, a maior parte dos animais desenvolve infeco
autolimitante, albergando provrus latentes integrados em clulas da medula ssea, podendo
haver resposta imune parcial. O risco de reativao espontnea e de desenvolvimento de
doenas relacionadas ao FeLV, nos animais com este tipo de infeco, pequeno. Nesse
caso, no h replicao e excreo de vrus, a no ser que o animal experimente um estado de
imunossupresso. (FILONI; CATO-DIAS, 2005a; 2005b; GOMES-KELLER et al., 2006)
A infeco por lentivrus relacionados ao FIV, em lees e pumas, na frica, Amrica
do Norte e Europa, foi demonstrada por Olmsted et al. (1992) e Spencer e Morkel (1993),
entre outros autores. O gene pol do vrus da imunodeficincia felina (FIV) obtido a partir de
uma suuarana mantida em um zoolgico brasileiro foi seqenciado (CARPENTER et al.,
1996). Antes disso, Brown et al. (1993) havia detectado anticorpos para FIV em um espcime
de suuarana brasileira de vida livre. Adicionalmente, Leal e Ravazzolo (1998) detectaram
provrus de FIV em ona-pintadas, suuaranas, jaguarundis, jaguatiricas, gatos-maracaj,
gatos-palheiro e gatos-do-mato-pequenos no Brasil. Em um estudo sorolgico conduzido em
populaes de pequenos felinos neotropicais mantidas em cativeiro no Estado de So Paulo,
no foram encontradas evidncias de exposio aos retrovrus FeLV e FIV (FILONI, 2001;
FILONI et al., 2003a). Desde ento, foram encontrados trs espcimes de feldeos
neotropicais virmicos para FeLV (um gato-maracaj e dois gatos-palheiros) em um
levantamento conduzido em zoolgicos norte-americanos (KENNEDY-STOSKOPF, 1999).
Foram encontrados, no Brasil, ona-pintadas, suuaranas, gatos-maracaj e um gato-palheiro
mantidos em cativeiro, assim como uma jaguatirica de vida livre, soropositivos para FeLV
(SCHMITT et al., 2003). Mais recentemente, Carvalho et al. (2004) encontraram lees
soropositivos para lentivrus felinos na populao de feldeos da Fundao Parque Zoolgico
de So Paulo (FPZSP) (APNDICE D).
2.3.5 Vrus da cinomose canina (CDV)
Desde que o CDV foi isolado a partir de ces domsticos (Canis familiaris), em 1905,
verificou-se que em pelo menos oito famlias de carnvoros terrestres (Canidae, Felidae,
Hyaenidae, Mustelidae, Procyonidae, Ursidae, Ailuridae e Viverridae) foram notificadas
37
espcies susceptveis infeco pelo CDV (DEEM et al., 2000). O virus da cinomose canina
(CDV) tem se mostrado um problema mundial afetando uma ampla gama de carnvoros. Uma
ona-pintada foi infectada por CDV durante uma epizootia ocorrida em feldeos mantidos em
cativeiro na Amrica do Norte (APPEL et al., 1994, CLEAVELAND et al., 2003; FUNK et
al., 2001).
Os feldeos em geral apresentam um comportamento de menor risco para a
transmisso-interespecfica de patgenos. Entretanto, algumas espcies, como as suuaranas,
podem ser encontradas tanto em reas preservadas quanto em reas periurbanas e rurais,
podendo entrar em contato e mesmo predar animais domsticos, potenciais fontes de
infeco. A susceptibilidade de gatos domsticos ao CDV foi demonstrada mediante infeco
experimental, mas os gatos infectados apresentam apenas um discreto aumento de
temperatura corporal e no eliminam vrus (APPEL; SHEFFY; PERCY, 1974). Por isso, por
muito tempo pensou-se que que o CDV no poderia provocar doena em feldeos. Embora
atualmente haja indicativos de que a infeco por CDV possa contribuir para a ocorrncia de
doenas respiratrias e hepticas em gatos domsticos ( IKEDA et al., 2001), foi somente
quando uma uma epizootia por CDV acometeu diversas espcies de feldeos em zoolgicos
norte-americanos, entre 1991 e 1992, que a importncia deste patgeno foi reconhecida para
a famlia Felidae. Naquela ocasio, uma alta mortalidade se concentrou em grandes feldeos,
como tigres (Panthera tigris), lees (Panthera leo) e leopardos (Panthera pardus), alm de
uma ona-pintada, enquanto outras espcies, como suuaranas, bobcats , servais (Leptailurus
serval) e gatos-maracaj apenas soroconverteram (KENNEDY-STOSKOPF, 1999). Em
seguida a esta epizootia, houve outra epizootia com efeitos devastadores na populao de
lees de vida livre no ecossistema do Serengeti, frica, que eliminou cerca de 30% desta
populao em 1994 (ROELKE-PARKER et al., 1996). Os grandes feldeos do gnero
Panthera evidenciam-se como mais susceptveis ao curso letal da infeco pelo CDV
(APPEL et al., 1994; KENNEDY-STOSKOPF, 1999). Nestes casos, foi demonstrado que os
morbilivrus responsveis por estas ocorrncias eram relacionados com os que circulavam em
outros carnvoros selvagens e ces domsticos locais (BARRET, 1999; HAAS et al., 1996).
No ambiente de cativeiro, pode haver contato com outras fontes de infeco, como carnvoros
domsticos; j foi reportada infeco por CDV em filhotes de tigre que tiveram contato com
ces (APPEL et al., 1994; KENNEDY-STOSKOPF, 1999).
Os feldeos acometidos podem apresentar sinais neurolgicos, respiratrios e
gastrointestinais, embora em cerca de 60% dos casos apenas os sinais neurolgicos se
38
manifestam, incluindo convulses, tremores, mioclonia, desorientao, fraqueza, ataxia,
paraparesia, hiperreflexia e coma. A durao dos sinais clnicos varia de um dia a vrias
semanas na maioria dos feldeos, mas j foi observado um caso de desenvolvimento de sinais
neurolgicos progressivos ao longo de mais de um ano. Alguns animais podem apresentar
anorexia, letargia, descarga nasal e ocular mucopurulenta, diarria sanguinolenta ou no.
Lees de vida livre apresentam anemia, linfadenopatia, condies precrias corporal e do
pelame e presena de mltiplos ferimentos. Feldeos acometidos podem apresentar alteraes
comportamentais, podendo se mostrar deprimidos ou com aumento de agressividade.
(MUNSON, 2001; ROELKE-PARKER et al., 1996) Os feldeos do gnero Panthera
desenvolvem sinais mais severos e apresentem um prognstico pior. Apenas sinais
gastrointestinais e respiratrios brandos foram observados em pumas, enquanto outras
espcies de felinos menores, como bobcats, servais e gatos-maracajs apresentaram-se
soropositivos e saudveis. (APPEL et al., 1994)
2.4 AGENTES BACTERIANOS
2.4.1 Bartonella henselae
As bactrias do gnero Bartonella causam infeces intraeritrocitrias crnicas em
uma ampla variedade de animais, incluindo humanos, em que a B. henselae o agente
etiolgico da doena-da-arranhadura-do-gato (cat scratch disease) (CHOMEL et al., 2004b).
O patgeno B. henselae principalmente transmitido atravs de pulgas (Ctenocephalides
felis) em gatos domsticos (CHOMEL et. al 1996), que se infectam ao se alimentar de
animais bactermicos, e potencialmente transmissvel entre gatos domsticos e feldeos
selvagens (CHOMEL et al., 2004b; JACOMO et al., 2002). Alm de pulgas, tem sido
sugerido que carrapatos do gnero Ixodes sejam potenciais vetores para Bartonella sp
(CHANG et al., 2001; CHOMEL et al., 2004a; SCHOULS et al., 1999). Em gatos
domsticos, a bacteremia pode persistir por mais de um ano e em colnias de gatos em que
pulgas so endmicas, mais da metade dos animais pode estar bactermica. Populaes de
39
gatos errantes apresentam soroprevalncias maiores que de gatos domiciliados
(BREITSCHWERDT; KORDICK, 2000; JACOMO et al., 2002).
Embora o patgeno possa permanecer como parte da microbiota intravascular de
gatos saudveis, evidncias recentes sugerem uma associao deste patgeno com
manifestaes insidiosas de doenas renais crnicas (GLAUS et al., 1997). Outras
anormalidades relatadas em gatos infectados com B. henselae incluem febre, discreta anemia
transitria, eosinofilia, linfadenomegalia, colangite, difuno neurolgica, leses cardacas e
falhas na reproduo (BREITSCHWERDT; KORDICK, 2000; ROTSTEIN et al., 2000).
Estudos tm demonstrado a exposio de uma variedade de feldeos de vida livre e
mantidos em cativeiro B. henselae, incluindo feldeos neotropicais mantidos em zoolgicos
da Amrica do Norte (KELLY et al., 1998; MOLIA et. al, 2004; YAMAMOTO et al., 1998;
PRETORIUS et al., 2004; ROTSTEIN et al., 2000). A soroprevalncia nestas populaes de
feldeos selvagens so comparveis s encontradas para gatos domsticos
(BREITSCHWERDT; KORDICK, 2000; ROTSTEIN et al., 2000). Um levantamento
extensivo conduzido nas Amricas detectou suuaranas soropositivas atravs da maioria das
reas de ocorrncia natural da espcie. (CHOMEL et al., 2004b); a soroprevalncia geral
relatada em suuaranas da Amrica do Sul foi de 22.4%. O estudo incluiu amostras de 11
suuaranas brasileiras de trs estados (So Paulo, Tocantins e Gois); porm no foram
mencionados resultados individuais, reas exatas de colheita ou condies de vida dos
animais.
2.4.2 Ehrlichia canis e Anaplasma phagocytophilum
Recentemente foi demonstrado que gatos domsticos so susceptveis infeco e
doena causada por Ehrlichia canis e Anaplasma phagocytophilum. A erliquiose em gatos
domsticos tem sido reconhecida cada vez com maior freqncia no mundo todo , inclusive
no Brasil (ALMOSNY; MASSARD, 1999; DAGNONE et al., 2003; TARELLO, 2005).
Classicamente, o diagnstico da infeco tem sido realizado a partir da demonstrao
de incluses em clulas. Entretanto, o diagnstico realizado com mtodos moleculares tem se
mostrado eficiente e demonstrou que h pelo menos duas formas de erliquiose felina: uma
causada pela E. canis, com incluses em clulas mononucleares (BREITSCHWERDT et al,
2002) e outra pelo A. phagocytophilum, este ltimo associando-se com incluses em
neutrfilos e possivelmente apresentando implicaes zoonticas (BJOERSDORFF et al.,
40
1999). Os sinais clnicos so semelhantes para os dois agentes, incluindo anorexia,
hiperestesia, letargia, perda de peso, dores articulares, dispnia, linfadenomegalia, anemia e
hipergamaglobulinemia (TARELLO, 2005). As pulgas (C. felis) so consideradas potenciais
vetores na transmisso destes agentes em gatos (LAPPIN et al, 2006), assim como carrapatos.
Pouco conhecido sobre erliquioses de forma geral em animais selvagens,
especialmente feldeos. Se em linces-eurasianos (Lynx lynx), um levantamento sorolgico
realizado para populaes de vida livre no norte da Europa demonstrou uma prevalncia de
4% (RYSER-DEGIORGIS et al., 2005), razovel supor que o clima quente e mido em
pelo menos parte do ano no Brasil favorea a transmisso destes agentes pelos vetores e a
doena esteja presente com alta morbidade em nosso meio sem ser reconhecida. Entretanto,
de acordo com nosso conhecimento, no h relatos prvios de infeces por E. canis e A.
phagocytophilum em feldeos neotropicais, seja em animais cativos ou de vida livre.
2.4.3 Hemoplasmas: Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma
haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis
O agente etiolgico da anemia infecciosa felina, antigo Haemobartonella felis, foi
recentemente reclassificado dentro de um novo grupo de espcies hemotrpicas de
micoplasmas, tambm chamados de hemoplasmas. O seqenciamento dos genes 16S rRNA
de diferentes agentes isolados de felinos resultou no reconhecimento de trs espcies dentro
deste grupo: Mycoplasma haemofelis (antigo Haemobartonella felis), Candidatus
Mycoplasma haemominutum e, mais recentemente, Candidatus Mycoplasma turicensis.
Estas espcies apresentam diferenas de patogenicidade em gatos domsticos. O M.
haemofelis e o Candidatus Mycoplasma turicensis so associados com severa anemia
hemoltica intravascular, enquanto o Candidatus Mycoplasma haemominutum usualmente
no induz anemia, mas estabelece relao com insuficincia renal. Os mecanismos pelos
quais os hemoplasmas felinos, especialmente o M. haemofelis, induzem hemlise no so
bem compreendidos; tanto podem ser resultantes de dano eritroctico direto como pela
remoo dos agentes de eritrcitos infectados que so seqestrados pelo bao. O curso da
infeco pode ser letal em gatos domsticos, e outros sinais observados incluem anorexia,
depresso, letargia, fraqueza, perda de peso, febre intermitente, palidez de mucosas, ictercia
41
e esplenomegalia. Co-infeces com os agentes virais imunossupressivos FIV ou FeLV
podem favorecer a hemlise observada em gatos infectados. (HAEFNER et al., 2003;
KEWISH et al., 2004; MESSICK, 2003; WILLI et al., 2005; 2006). Evidncias recentes
demonstram a presena das trs espcies de hemoplasmas em diversas espcies de feldeos
selvagens nos continentes europeu, africano e americano, sugerindo que todas as espcies de
feldeos sejam susceptveis. (HAEFNER et al., 2003; WENGI et al., em elaborao).
Pulgas (C. felis) e carrapatos so tidos como potenciais vetores destes
microorganismos (LAPPIN et al., 2006). Foi demonstrado que infeces verticais intra-
uterinas, durante o parto ou durante a lactao podem ocorrer em gatos domsticos, assim
como transmisses horizontais iatrognicas, mediante transfuses sangneas e agulhas
contaminadas (HAEFNER et al., 2003). Os animais infectados que so submetidos a
antibioticoterapia ou que desenvolvem evidente resposta imune, provavelmente permanecem
como portadores crnicos (MESSICK, 2003). O diagnstico etiolgico tradicionalmente
baseia-se na identificao citolgica de esfregaos sangneos corados, juntamente com a
anlise de hemogramas completos e sinais clnicos compatveis. Entretanto, o
desenvolvimento dos mtodos moleculares facilitaram a identificao e quantificao destes
agentes, de maneira sensvel e especfica, e a PCR considerada atualmente o mtodo de
escolha para o diagnstico destas infeces (WILLI et al., 2005; 2006).
2.5 PROTOZORIOS PIROPLASMAS: Theileria sp E Cytauxzoon sp
As tcnicas moleculares baseadas em PCR tm ampliado o diagnstico de diferentes
piroplasmas em novos hospedeiros, sugerindo que sua classificao taxonmica venha a ser
revista. De acordo com a classificao adotada por Ketz-Riley et al. (2003), os gneros
Theileria e Cytauxzoon so protozorios pertencentes famlia Theileridae, ordem
Piroplasmida, filo Apicomplexa. As infeces por Theileria sp e Cytauxzoon sp em seus
hospedeiros mamferos iniciam-se atravs da transmisso por carrapatos infectados,
causando parasitemias que podem ser letais. O contato direto entre feldeos infectados na
ausncia de carrapatos no constitui risco de transmisso. Aps a transmisso, os
protozorios reproduzem-se assexuadamente (esquizogonia) em uma fase eritroctica e uma
no eritroctica. Os esquizontes de Theileria sp se reproduzem em clulas linfocticas,
42
formam pequenas agregaes ou so nicos nestas clulas e induzem os linfcitos a se
transformarem em linfoblastos, provocando contnua proliferao. Os esquizontes de
Cytauxzoon sp, diferentemente, reproduzem-se em clulas fagocticas mononucleares e
formam agregaes maiores. Os esquizontes desenvolvem-se como merozotas, que so
endocitados por eritrcitos e, ao adquirir um aspecto pleomrfico, passam a ser referidos
como piroplasmas (BONDY et al., 2005). As manifestaes clnicas das infeces por
piroplasmas so inespecficas e similares aos de hemoplasmas, incluindo anorexia, letargia,
ictercia, palidez de mucosas, dispnia, taquipnia, taquicardia, febre, esplenomegalia,
hepatomegalia, e nos estgios finais da doena, hipotermia, vocalizao, convulses e coma.
Em funo da similaridade dos sinais clnicos, mtodos diagnsticos moleculares so
recomendados para o diagnstico e diferenciao destes agentes (BONDY et al., 2005;
CRIADO-FORNELI, et al., 2003)
A espcie Cytauxzoon felis infecta exclusivamente feldeos, tendo sido diagnosticada
desde os anos 1970 em gatos domsticos e diversas espcies de feldeos selvagens mantidos
em cativeiro, como bobcats, guepardos, pumas e tigres (GLENN et al., 1983; KETZ-RILEY
et al., 2003). Os bobcats da subespcie L. rufus rufus geralmente desenvolvem um curso
clnico discreto quando infectados, e so tidos como reservatrios do agente na Amrica do
Norte (BONDY et al., 2005). Mais recentemente, tambm foram diagnsticados
morfologicamente em feldeos selvagens exticos e neotropicais no Brasil, como lees,
onas-pintadas e gatos-do-mato-pequenos (SOARES, 2001). Um piroplasma relacionado mas
no identificado como C. felis foi diagnosticado atravs de mtodos moleculares em gatos-
de-Pallas (Otocolobus manul) capturados em vida-livre na Monglia em 2000 (KETZ-
RILEY et al., 2003), sugerindo que devam existir outras espcies de piroplasmas
relacionadas.
2.6 AS TCNICAS LABORATORIAIS
As tcnicas diagnsticas laboratoriais podem ser divididas em tcnicas indiretas e
diretas. Enquanto as primeiras direcionam-se deteco de anticorpos especficos, as
segundas so voltadas para a deteco direta dos patgenos. No presente trabalho foram
utilizadas algumas tcnicas indiretas e diretas. Entre as tcnicas indiretas, foram utilizados
43
testes sorolgicos indiretos como o enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) indireto,
Western blot e imunofluorescncia indireta (IFA). Entre os testes de deteco direta, foram
utilizados ELISA diretos e testes de reao de polimerizao em cadeia (PCR) ou reaes de
polimerizao em cadeia submetidas ao da transcriptase reversa (RT-PCR) em tempo real
TaqMan.
Tambm foram utilizados testes sorolgicos imunoenzimticos comerciais,
representados pelo o Snap Combo FeLV Antigen/FIV Antibody Test Kit (IDEXX
Laboratories, Inc., Westbrook, Maine 04092, USA), que em um nico dispositivo combinam
dois testes diferentes: um direto para o antgeno viral p27 do FeLV e um indireto para
anticorpos contra lentivrus felinos.
Os testes de deteco direta TaqMan permitem quantificao absoluta, so
altamentes sensveis, confiveis, rpidos, fceis de manejar e permitem o processamento de
uma grande amostragem com baixo risco de contaminao (GUT et al., 1999). So
adequados para o processamento de amostras de animais com suspeita clnica de infeco por
patgenos especficos, so teis para confirmao de resultados de outros testes de triagem,
so excelentes opes para animais em quarentena ou aguardando o transporte e prestam-se
ainda para levantamentos epidemiolgicos.
44
3 MATERIAIS E MTODOS
3.1 ANIMAIS E OBTENO DAS AMOSTRAS
Foram utilizadas amostras de material biolgico de 232 feldeos selvagens, sendo 22
de vida livre e 210 mantidos em cativeiro. As espcies e nmero amostral utilizado podem ser
verificados na tabela 1.
As amostras dos 22 animais de vida livre foram fornecidas pelo Banco de Amostras
Biolgicas do Centro Nacional de Pesquisas para Conservao de Predadores Naturais
(CENAP), Centro Especializado do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos
Naturais Renovveis (IBAMA), sendo provenientes de quatro biomas diferentes, e colhidas
em 13 localidades situadas nas regies Norte, Sul, Sudeste e Centro-Oeste do Brasil, entre
1998 e 2004 (Fig. 1, APNDICE A). As amostras dos animais de cativeiro foram fornecidas
pela FPZSP e pela organizao no-governamental (ONG) Associao Mata Ciliar (AMC).
Entre 2002 e 2004, foram colhidas amostras de 125 feldeos mantidos na FPZSP; tambm
foram includas amostras de um animal necropsiado em 2001 (animal CAD 19696,
APNDICE B). Em 2004, a AMC cedeu amostras de 62 feldeos, as quais haviam sido
obtidas entre 1996 e 2002, na vigncia do Programa de Identificao e Imunizao do Plano
de Manejo para Felinos Selvagens Brasileiros. Estas ltimas foram provenientes de 22
zoolgicos brasileiros e cinco centros de conservao (APNDICE C).
O CENAP forneceu amostras de soro e sangue em cido dietilenodiaminotetractico
(EDTA), provenientes de feldeos de vida livre e armazenadas a -80C ou em nitrognio
lquido e que haviam sido depositadas no Banco de Amostras Biolgicas por pesquisadores e
coordenadores de projetos de campo sobre ecologia e conservao de carnvoros selvagens in
situ. No caso de um gato-do-mato-pequeno supostamente de vida livre, que veio a bito na
cidade litornea de Ubatuba, SP (animal 20, Fig. 1, APNDICE A), o CENAP forneceu
amostras de fezes e soro obtido de cogulos cardacos que haviam sido depositadas em seu
Banco pelo Laboratrio de Patologia Comparada (LAPCOM) do Departamento de Patologia
(VPT) da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de So
Paulo (USP), onde foi realizada a necrpsia do animal. As amostras obtidas na FPZSP (soro,
plasma, sangue total em EDTA, papa de leuccitos e suabes) ficaram armazenadas a -80C
desde o dia da colheita at sua utilizao. As amostras de soro cedidas pela AMC foram
45
mantidas a -18C at o momento de sua cesso ao presente projeto, sendo que a partir deste
momento at a utilizao ficaram armazenadas a -80C.
Todas as amostras utilizadas foram transportadas obedecendo as instrues
internacionais da Associao Internacional de Transporte Areo (International Air Transport
Association IATA) como amostras diagnsticas (PI 650) e em completo acordo com
licenas federais especficas como a Conveno sobre o Comrcio Internacional de Espcies
da Flora e Fauna Selvagens em Perigo de Extino (Convention on International Trade in
Endangered Species CITES) (nmeros de licena 0112928BR e 1562/04), Conselho de
Gesto do Patrimnio Gentico (CGEN) e Ministrio da Agricultura (CSI 1530/2004).
As amostras dos feldeos de vida livre foram colhidas a campo no prprio local de
captura, enquanto se realizaram exames fsicos completos e colocao de colares
transmissores. Os feldeos de maior porte (suuaranas) foram capturados com a utilizao de
ces treinados, enquanto que para os pequenos felinos utilizaram-se armadilhas com presas
vivas como iscas. Os animais foram quimicamente imobilizados com o auxlio de dardos e
uma combinao 10 mg/kg IM de tiletamina e zolazepam (Telazol, Fort Dodge, Iowa,
USA). Aps a recuperao anestsica, os animais foram soltos no local de captura para
posterior monitoramento (MORATO, comunicao pessoal).
Os animais mantidos em cativeiro foram imobilizados com uma combinao de 10
mg/kg IM de cetamina (Ketalar, Ach Laboratrios Farmacuticos S. A, Parke-Davis;
Ketamina 50, Holliday- Scott S. A., Happy Vet Farma, So Paulo, Francotar, Virbac do
Brasil Ind. e Com. Ltda., So Paulo, Brasil) e 2 mg/kg IM de xilazina (Rompun, Bayer S.
A. Sade Animal, Coopazine, Coopers do Brasil Ltda., Virbaxyl, Virbac do Brasil Ind. e
Com. Ltda., So Paulo Brasil), aps um perodo de 24 horas de jejum. Na maioria dos casos,
foram utilizados dardos, pus e caixas de conteno.
46
Tabela 1 Nmero amostral e instituies cedentes de amostras de feldeos selvagens mantidos em cativeiro e
de vida livre. So Paulo, 2004
Espcies Nomes comuns Procedncia
Cativeiro Vida livre
Neotropicais FPZSP
1
AMC
2
Sub-total CENAP
3
Total
Puma concolor suuarana 2 12 14 18 32
Herpailurus yagouarondi jaguarundi 23 10 33 0 33
Leopardus pardalis jaguatirica 6 10 16 2 18
Leopardus tigrinus gato-do-mato-pequeno 33 10 43 2 45
Leopardus wiedii gato-maracaj 10 10 20 0 20
Oncifelis geoffroyi gato-do-mato-grande 13 10 23 0 23
Oncifelis colocolo gato-palheiro 10 0 10 0 10
Sub-total 97 62 159 22 181
Exticos
Panthera leo leo 30 0 30 NA
4
NA
Panthera pardus leopardo 4 0 4 NA NA
Acynonyx jubatus guepardo 2 0 2 NA NA
Panthera tigris altaica tigre-siberiano 13 0 13 NA NA
Uncia uncia leopardo-das-neves 2 0 2 NA NA
Sub-total 51 0 51 NA NA
Total 148 62 210 22 232
1
FPZSP = Fundao Parque Zoolgico de So Paulo.
2
AMC = Associao Mata Ciliar.
3
CENAP = Centro Nacional de Pesquisas para a Conservao de Predadores Naturais, Centro Especializado do Instituto
Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis (IBAMA).
4
NA = no se aplica.
47
Identificao das amostras no Banco de Amostras Biolgicas do Centro Nacional de Pesquisas para a Conservao de
Predadores Naturais (CENAP), Centro Especializado do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos
Naturais Renovveis (IBAMA): 1 = B61c1609; 2 = 061c6047; 3 = 061bc05f; 4 = 0610a655; 5 = 0610a16c; 6 = PNI
Juliana; 7 = Totti 7/6/98; 8 = 061c6683; 9 = 0610d9a3; 10 = 0001f9adf1; 11 = 06110af3b; 12 = 000610d48f; 13 =
000610a00a; 14 = 000610a3b; 15 = 00061c4d0f; 16 = 000610c60e; 17 = 1013; 18 = 004; 19 = 061bd88c; 20 = 003; 21
= 61431; 22 = 301.
Figura 1 Mapa mostrando as reas geogrficas no Brasil em que as amostras dos 22 feldeos de vida livre
foram colhidas. So Paulo, 2004
48
3.2 PATGENOS PESQUISADOS
Pesquisou-se um total de 16 patgenos diferentes utilizando-se diversos testes
diagnsticos em diferentes nmeros amostrais. O nmero de animais avaliados para cada
patgeno esto apresentados nos quadros 1 a 3.
Patgenos Testes sorolgicos Nmero de
animais
testados
Testes
TaqMan
Nmero de
animais
testados
Vrus de DNA

FHV 1 IFA 21 PCR 5
FPV IFA 21 PCR 6

Vrus de RNA

FCV IFA 21 RT-PCR 5
FCoV IFA 21 RT-PCR 6
FeLV ELISA direto
ELISA indireto
Western blot
21
21
21
PCR
RT-PCR
5
5
FIV Western blot 21 PCR
RT-PCR
5
5
PLV ELISA indireto 21 ...
1
...
CDV ... ... RT-PCR 6

Bactrias
Ehrlichia canis IFA 21 PCR 1
Anaplasma
phagocytophilum
IFA 21 PCR 1
Bartonella henselae IFA 20 ... ...

1
... = Testes no realizados.
Quadro 1 Testes realizados para 11 patgenos em amostras de material biolgico dos feldeos de vida livre.
So Paulo, 2004
49
Patgenos Testes
sorolgicos
Nmero de
animais
testados
Testes
TaqMan
Nmero de
animais
testados
Vrus de DNA

FHV 1 IFA 1 ...
1
...
FPV IFA 1 ... ...

Vrus de RNA

FCV IFA 1 ... ...
FCoV IFA 147 ... ...
FeLV Western blot
ELISA indireto
Snap Combo
2
25
147
148
PCR
RT-PCR
PCR (exo U
3)
24
24
109
FIV Western blot
Snap Combo
10
148
PCR 1

Bactrias

Ehrlichia canis IFA 147 PCR 109
Anaplasma phagocytophilum ... ... PCR 109
Bartonella henselae IFA 147 PCR 109
Candidatus Mycoplasma
haemominutum
... ... PCR 109
Mycoplasma haemofelis ... ... PCR 109
Candidatus Mycoplasma
turicensis
... ... PCR 109

Piroplasmas

Theileria sp ... ... PCR 109
Cytauxzoon sp ... ... PCR 109

1
= Testes no realizados.
2
Snap Combo FeLV Antigen/FIV Antibody Test Kit (IDEXX Laboratories, Inc., Westbrook, Maine 04092, USA).
Quadro 2 - Testes realizados para 14 patgenos em amostras de material biolgico dos feldeos mantidos na
Fundao Parque Zoolgico de So Paulo (FPZSP). So Paulo, 2004
50
Patgenos Testes sorolgicos Nmero de animais
testados (n)
Vrus de DNA

FHV 1 IFA 62
FPV IFA 62

Vrus de RNA

FCV IFA 62
FCoV IFA 62
FeLV Western blot
ELISA indireto
3
62

Bactrias
Ehrlichia canis IFA 62
Quadro 3 Testes realizados para seis patgenos em amostras de material biolgico dos feldeos mantidos em
cativeiro cedidas pela Associao Mata Ciliar (AMC). So Paulo, 2004
3.3 TESTES DIAGNSTICOS
Os testes diagnsticos foram realizados em 2004 no Clinical Laboratory, Vetsuisse
Faculty, University of Zurich, Sua, com exceo dos testes imunoenzimticos Snap
Combo FeLV Antigen/FIV Antibody Test Kit, que foram executados no momento de
colheita das amostras na FPZSP.
Foram realizados testes sorolgicos indiretos e diretos e testes moleculares para
deteco direta dos patgenos. Para os testes sorolgicos, foram utilizadas amostras de soro
ou plasma, com exceo dos testes imunoenzimticos Snap Combo FeLV Antigen/FIV
Antibody Test Kit, que foram realizados com sangue fresco ou soro. Para os testes
moleculares TaqMan PCR ou RT-PCR, foram utilizadas amostras de sangue, papa de
leuccitos, suabes ou mesmo soro em alguns casos. Os testes utilizados e o nmero de
animais avaliados esto apresentados nos quadros 1 a 3. As discriminaes individualizadas
do tipo de amostra biolgica utilizada para cada animal em cada teste constam nos apndices
A, B e C.
51
3.3.1 Testes sorolgicos
Entre os testes sorolgicos indiretos, voltados para deteco de anticorpos especficos
para os patgenos considerados, foram realizadas reaes de IFA, ensaios imunoenzimticos
(testes Snap e ELISA) e Western blot. Entre os testes sorolgicos diretos, foram
empregados ensaios imunoenzimticos voltados para a deteco de constituintes dos
patgenos (testes Snap e ELISA).
3.3.1.1 Reaes de imunofluorescncia indireta (IFA)
Os ttulos de anticorpos para FHV 1, FCV, FCoV, FPV, E. canis e A.
phagocytophilum foram determinados em amostras de soro ou plasma atravs de IFA de
acordo com Hofmann-Lehmann et al. (1996). Os testes de IFA foram realizados em amostras
de animais de vida livre e de cativeiro, conforme apresentados nos quadros 1 a 3 e nos
Apndices E, F e G.
Os substratos para a IFA foram os seguintes: clulas de rim felino de Crandell (CrFK)
infectadas com FHV 1 (Zurich 5-04, um isolado suo obtido de um gato apresentando
ceratite herptica; cepa de campo UT 88, C. Haid), FCV (cepa F9, Intervet, UK), e FPV
(FPL/01, Intervet, UK), respectivamente, e clulas de rim suno (PD-5) infectadas com vrus
da gastroenterite transmissvel (TGEV, cepa Purdue) para a deteco de anticorpos para
FCoV. As clulas infectadas com estes vrus foram aplicadas e fixadas em lminas de vidro
para utilizao como antgenos de captura, de acordo com Hofmann-Lehmann et al. (1996).
Como conjugado, foi utilizada imunoglobulina G de coelho anti-gato conjugada com
isotiocianato de fluorescena (FITC), cadeia H+L (Nordic Immunologic Laboratories,
Tillburg, The Netherlands) diludas nas proporo 1:40 em soluo salina fosfatada
tamponada (PBS). Todas as amostras foram inicialmente testadas em uma diluio de 1:20
em PBS. Resultados positivos ou questionveis para FHV 1, FCV e FPV na diluio 1:20
foram retestados e titulados at o ponto mximo de diluio. Nestes casos, foram realizadas
diluies seriadas das amostras iniciando-se na diluio 1:20 e procedendo-se a um mximo
de 1:640. Resultados positivos para FCoV na diluio 1:20 foram titulados nas diluies
52
1:25, 1:100, 1:400 e 1:1600.
As exposies para E. canis e A. phagocytophilum foram avaliadas inicialmente na
diluio de 1:80 por IFA. Lminas Mega Screen Fluoehrlichia c. (MegaCor Diagnostik
GmbH, 6912 Hrbranz, ustria) foram utilizados para detectar anticorpos especficos para E.
canis; lminas para E. equi (VMRD, Inc. Pulman, WA, USA) foram utilizadas para a
deteco de anticorpos direcionados contra A. phagocytophilum. Amostras positivas foram
tituladas at o ponto mximo de diluio atravs de diluies seriadas.
As amostras foram tambm avaliadas para presena de anticorpos para B.henselae por
IFA de acordo com Glaus et al. (1997). Tais amostras foram inicialmente testadas nas
diluies de 1:64 e 1:128. Ttulos 1:64 foram considerados positivos. Amostras positivas
foram tituladas at o ponto mximo de diluio atravs de diluies seriadas.
3.3.1.1.1 Controle de qualidade das lminas para IFA
Para o controle de qualidade das lminas de IFA, alquotas das culturas de clulas
(140 l) ou fragmentos raspados das lminas foram testados atravs de PCR ou RT-PCR para
certificao de ausncia de possveis contaminaes. Para esta finalidade, as amostras foram
incubadas a 40C por 10 min. em 300 l de tampo de lise e os cidos nuclicos totais (TNA)
foram extrados utilizando-se o equipamento robotizado MagNA Pure LC (Roche, Rotkreuz,
Switzerland). Os cidos nuclicos purificados foram diludos em um volume final de 100 l e
o TNA extrado foi analisado por TaqMan PCR em tempo real em um equipamento ABI
Prism 7700 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) para a
presena de agentes de interesse: FeLV, FIV, FCoV, FHV 1, FCV, FPV, CDV, A.
phagocytophilum e E. canis.
3.3.1.2 Ensaios imunoenzimticos
Foram realizados testes imunoenzimticos em amostras de animais de vida livre e de
cativeiro, conforme apresentados nos quadros 1 a 3 e nos Apndices E, F e G.
53
Amostras de sangue fresco ou de soro recm obtido dos feldeos da FPZSP foram
testadas para a presena de anticorpos para FIV ou lentivrus relacionados e para a presena
de antgenos de FeLV com os ensaios imunoenzimticos comerciais Snap Combo FeLV
Antigen/FIV Antibody Test Kit, disponveis comercialmente, e realizados de acordo com as
orientaes do fabricante.
Anticorpos para a glicoprotena viral gp70 do FeLV foram avaliados por ELISA em
amostras de soro ou plasma. Adicionalmente, estas as amostras foram testadas para a
presena de protena p27 do FeLV como medida para viremia por um ELISA sanduche
(LUTZ et al., 1988; 1983; 1980); amostras positivas foram retestadas na presena de soro de
camundongo (Mus sp) .
Anticorpos reativos a peptdeos especficos de PLV foram detectados mediante
ELISA indireto de acordo com Van Vuuren et al. (2003).
3.3.1.3 Western blot
A tcnica de Western blot foi executada para um nmero limitado de amostras de soro
de animais de vida livre e de cativeiro (Quadros 1 a 3; Apndices E, F e G).
Para a deteco de anticorpos para FeLV mediante Western blot foi utilizada a tcnica
descrita por Hofmann-Lehmann et al. (1995). Amostras contendo anticorpos para a
glicoprotena viral gp 70 e as protenas virais p58, p27, p15 e p12 foram consideradas
positivas.
Anticorpos para FIV foram detectados pela tcnica de Western blot de acordo com
Lutz et al. (1980, 1988). Amostras com anticorpos para as protenas virais p24 e p15 foram
consideradas positivas.
3.3.2 Testes Taqman PCR e RT-PCR
Foram realizados testes TaqMan PCR e RT-PCR para amostras de vida livre (n=6) e
de cativeiro (n=109) que no sofreram descongelamento antes da utilizao e que foram
54
permanentemente mantidas a temperaturas iguais ou inferiores a -70C.
As amostras e testes realizados para a populao amostral representativa de feldeos
de vida livre esto apresentados nos quadros 1 e 4. O DNA e RNA de uma amostra de fezes
de um gato-do-mato-pequeno e de uma amostra de sangue de uma jaguatirica foram extrados
utilizando-se o kit de TNA no equipamento MagNA Pure LC. Adicionalmente, DNA e RNA
de quatro amostras de soro no descongeladas previamente foram extrados com a utilizao
do QIAamp DNA Kit e QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen, Basel, Switzerland)
Os testes foram executados em um equipamento ABI Prism 7700 Sequence Detection
System. O TNA da amostra de fezes foi analisado por TaqMan RT-PCR para FCoV de
acordo com Gut et al. (1999), por TaqMan PCR para FPV de acordo com Meli et al. (2004)
e por TaqMan RT-PCR para CDV, em que uma seqncia de 84 pb do gene da polimerase
foi amplificado utilizando-se o forward primer 5-GGAAGCCTTGATGATAGCACTGA-3,
o reverse primer 5-GCCGAAAGAATATCCCCAGTT-3 e a sonda
5-FAM-TCTGGCGAAGATTATTCCGAAGGAAATGCT-6-TAMRA-3 (Quadro 4).
O DNA das amostras de soro e o TNA da amostra de sangue mencionadas acima
foram testados utilizando-se TaqMan PCR para FHV 1 (VOGTLIN et al., 2002), FPV
(MELI et al., 2004), provrus de FIV (LEUTENEGGER et al., 1999b) e provrus de FeLV
(GOMES-KELLER et al., 2006; HOFMANN-LEHMANN et al, 2001; 2006). Alm disso, o
RNA e TNA extrados destas cinco amostras foram testadas por TaqMan RT-PCR para
FIV, FeLV, FCoV (GUT et al., 1999 ; HOFMANN-LEHMANN et al, 2001; 2006) e FCV
(KUMMROW et al., 2005). O TNA extrado da amostra de sangue tambm foi avaliado por
TaqMan PCR para A. phagocytophilum (PUSTERLA et al., 1999) e para E. canis, em que
uma seqncia de 108 pares de bases do gene da subunidade 16S do rRNA foi amplificado
utilizando-se o forward primer, 5-ATGGCTATTCCGTACTACTAGGTAGATTC-3o
reverse primer 5-CATGCAAGTCGAACGGACAAT-3 e a sonda
5-FAM-TCTGCCACTAACAATTTCCTATAGCCAGAGGC-6-TAMRA-3. (Quadro 4)
O nmero amostral e testes realizados para a populao amostral constituda pelos
feldeos mantidos em cativeiro, pela FPZSP, esto apresentados no quadro 2. Foi utilizado o
kit de TNA no equipamento MagNA Pure LC para extrao de TNA das amostras de sangue
em EDTA e utilizado o QIAamp DNA Kit para extrao de DNA das amostras de papa de
leuccitos (obtidas com a centrifugao do sangue colhido em EDTA). Foram extrados
TNA das amostras de sangue em EDTA (n = 82) e de DNA de papa de leuccitos (n = 27),
55
perfazendo um total de 109 amostras de cidos nuclicos oriundos de igual nmero de
feldeos de cativeiro.
Nestas amostras, foram realizados testes TaqMan PCR e RT-PCR para os
patgenos FIV, FeLV, B. henselae, E. canis, A. phagocytophilum, Candidatus Mycoplasma
haemominutum, Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma turicensis, Theileria sp
e Cytauxzoon sp (RYSER-DEGIORGIS et al., 2005; WILLI et al., 2005; 2006) (Quadro 2).
Tais testes no foram realizados individualmente para cada amostra; os cidos nuclicos
(TNA ou DNA) extrados das amostras foram agrupados (pools) pelo equipamento MagNA
Pure LC da forma esquematizada na figura 2 (2a, 2b e 2c). A interseco entre linhas e
colunas de cada um dos dois esquemas de pipetagem ou a repetio dos testes em grupos
progressivamente menores permitiu a individualizao dos resultados positivos.
56
Espcies/Identificao
das amostras
1
Material
biolgico
Testes TaqMan /Patgenos
PCR RT-PCR
Puma concolor
n = 4

3, 4, 5 e 6
Soro
(DNA e RNA)
FHV 1
FPV
FIV provrus
FeLV provrus
FCV
FCoV
FIV
FeLV
CDV
Leopardus pardalis
n = 1

22
Sangue
(TNA)
FHV 1
FPV
FIV (provrus)
FeLV (provrus)
Anaplasma phagocytophilum
Ehrlichia canis
FCV
FCoV
FIV
FeLV
CDV
Leopardus tigrinus
n = 1

20
Fezes
(TNA)
FPV FCoV
CDV

1
= Identificao das amostras no Banco de Amostras Biolgicas do Centro Nacional de Pesquisas para a Conservao
de Predadores Naturais (CENAP), Centro Especializado do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos
Naturais Renovveis (IBAMA): 3 = 061bc05f; 4 = 0610a655; 5 = 0610a16c; 6 = PNI Juliana; 20 = 003; 22 = 301.
Quadro 4 Testes TaqMan PCR e RT-PCR realizados para 11 patgenos em amostras de material
biolgico de seis feldeos de vida livre. So Paulo, 2004
57
2a) Pipetagem A: cada amostra de uma mesma linha ou coluna contribuiu com o volume de 5l para a
composio de 16 agrupamentos (pools) de 40 l , mostrados como A1 at A8 e B1 at B8.
95 96 97 98 99 N
1
101 102 A1
103 104 105 106 109 110 128 129 A2
130 131 N 137 138 139 140 145 A3
146 147 148 149 150 152 153 154 A4
49 56 58 59 60 61 63 N A5
64 69 70 71 72 73 74 75 A6
76 000a 78 79 80 81 82 83 A7
84 85 86 87 91 92 93 94 A8

B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8
1
N = controle negativo: 5 l de soluo salina fosfatada tamponada (PBS).
2b) Pipetagem B: cada amostra de uma mesma linha ou coluna contribuiu com o volume de 5l para a
composio de 16 agrupamentos (pools) de 40 l , mostrados como C1 at C8 e D1 at D8.
1 18 54 55 56 57 58 61 C1
63 65 N
1
66 67 68 70 77 C2
79 85 88 89 90 111 112 113 C3
114 115 116 117 118 119 120 121 C4
122 123 124 125 N 126 127 151 C5
1 21 22 23 31 32 33 34 C6
42 43 44 45 46 47 48 49 C7
50 51 54 55 57 62 000f 000e C8

D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8
1
N = controle negativo: 5 l de soluo salina fosfatada tamponada (PBS).
2c) Disposio dos grupos (pools) de soluo de cidos nuclicos (DNA e TNA) originados das pipetagens A e
B em placa de 96 orifcios para a realizao dos testes Taqman PCR e RT-PCR.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A1
1
A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A
B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B
C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C
D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D
E
F
G
H
1
= cada orifco da placa recebeu o volume de de 40 l originado da somatria de 5l de oito amostras.
Figura 2 - As amostras de cidos nuclicos (DNA e TNA) dos feldeos de cativeiro foram agrupadas utilizando
um equipamento robotizado MagNAPure LC (Roche, Rotkreuz, Sua) de acordo com os esquemas
de pipetagem explicitados nas figuras 2a e 2b para realizao dos testes conforme
demonstrado na figura 2c. So Paulo, 2004
58
4 RESULTADOS
Os resultados de todos os testes sorolgicos realizados esto apresentados nas tabelas
2, 3 e 4. Estes resultados esto apresentados de forma individualizada nos apndices E, F e G.
Foram detectados anticorpos para FCoV em uma jaguatirica de vida livre, anticorpos
para FeLV, FIV, e PLV (ou lentivrus antigenicamente relacionados) em suuaranas de vida
livre e anticorpos para B. henselae nas trs espcies de feldeos (jaguatiricas, suuaranas e
gatos-do-mato-pequenos). As taxas de prevalncias de anticorpos, baseadas em amostras de
soro de 21 animais foram aproximadamente: B. henselae (95%); FPV (48%); FHV 1 and
FCV (29%); FeLV e PLV (10%); e FCoV, FIV, e E. canis (5%). Anticorpos para A.
phagocytophilum no foram detectados (Tabela 2).
As diferenas percentuais dos resultados dos testes indiretos de IFA para os patgenos
pesquisados nas populaes amostrais constitudas de indivduos de vida livre (n=21) e de
indivduos mantidos em cativeiro (n=210) podem ser comparadas graficamente observando-
se as figuras 3, 4, 5 e 6.
Os resultados individualizados dos testes moleculares TaqMan PCR e RT-PCR que
foram realizados em amostras de soro, sangue e fezes de seis feldeos de vida livre esto
apresentados na tabela 5.
Em amostras de sangue de dois espcimes de jaguarundis mantidos pela FPZSP
foram detectados provrus de FeLV (DNA) e RNA viral. Tambm foram detectados provrus
e RNA viral de FeLV amostras de soro e saliva (suabe oral) de um destes animais. Os
resultados dos testes PCR voltados para deteco de provrus (regio exo U
3
) foram positivos
para amostras dos jaguarundis citados acima, mas negativos para amostras dos demais
feldeos. Estes resultados esto apresentados de forma individualizada na tabela 6.
Os resultados dos testes moleculares TaqMan PCR para os agentes bacterianos B.
henselae, E. canis, A. phagocytophilum, Candidatus Mycoplasma haemominutum, M.
haemofelis, Candidatus Mycoplasma turicensis e dos protozorios piroplasmas Theileria sp
e Cytauxzoon sp esto apresentados na tabela 7 e de forma individualizada no apndice H.
59
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60
Tabela 4 Resultados dos testes sorolgicos realizados nas amostras de feldeos cedidas pela Associao Mata
Ciliar (AMC), distribudos em funo dos mtodos empregados e dos patgenos pesquisados. So
Paulo, 2004
IFA
1
Western blot
2
ELISA
FHV 1 FCV FCoV FPV Ehrlichia canis FeLV
indireto
FeLV
gp70
Amplitude
dos ttulos IFA
20-320 20/1280 25-1600 20-5120 320 NA
3
NA
Total resultados
positivos/
total de amostras
analisadas
12/62 32/62 29/62 44/62 1/62 0/2 10/62
Percentagem (%) 19,35 51,61 46,77 70,96 1,61 0 16,12

1
IFA = Imunofluorescncia indireta. Os ttulos de anticorpos so relatados como recprocas das respectivas diluies de
soro. Ttulos negativos foram definidos como < 20 para FHV 1, FCV, FPV, FCoV, < 80 para E. canis e < 64 para B.
henselae, respectivamente.
2
Os testes de Western blot para FeLV no foram realizados para as amostras dos 62 feldeos cedidos pela AMC, mas apenas
para 2.
3
NA = no se aplica.
Tabela 5 Resultados dos testes TaqMan PCR e RT-PCR realizados para seis amostras de feldeos de vida
livre, distribudos em funo das amostras utilizadas e dos patgenos pesquisados. So Paulo, 2004
Identificao das amostras
1
Testes / Patgenos pesquisados
Puma concolor
n = 4
Leopardus pardalis
n = 1
Leopardus tigrinus
n = 1
TaqMan PCR Soro Sangue Fezes
3 4 5 6 22 20

FHV 1 -
2
- - - - ...
3
FPV P
4
P P - - -
FIV - - - - - ...
FeLV - - - - - ...
Ehrlichia canis ... ... ... ... - ...
Anaplasma phagocytophilum ... ... ... ... - ...

TaqMan RT-PCR

FCV - - - - - ...
FCoV - - - - - -
FIV - - - - - ...
FeLV - - - - - ...
CDV - - - - - -

1
= Identificao das amostras no Banco de Amostras Biolgicas do Centro Nacional de Pesquisas para a Conservao de
Predadores Naturais (CENAP), Centro Especializado do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais
Renovveis (IBAMA): 3 = 061bc05f; 4 = 0610a655; 5 = 0610a16c; 6 = PNI Juliana; 20 = 003; 22 = 301.
2
- = Resultados negativos.
3
...= Testes no realizados.
4
P = Resultados positivos.
61
Vida livre - IFA
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%
Figura 3 Representao grfica do percentual em que foram detectados anticorpos para FHV 1 (28,57%),
FCV (28,57%), FCoV (4,76%), Ehrlichia canis (4,76%), Anaplasma phagocytophilum (0) e
Bartonella henselae (95,0%), atravs de testes de imunofluorescncia indireta (IFA), nas 21 amostras
de soro provenientes de feldeos de vida livre no Brasil. So Paulo, 2004
Cati vei ro - IFA
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%
Figura 4 - Representao grfica do percentual em que foram detectados anticorpos para FHV 1 (19,04%), FCV
(50,79%), FCoV (64,59%), FPV (69,84%), Ehrlichia canis (0,47%) e Bartonella henselae (48,29%),
atravs de testes de imunofluorescncia indireta (IFA), nas amostras de soro provenientes de feldeos
mantidos em cativeiro no Brasil, tomadas em conjunto. So Paulo, 2004
62
FPZSP - IFA
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0
50
100
%
Figura 5 Representao grfica do percentual em que foram detectados anticorpos para FCoV (72,10%),
Ehrlichia canis (0) e Bartonella henselae (48,29%), atravs de testes de imunofluorescncia
indireta (IFA), nas 147 amostras de soro provenientes de feldeos mantidos na Fundao Parque
Zoolgico de So Paulo (FPZSP). Tambm esto representados os resultados para o espcime de
Oncifelis colocolo, CAD 28505, que ainda no havia sido vacinado por ocasio da colheita de
material, o qual tambm se apresentou soronegativo para FHV 1, FCV e FPV. So Paulo, 2004
AMC - IFA
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0
50
100
%
Figura 6 Representao grfica do percentual em que foram detectados anticorpos para FHV 1 (19,35%), FCV
(51,61%), FCoV (46,77%), FPV (70,96%) e Ehrlichia canis (1,61%), atravs de testes de
imunofluorescncia indireta (IFA), em 62 amostras de soro de feldeos provenientes de diversos zos
no Brasil cedidas pela Associao Mata Ciliar (AMC). So Paulo, 2004

63
Tabela 6 Resultados dos testes TaqMan PCR e RT-PCR para FeLV nos jaguarundis (Herpailurus
yaguarondi) mantidos na Fundao Parque Zoolgico de So Paulo (FPZSP), distribudos em
funo das provas efetuadas e das amostras utilizadas. So Paulo, 2004
Identificao
das amostras (CAD)
1
FeLV TaqMan
RT-PCR PCR PCR (exo U
3
)
2
Herpailurus yaguarondi
n = 23 sangue soro suabe sangue suabe sangue

20761 P
3
P P P P P
20762 -
4
-
5
...
6
- ... -
21566 - ... ... - ... -
21810 P ... ... P ... P
22096 - ... ... - ... -
23120 - ... ... - ... -
23851 - ... ... - ... -
23911 - ... ... - ... -
23956 - ... ... - ... -
24142 - ... ... - ... -
24189 - ... ... - ... -
24226 - ... ... - ... -
24227 - ... ... - ... -
24958 - ... ... - ... -
25244 - ... ... - ... -
25845 - ... ... - ... -
25846 - ... ... - ... -
26005 - ... ... - ... -
27088 - ... ... - ... -
27155 - ... ... - ... -
27156 - ... ... - ... -
27689 - - ... - ... -
28018 - ... ... - ... -

Total resultados
positivos/amostras
analisadas
2/23 1/1 1/1 2/23 1/1 2/23

1
CAD = nmero do cadastro individual dos animais na FPZSP, SP.
2
FeLV TaqMan PCR (exo U
3
) = estes testes foram realizados para 109 feldeos de diversas espcies da FPZSP;
apenas os jaguarundis apresentaram resultados positivos.
3
P = Resultados positivos.
4
5
= Amostras que haviam sido descongeladas e recongeladas anteriormente execuo destes testes.
6
... = Testes no realizados.
64
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5 DISCUSSO
H uma grande carncia de conhecimento mdico-veterinrio acerca de feldeos
neotropicais no Brasil e em geral as causas de morbidade e mortalidade no so conhecidas,
seja para populaes de vida livre ou mantidas em cativeiro. Abordagens genricas e prticas
empricas so rotineiramente adotadas para o tratamento clnico de animais doentes nos
zoolgicos brasileiros e em boa parte do mundo. Apesar de ter havido expanso desta rea do
conhecimento nos ltimos 10 a 15 anos no Pas (observao pessoal), este conhecimento
encontra-se no estgio dos levantamentos epidemiolgicos preliminares. Em poucos casos h
estudos verticalizados em direo compreenso de fenmenos fisiolgicos gerais e
fisiopatolgicos subjacentes s doenas e infeces dos animais selvagens. O conhecimento
verticalizado de extrema importncia para a organizao de medidas voltadas para a
conservao das espcies de feldeos, mas o conhecimento horizontal representado pelos
levantamentos epidemiolgicos preliminares de avaliao de exposio a patgenos constitui
a base na qual estudos posteriores possam se fundar.
5.1 A AMOSTRAGEM
No existem estimativas precisas com relao ao nmero de feldeos em situao de
vida livre no territrio nacional. Mas pode-se afirmar que todas as espcies de feldeos
encontram-se, em algum grau, ameaadas de extino, ainda que algumas espcies, as menos
selvticas e mais ruderais, como suuaranas e jaguarundis, sejam mais resilientes
depredao ambiental e seu status de ameaa menos acentuado. Os feldeos so bem
representados nos zoolgicos brasileiros (observao pessoal), mas isto no traduz um bom
desempenho reprodutivo em cativeiro; antes, decorre do contnuo deslocamento de animais
de vida livre em direo ao cativeiro em decorrncia de conflitos com humanos.
A iniciativa da formao de um Banco de Amostras Biolgicas originrias de
carnvoros de vida livre pelo CENAP IBAMA em 2002 foi um passo essencial para as
pesquisas em conservao, pois passou a permitir o necessrio acmulo de amostras
representativas das populaes em datas e localidades conhecidas para a execuo dos mais
diversos estudos genticos e epidemiolgicos. Igualmente, as populaes mantidas em
66
cativeiro tambm tm sido beneficiadas com a crescente abertura e interesse dos zoolgicos
em melhorar continuamente as condies de manuteno dos animais, ao estabelecer
parcerias com projetos de pesquisas fomentados em universidades e outras instituies. O
Programa de Identificao e Imunizao do Plano de Manejo para Felinos Selvagens
Brasileiros, iniciado h mais de uma dcada sob a coordenao da AMC (BRASIL, 1995), foi
um exemplo destas parcerias. Cada indivduo da populao de feldeos neotropicais mantida
em cativeiro no Pas era identificado, avaliado e amostras de material biolgico colhidas de
forma a constituir um banco disponvel para pesquisas. A obteno das amostras para o
presente estudo valeu-se destas inciativas, refletindo desta forma o grau de maturidade
organizacional das entidades ligadas conservao dos feldeos selvagens.
A amostragem de feldeos de vida livre no foi estratificada em funo de quaisquer
variveis que no o fato de pertencerem famlia Felidae e serem procedentes do Brasil. No
possvel inferir que as amostras de material biolgico originadas dos 22 espcimes de
feldeos neotropicais de vida livre utilizadas neste trabalho, oriundos de diversas localidades
do vasto territrio brasileiro, sejam representativas de suas populaes de origem, dado o
pequeno nmero. De maneira similar, a amostragem procedente de feldeos cativos, embora
maior (n=210), no pde ser tratada estatisticamente mediante variveis como espcie, sexo,
idade, instituio de origem, nascimento em vida livre ou em cativeiro. Muitas informaes
puderam ser recuperadas, conforme constam nos apndices B e C, mas houve
tendenciosidade associada s oportunidades de aquisio. As instituies brasileiras que
mantm feldeos em cativeiro no foram igualmente representadas.
A escassez de informaes epidemiolgicas prvias referentes s amostras e
respectivas populaes de origem orientou a opo de estender o diagnstico laboratorial para
uma ampla gama de patgenos, valendo-se igualmente de diversas tcnicas laboratoriais, de
forma que este trabalho adquirisse um carter de varredura. As anlises laboratoriais adotadas
para diferentes sub-grupos amostrais (animais procedentes de vida livre, de cativeiro,
procedentes da FPZSP e de outros zos em conjunto, grupo de jaguarundis da FPZSP)
tiveram o propsito de ampliar a caracterizao dos achados otimizando os recursos
disponveis.
67
5.2 ANLISE DOS RESULTADOS OBTIDOS PARA FELDEOS DE VIDA LIVRE
Este estudo representou a primeira evidncia sorolgica de que FHV 1, FCV, FPV e a
bacteria intracellular obrigatria E. canis (ou agentes antigenicamente relacionados) estejam
presentes entre feldeos de vida livre no Brasil. Os resultados indicam que a co-infeco com
os patgenos virais estudados no comum para feldeos neotropicais brasileiros de vida
livre: a maioria dos animais (76%) foram soropositivos para apenas um ou dois dos vrus
selecionados. A nica exceo foi uma jaguatirica amaznica (animal 18, Fig. 1, Apndice A)
que se apresentou soropositiva para quatro dos vrus pesquisados: FHV 1, FCV, FCoV, FPV
(Apndice E).
A alta prevalncia de anticorpos demonstrada para parvovrus (aproximadamente
48%), como pode ser observado na tabela 2, pode estar relacionada com a grande resistncia
ambiental destes vrus no envelopados. Desta forma, animais de vida livre podem ser
expostos em reas contaminadas por fezes, ainda que os feldeos sejam solitrios,
esparsamente distribudos e suas populaes tenham baixa densidade (BARKER; PARISH,
2001). Em contraste, o FCoV no persiste no ambiente, o que pode explicar o nico animal
soropositivo encontrado neste estudo.
Entretanto, os vrus respiratrios FHV 1 e FCV so lbeis no ambiente, requerem
contato direto para serem transmitidos, e ainda assim resultados positivos para ambos agentes
foram relativamente comuns neste estudo (aproximadamente 29%). Esta situao similar
de lees de vida livre na frica, em que altas prevalncias para FHV 1 e FCV so relatadas
(HOFMANN-LEHMANN et al., 1996). No caso dos lees, o comportamento grupal, que
permite a transmisso horizontal, pode explicar a alta soroprevalncia. No presente caso, os
resultados para FHV 1 e FCV podem refletir a persistncia de anticorpos em funo de
infeco quando filhotes, durante acasalamento ou ainda devido a contato com gatos
domsticos.
O encontro de anticorpos para retrovirus (FeLV, FIV e PLV) chama a ateno para a
necessidade de monitoramento. Um total de trs animais apresentaram anticorpos para FeLV
(um animal para a glicoprotena gp 70 do vrus no ELISA; outro animal apenas para a
protena p27 do vrus no Western blot; e dois destes animais para gp 70 e p27), como pode
ser observado no apndice E, para os animais identificados como 6, 9 e 10. Entretanto, o
antgeno p27 no foi detectado no ELISA direto para nenhum dos trs animais, indicando que
no havia infeco ativa, com replicao viral e sugerindo que estes animais tenham
68
desenvolvido infeco regressiva, montando respostas imunes especficas. Todavia, o
encontro de animais soropositivos preocupante. No se sabe se feldeos neotropicais so
susceptveis doena; h relatos de feldeos filogeneticamente distantes dos gatos domsticos
susceptveis s enfermidades (JESSUP et al., 1993; MARKER et al., 2003), ao passo que
para o gato-selvagem-europeu, to filogeneticamente prximo do domstico, o FeLV
consistentemente encontrado em populaes de vida livre e no apresenta alta
patogenicidade. A alta prevalncia de infeces por FeLV em gatos-selvagens-europeus
sugere que o vrus seja mantido nestas populaes. A possibilidade de que a infeco seja
constantemente adquirida atravs do contato com gatos domsticos nestas populaes
selvagens europias no parece provvel, uma vez que as prevalncias so constantemente
mais altas que aquelas dos domsticos em todas as reas estudadas de ocorrncia natural da
espcie. (HOFMANN-LEHMANN, comunicao pessoal; DANIELS et al., 1999;
FROMONT et. al., 2000; LEUTENEGGER et. al. 1999a).
Uma nica suuarana apresentou-se soropositiva para FIV (animal 2, Apndice E).
Este animal e um segundo animal tambm apresentou anticorpos para PLV (animal 8,
Apndice E). A nica forma de se determinar a natureza e origem destes virus seria uma
anlise de seqncias gnicas; porm no houve material disponvel para execuo de tais
anlises.
Anticorpos para E. canis mediante IFA foram detectados em amostra de soro de uma
nica suuarana (animal 19, Apndice E). Embora o ttulo tenha sido muito alto, a
interpretao deste resultado difcil. Pode representar evidncia de infeco por E. canis ou
os anticorpos detectados podem ter sido resultado de infeces por outras espcies
relacionadas de Ehrlichia, como E. chaffeensis ou E. ewingii. Carrapatos, potenciais vetores
na transmisso das erliquioses, so comuns na regio (Baro de Melgao, Mato Grosso) onde
este animal foi capturado e numerosas espcies, incluindo Amblyomma ovale, A. parvum, A.
cajennense, Boophilus microplus e Ixodes aragaoi foram relatadas parasitando suuaranas
(LABRUNA et al., 2005). Pesquisas genmicas das diversas espcies de Ehrlichia em
carrapatos colhidos nos locais de captura seriam importantes para elucidar seu papel como
vetores. Anlises moleculares em amostras de sangue desta suuarana soropositiva poderiam
determinar as espcies de Ehrlichia envolvidas. Entretanto, no havia amostras de sangue
disponveis para a execuo destes testes. Estudos posteriores com amostragens maiores de
sangue de feldeos de vida livre poderiam eventualmente caracteriz-los como potenciais
reservatrios dos agentes, da mesma forma que recentemente cervdeos de vida livre foram
implicados como potenciais reservatrios de erlquias (MACHADO et al., 2006). A
69
implicao zoontica de tais agentes evidente, uma vez que vrias espcies dentro dos
gneros Ehrlichia e Anaplasma tm sido associados com doenas emergentes transmitidas
por vetores em em humanos (PAROLA; DAVOUST; RAOULT, 2005).
Foi detectada uma prevalncia muito alta de anticorpos para B. henselae (95%)
mediante IFA nas amostras de 20 animais analisadas, constituindo a mais alta prevalncia j
relatada para qualquer espcie de feldeo (CHOMEL et al., 2004b). Estes resultados sugerem
que feldeos brasileiros de vida livre podem ser reservatrios do patgeno zoontico B.
henselae, que causa a doena-da-arranhadura-do-gato em humanos (CHOMEL et al., 2004a).
Esta zoonose deve ser considerada nas capturas de feldeos devido ao risco representado
(ROTSTEIN et al., 2000). Diretrizes em zoolgicos e programas de manejo de vida selvagem
devem enfatizar as recomendaes para o manejo seguro de animais. O patgeno B. henselae
transmitido principalmente atravs de pulgas (C. felis) em gatos domsticos (CHOMEL et.
al 1996) e potencialmente transmissvel entre feldeos domsticos e selvagens (CHOMEL et
al., 2004b). O contato entre feldeos de vida livre e gatos domsticos, todos hospedeiros para
C. felis (LINARDI; GUIMARES, 2000) deve ser previsto. O controle de pulgas em gatos
domsticos recomendado pelo menos onde os territrios dos feldeos de vida livre se
sobrepem aos assentamentos humanos. Alm de pulgas, h indcios de que carrapatos do
gnero Ixodes sejam vetores para Bartonella sp (CHANG et al., 2001; CHOMEL et al.,
2004b; SCHOULS et al., 1999) e carrapatos da espcie Ixodes aragaoi foram identificados
parasitando uma suuarana em Baro de Melgao/ Mato Grosso (LABRUNA et al., 2005).
Nesta localidade, a maioria das suuaranas ( Figura 1, Apndices A e E) apresentou-se
soropositiva para B. henselae.
Os resultados dos testes TaqMan PCR e RT-PCR realizados para amostras de soro
de seis feldeos de vida livre evidenciaram trs suuaranas soropositivas para FPV (Tabela 5),
que apresentavam viremia aguda por ocasio da conteno/colheita (animais 3, 4 e 5,
Apndice E), enquanto uma amostra de soro analisada de um animal soronegativo
apresentou resultados negativos (animal 6, Apndice E). Infelizmente, no havia amostras de
fezes disponveis dos animais 3, 4 e 5 para pesquisa de eliminao viral. Os demais testes de
deteco viral realizados nas demais amostras disponveis de sangue e fezes no detectaram a
presena de nenhum dos agentes investigados. Estes testes foram executados apenas para
amostras desta populao que no haviam sofrido descongelamento prvio; do contrrio a
previsvel degradao dos cidos nuclicos no traria resultados informativos.
De acordo com os exames fsicos realizados no momento da colheita das amostras,
no houve sinais das infeces ou doenas relacionadas nos animais. O nico animal
70
necropsiado, um gato-do-mato-pequeno (animal 20, Figura 1, Apndice A), apresentava
excelente condio corporal, com exceo de intensa parasitose, incluindo Dirofilaria immitis
(FILONI et al., 2004; 2003b). At o momento, o significado destes patgenos para a sade
geral das populaes destes feldeos selvagens desconhecida. Para todos os agentes
infecciosos avaliados neste estudo, incluindo CDV e A. phagocytophilum, a importncia
destas infeces podem ter sido subestimadas, pois possvel que muitos animais infectados
tenham desenvolvido sinais clnicos ou morrido sem serem notados, no permitindo a
deteco das infeces. Uma vez que os agentes infecciosos investigados no presente estudo
so patgenos comuns em carnvoros domsticos, no possvel determinar se estes agentes
so historicamente associados com populaes de feldeos neotropicais ou foram introduzidos
atravs de interaes com carnvoros domsticos. O isolamento e caracterizao molecular
destes patgenos, tanto em carnvoros domsticos como selvagens, poderiam fornecer
respostas a estas questes.
A exposio de feldeos a agentes infecciosos na natureza, por um lado, pode
significar que a soltura ou reintroduo de animais procedentes de cativeiro, potencialmente
infectados, no representaria risco de se introduzir tais agentes (LEUTENEGGER et al.,
1999a). Por outro lado, o potencial patognico destes agentes no est estabelecido e
translocaes de animais soropositivos e/ou infectados pode apresentar efeitos deletrios na
regulao natural de populaes que podem estar indenes; devendo ser avaliadas muito
cuidadosamente (HOFMANN-LEHMANN et al., 1996).
O bioma da Floresta Amaznica ainda o mais preservado e com maior cobertura
vegetal e ocupa a maior rea espacial. Apesar disso, tivemos acesso a amostras de apenas
duas localidades diferentes dentro deste bioma. Isto coincide com o fato de que projetos de
campo acerca de conservao de feldeos esto concentrados nas proximidades de reas de
conflito entre humanos e grandes feldeos nas Regies Centro-Oeste e Sudeste. Seria
importante a obteno de mais incentivo econmico para que projetos de campo fossem
conduzidos na regio amaznica. Alm disso, seria recomendvel promover a obteno de
dados para o desenvolvimento de programas direcionados preveno e mitigao de
doenas infecciosas, seja em projetos de campo j em andamento ou futuros, de acordo com
recentes iniciativas governamentais e no-governamentais (BRASIL, 2004). Em todas as
reas naturais amostradas, alteraes nas paisagens devido a presses antrpicas so um
importante ponto de preocupao, principalmente nos biomas do Cerrado e Floresta
Atlntica, onde o desmatamento, agricultura, industrializao e urbanizao so
especialmente acentuados. Neste cenrio, carnvoros domsticos, entre outros, esto
71
amplamente distribudos como espcies exticas introduzidas. Uma vez que os agentes
infecciosos investigados no presente estudo so patgenos comuns de carnvoros domsticos,
no possvel determinar se as infeces detectadas so originrias das populaes de
feldeos neotropicais ou os carnvoros domsticos transmitiram estes agentes aos selvagens.
O isolamento e caracterizao molecular dos patgenos, tanto nos carnvoros domsticos
como selvagens, seriam teis em ajudar a encontrar uma resposta para esta questo.
5.3 ANLISE DOS RESULTADOS OBTIDOS PARA FELDEOS MANTIDOS EM
CATIVEIRO
Uma comparao entre as figuras 3 e 4 revela semelhanas entre os percentuais de
animais soropositivos para FHV 1, FPV, E. canis e B. henselae mediante IFA entre as
populaes de vida livre e de cativeiro, mas sugere tambm que o patgeno FCoV esteja mais
disseminado nos ambientes de cativeiro que na natureza, uma vez que a soroprevalncia na
populao amostral referente a animais cativos foi maior que a seroprevalncia na populao
amostral de vida livre, aproximadamente 65% (135:209) e 5% (1:21), respectivamente.
Houve ocorrncia maior de animais soropositivos para FCV nos zos
(aproximadamente 65%) que em vida livre ( aproximadamente 5%). (Figuras 3 e 4). As
prevalncias de anticorpos para os vrus respiratrios felinos FHV 1 e FCV foram diferentes
entre populaes amostrais de cativeiro no vacinadas cedidos pela AMC (os animais
vacinados da FPZSP foram excludos destes testes) e as populaes amostrais de vida livre.
As soroprevalncias para FHV 1 e FCV foram semelhantes para feldeos de vida livre, ao
passo que para os feldeos de cativeiro, a soroprevalncia para FCV foi maior que para FHV
1. Uma vez que as formas de transmisso so semelhantes, tais resultados podem ser
decorrentes na maior resistncia ambiental do FCV ao contaminar o ambiente e do
prolongado estado de carreador que se estabelece nos animais infectados por este vrus. O
FHV 1 estabelece latncia com episdios intermitentes de reativao, e quando a infeco
est latente, no h prognie viral; de forma que animais com infeco latente para FHV 1
no so transmissores. (MAGGS, 2005). Desta forma, possvel o FCV esteja mais
disseminado devido sua maior resistncia ambiental e porque animais infectados com FCV
representem fontes de infeco por mais tempo. Anlises prospectivas de deteco viral
nestas populaes para ambos patgenos poderiam elucidar esta questo.
72
A observao das figuras 3 e 4 tambm demonstra que a soroprevalncia para o FPV
maior no ambiente de cativeiro que no de vida livre. Situao esperada, uma vez que a
contaminao ambiental do ambiente pelos vrus favorecida com as altas densidades
populacionais nos zoolgicos, ao contrrio das populaes dispersas na natureza.
Analisando-se as figuras 5 e 6, pode-se observar que os feldeos mantidos na FPSZP
apresentaram maior soroprevalncia para FCoV. Os testes sorolgicos so teis para o
diagnstico de FIP, mas apenas podem ser interpretados em correlao com sinais clnicos. O
diagnstico conclusivo para FIP classicamente obtido atravs de exames histopatolgicos
em bipsias ou necrpsias. Foram desenvolvidas RT-PCRs direcionadas o RNA mensageiro
do FCoV em clulas mononucleares perifricas para o diagnstico de FCoV em gatos
baseados nos princpios de que apenas vrus mutantes apresentem tropismo para moncitos e
macrfagos, o que estaria correlacionado com a virulncia do agente em causar FIP
(SIMONS et al., 2005). Esta abordagem proposta o monitoramento da populao de
feldeos soropositivos para FCoV de feldeos mantidos em cativeiro, especialmente a
populao da FPZSP, uma vez que estes animais correm o risco de desenvolver FIP.
No grupo de 23 jaguarundis mantidos pela FPZSP, foram evidenciados dois
espcimes (CAD 20761 e CAD 21810) em que foram detectadas tanto a presena de provrus
(DNA) de FeLV como de RNA viral em amostras de sangue; em um destes animais (CAD
20761) tambm foi detectado provrus e RNA viral de FeLV em soro e saliva (suabe oral)
(Tabela 6). Esta constituiu a primeira descrio de FeLV na espcie H. yagouarondi. Os dois
animais vieram a bito posteriormente realizao do teste, sendo que um deles apresentou
desenvolvimento de massa tumoral abdominal compatvel com as doenas proliferativas
associadas com infeco por FeLV em gatos domsticos. O prosseguimento da investigao,
com anlises histopatolgicas e e de hibridizao in situ nos tecidos preservados est em
prosseguimento e poder caracterizar definitivamente a espcie como susceptvel s doenas
causadas pelo FeLV. Este tipo de estudo verticalizado s, assim como o estudo envolvendo
FCoV em feldeos mantidos na FPZSP somente poder se tornar possvel porque este
presente estudo horizontal foi realizado.
A anlise dos resultados apresentados nas tabelas 2 e 3, Apndices E e F, sugere
algumas consideraes. A ausncia de deteco sorolgica de antgenos p27, que so
considerados marcadores de infeco viral, no exclui a possibilidade de existncia de
infeces latentes e possveis reativaes virais em caso de estresse (GOMES-KELLER et al,
2006). Desta forma, os resultados negativos obtidos para p27 no excluem a possibilidade de
infeco pelo FeLV nas populaes de vida livre e mantidas na FPZSP. A deteco de
73
anticorpos para FeLV (Western blot, ELISA indireto) indica exposio ao vrus e pode
significar que animais soropositivos responderam infeco com uma resposta imune, que
talvez possa ser protetora. A investigao prospectiva no grupo de jaguarundis da FPZSP
poder contribuir para o entendimento desta questo.
No caso de lees mantidos na FPZSP (Tabela 3, Apndice F), foram detectados
anticorpos para lentivrus felinos em diversos animais (Apndice D; CARVALHO et al.,
2004). A deteco de anticorpos direcionados para outras protenas virais mediante Western
blot para este grupo de animais indicou semelhana entre resultados para determinados
animais, enquanto que para outros os resultados no foram concordantes ou foram
questionveis, sugerindo que outros lentivrus felinos, alm do FIV possam estar presentes
nas populaes de lees mantidas em cativeiro nesta instituio e possivelmente em outros
zos no Pas.
A Bartonella henselae est mais implicada com animais de vida livre, provavelmente
em funo de maior exposio a vetores nos ambientes naturais que em cativeiro, onde a
sobrevivncia pelo menos de carrapatos dificultada nos recintos em que os animais vivem
nos zos. As pulgas, incluindo C. felis, so freqentemente encontradas parasitando feldeos
em cativeiro (TEIXEIRA, comunicao pessoal), que devem estar implicadas na
soropositividade observada para a populao avaliada. Desta forma, o controle de pulgas
de fundamental importncia em instituies que mantm feldeos em cativeiro. Alm disso,
seria importante colher e preservar estes potenciais vetores para posteriores anlises de
deteco direta Bartonella henselae mediante tcnicas de PCR.
A Bartonella henselae zoontica, e as mesmas recomendaes para feldeos de vida
livre devem ser adotadas durante o manejo de feldeos em zoolgicos. Finalmente, a
Bartonella henselae foi implicada com insuficincias renais crnicas em gatos domsticos
(GLAUS et al., 1997) e outras condies, de forma que a bartonelose sugere um reexame na
interpretao etiolgica das insuficincias renais e outras condies patolgicas devido
prolongada bacteremia que se verifica. Da mesma forma que a bartonelose pode estar
implicada em casos no elucidados de morbidade e mortalidade de feldeos em zoolgicos, as
erlquias, os hemoplasmas e os protozorios piroplasmas tambm sugerem uma
reinterpretao dos quadros clnicos.
74
5.4 CONSIDERAES FINAIS
A expanso verificada nos ltimos anos em relao a deteco e caracterizao de
novos patgenos mediante o emprego de mtodos moleculares, como por exemplo no caso
dos agentes etiolgicos das erliquioses e piroplasmoses, sugere que a mesma expanso do
conhecimento deva se verificar com relao a outros agentes infecciosos. Os resultados
obtidos sinalizaram a exposio dos animais maior parte dos patgenos investigados, sendo
indicativos de que muitos destes agentes circulam nas populaes de feldeos selvagens de
vida livre e em situao de cativeiro no Brasil. O conhecimento sobre doenas infecciosas em
feldeos neotropicais escasso, e freqentemente os animais cativos so acometidos por
enfermidades de causa no elucidada (observao pessoal). Portanto, de se supor que os
patgenos detectados direta ou indiretamente neste estudo, alguns pela primeira vez,
contribuam nos quadros no diagnosticados de morbidade e/ou mortalidade das populaes
de feldeos selvagens no Pas.
Os agentes pesquisados para os feldeos de cativeiro tambm so mantidos em
espcies abundantes, representadas pelos carnvoros domsticos. Ao contrrio dos demais
feldeos, a populao mundial de gatos e ces domsticos tem aumentado, sendo encontrados
em todos os ambientes onde h ocupao humana. No Brasil, tambm esto ampla e
numerosamente distribudos, presentes em ambientes urbanos, comunidades rurais, reas
adjacentes a parques e reservas naturais. Zoolgicos e outras instituies que mantm animais
em cativeiro, alm da presena gatos domsticos e, lidam com um fator de complicao
adicional: a coexistncia de espcies provenientes das mais diversas localidades geogrficas,
o que aumenta ainda mais o risco de transmisso interespecfica de patgenos.
Um ponto importante que requer considerao ao se interpretar os resultados so as
janelas de sensibilidade para cada uma das infeces estudadas e de acordo com os testes
utilizados. Um teste negativo no corresponde necessariamente ausncia de exposio aos
patgenos investigados. Os ensaios sorolgicos podem fornecer resultados negativos se as
amostras forem colhidas em estgios muito iniciais da infeco, antes do desenvolvimento de
anticorpos especficos ou quando as cargas virais so muito baixas. Para ensaios diretos como
PCR, resultados negativos so esperados no caso da ausncia de vrus no sangue ou nas fezes,
presena de vrus em um outro compartimento do corpo ou ainda aps a completa
recuperao da infeco. A combinao entre exames fsicos, sorologia e PCR para cada
animal amostrado, em um programa contnuo de monitoramento, seria a melhor soluo para
75
maximizar estas janelas de sensibilidade em cada um dos animais amostrados e determinar a
existncia ou ausncia de cada um dos patgenos investigados em todas as regies
geogrficas e zoolgicos avaliados.
O estabelecimento de laboratrios e de meios diagnsticos adequados abrir
perspectivas para estudos de fisiopatologia das doenas e os patgenos especficos podero
ser analisados sob o ponto de vista estrutural e funcional.
O monitoramento destas infeces constitui importante ferramenta de manejo para
populaes ameaadas (DASZAK et al., 2000; MUNSON, 2000; MURRAY et al., 1999), e a
conservao de feldeos selvagens requer uma abordagem integrada e multidisciplinar, em
que :
a) translocaes natureza-natureza, natureza-zoolgicos, zoolgicos-
zoolgicos, reintrodues zoolgicos-natureza, que deveriam ter base
cientfica para acessar os riscos de se introduzir doenas em reas
previamente indenes;
b) determinao das prevalncias das infeces ao longo das reas de
ocorrncia das espcies de feldeos;
c) identificao dos patgenos, seus potenciais hospedeiros e vetores;
d) integrao destes estudos com padres de comportamento e ecolgicos para
acessar os impactos destas infeces em populaes de feldeos de vida
livre;
e) investigao da ocorrncia de infeces em animais domsticos,
principalmente ces e gatos, incluindo os ces treinados utilizados nas
capturas;
f) sistematizao das colheitas de amostras de material biolgico, reduzindo
custos e otimizando esforos;
g) nfase na importncia das medidas preventivas tradicionais ao alojar e
manejar feldeos ou amostras biolgicas de feldeos de forma a evitar a
disseminao iatrognica e zoontica de patgenos;
h) adoo de medidas de preveno de disseminao de agentes infecciosos ao
lidar com feldeos infectados com os agentes pesquisados, controlando
vetores e adotando medidas de segregao.
76
6 CONCLUSES
1) populaes de feldeos selvagens no Brasil esto expostas aos agentes virais: FHV 1,
FCV, FPV, FCoV, FeLV e lentivrus felinos; aos agentes bacterianos: Bartonella
henselae, Ehrlichia canis e os hemoplasmas Mycoplasma haemofelis, Candidatus
Mycoplasma haemominutum; assim como aos protozorios piroplasmas Cytauxzoon sp;
2) carnvoros domsticos representam risco de transmisso interespecfica dos patgenos
(agentes virais FHV 1, FCV, FPV, FCoV, FeLV, FIV; agentes bacterianos Bartonella
henselae, Ehrlichia canis, hemoplasmas Mycoplasma haemofelis e Candidatus
Mycoplasma haemominutum; assim como Cytauxzoon sp) para feldeos selvagens em
vida livre ou em situao de cativeiro; da mesma forma feldeos selvagens podem
constituir fontes de infeco de tais patgenos para carnvoros domsticos;
3) contribuem nos quadros no diagnosticados de morbidade e/ou mortalidade das
populaes de feldeos selvagens no Pas: os agentes virais FHV 1, FCV, FPV, FCoV; os
agentes bacterianos: Bartonella henselae, hemoplasmas (Mycoplasma haemofelis e
Candidatus Mycoplasma haemominutum), Ehrlichia canis ou agentes antigenicamente
relacionados e o piroplasma Cytauxzoon sp;
4) as populaes de feldeos selvagens no Pas podem ser reservatrios de Bartonella
henselae, constituindo risco para transmisso de zoonoses;
5) testes sorolgicos indiretos e testes de deteco direta de patgenos TaqMan so
adequados para compor o repertrio de tcnicas em laboratrios de referncia no Pas,
para investigao de enfermidades infecciosas em animais selvagens, de maneira que:
a) agentes etiolgicos sejam investigados laboratorialmente em tempo hbil para
tratamento e/ou segregao em casos de enfermidades em que sinais clnicos
compatveis estejam presentes;
b) sejam adotados em protocolos preventivos para o manejo de feldeos selvagens no
Pas, em procedimentos/situaes tais como translocaes, quarentenas,
manuteno e monitoramento de feldeos selvagens;
77
c) Potenciais vetores, como pulgas e carrapatos, devem ser identificados e analisados
para a presena de agentes dos gneros Bartonella, Ehrlichia e Anaplasma;
6) este o primeiro relato de anticorpos para Ehrlichia canis ou agentes relacionados em
suuaranas ou pumas (Puma concolor);
7) este o primeiro relato de infeco por FeLV em jaguarundis (Herpailurus yaguarondi).
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92
APNDICE A Descrio das amostras de feldeos de vida livre fornecidas pelo Centro Nacional
de Pesquisas para a Conservao de Predadores Naturais (CENAP), Centro
Especializado do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos
Naturais Renovveis (IBAMA). So Paulo, 2004
Identificao
dos animais
1
Data de
colheita
Sexo
Faixa
etria
Procedncia dos animais
Material
biolgico
Regio/Bioma Municpio/UF
2
Puma
concolor
n = 19
3 07/01/03 macho filhote Norte/ Floresta Amaznica Vilhena/ RO soro
1 05/04/02 macho adulto Centro-Oeste/Pantanal Baro de Melgao/ MT soro
9 21/01/02 fmea adulta Centro-Oeste/Pantanal Baro de Melgao/ MT soro
11 21/01/02 fmea filhote Centro-Oeste/Pantanal Baro de Melgao/ MT soro
19 21/01/02 macho filhote Centro-Oeste/Pantanal Baro de Melgao/ MT soro
15 06/09/02 fmea jovem Centro-Oeste/ Cerrado Corumb/ MS soro
16 06/09/02 macho jovem Centro-Oeste/ Cerrado Corumb/ MS soro
7 07/06/98 fmea adulta Centro-Oeste/ Cerrado Bataguassu/ MS soro
12 06/09/02 macho jovem Centro-Oeste/ Cerrado Jardim/ MS soro
13 06/09/02 macho jovem Centro-Oeste/ Cerrado Jardim/ MS soro
14 06/09/02 macho filhote Centro-Oeste/ Cerrado Ponta Por/ MS soro
6 03/12/98 fmea adulta Sul/Floresta Atlntica
Parque Nacional do
Iguau /PR soro
10 04/07/02 macho jovem Sudeste/ Floresta Atlntica Serra da Cantareira/ SP soro
17 16/08/04 macho adulto Sudeste/ Floresta Atlntica Ilha Solteira/ SP soro
Leopardus
pardalis
n = 2

18 10/11/03 fmea adulta Norte/ Floresta Amaznica Rio Branco/ AC soro
22 ... ... ... Sul/Floresta Atlntica Balsa Nova/ PR sangue
Leopardus
tigrinus
n = 2

20 17/09/03 fmea adulta Sudeste/ Floresta Atlntica Ubatuba/ SP soro, fezes
21 08/03/04 fmea adulta Sudeste/ Floresta Atlntica Nova Friburgo/ RJ soro

1
= Identificao das amostras segundo os nmeros de registro no Banco de Amostras Biolgicas do Centro Nacional de Pesquisas
para a Conservao de Predadores Naturais (CENAP), Centro Especializado do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos
Recursos Naturais Renovveis (IBAMA): 1 = B61c1609; 2 = 061c6047; 3 = 061bc05f; 4 = 0610a655; 5 = 0610a16c; 6 = PNI
Juliana; 7 = Totti 7/6/98; 8 = 061c6683; 9 = 0610d9a3; 10 = 0001f9adf1; 11 = 06110af3b; 12 = 000610d48f; 13 = 000610a00a; 14
= 000610aa3b; 15 = 00061c4d0f; 16 = 000610c60e; 17 = 1013; 18 = 004; 19 = 061bd88c; 20 = 003; 21 = 61431; 22 = 301.
2
UF = Unidade da Federao
3
... = dados no disponveis.
93
APNDICE B Descrio das amostras de feldeos mantidos em cativeiro fornecidas pela
Fundao Parque Zoolgico de So Paulo (FPZSP). So Paulo, 2001-2004
(continua)
Identificao
dos animais
(CAD)
1
Sexo
Faixa
etria
Procedncia dos animais Material biolgico
Tipo Localidade
2
Feldeos
neotropicais

Puma
concolor
n = 2

18687 macho adulto vida livre MS soro, papa de leuccitos
20421 fmea adulta vida livre SP soro, papa de leuccitos

Herpailurus
yagouarondi
n = 23

20761 macho adulto cativeiro FPZSP, SP
soro, papa de leuccitos, suabe
oral
20762 fmea adulta cativeiro FPZSP, SP soro, sangue em EDTA
21566 fmea adulta vida livre Limeira, SP soro, sangue em EDTA
21810 macho adulto cativeiro FPZSP, SP soro, papa de leuccitos
23911 macho adulto cativeiro FPZSP, SP soro, sangue em EDTA
24142 fmea adulta vida livre Ribeiro Preto, SP soro, sangue em EDTA
24189 macho adulto cativeiro FPZSP, SP soro, papa de leuccitos em PBS
soro, leuccitos extrados com
Ficoll
soro, leuccitos extrados com
Ficoll
25846 macho adulto cativeiro FPZSP, SP soro, papa de leuccitos em PBS
26005 fmea adulta vida livre Ilha Solteira, SP plasma, sangue em EDTA
28018 fmea adulta cativeiro FPZSP, SP plasma, sangue em EDTA

Leopardus
pardalis
n = 6

17312 fmea adulta cativeiro FPZSP, SP soro, papa de leuccitos
18776 macho adulto vida livre ...
3
papa de leuccitos
22028 fmea adulta vida livre provvel litoral sul, SP soro, papa de leuccitos
22732 macho adulto vida livre Mairipor, SP soro, papa de leuccitos
94
(continuao)
Identificao
dos animais
(CAD)
1
Sexo
Faixa
etria
Tipo Localidade
2

Leopardus
tigrinus
n = 33

18781 macho adulto vida livre soro, papa de leuccitos
19156 macho adulto vida livre provvel SP soro, papa de leuccitos
19235 macho adulto vida livre provvel GO soro, sangue em EDTA
19250 macho adulto vida livre Bauru, SP plasma, sangue em EDTA
20287 fmea adulta vida livre provvel SC soro, sangue em EDTA
20913 fmea adulta vida livre Dourado, SP plasma, papa de leuccitos
21292 macho adulto vida livre soro, sangue em EDTA
21537 macho adulto vida livre Braslia, DF soro, sangue em EDTA
21809 fmea adulta vida livre provvel SP soro, papa de leuccitos
22101 fmea adulta vida livre soro, sangue em EDTA
22111 fmea adulta vida livre soro, papa de leuccitos
22347 fmea adulta vida livre provvel SP soro, papa de leuccitos
22641 fmea adulta vida livre Belo Horizonte, MG soro, papa de leuccitos
23608 macho adulto vida livre Belo Horizonte, MG soro, papa de leuccitos
26118 macho adulto vida livre plasma, sangue em EDTA

Leopardus
wiedii
n = 10

22102 macho adulto vida livre Belm, PA soro

95
(continuao)
Identificao
dos animais
(CAD)
1
Sexo
Faixa
etria
Tipo Localidade
2

Oncifelis
geofffroyi
n = 13

20769 macho adulto vida livre RS soro, sangue em EDTA
25617 macho adulto cativeiro Uruguai soro, papa de leuccitos
25618 fmea adulto cativeiro Uruguai soro, papa de leuccitos
25619 fmea adulta cativeiro Uruguai soro
25936 fmea adulta cativeiro FPZSP, SP plasma, papa de leuccitos
26432 macho adulto cativeiro FPZSP, SP plasma, papa de leuccitos
28022 fmea adulta cativeiro Uruguai soro
28154 fmea adulta cativeiro FPZSP, SP soro
28155 macho adulto cativeiro FPZSP, SP soro

Oncifelis
colocolo
n = 10

20034 macho adulto cativeiro Zo de Goinia, GO plasma
20245 macho adulto vida livre Rondonpolis, MT soro, papa de leuccitos
21866 macho adulto vida livre
soro, papa de leuccitos em
meio MEM
23070 fmea adulta vida livre RS
meio MEM
23672 fmea adulta vida livre Braslia, DF
meio MEM
23879 fmea adulta cativeiro RS
meio MEM
27915 fmea adulta cativeiro Zo de Braslia, DF soro
Feldeos
exticos
Panthera leo
n = 30

19696
4
fmea adulta cativeiro FPZSP, SP soro, sangue em EDTA
20408 fmea adulto cativeiro FPZSP, SP soro, papa de leuccitos
20423 fmea adulta cativeiro apreenso circo, SP soro
96
(continuao)
Identificao
dos animais
(CAD)
1
Sexo
Faixa
etria
Tipo Localidade
2

20748 macho adulto cativeiro
apreenso Santa Isabel,
SP
soro
26281 macho adulto cativeiro apreenso circo, SP soro
26294 macho adulto cativeiro apreenso, SP soro
26304 fmea adulta cativeiro apreenso circo, SP soro

Panthera
tigris altaica
n = 13

19846 macho adulto cativeiro Holanda soro, papa de leuccitos
19849 macho adulto cativeiro Holanda soro, sangue em EDTA
19850 fmea adulta cativeiro Holanda soro, papa de leuccitos

Uncia uncia
n = 2

23071 macho adulto cativeiro EUA soro, papa de leuccitos
23072 fmea adulta cativeiro EUA soro, papa de leuccitos

Panthera
pardus
n = 4
97
(concluso)
Identificao
dos animais
(CAD)
1
Sexo
Faixa
etria
Tipo Localidade
2

Acinonyx
jubatus
n = 2

25514 fmea adulta cativeiro SC soro, papa de leuccitos
22597 macho adulto cativeiro frica do Sul soro, papa de leuccitos
1
CAD = nmero do cadastro individual dos animais na FPZSP, SP.
2
Localidade = instituies, municipos, siglas referentes s respectivas Unidades da Federao do Brasil ou pases de
origem de animais importados.
3
... = dados no disponveis.
4
CAD 19696 = espcime de Panthera leo cujas amostras foram obtidas na necrpsia, em 2001.
98
APNDICE C Descrio das amostras de feldeos neotropicais mantidos em cativeiro
fornecidas pela Associao Mata Ciliar (AMC). So Paulo, 2004
(continua)
Identificao
dos animais
1
Sexo
Faixa
etria
Material
biolgico
Tipo Localidade
2
Puma concolor
n = 12

SABIA macho AMC, Jundia/SP soro
SB022 macho Zo de Cuiab /MT soro
SB031 fmea Zo de Goinia /GO soro
SB050 fmea Zo de Recife /PE soro
SB073 macho Criadouro Cariu/AM soro
SB077 macho 2 BIS Belm /PA soro
SB083 fmea Zo de Carajs /PA soro
SB098 macho Zo de Braslia /DF soro
SB126 fmea Ilha Solteira Zo/SP soro
SB131 fmea Zo de Andradina /MG soro
SB148 fmea Zo de Sapucaia do Sul /RS soro
SHOGUN macho Criadouro Ozelot/MG soro

Herpailurus
yagouarondi
n = 10

SB006 macho Zo de Mogi Mirim /SP soro
SB007 fmea Zo de Maring /PR soro
SB010 macho Zo de Campinas /SP soro
SB027 macho Criadouro AMC, Jundia/SP soro
SB028 fmea Criadouro AMC/SP soro
SB044 fmea Zo de Goinia /GO soro
SB046 fmea Zo de Cuiab /MT soro
SB063 fmea Zo de Cascavel /PR soro
SB065 macho 1 BIS Manaus /AM soro
SB082 macho CASIB, Foz do Iguau /PR soro

Leopardus
pardalis
n = 10

KIKO macho Criadouro Ozelot /MG soro
LILLY fmea Criadouro Ozelot /MG soro
SB007 fmea Zo de So Bernardo do Campo /SP soro
SB014 macho Zo de Carajs /PA soro
SB015 fmea Zo de Campinas /SP soro
SB019 macho Zo de Uberaba /MG soro
SB053 macho Zo de Curitiba /PR soro
SB074 fmea Zo de Recife /PE soro
SB086 fmea CIGS Manaus /AM soro
SB110 fmea CASIB Foz do Iguau /PR soro
SB111 macho CASIB Foz do Iguau /PR soro
SB121 macho Zo de Santa Maria /RS soro
SB122 fmea Zo de Santa Maria /RS soro
SB124 macho Zo de Cachoeira do Sul /RS soro
SB125 fmea Zo de Cachoeira do Sul /RS soro
SB126 macho Zo de Sapucaia do Sul /RS soro
99
(continuao)
Identificao
dos animais
1
Sexo
Faixa
etria
Material
biolgico
Tipo Localidade
2

SB151 fmea Zo de Uberlndia /MG soro
SB209 macho Zo de Varginha /MG soro
SB231 macho Criadouro AMC, Jundia /SP soro
SB233 fmea Criadouro AMC, Jundia /SP soro

Leopardus
wiedii
n = 10

SB041 fmea Zo de Curitiba /PR soro
SB045 macho Zo de Curitiba /PR soro
SB050 fmea Criadouro Klabin /PR soro
SB051 fmea Criadouro Klabin /PR soro
SB052 macho Zo de Maring /PR soro
SB054 fmea CASIB Foz do Iguau /PR soro
SB055 macho CASIB Foz do Iguau /PR soro
THUNGA fmea Criadouro Ozelot /MG soro

Oncifelis
geofffroyi
n = 10

SB001 macho Criadouro AMC, Jundia /SP soro
SB006 fmea Zo de Sapucaia do Sul /RS soro

1
As amostras so identificadas com os nmeros individuais e intransferveis de registro de Studbook (SB) dos animais ou
com apelidos provisrios.
2
Localidade = instituies ou municipos e siglas referentes s respectivas Unidades da Federao do Brasil.
100
APNDICE D - CARVALHO, V. M.; COUTINHO, S. D.; FILONI, C.; PEREIRA, A. P. C.;
CORRA, S. H.; TEIXEIRA, R. H.; CATO-DIAS, J. L. Serosurvey for
the feline leukemia vrus and lentiviruses in captive felids at Fundao
Parque Zoolgico de So Paulo, So Paulo state, Brazil. In: HEALTH
AND CONSERVATION OF CAPTIVE AND FREE-RANGING
WILDLIFE, 2004, San Diego, California, USA. ProceedingsSan
Diego: American Association of zoo Veterinarians, American Association
of Wildlife Veterinarians, Wildlife Disease Association, 2004. P. 538-539.
101
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111
APNDICE G Resultados dos testes sorolgicos realizados nas amostras de feldeos
cedidas pela Associao Mata Ciliar (AMC), distribudos em funo dos
mtodos empregados e dos patgenos pesquisados. So Paulo, 2004
(continua)
IFA
2
Western
blot
ELISA Espcies/
Identificao
das amostras
1
FHV 1 FCV FCoV FPV
Ehrlichia
canis FeLV
indireto
FeLV gp70
Puma concolor
n=12

SABI P (40)
3
-
4
- P (160) -
5
-
SB022 - - P (100) P (40) - -
SB031 - P (160) P (400) P (20) - -
SB050 - - - P (160) - -
SB073 - P (80) P (100) P (160) - P
SB077 - - - P (1280) - -
SB083 P(320)
b
- P (400) - - -
SB098 - P (20) P (100) P (80) - -
SB126 - - - - - -
SB131 - - - P (160) - -
SB148 - P (640) - - - -
SHOGUN - P (40) P (25) P (640) - -

Herpailurus
yaguarondi
n=10

SB006 P (160) P (80) P (1600) P (640) - - P
SB007 - P (160) - - - -
SB010 - - P (400) P (160) - -
SB027 - P (40) P (100) P (80) - -
SB028 - - - - - -
SB044 - - - P (640) - -
SB046 - - - - - P
SB063 - - - P (640) - -
SB065 - - P (100) - - -
SB082 - - - - - -

Leopardus
pardalis
n=10

SB014 - P (40) P (100) - P (320) P
SB015 - P (160) P (100) P (320) - -
SB019 - P (80) P (100) P (160) - -
SB053 P (80) - P (400) P (320) - P
SB074 - - - P (320) - -
SB086 - P (20) P (400) - - P
SB151 - P (160) - P (5120) - -
SB209 - - P (100) P (320) - -
SB231 - P (231) P (400) P (640) - -
SB233 - - - - - P

Leopardus
tigrinus
n=10

KIKO P (40) P (320) P (100) P (320) - P
LILLY P (160) P (320) P (100) P (640) - -
SB007 - - - P (640) - P
SB110 - - - - - P
112
(concluso)
IFA
2
Western
blot
ELISA
Espcies/
Identificao
das amostras
1
FHV 1 FCV FCoV FPV
Ehrlichia
canis FeLV
indireto
FeLV gp70
SB111 - - - - - P
SB121 - - P (25) P (640) - - P
SB122 - - - P (640) - P
SB124 - P (40) P (25) P (320) - -
SB125 - P (80) P (100) P (160) - P
SB126 - P (800 - P (320) - P

Leopardus wiedii
n=10

SB041 P (160) P (20) - P (40) - -
SB045 P (160) - - P (160) - -
SB050 - - P (25) P (160) - - P
SB051 - - - P (80) - -
SB052 - - P (100) - - -
SB054 - - - - - -
SB055 - - - - - -
SB057 - P (40) P (400) P (160) - -
SB058 P (20) P (1280) - - - P
THUNGA P (320) P (320) P (25) P (320) - -

Oncifelis
geoffroyi
n=10

SB001 P (20) - - P (80) - -
SB002 - P (160) - P (80) - -
SB003 - P (320) - P (160) - -
SB004 - P (320) - P (20) - -
SB005 - P (160) P (100) P (320) - P
SB006 - P (160) - - - -
SB007 P (20) P (80) - P (1280) - -
SB008 - P (160) - P (320) - -
SB009 - P (320) P (25) P (20) - P
SB010 - P (160) P (100) P (160) - P

Amplitude dos
ttulos IFA 20-320 20/1280 25-1600 20-5120 320
Total resultados
positivos/
total de amostras
analisadas
12/62 32/62 29/62 44/62 1/62 0/3 10/62

1
As amostras so identificadas com os nmeros individuais e intransferveis de registro de Studbook (SB) dos animais
ou com apelidos provisrios.
2
IFA = Imunofluorescncia indireta. Os ttulos de anticorpos so relatados como recprocas das respectivas diluies
de soro. Ttulos negativos foram definidos como < 20 para FHV 1, FCV, FPV, FCoV, < 80 para E. canis e < 64 para B.
henselae, respectivamente.
4
P = Resultados positivos. Os nmeros em parnteses aps os resultados de IFA representam o ttulo de anticorpos
para a amostra considerada.
5
6
...= Testes no realizados.
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119
APNDICE I FILONI, C.; CATO-DIAS, J. L.; BAY, G.; DURIGON, E. L.; JORGE, R.
S. P.; LUTZ, H.; HOFMANN-LEHMANN, R. H. First Evidence of Feline
Herpesvirus, Calicivirus, Parvovirus, and Ehrlichia Exposure in Brazilian
Free-ranging Felids. Journal of Wildlife Diseases, v. 42, n.2, p. 000-000,
2006. (no prelo).
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