Manual Bioseguridad OMS

Organizacin Mundial de la Salud
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ISBN 92 4 354650 3
MANUAL DE
BIOSEGURIDAD EN
EL LABORATORIO
Tercera edicin
Durante los ms de 20 aos transcurridos desde su primera publica-
cin en 1983, el Manual de bioseguridad en el laboratorio ha propor-
cionado orientacin prctica sobre las tcnicas de bioseguridad a los
laboratorios de todos los niveles. Las tcnicas microbiolgicas apro-
piadas y el uso correcto del equipo de bioseguridad por personal bien
adiestrado siguen siendo los pilares fundamentales de la bioseguridad
en el laboratorio. Sin embargo, la globalizacin, los importantes avan-
ces tecnolgicos, la aparicin de nuevas enfermedades y las graves
amenazas que suponen el uso indebido y la liberacin intencionados
de agentes microbiolgicos y toxinas han hecho necesario revisar los
procedimientos conocidos. En consecuencia, para esta nueva edicin
el manual ha sido profundamente revisado y ampliado.
El nuevo manual abarca la evaluacin de riesgos y el uso de la tecno-
loga del ADN recombinante en condiciones de seguridad y ofrece
directrices para la puesta en servicio y la certificacin de los laborato-
rios. Se presentan conceptos de proteccin biolgica y se reflejan las
normas ms recientes para el transporte de sustancias infecciosas.
Tambin se han incorporado materiales sobre la seguridad en los
laboratorios asistenciales que han sido publicados previamente por la
OMS en otros documentos.
Es de esperar que el manual siga sirviendo de estmulo para que los
pases implanten programas de seguridad biolgica y cdigos de
prcticas nacionales para la manipulacin sin riesgo de material
potencialmente infeccioso.
MANUAL DE BIOSEGURIDAD
EN EL LABORATORIO
Tercera Edicin
ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD
Ginebra
2005
Catalogacin por la Biblioteca de la OMS
Organizacin Mundial de la Salud.
Manual de bioseguridad en el laboratorio. 3
a
ed.
1.Contencin de riesgos biolgicos 2.Laboratorios normas
3.Infeccin de laboratorio prevencin y control 4.Manuales I.Ttulo.
ISBN 92 4 354650 3 (Clasicacin LC/NLM: QY 25)
Esta publicacin ha contado con el apoyo de la Donacin/Acuerdo de Cooperacin N
U50/CCU012445-08 de los Centros para el Control y la Prevencin de Enfermedades (CDC),
Atlanta, GA (EE.UU.). Su contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa
necesariamente la opinin ocial de los CDC.
Organizacin Mundial de la Salud, 2005
Se reservan todos los derechos. Las publicaciones de la Organizacin Mundial de la Salud
pueden solicitarse a Ediciones de la OMS, Organizacin Mundial de la Salud, 20 Avenue
Appia, 1211 Ginebra 27, Suiza (tel.: +41 22 791 2476; fax: +41 22 791 4857; correo electrnico:
bookorders@who.int). Las solicitudes de autorizacin para reproducir o traducir las publica-
ciones de la OMS ya sea para la venta o para la distribucin sin nes comerciales deben
dirigirse a Ediciones de la OMS, a la direccin precitada (fax: +41 22 791 4806; correo elec-
trnico: permissions@who.int).
Las denominaciones empleadas en esta publicacin y la forma en que aparecen presentados
los datos que contiene no implican, por parte de la Organizacin Mundial de la Salud, juicio
alguno sobre la condicin jurdica de pases, territorios, ciudades o zonas, o de sus autoridades,
ni respecto del trazado de sus fronteras o lmites. Las lneas discontinuas en los mapas repre-
sentan de manera aproximada fronteras respecto de las cuales puede que no haya pleno acuerdo.
La mencin de determinadas sociedades mercantiles o de nombres comerciales de ciertos
productos no implica que la Organizacin Mundial de la Salud los apruebe o recomiende con
preferencia a otros anlogos. Salvo error u omisin, las denominaciones de productos patenta-
dos llevan letra inicial mayscula.
La Organizacin Mundial de la Salud ha adoptado todas las precauciones razonables para
vericar la informacin que gura en la presente publicacin, no obstante lo cual, el material
publicado se distribuye sin garanta de ningn tipo, ni explcita ni implcita. El lector es respon-
sable de la interpretacin y el uso que haga de ese material, y en ningn caso la Organizacin
Mundial de la Salud podr ser considerada responsable de dao alguno causado por su
utilizacin.
Diseo: minimum graphics
Impreso en Malta
iii
Prefacio viii
Agradecimientos x
1. Principios generales 1
Introduccin 1
PARTE I Directrices en materia de bioseguridad 5
2. Evaluacin del riesgo microbiolgico 7
Muestras para las que se dispone de informacin limitada 8
Evaluacin de riesgos y microorganismos genticamente modicados 8
3. Laboratorios bsicos niveles de bioseguridad 1 y 2 9
Cdigo de prcticas 9
Diseo e instalaciones del laboratorio 12
Material de laboratorio 15
Vigilancia mdica y sanitaria 16
Capacitacin 17
Manipulacin de desechos 18
Seguridad qumica, elctrica y radiolgica, proteccin contra incendios
y material de seguridad 20
4. El laboratorio de contencin nivel de bioseguridad 3 21
Cdigo de prcticas 21
Vigilancia mdica y sanitaria 24
5. El laboratorio de contencin mxima nivel de bioseguridad 4 26
Cdigo de prcticas 26
6. Animalarios 30
Animalarios nivel de bioseguridad 1 31
ndice
MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
iv
Invertebrados 34
7. Directrices para la puesta en servicio de laboratorios e instalaciones 36
8. Directrices para la certicacin de laboratorios e instalaciones 39
PARTE II Bioproteccin en el laboratorio 47
9. Conceptos de bioproteccin en el laboratorio 49
PARTE III Equipo de laboratorio 53
10. Cmaras de seguridad biolgica 55
Cmaras de seguridad biolgica de clase I 56
Cmaras de seguridad biolgica de clase II 57
Cmaras de seguridad biolgica de clase III 60
Conexiones de aire de las cmaras de seguridad biolgica 60
Eleccin de una cmara de seguridad biolgica 62
Uso de las cmaras de seguridad biolgica en el laboratorio 62
11. Equipo de seguridad 66
Cmaras aislantes de material exible y presin negativa 66
Dispositivos de pipeteo 68
Homogeneizadores, agitadores, mezcladores y desintegradores
ultrasnicos 69
Asas desechables 69
Microincineradores 69
Ropas y equipo de proteccin personal 70
PARTE IV Tcnicas microbiolgicas apropiadas 73
12. Tcnicas de laboratorio 75
Manipulacin segura de muestras en el laboratorio 75
Uso de pipetas y dispositivos de pipeteo 76
Tcnicas para evitar la dispersin de material infeccioso 76
Uso de las cmaras de seguridad biolgica 77
Tcnicas para evitar la ingestin de material infeccioso y su contacto
con la piel y los ojos 77
Tcnicas para evitar la inyeccin de material infeccioso 78
Separacin de suero 78
Uso de las centrifugadoras 78
Uso de homogeneizadores, agitadores, mezcladores y desintegradores
ultrasnicos 79
NDICE
v
Uso de trituradores de tejidos 80
Mantenimiento y uso de refrigeradores y congeladores 80
Tcnicas para abrir ampollas que contengan material infeccioso liolizado 80
Almacenamiento de ampollas que contengan material infeccioso 81
Precauciones normalizadas en relacin con la sangre y otros lquidos
corporales, tejidos y excreciones 81
Precauciones con materiales que puedan contener priones 83
13. Planes de contingencia y procedimientos de emergencia 85
Plan de contingencia 85
Procedimientos de emergencia para laboratorios de microbiologa 86
14. Desinfeccin y esterilizacin 89
Deniciones 89
Limpieza del material de laboratorio 90
Germicidas qumicos 90
Descontaminacin de espacios y supercies 96
Descontaminacin de cmaras de seguridad biolgica 97
Lavado y descontaminacin de las manos 98
Desinfeccin y esterilizacin por calor 98
Incineracin 101
Eliminacin de desechos 101
15. Introduccin al transporte de sustancias infecciosas 102
Reglamentacin internacional en materia de transportes 102
El sistema bsico de embalaje/envasado triple 103
Procedimiento de limpieza de derrames 103
PARTE V Introduccin a la biotecnologa 107
16. Bioseguridad y tecnologa del ADN recombinante 109
Consideraciones de bioseguridad en relacin con los sistemas de
expresin biolgica 110
Consideraciones de bioseguridad en relacin con los vectores
de expresin 110
Vectores vricos para la transferencia de genes 110
Animales transgnicos y con genes inactivados (knock-out) 110
Plantas transgnicas 111
Evaluacin de riesgos en relacin con los organismos genticamente
modicados 111
Otras consideraciones 112
vi
PARTE VI Seguridad qumica y elctrica y proteccin contra incendios 115
17. Sustancias qumicas peligrosas 117
Vas de exposicin 117
Almacenamiento de sustancias qumicas 117
Normas generales en relacin con las incompatibilidades qumicas 117
Efectos txicos de las sustancias qumicas 117
Sustancias qumicas explosivas 118
Derrame de sustancias qumicas 118
Gases comprimidos y licuados 120
18. Otros peligros en el laboratorio 121
Peligro de incendio 121
Peligros elctricos 122
Ruido 122
Radiaciones ionizantes 123
PARTE VII Organizacin y formacin en materia de seguridad 127
19. El funcionario de bioseguridad y el comit de bioseguridad 129
Funcionario de bioseguridad 129
Comit de bioseguridad 130
20. Reglas de seguridad para el personal de apoyo 132
Mecnicos y personal de mantenimiento del edicio 132
Personal de limpieza 132
21. Programas de capacitacin 133
PARTE VIII Lista de comprobacin de la seguridad 135
22 Lista de comprobacin de la seguridad 137
Locales del laboratorio 137
Locales de almacenamiento 138
Instalaciones de saneamiento y destinadas al personal 138
Calefaccin y ventilacin 138
Alumbrado 138
Servicios 139
Bioproteccin en el laboratorio 139
Prevencin de incendios 139
Almacenamiento de lquidos inamables 140
Gases comprimidos y licuados 141
Peligros elctricos 141
NDICE
vii
Proteccin personal 141
Salud y seguridad del personal 142
Material infeccioso 143
Sustancias qumicas y radiactivas 143
PARTE IX Referencias, anexos e ndice alfabtico 145
Referencias 147
ANEXO 1 Primeros auxilios 151
ANEXO 2 Inmunizacin del personal 152
ANEXO 3 Centros Colaboradores de la OMS en materia de bioseguridad 153
ANEXO 4 Seguridad del material 154
ANEXO 5 Sustancias qumicas: peligros y precauciones 158
ndice alfabtico 202
viii
Hace tiempo que la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) reconoce que la seguri-
dad y, en particular, la seguridad biolgica son importantes cuestiones de inters inter-
nacional. La OMS public la primera edicin del Manual de bioseguridad en el
laboratorio en 1983. En ella se alentaba a los pases a aceptar y aplicar conceptos bsicos
en materia de seguridad biolgica y a elaborar cdigos nacionales de prcticas para la
manipulacin sin riesgo de microorganismos patgenos en los laboratorios que se
encuentran dentro de sus fronteras nacionales. Desde 1983, muchos pases han
seguido la orientacin especializada que se ofrece en el manual para elaborar esos
cdigos de prcticas. En 1993 se public una segunda edicin del manual.
En esta tercera edicin del manual, la OMS sigue proporcionando liderazgo
internacional en materia de bioseguridad al abordar los aspectos de la seguridad y la
proteccin biolgica que se plantean en el nuevo milenio. A lo largo de toda la pu-
blicacin se subraya la importancia de la responsabilidad personal. Se han incluido
nuevos captulos que se ocupan de la evaluacin de riesgos, el uso de las tecnologas
del ADN recombinante en condiciones de seguridad y el transporte de material infec-
cioso. Los recientes acontecimientos mundiales han puesto de maniesto la existen-
cia de nuevas amenazas para la salud pblica derivadas de la liberacin o el uso
indebido deliberados de agentes y toxinas microbianos. Por consiguiente, en la pre-
sente edicin del manual tambin se introduce el concepto de bioproteccin, es decir,
la proteccin del material microbiolgico contra el robo, la prdida o la desviacin
para evitar que esos agentes se puedan utilizar de forma indebida con el n de
atentar contra la salud pblica. Esta edicin tambin contiene informacin sobre
seguridad tomada de Safety in health-care laboratories (1), que public la OMS
en 1997.
La tercera edicin del Manual de bioseguridad en el laboratorio de la OMS ser de
utilidad como referencia y orientacin para los pases que acepten el reto de elaborar
y establecer cdigos nacionales de prcticas con miras a proteger esos bienes micro-
Prefacio
PREFACIO
ix
biolgicos y al mismo tiempo garantizar su disponibilidad para nes clnicos, de inves-
tigacin y epidemiolgicos.
Dr. A. Asamoah-Baah
Subdirector General
Enfermedades Transmisibles
Organizacin Mundial de la Salud
Ginebra (Suiza)
x
La preparacin de la presente edicin del Manual de bioseguridad en el laboratorio ha
sido posible gracias a las contribuciones de las siguientes personas, a las que se
reconoce con gratitud la aportacin de sus conocimientos especializados:
Dr. W. Emmett Barkley. Instituto Mdico Howard Hughes, Chevy Chase, MD
(EE.UU.).
Dr. Murray L. Cohen (jubilado). Centros para el Control y la Prevencin de
Enfermedades, Atlanta, GA (EE.UU.).
Dra. Ingegerd Kallings. Instituto Sueco de Lucha contra las Enfermedades Infecciosas,
Estocolmo (Suecia).
Sra. Mary Ellen Kennedy. Consultora especializada en bioseguridad, Ashton, Ontario
(Canad).
Sra. Margery Kennett (jubilada). Laboratorio de Referencia de Victoria para las
Enfermedades Infecciosas, North Melbourne (Australia).
Dr. Richard Knudsen. Ocina de Salud y Seguridad, Centros para el Control y la
Prevencin de Enfermedades, Atlanta, GA (EE.UU.).
Dra. Nicoletta Previsani. Programa de Bioseguridad, Organizacin Mundial de la
Salud, Ginebra (Suiza).
Dr. Jonathan Richmond (jubilado). Ocina de Salud y Seguridad, Centros para el
Control y la Prevencin de Enfermedades, Atlanta, GA (EE.UU.).
Dr. Syed A. Sattar. Facultad de Medicina, Universidad de Ottawa, Ottawa, Ontario
(Canad).
Dra. Deborah E. Wilson, Divisin de Salud y Seguridad Ocupacional, Institutos
Nacionales de la Salud, Washington D.C. (EE.UU.).
Dr. Riccardo Wittek, Instituto de Biologa Animal, Universidad de Lausana, Lausana
(Suiza).
La OMS expresa asimismo su gratitud a las siguientes personas por su asistencia:
Sra. Maureen Best, Ocina de Seguridad en el Laboratorio, Health Canada, Ottawa
(Canad).
Dr. Mike Catton, Laboratorio de Referencia de Victoria para las Enfermedades
Infecciosas, North Melbourne (Australia).
Agradecimientos
AGRADECIMIENTOS
xi
Dra. Shanna Nesby, Ocina de Salud y Seguridad, Centros para el Control y la
Prevencin de Enfermedades, Atlanta, GA (EE.UU.).
Dr. Stefan Wagener, Centro de Ciencias de la Salud Humana y Animal del Canad,
Winnipeg (Canad).
Los redactores y revisores desean reconocer tambin las aportaciones originales de los
numerosos profesionales cuya labor qued recogida en las ediciones primera y
segunda del Manual de bioseguridad en el laboratorio y en Safety in health-care labo-
ratories (1), publicada por la OMS en 1997.
1
1. Principios generales
Introduccin
A lo largo de todo este manual, se hace referencia a los peligros relativos que entraan
los microorganismos infecciosos, clasicados por grupos de riesgo (grupos de riesgo
1, 2, 3 y 4 (OMS)). Esta clasicacin por grupos de riesgo se utilizar exclusiva-
mente para el trabajo de laboratorio. En el cuadro 1 se describen esos grupos de
riesgo.
Cuadro 1. Clasicacin de los microorganismos infecciosos por grupos de riesgo
Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo)
Microorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano
o los animales.
Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo)
Agentes patgenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que tienen
pocas probabilidades de entraar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la poblacin,
el ganado o el medio ambiente. La exposicin en el laboratorio puede provocar una infeccin
grave, pero existen medidas preventivas y teraputicas ecaces y el riesgo de propagacin es
limitado.
Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo)
Agentes patgenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales graves, pero que
de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y teraputicas
ecaces.
Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado)
Agentes patgenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales
y que se transmiten fcilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente. Normalmente
no existen medidas preventivas y teraputicas ecaces.
Los laboratorios se clasican como sigue: laboratorio bsico nivel de bioseguri-
dad 1; laboratorio bsico nivel de bioseguridad 2; laboratorio de contencin nivel
de bioseguridad 3, y laboratorio de contencin mxima nivel de bioseguridad 4. Las
designaciones del nivel de bioseguridad se basan en una combinacin de las carac-
tersticas de diseo, construccin, medios de contencin, equipo, prcticas y proced-
imientos de operacin necesarios para trabajar con agentes patgenos de los distintos
grupos de riesgo. En el cuadro 2 se relacionan, no se equiparan, los grupos de riesgo
con el nivel de bioseguridad de los laboratorios destinados al trabajo con micro-
organismos de cada uno de esos grupos.
Los pases o regiones debern elaborar una clasicacin nacional o regional de los
microorganismos en grupos de riesgo, teniendo en cuenta los siguientes factores:
1. La patogenicidad del microorganismo;
2. El modo de transmisin y la gama de huspedes del microorganismo. Estos dos
factores pueden depender de los niveles de inmunidad existentes en la poblacin
local, la densidad y los movimientos de la poblacin de huspedes, la presencia de
vectores apropiados y el nivel de higiene ambiental.
3. La disponibilidad local de medidas preventivas ecaces, entre las que cabe citar
la prolaxis mediante la administracin de antisueros (inmunizacin pasiva) o
vacunas; las medidas de higiene (higiene de los alimentos y del agua, por ejemplo),
y la lucha contra los reservorios animales o los artrpodos vectores.
4. La disponibilidad local de tratamientos ecaces, que comprende la inmunizacin
pasiva, la vacunacin posexposicin y la administracin de antimicrobianos,
antivricos y quimioterapia, y debe tener en cuenta la posibilidad de que aparez-
can cepas farmacorresistentes.
2
Cuadro 2. Relacin de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las
prcticas y el equipo
GRUPO DE NIVEL DE TIPO DE PRCTICAS DE EQUIPO DE
RIESGO BIOSEGURIDAD LABORATORIO LABORATORIO SEGURIDAD
1 Bsico Enseanza bsica, TMA Ninguno; trabajo en
Nivel 1 investigacin mesa de laboratorio
al descubierto
2 Bsico Servicios de TMA y ropa Trabajo en mesa al
Nivel 2 atencin primaria; protectora; descubierto y CSB
diagnstico, seal de riesgo para posibles
investigacin biolgico aerosoles
3 Contencin Diagnstico Prcticas de nivel 2 CSB adems de otros
Nivel 3 especial, ms ropa especial, medios de contencin
investigacin acceso controlado primaria para todas
y ujo direccional las actividades
del aire
4 Contencin Unidades de Prcticas de nivel 3 CSB de clase III o trajes
mxima patgenos ms cmara de presurizados junto
Nivel 4 peligrosos entrada con cierre con CSB de clase II,
hermtico, salida con autoclave de doble
ducha y eliminacin puerta (a travs de la
especial de residuos pared), aire ltrado
TMA: tcnicas microbiolgicas apropiadas (Vase la parte IV del presente manual). CSB: cmara de seguri-
dad biolgica.
La asignacin de un agente a un nivel de bioseguridad para el trabajo de laboratorio
debe basarse en una evaluacin del riesgo. Esa evaluacin tendr en cuenta el grupo
de riesgo, adems de otros factores, con el n de determinar el nivel de bioseguridad
ms apropiado. Por ejemplo, un agente patgeno asignado al grupo de riesgo 2 en
general requerir instalaciones, equipo, prcticas y procedimientos del nivel de biose-
guridad 2 para trabajar sin riesgo. No obstante, si ciertos experimentos entraan la
generacin de aerosoles con elevadas concentraciones, quiz sea ms apropiado el
nivel de bioseguridad 3 para proporcionar el grado necesario de seguridad, pues
garantiza una mayor contencin de los aerosoles en el entorno de trabajo del
laboratorio. Por consiguiente, el nivel de bioseguridad asignado a un trabajo concreto
depender del juicio profesional basado en la evaluacin del riesgo, y no en la asi-
gnacin automtica de un nivel de bioseguridad con arreglo al grupo de riesgo par-
ticular al que pertenezca el agente patgeno con el que se va a trabajar (vase el
captulo 2).
En el cuadro 3 se resumen los requisitos de las instalaciones en los cuatro niveles
de bioseguridad.
1. PRINCIPIOS GENERALES
3
Cuadro 3. Resumen de los requisitos por nivel de bioseguridad
NIVEL DE BIOSEGURIDAD
1 2 3 4
Aislamiento
a
del laboratorio No No S S
Sala que pueda precintarse para ser descontaminada No No S S
Ventilacin:
Flujo de aire hacia el interior No Conveniente S S
Sistema de ventilacin controlada No Conveniente S S
Salida de aire con HEPA No No S/No
b
S
Entrada de doble puerta No No S S
Cmara de cierre hermtico No No No S
Cmara de cierre hermtico con ducha No No No S
Antesala No No S
Antesala con ducha No No S/No
c
No
Tratamiento de euentes No No S/No
c
S
Autoclave:
En el local No Conveniente S S
En la sala de trabajo No No Conveniente S
De doble puerta No No Conveniente S
CSB No Conveniente S S
Capacidad de vigilancia de la seguridad del personal
d
No No Conveniente S
a
Aislamiento ambiental y funcional respecto del trco general.
b
Segn la localizacin de la salida de aire (vase el captulo 4).
c
Segn cules sean los agentes empleados en el laboratorio.
d
Por ejemplo, ventana, sistema de televisin en circuito cerrado, comunicacin en dos sentidos.
HEPA: ltracin de partculas areas de gran eciencia (del ingls High-Efciency Particulate Air). CSB:
cmara de seguridad biolgica.
De este modo, la asignacin de un nivel de bioseguridad tiene en consideracin el
microorganismo (agente patgeno) utilizado, las instalaciones disponibles y el equipo,
las prcticas y los procedimientos necesarios para trabajar con seguridad en el
laboratorio.
4
PARTE I
Directrices en materia
de bioseguridad
2. Evaluacin del riesgo
microbiolgico
7
El pilar de la prctica de la bioseguridad es la evaluacin del riesgo. Aunque existen
muchas herramientas para ayudar a evaluar el riesgo que comporta un procedimiento
o un experimento determinado, el componente ms importante es el juicio profe-
sional. Las evaluaciones del riesgo deben ser efectuadas por las personas que mejor
conozcan las caractersticas peculiares de los organismos con los que se va a trabajar,
el equipo y los procedimientos que van a emplearse, los modelos animales que pueden
utilizarse y el equipo y los medios de contencin disponibles. El director o investi-
gador principal del laboratorio es el responsable de asegurar que se realicen de modo
oportuno las evaluaciones del riesgo ms apropiadas y de colaborar estrechamente
con el comit de seguridad y el personal de bioseguridad de la institucin con el n
de velar por que se disponga del equipo y los medios apropiados para el trabajo que
est previsto llevar a cabo. Una vez terminadas, las evaluaciones del riesgo deben ser
consultadas peridicamente y revisadas cada vez que sea preciso, teniendo en cuenta
la obtencin de nuevos datos que tengan alguna inuencia en el grado de riesgo y
toda nueva informacin pertinente que aparezca en las publicaciones cientcas.
Una de las herramientas ms tiles de que se dispone para llevar a cabo una eva-
luacin del riesgo microbiolgico es la asignacin de los agentes microbiolgicos a uno
de los grupos de riesgo (vase el captulo 1). Sin embargo, la mera consulta del grupo
de riesgo a que pertenece cierto agente no basta para realizar una evaluacin del riesgo.
Otros factores que hay que tener en cuenta, segn proceda, son los siguientes:
1. La patogenicidad del agente y la dosis infectiva.
2. El resultado potencial de la exposicin.
3. La va natural de infeccin.
4. Otras vas de infeccin, derivadas de manipulaciones en el laboratorio (parenteral,
area, por ingestin).
5. La estabilidad del agente en el ambiente.
6. La concentracin del agente y el volumen del material concentrado que va a
manipularse.
7. La presencia de un husped apropiado (personas o animales).
8. La informacin disponible procedente de estudios en animales y de noticaciones
de infecciones adquiridas en el laboratorio o de informes clnicos.
9. La actividad prevista en el laboratorio (tratamiento con ultrasonidos, produccin
de aerosoles, centrifugacin, entre otras).
10. Toda manipulacin gentica del microorganismo que pueda ampliar su gama de
huspedes o su sensibilidad a los regmenes teraputicos ecaces conocidos (vase
el captulo 16).
11. Disponibilidad local de intervenciones prolcticas o teraputicas ecaces.
Sobre la base de la informacin obtenida durante la evaluacin de riesgos, se podr
asignar un nivel de bioseguridad al trabajo previsto, seleccionar el equipo de protec-
cin apropiado para el personal, y elaborar procedimientos normalizados de trabajo
que incorporen otras intervenciones de seguridad con el n de velar por la mxima
seguridad en la realizacin del trabajo.
Muestras para las que se dispone de informacin limitada
El procedimiento de evaluacin del riesgo descrito anteriormente funciona bien
cuando se dispone de informacin suciente. Sin embargo, en algunas situaciones no
hay informacin suciente para llevar a cabo una evaluacin apropiada de los riesgos,
como ocurre con las muestras clnicas o epidemiolgicas recogidas sobre el terreno.
En esos casos, conviene que la manipulacin de las muestras se realice con
prudencia.
1. Deben adoptarse precauciones normalizadas (2) y emplearse protecciones de
barrera (guantes, batas, proteccin ocular) cada vez que se obtengan muestras de
pacientes.
2. Las prcticas y los procedimientos bsicos de contencin del nivel de bioseguri-
dad 2 deben ser el requisito mnimo para la manipulacin de muestras.
3. El transporte de muestras debe respetar las normas y reglamentos nacionales o
internacionales.
Quiz se disponga de alguna informacin que ayude a determinar el riesgo que
entraa manipular esas muestras:
1. Datos mdicos sobre el paciente.
2. Datos epidemiolgicos (datos de morbilidad y mortalidad, presunta va de trans-
misin, otros datos de la investigacin de brotes).
3. Informacin sobre el origen geogrco de la muestra.
Si se producen brotes de enfermedad de etiologa desconocida, las autoridades
nacionales competentes o la OMS pueden elaborar directrices particulares apropiadas
que publicarn en la Web (como se hizo en 2003 en el caso del sndrome respiratorio
agudo severo) para indicar cmo deben prepararse las muestras para el transporte y
en qu nivel de bioseguridad deben analizarse.
Evaluacin de riesgos y microorganismos genticamente modicados
En el captulo 16 se ofrece un examen detallado de la evaluacin de los riesgos de los
organismos genticamente modicados.
8
9
3. Laboratorios bsicos
niveles de bioseguridad
1 y 2
Las orientaciones y recomendaciones que se ofrecen en el presente manual a ttulo de
requisitos mnimos para los laboratorios de todos los niveles de bioseguridad ataen
a los microorganismos de los grupos de riesgo 1 a 4. Aunque algunas precauciones
pueden parecer innecesarias para algunos organismos del grupo de riesgo 1, son con-
venientes con nes de capacitacin, para fomentar el uso de tcnicas microbiolgicas
apropiadas (es decir, seguras).
Todos los laboratorios de diagnstico y de atencin de salud (de salud pblica,
clnicos o de hospital) deben estar diseados para cumplir, como mnimo, los requi-
sitos del nivel de bioseguridad 2. Dado que ningn laboratorio puede ejercer un
control absoluto sobre las muestras que recibe, el personal puede verse expuesto a
organismos de grupos de riesgo ms altos de lo previsto. Esa posibilidad debe tenerse
presente en la elaboracin de los planes y las polticas de seguridad. En algunos pases
se exige que los laboratorios clnicos estn acreditados. En general, siempre deben
adoptarse y aplicarse las precauciones normalizadas (2).
Las directrices para laboratorios bsicos niveles de bioseguridad 1 y 2 que aqu
se exponen son completas y detalladas, ya que son fundamentales para todo tipo de
laboratorios. Las directrices para los laboratorios de contencin nivel de bioseguri-
dad 3 y los laboratorios de contencin mxima nivel de bioseguridad 4 que se
ofrecen ms adelante (captulos 4 y 5) son modicaciones y adiciones a estas direc-
trices y estn concebidas para trabajar con los agentes patgenos ms peligrosos (de
mayor riesgo).
Cdigo de prcticas
Este cdigo es una enumeracin de las prcticas y los procedimientos de laboratorio
esenciales que constituyen la base de las tcnicas microbiolgicas apropiadas. En
muchos laboratorios y programas nacionales, este cdigo puede utilizarse para ela-
borar una gua escrita de prcticas y procedimientos para el trabajo de laboratorio en
condiciones de seguridad.
Cada laboratorio debe adoptar un manual de seguridad o de trabajo en el que
se identiquen los riesgos conocidos y potenciales y se especiquen las prcticas y
los procedimientos encaminados a eliminar o reducir al mnimo esos riesgos. Las
tcnicas microbiolgicas apropiadas son fundamentales para la seguridad en el
laboratorio y no pueden sustituirse por equipo de laboratorio especializado, que
no pasa de ser un complemento. A continuacin se exponen los conceptos ms
importantes.
Acceso
1. El smbolo y signo internacional de peligro biolgico (gura 1) deber colocarse
en las puertas de los locales donde se manipulen microorganismos del grupo de
riesgo 2 o superior.
2. Slo podr entrar en las zonas de trabajo del laboratorio el personal autorizado.
3. Las puertas del laboratorio se mantendrn cerradas.
4. No se autorizar ni permitir la entrada de nios en las zonas de trabajo del
laboratorio.
10
ACCESO RESTRINGIDO.
SLO PERSONAL AUTORIZADO
Nivel de bioseguridad: ___________________________
Investigador encargado: __________________________
En caso de emergencia, avsese a: __________________
Telfono diurno: _________________________________
Telfono particular: ______________________________
Las autorizaciones de entrada debern solicitarse al
investigador encargado mencionado ms arriba
PELIGRO BIOLGICO
Figura 1. Seal de advertencia de peligro biolgico para las puertas del laboratorio
5. El acceso a los locales que alberguen animales habr de autorizarse especialmente.
6. No se permitir el acceso al laboratorio de animales que no sean objeto del trabajo
del laboratorio.
Proteccin personal
1. Se usarn en todo momento monos, batas o uniformes especiales para el trabajo
en el laboratorio.
2. Se usarn guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que
puedan entraar contacto directo o accidental con sangre, lquidos corporales y
otros materiales potencialmente infecciosos o animales infectados. Una vez uti-
lizados, los guantes se retirarn de forma asptica y a continuacin se lavarn las
manos.
3. El personal deber lavarse las manos despus de manipular materiales y animales
infecciosos, as como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio.
4. Se usarn gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de proteccin cuando
sea necesario proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos y fuentes de
radiacin ultravioleta articial.
5. Estar prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio, por ejemplo
en cantinas, cafeteras, ocinas, bibliotecas, salas para el personal y baos.
6. No se usar calzado sin puntera.
7. En las zonas de trabajo estar prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosmticos
o manipular lentes de contacto.
8. Estar prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las
zonas de trabajo del laboratorio.
9. La ropa protectora de laboratorio no se guardar en los mismos armarios o ta-
quillas que la ropa de calle.
Procedimientos
1. Estar estrictamente prohibido pipetear con la boca.
2. No se colocar ningn material en la boca ni se pasar la lengua por las etiquetas.
3. Todos los procedimientos tcnicos se practicarn de manera que se reduzca al
mnimo la formacin de aerosoles y gotculas.
4. Se limitar el uso de jeringuillas y agujas hipodrmicas, que no se utilizarn en
lugar de dispositivos de pipeteo ni con ningn n distinto de las inyecciones por
va parenteral o la aspiracin de lquidos de los animales de laboratorio.
5. Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales
infecciosos se comunicarn al supervisor del laboratorio. Se mantendr un re-
gistro escrito de esos accidentes e incidentes.
6. Se elaborar y seguir un procedimiento escrito para la limpieza de todos los
derrames.
7. Los lquidos contaminados debern descontaminarse (por medios qumicos o
fsicos) antes de eliminarlos por el colector de saneamiento. Puede ser necesario
3. LABORATORIOS BSICOS NIVELES DE BIOSEGURIDAD 1 Y 2
11
un sistema de tratamiento de euentes, segn lo que indique la evaluacin de
riesgos del agente con el que se est trabajando.
8. Los documentos escritos que hayan de salir del laboratorio se protegern de la
contaminacin mientras se encuentren en ste.
Zonas de trabajo del laboratorio
1. El laboratorio se mantendr ordenado, limpio y libre de materiales no relaciona-
dos con el trabajo.
2. Las supercies de trabajo se descontaminarn despus de todo derrame de mate-
rial potencialmente peligroso y al nal de cada jornada de trabajo.
3. Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados debern ser descontami-
nados antes de eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.
4. El embalaje y el transporte de material debern seguir la reglamentacin nacional
o internacional aplicable.
5. Las ventanas que puedan abrirse estarn equipadas con rejillas que impidan el
paso de artrpodos.
Gestin de la bioseguridad
1. Incumbir al director del laboratorio (la persona que tiene responsabilidad
inmediata respecto del laboratorio) garantizar la elaboracin y la adopcin de un
plan de gestin de la bioseguridad y de un manual de seguridad o de operacin.
2. El supervisor del laboratorio (que depender del director) velar por que se pro-
porcione capacitacin peridica en materia de seguridad en el laboratorio.
3. Se informar al personal de los riesgos especiales y se le exigir que lea el manual
de seguridad o de trabajo y siga las prcticas y los procedimientos normalizados.
El supervisor del laboratorio se asegurar de que todo el personal los comprenda
debidamente. En el laboratorio estar disponible una copia del manual de seguri-
dad o de trabajo.
4. Habr un programa de lucha contra los artrpodos y los roedores.
5. Se ofrecer a todo el personal en caso de necesidad un servicio apropiado de eva-
luacin, vigilancia y tratamiento mdico, y se mantendrn los debidos registros
mdicos.
Diseo e instalaciones del laboratorio
Al disear el laboratorio y asignarle determinados tipos de trabajo, se prestar espe-
cial atencin a aquellas condiciones que se sepa que plantean problemas de seguri-
dad. Entre ellas guran:
1. La formacin de aerosoles.
2. El trabajo con grandes cantidades o altas concentraciones de microorganismos.
3. El exceso de personal o de material.
4. La infestacin por roedores y artrpodos.
12
Figura 2. Laboratorio tpico del nivel de bioseguridad 1.
(Ilustracin amablemente cedida por CUH2A, Princeton, NJ (EE.UU.))
5. La entrada de personas no autorizadas.
6. El circuito de trabajo: utilizacin de muestras y reactivos concretos.
En las guras 2 y 3, respectivamente, aparecen ejemplos de diseos de laboratorios de
los niveles de bioseguridad 1 y 2.
Caractersticas de diseo
1. Se dispondr de espacio suciente para realizar el trabajo de laboratorio en condi-
ciones de seguridad y para la limpieza y el mantenimiento.
2. Las paredes, los techos y los suelos sern lisos, fciles de limpiar, impermeables a
los lquidos y resistentes a los productos qumicos y desinfectantes normalmente
utilizados en el laboratorio. Los suelos sern antideslizantes.
3. Las supercies de trabajo sern impermeables y resistentes a desinfectantes, cidos,
lcalis, disolventes orgnicos y calor moderado.
4. La iluminacin ser adecuada para todas las actividades. Se evitarn los reejos y
brillos molestos.
13
5. El mobiliario debe ser robusto y debe quedar espacio entre mesas, armarios y otros
muebles, as como debajo de los mismos, a n de facilitar la limpieza.
6. Habr espacio suciente para guardar los artculos de uso inmediato, evitando as
su acumulacin desordenada sobre las mesas de trabajo y en los pasillos. Tambin
debe preverse espacio para el almacenamiento a largo plazo, convenientemente
situado fuera de las zonas de trabajo.
7. Se prevern espacio e instalaciones para la manipulacin y el almacenamiento
seguros de disolventes, material radiactivo y gases comprimidos y licuados.
8. Los locales para guardar la ropa de calle y los objetos personales se encontrarn
fuera de las zonas de trabajo del laboratorio.
9. Los locales para comer y beber y para descansar se dispondrn fuera de las zonas
de trabajo del laboratorio.
10. En cada sala del laboratorio habr lavabos, a ser posible con agua corriente, insta-
lados de preferencia cerca de la salida.
14
Figura 3. Laboratorio tpico del nivel de bioseguridad 2
(Ilustracin amablemente cedida por CUH2A, Princeton, NJ (EE.UU)). Los proce-
dimientos que pueden generar aerosoles se efectan dentro de una cmara de seguri-
dad biolgica. Las puertas se mantienen cerradas y llevan las debidas seales de
riesgo biolgico. Los residuos potencialmente contaminados se separan del circuito
general de residuos.
11. Las puertas irn provistas de mirillas y estarn debidamente protegidas contra el
fuego; de preferencia se cerrarn automticamente.
12. En el nivel de bioseguridad 2 se dispondr de una autoclave u otro medio de
descontaminacin debidamente prximo al laboratorio.
13. Los sistemas de seguridad deben comprender medios de proteccin contra incen-
dios y emergencias elctricas, as como duchas para casos de urgencia y medios
para el lavado de los ojos.
14. Hay que prever locales o salas de primeros auxilios, convenientemente equipados
y fcilmente accesibles (vase el anexo 1).
15. Cuando se planique una nueva instalacin, habr que prever un sistema
mecnico de ventilacin que introduzca aire del exterior sin recirculacin. Cuando
no se disponga de ventilacin mecnica, las ventanas debern poder abrirse y, a
ser posible, estarn provistas de mosquiteras.
16. Es indispensable contar con un suministro regular de agua de buena calidad. No
debe haber ninguna conexin entre las conducciones de agua destinada al labo-
ratorio y las del agua de bebida. El sistema de abastecimiento pblico de agua
estar protegido contra el reujo por un dispositivo adecuado.
17. Debe disponerse de un suministro de electricidad seguro y de suciente
capacidad, as como de un sistema de iluminacin de emergencia que permita
salir del laboratorio en condiciones de seguridad. Conviene contar con un grupo
electrgeno de reserva para alimentar el equipo esencial (estufas, CSB,
congeladores, entre otros), as como para la ventilacin de las jaulas de los
animales.
18. Es esencial un suministro able y adecuado de gas. La instalacin debe ser objeto
del debido mantenimiento.
19. Tanto los laboratorios como los locales destinados a los animales son a veces objeto
de actos de vandalismo. Hay que prever sistemas de proteccin fsica y contra
incendios. Cabe mejorar la seguridad reforzando las puertas, protegiendo las ven-
tanas y limitando el nmero de llaves en circulacin. Se podrn estudiar y aplicar
otras medidas, segn proceda, para incrementar la seguridad (vase el captulo 9).
Material de laboratorio
Junto con los procedimientos y prcticas correctos, el uso de material de seguridad
ayudar a reducir los riesgos cuando se trabaje con agentes biolgicos que entraen
peligro. En la presente seccin se exponen los principios fundamentales relacionados
con el material apropiado para los laboratorios de todos los niveles de bioseguridad.
Los requisitos en relacin con el material de laboratorio correspondiente a niveles de
bioseguridad ms altos se detallan en los captulos pertinentes.
Tras consultar con el funcionario de bioseguridad y el comit de seguridad (en caso
de que se haya designado), el director del laboratorio debe velar por que el material
sea apropiado y se utilice debidamente. Para elegir el material de laboratorio habr
que cerciorarse de que responda a los siguientes principios generales:
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1. Que su diseo permita limitar o evitar los contactos entre el trabajador y el mate-
rial infeccioso.
2. Que est construido con materiales impermeables a los lquidos, resistentes a la
corrosin y acordes con las normas de resistencia estructural.
3. Que carezca de rebabas, bordes cortantes y partes mviles sin proteger.
4. Que est diseado, construido e instalado con miras a simplicar su manejo y
conservacin, as como a facilitar la limpieza, la descontaminacin y las pruebas
de certicacin; siempre que se pueda, se evitar el material de vidrio y otro
material rompible.
Para cerciorarse de que el material posee las caractersticas de seguridad requeridas
quiz sea necesario consultar sus especicaciones detalladas de funcionamiento y
construccin (vanse tambin los captulos 10 y 11).
Material de bioseguridad indispensable
1. Dispositivos de pipeteo para evitar que se pipetee con la boca. Existen muchos
modelos diferentes.
2. CSB, que se utilizarn en los siguientes casos:
Siempre que se manipule material infeccioso; ese material puede ser centrifu-
gado en el laboratorio ordinario si se utilizan vasos de centrifugadora con tapas
hermticas de seguridad y si stos se cargan y descargan en una CSB;
Cuando haya un alto riesgo de infeccin transmitida por va area.
Cuando se utilicen procedimientos con grandes posibilidades de producir
aerosoles, como la centrifugacin, trituracin, homogeneizacin, agitaciones
o mezcla vigorosa, desintegracin ultrasnica, apertura de envases de mate-
riales infecciosos cuya presin interna pueda diferir de la presin ambiental,
inoculacin intranasal a animales y recoleccin de tejidos infecciosos de ani-
males y huevos.
3. Asas de siembra de plstico desechables. Tambin pueden utilizarse incineradores
elctricos de asas dentro de la CSB para reducir la formacin de aerosoles.
4. Frascos y tubos con tapn de rosca.
5. Autoclaves u otros medios apropiados para esterilizar el material contaminado.
6. Pipetas de Pasteur de plstico desechables, cuando estn disponibles, en sustitu-
cin del vidrio.
7. Los aparatos como las autoclaves y las CSB deben ser validados con mtodos
apropiados antes de usarlos. A intervalos peridicos deben ser nuevamente certi-
cados, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (vase el captulo 7).
Vigilancia mdica y sanitaria
La entidad que emplea al personal del laboratorio tiene la obligacin de cerciorarse,
por medio del director de ste, de que la salud de dicho personal est sometida a la
debida vigilancia. El objetivo de esa vigilancia es detectar posibles enfermedades
16
contradas durante el trabajo. Entre las actividades apropiadas para alcanzar ese obje-
tivo guran las siguientes:
1. Proporcionar inmunizacin activa o pasiva cuando est indicada (vase el
anexo 2).
2. Facilitar la deteccin temprana de infecciones adquiridas en el laboratorio.
3. Excluir a las personas muy susceptibles (por ejemplo, embarazadas o personas
inmunodecientes) de las tareas de laboratorio que entraen mucho riesgo.
4. Proporcionar material y procedimientos ecaces de proteccin personal.
Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos en el
nivel de bioseguridad 1
La experiencia indica que estos microorganismos tienen pocas probabilidades de
provocar enfermedades humanas o enfermedades animales de importancia veteri-
naria. No obstante, lo ideal es someter a todo el personal a un reconocimiento mdico
previo a la contratacin en el que se anoten los antecedentes mdicos de cada persona.
Conviene que se notiquen rpidamente las enfermedades o accidentes de laborato-
rio y que todos los miembros del personal comprendan la importancia de aplicar tc-
nicas microbiolgicas apropiadas.
Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos en el
1. El reconocimiento mdico previo al empleo o a la asignacin de un puesto es
indispensable. Debe registrarse el historial mdico de la persona y realizar una
evaluacin de la salud ocupacional para los nes del laboratorio.
2. El director del laboratorio debe mantener un registro de enfermedades y bajas
laborales.
3. Las mujeres en edad fecunda debern ser informadas de los riesgos que supone
para el feto la exposicin profesional a ciertos microorganismos, como el virus de
la rubola. Las medidas concretas que se adopten para proteger al feto dependern
de los microorganismos a los que pueda estar expuesta la mujer.
Capacitacin
Los errores humanos y las tcnicas incorrectas pueden poner en peligro incluso las
mejores medidas destinadas a proteger al personal de laboratorio. Por esta razn, el
elemento clave para prevenir las infecciones adquiridas, los incidentes y los accidentes
en el laboratorio es un personal preocupado por la seguridad y bien informado sobre
la manera de reconocer y combatir los peligros que entraa su trabajo en ese entorno.
En consecuencia, la formacin continua en el servicio acerca de las medidas de seguri-
dad es primordial. El proceso empieza por el personal directivo, que debe velar por
que los procedimientos y prcticas de seguridad en el laboratorio formen parte de la
capacitacin bsica de los empleados. La formacin en medidas de seguridad siempre
17
debe estar integrada en la capacitacin inicial de los nuevos empleados. Deben ponerse
a disposicin del personal el cdigo de prcticas y las directrices locales, incluido el
manual de seguridad o de operaciones. Se adoptarn medidas para garantizar que los
empleados hayan ledo y comprendido las directrices, como pueden ser las pginas de
rmas. Los supervisores del laboratorio deben desempear el papel principal en la
formacin de sus subordinados inmediatos acerca de las tcnicas correctas de labora-
torio. El funcionario encargado de la bioseguridad puede colaborar en esa formacin
y contribuir a la elaboracin de materiales y documentos de capacitacin (vase
tambin el captulo 21).
La capacitacin del personal debe comprender siempre la enseanza de mtodos
seguros para utilizar procedimientos peligrosos que habitualmente afectan a todo el
personal de laboratorio y que entraan los siguientes riesgos:
1. Riesgo de inhalacin (es decir, formacin de aerosoles): uso de asas, siembra de
placas de agar, pipeteo, preparacin de frotis, apertura de recipientes de cultivo,
toma de muestras de sangre/suero, centrifugacin, entre otros.
2. Riesgo de ingestin al manipular muestras, frotis y cultivos.
3. Riesgo de inoculacin cutnea al emplear jeringuillas y agujas.
4. Riesgo de mordeduras y araazos en la manipulacin de animales.
5. Manipulacin de sangre y otros materiales patolgicos potencialmente peligrosos.
6. Descontaminacin y eliminacin de material infeccioso.
Manipulacin de desechos
Se considera desecho todo aquello que debe descartarse.
En los laboratorios, la descontaminacin y la eliminacin de desechos son opera-
ciones estrechamente relacionadas. En el trabajo cotidiano, son pocos los materiales
contaminados que es preciso retirar del laboratorio o destruir. La mayor parte de la
cristalera, los instrumentos y la ropa del laboratorio vuelve a utilizarse o se recicla.
El principio bsico es que todo el material infeccioso ha de ser descontaminado, este-
rilizado en autoclave o incinerado en el laboratorio.
Las principales preguntas que hay que hacerse antes de eliminar cualquier objeto
o material de un laboratorio que trabaja con microorganismos o tejidos animales
potencialmente infecciosos son las siguientes:
1. Se han descontaminado o desinfectado realmente los objetos o el material por un
procedimiento aprobado?
2. De lo contrario, se han embalado con un mtodo aprobado para ser incinerados
inmediatamente in situ o transferidos a otro laboratorio que tenga capacidad para
incinerar?
3. Entraa la eliminacin de los objetos o materiales descontaminados algn otro
peligro, biolgico o de otra clase, para quienes realizan las operaciones de elimi-
nacin inmediata o para quienes puedan entrar en contacto con los objetos o
materiales desechados fuera del recinto del laboratorio?
18
Descontaminacin
El tratamiento en autoclave de vapor constituye el mtodo de eleccin para todos los
procesos de descontaminacin. El material destinado a la descontaminacin y elimi-
nacin debe introducirse en recipientes (por ejemplo en bolsas de plstico resistentes
al tratamiento en autoclave) que tengan un cdigo de color para indicar si el con-
tenido ha de pasar a la autoclave o a la incineracin. Slo se recurrir a otros mtodos
si stos eliminan o destruyen los microorganismos (para ms detalles, vase el
captulo 14).
Procedimientos de manipulacin y eliminacin de material y desechos contaminados
Deber adoptarse un sistema de identicacin y separacin del material infeccioso y
sus recipientes. Se seguirn las normas nacionales e internacionales y se tendrn en
cuenta las siguientes categoras:
1. Desechos no contaminados (no infecciosos) que puedan reutilizarse o reciclarse
o eliminarse como si fueran basura en general.
2. Objetos cortantes y punzantes contaminados (infecciosos): agujas hipodrmicas,
bisturs, cuchillas, vidrio roto; se recogern siempre en recipientes a prueba de per-
foracin dotados de tapaderas y sern tratados como material infeccioso.
3. Material contaminado destinado al tratamiento en autoclave que despus pueda
lavarse y volverse a utilizar o reciclarse.
4. Material contaminado destinado al tratamiento en autoclave y a la eliminacin.
5. Material contaminado destinado a la incineracin directa.
Objetos cortantes y punzantes
Las agujas hipodrmicas no se deben volver a tapar, cortar ni retirar de las jerin-
guillas desechables despus de utilizarlas. El conjunto completo debe colocarse en un
recipiente de eliminacin especco. Las jeringuillas desechables, utilizadas con o sin
aguja, se introducirn en recipientes de eliminacin apropiados y se incinerarn, este-
rilizndolas previamente en autoclave si fuera necesario.
Los recipientes de eliminacin de objetos cortantes y punzantes sern resistentes a
la perforacin y no se llenarn por completo. Cuando estn llenos en sus tres cuartas
partes se colocarn en un recipiente de desechos infecciosos y se incinerarn, este-
rilizndolos primero en autoclave si la prctica del laboratorio lo exige. Los recipientes
de eliminacin de objetos cortantes y punzantes no se desecharn en vertederos.
Material contaminado (potencialmente infeccioso) para ser tratado en
autoclave y reutilizado
No se efectuar limpieza alguna de ningn material contaminado (potencialmente
infeccioso) que vaya a ser tratado en autoclave y reutilizado. Cualquier limpieza o
reparacin que se revele necesaria se realizar siempre despus del paso por la auto-
clave o la desinfeccin.
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Material contaminado (potencialmente infeccioso) para ser eliminado
Aparte de los objetos cortantes y punzantes mencionados ms arriba, todo el mate-
rial contaminado (potencialmente infeccioso) debe ser introducido en recipientes
impermeables (por ejemplo en bolsas de plstico que resistan el tratamiento en auto-
clave marcadas con un cdigo de color) y tratado en autoclave antes de proceder a su
eliminacin. Despus de pasar por la autoclave, el material puede colocarse en reci-
pientes apropiados para ser transportado al incinerador. Si es posible, el material
procedente de actividades relacionadas con la atencin sanitaria no debe desecharse
en vertederos, ni siquiera despus de haber sido descontaminado. Si se dispone de un
incinerador en el laboratorio, no es necesario el tratamiento en autoclave: el material
contaminado se coloca en recipientes especialmente marcados (por ejemplo, bolsas
con un cdigo de color) y se transporta directamente al incinerador. Los recipientes
de transporte reutilizables deben ser impermeables y tener tapas que ajusten debida-
mente. Se desinfectarn y limpiarn antes de devolverlos al laboratorio para un uso
ulterior.
En cada puesto de trabajo deben colocarse recipientes, tarros o cubetas para dese-
chos, de preferencia irrompibles (por ejemplo, de plstico). Cuando se utilicen desin-
fectantes, los materiales de desecho deben permanecer en contacto ntimo con stos
(es decir, sin estar protegidos por burbujas de aire) durante el tiempo apropiado, segn
el desinfectante que se utilice (vase el captulo 14). Los recipientes para desechos
habrn de ser descontaminados y lavados antes de su reutilizacin.
La incineracin de desechos contaminados deber contar con la aprobacin de las
autoridades encargadas de la salud pblica y la contaminacin del aire, as como la
del funcionario de bioseguridad del laboratorio (vase la seccin relativa a la inci-
neracin en el captulo 14).
Seguridad qumica, elctrica y radiolgica, proteccin contra incendios y
material de seguridad
Los incendios o los accidentes de origen qumico, elctrico o radiolgico pueden tener
como consecuencia indirecta un fallo de las medidas de contencin de organismos
patgenos. As pues, en cualquier laboratorio de microbiologa es indispensable man-
tener un nivel elevado de seguridad en esos aspectos. La promulgacin de normas y
reglamentos sobre cada una de estas formas de proteccin incumbe normalmente a
las autoridades nacionales y locales competentes, cuya ayuda debe recabarse siempre
que sea necesario. Los riesgos qumicos, elctricos, radiolgicos y derivados de los
incendios se examinan en ms detalle en la Parte IV del presente manual (captulos
17 y 18).
En el captulo 11 se ofrece ms informacin acerca del material de seguridad.
20
21
4. El laboratorio de contencin
El laboratorio de contencin nivel de bioseguridad 3 est concebido e instalado para
trabajar con microorganismos del grupo de riesgo 3, as como con grandes volmenes
o concentraciones de microorganismos del grupo de riesgo 2, por entraar un mayor
riesgo de difusin de aerosoles. Este nivel de contencin exige fortalecer los progra-
mas de trabajo y de seguridad correspondientes a los laboratorios bsicos niveles de
bioseguridad 1 y 2 (vase el captulo 3).
Las directrices que se ofrecen en este captulo se presentan en forma de adiciones
a las enunciadas para los laboratorios bsicos niveles de bioseguridad 1 y 2, que por
ello debern aplicarse antes de las destinadas especcamente al laboratorio de con-
tencin nivel de bioseguridad 3. Las principales adiciones y modicaciones se
reeren a los siguientes aspectos:
1. Cdigo de prcticas.
2. Diseo e instalaciones del laboratorio.
3. Vigilancia mdica y sanitaria.
Los laboratorios de esta categora deben gurar en un registro o una lista que estable-
cern las autoridades sanitarias nacionales u otra autoridad competente.
Cdigo de prcticas
El cdigo de prcticas de los laboratorios bsicos niveles de bioseguridad 1 y 2
tambin se aplica en este caso, con las siguientes modicaciones:
1. El smbolo y signo internacional de advertencia de peligro biolgico (vase la
gura 1) expuesto en las puertas de acceso al laboratorio debe especicar el nivel
de bioseguridad y el nombre del supervisor del laboratorio que controla el acceso
a ste, as como indicar cualquier condicin especial de entrada en la zona, como
puede ser la inmunizacin.
2. En el laboratorio se debe llevar ropa protectora apropiada (batas sin abertura
delantera o envolventes, trajes de dos piezas de tipo pijama, monos, gorros y, si
corresponde, proteccin para el calzado o calzado especial). No son apropiadas las
batas de laboratorio abotonadas por delante, ni las mangas que no cubran por
completo los antebrazos. La ropa de laboratorio no debe usarse fuera de ste y
debe descontaminarse antes de enviarla a la lavandera. En ciertos casos, como
cuando se trabaja con agentes agrcolas o zoonticos, est justicado quitarse la
ropa de calle y utilizar ropa de laboratorio especial.
3. Toda manipulacin abierta de material potencialmente infeccioso debe realizarse
dentro de una CSB u otro dispositivo de contencin primaria (vase tambin el
captulo 10).
4. Puede ser necesario utilizar equipo de proteccin respiratoria para ciertos pro-
cedimientos de laboratorio o para el trabajo con animales que estn infectados
con ciertos agentes patgenos (vase el captulo 11).
Las directrices sobre diseo e instalaciones del laboratorio correspondientes a los
laboratorios bsicos niveles de bioseguridad 1 y 2 se aplican tambin en este caso,
con las siguientes modicaciones:
1. El laboratorio debe estar separado de las zonas del edicio por las que se puede
circular sin restricciones. Puede conseguirse una separacin suplementaria habi-
litando el laboratorio al fondo de un pasillo o instalando un tabique con puerta
o un sistema de acceso que delimite un pequeo vestbulo (por ejemplo, entrada
de doble puerta o laboratorio bsico nivel de bioseguridad 2) destinado a
mantener la diferencia de presiones entre el laboratorio y el espacio adyacente. El
vestbulo debe contar con una zona para separar la ropa limpia de la sucia, y
tambin puede ser necesaria una ducha.
2. Las dobles puertas de acceso al laboratorio deben ser de cierre automtico y
disponer de un mecanismo de interbloqueo, de modo que slo una de ellas est
abierta al mismo tiempo. Para uso en caso de emergencia es posible colocar una
mampara que se pueda romper.
3. Las supercies de las paredes, suelos y techos deben ser impermeables y fciles de
limpiar. Todas las aberturas existentes en esas supercies (por ejemplo, para
tuberas de servicio) deben estar obturadas para facilitar la descontaminacin de
los locales.
4. La sala del laboratorio debe poderse precintar para proceder a su descontami-
nacin. Los sistemas de conduccin de aire han de estar construidos de modo que
sea factible la descontaminacin con gases.
5. Las ventanas deben estar cerradas hermticamente y llevar cristales resistentes a
la rotura.
6. En las inmediaciones de todas las puertas de salida del laboratorio habr un lavabo
que no necesite ser accionado con la mano.
7. Debe haber un sistema de ventilacin que establezca un ujo direccional hacia el
laboratorio. Se instalar un dispositivo de vigilancia visual, con o sin alarma, para
que el personal pueda comprobar en todo momento que la corriente de aire circula
en el sentido deseado.
8. El sistema de ventilacin del edicio debe estar construido de modo que el aire
del laboratorio de contencin nivel de bioseguridad 3 no se dirija a otras zonas
22
del edicio. El aire puede ser ltrado por un sistema HEPA, reacondicionado y
recirculado dentro del laboratorio. Cuando el aire del laboratorio (no de las CSB)
se expulsa directamente al exterior del edicio, debe dispersarse lejos de los edi-
cios ocupados y de las tomas de aire. Segn los agentes con los que se est traba-
jando, ese aire puede evacuarse a travs de ltros HEPA. Puede instalarse un
sistema de control de la calefaccin, la ventilacin y el aire acondicionado para
impedir una presin positiva sostenida en el laboratorio. Cabe estudiar la posi-
bilidad de instalar alarmas audibles o claramente visibles para alertar al personal
de posibles fallos del sistema de calefaccin, ventilacin y aire acondicionado.
9. Todos los ltros HEPA debern estar instalados de modo que permitan la descon-
taminacin con gases y la realizacin de pruebas.
10. Las CSB deben estar alejadas de las zonas de paso y de los lugares de cruce de
corrientes procedentes de puertas y sistemas de ventilacin (vase el captulo 10).
11. El aire que sale de las CSB de las clases I o II (vase el captulo 10), y que habr
pasado por ltros HEPA, deber expulsarse de manera que no se perturbe el equi-
librio del aire en la cmara ni en el sistema de evacuacin del edicio.
12. Dentro del laboratorio de contencin debe haber una autoclave para desconta-
minar el material de desecho infectado. Si hay que sacar ese material de desecho
del laboratorio de contencin para su descontaminacin y eliminacin, habr que
transportarlo en recipientes hermticos, irrompibles e impermeables de acuerdo
con las normas nacionales o internacionales, segn proceda.
13. El sistema de abastecimiento de agua debe estar dotado de dispositivos contra el
reujo. Los tubos de vaco deben estar protegidos con sifones con desinfectante
lquido y ltros HEPA o su equivalente. Las bombas de vaco alternativas tambin
deben estar debidamente protegidas con sifones y ltros.
14. El diseo de las instalaciones y los procedimientos de trabajo del laboratorio de
contencin nivel de bioseguridad 3 deben estar documentados.
En la gura 4 se presenta un ejemplo de diseo de un laboratorio de nivel de biose-
guridad 3.
Los principios aplicables a la seleccin del material, incluidas las CSB (vase el cap-
tulo 10) son los mismos que se enunciaron para el laboratorio bsico nivel de biose-
guridad 2, con la excepcin de que todas las actividades de manipulacin de todo el
material potencialmente infeccioso deben realizarse dentro de una CSB u otro dis-
positivo de contencin fsica primaria. Debe tenerse en cuenta que si se utilizan
aparatos como centrifugadoras, stas necesitarn accesorios de contencin suple-
mentarios como cubetas de seguridad o rotores de contencin. Algunas centrifu-
gadoras y otro material, como los separadores de clulas, destinados al trabajo con
clulas infectadas pueden necesitar sistemas suplementarios de ventilacin y
evacuacin local con ltros HEPA para una contencin eciente.
4. EI LABORATORIO DE CONTENCIN NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3
23
Vigilancia mdica y sanitaria
Los objetivos de los programas de vigilancia mdica y sanitaria enunciados para los
laboratorios bsicos niveles de bioseguridad 1 y 2 se aplican tambin a los labora-
torios de contencin nivel de bioseguridad 3, con las siguientes modicaciones:
1. El reconocimiento mdico de todo el personal que trabaja en el laboratorio de
contencin nivel de bioseguridad 3 es obligatorio y debe comprender una his-
toria clnica detallada y un reconocimiento fsico orientado a la actividad laboral.
2. Una vez pasado el reconocimiento mdico con un informe favorable, se entregar
a la persona examinada una tarjeta de contacto mdico (vase el ejemplo de la
24
Figura 4. Laboratorio tpico del nivel de bioseguridad 3
(Ilustracin amablemente cedida por CUH2A, Princeton, NJ (EE.UU.)). El laboratorio
est separado de la circulacin general y se accede a l por un vestbulo (entrada de
doble puerta o laboratorio bsico nivel de bioseguridad 2) o una cmara de cierre
hermtico. Dentro de la sala se dispone de una autoclave para la descontaminacin
de residuos antes de su eliminacin. Hay tambin un lavabo con grifo que puede
accionarse sin usar las manos. La corriente de aire circula hacia el interior y todo el
trabajo con material infeccioso se efecta en una cmara de seguridad biolgica.
gura 5) en la que se declare que trabaja en un centro que tiene un laboratorio de
contencin nivel de bioseguridad 3. Esa cha tendr el tamao de un billetero,
llevar la fotografa del titular y ste la llevar siempre consigo. Quienes gurarn
como contacto en la tarjeta es algo que tendr que acordarse en el plano local,
pero entre esas personas deben estar el director del laboratorio, el asesor mdico
o el funcionario responsable de la bioseguridad.
4. EI LABORATORIO DE CONTENCIN NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3
25
A. Anverso
INFORMACIN PARA LA VIGILANCIA DE ENFERMEDADES
AL EMPLEADO
Conserve esta tarjeta en su poder. En caso de enfermedad febril inexplicada, mustrela a su
mdico y avise a uno de los siguientes mdicos en el orden indicado:
titular
Dr._____________________________Tel (Consultorio)_______________________________
_______________________________ Tel (Domicilio)_________________________________
Dr. ____________________________ Tel (Consultorio)_______________________________
_______________________________ Tel (Domicilio)_________________________________
______________________________________________
Nombre_______________________________________
Figura 5. Formato sugerido para la cha de contacto mdico
Fotografa
del
titular
B. Reverso
AL MDICO
El titular de esta tarjeta trabaja en ________________________________________________
donde existen virus, rickettsias, bacterias, protozoos o helmintos patgenos. En caso d
enfermedad febril inexplicada, srvase pedir al empleador informacin sobre los agentes a lo
que puede haber estado expuesto este empleado.
Nombre del laboratorio__________________________________________________________
Direccin____________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
Telfono_____________________________________________________________________
__________
26
5. El laboratorio de contencin
mxima nivel de
bioseguridad 4
El laboratorio de contencin mxima nivel de bioseguridad 4 est concebido para
trabajar con microorganismos del grupo de riesgo 4. Antes de construir y poner en
funcionamiento un laboratorio de contencin mxima se requiere una labor inten-
siva de consulta con instituciones que tengan experiencia en la utilizacin de instala-
ciones de este tipo. Los laboratorios de contencin mxima nivel de bioseguridad 4
en funcionamiento deben estar sometidos al control de las autoridades sanitarias
nacionales, u otras apropiadas. La informacin que sigue tiene como propsito servir
solamente como material de presentacin. Las entidades que tengan intencin de
poner en funcionamiento un laboratorio de este nivel deben ponerse en contacto con
el programa de Bioseguridad de la OMS para obtener ms informacin.
1
Cdigo de prcticas
El cdigo de prcticas correspondiente al nivel de bioseguridad 3 se aplica tambin a
este nivel con las siguientes modicaciones:
1. Hay que aplicar la regla del trabajo realizado por dos personas, en virtud de la cual
ninguna persona debe trabajar sola en el interior del laboratorio. Esto es particu-
larmente importante si el trabajo se realiza con ropa especial del nivel de biose-
guridad 4.
2. Al entrar y al salir del laboratorio es imprescindible un cambio completo de ropa
y calzado.
3. El personal debe recibir capacitacin en procedimientos de evacuacin de emer-
gencia en caso de que un miembro del personal sufra lesiones o caiga enfermo.
4. Debe establecerse un mtodo de comunicacin entre el personal que
trabaja dentro del laboratorio del nivel de bioseguridad 4 y el personal de apoyo
que se encuentra fuera del laboratorio para la comunicacin ordinaria y de
emergencia.
1
Programa de Bioseguridad, Departamento de Enfermedades Transmisibles (Vigilancia y Respuesta),
Organizacin Mundial de la Salud, 20 Avenue Appia, 1211 Ginebra 27, Suiza (http://www.who.int/csr/).
Los requisitos del laboratorio de contencin nivel de bioseguridad 3 se aplican
tambin a los laboratorios de contencin mxima nivel de bioseguridad 4, con la
adicin de los siguientes:
1. Contencin primaria. Debe existir un sistema eciente de contencin primaria
que comprenda uno o ms de los siguientes elementos:
Laboratorio con CSB de clase III. Se exige el paso a travs de un mnimo de dos
puertas antes de acceder a la sala que contiene la CSB de clase III (sala de la
cmara). En este diseo de laboratorio la CSB de clase III proporciona la con-
tencin primaria. Es necesaria una ducha personal con vestuarios interior y
exterior. Los utensilios y materiales que no ingresan en la sala de la cmara a
travs de la zona de vestuario se introducen por una autoclave o una cmara
de fumigacin de doble puerta. Una vez debidamente cerrada la puerta exte-
rior, el personal que se encuentra dentro del laboratorio puede abrir la puerta
interior para recoger los materiales. Las puertas de la autoclave o la cmara de
fumigacin estn diseadas de tal modo que la puerta exterior no pueda
abrirse a menos que la autoclave haya completado un ciclo de esterilizacin o
la cmara de fumigacin haya sido descontaminada (vase el captulo 10).
Laboratorio diseado para trabajar con trajes especiales. El diseo y las instala-
ciones de un laboratorio destinado al trabajo con trajes protectores con respi-
rador autnomo diere considerablemente de un laboratorio de nivel de
bioseguridad 4 con CSB de clase III. Las salas de este tipo de laboratorio estn
dispuestas de tal manera que se dirige al personal a travs de las zonas de ves-
tuario y descontaminacin antes de entrar en las zonas donde se manipula el
material infeccioso. Debe existir una ducha de descontaminacin de trajes, que
ser utilizada por el personal antes de abandonar la zona de contencin del
laboratorio. Habr otra ducha personal con vestuarios interior y exterior. El
traje especial ser de una pieza, dotado de presin positiva y con suministro
de aire ltrado por HEPA. El aire del traje ser suministrado por un sistema
que tenga una capacidad redundante del 100% con una fuente de aire inde-
pendiente, para utilizarla en caso de emergencia. La entrada en la zona del
laboratorio destinada al trabajo con trajes especiales se realizar por una
cmara dotada de puertas de cierre hermtico. Estos laboratorios dispondrn
de un sistema apropiado de alarma que el personal pueda utilizar en caso de
fallo del sistema mecnico o de aire (vase el captulo 10).
2. Acceso controlado. El laboratorio de contencin mxima nivel de bioseguridad
4 debe estar situado en un edicio independiente o en una zona claramente deli-
mitada en el interior de un edicio protegido. La entrada y la salida del personal
y de los suministros se harn a travs de cmaras de cierre hermtico o sistemas
de caja de paso. Al entrar, el personal se mudar por completo de ropa y al salir
se duchar antes de volver a ponerse la ropa de calle.
5. EL LABORATORIO DE CONTENCIN MXIMA NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4
27
3. Sistema de ventilacin controlada. Debe mantenerse la presin negativa dentro
de las instalaciones. Tanto el aire de entrada como el de salida debe pasar por ltros
HEPA. Existen diferencias considerables entre los sistemas de ventilacin de los
laboratorios con CSB de clase III y los laboratorios donde hay que trabajar con
trajes especiales:
Laboratorio con cmara biolgica de clase III. El aire suministrado a las CSB de
clase III puede proceder del interior de la sala y atravesar un ltro HEPA
montado en la cmara o directamente del sistema de entrada de aire. El aire
evacuado de la CSB de clase III debe atravesar dos ltros HEPA antes de salir
al exterior del edicio. La cmara debe funcionar en todo momento a presin
negativa respecto del laboratorio circundante. Se requiere un sistema de ven-
tilacin exclusivo que no haga recircular el aire para el laboratorio.
Laboratorio diseado para trabajar con trajes especiales. Se requieren sistemas
exclusivos de suministro y evacuacin del aire de la sala. Los componentes de
suministro y evacuacin del sistema de ventilacin estarn equilibrados de tal
forma que el ujo de aire dentro de la zona de trabajo con traje protector vaya
desde las zonas de menos peligro a las de mayor peligro. Se necesitan venti-
ladores extractores redundantes para garantizar que las instalaciones se
mantienen en todo momento a presin negativa. Deben vigilarse las diferen-
cias de presin dentro del laboratorio y entre el laboratorio y las zonas adya-
centes, as como el ujo del aire en los componentes de suministro y
evacuacin del sistema de ventilacin, y debe utilizarse un sistema de control
apropiado para impedir la presurizacin del laboratorio. El aire suministrado
a la zona de trabajo con trajes especiales y a la ducha y a las cmaras de descon-
taminacin con cierre hermtico debe pasar por ltros HEPA. El aire evacuado
del laboratorio debe atravesar dos ltros HEPA antes de salir al exterior. Otra
posibilidad es que, tras una doble ltracin por HEPA, el aire se recircule, pero
slo dentro del laboratorio; en ninguna circunstancia el aire evacuado del
laboratorio de nivel de bioseguridad 4 diseado para trabajar con trajes
especiales se reciclar a otras zonas. Debe obrarse con la mxima precaucin
si se elige el sistema de recirculacin de aire dentro del laboratorio. Deben
tenerse en cuenta los tipos de investigacin que se realicen, el equipo, las
sustancias qumicas y otros materiales utilizados, as como las especies de
animales que puedan intervenir en la investigacin.
Todos los ltros HEPA sern probados y certicados una vez al ao. Los ltros
HEPA estarn instalados de tal modo que permitan su descontaminacin in situ
antes de retirarlos. Otra posibilidad es retirar el ltro y colocarlo en un recipiente
primario cerrado y hermtico para su ulterior descontaminacin y/o destruccin
por incineracin.
4. Descontaminacin de euentes. Todos los euentes de la zona de trabajo con
trajes especiales, la cmara y la ducha de descontaminacin o la CSB de clase III
28
sern descontaminados antes de su eliminacin denitiva. El mtodo de eleccin
es el tratamiento trmico. Ser necesario corregir el pH de algunos euentes antes
de evacuarlos. El agua de la ducha personal y los retretes se puede verter directa-
mente al alcantarillado sin tratamiento previo.
5. Esterilizacin de los desechos y materiales. La zona del laboratorio debe contar
con una autoclave de doble puerta. Debe disponerse de otros mtodos de descon-
taminacin para aquellos elementos del equipo que no soporten la esterilizacin
por vapor.
6. Accesos con entrada de cierre hermtico para muestras, materiales y animales.
7. Deben existir lneas de suministro elctrico exclusivas y de emergencia.
8. Se instalarn sumideros de contencin.
Dada la gran complejidad de las caractersticas tcnicas, el diseo y la construccin
de las instalaciones del nivel de bioseguridad 4, tanto en la modalidad de CSB como
en la de trajes especiales, no se han incluido representaciones esquemticas de esas
instalaciones.
Del mismo modo, la gran complejidad del trabajo que se lleva a cabo en los labo-
ratorios del nivel de bioseguridad 4 hace necesario elaborar un manual de trabajo
detallado y aparte que se ensayar en los ejercicios de capacitacin. Adems, se ela-
borar un programa de emergencia (vase el captulo 13). En la preparacin de este
programa habr que contar con la colaboracin activa de las autoridades sanitarias
nacionales y locales, y la participacin de otros servicios de emergencia (por ejemplo
bomberos, polica y servicios hospitalarios).
5. EL LABORATORIO DE CONTENCIN MXIMA NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4
29
30
6. Animalarios
El empleo de animales de laboratorio con nes experimentales y de diagnstico
impone al usuario la obligacin moral de adoptar todas las medidas necesarias para
evitar que aqullos padezcan dolores o sufrimientos innecesarios. Hay que propor-
cionar a los animales un alojamiento cmodo, higinico y de dimensiones sucientes,
as como agua y comida de buena calidad y en cantidad suciente. Al nal del expe-
rimento habr que sacricarlos con el procedimiento menos cruel posible.
Por motivos de seguridad, los animales deben estar alojados en un local indepen-
diente, separado del laboratorio. Si se trata de un local contiguo, deber estar
construido de tal modo que sea posible aislarlo de las partes pblicas del laboratorio
en caso de necesidad, as como para las operaciones de descontaminacin y
desinfestacin.
Cuadro 4. Niveles de contencin de los animalarios: resumen de los procedi-
mientos y equipo de seguridad
GRUPO DE NIVEL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO Y EQUIPO DE SEGURIDAD
RIESGO CONTENCIN
1 NBSA-1 Acceso restringido, ropa y guantes protectores
2 NBSA-2 Procedimientos del NBSA-1, ms seales de advertencia del riesgo.
CSB de clase I o II para las actividades que producen aerosoles.
Descontaminacin de desechos y jaulas antes del lavado.
3 NBSA-3 Procedimientos del NBSA-2, ms acceso controlado. CSB y ropa
protectora especial para todas las actividades.
4 NBSA-4 Procedimientos del NBSA-3, ms acceso estrictamente restringido.
Muda de ropa antes de entrar. CSB de clase III o trajes de presin
positiva. Ducha a la salida. Descontaminacin de todos los desechos
antes de su salida de las instalaciones.
NBSA: nivel de bioseguridad de las instalaciones para los animales; CSB: cmaras de seguridad biolgica.
Al igual que los laboratorios, los animalarios pueden clasicarse en cuatro niveles
de bioseguridad, con arreglo a una evaluacin del riesgo y al grupo de riesgo al que
pertenecen los microorganismos investigados.
En lo que respecta a los agentes patgenos que van a utilizarse en el laboratorio de
animales, hay que tener en cuenta los siguientes factores:
1. La va normal de transmisin.
2. Los volmenes y las concentraciones que van a manejarse.
3. La va de inoculacin.
4. En su caso, la va de excrecin de los agentes.
En cuanto a los animales que van a usarse en el laboratorio, los factores que hay que
tener en cuenta son los siguientes:
1. El carcter de los animales, es decir, su grado de agresividad y tendencia a morder
o araar.
2. Sus endoparsitos y ectoparsitos naturales.
3. Las zoonosis a las que son susceptibles.
4. La posible diseminacin de alrgenos.
Como en el caso de los laboratorios, los requisitos relativos a las caractersticas de
diseo, el equipo y las precauciones son cada vez ms estrictos a medida que aumenta
el nivel de seguridad. Esos requisitos se describen a continuacin y se resumen en el
cuadro 4. Las directrices son acumulativas; es decir, cada nivel incorpora los requisi-
tos de los niveles inferiores.
Animalarios nivel de bioseguridad 1
Este nivel es el apropiado para mantener a la mayora de los animales despus de la
cuarentena (salvo los primates no humanos, respecto de los cuales debe consultarse a
las autoridades nacionales) y para los animales que son inoculados deliberadamente
con agentes del grupo de riesgo 1. Se necesitan tcnicas microbiolgicas apropiadas.
El director del animalario debe determinar las polticas, procedimientos y protocolos
para todas las operaciones, as como para el acceso al animalario. Se instituir un pro-
grama apropiado de vigilancia mdica para el personal y se preparar y adoptar un
manual de seguridad de las operaciones.
Este nivel es apropiado para el trabajo con animales a los que se inoculan delibe-
radamente microorganismos del grupo de riesgo 2. Se aplicarn las siguientes
precauciones de seguridad:
1. Se cumplirn todos los requisitos de los animalarios del nivel 1.
2. Se colocarn seales de advertencia del peligro biolgico (vase la gura 1) en las
puertas y otros lugares apropiados.
3. El local estar diseado de modo que sea fcil de limpiar y mantener.
4. Las puertas deben abrirse hacia dentro y cerrarse solas.
5. La calefaccin, la ventilacin y la iluminacin deben ser apropiadas.
6. ANIMALARIOS
31
6. Si se instala ventilacin mecnica, el ujo de aire debe dirigirse hacia dentro. El
aire utilizado se evacuar al exterior y no se reciclar a ninguna otra parte del
edicio.
7. El acceso se limitar a las personas autorizadas.
8. No se admitir ningn animal distinto de los utilizados con nes experimentales.
9. Existir un programa de lucha contra artrpodos y roedores.
10. Si hay ventanas, estas sern seguras, irrompibles y, si se pueden abrir, llevarn
rejillas a prueba de artrpodos.
11. Las supercies de trabajo habrn de ser descontaminadas con desinfectantes e-
caces despus del trabajo (vase el captulo 14).
12. Se dispondr de CSB (clases I o II) o jaulas aislantes con suministro especial de
aire y evacuacin de aire a travs de ltros HEPA para aquellas tareas que puedan
entraar la generacin de aerosoles.
13. Se dispondr de una autoclave in situ o cerca del animalario.
14. El material de los lechos de los animales se eliminar de modo que se reduzca al
mnimo la produccin de aerosoles y polvo.
15. Todos los materiales de desecho y de los lechos deben descontaminarse antes de
ser eliminados.
16. Se restringir en lo posible el uso de instrumentos punzantes o cortantes. stos se
recogern siempre en recipientes resistentes y a prueba de perforacin, provistos
de tapa, y sern tratados como material infeccioso.
17. El material destinado al tratamiento con autoclave o a la incineracin debe trans-
portarse sin riesgo en recipientes cerrados.
18. Las jaulas de los animales se descontaminarn despus de su uso.
19. Los cadveres de los animales sern incinerados.
20. En el local se utilizar ropa y equipo de proteccin, que se retirar a la salida.
21. Se instalarn lavabos y el personal se lavar las manos antes de salir del animalario.
22. Todas las lesiones, por leves que sean, debern ser tratadas de forma apropiada,
noticadas y registradas.
23. Estar prohibido comer, beber, fumar y aplicar cosmticos dentro del animalario.
24. Todo el personal deber recibir capacitacin apropiada.
Este nivel es apropiado para trabajar con animales que son inoculados deliberada-
mente con agentes incluidos en el grupo de riesgo 3, o cuando as lo indique la
evaluacin del riesgo. Todos los sistemas, prcticas y procedimientos habrn de ser
revisados y certicados nuevamente una vez al ao. Se aplicarn las siguientes pre-
cauciones de seguridad:
1. Deben cumplirse todos los requisitos correspondientes a los animalarios de los
niveles de bioseguridad 1 y 2.
2. El acceso debe estar estrictamente controlado.
32
3. El animalario estar separado de otros locales del laboratorio y destinados a ani-
males por dos puertas que formen un vestbulo o antesala.
4. En el vestbulo se instalarn lavabos.
5. En el vestbulo se instalarn duchas.
6. Habr que disponer de ventilacin mecnica que asegure un ujo continuo de aire
en todos los locales. El aire de salida pasar por ltros HEPA antes de ser
evacuado a la atmsfera sin ningn tipo de recirculacin. El sistema estar
diseado de tal modo que impida el ujo de retorno accidental y que haya una
presin positiva en todas partes del animalario.
7. Se dispondr de una autoclave situada en un lugar cmodo respecto del alo-
jamiento de los animales y donde el riesgo biolgico est contenido. Los residuos
infecciosos se tratarn en la autoclave antes de trasladarlos a otros lugares de la
instalacin.
8. Se dispondr de un incinerador de fcil acceso en la instalacin o se tomarn otras
disposiciones al mismo efecto con las autoridades competentes.
9. Los animales infectados con microorganismos del grupo de riesgo 3 estarn alo-
jados en jaulas aisladas o en locales con salidas de ventilacin situadas detrs de
las jaulas.
10. Los lechos de los animales tendrn el mnimo polvo que sea posible.
11. Toda la ropa protectora deber ser descontaminada antes de enviarla a la
lavandera.
12. Las ventanas estarn hermticamente cerradas y sern resistentes a la rotura.
13. Se ofrecer al personal la posibilidad de inmunizarse, si procede.
El trabajo que se realice en estas instalaciones normalmente guardar relacin con el
del laboratorio de contencin mxima nivel de bioseguridad 4, y habr que armo-
nizar las normas y los reglamentos nacionales y locales para aplicarlos a ambos tipos
de instalaciones. Para el trabajo en laboratorios que requieren trajes especiales se uti-
lizarn prcticas y procedimientos especiales, adems de los que se describen a con-
tinuacin (vase el captulo 5).
1. Se cumplirn todos los requisitos de los animalarios de los niveles de bioseguri-
dad 1, 2 y 3.
2. El acceso estar estrictamente controlado; slo tendr autorizacin para entrar el
personal designado por el director del establecimiento.
3. Ninguna persona deber trabajar sola: se aplicar la regla de las dos personas.
4. El personal habr recibido el mximo nivel posible de formacin en microbiologa
y estar familiarizado con los riesgos que entraa su trabajo y las precauciones
necesarias.
5. Las zonas en las que se alojen los animales infectados con agentes del grupo de
riesgo 4 mantendrn los criterios de contencin descritos y aplicados en los
laboratorios de contencin mxima nivel de bioseguridad 4.
6. ANIMALARIOS
33
6. Se entrar en la instalacin por un vestbulo de cierre hermtico cuya parte limpia
estar separada de la parte restringida por las instalaciones de cambio de ropa y
duchas.
7. El personal deber quitarse la ropa de calle al entrar y ponerse ropa protectora
especial. Despus del trabajo se quitar la ropa, la separar para ser tratada en
autoclave, y se duchar antes de salir.
8. La instalacin estar ventilada por un sistema de evacuacin de aire con ltros
HEPA que asegure una presin negativa (ujo de aire hacia el interior).
9. El sistema de ventilacin estar diseado de modo que impida el ujo de retorno
y la presurizacin positiva.
10. Para el intercambio de materiales se dispondr de una autoclave de doble puerta
con el extremo limpio situado en una sala exterior a las salas de contencin.
11. Para el intercambio de materiales que no puedan ser tratados en la autoclave se
dispondr de una caja de paso con cierre hermtico cuyo extremo limpio estar
situado fuera de salas de contencin.
12. Todas las manipulaciones de animales infectados con agentes del grupo de riesgo
4 se realizarn en condiciones de contencin mxima nivel de bioseguridad 4.
13. Todos los animales estarn alojados en aisladores.
14. Todos los desechos y el material de los lechos de los animales se tratarn en la
autoclave antes de sacarlos del animalario.
15. Se someter al personal a vigilancia mdica.
Invertebrados
Como en el caso de los vertebrados, el nivel de bioseguridad de las instalaciones para
estos animales vendr determinado normalmente por el grupo de riesgo del agente
estudiado o segn lo que indique la evaluacin del riesgo. No obstante, con ciertos
artrpodos, en particular los insectos voladores, se necesitan adems algunas precau-
ciones especiales:
1. Se dispondr de locales distintos para los invertebrados infectados y no
infectados.
2. Esos locales podrn sellarse para ser fumigados.
3. Se dispondr con facilidad de pulverizadores de insecticidas.
4. Se dispondr de instalaciones de enfriamiento para reducir, cuando sea preciso,
la actividad de los invertebrados.
5. El acceso se har a travs de un vestbulo provisto de mosquiteras en las puertas
y trampas para insectos.
6. Todos los conductos de salida de la ventilacin y las ventanas que puedan abrirse
estarn equipados con mosquiteras.
7. No se permitir que se sequen los sifones de los fregaderos y desages.
8. Todos los residuos se descontaminarn en la autoclave, ya que algunos inverte-
brados son resistentes a algunos insecticidas.
34
9. Se controlar el nmero de larvas y formas adultas de artrpodos voladores, rep-
tadores y saltadores.
10. Los recipientes para garrapatas y caros se depositarn en cubetas con aceite.
11. Los insectos voladores infectados o potencialmente infectados se albergarn en
jaulas de doble malla.
12. Los artrpodos infectados o potencialmente infectados se manipularn en CSB o
cmaras aislantes.
13. Los artrpodos infectados o potencialmente infectados podrn manipularse en
bandejas de enfriamiento.
Puede obtenerse ms informacin en las referencias 3 a 6.
6. ANIMALARIOS
35
36
7. Directrices para la puesta en
servicio de laboratorios e
instalaciones
La puesta en servicio de laboratorios e instalaciones anes puede denirse como el
proceso de comprobacin sistemtica y documentacin de que los componentes
estructurales y los sistemas y/o componentes de sistemas del laboratorio han sido
instalados, inspeccionados, sometidos a pruebas funcionales y vericados para deter-
minar si cumplen las normas nacionales o internacionales, segn proceda. Esos
requisitos son establecidos por los criterios de diseo del sistema y la funcin de cada
edicio. En otras palabras, los laboratorios de los niveles de bioseguridad 1 a 4 tendrn
distintos requisitos, cada vez ms complejos, en materia de puesta en servicio. Las
condiciones geogrcas y climticas, como las fallas tectnicas o el calor, fro y
humedad extremos, tambin pueden inuir en el diseo del laboratorio y, por tanto,
en los requisitos de la puesta en servicio. Al nal del proceso de puesta en servicio, los
componentes estructurales y los sistemas de apoyo pertinentes habrn sido someti-
dos a las diversas condiciones de funcionamiento que razonablemente cabe esperar,
as como a distintas modalidades de fallo, y habrn recibido la aprobacin necesaria.
El proceso de puesta en servicio y los criterios de aceptacin de las instalaciones
debern determinarse en una fase temprana, preferiblemente durante la progra-
macin del proyecto de construccin o renovacin. Al tener en cuenta el proceso de
puesta en servicio durante las primeras fases del proyecto, los arquitectos, los inge-
nieros, el personal de seguridad e higiene y, en ltima instancia, los ocupantes del
laboratorio comprendern los requisitos de funcionamiento del laboratorio de que se
trate y tendrn expectativas uniformes en cuanto al rendimiento de las instalaciones.
El proceso de puesta en servicio proporciona a la institucin y a la comunidad cir-
cundante un mayor grado de conanza al asegurar que los sistemas estructural, elc-
trico, mecnico y de conducciones, los sistemas de contencin y descontaminacin y
los sistemas de seguridad y alarma funcionarn conforme a lo previsto para garanti-
zar la contencin de todo microorganismo potencialmente peligroso con el que se est
trabajando en ese laboratorio o animalario.
Las actividades de puesta en servicio suelen comenzar durante la fase de progra-
macin del proyecto y avanzan a lo largo de la construccin y el ulterior perodo de
garanta del laboratorio o la instalacin. Los perodos de garanta normalmente deben
ser de un ao tras la ocupacin de las instalaciones. Se recomienda recurrir a un agente
de puesta en servicio que sea independiente de las empresas de arquitectos, ingenieros
y constructores que han intervenido en el diseo y la construccin del laboratorio. El
agente acta como defensor de la institucin que construye o renueva el laboratorio
y debe ser considerado miembro del equipo de diseo; su participacin en las
primeras fases de programacin del proyecto es indispensable. En algunos casos, la
propia institucin puede desempear ese papel. Cuando se trate de laboratorios ms
complejos (niveles de bioseguridad 3 4), quiz la institucin desee recurrir a un
agente externo que haya demostrado experiencia y buen hacer en la puesta en servi-
cio de otros laboratorios y animalarios complejos. Aunque se recurra a un agente
independiente, la institucin debe formar parte del equipo de puesta en servicio. Se
recomienda que, adems del agente de puesta en servicio, formen tambin parte del
equipo el funcionario de seguridad y el ocial de proyectos de la institucin, el direc-
tor del programa y un representante del personal de operaciones y mantenimiento.
A continuacin se enumeran, de forma no exhaustiva, los sistemas y componentes
del laboratorio que pueden incluirse en un plan de puesta en servicio para un ensayo
de funcionamiento, segn el nivel de contencin de las instalaciones que se estn
renovando o construyendo. Evidentemente, el plan de puesta en servicio efectiva ree-
jar la complejidad del laboratorio que se est planicando.
1. Sistemas automatizados del edicio, incluidos los enlaces con puntos de vigilan-
cia y control remotos
2. Sistemas electrnicos de vigilancia y deteccin
3. Cierres electrnicos de seguridad y dispositivos lectores de proximidad
4. Sistemas de calefaccin, ventilacin (suministro y extraccin) y aire
acondicionado
5. Sistemas de ltracin HEPA
6. Sistemas de descontaminacin por ltros HEPA
7. Controles de los sistemas de calefaccin, ventilacin, aire acondicionado,
evacuacin de aire, y cierre con dispositivo de interbloqueo
8. Compuertas aislantes de cierre hermtico
9. Sistema de refrigeracin del laboratorio
10. Calderas y sistema de vapor
11. Sistemas de deteccin, alarma y extincin de incendios
12. Sistemas de prevencin de reujo del agua de uso domstico
13. Sistemas de agua tratada (es decir, smosis inversa, agua destilada)
14. Sistemas de tratamiento y neutralizacin de euentes lquidos
15. Sistemas de fontanera y desages
16. Sistemas de descontaminacin qumica
17. Sistemas de gases para laboratorios mdicos
18. Sistemas de aire para respirar
19. Sistemas de aire para servicios e instrumentos
20. Vericacin de la cascada de presiones diferenciales en los laboratorios y zonas
auxiliares
21. Sistemas de red de rea local (LAN) y de datos informticos
7. DIRECTRICES PARA LA PUESTA EN SERVICIO DE LABORATORIOS E INSTALACIONES
37
22. Sistemas de energa ordinarios
23. Sistemas de energa de emergencia
24. Sistemas de energa ininterrumpibles
25. Sistemas de alumbrado de emergencia
26. Juntas aislantes de los elementos de alumbrado
27. Juntas aislantes de los dispositivos elctricos y mecnicos
28. Sistemas telefnicos
29. Controles de los dispositivos de interbloqueo de las puertas de cierre hermtico
30. Juntas de estanqueidad de las puertas de cierre hermtico
31. Juntas de estanqueidad de ventanas y mirillas
32. Cajas de paso a travs de barreras
33. Vericacin de la integridad estructural: suelos, paredes y techos de hormign
34. Vericacin de revestimientos de barrera: suelos, paredes y techos
35. Funciones de presurizacin y aislamiento en la zona de contencin del nivel de
bioseguridad 4
36. CSB
37. Autoclaves
38. Sistema de nitrgeno lquido y alarmas
39. Sistema de deteccin de agua (por ej., en caso de inundacin de la zona de
contencin)
40. Duchas de descontaminacin y sistema de aditivos qumicos
41. Sistemas de lavado y neutralizacin para jaulas
42. Gestin de desechos.
38
39
8. Directrices para la certicacin
de laboratorios e instalaciones
Los laboratorios son entornos complejos y dinmicos. Un laboratorio clnico o de
investigacin biomdica moderno debe ser capaz de adaptarse rpidamente a las
necesidades y presiones cada vez mayores en materia de salud pblica. Buen ejemplo
de ello es la necesidad de que los laboratorios ajusten sus prioridades para hacer frente
a los retos planteados por las enfermedades infecciosas emergentes o reemergentes.
Para velar por que esos entornos dinmicos que son los laboratorios se adapten y
estn mantenidos de modo apropiado y sin riesgos, todos los laboratorios clnicos y
de investigacin biolgica deben ser certicados peridicamente. Esa certicacin
permite garantizar que:
1. Se estn utilizando controles tcnicos apropiados que funcionan debidamente y
con arreglo al diseo
2. Existan los debidos controles administrativos respecto del lugar y de los
protocolos
3. El equipo de proteccin personal sea el indicado para las tareas que se realizan
4. La descontaminacin de desechos y materiales se haya estudiado y existan los
debidos procedimientos de gestin de desechos
5. Se observen las normas generales de seguridad en el laboratorio, entre ellas las
relativas a la seguridad fsica, elctrica y qumica.
La certicacin del laboratorio diere de las actividades de puesta en servicio (cap-
tulo 7) en varios aspectos importantes. La certicacin del laboratorio es el examen
sistemtico de todas las caractersticas y procesos de seguridad dentro del laboratorio
(controles tcnicos, equipo de proteccin personal y controles administrativos).
Tambin se examinan las prcticas y los procedimientos en materia de bioseguridad.
La certicacin es una actividad sostenida de garanta de la calidad y la seguridad que
debe efectuarse con carcter peridico.
Las actividades de certicacin de laboratorios pueden ser realizadas por profe-
sionales de seguridad y salud o de bioseguridad debidamente adiestrados. Las insti-
tuciones pueden contratar a personal que cuente con los conocimientos necesarios
para llevar a cabo auditoras, encuestas o inspecciones (trminos que se emplean
indistintamente) asociadas al proceso de certicacin. Tambin puede darse el caso
de que las instituciones preeran o se les exija recurrir a terceros para prestar esos
servicios.
Los laboratorios clnicos y de investigacin biomdica pueden poner a punto
instrumentos de auditora, encuesta o inspeccin para lograr cierta coherencia en el
proceso de certicacin. Esos instrumentos deben ser lo bastante exibles como para
amoldarse a las diferencias fsicas y de procedimiento que existen entre unos labora-
torios y otros y que dependen del tipo de trabajo que realizan, y al mismo tiempo
aplicar un criterio uniforme dentro de la institucin. Debe procurarse que esos instru-
mentos slo sean utilizados por personal adecuadamente adiestrado, para que no se
tomen como un mero sustituto de una correcta evaluacin profesional de la biose-
guridad. En los cuadros 5 a 7 se ofrecen ejemplos de esos instrumentos.
Los resultados de la auditora, encuesta o inspeccin deben comentarse con el per-
sonal y la direccin del laboratorio. Dentro del laboratorio, habr que designar a una
persona responsable de velar por que se adopten las medidas necesarias para corregir
toda deciencia que haya puesto de maniesto la auditora. La certicacin del labo-
ratorio no estar completa, y el laboratorio no deber funcionar, hasta que las de-
ciencias se hayan subsanado debidamente.
Por su complejidad, las operaciones de los laboratorios del nivel de bioseguridad 4
quedan fuera del alcance del presente manual. Si se desean ms detalles e informa-
cin, puede consultarse al Programa de Bioseguridad de la OMS
1
(vase tambin el
anexo 3).
40
1
Programa de Bioseguridad, Departamento de Enfermedades Transmisibles (Vigilancia y Respuesta),
Organizacin Mundial de la Salud, 20 Avenue Appia, 1211 Ginebra 27, Suiza (http://www.who.int/csr/).
8. DIRECTRICES PARA LA CERTIFICACIN DE LABORATORIOS E INSTALACIONES
41
Cuadro 5. Laboratorio bsico nivel de bioseguridad 1: encuesta sobre la
seguridad en el laboratorio
LUGAR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . FECHA . . . . . . . . . . . . . .
ENCARGADO DEL LABORATORIO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
COMPROBADO (FECHA) S NO N/A OBSERVACIONES
Laboratorio
Sealizacin apropiada: radiacin ultravioleta, lser, Nivel de
material radiactivo, etc. .................................................... bioseguridad:
Directrices de bioseguridad apropiadas disponibles Adjuntar el
y cumplidas ...................................................................... formulario de
Equipo de laboratorio debidamente rotulado (peligro encuesta del nivel
biolgico, radiactivo, txico, etc.) .................................... de bioseguridad
que corresponda
Diseo del laboratorio
Facilidad de limpieza .............................................................
Alumbrado ultravioleta en la sala con interruptor de
interbloqueo .....................................................................
Todas las estanteras estn jadas con rmeza ....................
Mostradores impermeables y resistentes a cidos,
lcalis, disolventes orgnicos y calor ...............................
Iluminacin suciente ...........................................................
Suciente espacio de almacenamiento, que se
aprovecha debidamente ...................................................
Bombonas de gas
Todas las bombonas bien aseguradas ..................................
Bombonas de reserva con sus tapas correspondientes .......
Gases asxiantes y peligrosos slo en salas ventiladas .......
Cantidad excesiva de bombonas o bombonas vacas ...........
Sustancias qumicas
Sustancias inamables almacenadas en armario
especial ............................................................................
Sustancias formadoras de perxidos con doble fecha
(recepcin y apertura) ......................................................
Sustancias qumicas debidamente separadas .......................
Sustancias qumicas peligrosas almacenadas por
encima del nivel de los ojos .............................................
Sustancias qumicas almacenadas en el suelo .....................
Recipientes abiertos ..............................................................
Todas las soluciones debidamente rotuladas ........................
Termmetros de mercurio en uso .........................................
Frigorcos/congeladores/cmaras de fro
Presencia de alimentos para consumo humano ...................
Sustancias inamables en unidades a prueba de
explosin ..........................................................................
Rtulos exteriores si contienen sustancias
cancergenas, radiactivas o con peligro biolgico ...........
Cmaras de fro con apertura de emergencia .......................
Equipo elctrico
Cables alargadores ................................................................
Enchufes con toma de tierra y la debida polaridad ...............
Conexiones cerca de fregaderos, duchas, etc. ......................
Equipo sin cables desgastados o en mal estado ..................
Enchufes o tomas elctricas sobrecargados .........................
Tomas de corriente montadas fuera del suelo ......................
Fusibles apropiados ..............................................................
Las tomas elctricas cercanas a puntos de agua
cumplen las normas locales .............................................
Toma de tierra en cables elctricos .......................................
Calefactores porttiles ...........................................................
Equipo de proteccin personal
Material para lavado de ojos en el laboratorio ......................
Ducha de seguridad disponible .............................................
Equipo de proteccin personal disponible (guantes,
batas, gafas de proteccin, etc.) ......................................
Ocupantes debidamente vestidos ..........................................
Las batas, camisas, guantes y otras prendas de vestir
no se usan fuera del laboratorio ......................................
Equipo de proteccin personal para el
almacenamiento criognico ..............................................
Gestin de residuos
Signos de gestin indebida de residuos ...............................
Desechos debidamente separados en los recipientes
apropiados .......................................................................
Recipientes para residuos qumicos rotulados,
fechados y cerrados .........................................................
Recipientes para residuos qumicos debidamente
manipulados y almacenados ............................................
Recipientes para objetos cortantes y punzantes
debidamente utilizados y eliminados ...............................
Ausencia de basura en el suelo .............................................
Procedimientos de eliminacin de residuos expuestos
en el laboratorio ...............................................................
Programas de salud y seguridad en el trabajo
Comunicacin de riesgos ......................................................
Proteccin respiratoria ..........................................................
Conservacin de la audicin .................................................
Vigilancia del formaldehdo ...................................................
Vigilancia del xido de etileno ...............................................
Vigilancia de gases anestsicos ............................................
Controles tcnicos generales
La presin en el laboratorio es negativa respecto de
las zonas de ocupacin general, los pasillos y
las ocinas .......................................................................
42
Los sumideros de las pilas actan como respiraderos .........
Se dispone de lavabo para las manos ..................................
Piezas de maquinaria al aire (poleas, ruedas dentadas) .......
La lnea de vaco tiene ltros y sifones en las mesas
de trabajo .........................................................................
Riesgo de reujo al suministro de agua ...............................
Sistemas de agua destilada en buen estado .........................
Programa activo y ecaz de control de artrpodos
y roedores ........................................................................
Prcticas y procedimientos generales
Los alimentos para consumo humano se guardan
fuera del laboratorio .........................................................
Los hornos de microondas estn claramente
rotulados: Prohibida la preparacin de
alimentos. Uso exclusivo del laboratorio .......................
En el laboratorio se come, se bebe, se fuma o se
aplican cosmticos ...........................................................
Recipientes de vidrio presurizados sellados con cinta
adhesiva o protegidos (purgadores de vaco) ..................
Prohibicin de pipetear con la boca ......................................
Dispositivos mecnicos de pipeteo disponibles y en
uso ...................................................................................
Ropa protectora de laboratorio almacenada en lugar
distinto de la ropa de calle ...............................................
Organizacin general del laboratorio
Recipientes de vidrio en el suelo ..........................................
Riesgos evidentes de tropezarse ...........................................
Paos absorbentes limpios en las supercies de
trabajo ..............................................................................
Objetos de vidrio roto manipulados por medios
mecnicos (escoba y recogedor, pinzas, etc.) .................
Proteccin contra incendios
Aspersores libres y despejados ............................................
Inserciones abiertas en paredes, techos, suelos, etc. ...........
Cables o conducciones a travs del hueco de la puerta .......
Paso de anchura mnima de 1m en el laboratorio ................
Objetos almacenados sobre las tuberas o los
accesorios elctricos ........................................................
Exceso de combustibles almacenados en el laboratorio .......
Baos calientes a temperatura constante
Bao equipado con nivel de agua bajo y termostato
para posible sobrecalentamiento ......................................
Bao construido con materiales no combustibles ................
Firma del encargado de la encuesta de seguridad . . . . . . . . Fecha de la encuesta . . . . . . . . .
N/A = no aplicable.
43
44
Cuadro 6. Laboratorio bsico nivel de bioseguridad 2: encuesta sobre la
seguridad en el laboratorio. Este formulario debe emplearse junto con el
anterior (nivel de bioseguridad 1)
LUGAR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . FECHA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Cmara de seguridad biolgica Fecha:
Certicada en los doce meses anteriores .................................... Localizacin:
Su supercie se limpia con un desinfectante apropiado al Marca:
principio y al nal de cada procedimiento ............................. Tipo:
Rejilla frontal y ltro de salida sin obstrucciones ....................... N de serie:
Uso de llamas desnudas dentro de la cmara ............................
La lnea de vaco dispone de ltros y sifones con
desinfectante ..........................................................................
Posicin incorrecta en relacin con las corrientes de aire en
la sala .....................................................................................
Se utiliza cuando hay posibilidad de que se generen aerosoles ..
Laboratorio
Acceso limitado y restringido al personal autorizado ..................
Entrada limitada al personal informado de todos los riesgos .....
Signo de peligro biolgico en la puerta, si procede ....................
Informacin del signo exacta y actualizada ........................
Signo legible y no borrado ..................................................
Todas las puertas cerradas ..........................................................
Descontaminacin
Descontaminante especco para el organismo que se est
usando ....................................................................................
Informe al supervisor del laboratorio de todo derrame
y accidente con material infeccioso .......................................
Utilizacin del descontaminante apropiado para limpiar los
derrames ................................................................................
Descontaminacin de las supercies de trabajo antes y despus
de cada operacin, todos los das y tras cualquier
derrame ..................................................................................
Manipulacin de desechos contaminados
Los recipientes de desechos infecciosos se utilizan
debidamente ............................................................................
Los recipientes estn excesivamente llenos ................................
Los recipientes estn debidamente rotulados y cerrados ...........
Los cultivos y otros desechos reglamentados se
descontaminan correctamente antes de eliminarlos ..............
Los materiales descontaminados fuera del laboratorio se
transportan en recipientes cerrados, duraderos y estancos,
conformes con las normas y reglamentaciones locales ........
Los desechos mixtos se descontaminan biolgicamente antes
de ser eliminados como residuos qumicos o radiolgicos ...
45
Proteccin personal
Se recuerdan al personal del laboratorio las inmunizaciones/
pruebas apropiadas para los agentes que se manejan ..........
Se recurre a los servicios mdicos apropiados para las
evaluaciones mdicas, la vigilancia y el tratamiento de la
exposicin ocupacional ..........................................................
Se utilizan guantes cuando se maneja material infeccioso o
equipo contaminado ...............................................................
Se usa proteccin facial cuando se trabaja con material
infeccioso fuera de la CSB .....................................................
Se lavan las manos despus de retirar los guantes o de trabajar
con agentes infecciosos y antes de salir del laboratorio .......
Agente antimicrobiano disponible para primeros auxilios
inmediatos ..............................................................................
Prcticas
Se utiliza la CSB cuando hay la posibilidad de que se generen
aerosoles infecciosos o salpicaduras .....................................
Se ha preparado y adoptado un manual de bioseguridad ...........
El personal lee, revisa y sigue las instrucciones sobre prcticas
y procedimientos (obligatorio una vez al ao para todo
el personal) ............................................................................
Se aplican procedimientos para reducir al mnimo los aerosoles
y salpicaduras ........................................................................
Se utilizan jeringuillas con vaina ja protectora de la aguja o
jeringuillas con aguja ja de un solo uso ...............................
Los cestillos y rotores de centrifugadora se abren solamente
dentro de la CSB ....................................................................
Las muestras infecciosas se transportan fuera de la CSB en
recipientes aprobados, siguiendo las normas de transporte
aprobadas ...............................................................................
Instalaciones
Lavabo para las manos disponible cerca de la salida del
laboratorio ..............................................................................
Firma del encargado de la encuesta de seguridad . . . . . . . . . . . . . . Fecha de la encuesta . . . .
N/A = no aplicable. CSB = cmara de seguridad biolgica.
46
Cuadro 7. Laboratorio de contencin nivel de bioseguridad 3: encuesta sobre la
seguridad en el laboratorio.
Este formulario debe emplearse junto con los dos anteriores (niveles de
bioseguridad 1 y 2)
LUGAR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . FECHA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Instalaciones
El laboratorio est separado de la circulacin general del
edicio ....................................................................................
El acceso al laboratorio se hace por una antesala con puertas
de cierre automtico ...............................................................
Todas las aberturas del laboratorio estn selladas o pueden
cerrarse hermticamente para la descontaminacin ..............
El aire del laboratorio se evacua en un solo sentido y a distancia
de las zonas ocupadas ...........................................................
Se dispone de un sistema de ventilacin controlado para vigilar
la direccin de la corriente de aire .........................................
Proteccin personal
En el laboratorio se usan batas sin aberturas delanteras ............
La ropa de proteccin slo se usa en las zonas de laboratorio...
Los grifos del lavabo se accionan con el pie, el codo o son
automticos ............................................................................
Proteccin de las manos
Se usan guantes dobles para manejar material infeccioso y
equipo o supercies de trabajo potencialmente
contaminados .........................................................................
Proteccin respiratoria
Todo el personal lleva proteccin respiratoria en el laboratorio
mientras los aerosoles no estn contenidos de forma segura
en la CSB ................................................................................
Prcticas
Se protegen las mucosas cuando se trabaja con material
infeccioso fuera de una CSB ..................................................
Se informa al personal sobre los riesgos especiales asociados
a los agentes con los que se trabaja ......................................
El personal est obligado a leer y aplicar todas las instrucciones
sobre prcticas y procedimientos ..........................................
El personal recibe actualizaciones anuales o formacin
complementaria para los cambios de procedimiento .............
Todos los residuos contaminados se tratan en la autoclave
antes de eliminarlos ...............................................................
Firma del encargado de la encuesta de seguridad . . . . . . . . . . . Fecha de la encuesta . . . . .
N/A = no aplicable. CSB = cmara de seguridad biolgica.
PARTE II
Bioproteccin en
el laboratorio
9. Conceptos de bioproteccin
en el laboratorio
49
En ediciones anteriores, el Manual de bioseguridad en el laboratorio se ha centrado en
las orientaciones tradicionales en materia de seguridad biolgica para los laborato-
rios. En ellas se haca hincapi en el uso de prcticas microbiolgicas correctas, el
equipo de contencin apropiado, el diseo, la operacin y el mantenimiento de las
instalaciones, y los aspectos administrativos para reducir al mnimo el riesgo de
lesiones o enfermedades entre el personal. Con la aplicacin de esas recomendaciones,
el riesgo para el medio ambiente y para la comunidad circundante tambin se reduce
al mnimo. Sin embargo, los acontecimientos mundiales recientes han puesto de
relieve la necesidad de proteger los laboratorios y los materiales que contienen de
acciones que puedan perjudicar a las personas, el ganado, la agricultura o el medio
ambiente. Antes de denir las necesidades de un laboratorio o un programa en materia
de bioproteccin, es preciso denir claramente la distincin entre seguridad biol-
gica y proteccin biolgica.
Seguridad biolgica (o bioseguridad) es el trmino utilizado para referirse a
los principios, tcnicas y prcticas aplicadas con el n de evitar la exposicin no inten-
cional a patgenos y toxinas, o su liberacin accidental. En cambio, la proteccin
biolgica (o bioproteccin) se reere a las medidas de proteccin de la institucin
y del personal destinadas a reducir el riesgo de prdida, robo, uso incorrecto, desvia-
ciones o liberacin intencional de patgenos o toxinas.
Un programa de bioproteccin debe apoyarse en un programa slido de seguridad
biolgica. Mediante las evaluaciones del riesgo realizadas como parte integral
del programa de bioseguridad de la institucin, se acopia informacin sobre el tipo
de organismos utilizados, su localizacin, el personal que necesita tener acceso a ellos
y las personas responsables de ellos. Esa informacin puede utilizarse para determi-
nar si la institucin posee materiales biolgicos de inters para quienes puedan
querer usarlos incorrectamente. Deben elaborarse normas nacionales que reconoz-
can y denan la responsabilidad que tienen los pases y las instituciones de pro-
teger las muestras, patgenos y toxinas para que no sean utilizados de forma
incorrecta.
Debe prepararse y aplicarse un programa de bioproteccin especco para cada
centro, teniendo en cuenta los requisitos del centro, el tipo de trabajo de laboratorio
que se realiza y las condiciones locales. En consecuencia, las actividades de biopro-
teccin en el laboratorio deben ser representativas de las diferentes necesidades de la
institucin y tener en cuenta la informacin proporcionada por los directores cient-
cos, los investigadores principales, los funcionarios de bioseguridad, el personal cien-
tco del laboratorio, el personal de mantenimiento, los administradores, el personal
de tecnologa de la informacin y, cuando proceda, de los organismos responsables
del cumplimiento de la ley y del personal de seguridad.
Las medidas de proteccin biolgica del laboratorio deben basarse en un programa
integral de rendicin de cuentas sobre los patgenos y las toxinas que incluya un
inventario actualizado donde gure el lugar de almacenamiento, la identicacin del
personal que dispone de acceso, la descripcin del uso, la documentacin de las trans-
ferencias internas o externas, dentro de un mismo centro y entre diferentes centros, y
cualquier inactivacin y/o eliminacin de los materiales. Del mismo modo, debe
instaurarse un protocolo institucional de bioproteccin en el laboratorio, destinado a
identicar, noticar, investigar y corregir los incumplimientos de las normas de bio-
proteccin del laboratorio, incluidas las discrepancias en los resultados de los inven-
tarios. La participacin y los papeles y responsabilidades de las autoridades de salud
pblica y de seguridad en caso de infraccin de las normas de proteccin deben estar
claramente denidas.
Se proporcionar capacitacin especca en materia de bioproteccin, adems de
la relativa a la seguridad biolgica, a todo el personal. Esa capacitacin ayudar al per-
sonal a comprender la necesidad de proteger esos materiales y los fundamentos de las
medidas concretas de bioproteccin, y deber incluir un examen de las normas
nacionales y de los procedimientos especcos de la institucin que sean pertinentes.
Durante la capacitacin tambin se deben presentar procedimientos que describan los
papeles y las responsabilidades del personal en lo relativo a la proteccin, en caso de
infraccin de las normas.
La idoneidad profesional y tica para trabajar con patgenos peligrosos por parte
de todo el personal que disponga de autorizacin de acceso regular a materiales sen-
sibles es otro componente fundamental de las actividades ecaces de bioproteccin
en el laboratorio.
En resumen, las precauciones relacionadas con la proteccin deben formar parte
de la rutina de trabajo en el laboratorio, exactamente igual que las tcnicas aspticas
y otras prcticas microbiolgicas seguras. Las medidas de bioproteccin no deben di-
cultar el intercambio eciente de materiales de referencia, de muestras clnicas y epi-
demiolgicas ni de la informacin conexa necesaria para las investigaciones clnicas
o de salud pblica. Una gestin competente de la proteccin no tiene por qu inter-
ferir indebidamente con las actividades cotidianas del personal cientco ni ser un
impedimento para la actividad investigadora. Se debe proteger el acceso legtimo a
materiales clnicos y de investigacin importantes. La evaluacin de la idoneidad del
personal, la formacin especca en temas de proteccin y el cumplimiento riguroso
de los procedimientos de proteccin de los patgenos constituyen formas razonables
de incrementar la bioproteccin en el laboratorio. Todas estas medidas deben ser
establecidas y mantenidas mediante evaluaciones peridicas de los riesgos y las ame-
50
nazas y mediante una revisin y actualizacin peridica de los procedimientos. Las
comprobaciones del cumplimiento de estos procedimientos, con instrucciones claras
sobre los papeles, las responsabilidades y las medidas correctoras, deben formar parte
integral de los programas de bioproteccin del laboratorio y de las normas nacionales
sobre la bioproteccin en el laboratorio.
9. CONCEPTOS DE BIOPROTECCIN EN EL LABORATORIO
51
PARTE III
Equipo de laboratorio
10. Cmaras de seguridad
biolgica
55
Las CSB estn diseadas para proteger al trabajador, la atmsfera del laboratorio y los
materiales de trabajo de la exposicin a las salpicaduras y los aerosoles infecciosos que
pueden generarse al manipular material que contiene agentes infecciosos, como
cultivos primarios, soluciones madre y muestras de diagnstico. Los aerosoles se
producen en cualquier actividad que transmita energa a un material lquido o
semilquido, por ejemplo, al agitarlo, verterlo a otro recipiente, removerlo o verterlo
sobre una supercie o sobre otro lquido. Las actividades como la siembra de placas
de agar, la inoculacin de frascos de cultivo celular con pipeta, el uso de pipetas
mltiples para dispensar suspensiones lquidas de agentes infecciosos en placas
de microcultivo, la homogeneizacin y la agitacin vorticial de material infeccioso, y
la centrifugacin de lquidos infecciosos o el trabajo con animales pueden generar
aerosoles infecciosos. Las partculas de aerosol de menos de 5mm de dimetro y las
pequeas gotculas de 5 a 100mm de dimetro no son visibles a simple vista. El tra-
bajador no suele darse cuenta de que se estn produciendo esas partculas, que pueden
ser inhaladas o provocar la contaminacin cruzada de los materiales que se encuen-
tran sobre las supercies de trabajo. Las CSB, cuando se utilizan debidamente, han
demostrado ser sumamente ecaces para reducir las infecciones adquiridas en el
laboratorio y la contaminacin cruzada de cultivos por exposicin a aerosoles. Las
CSB tambin protegen la atmsfera del laboratorio.
A lo largo de los aos, el diseo bsico de las CSB ha sufrido varias modicaciones.
Un cambio importante fue la adicin de un ltro HEPA. Los ltros HEPA retienen el
99,97% de las partculas de 0,3mm de dimetro y el 99,99% de las partculas de tamao
mayor o menor; esto les permite retener ecazmente todos los agentes infecciosos
conocidos y garantizar que de la cmara slo sale aire exento de microorganismos.
Una segunda modicacin del diseo consisti en dirigir hacia la supercie de trabajo
aire que haya pasado por ltros HEPA, con el n de proteger de la contaminacin los
materiales de esa supercie. Esta caracterstica a menudo se conoce como proteccin
del producto. Estos conceptos de diseo bsicos han llevado a la evolucin de tres
clases de CSB. En el cuadro 8 se explica el tipo de proteccin que ofrece cada una de
ellas.
Nota. Las cabinas de ujo de aire horizontal y vertical (bancos de trabajo de aire
limpio) no son CSB y no deben emplearse como tal.
Cmaras de seguridad biolgica de clase I
En la gura 6 aparece un esquema de una CSB de clase I. El aire de la sala entra por
la abertura delantera a una velocidad mnima de 0,38m/s, pasa por encima de la
supercie de trabajo y sale de la cmara por el conducto de extraccin. La corriente
de aire arrastra las partculas de aerosol que puedan generarse en la supercie de
trabajo, alejndolas del trabajador y dirigindolas hacia el conducto de extraccin. La
abertura frontal permite que los brazos del trabajador lleguen a la supercie de trabajo
del interior de la cmara mientras observa la supercie a travs de una ventana de
cristal. Esta ventana tambin puede levantarse por completo para tener acceso a la
supercie de trabajo para limpiarla o con otros nes.
El aire procedente de la cmara se evacua a travs de un ltro HEPA: a) al labora-
torio y a continuacin al exterior del edicio a travs del sistema de evacuacin de
aire del edicio; b) al exterior a travs del sistema de evacuacin de aire del edicio,
o c) directamente al exterior. El ltro HEPA puede estar situado en la cmara de dis-
tribucin del extractor de la CSB o en la salida de aire del edicio. Algunas CSB de
clase I llevan integrado un ventilador de extraccin, mientras que otras funcionan con
el ventilador de evacuacin de aire del sistema general del edicio.
La CSB de clase I fue la primera CSB reconocida, y debido a la sencillez de su diseo
sigue teniendo un uso muy extendido en todo el mundo. Su ventaja es que propor-
ciona proteccin tanto personal como ambiental y tambin puede utilizarse para tra-
bajar con radionclidos y sustancias qumicas txicas voltiles. Como se hace pasar
56
Cuadro 8. Seleccin de una cmara de seguridad biolgica (CSB) segn el tipo de
proteccin necesaria
TIPO DE PROTECCIN SELECCIN DE LA CSB
Proteccin personal, microorganismos Clase I, clase II, clase III
de los grupos de riesgo 1 a 3
Proteccin personal, microorganismos del Clase III
grupo de riesgo 4, laboratorio para
trabajar con cmara de guantes
Proteccin personal, microorganismos Clase I, clase II
del grupo de riesgo 4, laboratorio para
trabajar con trajes especiales
Proteccin del producto Clase II, clase III slo si incluye ujo laminar
Proteccin contra cantidades mnimas Clase IIB1, clase IIA2 ventilada hacia el
de sustancias qumicas/ exterior
radionclidos voltiles
Proteccin contra sustancias qumicas/ Clase I, clase IIB2, clase III
radionclidos voltiles
aire de la sala, sin esterilizar, sobre la supercie de trabajo, se considera que no ofrece
una proteccin able del producto.
Cmaras de seguridad biolgica de clase II
A medida que fue aumentando el uso de cultivos celulares y tisulares para la propa-
gacin de virus y otros nes, dej de considerarse satisfactorio que el aire no este-
rilizado de la sala pasara por encima de la supercie de trabajo. Adems de propor-
cionar proteccin personal, las CSB de clase II protegen del aire contaminado del local
a los materiales de la supercie de trabajo. Las CSB de clase II, de las que hay cuatro
tipos (A1, A2, B1 y B2), dieren de las CSB de clase I en que slo permiten que entre
en contacto con la supercie de trabajo aire que ha pasado por un ltro HEPA (aire
estril). Las CSB de clase II pueden utilizarse para trabajar con agentes infecciosos de
los grupos de riesgo 2 y 3, y tambin con agentes infecciosos del grupo de riesgo 4,
siempre que se utilicen trajes presurizados.
Cmaras de seguridad biolgica de clase II tipo A1
Estas cmaras se representan en la gura 7. Un ventilador interno succiona aire de la
sala (aire de entrada) hacia la cmara a travs de la abertura frontal y lo dirige hacia
la rejilla frontal de entrada. La velocidad de esta corriente de aire debe ser de al menos
0,38m/s a la altura de la abertura frontal. Ese aire pasa a continuacin por un ltro
HEPA antes de dirigirse, descendiendo verticalmente, hacia la supercie de trabajo.
10. CMARAS DE SEGURIDAD BIOLGICA
57
Figura 6. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase I.
A: abertura frontal; B: ventana de cristal; C: ltro HEPA de salida; D: cmara de dis-
tribucin del extractor
A medida que el aire desciende, se divide a unos 618cm de la supercie de trabajo,
de modo que la mitad pasa a travs de la rejilla de extraccin delantera y la otra mitad
por la rejilla de extraccin trasera. Toda partcula de aerosol que se genere en la super-
cie de trabajo es inmediatamente capturada por esta corriente de aire descendente y
pasa a travs de la rejilla de evacuacin delantera o trasera, con lo que se consigue el
mximo nivel de proteccin del producto. A continuacin el aire se evacua a travs
de la cmara de distribucin posterior hacia el espacio comprendido entre los ltros
de suministro y de evacuacin situados en la parte superior de la cmara. Debido al
tamao relativo de estos ltros, alrededor del 70% del aire vuelve a circular a travs
del ltro HEPA de suministro y regresa a la zona de trabajo; el 30% restante pasa a
travs del ltro de evacuacin hacia la sala o el exterior.
El aire de salida de este tipo de cmara puede reciclarse en la sala o evacuarse al
exterior del edicio a travs de un acoplador de tipo dedal conectado a un conducto
destinado exclusivamente a este n o a travs del sistema de evacuacin de aire del
edicio.
El reciclaje del aire de salida hacia la sala tiene la ventaja de reducir los gastos de
combustible del edicio, ya que no se evacua aire caliente o fro a la atmsfera exte-
rior. La conexin a los conductos del sistema de evacuacin de aire tambin permite
58
vista frontal vista lateral
aire de la sala
aire potencialmente contaminado
aire filtrado por HEPA
B
A
E
C
D
F
Figura 7. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase II tipo A1.
A: abertura frontal; B: ventana; C: ltro HEPA de salida; D: cmara de distribucin
trasera; E: ltro HEPA de suministro; F: ventilador
utilizar algunas CSB para trabajar con radionclidos voltiles y sustancias qumicas
txicas voltiles (cuadro 8).
Cmaras de clase II de tipo A2 con salida al exterior, y de tipo B1 y B2
Las CSB de clase IIA2 con salida al exterior, IIB1 (Figura 8) y IIB2 son variaciones del
tipo IIA1. Sus caractersticas, junto con las de las CSB de las clases I y III, se indican
en el cuadro 9. Cada una de esas variaciones permite utilizar la CSB para nes espec-
cos (vase el cuadro 8). Estas CSB se distinguen entre s en varios aspectos: la veloci-
dad de entrada del aire por la abertura frontal; la cantidad de aire que se vuelve a hacer
pasar por la supercie de trabajo y que sale de la cmara; el sistema de extraccin de
aire, que determina si el aire se evacua hacia la sala o al exterior por su propio sistema
de evacuacin o por el sistema de evacuacin de aire del edicio; y las presiones en el
interior de la cmara (en unas los conductos y las cmaras de distribucin cargados
de aire biolgicamente contaminado estn bajo presin negativa, o estn rodeados por
conductos y cmaras de distribucin bajo presin negativa).
59
Figura 8. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase IIB1.
A: abertura frontal; B: ventana; C: ltro HEPA de salida; D: ltro HEPA de entrada; E:
cmara de distribucin de salida con presin negativa; F: ventilador; G: ltro HEPA
para el aire de entrada. La salida de aire de la cmara debe estar conectada al sistema
de evacuacin de aire del edicio.
En las referencias 7 y 8 y en los prospectos informativos que proporcionan los fab-
ricantes pueden encontrarse las descripciones completas de las distintas cmaras de
clase IIA y IIB.
Cmaras de seguridad biolgica de clase III
Este tipo de cmaras (gura 9) es el que proporciona mayor nivel de proteccin per-
sonal y se utiliza para trabajar con agentes del grupo de Riesgo 4. Todos los oricios
estn sellados para impedir el paso de gases. El aire de entrada es ltrado por HEPA
y el aire de salida pasa por dos ltros HEPA. La corriente de aire se mantiene
mediante un sistema de extraccin propio en el exterior de la cmara, que mantiene
el interior de sta a una presin negativa (alrededor de 124,5Pa). El acceso a la
supercie de trabajo se hace mediante guantes de goma gruesa, conectados a unos
oricios en la cmara. La cmara debe tener una caja de paso que pueda esterilizarse
y vaya equipada con una salida de aire provista de un ltro HEPA. Puede ir conectada
a una autoclave de doble puerta en la que se descontaminar todo el material que
entre o salga de la cmara. Pueden unirse varias cmaras de guantes para ampliar la
supercie de trabajo. Las CSB de clase III son idneas para los laboratorios de los
niveles de bioseguridad 3 y 4.
Conexiones de aire de las cmaras de seguridad biolgica
Las CSB de las clases IIA1 y IIA2 con salida al exterior estn pensadas para tener cone-
xiones mediante acopladores de tipo dedal o de tipo campana en dosel. El dedal
60
Cuadro 9. Diferencias entre las cmaras de seguridad biolgica de las clases I, II y III
CSB VELOCIDAD EN LA FLUJO DE AIRE (%) SISTEMA DE
ABERTURA FRONTAL (m/s)
RECIRCULADO EVACUADO
EVACUACIN
Clase I
a
0,36 0 100 Conducto rgido
Clase IIA1 0,380,51 70 30 Extraccin a la sala
o a un acoplador
de tipo dedal
Clase IIA2 con 0,51 70 30 Extraccin a la sala
salida al exterior
a
o a un acoplador
de tipo dedal
Clase IIB1
a
Clase IIB2
a
Clase III
a
NA 0 100 Conducto rgido
NA: No aplicable.
a
Todos los conductos biolgicamente contaminados se encuentran bajo presin negativa o estn rodeados
por conductos y cmaras de distribucin con presin negativa.
se ajusta a la salida de aire de la cmara dejando un espacio libre de unos 2,5cm de
dimetro. Este pequeo espacio permite succionar aire de la sala tambin hacia el
sistema de evacuacin de aire del edicio. La capacidad del sistema de evacuacin del
edicio debe ser suciente para captar aire procedente tanto de la sala como de la
cmara. El dedal debe ser extrable o estar diseado para permitir las pruebas de
funcionamiento de la cmara. En general, el rendimiento de una cmara conectada
mediante un dedal no se ve muy afectado por las uctuaciones en la corriente de
aire del edicio.
Las CSB de las clases IIB1 y IIB2 estn conectadas por conductos rgidos, es decir
slidamente conectadas sin abertura de ninguna clase, al sistema de evacuacin del
edicio o, preferiblemente, a un sistema de conductos de extraccin propios. El
sistema de evacuacin del edicio debe adaptarse con precisin a los requisitos de
ujo de aire especicados por el fabricante tanto en relacin con el volumen como
con la presin esttica. La certicacin de las CSB conectadas por conductos rgidos
lleva mucho ms tiempo que la de las CSB que reciclan el aire hacia la sala o de las
que llevan acopladores de tipo dedal.
61
Figura 9. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase III (cmara de guantes).
A: oricios para guantes del largo de un brazo; B: ventana; C: dobles ltros HEPA de
salida; D: ltro HEPA de entrada; E: autoclave de doble puerta o caja de paso; F: tanque
de inmersin qumica. La salida del aire de la cmara debe estar conectada a un
sistema independiente de extraccin de aire del edicio.
Eleccin de una cmara de seguridad biolgica
La eleccin de una CSB depende primordialmente del tipo de proteccin que se nece-
site: proteccin del producto, proteccin del personal frente a microorganismos de los
grupos de riesgo 1 a 4, proteccin del personal frente a la exposicin a radionclidos
y sustancias qumicas txicas voltiles, o una combinacin de todas ellas. En el cuadro
8se muestra qu CSB se recomienda para cada tipo de proteccin.
No deben utilizarse sustancias qumicas txicas o voltiles en las CSB que reciclan
el aire de salida hacia la sala, es decir las de clase I no conectadas al sistema de eva-
cuacin de aire del edicio, o las de clase II A1 y A2. Las de clase IIB1 son aceptables
para trabajar con cantidades muy reducidas de sustancias qumicas voltiles y
radionclidos. Cuando est previsto utilizar cantidades importantes de radionclidos
y sustancias qumicas voltiles es necesario utilizar una CSB de clase IIB2, tambin
denominada cmara de extraccin total de aire.
Uso de las cmaras de seguridad biolgica en el laboratorio
Localizacin
La velocidad del aire que ingresa en la CSB por la abertura frontal es de unos 0,45
m/s. A esta velocidad, la integridad del ujo direccional del aire de entrada es frgil
y puede verse fcilmente perturbada por las corrientes de aire que generan el
movimiento de personas en las proximidades de la cmara, las ventanas abiertas, los
registros del suministro de aire y la apertura y cierre de puertas. Lo ms conveniente
es situar la CSB en un lugar alejado de la circulacin del personal y de corrientes de
aire que puedan provocar perturbaciones. Siempre que sea posible debe dejarse un
espacio de 30cm por detrs y a ambos lados de la cmara con el n de poder acceder
fcilmente a todas las partes de la cmara para las labores de mantenimiento. Por
encima de la CSB conviene dejar un espacio de 30 a 35cm que permita medir debida-
mente la velocidad del aire a travs del ltro de salida y cambiar este ltro.
Trabajadores
Si las CSB no se usan correctamente, sus efectos protectores pueden verse gravemente
disminuidos. Los trabajadores deben tener cuidado de mantener la integridad del ujo
de entrada de aire por la abertura frontal al meter y sacar los brazos de la cmara. Los
brazos deben moverse con lentitud, perpendicularmente a la abertura frontal. Es
conveniente esperar aproximadamente un minuto despus de meter las manos y los
brazos en la cmara antes de comenzar a manipular el material, con el n de permi-
tir que la cmara se ajuste y el aire barra las manos y los brazos. El nmero de
movimientos a travs de la abertura frontal tambin debe reducirse al mnimo colo-
cando todo el material necesario en el interior antes de comenzar las manipulaciones.
Colocacin del material
La rejilla frontal de entrada de las CSB de clase II no debe estar bloqueada con papeles,
instrumental ni otros objetos. La supercie de los materiales que haya que colocar en
el interior de la cmara debe descontaminarse con alcohol al 70%. El trabajo puede
62
realizarse sobre paos absorbentes empapados de desinfectante con el n de que stos
recojan las salpicaduras y los derrames. Todos los materiales deben colocarse lo ms
dentro posible de la cmara, hacia el borde posterior de la supercie de trabajo, pero
sin bloquear la rejilla posterior. El equipo que pueda generar aerosoles (por ejemplo
mezcladoras, centrifugadoras) debe colocarse hacia la parte posterior de la cmara.
Los artculos voluminosos, como las bolsas especcas para material biolgico peli-
groso, las bandejas de pipetas desechadas y los frascos de succin deben colocarse a
un lado del interior de la cmara. El trabajo debe proceder desde las zonas limpias
hacia las contaminadas a lo largo de la supercie de trabajo.
Las bolsas de recogida de material biolgico peligroso para la autoclave y la bandeja
de recogida de pipetas no deben colocarse fuera de la cmara. Los frecuentes
movimientos de entrada y salida necesarios para utilizar estos recipientes perturban
la barrera de aire de la cmara y puede poner en peligro la proteccin tanto del per-
sonal como del producto.
Operacin y mantenimiento
La mayora de las CSB estn diseadas para funcionar 24 horas al da; los investi-
gadores han llegado a la conclusin de que el funcionamiento continuo ayuda a con-
trolar los niveles de polvo y de partculas en el laboratorio. Las CSB de clase IIA1 y
IIA2 que evacuan el aire a la sala o que estn conectadas por acopladores de tipo
dedal a conductos de extraccin propios pueden apagarse cuando no estn en uso.
Otros tipos, como las de la clase IIB1 y IIB2, que tienen instalaciones a base de con-
ductos rgidos, deben mantener una corriente de aire en su interior en todo momento
para contribuir a mantener el equilibrio del aire de la sala. Las cmaras deben encen-
derse al menos 5 minutos antes de comenzar el trabajo y despus de terminarlo para
permitir que se purguen, es decir, dejar tiempo para que el aire contaminado sea
eliminado del entorno de la cmara.
Todas las reparaciones que se hagan en una CSB debe realizarlas un tcnico cali-
cado. Cualquier fallo en el funcionamiento de la CSB debe comunicarse y repararse
antes de utilizarla de nuevo.
Luz ultravioleta
Las CSB no necesitan lmparas de luz ultravioleta. Si se utilizan, las lmparas deben
limpiarse una vez a la semana para quitar el polvo y la suciedad que puedan bloquear
la ecacia germicida de la luz. La intensidad de la luz ultravioleta debe comprobarse
cada vez que se vuelve a certicar la cmara para asegurarse de que la emisin de luz
es apropiada. Las luces ultravioletas deben apagarse cuando la sala est ocupada, para
proteger los ojos y la piel de exposiciones involuntarias.
Llamas desnudas
Deben evitarse las llamas desnudas en el entorno prcticamente libre de microorga-
nismos creado dentro de la cmara. Esas llamas alteran las corrientes de aire y pueden
ser peligrosas cuando se utilizan al mismo tiempo sustancias voltiles e inamables.
63
Para esterilizar las asas microbiolgicas, es preferible utilizar microincineradores u
hornos elctricos.
Derrames
Se colocar en lugar visible una copia del protocolo del laboratorio para tratar los
derrames, que debern leer y comprender todos los usuarios. Cuando se produzca un
derrame de material de riesgo biolgico dentro de una CSB, debe procederse de
inmediato a su limpieza, mientras la cmara sigue en funcionamiento. Debe utilizarse
un desinfectante ecaz y aplicarse de modo que se reduzca al mnimo la formacin
de aerosoles. Todos los materiales que entren en contacto con el agente derramado
deben desinfectarse o tratarse en autoclave.
Certicacin
El funcionamiento y la integridad de cada CSB deben ser certicados en relacin con
las normas de funcionamiento nacionales o internacionales en el momento de la insta-
lacin, y despus de forma peridica, por tcnicos cualicados y de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. La evaluacin de la ecacia de contencin de la cmara
debe incluir pruebas de la integridad de la cmara, fugas de los ltros HEPA, perl de
velocidad del ujo de aire descendente, velocidad en la abertura frontal, tasa de presin
negativa/ventilacin, caractersticas del ujo de aire, y alarmas e interruptores de
interbloqueo. Tambin pueden realizarse pruebas facultativas en relacin con la insta-
lacin elctrica y la intensidad de la iluminacin, la luz ultravioleta, los ruidos y las
vibraciones. Para llevar a cabo estas pruebas se requieren capacitacin, conocimien-
tos y equipos especiales; es sumamente recomendable que las haga un profesional
cualicado.
Limpieza y desinfeccin
Todos los artculos que entren en una CSB, incluido el material de laboratorio, deben
tener su supercie descontaminada y sacarse de la cmara una vez terminado el
trabajo, ya que los medios de cultivo residuales pueden permitir la proliferacin de
microbios.
Las supercies internas de las CSB deben descontaminarse antes y despus de cada
uso. Las supercies de trabajo y las paredes internas deben limpiarse con un pao
empapado en un desinfectante que elimine los microorganismos que pudiera haber.
Al nal del da de trabajo, la descontaminacin nal de las supercies debe incluir la
limpieza de la supercie de trabajo, los laterales, la cara posterior y el interior de la
ventana de cristal. Para los organismos sensibles se utilizar una solucin de leja o
alcohol al 70%. Despus habr que pasar de nuevo un pao con agua estril cada vez
que se utilice un desinfectante corrosivo, como la leja.
Se recomienda dejar la cmara en funcionamiento. En caso contrario, antes de
apagarla habr que dejarla funcionando durante 5 minutos para purgar la atmsfera
interior.
64
Descontaminacin
Las CSB deben descontaminarse antes de los cambios de ltro y antes de cambiarlas
de sitio. El mtodo de descontaminacin ms comn es la fumigacin con formal-
dehdo gaseoso. La descontaminacin de las CSB debe ser realizada por un profesional
cualicado.
Equipo de proteccin personal
Siempre que use una CSB, el trabajador deber llevar prendas de proteccin personal.
Las batas de laboratorio son aceptables para trabajar en los niveles de bioseguridad 1
y 2. En los niveles de bioseguridad 3 y 4 (salvo en los laboratorios diseados para
trabajar con trajes especiales) deben usarse batas de frente cerrado, abrochadas por
detrs, que protegen mejor. Los guantes deben estirarse bien por encima de las mangas
de la bata, en lugar de meterlos por debajo. Pueden usarse mangas con elstico para
proteger las muecas del investigador. Para algunos procedimientos pueden hacer falta
mascarillas y gafas de seguridad.
Alarmas
Las CSB pueden ir equipadas con uno de los dos tipos siguientes de alarma. Las
alarmas de abertura, que slo se encuentran en las cmaras que llevan ventanas de
cristal correderas; indican que el trabajador ha colocado el cristal en posicin in-
correcta, y se detienen cuando el cristal est debidamente colocado. Las alarmas de
ujo de aire sealan perturbaciones de las caractersticas normales del ujo de aire en
la cmara que representan un peligro inmediato para el trabajador o el producto.
Cuando suene esta alarma, se interrumpir inmediatamente el trabajo y se avisar al
supervisor del laboratorio. Los manuales de instrucciones del fabricante deben dar
ms detalles. La capacitacin para el uso de CSB debe incluir este aspecto.
Informacin complementaria
La eleccin del tipo correcto de CSB, su instalacin y uso correctos y la certicacin
anual de su funcionamiento son procesos complejos. Se recomienda que todos ellos
se hagan bajo la supervisin de un profesional de la seguridad biolgica bien
adiestrado y con experiencia. Este profesional debe estar bien familiarizado con las
publicaciones pertinentes enumeradas en la seccin de Referencias y debe haber
recibido capacitacin en todos los aspectos de las CSB. Los trabajadores deben recibir
capacitacin formal sobre el funcionamiento y el manejo de las CSB.
Si se desea ms informacin, consltense las referencias 5 y 7 a 16, y el captulo 11.
65
66
11. Equipo de seguridad
Habida cuenta de que los aerosoles son importantes fuentes de infeccin, debe tenerse
cuidado de reducir su formacin y dispersin. Muchas operaciones de laboratorio
generan aerosoles peligrosos, como mezclar, triturar, agitar, remover, someter a ultra-
sonidos o centrifugar material infeccioso. Aunque se utilice equipo seguro, es preferi-
ble efectuar esas operaciones en una CSB siempre que sea posible. Las CSB, su uso y
las pruebas a que deben someterse, se examinan en el captulo 10. El uso de equipo
de seguridad no garantiza la proteccin, a menos que el trabajador est adiestrado en
su uso y aplique las tcnicas apropiadas. El equipo debe probarse con regularidad para
asegurarse de que sigue siendo seguro.
En el cuadro 10 aparece una lista de comprobacin del equipo de seguridad
diseado para eliminar o reducir ciertos peligros y se exponen brevemente las carac-
tersticas que determinan la seguridad. En las pginas que siguen se ofrecen ms
detalles sobre gran parte de ese material. En el captulo 12 puede encontrarse ms
informacin acerca del uso apropiado de ese equipo.
En el anexo 4 se ofrece informacin sobre el equipo y las operaciones que pueden
entraar un peligro.
Cmaras aislantes de material exible y presin negativa
Las cmaras aislantes de material exible y presin negativa son dispositivos auto-
portantes de contencin primaria que ofrecen mxima proteccin frente a materiales
biolgicos peligrosos. Pueden colocarse sobre un soporte mvil. El banco de trabajo
est totalmente encerrado en una envoltura de cloruro de polivinilo (PVC) trans-
parente, suspendida de un marco de acero. La cmara aislante se mantiene a una
presin interna inferior a la atmosfrica. El aire de entrada pasa a travs de un ltro
HEPA y el de salida a travs de dos ltros HEPA, lo que hace innecesario conducir el
aire evacuado hacia el exterior del edicio. El aislador puede equiparse con una
incubadora, un microscopio y otro material de laboratorio, como centrifugadoras,
jaulas de animales o bloques trmicos, entre otros. El material se introduce y se extrae
de la cmara aislante a travs de aberturas especiales, de modo que no se pone en
peligro la seguridad microbiolgica. Las manipulaciones se realizan utilizando mangas
largas con guantes desechables incorporados. La caja lleva un manmetro para vigilar
la presin de la envoltura.
11. EQUIPO DE SEGURIDAD
67
Cuadro 10. Equipo de bioseguridad
EQUIPO PELIGRO EVITADO CARACTERSTICAS DE SEGURIDAD
Cmaras de seguridad
biolgica
Clase I Aerosoles y salpicaduras Flujo mnimo de aire hacia el
interior (velocidad frontal) en la
abertura de trabajo. Filtracin
adecuada del aire expulsado
No protege el producto
Clase II Aerosoles y salpicaduras Flujo mnimo de aire hacia el
interior (velocidad frontal) en la
abertura de trabajo. Filtracin
adecuada del aire expulsado
Protege el producto
Clase III Aerosoles y salpicaduras Contencin mxima
Protege el producto si se incluye
ujo de aire laminar
Cmaras aislantes de Aerosoles y salpicaduras Contencin mxima
material exible y
presin negativa
Pantalla contra Salpicadura de sustancias Establece una separacin entre
salpicaduras qumicas el trabajador y el trabajo
Dispositivos de pipeteo Riesgos propios del pipeteo Facilidad de empleo
por succin bucal, como la Evita la contaminacin del
ingestin de patgenos, la extremo bucal de la pipeta,
inhalacin de aerosoles con lo que protege el dispositivo,
producidos por la succin el usuario y el circuito de vaco
bucal, expulsin de lquido Posibilidad de esterilizacin
o goteo de la pipeta, Se evita el goteo del extremo
contaminacin del extremo inferior de la pipeta
bucal de la pipeta
Microincineradores Salpicaduras procedentes Proteccin mediante un tubo de
de asas, asas de las asas vidrio o cermica, abierto por un
desechables extremo y calentado por gas
o electricidad
Desechables, no necesitan
calentamiento
Recipientes hermticos Aerosoles, derrames y Diseo hermtico, con tapa
para recoger y transportar fugas Duraderos
material infeccioso Posibilidad de tratarlos en la
destinado a la esterilizacin autoclave
dentro del laboratorio
Las cmaras aislantes de material exible se utilizan para manipular organismos de
alto riesgo (grupos de riesgo 3 4) en el trabajo de campo cuando no es posible o
apropiado instalar o mantener CSB convencionales.
Dispositivos de pipeteo
Para los procedimientos de pipeteo debe utilizarse siempre un dispositivo especial. El
pipeteo con la boca debe estar estrictamente prohibido.
No puede insistirse bastante en la importancia de utilizar dispositivos de pipeteo.
Los riesgos ms comunes que entraa el uso de pipetas son resultado de la succin
bucal. La aspiracin por la boca y la ingestin de material peligroso han dado lugar a
numerosas infecciones en los laboratorios.
Tambin pueden transferirse agentes patgenos a la boca si se coloca un dedo con-
taminado en el extremo de la pipeta por el que se hace la succin. Un riesgo menos
68
Recipientes para la Heridas punzantes Posibilidad de tratamiento en
eliminacin de objetos autoclave
cortantes y punzantes Robustos, a prueba de
perforaciones
Recipientes de transporte Liberacin de organismos Robustos
entre laboratorios Recipientes primario y
e instituciones secundario estancos para evitar
fugas
Material absorbente para enjugar
los escapes
Autoclaves, manuales o Material infeccioso Diseo aprobado
automticas (transformado en inocuo Esterilizacin trmica ecaz
para su eliminacin o
reutilizacin)
Frascos con tapn de rosca Aerosoles y derrames Contencin ecaz
Proteccin del circuito Contaminacin del sistema Un ltro de tipo cartucho
de vaco de vaco del laboratorio por impide el paso de aerosoles
aerosoles o rebosamiento (tamao de las partculas:
de lquidos 0,45m)
El matraz de rebosamiento
contiene un desinfectante
apropiado. Puede usarse
una pera de goma para
cortar automticamente
el vaco cuando se
llena el matraz colector
Todo el sistema puede
esterilizarse en la autoclave
conocido del pipeteo con la boca es la inhalacin de aerosoles provocados por la
succin. Los tapones de algodn no constituyen un ltro microbiano eciente sea la
presin negativa o positiva, pues permiten el paso de las partculas durante la succin.
Cuando el tapn est muy apretado, se necesita una succin muy enrgica, con el con-
siguiente riesgo de aspirar a la vez el algodn, el aerosol e incluso el lquido. El uso de
dispositivos de pipeteo permite evitar la ingestin de patgenos.
Tambin pueden generarse aerosoles cuando el lquido de una pipeta gotea sobre
una supercie de trabajo; cuando se mezclan cultivos alternando succin y soplado,
y cuando se sopla por la pipeta para que salga la ltima gota. La inhalacin de los
aerosoles que inevitablemente se generan durante las operaciones de pipeteo puede
evitarse trabajando en una CSB.
Los dispositivos de pipeteo deben seleccionarse con cuidado. Es importante que ni
su diseo ni su modo de empleo aumenten el riesgo de infeccin, y que sean fciles
de esterilizar y limpiar. Deben utilizarse puntas de pipeta obturadas (resistentes a los
aerosoles) cuando se manipulen microorganismos y cultivos celulares.
Las pipetas que tengan los extremos de succin agrietados o astillados deben
desecharse, ya que daan las juntas hermticas por las que se insertan en los dispo-
sitivos de pipeteo y crean un peligro.
Homogeneizadores, agitadores, mezcladores y desintegradores ultrasnicos
Los homogeneizadores domsticos (de cocina) no son hermticos y liberan aerosoles.
Slo deben utilizarse aparatos diseados especialmente para el trabajo de laboratorio,
que estn construidos de forma que se reduce al mnimo o se impide esa
liberacin de aerosoles. Los homogeneizadores de tipo Stomacher, disponibles ahora
para trabajar con volmenes grandes y pequeos, tambin pueden producir
aerosoles.
Los homogeneizadores utilizados para los microorganismos del grupo de riesgo 3
siempre deben cargarse y abrirse en una CSB.
Los desintegradores ultrasnicos pueden liberar aerosoles. Deben manipularse en
CSB o cubrirse con pantallas protectoras durante su uso. Los dispositivos protectores
y la parte exterior de los desintegradores ultrasnicos deben descontaminarse despus
de su utilizacin.
Asas desechables
Las asas desechables ofrecen la ventaja de que no necesitan ser esterilizadas, por lo que
pueden utilizarse en CSB, en las que los mecheros de Bunsen y los microincineradores
perturbaran la corriente de aire. Estas asas deben colocarse en un desinfectante
despus del uso y desecharse como material contaminado (vase el captulo 3).
Microincineradores
Los microincineradores calentados con gas o electricidad llevan protecciones de cristal
de borosilicato o de cermica que reducen al mnimo las salpicaduras y la dispersin
de material infectado cuando se esterilizan las asas. Sin embargo, pueden perturbar la
69
corriente de aire y por consiguiente deben colocarse hacia la parte trasera de la super-
cie de trabajo de las CSB.
Ropas y equipo de proteccin personal
La vestimenta y el equipo de proteccin personal pueden actuar como barrera para
reducir al mnimo el riesgo de exposicin a aerosoles, salpicaduras e inoculacin acci-
dental. Las prendas de vestir y el equipo que se seleccionen dependen de la naturaleza
del trabajo que se realice. En el laboratorio los trabajadores llevarn ropa protectora.
Antes de abandonar el laboratorio, tendrn que quitarse las prendas protectoras y
lavarse las manos. En el cuadro 11 se exponen algunos elementos de proteccin per-
sonal utilizados en laboratorios y la proteccin que ofrecen.
Batas, monos y delantales de laboratorio
De preferencia, las batas de laboratorio irn abotonadas hasta arriba. Sin embargo, las
batas de manga larga y abertura trasera y los monos protegen mejor que las batas de
abertura frontal y son preferibles en los laboratorios de microbiologa y cuando se
trabaja en una CSB. Los delantales pueden llevarse por encima de las batas cuando se
necesite mayor proteccin contra el derrame de sustancias qumicas o material
biolgico como sangre o lquidos de cultivo. Los servicios de lavandera deben encon-
trarse en las instalaciones o cerca de ellas.
Las batas, monos y delantales no deben usarse fuera de las zonas del laboratorio.
Gafas de seguridad y viseras
La eleccin del material para proteger los ojos y el rostro de salpicaduras e impactos
de objetos depender de la actividad que se lleve a cabo. Pueden fabricarse gafas,
graduadas o no, con monturas especiales que permiten colocar los cristales desde
delante. Los cristales son de material irrompible y pueden ser curvos o llevar protec-
ciones laterales (cristales de seguridad). Las gafas de patilla no protegen debidamente
contra las salpicaduras ni siquiera cuando se utilizan con protecciones laterales. Las
gafas de mscara para proteger contra salpicaduras e impactos deben llevarse sobre
las gafas graduadas normales y las lentes de contacto (que no protegen contra los
riesgos biolgicos o qumicos). Las viseras estn hechas de plstico irrompible, se
ajustan al rostro y se sujetan a la cabeza mediante cintas o una capucha.
Ninguno de estos elementos de proteccin debe usarse fuera del laboratorio.
Mascarillas respiratorias
La proteccin respiratoria puede utilizarse cuando se realizan procedimientos de alto
riesgo, como limpiar un derrame de material infeccioso. El tipo de mascarilla
respiratoria elegida depender del tipo de peligro. Existen respiradores con ltros
cambiables para proteger contra gases, vapores, partculas y microorganismos. Es
indispensable que el ltro est colocado en el tipo de mascarilla adecuado. Para que
la proteccin sea mxima, las mascarillas respiratorias deben ajustarse al rostro de
70
cada trabajador y probarse previamente. Los respiradores autnomos con suministro
de aire integrado proporcionan proteccin completa. Para seleccionar el respirador
correcto habr que solicitar el consejo de una persona debidamente cualicada, como
un especialista en higiene laboral. Las mascarillas de tipo quirrgico estn diseadas
exclusivamente para proteger a los pacientes y no ofrecen proteccin respiratoria a
los trabajadores. Algunas mascarillas respiratorias desechables de un solo uso (ISO
13.340.30) estn diseadas para proteger de las exposiciones a agentes biolgicos.
Las mascarillas respiratorias no deben usarse fuera del laboratorio.
Guantes
Las manos pueden contaminarse cuando se trabaja en el laboratorio. Tambin son
vulnerables a las heridas producidas por objetos punzantes o cortantes. Los guantes
71
Cuadro 11. Equipo de proteccin personal
Batas y monos de Contaminacin de la ropa Abertura trasera
laboratorio Cubren la ropa de calle
Delantales de plstico Contaminacin de la ropa Impermeables
Calzado Impactos y salpicaduras Puntera cerrada
Gafas de mscara Impactos y salpicaduras Lentes resistentes a los impactos (con
correccin ptica o bien deben usarse
sobre las lentes correctoras)
Proteccin lateral
Gafas de seguridad Impactos Lentes resistentes a los impactos (con
correccin ptica)
Proteccin lateral
Viseras Impactos y salpicaduras Protegen todo el rostro
Se retiran fcilmente en caso de
accidente
Mascarillas Inhalacin de aerosoles Varios diseos disponibles: desechables,
respiratorias de un solo uso; puricadoras de aire,
de cara entera o de media cara;
puricadoras de aire elctricas, de cara
entera o con capucha; con suministro
de aire
Guantes Contacto directo con De ltex, vinilo o nitrilo, aprobados para
microorganismos uso microbiolgico, desechables
Proteccin de las manos
Punciones o cortes De malla
desechables de ltex, vinilo o nitrilo de tipo quirrgico aprobados para uso micro-
biolgico son los ms extendidos para el trabajo general de laboratorio y para mani-
pular agentes infecciosos, as como sangre y otros lquidos corporales. Tambin
pueden usarse guantes reutilizables, pero hay que lavarlos, retirarlos, limpiarlos y
desinfectarlos correctamente.
Despus de manipular material infeccioso o trabajar en una CSB y antes de aban-
donar el laboratorio es preciso retirar los guantes y lavarse las manos concienzuda-
mente. Los guantes desechables usados deben eliminarse junto con los residuos de
laboratorio infectados.
Se han noticado casos de reacciones alrgicas como dermatitis e hipersensibilidad
inmediata despus de usar guantes de ltex, particularmente los que llevan polvo.
Deber disponerse en el laboratorio de alternativas a ese tipo de guantes.
Los guantes de malla de acero inoxidable se llevarn cuando haya posibilidad de
exposicin a instrumentos cortantes o punzantes (por ejemplo, durante una autop-
sia). No obstante, esos guantes protegen contra los cortes pero no contra las
punciones.
Los guantes no deben usarse fuera de las zonas de laboratorio.
Si se desea ms informacin, vanse las referencias 12, 17 y 18.
72
PARTE IV
Tcnicas microbiolgicas
apropiadas
12. Tcnicas de laboratorio
75
Los errores humanos, las tcnicas de laboratorio incorrectas y el mal uso del equipo
son la causa de la mayora de los accidentes de laboratorio y las infecciones conexas.
En el presente captulo se compendian los mtodos tcnicos destinados a evitar o
reducir al mnimo los accidentes ms comunes provocados por esos factores.
Manipulacin segura de muestras en el laboratorio
La recogida, transporte y manipulacin de muestras en el laboratorio entraan un
riesgo de infeccin para el personal.
Recipientes para muestras
Los recipientes para muestras pueden ser de vidrio o, preferiblemente, de plstico.
Deben ser fuertes y no permitir fugas cuando la tapa o el tapn estn correctamente
colocados. En el exterior del recipiente no debe quedar ningn material. Los reci-
pientes han de estar correctamente rotulados para facilitar su identicacin. Los for-
mularios de peticin de examen de la muestra no se colocarn alrededor de los recip-
ientes, sino por separado, preferiblemente en sobres impermeables.
Transporte de muestras dentro de la instalacin
Para evitar fugas o derrames accidentales, deben utilizarse envases/embalajes secun-
darios (por ejemplo, cajas) equipados con gradillas, de modo que los recipientes que
contienen las muestras se mantengan en posicin vertical. Los envases/embalajes
secundarios pueden ser de metal o de plstico, pero deben poderse tratar en autoclave
o ser resistentes a la accin de los desinfectantes qumicos; de preferencia, el cierre
debe tener una junta que garantice la estanqueidad. Debern descontaminarse
peridicamente.
Recepcin de las muestras
Los laboratorios que reciban un elevado nmero de muestras deben destinar un local
o zona especial con este propsito.
Apertura de los envases/embalajes
El personal que recibe y desempaqueta las muestras debe conocer los riesgos para la
salud que entraa su actividad y debe estar capacitado para adoptar precauciones
normalizadas (2), particularmente cuando manipule recipientes rotos o con fugas. Los
recipientes primarios de las muestras deben abrirse en una CSB. Se dispondr de
desinfectantes.
Uso de pipetas y dispositivos de pipeteo
1. Debe utilizarse siempre un dispositivo de pipeteo. El pipeteo con la boca estar
prohibido.
2. Todas las pipetas tendrn tapones de algodn para reducir la contaminacin de
los dispositivos de pipeteo.
3. Nunca se insuar aire en un lquido que contenga agentes infecciosos.
4. No debe mezclarse el material infeccioso aspirando y soplando alternativamente
a travs de una pipeta.
5. No se expulsarn a la fuerza los lquidos de una pipeta.
6. Son preferibles las pipetas aforadas con una muesca superior y otra inferior, ya
que no exigen la expulsin de la ltima gota.
7. Las pipetas contaminadas deben sumergirse completamente en un desinfectante
adecuado contenido en un recipiente irrompible y permanecer en l durante un
tiempo suciente antes de tirarlas.
8. Debe colocarse un recipiente para las pipetas usadas dentro (no fuera) de la CSB.
9. No deben utilizarse para pipetear jeringuillas provistas de aguja hipodrmica.
10 En vez de agujas, existen dispositivos para abrir los frascos tapados con un
diafragma que permiten usar pipetas y evitar el uso de agujas y jeringuillas
hipodrmicas.
11. Para evitar la dispersin del material infeccioso que caiga accidentalmente de
una pipeta, se recubrir la supercie de trabajo con material absorbente, que se
desechar como residuo infeccioso una vez utilizado.
Tcnicas para evitar la dispersin de material infeccioso
1. A n de evitar que su carga caiga prematuramente, las asas microbiolgicas deben
tener un dimetro de 23mm y terminar en un anillo completamente cerrado.
Los mangos no deben tener ms de 6cm de longitud para reducir la vibracin al
mnimo.
2. Para evitar el riesgo de que se produzcan salpicaduras de material infeccioso al
amear las asas en el mechero de Bunsen, se utilizar un microincinerador elc-
trico cerrado para esterilizar las asas. Es preferible utilizar asas desechables que no
necesitan volver a ser esterilizadas.
3. Al secar muestras de esputo debe procederse con cuidado para evitar la creacin
de aerosoles.
4. Las muestras y los cultivos desechados destinados a la autoclave o a la eliminacin
se colocarn en recipientes impermeables, como las bolsas de desechos de labora-
torio. La parte superior se cerrar (por ejemplo con cinta de autoclave) antes de
tirarlas a los recipientes para desechos.
76
5. Las zonas de trabajo se descontaminarn con un desinfectante apropiado despus
de cada periodo de trabajo.
Para ms informacin, vase la referencia 12.
Uso de las cmaras de seguridad biolgica
1. Habr que explicar a todos los posibles usuarios el modo de empleo y las limita-
ciones de estas cmaras (vase el captulo 10), tomando como referencia las
normas nacionales y las publicaciones pertinentes. El personal recibir protoco-
los escritos o manuales de seguridad o de operacin. En particular, ha de quedar
claro que la cmara no protege al trabajador de derrames, roturas o tcnicas
incorrectas.
2. La cmara no debe utilizarse si no funciona correctamente.
3. La ventana de vidrio transparente no debe abrirse mientras se est utilizando la
cmara.
4. Los aparatos y materiales introducidos en la cmara deben reducirse al mnimo
y no deben bloquear la circulacin del aire en la cmara de distribucin
trasera.
5. No deben utilizarse mecheros de Bunsen en el interior de la cmara, ya que el calor
producido perturbar el ujo de aire y puede daar los ltros. Puede permitirse
el uso de un microincinerador, aunque es preferible utilizar asas estriles
desechables.
6. Todo el trabajo debe hacerse en la zona media o posterior de la supercie de
trabajo y ser visible a travs de la ventana.
7. El paso de personas por detrs del trabajador debe reducirse al mnimo.
8. El trabajador no debe alterar el ujo de aire al sacar y volver a introducir repeti-
das veces los brazos.
9. Las rejillas de aire no deben estar bloqueadas con papeles, pipetas u otros mate-
riales, pues con ello se perturba el ujo de aire y puede provocarse la contami-
nacin del material y la exposicin del trabajador.
10. La supercie de la CSB deber limpiarse con un pao empapado con un desin-
fectante apropiado una vez terminado el trabajo y al nal del da.
11. El ventilador de la cmara se encender al menos 5 minutos antes de empezar
el trabajo y debe seguir funcionando al menos durante 5 minutos despus de
concluido el trabajo.
12. Nunca se introducirn papeles en las CSB.
Si se desea ms informacin acerca de las CSB, vase el captulo 10.
Tcnicas para evitar la ingestin de material infeccioso y su contacto con la
piel y los ojos
1. Las partculas y gotculas de mayor tamao (>5mm) que se desprenden durante
las manipulaciones microbiolgicas se depositan rpidamente en la supercie de
12. TCNICAS DE LABORATORIO
77
las mesas y en las manos del trabajador. ste llevar guantes desechables. Los tra-
bajadores del laboratorio evitarn tocarse la boca, los ojos y el rostro.
2. En el laboratorio no se deben conservar ni consumir alimentos o bebidas.
3. En el laboratorio no se colocarn objetos en la boca (lpices, goma de mascar).
4. En el laboratorio no se aplicarn cosmticos.
5. La cara, los ojos y la boca deben estar protegidos con una pantalla o de algn otro
modo durante cualquier operacin que pueda provocar salpicaduras de material
potencialmente infeccioso.
Tcnicas para evitar la inyeccin de material infeccioso
1. La inoculacin accidental debida a heridas por objetos de vidrio rotos o astillados
puede evitarse mediante prcticas y procedimientos cuidadosos. El material de
vidrio debe ser reemplazado por material de plstico siempre que sea posible.
2. La inoculacin accidental puede producirse como consecuencia de heridas con
agujas hipodrmicas, pipetas de Pasteur de vidrio o vidrios rotos.
3. El nmero de accidentes causados por agujas hipodrmicas puede reducirse
restringiendo al mnimo el uso de jeringuillas y agujas (por ejemplo, existen dis-
positivos sencillos para abrir los frascos con tapn de diafragma de modo que
puedan usarse pipetas en lugar de jeringuillas y agujas), o utilizando dispositivos
especiales de seguridad para objetos cortantes y punzantes cuando se hace im-
prescindible utilizar jeringuillas y agujas.
4. Nunca deben volver a cubrirse las agujas. Los artculos desechables debern colo-
carse en recipientes resistentes a la perforacin que tengan tapa.
5. Las pipetas de Pasteur de vidrio deben sustituirse por otras de plstico.
Separacin de suero
1. Slo realizar este trabajo personal de laboratorio debidamente capacitado.
2. El personal llevar guantes y equipo protector de ojos y mucosas.
3. Slo una buena tcnica permite evitar o reducir al mnimo las salpicaduras y los
aerosoles. La sangre y el suero se deben pipetear con cuidado en lugar de verter-
los. El pipeteo con la boca estar prohibido.
4. Una vez usadas, las pipetas se sumergirn por completo en un desinfectante
apropiado y permanecern en l durante un tiempo suciente, hasta que se
eliminen o se laven y esterilicen para volverlas a utilizar.
5. Los tubos de ensayo que se desea eliminar y que contienen cogulos de sangre u
otros materiales se colocarn, nuevamente con sus tapas, en recipientes imper-
meables apropiados que se tratarn y esterilizarn en la autoclave o se incinerarn.
6. Habr que disponer de desinfectantes apropiados para limpiar las salpicaduras y
los derrames de material (vase el captulo 14).
Uso de las centrifugadoras
1. El funcionamiento mecnico satisfactorio es un requisito de la seguridad micro-
biolgica del empleo de centrifugadoras en el laboratorio.
78
2. Las centrifugadoras se utilizarn segn las instrucciones del fabricante.
3. Las centrifugadoras deben colocarse a una altura tal que los trabajadores puedan
ver la cubeta para colocar correctamente los soportes y los cestillos.
4. Los tubos de la centrifugadora y los recipientes de muestras destinados al uso en
la centrifugadora deben estar fabricados de vidrio grueso o, preferiblemente, de
plstico, y deben inspeccionarse para detectar defectos antes de usarlos.
5. Los tubos y los recipientes para muestras deben estar siempre bien cerrados (con
tapn de rosca si es posible) para la centrifugacin.
6. Los cestillos deben cargarse, equilibrarse, cerrarse y abrirse en una CSB.
7. Los cestillos y los soportes se deben emparejar por el peso y equilibrar correcta-
mente con los tubos en su sitio.
8. El espacio que debe dejarse entre el nivel del lquido y el borde de cada tubo de
centrifugacin debe ser especicado en las instrucciones del fabricante.
9. Para equilibrar los cestillos vacos se emplear agua destilada o alcohol (propanol
al 70%). No se emplear suero salino ni solucin de hipoclorito porque ambos
productos corroen los metales.
10. Para los microorganismos de los grupos de riesgo 3 y 4 se utilizarn cestillos de
centrifugadora de cierre hermtico (cestillos de seguridad).
11. Cuando se utilicen rotores de cabeza angular, debe velarse por que el tubo no est
excesivamente cargado, ya que puede haber fugas del lquido.
12. El interior de la cubeta de la centrifugadora se inspeccionar a diario para obser-
var si existen manchas o suciedad en el rotor. Si stas son maniestas, se deben
examinar de nuevo los protocolos de centrifugacin.
13. Los rotores y los cestillos de la centrifugadora deben observarse diariamente para
detectar signos de corrosin y grietas.
14. Los cestillos, los rotores y la cubeta de la centrifugadora deben descontaminarse
despus de cada uso.
15. Despus del uso, los cestillos se depositarn en posicin invertida a n de vaciar
el lquido utilizado para equilibrar.
16. Al utilizar centrifugadoras pueden expulsarse partculas infecciosas transportadas
por el aire. Esas partculas salen despedidas a una velocidad demasiado alta para
que las retenga el ujo de aire de la cmara si la centrifugadora est funcionando
en una CSB tradicional con abertura frontal de las clases I y II. Si se colocan las
centrifugadoras en CSB de clase III se evita que los aerosoles emitidos se dispersen
ampliamente. No obstante, el empleo de una buena tcnica de centrifugacin y de
tubos tapados correctamente ofrece proteccin suciente contra los aerosoles
infecciosos y la dispersin de partculas.
Uso de homogeneizadores, agitadores, mezcladores y desintegradores
ultrasnicos
1. No deben utilizarse homogeneizadores domsticos (de cocina) en los laboratorios,
pues pueden tener fugas o desprender aerosoles. Los mezcladores y homo-
geneizadores de laboratorio de tipo Stomacher son ms seguros.
79
2. Los tapones y los recipientes o frascos deben estar en buenas condiciones, sin
deformaciones ni suras. Los tapones deben ajustar bien y las juntas deben estar
en buen estado.
3. Durante el funcionamiento de los homogeneizadores, agitadores y desintegradores
ultrasnicos se produce un aumento de la presin dentro del recipiente, con lo
que pueden desprenderse entre la tapa y el recipiente aerosoles con materiales
infecciosos. Se recomiendan los recipientes de plstico, en particular de politetra-
uoroetileno (PTFE), porque el vidrio puede romperse y liberar material infec-
cioso, e incluso herir al trabajador.
4. Durante su utilizacin, hay que recubrir los aparatos con una funda fuerte de pls-
tico transparente, que se desinfectar una vez usada. Siempre que sea posible, estos
aparatos, con su funda de plstico, se utilizarn dentro de una CSB.
5. Una vez terminada la operacin, el recipiente se abrir en una CSB.
6. Las personas que utilicen desintegradores ultrasnicos deben llevar proteccin
auditiva.
Uso de trituradores de tejidos
1. Los trituradores de vidrio deben sostenerse envueltos en una pieza de material
absorbente y con la mano enguantada. Son ms seguros los trituradores de pls-
tico (PTFE).
2. Los trituradores de tejidos deben utilizarse y abrirse en una CSB.
Mantenimiento y uso de refrigeradores y congeladores
1. Los refrigeradores, congeladores y recipientes de nieve carbnica deben descon-
gelarse y limpiarse peridicamente; se eliminarn todos los tubos, ampollas y otros
objetos que se hayan roto durante el almacenamiento. Durante la limpieza se debe
utilizar proteccin facial y guantes de goma gruesa. Despus de la limpieza se
desinfectarn las supercies interiores de la cmara.
2. Todos los recipientes almacenados en refrigeradores y congeladores deben llevar
etiquetas bien claras con el nombre cientco del contenido, la fecha de almace-
namiento y el nombre de la persona que los ha almacenado. Los materiales sin
etiquetas y anticuados deben tratarse en la autoclave y desecharse.
3. Debe mantenerse un inventario del contenido de los refrigeradores y congeladores.
4. No deben guardarse nunca soluciones inamables en refrigeradores, excepto si
estos son a prueba de explosin. En las puertas de los refrigeradores se colocarn
advertencias al respecto.
Tcnicas para abrir ampollas que contengan material infeccioso liolizado
Conviene abrir con precaucin las ampollas de material liolizado pues, al estar cer-
radas a presin reducida, la entrada brusca de aire puede dispersar el contenido en la
atmsfera. Las ampollas deben abrirse siempre dentro de una CSB. Para abrir las
ampollas se recomienda el siguiente procedimiento:
80
1. En primer lugar, descontaminar la supercie exterior de la ampolla.
2. Hacer con la lima una marca en el tubo, cerca de la mitad del tapn de algodn
o celulosa, si lo hay.
3. Sujetar la ampolla en un algodn empapado en alcohol para proteger las manos
antes de romperla por la marca.
4. Retirar con cuidado la parte superior y tratarla como si fuera material contami-
nado.
5. Si el tapn sigue estando por encima del contenido de la ampolla, retirarlo con
una pinza estril.
6. Reconstituir la suspensin aadiendo el lquido lentamente para evitar la forma-
cin de espuma.
Almacenamiento de ampollas que contengan material infeccioso
Las ampollas que contienen material infeccioso no se deben sumergir nunca en
nitrgeno lquido, ya que las que estn suradas o mal cerradas podran romperse o
explotar al sacarlas. Si se necesitan temperaturas muy bajas, las ampollas slo se deben
almacenar en la fase gaseosa que queda por encima del nitrgeno lquido. Tambin
pueden almacenarse los materiales infecciosos en congeladores mecnicos o nieve car-
bnica. Al retirar las ampollas del almacenamiento en fro, el personal deber llevar
protegidos los ojos y las manos.
Las ampollas conservadas por estos procedimientos se descontaminarn por fuera
siempre que se saquen del lugar de almacenamiento.
Precauciones normalizadas en relacin con la sangre y otros lquidos
corporales, tejidos y excreciones
Las precauciones normalizadas (que incluyen las precauciones universales (19))
estn concebidas para reducir el riesgo de transmisin de microorganismos de fuentes
de infeccin tanto reconocidas como no reconocidas (2).
Recogida, etiquetado y transporte de muestras
1. Se seguirn siempre las precauciones normalizadas (2); se usarn guantes en todos
los procedimientos.
2. La toma de sangre de personas y animales estar a cargo de personal capacitado.
3. En las ebotomas, los sistemas convencionales de aguja y jeringuilla se sustituirn
por dispositivos de seguridad al vaco de un solo uso que permitan recoger la
sangre directamente en tubos de transporte o de cultivo con tapn y que inutili-
cen la aguja despus del uso.
4. Los tubos se colocarn en recipientes apropiados para el transporte al laboratorio
(vase el captulo 15 para ms informacin sobre los requisitos de transporte) y
dentro del laboratorio (vase en el presente captulo la seccin sobre transporte
de muestras dentro del servicio). Los formularios de peticin de examen se colo-
carn en bolsas o sobres impermeables separados.
5. El personal de recepcin no debe abrir estas bolsas.
81
Apertura de tubos de muestras y muestreo del contenido
1. Los tubos de muestras deben abrirse en una CSB.
2. Deben usarse guantes. Tambin se recomienda proteger los ojos y las mucosas
(gafas de seguridad de tipo mscara o viseras).
3. Las prendas de proteccin se complementarn con un delantal de plstico.
4. Para sacar el tapn, ste se agarrar con un trozo de papel o de gasa con el n de
evitar salpicaduras.
Vidrio y objetos punzantes y cortantes
1. Siempre que sea posible, se sustituir el material de vidrio por material de
plstico. Slo se utilizar vidrio duro especial para laboratorio (borosilicato); se
desechar todo artculo que est astillado o agrietado.
2. No se utilizarn agujas hipodrmicas para pipetear (vase tambin el apartado
Tcnicas para evitar la inoculacin de material infeccioso en el presente
captulo).
Extensiones y frotis para el examen microscpico
La jacin y tincin de muestras de sangre, esputo y heces para el microscopio no
destruye necesariamente todos los organismos o los virus de las extensiones. stas
deben manipularse con pinzas, almacenarse cuidadosamente y descontaminarse o
tratarse en autoclave antes de eliminarlas.
Equipo automtico (desintegradores ultrasnicos, mezcladores vorticiales)
1. El equipo debe ser cerrado para evitar la dispersin de gotitas y aerosoles.
2. Los euentes se recogern en recipientes cerrados y se tratarn en la autoclave o
se eliminarn.
3. El equipo se desinfectar al nal de cada sesin de trabajo, siguiendo las instruc-
ciones del fabricante.
Tejidos
1. Se utilizarn jadores a base de formol.
2. Se evitarn los cortes de material congelado. Cuando sea necesario, el criostato
estar protegido y el trabajador llevar visera de seguridad. Para la descon-
taminacin, la temperatura del instrumento se elevar a 20C, como
mnimo.
Descontaminacin
Para la descontaminacin se recomiendan hipocloritos y desinfectantes de alto nivel.
Las soluciones de hipoclorito recin preparadas contendrn cloro disponible a razn
de 1g/l para uso general, y de 5g/l para limpiar derrames de sangre. Para la desinfec-
cin de supercies puede utilizarse glutaraldehdo (vase el captulo 14).
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Precauciones con materiales que puedan contener priones
Los priones, tambin conocidos como virus lentos, se asocian a las encefalopatas
espongiformes transmisibles, en particular la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob
(incluida la nueva variante), el sndrome de Gerstmann-Strussler-Scheinker, el
insomnio familiar letal y el kuru en el ser humano; la tembladera en el ganado ovino
y caprino; la encefalopata espongiforme bovina en el ganado bovino, y otras
encefalopatas transmisibles en el reno, el alce y el visn. Aunque la enfermedad de
Creutzfeldt-Jakob se ha transmitido a seres humanos, no parece que existan casos
demostrados de infecciones asociadas al laboratorio provocadas por ninguno de esos
agentes. Sin embargo, es prudente observar ciertas precauciones en la manipulacin
de material procedente de personas y animales infectados o posiblemente infectados.
La seleccin de un nivel de bioseguridad para trabajar con materiales asociados a
las encefalopatas espongiformes transmisibles depender de la naturaleza del agente
y de las muestras que vayan a estudiarse, y se realizar en consulta con las autoridades
nacionales. Las mayores concentraciones de priones se localizan en los tejidos del
sistema nervioso central. Los estudios en animales indican que tambin se encuen-
tran concentraciones elevadas en el bazo, el timo, los ganglios linfticos y el pulmn.
Estudios recientes indican que los priones presentes en los tejidos de la lengua y del
msculo esqueltico tambin pueden suponer un riesgo de infeccin (2023).
Dado que es difcil conseguir la inactivacin completa de los priones, es impor-
tante insistir en que se utilicen instrumentos desechables siempre que sea posible, as
como una cubierta protectora desechable para la supercie de trabajo de la CSB.
La principal precaucin que hay que adoptar es evitar la ingestin de material con-
taminado y la puncin de la piel del trabajador. Adems, se tomarn las siguientes
precauciones, ya que estos agentes no son inactivados por los procesos normales de
desinfeccin y esterilizacin del laboratorio:
1. Se recomienda encarecidamente utilizar equipo exclusivo, es decir, no compartido
con otros laboratorios.
2. Se llevar ropa protectora (batas y delantales) y guantes (de malla de acero entre
guantes de goma para los anatomopatlogos) desechables.
3. Se recomienda encarecidamente el uso de material de plstico desechable, que
puede tratarse y eliminarse como residuo seco.
4. No deben utilizarse procesadores de tejidos debido a los problemas de desinfec-
cin. Se utilizarn en su lugar frascos y vasos de boca ancha de plstico.
5. Todas las manipulaciones se realizarn en CSB.
6. Se tendr gran cuidado para evitar la produccin e ingestin de aerosoles, as como
los cortes y punciones de la piel.
7. Los tejidos jados con formol seguirn considerndose infecciosos, aun despus
de una exposicin prolongada al formol.
8. Las muestras histolgicas que contengan priones quedan sustancialmente inacti-
vadas por la exposicin durante 1h al cido frmico al 96% (24, 25).
83
9. Los residuos del lugar de trabajo, incluidos los guantes, las batas y los delantales
desechables, se tratarn en la autoclave utilizando un esterilizador de vapor para
sustancias porosas a 134137 C durante un ciclo de 18 minutos, o seis ciclos suce-
sivos de 3 minutos cada uno, seguidos de incineracin.
10. Los instrumentos no desechables, incluidos los guantes de malla de acero, deben
recogerse para ser descontaminados.
11. Los residuos de lquidos infecciosos contaminados con priones deben tratarse
durante 1h con hipoclorito sdico con 20g de cloro libre por litro (2%) (con-
centracin nal).
12. Los procedimientos de vaporizacin con paraformaldehdo no disminuyen los
ttulos de priones. Los priones son resistentes a la radiacin ultravioleta. A pesar
de ello, deben seguir descontaminndose las cmaras por los mtodos habituales
(formaldehdo gaseoso) para inactivar otros agentes que puedan estar presentes.
13. Las CSB y otras supercies contaminadas por priones pueden descontaminarse
con hipoclorito sdico (20g de cloro libre por litro: 2%) durante 1h.
14. Los ltros HEPA deben incinerarse a una temperatura mnima de 1000 C despus
de retirarlos. Otros pasos recomendados antes de la incineracin son los
siguientes:
a. rociar la cara expuesta del ltro con laca para el cabello antes de retirarlo;
b. introducir los ltros en bolsas durante su extraccin, y
c. extraer el ltro HEPA desde la cmara de trabajo, de modo que la cmara de
distribucin inaccesible no se contamine.
15. Los instrumentos se sumergirn en hipoclorito sdico (20g de cloro libre por litro:
2%) durante 1h, y a continuacin se enjuagarn cuidadosamente en agua antes
de tratarlos en la autoclave.
16. Los instrumentos que no puedan tratarse en la autoclave pueden limpiarse mojn-
dolos repetidamente con hipoclorito sdico (20g de cloro libre por litro: 2%)
durante 1h. Se enjuagar cuidadosamente a n de eliminar los residuos de
hipoclorito sdico.
En las referencias 12, 26 y 27 gura ms informacin sobre la manipulacin de agentes
no convencionales.
84
85
13. Planes de contingencia y
procedimientos de emergencia
Todo laboratorio que trabaje con microorganismos infecciosos deber establecer pre-
cauciones de seguridad acordes con el riesgo que entraen los microorganismos y los
animales utilizados.
En cualquier instalacin que almacene o trabaje con microorganismos de los
grupos de riesgo 3 4 (laboratorios de contencin nivel de bioseguridad 3 y labo-
ratorios de contencin mxima nivel de bioseguridad 4) es indispensable un plan
escrito de medidas de contingencia para hacer frente a los accidentes en el laborato-
rio y en los animalarios. Las autoridades sanitarias nacionales o locales debern par-
ticipar en la elaboracin del plan de preparacin para emergencias.
Plan de contingencia
El plan de contingencia debe prever procedimientos operativos para los siguientes
casos:
1. Precauciones contra catstrofes naturales, como incendios, inundaciones, terre-
motos y explosiones
2. Evaluacin del riesgo biolgico
3. Medidas aplicables en caso de exposicin accidental y descontaminacin
4. Evacuacin de emergencia de personas y animales de los locales
5. Tratamiento mdico de emergencia de las personas expuestas y heridas
6. Vigilancia mdica de las personas expuestas
7. Manejo clnico de las personas expuestas
8. Investigacin epidemiolgica
9. Continuacin del funcionamiento tras el incidente.
En la elaboracin del plan habr que prever la inclusin de los siguientes elementos:
1. Identicacin de microorganismos de alto riesgo
2. Localizacin de zonas de alto riesgo, como laboratorios, almacenes y animalarios
3. Identicacin del personal y de las poblaciones en riesgo
4. Identicacin del personal con responsabilidades y de sus obligaciones, como
el funcionario de bioseguridad, el personal de seguridad, las autoridades sani-
tarias locales, clnicos, microbilogos, veterinarios, epidemilogos, servicios de
bomberos y de polica
5. Lista de los servicios de tratamiento y aislamiento que pueden atender a las per-
sonas expuestas o infectadas
6. Transporte de las personas expuestas o infectadas
7. Lista de fuentes de inmunosueros, vacunas, medicamentos y materiales y sumi-
nistros especiales
8. Provisin de material de emergencia, como ropa protectora, desinfectantes,
estuches de material para derrames qumicos y biolgicos, material y suministros
para la descontaminacin.
Procedimientos de emergencia para laboratorios de microbiologa
Heridas punzantes, cortes y abrasiones
La persona afectada deber quitarse la ropa protectora, lavarse las manos y la parte
lesionada, aplicarse un desinfectante cutneo apropiado y buscar la atencin mdica
que sea precisa. Se noticar la causa de la herida y los microorganismos implicados;
se mantendrn registros mdicos apropiados y completos.
Ingestin de material potencialmente infeccioso
Se quitar la ropa protectora y se buscar atencin mdica. Se noticar la identidad
del material ingerido y las circunstancias del incidente, y se mantendrn registros
mdicos apropiados y completos.
Emisin de aerosoles potencialmente infecciosos (fuera de una cmara de
seguridad biolgica)
Todas las personas debern evacuar inmediatamente la zona afectada; las personas
expuestas sern enviadas de inmediato para recibir atencin mdica. Se informar
inmediatamente al director del laboratorio y al funcionario de bioseguridad. Nadie
podr entrar en el local durante un tiempo prudencial (por ejemplo, una hora), de
modo que los aerosoles puedan salir y se depositen las partculas ms pesadas. Si el
laboratorio no cuenta con un sistema central de evacuacin de aire, la entrada se
retrasar (por ejemplo durante 24 horas).
Se colocarn seales indicando que queda prohibida la entrada. Al cabo del tiempo
apropiado, se proceder a la descontaminacin bajo la supervisin del funcionario de
bioseguridad. Para ello habr que utilizar ropa protectora y proteccin respiratoria
apropiadas.
Rotura de recipientes y derrames de sustancias infecciosas
Los recipientes rotos contaminados con sustancias infecciosas y las sustancias infec-
ciosas derramadas se cubrirn con paos o papel absorbente. A continuacin se
verter sobre stos un desinfectante que se dejar actuar durante tiempo suciente, y
despus podr retirarse el pao o el papel absorbente junto con el material roto; los
fragmentos de vidrio debern ser manipulados con pinzas. Despus se fregar la zona
contaminada con un desinfectante. Si se utilizan recogedores de polvo para retirar el
material roto, despus habr que tratarlos en la autoclave o sumergirlos en un
86
desinfectante ecaz. Los paos, el papel absorbente y las bayetas utilizados para la
limpieza se colocarn en un recipiente para residuos contaminados. Habr que
utilizar guantes en todas estas operaciones.
Si se contaminan los formularios del laboratorio u otros papeles manuscritos o
impresos, se copiar la informacin en otro formulario y se tirar el original en un
recipiente para residuos contaminados.
Rotura de tubos con material potencialmente infeccioso en centrifugadoras carentes
de cestillos de seguridad
Si se sabe o se sospecha que se ha roto un tubo mientras est funcionando el aparato,
habr que parar el motor y dejar el aparato cerrado (por ejemplo durante 30 minutos)
para que se pose el material. Si la rotura se descubre cuando la mquina se ha parado,
se volver a tapar inmediatamente y se dejar cerrada (por ejemplo durante 30
minutos). En ambos casos, habr que informar al funcionario de bioseguridad.
En todas las operaciones posteriores habr que utilizar guantes fuertes (por
ejemplo, de goma gruesa), cubiertos en caso necesario con guantes desechables
apropiados. Para recoger los trozos de vidrio se utilizarn pinzas o algodn manipu-
lado con pinzas.
Todos los tubos rotos, fragmentos de vidrio, cestillos, soportes y el rotor se sumer-
girn en un desinfectante no corrosivo de ecacia conocida contra los microorganis-
mos de que se trate (vase el captulo 14). Los tubos intactos, con sus correspondientes
tapones, pueden introducirse en desinfectante en un recipiente aparte para
recuperarlos.
La cubeta de la centrifugadora se limpiar con una bayeta empapada en el mismo
desinfectante a la dilucin apropiada; se repetir la operacin y despus se lavar con
agua y se secar. Todo el material de limpieza utilizado se tratar como si fuera mate-
rial de desecho infectado.
Rotura de tubos dentro de los cestillos de cierre hermtico (cestillos de seguridad)
Todos los cestillos de centrifugadora de cierre hermtico se cargarn y descargarn en
una CSB. Si se sospecha que se ha producido una rotura dentro del cestillo de seguri-
dad, la tapa de seguridad se soltar cuidadosamente y se tratar el cestillo en la auto-
clave. Tambin se podr desinfectar con agentes qumicos.
Incendios y catstrofes naturales
Los servicios de incendios y de otro tipo deben participar en la elaboracin de los
planes de preparacin para emergencias y estarn informados de antemano acerca de
las salas que contienen material potencialmente infeccioso. Es conveniente que estos
servicios visiten las instalaciones del laboratorio para familiarizarse con su distribu-
cin y su contenido.
Despus de una catstrofe natural, se informar a los servicios de emergencia
locales o nacionales de los riesgos existentes dentro del edicio del laboratorio y en
sus proximidades. El personal de esos servicios slo deber entrar acompaado por
13. PLANES DE CONTINGENCIA Y PROCEDIMIENTOS DE EMERGENCIA
87
un trabajador capacitado del laboratorio. El material infeccioso ser recogido en cajas
impermeables o bolsas desechables fuertes.
El personal de seguridad, basndose en la reglamentacin local, determinar el
material que podr recuperarse o eliminarse denitivamente.
Servicios de emergencia: a quin acudir?
En las instalaciones se expondrn en lugar bien visible las direcciones y los nmeros
de telfono siguientes:
1. Del propio establecimiento o laboratorio (sus seas y su situacin quiz no sean
conocidos por la persona que llama ni por los servicios a los que se acude)
2. Del director del establecimiento o laboratorio
3. Del supervisor del laboratorio
4. Del funcionario de bioseguridad
5. Del servicio de bomberos
6. Del hospital/servicio de ambulancias/personal mdico (nombre de los distintos
servicios, departamentos o personal mdico, si es posible)
7. De la polica
8. Del funcionario mdico
9. Del tcnico responsable
10. De los servicios de agua, gas y electricidad.
Equipo de emergencia
Se dispondr del siguiente equipo de emergencia:
1. Botiqun de primeros auxilios, que contendr antdotos universales y especiales
2. Extintores de incendios, mantas para apagar fuegos.
A continuacin se indican otros materiales que pueden ser necesarios en ciertas cir-
cunstancias locales:
1. Vestimenta protectora completa (monos de una pieza, guantes y capuchas, para
incidentes con microorganismos de los grupos de riesgo 3 y 4)
2. Mascarillas respiratorias que cubran toda la cara, provistas de ltros para partcu-
las y sustancias qumicas
3. Material para la desinfeccin de locales, como rociadores y vaporizadores de
formaldehdo
4. Camillas
5. Herramientas, como martillos, hachas, llaves de tuercas, destornilladores, escaleras
de mano, cuerdas
6. Material para demarcar y sealar zonas peligrosas.
Si se desea ms informacin, consltense las referencias 12 y 28.
88
89
14. Desinfeccin y esterilizacin
Para la bioseguridad en el laboratorio es fundamental disponer de conocimientos
bsicos sobre la desinfeccin y la esterilizacin. Habida cuenta de que los objetos muy
sucios no pueden desinfectarse o esterilizarse rpidamente, es igualmente importante
comprender los conceptos bsicos de la limpieza previa. A este respecto, los siguientes
principios generales se aplican a todas las clases conocidas de microbios patgenos.
Los requisitos particulares de la descontaminacin dependern del tipo de trabajo
experimental y de la naturaleza de los agentes infecciosos que se estn manipulando.
La informacin genrica que aqu se ofrece puede utilizarse para elaborar proce-
dimientos tanto normalizados como ms especcos para hacer frente a los peligros
biolgicos que existan en un laboratorio concreto.
Los tiempos de contacto con los desinfectantes son distintos para cada material y
cada fabricante. As pues, todas las recomendaciones para el uso de desinfectantes
deben seguir las especicaciones del fabricante.
Deniciones
En la esfera de la desinfeccin y la esterilizacin se utilizan muchos trminos
diferentes. Los siguientes se encuentran entre los ms comunes en el campo de la
bioseguridad:
Antimicrobiano Agente que mata los microorganismos o suprime su crecimiento
y proliferacin.
Antisptico Sustancia que inhibe el crecimiento y el desarrollo de microorganismos
pero no necesariamente los mata. Los antispticos suelen aplicarse a las supercies
corporales.
Biocida Trmino general para cualquier agente que mate organismos.
Descontaminacin Cualquier proceso utilizado para eliminar o matar microor-
ganismos. Tambin se utiliza para referirse a la eliminacin o neutralizacin de sus-
tancias qumicas peligrosas y materiales radioactivos.
Desinfeccin Medio fsico o qumico de matar microorganismos, pero no nece-
sariamente esporas.
Desinfectante Sustancia o mezcla de sustancias qumicas utilizada para matar
microorganismos, pero no necesariamente esporas. Los desinfectantes suelen apli-
carse a supercies u objetos inanimados.
Esporicida Sustancia o mezcla de sustancias qumicas utilizadas para matar
microorganismos y esporas.
Esterilizacin Proceso que mata o elimina todas las clases de microorganismos y
esporas.
Germicida qumico Sustancia o mezcla de sustancias qumicas utilizada para matar
microorganismos.
Microbicida Sustancia o mezcla de sustancias qumicas que mata microorganismos.
Este trmino se utiliza a menudo en lugar de biocida, germicida qumico o
antimicrobiano.
Limpieza del material de laboratorio
La limpieza consiste en la eliminacin de suciedad, materia orgnica y manchas.
Incluye el cepillado, la aspiracin, el desempolvado en seco, el lavado o el fregado con
un pao y agua con jabn o detergente. La suciedad, la tierra y la materia orgnica
pueden albergar microorganismos e interferir con la accin de los descontaminantes
(antispticos, germicidas qumicos y desinfectantes).
La limpieza previa es fundamental para conseguir una correcta desinfeccin o
esterilizacin. Muchos productos germicidas slo son activos sobre material previa-
mente limpio. La limpieza previa debe llevarse a cabo con cuidado para evitar la
exposicin a agentes infecciosos.
Deben utilizarse materiales que sean qumicamente compatibles con los germici-
das que vayan a utilizarse despus. Es muy frecuente utilizar el mismo germicida
qumico para la limpieza previa y la desinfeccin.
Germicidas qumicos
Pueden utilizarse como desinfectantes o antispticos muchos tipos de sustancias
qumicas. Dado que el nmero y la variedad de productos comerciales es cada vez
mayor, deben elegirse cuidadosamente las formulaciones que sean ms indicadas para
las necesidades concretas.
La actividad germicida de muchas sustancias qumicas es ms rpida y ecaz a
temperaturas ms altas, pero las temperaturas elevadas tambin pueden acelerar su
evaporacin y degradarlas. Es preciso tener particular cuidado en el uso y el almace-
namiento de esas sustancias en las regiones tropicales, donde su tiempo de conser-
vacin puede verse reducido a causa de las altas temperaturas del ambiente.
Muchos germicidas pueden ser perjudiciales para el ser humano o el medio
ambiente. Se deben seleccionar, almacenar, manipular, utilizar y eliminar con precau-
cin, siguiendo las instrucciones del fabricante. En relacin con la seguridad personal,
se recomienda utilizar guantes, delantales y proteccin ocular cuando se preparen
diluciones de germicidas qumicos.
Normalmente no se necesita recurrir a germicidas qumicos para la limpieza ordi-
naria de suelos, paredes, equipo y mobiliario, pero su uso puede ser apropiado en
ciertos casos para controlar brotes.
90
El uso correcto de los germicidas qumicos contribuir a la seguridad en el lugar
de trabajo y al mismo tiempo reducir el riesgo que suponen los agentes infecciosos.
En la medida de lo posible, el nmero de sustancias qumicas germicidas que se
utilicen deber ser limitado por razones econmicas y de control del inventario, as
como para reducir la contaminacin ambiental.
A continuacin se describen las clases ms utilizadas de germicidas qumicos, con
informacin genrica sobre sus aplicaciones y sus caractersticas de seguridad. A
menos que se indique otra cosa, sus concentraciones se expresan en peso/volumen.
En el cuadro 12 se resumen las diluciones recomendadas de los compuestos que
liberan cloro.
Cloro (hipoclorito sdico)
El cloro, oxidante de accin rpida, es un germicida qumico de uso muy extendido
y de amplio espectro. Normalmente se vende en forma de leja, una solucin acuosa
de hipoclorito sdico (NaOCl) que puede diluirse en agua para conseguir distintas
concentraciones de cloro libre.
El cloro, especialmente en forma de leja, es sumamente alcalino y puede ser cor-
rosivo para los metales. Su actividad se ve considerablemente reducida por la materia
orgnica (protenas). Las soluciones madre o de trabajo de leja almacenadas en reci-
pientes abiertos, particularmente a temperaturas elevadas, liberan cloro gaseoso con
lo que se debilita su potencial germicida. La frecuencia con la que deben prepararse
nuevas soluciones de trabajo de leja depende de su potencia inicial, del tamao y el
tipo de los recipientes (por ejemplo, con o sin tapa), de la frecuencia y el tipo de uso,
y de las condiciones ambientales. A ttulo de orientacin general, las soluciones que
reciban materiales con gran cantidad de materia orgnica varias veces al da deben
14. DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN
91
Cuadro 12. Diluciones recomendadas de compuestos que liberan cloro
SITUACIONES LIMPIAS
a
SITUACIONES SUCIAS
b
Cloro libre requerido 0,1% (1g/l) 0,5% (5g/l)
Solucin de hipoclorito sdico 20ml/l 100ml/l
(5% de cloro libre)
Hipoclorito clcico (70% de cloro libre) 1,4g/l 7,0g/l
Dicloroisocianurato sdico en polvo 1,7g/l 8,5g/l
(60% de cloro libre)
Dicloroisocianurato sdico en comprimidos Un comprimido por Cuatro comprimidos
(1,5g de cloro libre por comprimido) litro por litro
Cloramina (25% de cloro libre)
c
20g/l 20g/l
a
Despus de retirar el material grueso.
b
Para enjuagar, por ejemplo sobre la sangre o antes de retirar el material grueso.
c
Vase el texto.
cambiarse al menos diariamente, mientras que aquellas que se usan con menos fre-
cuencia pueden durar hasta una semana.
Como solucin desinfectante general para toda clase de trabajos de laboratorio se
utilizar una concentracin de 1g/l de cloro libre. En caso de derrame que conlleve
un peligro biolgico y en presencia de grandes cantidades de materia orgnica, se
recomienda utilizar una solucin ms concentrada, que contenga 5g/l de cloro libre.
Las soluciones de hipoclorito sdico, como la leja de uso domstico, contienen 50g/l
de cloro libre y por tanto deben diluirse a razn de 1: 50 o 1: 10 para obtener con-
centraciones nales de 1g/l y 5g/l, respectivamente. Las soluciones industriales de leja
tienen una concentracin de hipoclorito sdico cercana a los 120g/l y deben diluirse
en consecuencia para obtener los niveles indicados ms arriba.
Los grnulos o comprimidos de hipoclorito clcico (Ca(ClO)
2
) suelen contener
alrededor de un 70% de cloro libre. Las soluciones preparadas con grnulos o com-
primidos, que contienen 1,4g/l y 7,0g/l, contendrn entonces 1,0g/l y 5g/l de cloro
libre, respectivamente.
La leja no se recomienda como antisptico, pero puede utilizarse como desinfec-
tante de uso general y para sumergir materiales no metlicos contaminados. En caso
de emergencia, tambin puede utilizarse la leja para desinfectar agua para beber con
una concentracin nal de 12mg/l de cloro libre.
El cloro gaseoso es sumamente txico. Por esa razn, la leja debe almacenarse y
utilizarse solamente en zonas bien ventiladas. Adems, la leja no debe mezclarse con
cidos para evitar la liberacin rpida de cloro gaseoso. Muchos subproductos del
cloro pueden ser nocivos para el ser humano y el medio ambiente, de modo que debe
evitarse el uso indiscriminado de desinfectantes a base de cloro, y en particular de la
leja.
Dicloroisocianurato sdico
El dicloroisocianurato sdico (NaDCC) en polvo contiene un 60% de cloro libre. Las
soluciones preparadas con NaDCC en polvo a razn de 1,7g/l y 8,5g/l contendrn
1g/l y 5g/l de cloro libre, respectivamente. Los comprimidos de NaDCC suelen con-
tener el equivalente a 1,5g de cloro libre por comprimido. Uno o cuatro comprimi-
dos disueltos en un litro de agua darn aproximadamente las concentraciones
requeridas de 1g/l o 5g/l, respectivamente. El NaDCC se puede almacenar de forma
fcil y segura tanto en polvo como en comprimidos. El NaDCC slido puede aplicarse
sobre las salpicaduras de sangre u otros lquidos que entraen un riesgo biolgico,
dejndolo actuar durante 10 minutos antes de retirarlo. Despus puede procederse a
la limpieza minuciosa de la zona afectada.
Cloraminas
Las cloraminas existen en forma de polvo que contiene aproximadamente un 25% de
cloro libre. Al liberar el cloro a menos velocidad que los hipocloritos, se requieren
concentraciones iniciales ms altas para obtener una ecacia equivalente a la de
92
aqullos. Por otro lado, las soluciones de cloramina no son inactivadas por la materia
orgnica con la misma intensidad que los hipocloritos y se recomienda una concen-
tracin de 20g/l para situaciones tanto limpias como sucias.
Las soluciones de cloramina son prcticamente inodoras. No obstante, los objetos
sumergidos en ellas deben enjuagarse concienzudamente para eliminar todo residuo
de los agentes inertes que se aaden a los polvos de cloramina T (tosilcloramida
sdica).
Dixido de cloro
El dixido de cloro (ClO
2
) es un germicida, desinfectante y oxidante potente y de
accin rpida que a menudo tiene actividad a concentraciones inferiores a las
necesarias en el caso del cloro procedente de la leja. La forma gaseosa es inestable y
se descompone en cloro gaseoso (Cl
2
) y oxgeno gaseoso (O
2
), produciendo calor.
Sin embargo, el dixido de cloro es soluble en agua y estable en solucin acuosa.
Puede obtenerse de dos formas: 1) por generacin in situ, mezclando dos compo-
nentes distintos, el cido clorhdrico (HCl) y el clorito sdico (NaClO
2
), o 2)
encargando la forma estabilizada, que despus se activa en el laboratorio cuando se
necesita.
El dixido de cloro es el ms selectivo de los biocidas oxidantes. El ozono y el cloro
son mucho ms reactivos que el dixido de cloro y son consumidos por la mayora
de los compuestos orgnicos. En cambio, el dixido de cloro slo reacciona con los
compuestos de azufre reducido, las aminas secundarias y terciarias, y otros com-
puestos orgnicos muy reducidos y reactivos. Por consiguiente, con el dixido de cloro
puede conseguirse un residuo ms estable a dosis mucho menores que cuando se uti-
lizan cloro u ozono. Si se genera debidamente, el dixido de cloro, gracias a su selec-
tividad, puede usarse con ms ecacia que el ozono o el cloro en los casos de mayor
carga de materia orgnica.
Formaldehdo
El formaldehdo (HCHO) es un gas que mata todos los microorganismos y esporas
a temperaturas superiores a los 20C. Sin embargo, no tiene actividad contra los
priones.
Su accin es relativamente lenta y requiere una humedad relativa de alrededor del
70%. Se comercializa en forma de polmero slido (paraformaldehdo), en copos o
comprimidos, o como formol, solucin del gas en agua con aproximadamente 370g/l
(37%) y con metanol (100ml/l) como estabilizante. Ambas formulaciones se calien-
tan para liberar el gas, que se utiliza en la descontaminacin y la desinfeccin de espa-
cios cerrados como CSB y locales (vase ms adelante el apartado sobre
descontaminacin ambiental de locales). El formaldehdo (un 5% de formol en agua)
puede utilizarse como desinfectante lquido.
El formaldehdo es un agente presuntamente cancergeno. Se trata de un gas
peligroso de olor acre que puede irritar los ojos y las mucosas. As pues, debe
93
almacenarse y utilizarse con una campana extractora de vapores o en zonas bien ven-
tiladas. Deben observarse las normas nacionales de seguridad de las sustancias
qumicas.
Glutaraldehdo
Al igual que el formaldehdo, el glutaraldehdo (OHC(CH
2
)
3
CHO) tiene actividad
contra formas vegetativas de bacterias, esporas, hongos y virus con y sin envoltura
lipdica. No es corrosivo y su accin es ms rpida que la del formaldehdo. No
obstante, tarda varias horas en matar las esporas bacterianas.
El glutaraldehdo suele suministrarse en forma de solucin con una concentracin
de unos 20g/l (2%); algunos productos antes de ser utilizados necesitan ser activa-
dos (alcalinizados) mediante la adicin de un compuesto de bicarbonato que se
suministra con el producto. La solucin activada puede volver a utilizarse durante 1
a 4 semanas, segn la formulacin y el tipo y la frecuencia de uso. Las tiras reactivas
indicadoras que se suministran con algunos productos slo dan una indicacin
aproximada de los niveles de glutaraldehdo activo disponible en las soluciones en uso.
Las soluciones de glutaraldehdo deben desecharse si estn turbias.
El glutaraldehdo es txico e irritante para la piel y las mucosas; debe evitarse el
contacto con l. Debe utilizarse con una campana extractora de vapores o en locales
bien ventilados. No se recomienda en forma de pulverizacin ni de solucin para
descontaminar supercies. Deben observarse las normas nacionales de seguridad de
las sustancias qumicas.
Compuestos fenlicos
Los compuestos fenlicos, un grupo amplio de productos, guran entre los germici-
das ms antiguos. Sin embargo, los resultados de estudios de inocuidad ms recientes
recomiendan restringir su uso. Tienen actividad contra las formas vegetativas de las
bacterias y contra los virus con envoltura lipdica y, cuando estn debidamente for-
mulados, tambin son activos contra las micobacterias. No tienen actividad contra las
esporas y su actividad contra los virus sin envoltura lipdica es variable. Muchos pro-
ductos fenlicos se utilizan para descontaminar supercies ambientales, y algunos
(por ejemplo, el triclosn y el cloroxilenol) se encuentran entre los antispticos ms
usados.
El triclosn es comn en los productos para el lavado de manos. Tiene actividad
principalmente contra las formas vegetativas de las bacterias y es inocuo para la piel
y las mucosas. Sin embargo, en estudios de laboratorio se ha observado que las bac-
terias con resistencia inducida a bajas concentraciones de triclosn tambin muestran
resistencia a ciertos tipos de antibiticos. Se desconoce el alcance de esta observacin
sobre el terreno.
Algunos compuestos fenlicos son sensibles a la dureza del agua y pueden quedar
inactivados con aguas duras; por esa razn, deben diluirse con agua destilada o
desionizada.
94
No se recomiendan los compuestos fenlicos para las supercies que entren en
contacto con alimentos ni en zonas en las que haya nios pequeos. Pueden ser
absorbidos por el caucho y tambin pueden penetrar en la piel. Deben observarse las
normas nacionales en materia de seguridad de las sustancias qumicas.
Compuestos de amonio cuaternario
Muchos tipos de compuestos de amonio cuaternario se utilizan como mezclas y a
menudo en combinacin con otros germicidas, como los alcoholes. Tienen buena
actividad contra algunas bacterias en fase vegetativa y virus con envoltura lipdica.
Algunos tipos (por ejemplo, el cloruro de benzalconio) se utilizan como antispticos.
La actividad germicida de ciertos tipos de compuestos de amonio cuaternario se
reduce considerablemente con la materia orgnica, las aguas duras y los detergentes
aninicos. As pues, es necesario tener cuidado en la seleccin de los agentes emplea-
dos en la limpieza previa cuando se vayan a utilizar compuestos de amonio cuater-
nario para la desinfeccin. En las soluciones de estos compuestos pueden proliferar
bacterias potencialmente nocivas. Debido a su baja biodegradabilidad, estos com-
puestos tambin pueden acumularse en el medio ambiente.
Alcoholes
El etanol (alcohol etlico, C
2
H
5
OH) y el 2-propanol (alcohol isoproplico,
(CH
3
)
2
CHOH) tienen propiedades desinfectantes similares. Son activos contra las
formas vegetativas de las bacterias, los hongos y los virus con envoltura lipdica, pero
no contra las esporas. Su accin sobre los virus sin envoltura lipdica es variable. Para
conseguir la mxima ecacia deben utilizarse en concentraciones acuosas de aproxi-
madamente un 70% (v/v): las concentraciones ms altas o ms bajas pueden no tener
tanto poder germicida. Una de las grandes ventajas de las soluciones acuosas de
alcoholes es que no dejan residuo alguno en los objetos tratados.
Las mezclas con otros agentes son ms ecaces que el alcohol por s solo;
por ejemplo, el alcohol al 70% (v/v) con 100g/l de formaldehdo, o el alcohol con
2g/l de cloro libre. Las soluciones acuosas de etanol al 70% (v/v) pueden utilizarse en
la piel, las supercies de trabajo de las mesas de laboratorio y las CSB, as como
para sumergir pequeas piezas de instrumental quirrgico. Dado que el etanol puede
secar la piel, a menudo se mezcla con emolientes. Las friegas de alcohol se recomien-
dan para descontaminar manos ligeramente sucias en situaciones en las que no es
posible o prctico lavarlas. Sin embargo, hay que recordar que el etanol no tiene
actividad contra las esporas y quiz no mate todos los tipos de virus sin envoltura
lipdica.
Los alcoholes son voltiles e inamables y no deben utilizarse en las proximidades
de llamas desnudas. Las soluciones de trabajo deben almacenarse en recipientes
apropiados para evitar la evaporacin. Los alcoholes pueden endurecer el caucho y
disolver ciertos tipos de cola. El inventario y el almacenamiento apropiados del etanol
en el laboratorio son sumamente importantes con el n de evitar que se use para
95
aplicaciones distintas de la desinfeccin. Los frascos que contengan soluciones con
alcohol deben rotularse con claridad para evitar que sean tratados en la autoclave.
Yodo y yodforos
La accin de estos desinfectantes es anloga a la del cloro, aunque pueden ser ligera-
mente menos susceptibles a la inhibicin por la materia orgnica. El yodo puede
manchar los tejidos y las supercies del entorno, y en general no es adecuado como
desinfectante. Por otro lado, los yodforos y las tinturas de yodo son buenos antisp-
ticos. La povidona yodada es un agente de lavado quirrgico able e inocuo, y sirve
como antisptico cutneo preoperatorio. Los antispticos a base de yodo no suelen
ser adecuados para utilizarlos en material mdico/dental. El yodo no debe usarse en
objetos de aluminio o cobre.
El yodo puede ser txico. Los productos orgnicos a base de yodo deben almace-
narse a 410 C para evitar la proliferacin de bacterias potencialmente peligrosas en
ellos.
Perxido de hidrgeno y percidos
Como el cloro, el perxido de hidrgeno (H
2
O
2
) y los percidos son oxidantes enr-
gicos y pueden servir como potentes germicidas de amplio espectro. Son tambin ms
inocuos que el cloro para el ser humano y para el medio ambiente.
El perxido de hidrgeno se suministra en forma de solucin al 3% lista para usar
o como solucin acuosa al 30% que debe ser diluida hasta 510 veces su volumen en
agua esterilizada. Sin embargo, esas soluciones al 36% por s solas son relativamente
lentas y limitadas como germicidas. Los productos disponibles hoy en da tienen otros
ingredientes para estabilizar el contenido de perxido de hidrgeno, acelerar su accin
germicida y hacerlo menos corrosivo.
El perxido de hidrgeno puede utilizarse para descontaminar las supercies de
trabajo del laboratorio y de las CSB, y las soluciones ms potentes pueden servir
para desinfectar el material mdico/dental sensible al calor. El uso de perxido de
hidrgeno vaporizado o cido peractico (CH
3
COOOH) para la descontaminacin
de material mdico/quirrgico sensible al calor requiere equipo especializado.
El perxido de hidrgeno y los percidos pueden ser corrosivos para metales como
el aluminio, el cobre, el latn y el zinc, y tambin pueden descolorar tejidos, cabellos,
piel y mucosas. Los objetos tratados con ellos deben enjuagarse concienzudamente
antes del contacto con ojos y mucosas. Siempre se almacenarn alejados del calor y
protegidos de la luz.
Descontaminacin de espacios y supercies
La descontaminacin del espacio, el mobiliario y el equipo de laboratorio requiere
una combinacin de desinfectantes lquidos y gaseosos. Las supercies pueden
descontaminarse con una solucin de hipoclorito sdico (NaOCl); una solucin que
contenga 1g/l de cloro libre puede ser apropiada para la limpieza general, pero se
96
recomiendan soluciones ms potentes (5g/l) cuando se trate de situaciones de alto
riesgo. Para la descontaminacin de espacios y supercies, las soluciones de leja
pueden sustituirse por frmulas que contengan un 3% de perxido de hidrgeno
(H
2
O
2
).
Las salas y el equipo pueden descontaminarse por fumigacin con formaldehdo
gaseoso, que se obtiene calentando paraformaldehdo o hirviendo formol. Este pro-
cedimiento es sumamente peligroso y debe ser realizado por personal especialmente
adiestrado. Todas las aberturas del local (ventanas, puertas, entre otros) deben
cerrarse con cinta adhesiva o un material anlogo antes de que se desprenda el gas.
La fumigacin debe efectuarse a una temperatura ambiente de al menos 21 C y una
humedad relativa del 70% (vase tambin el apartado sobre descontaminacin de CSB
en este captulo).
Tras la fumigacin, la zona debe ventilarse completamente antes de permitir la
entrada de personal. Toda persona que entre en la sala antes de la ventilacin habr
de llevar mascarillas respiratorias apropiadas. Para neutralizar el formaldehdo puede
utilizarse bicarbonato amnico gaseoso.
La fumigacin de espacios reducidos con vapores de perxido de hidrgeno
tambin es ecaz, pero requiere equipo especializado para generar el vapor.
Descontaminacin de cmaras de seguridad biolgica
Para descontaminar las CSB de las clases I y II se dispone de aparatos autnomos que
generan, ponen en circulacin y neutralizan formaldehdo gaseoso de forma inde-
pendiente. Si no se dispone de ese equipo, debe colocarse la cantidad apropiada de
paraformaldehdo (concentracin nal de 0,8% de paraformaldehdo en el aire) en
una sartn sobre una placa elctrica caliente. En una segunda placa caliente, tambin
dentro de la cmara, se coloca otra sartn con bicarbonato amnico en una cantidad
un 10% mayor que el paraformaldehdo de la primera sartn. Ambas placas deben
estar enchufadas fuera de la cmara para que se pueda controlar su funcionamiento
desde el exterior. Si la humedad relativa es inferior al 70%, tambin debe colocarse
una sartn con agua caliente en el interior de la cmara antes de sellar los bordes de
la ventana frontal con cinta adhesiva fuerte (cinta aislante, por ejemplo). Sobre la aber-
tura frontal y el oricio de evacuacin se ja con cinta adhesiva una lmina de pls-
tico grueso, con el n de asegurar que el gas no pueda ltrarse a la sala. Los oricios
de penetracin de los cables elctricos que pasan por la abertura frontal tambin
deben cerrarse con cinta aislante.
Se enciende la placa con la sartn de paraformaldehdo y se apaga cuando se haya
evaporado totalmente. La cmara se deja en reposo durante al menos 6 horas.
Entonces se enciende la segunda placa y se permite que el bicarbonato amnico se
evapore. En ese momento se apaga la placa y se enciende el ventilador de la CSB
durante dos intervalos de unos dos segundos para permitir que el gas de bicarbonato
amnico circule por el interior. La cmara se dejar en reposo durante 30min antes
de retirar el plstico de la abertura frontal y del oricio de salida de aire. Antes de
97
volver a utilizar la cmara se limpiarn sus supercies con un pao para eliminar los
residuos.
Lavado y descontaminacin de las manos
Siempre que sea posible, se llevarn guantes apropiados cuando se manipulen mate-
riales biolgicos peligrosos. A pesar de ello, los guantes no obvian la necesidad de que
el personal se lave las manos de forma regular y correcta. Las manos se lavarn despus
de manipular materiales biolgicos peligrosos y animales, y antes de abandonar el
laboratorio.
En la mayora de las situaciones, un lavado concienzudo de las manos con jabn
normal y agua basta para descontaminarlas, pero en las situaciones de alto riesgo se
recomienda utilizar jabones germicidas. Se formar espuma abundante con el jabn
y se frotarn bien las manos, durante un mnimo de 10 segundos; a continuacin se
aclararn en agua limpia y se secarn con una toalla de papel o un pao limpio
(tambin se pueden utilizar secadores de manos de aire caliente).
Se recomiendan los grifos accionados con el pie o el codo. Cuando no existan, debe
utilizarse una toalla de papel o pao para cerrar los mandos de los grifos con el n
de evitar volver a contaminarse las manos ya lavadas.
Como ya se ha dicho, pueden realizarse friegas con alcohol en las manos para
descontaminarlas cuando estn ligeramente sucias y no se pueda lavarlas con agua y
jabn.
Desinfeccin y esterilizacin por calor
El calor es el agente fsico ms utilizado para la descontaminacin de patgenos. El
calor seco, que no es en absoluto corrosivo, se utiliza para tratar muchos objetos de
laboratorio que pueden soportar temperaturas de 160 C o ms durante dos a cuatro
horas. La combustin o incineracin (vase ms adelante) es tambin una forma de
calor seco. El calor hmedo es especialmente ecaz cuando se utiliza en autoclave.
La coccin no necesariamente mata todos los microorganismos o patgenos, pero
puede utilizarse como tratamiento mnimo de desinfeccin cuando no puedan apli-
carse o no estn disponibles otros mtodos, como la desinfeccin o descontaminacin
qumica, o el tratamiento en autoclave.
Los artculos esterilizados deben manipularse y guardarse de forma que se man-
tengan descontaminados hasta que se vuelvan a utilizar.
Tratamiento en autoclave
La aplicacin de vapor de agua saturado a presin (tratamiento en autoclave) es el
medio ms ecaz y able de esterilizar material del laboratorio. Para la mayora de los
propsitos, los ciclos siguientes garantizarn la esterilizacin del contenido de la auto-
clave siempre que se haya cargado correctamente:
1. 3 minutos a 134 C
98
4. 25 minutos a 115 C.
Hay distintos tipos de autoclaves, entre los que cabe citar los siguientes:
Autoclaves de desplazamiento por gravedad. En la gura 10 se muestra la construccin
general de una autoclave de desplazamiento por gravedad. El vapor entra en la cmara
a presin y desplaza el aire ms pesado hacia abajo, a travs de la vlvula del oricio
de salida, equipada con un ltro HEPA.
Autoclaves de prevaco. Estos aparatos permiten eliminar el aire de la cmara antes de
dar paso al vapor. El aire extrado se evacua a travs de una vlvula equipada con un
ltro HEPA. Al nal del ciclo, el vapor se evacua automticamente. Estas autoclaves
pueden funcionar a 134 C, por lo que el ciclo de esterilizacin puede reducirse a tres
minutos. Son ideales para cargas de material poroso, pero no pueden utilizarse para
tratar lquidos debido al vaco.
Autoclaves de olla a presin calentadas por combustible. Este tipo de autoclaves
slo deben utilizarse si no se dispone de una autoclave de desplazamiento por
99
Figure 10. Autoclave de desplazamiento por gravedad
gravedad. Se cargan desde arriba y se calientan con gas, electricidad u otro com-
bustible. El vapor se produce por el calentamiento del agua en la base del recipiente;
el aire se desplaza en sentido ascendente por una abertura de descarga. Cuando se ha
sacado todo el aire, la vlvula de la abertura de descarga se cierra y se reduce el calor.
La presin y la temperatura aumentan hasta que la vlvula de seguridad funciona en
el nivel preestablecido. Este es el comienzo del tiempo de retencin. Al nal del ciclo
se cierra la fuente de calor y se deja que la temperatura descienda a 80 C o menos
antes de abrir la tapa.
Carga de las autoclaves
El material y los objetos que se vayan a esterilizar deben agruparse sin apretarlos en
la cmara, de modo que el vapor pueda circular sin dicultad y el aire pueda salir
fcilmente. Las bolsas deben permitir que el vapor penetre en su contenido.
Precauciones en el uso de las autoclaves
Las reglas siguientes pueden reducir al mnimo los riesgos derivados del manejo de
cualquier recipiente a presin.
1. El manejo y el mantenimiento ordinario deben ser responsabilidad de personas
adiestradas.
2. Se realizar a intervalos regulares un programa de mantenimiento preventivo que
comprender la inspeccin de la cmara, el sellado de las puertas y todos los
calibradores y controles por parte de personal calicado.
3. El vapor de agua estar saturado y exento de sustancias qumicas (por ejemplo,
inhibidores de la corrosin) que podran contaminar los objetos que se estn
esterilizando.
4. Todo el material debe colocarse en recipientes que permitan una fcil evacuacin
del aire y una buena penetracin del calor; la cmara no estar sobrecargada, de
modo que el vapor alcance por igual a toda la carga.
5. En las autoclaves que no dispongan de un dispositivo de seguridad que impida
que la puerta se abra cuando la cmara est sometida a presin, es indispensable
que la vlvula central del vapor est cerrada y que se deje descender la tempe-
ratura por debajo de 80 C antes de abrir la puerta.
6. Cuando se introduzcan lquidos en la autoclave, la evacuacin debe ser lenta, pues
al sacarlos pueden hervir debido al sobrecalentamiento.
7. Los trabajadores deben llevar guantes y viseras de proteccin apropiadas al abrir
la autoclave, incluso cuando la temperatura haya bajado por debajo de los 80 C.
8. En la vigilancia regular del funcionamiento de la autoclave, se colocarn indi-
cadores biolgicos o termopares en el centro de cada carga. La vigilancia regular
mediante termopares y dispositivos de registro colocados en una carga ms des-
favorable es sumamente conveniente para determinar los ciclos de fun-
cionamiento ms adecuados.
100
9. El ltro de la rejilla de drenaje de la cmara (si existe) debe retirarse y limpiarse
todos los das.
10. Debe procurarse que las vlvulas de descarga de las autoclaves de olla a presin
no queden bloqueadas por papel u otro material presente en la carga.
Incineracin
La incineracin es un mtodo til para eliminar del laboratorio los cadveres de ani-
males y los desechos anatmicos y de otro tipo, con o sin descontaminacin previa
(vase el captulo 3). La incineracin de material infeccioso slo sustituye al
tratamiento en autoclave si el incinerador est sometido a control del laboratorio.
Una incineracin correcta exige disponer de un medio eciente de control de la
temperatura y de una cmara de combustin secundaria. Muchos incineradores, espe-
cialmente los que tienen una sola cmara de combustin, no resultan satisfactorios
para tratar material infeccioso, cadveres de animales y plsticos. Esos materiales quiz
no se destruyan por completo y el euente de la chimenea puede contaminar la atms-
fera con microorganismos, sustancias qumicas txicas y humo. No obstante, hay
muchas conguraciones satisfactorias de las cmaras de combustin; lo ideal es que
la temperatura en la cmara primaria sea de al menos 800 C y en la cmara secun-
daria de al menos 1000 C.
Los materiales destinados a la incineracin, incluso si se han descontaminado pre-
viamente, deben transportarse al incinerador en bolsas, preferiblemente de plstico.
Los encargados del incinerador deben recibir instrucciones apropiadas acerca de la
carga y el control de la temperatura. Tambin cabe sealar que el funcionamiento e-
ciente de un incinerador depende en gran medida de que la combinacin de materi-
ales en los residuos que se estn tratando sea la adecuada.
Las posibles repercusiones ambientales negativas de los incineradores existentes o
en proyecto siguen siendo motivo de preocupacin, y prosiguen los esfuerzos enca-
minados a que los incineradores sean ms compatibles con el entorno y ms ecientes
en el uso de energa.
Eliminacin de desechos
La eliminacin de los desechos mdicos y de laboratorio est sometida a varias
reglamentaciones regionales, nacionales e internacionales. Deben consultarse las
ltimas versiones de los documentos pertinentes antes de disear y poner en prctica
un programa de manipulacin, transporte y eliminacin nal de desechos biolgicos
peligrosos. En general, las cenizas procedentes de los incineradores pueden tratarse
igual que las basuras domsticas corrientes y ser evacuadas por los servicios locales.
Los desechos de la autoclave pueden ser eliminados en vertederos autorizados o por
incineracin fuera del laboratorio (vase el captulo 3).
Para ms informacin, vanse las referencias 13 y 29 a 39.
101
102
15. Introduccin al transporte de
sustancias infecciosas
El transporte de material infeccioso y potencialmente infeccioso est sometido a
reglamentaciones nacionales e internacionales estrictas. Esas reglamentaciones
describen el uso apropiado de materiales de embalaje/envasado, adems de otros
requisitos.
El personal de laboratorio debe enviar las sustancias infecciosas de acuerdo con las
normas de transporte aplicables, cuyo cumplimiento permitir:
1. reducir la probabilidad de que los embalajes/envases se estropeen y derramen su
contenido, y con ello
2. reducir el nmero de exposiciones que den lugar a posibles infecciones, y
3. mejorar la eciencia de la entrega de los envos.
Reglamentacin internacional en materia de transportes
La reglamentacin relacionada con el transporte de material infeccioso por cualquier
medio de transporte se basa en las Recomendaciones relativas al transporte de mer-
cancas peligrosas (40). Esas recomendaciones de las Naciones Unidas han sido
elaboradas por el Comit de Expertos de las Naciones Unidas en Transporte de
Mercancas Peligrosas. Para que sea jurdicamente vinculante, la Reglamentacin
Modelo ha de ser introducida en las normas nacionales y las reglamentaciones modelo
internacionales por las autoridades competentes (por ejemplo, las Instrucciones
Tcnicas para el transporte sin riesgos de mercancas peligrosas por va area (41) de la
Organizacin de Aviacin Civil Internacional (OACI) en relacin con el transporte
areo, y el Acuerdo Europeo sobre el Transporte Internacional de Mercaderas Peligrosas
por Carretera (ADR) (42)).
La Asociacin de Transporte Areo Internacional (IATA) publica todos los aos
una gua sobre el transporte de sustancias infecciosas (Infectious Substances Shipping
Guidelines) (43). La gua de la IATA debe seguir como mnimo las Instrucciones
Tcnicas de la OACI, pero puede imponer restricciones adicionales. Cuando un envo
es transportado por un miembro de la Asociacin deben seguirse las directrices de
la IATA.
Puesto que la Reglamentacin Modelo para el Transporte de Mercancas Peligrosas es
un conjunto dinmico de recomendaciones sometido a modicaciones cada dos aos,
se remite al lector a las ltimas ediciones de las normas nacionales e internacionales
para consultar los textos reglamentarios aplicables.
La OMS acta en calidad de asesora ante el Comit de Expertos de las Naciones
Unidas en el Transporte de Mercancas Peligrosas. En la 13
a
edicin (2003) de la
Reglamentacin Modelo de las Naciones Unidas se introdujeron importantes cambios,
especialmente en lo que atae a las sustancias infecciosas (40). Puede solicitarse a la
OMS orientacin sobre los antecedentes de las enmiendas adoptadas (44).
La reglamentacin internacional no pretende reemplazar las normas locales o
nacionales. Sin embargo, en las situaciones en que no existan normas nacionales, debe
seguirse la reglamentacin internacional.
Es importante sealar que el transporte internacional de las sustancias infecciosas
tambin depende de la normativa nacional en materia de importacin y exportacin.
El sistema bsico de embalaje/envasado triple
El sistema de embalaje/envasado triple, que es el preferible para el transporte de sus-
tancias infecciosas y potencialmente infecciosas, se muestra a modo de ejemplo en la
gura 11. Este sistema de embalaje/envasado consta de tres componentes: el reci-
piente primario, el embalaje/envase secundario y el embalaje/envase externo.
El recipiente primario que contiene la muestra debe ser estanco, a prueba de fugas
y estar debidamente etiquetado en relacin con el contenido. Debe ir envuelto en
material absorbente suciente para absorber todo el lquido en caso de rotura o fuga.
El recipiente primario se introduce en un segundo embalaje/envase protector
estanco y a prueba de fugas. Pueden colocarse varios recipientes primarios en un solo
embalaje/envase secundario. En algunos textos reglamentarios se incluyen lmites en
relacin con el volumen o el peso de las sustancias infecciosas envasadas.
El embalaje/envase externo protege el embalaje/envase secundario de los daos
fsicos durante el transporte. Los formularios de datos relativos a la muestra, las cartas
y dems material informativo que permitan identicarla o describirla, as como iden-
ticar al remitente y al destinatario, junto con toda la dems documentacin exigida,
tambin se incluirn de acuerdo con la reglamentacin vigente.
La Reglamentacin Modelo de las Naciones Unidas prescribe el uso de dos sistemas
diferentes de envasado triple. El sistema bsico es el indicado para el transporte de
diversas sustancias infecciosas, pero los organismos de alto riesgo deben enviarse
siguiendo normas ms estrictas. Para ms detalles sobre el uso de los distintos envases
segn los materiales que se vayan a enviar, se aconseja al lector que consulte la
reglamentacin nacional o internacional para conocer los textos normativos
aplicables.
Procedimiento de limpieza de derrames
En caso de que se produzca un derrame de material infeccioso o potencialmente infec-
cioso, se aplicar el siguiente procedimiento de limpieza:
1. Utilizar guantes y ropa protectora, e incluso proteccin facial y ocular si estuviera
indicada.
15. INTRODUCCIN AL TRANSPORTE DE SUSTANCIAS INFECCIOSAS
103
104
Figura 11. Ejemplos de sistemas de embalaje/envasado triple
(Ilustraciones amablemente cedidas por la IATA, Montreal (Canad))
Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categora A
Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categora B
2. Cubrir el derrame con paos o papel absorbente para contenerlo.
3. Verter un desinfectante apropiado sobre el papel absorbente y la zona inmediata-
mente circundante (en general, son apropiadas las soluciones de leja al 5%; sin
embargo, para los derrames en aeronaves deben utilizarse desinfectantes a base de
amonio cuaternario).
4. Aplicar el desinfectante en crculos concntricos, comenzando por el exterior de
la supercie del derrame y procediendo hacia el centro.
5. Despus del tiempo necesario (por ejemplo, 30 minutos), retirar todos los mate-
riales. Si hay vidrios rotos u objetos punzantes, juntarlos con una pala o un trozo
de cartn rgido y depositarlos en un recipiente a prueba de perforaciones para
su eliminacin.
6. Limpiar y desinfectar la zona afectada por el derrame (en caso necesario, repetir
los pasos 2 a 5).
7. Colocar el material contaminado en un recipiente para desechos a prueba de fugas
y de perforaciones.
8. Tras una desinfeccin satisfactoria, informar a las autoridades competentes de que
el lugar ha quedado descontaminado.
15. INTRODUCCIN AL TRANSPORTE DE SUSTANCIAS INFECCIOSAS
105
PARTE V
Introduccin a
la biotecnologa
16. Bioseguridad y tecnologa del
ADN recombinante
109
La tecnologa del ADN recombinante entraa la combinacin de informacin gentica
procedente de distintas fuentes para crear organismos genticamente modicados
(OGM) que pueden no haber existido antes en la naturaleza. En un principio, los espe-
cialistas en biologa molecular expresaron cierta preocupacin por la posibilidad de
que esos organismos tuvieran propiedades impredecibles y perjudiciales y pudieran
representar un riesgo biolgico en caso de que salieran de los laboratorios. Esa pre-
ocupacin fue el objeto de una conferencia cientca celebrada en Asilomar (Califor-
nia, EE.UU.) en 1975 (45), en la que se debatieron cuestiones de seguridad y se
propusieron las primeras directrices en materia de tecnologa del ADN recombinante.
La experiencia obtenida a lo largo de los ms de 25 aos de investigacin que
siguieron ha demostrado que la ingeniera gentica puede desarrollarse en condiciones
de seguridad cuando se realizan las debidas evaluaciones de riesgos y se adoptan las
medidas de seguridad apropiadas.
La tecnologa del ADN recombinante, tambin conocida como ingeniera gentica,
se utiliz por primera vez para clonar fragmentos de ADN en huspedes bacterianos
a n de sobreexpresar productos gnicos concretos destinados al estudio. Las molcu-
las de ADN recombinante tambin se han utilizado para crear organismos gentica-
mente modicados, como animales transgnicos o con genes inactivados (knock-out),
as como plantas transgnicas.
Esta tecnologa ya ha tenido un enorme impacto en la biologa y la medicina, y
probablemente tenga una inuencia an mayor en el futuro, ahora que se ha deter-
minado la secuencia completa de nucletidos del genoma humano. Gracias a la inge-
niera gentica podrn estudiarse decenas de miles de genes cuya funcin an se
desconoce. La terapia gnica puede llegar a convertirse en el tratamiento habitual de
ciertas enfermedades, y probablemente se obtengan nuevos vectores para la trans-
ferencia de genes mediante tcnicas de ingeniera gentica. Adems, las plantas trans-
gnicas producidas mediante esta tecnologa pueden desempear un papel cada vez
ms importante en la agricultura moderna.
Los experimentos que supongan la creacin o el uso de OGM deben realizarse
despus de efectuar una evaluacin del riesgo biolgico. Las propiedades patgenas y
cualquier peligro potencial asociado a esos organismos pueden ser nuevos y no estar
bien caracterizados. Hay que evaluar las propiedades del organismo donante, la
naturaleza de las secuencias de ADN que van a transferirse, las propiedades del
organismo receptor y las propiedades del entorno. Esos factores ayudarn a determi-
nar el nivel de bioseguridad que se necesita para manipular sin riesgo el OGM resul-
tante y a identicar los sistemas de contencin biolgica y fsica que habr que emplear.
Consideraciones de bioseguridad en relacin con los sistemas
de expresin biolgica
Los sistemas de expresin biolgica constan de vectores y clulas husped. Para que
sean ecaces y puedan utilizarse sin riesgo, es preciso satisfacer varios criterios. Un
ejemplo de sistema de expresin biolgica es el plsmido pUC18, que se utiliza a
menudo como vector de clonacin en combinacin con clulas de Escherichia coli K12
y ha sido completamente secuenciado. De su plsmido precursor pBR322 se han
eliminado todos los genes necesarios para la expresin en otras bacterias. E. coli K12
es una cepa no patgena que no puede colonizar permanentemente el intestino del
ser humano ni de los animales sanos. Pueden llevarse a cabo sin riesgo experimentos
ordinarios de ingeniera gentica en E. coli K12/pUC18 en el nivel de bioseguridad 1,
siempre que los productos de la expresin de ADN extrao insertado no exijan
mayores niveles de bioseguridad.
Consideraciones de bioseguridad en relacin con los vectores de expresin
Puede ser necesario trabajar en niveles de bioseguridad ms altos en los siguientes
casos:
1. Cuando la expresin de secuencias de ADN derivadas de organismos patgenos
pueda aumentar la virulencia del OGM
2. Cuando las secuencias de ADN insertadas no estn bien caracterizadas, por
ejemplo durante la preparacin de genotecas de ADN genmico de micro-
organismos patognicos
3. Cuando los productos gnicos puedan tener actividad farmacolgica
4. Cuando los productos gnicos sean toxinas.
Vectores vricos para la transferencia de genes
Los vectores vricos, por ejemplo los de adenovirus, se utilizan para transferir genes a
otras clulas. Esos vectores carecen de ciertos genes necesarios para la replicacin
vrica y son propagados en lneas celulares que complementan el defecto.
Las poblaciones de esos vectores pueden contaminarse con virus que tienen intacta
la capacidad de replicacin, generados por sucesos poco frecuentes de recombinacin
espontnea en las lneas celulares de propagacin, o procedentes de una puricacin
insuciente. Esos vectores deben manipularse al mismo nivel de bioseguridad que el
adenovirus del que proceden.
Animales transgnicos y con genes inactivados (knock-out)
Los animales que llevan informacin gentica extraa (animales transgnicos) deben
manipularse en niveles de contencin apropiados para las caractersticas de los pro-
110
ductos de los genes extraos. Los animales en los que se han suprimido de forma selec-
tiva ciertos genes (knock-out) no suelen entraar riesgos biolgicos particulares.
Cabe citar como ejemplos de animales transgnicos los animales que expresan
receptores de virus normalmente incapaces de infectar a esa especie. Si esos animales
salieran del laboratorio y transmitieran el transgn a la poblacin animal salvaje, en
teora podra generarse un reservorio animal de esos virus en particular.
Esta posibilidad se ha examinado en el caso de los poliovirus y es particularmente
pertinente en el contexto de la erradicacin de la poliomielitis. Los ratones trans-
gnicos, generados en distintos laboratorios, que expresaban el receptor de poliovirus
humanos eran susceptibles a la infeccin por poliovirus por varias vas de inoculacin,
y la enfermedad resultante era anloga a la poliomielitis humana desde los puntos de
vista histopatolgico y clnico. Sin embargo, el modelo murino diere del ser humano
en que la replicacin de los poliovirus administrados por va oral en el tubo digestivo
es poco eciente o no se produce. Por consiguiente, es muy poco probable que, de
escaparse esos ratones transgnicos de un laboratorio, se generase un nuevo reservo-
rio animal de poliovirus. A pesar de todo, este ejemplo indica que en cada nueva lnea
de animales transgnicos es preciso efectuar estudios detallados para determinar las
vas por las que pueden infectarse los animales, el tamao del inculo necesario para
que se produzca una infeccin y el grado de excrecin de virus por parte de los ani-
males infectados. Adems, deben adoptarse todas las medidas posibles para garanti-
zar una contencin estricta de los ratones transgnicos receptores.
Plantas transgnicas
Las plantas transgnicas que expresan genes que coneren tolerancia a los herbicidas
o resistencia a los insectos son actualmente objeto de una controversia considerable
en muchos lugares del mundo. El debate gira en torno a la seguridad de esas plantas
cuando se utilizan como alimentos, as como a las consecuencias ecolgicas a largo
plazo de su cultivo.
Las plantas transgnicas que expresan genes de origen animal o humano se utilizan
para elaborar productos medicinales y nutricionales. Una evaluacin del riesgo deter-
minar el nivel de bioseguridad ms apropiado para la produccin de esas plantas.
Evaluacin de riesgos en relacin con los organismos
genticamente modicados
Las evaluaciones de riesgos para trabajar con organismos genticamente modicados
(OGM) deben tener en cuenta las caractersticas de los organismos donantes y los
organismos receptores/huspedes.
Entre los ejemplos de caractersticas que hay que tener presentes cabe citar:
Riesgos derivados directamente del gen insertado (organismo donante)
Es preciso realizar una evaluacin en aquellas situaciones en las que el producto del
gen insertado tenga una actividad biolgica o farmacolgica que pueda resultar
daina, como:
16. BIOSEGURIDAD Y TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE
111
1. Toxinas
2. Citoquinas
3. Hormonas
4. Reguladores de la expresin gnica
5. Factores de virulencia o potenciadores de la virulencia
6. Secuencias oncognicas
7. Resistencia a antibiticos
8. Alrgenos.
El examen de esos casos debe incluir una estimacin del nivel de expresin necesario
para conseguir actividad biolgica o farmacolgica.
Riesgos asociados al receptor/husped
1. Susceptibilidad del husped
2. Patogenicidad de la cepa husped, incluida la virulencia, la infectividad y la pro-
duccin de toxinas
3. Modicacin de la gama de huspedes
4. Estado inmunitario del receptor
5. Consecuencias de la exposicin.
Riesgos derivados de la alteracin de rasgos patognicos existentes
Muchas modicaciones no utilizan genes cuyos productos sean intrnsecamente
nocivos, pero pueden producirse efectos adversos de resultas de la alteracin de
caractersticas patognicas o no patognicas existentes. La modicacin de genes nor-
males puede alterar la patogenicidad. Para intentar determinar esos riesgos, pueden
tenerse en cuenta los siguientes aspectos (la lista no es exhaustiva):
1. Hay un aumento de la infectividad o la patogenicidad?
2. Podra superarse cualquier mutacin incapacitante en el receptor de resultas de
la insercin del gen extrao?
3. Codica el gen extrao un determinante de patogenicidad de otro organismo?
4. Si el ADN extrao incluye un determinante de patogenicidad, cabe prever que
ese gen pudiera contribuir a la patogenicidad del OGM?
5. Se dispone de tratamiento?
6. Se ver afectada la susceptibilidad del OGM a los antibiticos u otra forma de
tratamiento a consecuencia de la modicacin gentica?
7. Podra conseguirse la erradicacin del OGM?
Otras consideraciones
El uso de animales o plantas enteras con nes experimentales tambin merece una
consideracin cuidadosa. Los investigadores deben cumplir las normas, restricciones
y requisitos para trabajar con OGM vigentes en los pases y las instituciones en los
que se desarrolla su labor.
112
Los pases pueden contar con autoridades nacionales encargadas de elaborar direc-
trices para trabajar con OGM que pueden ayudar a los cientcos a clasicar su labor
en el nivel de bioseguridad apropiado. En algunos casos la clasicacin puede variar
de un pas a otro; quiz un pas decida asignar el trabajo a un nivel ms alto o ms
bajo cuando aparece nueva informacin sobre un nuevo sistema de vector/husped.
La evaluacin del riesgo es un proceso dinmico que tiene en cuenta los nuevos
acontecimientos y los avances cientcos. La realizacin de las debidas evaluaciones
del riesgo garantizar que los benecios de la tecnologa del ADN recombinante sigan
estando al alcance de la humanidad en los aos venideros.
Para ms informacin, consltense las referencias 17 y 46 a 48.
16. BIOSEGURIDAD Y TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE
113
PARTE VI
Seguridad qumica y elctrica
y proteccin contra incendios
17. Sustancias qumicas peligrosas
117
El personal que trabaja en los laboratorios de microbiologa est expuesto no slo a
microorganismos patognicos, sino tambin a los peligros que entraan las sustan-
cias qumicas. Es importante que el personal tenga los debidos conocimientos acerca
de los efectos txicos de esas sustancias qumicas, las vas de exposicin y los peligros
que pueden estar asociados a su manipulacin y almacenamiento (vase el anexo 5).
Los fabricantes y/o proveedores de sustancias qumicas facilitan hojas informativas
con datos sobre la seguridad de los materiales y otras informaciones sobre los peli-
gros qumicos. Esas hojas deben estar disponibles en los laboratorios donde se uti-
lizan esas sustancias, por ejemplo como parte de un manual de seguridad o de
operaciones.
Vas de exposicin
La exposicin a sustancias qumicas peligrosas puede darse por las siguientes vas:
1. Inhalacin
2. Contacto
3. Ingestin
4. Jeringuillas
5. Heridas en la piel.
Almacenamiento de sustancias qumicas
En el laboratorio slo deben conservarse las cantidades de sustancias qumicas que
sean necesarias para el uso diario. Las cantidades importantes deben guardarse en
locales o edicios destinados especialmente a este n.
Las sustancias qumicas nunca deben almacenarse por orden alfabtico.
Normas generales en relacin con las incompatibilidades qumicas
Para evitar los incendios y/o las explosiones, las sustancias que aparecen en la columna
izquierda del cuadro 13 deben almacenarse y manipularse de modo que no puedan
entrar en contacto con las sustancias correspondientes de la columna derecha del
mismo cuadro.
Efectos txicos de las sustancias qumicas
Algunas sustancias qumicas son perjudiciales para la salud de quienes las manipulan
o inhalan sus vapores. Aparte de los venenos maniestos, hay sustancias que tienen
diversos efectos txicos. Las vas respiratorias, la sangre, los pulmones, el hgado, los
riones y el aparato digestivo, as como otros rganos y tejidos, pueden sufrir efectos
adversos o padecer lesiones graves. Se sabe que ciertas sustancias qumicas son can-
cergenas o teratgenas.
La inhalacin de los vapores de ciertos disolventes puede tener efectos txicos.
Adems de los efectos ms graves antes sealados, la exposicin puede provocar
trastornos que, aunque no tengan efectos inmediatamente apreciables en la salud, en
ocasiones producen sntomas como falta de coordinacin, embotamiento y otros
anlogos, que pueden aumentar la propensin a los accidentes.
La exposicin prolongada o repetida a la fase lquida de muchos disolventes orgni-
cos puede provocar lesiones cutneas. Ello puede deberse al efecto lipoltico de los
disolventes, pero tambin pueden presentarse efectos corrosivos y alrgicos.
Para ms informacin acerca de los efectos txicos de las sustancias qumicas, vase
el anexo 5.
Sustancias qumicas explosivas
Las azidas, que a menudo se utilizan en soluciones antibacterianas, no deben entrar
en contacto con el cobre ni el plomo (por ejemplo, en tuberas de desage y alcan-
tarillado), ya que pueden explotar violentamente cuando se someten a un impacto,
aunque sea ligero.
Los teres que se conservan desde hace tiempo y que han cristalizado son suma-
mente inestables y potencialmente explosivos.
El cido perclrico, si se deja que se seque en la madera, ladrillos o tejidos, explotar
y provocar un incendio con el impacto.
El cido pcrico y los picratos detonan por la accin del calor y los impactos.
Derrame de sustancias qumicas
La mayora de los fabricantes de sustancias qumicas para laboratorios distribuyen
grcos que describen los mtodos para tratar los derrames. Tambin se encuentran
en el comercio grcos y estuches de material para casos de derrame. Los grcos
118
Cuadro 13. Normas generales en relacin con las incompatibilidades qumicas
CATEGORA DE SUSTANCIAS SUSTANCIAS INCOMPATIBLES
Metales alcalinos, como el sodio, potasio, Dixido de carbono, hidrocarburos clorados, agua
cesio y litio
Halgenos Amoniaco, acetileno, hidrocarburos
cidos actico, sulfhdrico y sulfrico, Agentes oxidantes, como los cidos crmico y
anilina, hidrocarburos ntrico, los perxidos o los permanganatos
pertinentes debern exponerse en el laboratorio en lugar destacado. Tambin deber
disponerse del siguiente equipo:
1. Estuches especiales de material para derrames qumicos
2. Ropa protectora: guantes de goma fuertes, chanclos o botas de agua, mascarillas
respiratorias
3. Escobas y palas para el polvo
4. Pinzas para recoger los trozos de vidrio
5. Bayetas, trapos y toallas de papel
6. Cubos
7. Carbonato sdico (Na
2
CO
3
) o bicarbonato sdico (NaHCO
3
) para neutralizar
cidos y sustancias qumicas corrosivas
8. Arena (para cubrir los derrames de sustancias alcalinas)
9. Detergente no inamable.
En caso de que se produzca un derrame qumico importante, debe procederse como
sigue:
1. Noticar el incidente al funcionario de seguridad que corresponda.
2. Evacuar del local al personal no indispensable.
3. Atender a las personas que puedan haberse contaminado.
4. Si el material derramado es inamable, extinguir todas las llamas desnudas, cortar
el gas del local afectado y de los locales adyacentes, abrir las ventanas (si es posible),
y cortar la electricidad de los aparatos que puedan producir chispas.
5. Evitar la respiracin de vapores del material derramado.
6. Establecer una ventilacin de salida si es posible hacerlo con seguridad.
7. Obtener el material necesario (vase ms arriba) para limpiar el material derra-
mado.
Gases comprimidos y licuados
En el cuadro 14 se ofrece informacin sobre el almacenamiento de gases comprimi-
dos y licuados.
17. SUSTANCIAS QUMICAS PELIGROSAS
119
Si se desea ms informacin, vanse las referencias 1 y 49 a 51, y el anexo 5.
120
Cuadro 14. Almacenamiento de gases comprimidos y licuados
RECIPIENTE INFORMACIN SOBRE EL ALMACENAMIENTO
Bombonas de gas comprimido Se jarn de forma segura (por ejemplo, con una cadena)
y recipientes de gas licuado
a,b
a la pared o a una mesa slida, para que no puedan
soltarse inadvertidamente.
Se transportarn debidamente tapadas y en carretillas.
Las bombonas de reserva se guardarn en otro edicio
a alguna distancia del laboratorio; el local estar bien
cerrado y debidamente identicado.
No se situarn cerca de radiadores, llamas desnudas u
otras fuentes de calor, aparatos elctricos que produzcan
chispas o bajo la luz solar directa.
Bombonas pequeas de gas de No deben incinerarse.
un solo uso
a,b
a
La vlvula principal de alta presin debe cerrarse cuando el equipo no est en uso y cuando el local est
vaco.
b
Los locales donde se utilicen bombonas de gas inamable deben identicarse mediante signos de adver-
tencia en las puertas.
121
18. Otros peligros en el laboratorio
El personal que trabaja en el laboratorio puede enfrentarse a peligros debidos a formas
de energa como el fuego, la electricidad, las radiaciones o el ruido. En este captulo
se ofrece informacin acerca de cada una de ellas.
Peligro de incendio
Es indispensable que haya una estrecha cooperacin entre los funcionarios de seguri-
dad y los servicios locales de prevencin de incendios. Aparte de los riesgos debidos
a las sustancias qumicas, deben examinarse los efectos del incendio en la posible
diseminacin de material infeccioso. Esto puede ser determinante a la hora de decidir
si es preferible extinguir o contener el incendio.
Conviene contar con la ayuda de los servicios locales de prevencin de incendios
para la capacitacin del personal del laboratorio en lo que se reere a la prevencin
de incendios, las medidas inmediatas en caso de incendio y el uso del equipo de lucha
contra incendios.
En cada sala y en los pasillos y vestbulos deben gurar de forma destacada adver-
tencias sobre incendios, instrucciones e indicaciones de las vas de salida.
Las causas ms comunes de incendios en los laboratorios son las siguientes:
1. Sobrecarga de los circuitos elctricos
2. Mal mantenimiento de la instalacin elctrica, como cables mal aislados o con el
aislante en mal estado
3. Tuberas de gas y cables elctricos demasiado largos
4. Equipo que se deja conectado sin necesidad
5. Equipo que no est diseado para el laboratorio
6. Llamas desnudas
7. Tuberas de gas en mal estado
8. Manipulacin y almacenamiento indebidos de material inamable o explosivo
9. Separacin indebida de sustancias qumicas incompatibles
10. Aparatos que producen chispas en las proximidades de sustancias y vapores
inamables
11. Ventilacin indebida o insuciente.
El equipo de lucha contra incendios debe colocarse cerca de las puertas de las salas
y en puntos estratgicos de los pasillos y vestbulos. Ese equipo debe comprender
mangueras, cubos (de agua o arena) y un extintor. Los extintores deben ser inspec-
cionados y mantenidos peridicamente y debe respetarse su vida til. En el cuadro 15
se indican los tipos y usos particulares de los extintores de incendios.
Para ms informacin consltese la referencia 49.
Peligros elctricos
Es indispensable que todas las instalaciones y el equipo elctricos sean inspecciona-
dos y probados con regularidad, incluida la toma de tierra.
Los circuitos elctricos del laboratorio que lo requieran deben disponer de
interruptores de circuito e interruptores por fallo de la toma de tierra. Los
interruptores de circuito no protegen a las personas: estn concebidos para proteger
los cables de las sobrecargas elctricas y con ello evitar los incendios. Los interrup-
tores por fallo de la toma de tierra tienen por objeto proteger a las personas contra
los choques elctricos.
Todo el equipo elctrico del laboratorio debe tener toma de tierra, preferiblemente
mediante enchufes de tres espigas.
Todo el equipo elctrico del laboratorio debe ajustarse a las normas y los cdigos
nacionales de seguridad elctrica.
Ruido
El exceso de ruido es perjudicial con el tiempo. Algunos tipos de equipo de laborato-
rio, como ciertos sistemas de lser, as como las instalaciones que albergan animales,
pueden exponer a los trabajadores a un ruido considerable. Pueden realizarse
mediciones del ruido para determinar el riesgo correspondiente. Cuando as lo justi-
quen los datos, cabe estudiar la posibilidad de instalar controles tcnicos como
cubiertas o barreras en torno al equipo ruidoso o entre las zonas ruidosas y otras zonas
122
Cuadro 15. Tipos y usos de extintores de incendios
TIPO USO NO USAR PARA:
Agua Papel, madera, tejidos Incendios elctricos,
lquidos inamables,
metales incendiados
Gases extintores de CO
2
Lquidos y gases inamables, Metales alcalinos, papel
incendios elctricos
Polvo seco Lquidos y gases inamables, metales Equipo e instrumentos
alcalinos, incendios elctricos reutilizables, pues los
residuos son muy
difciles de eliminar
Espuma Lquidos inamables Incendios elctricos
de trabajo. En los lugares donde no pueda reducirse en nivel de ruido y el personal
del laboratorio sufra habitualmente una exposicin excesiva, debe ponerse en marcha
un programa de conservacin de la audicin que incluya el uso de proteccin audi-
tiva cuando se trabaja en condiciones de ruido excesivo y un programa de vigilancia
mdica para determinar los efectos del ruido en los trabajadores.
Radiaciones ionizantes
La proteccin radiolgica trata de proteger a los seres humanos contra los efectos per-
judiciales de las radiaciones ionizantes, entre los que se incluyen los siguientes:
1. Efectos somticos, por ejemplo sntomas clnicos observables en las personas
expuestas. Entre ellos guran los tumores inducidos por radiaciones, como la
leucemia y los cnceres de hueso, pulmn y piel, cuya aparicin puede producirse
muchos aos despus de la irradiacin. Entre otros efectos somticos menos
graves guran lesiones cutneas leves, alopecia, trastornos hematolgicos, lesiones
gastrointestinales y formacin de cataratas.
2. Efectos hereditarios, es decir sntomas observados en los descendientes de los indi-
viduos expuestos. Los efectos hereditarios de la exposicin de las gnadas incluyen
las lesiones cromosmicas y las mutaciones gnicas. La irradiacin de las clulas
germinales de las gnadas en dosis elevadas tambin puede provocar la muerte
celular, que produce trastornos de la fecundidad en ambos sexos o cambios
menstruales en las mujeres. La exposicin del feto, particularmente entre las
semanas 8
a
a 15
a
del embarazo, puede aumentar el riesgo de malformaciones
congnitas, deciencias mentales o cnceres inducidos por la radiacin ms
adelante en la vida.
Principios de la proteccin contra las radiaciones ionizantes
Para limitar los efectos nocivos de las radiaciones ionizantes, el uso de radioistopos
debe ser controlado y cumplir las normas nacionales aplicables. La proteccin contra
las radiaciones debe seguir cuatro principios:
1. Reducir al mnimo el tiempo de exposicin a la radiacin.
2. Aumentar al mximo la distancia de la fuente de radiacin.
3. Proteger la fuente de radiacin.
4. Sustituir el uso de radionclidos por tcnicas no radiomtricas.
1. Tiempo. El tiempo de exposicin durante las manipulaciones de material radio-
activo puede reducirse de las siguientes formas:
Practicando tcnicas nuevas y an poco conocidas sin utilizar el radionclido
hasta que se dominen esas tcnicas
Trabajando con los radionclidos de forma concienzuda y oportuna, sin prisas
Velando por que todas las fuentes radioactivas se devuelvan a su lugar de alma-
cenamiento inmediatamente despus de usarlas
Retirando los residuos radioactivos del laboratorio a intervalos frecuentes
18. OTROS PELIGROS EN EL LABORATORIO
123
Pasando el menor tiempo posible en la zona de radiaciones del laboratorio
Gestionando y planicando con eciencia el tiempo de manipulacin de mate-
rial radiactivo en el laboratorio.
Cuanto menos tiempo se pase en un campo de irradiacin, menor ser la dosis
personal recibida, de acuerdo con la ecuacin siguiente:
2. Distancia. La intensidad de la dosis de la mayor parte de las radiaciones g y X es
inversamente proporcional al cuadrado de la distancia a la fuente:
Si se duplica la distancia a la fuente de radiacin, la exposicin queda reducida a
la cuarta parte en el mismo periodo de tiempo. Se utilizan diversos dispositivos y
aparatos auxiliares para aumentar la distancia entre el trabajador y la fuente de
radiacin, como pinzas largas, abrazaderas y pipeteadores a distancia. Obsrvese
que un pequeo aumento de la distancia puede dar lugar a una disminucin con-
siderable de la intensidad de la dosis.
3. Blindaje. Los blindajes que absorben o atenan la radiacin, situados entre la
fuente y el trabajador u otros ocupantes del laboratorio, ayudarn a limitar su
exposicin. El tipo y el grosor de cualquier material de blindaje dependen de la
capacidad de penetracin (tipo y energa) de la radiacin. Una barrera de 1,31,5
cm de material acrlico, madera o metal ligero protege contra partculas b de alta
energa, mientras que para proteger contra las radiaciones g y X de alta energa se
necesita plomo de alta densidad.
4. Sustitucin. Los materiales basados en radionclidos no deben utilizarse si hay
otras tcnicas disponibles. Si no es posible la sustitucin, se utilizar el radion-
clido que tenga el menor poder de penetracin o la menor energa.
Sistemas seguros de trabajo con radionclidos
Las normas relativas al trabajo con sustancias radiactivas deben tener en cuenta cuatro
zonas:
1. Zona de radiaciones
2. Zona de mesas de trabajo
3. Zona de desechos radiactivos
4. Registros y respuesta a las emergencias.
Entre las normas ms importantes para trabajar con radionclidos guran las
siguientes:
1. Zona de radiaciones
Slo se deben utilizar sustancias radiactivas en zonas exclusivamente desti-
nadas a ello.
124
Slo se permitir la presencia del personal indispensable.
Se utilizar equipo de proteccin personal: batas de laboratorio, gafas de
seguridad y guantes desechables.
Se vigilarn las exposiciones del personal a las radiaciones.
Los laboratorios en los que se utilizan radionclidos deben disearse de modo que
se simpliquen las operaciones de contencin, limpieza y descontaminacin. La
zona de trabajo con radionclidos debe situarse en una pequea sala adyacente al
laboratorio principal o en una zona exclusiva dentro del laboratorio, separada de
otras actividades. La entrada a la zona de radiaciones se demarcar con el smbolo
internacional de radiacin (gura 12):
2. Zona de mesas de trabajo
Utilizar bandejas para derrames cubiertas con material absorbente desechable.
Limitar las cantidades de radionclidos.
Blindar las fuentes de radiacin en las zonas de radiaciones, de mesas de
trabajo y de desechos radiactivos.
Marcar los recipientes de materiales radiactivos con el smbolo apropiado,
anotando tambin la identidad del radionclido, su actividad y la fecha del
anlisis.
Utilizar medidores de la radiacin para vigilar las zonas de trabajo, la ropa
protectora y las manos una vez terminado el trabajo.
Utilizar para el transporte recipientes debidamente blindados.
3. Zona de desechos radiactivos
Retirar con frecuencia los desechos radiactivos de la zona de trabajo.
4. Registros y respuesta de emergencia
Mantener registros apropiados del uso y la eliminacin de material radiactivo.
Repasar los registros dosimtricos para ver si hay materiales que superan los
lmites de dosis.
18. OTROS PELIGROS EN EL LABORATORIO
125
Figura 12. Smbolo interna-
cional de peligro
de irradiacin
Elaborar y poner en prctica peridicamente planes de respuesta de
emergencia.
En caso de emergencia, prestar ayuda en primer lugar a las personas heridas.
Limpiar concienzudamente las zonas contaminadas.
Pedir asistencia a la ocina de seguridad, si existe.
Redactar y mantener informes sobre los incidentes.
126
PARTE VII
Organizacin y formacin en
materia de seguridad
19. El funcionario de bioseguridad
y el comit de bioseguridad
129
Es fundamental que cada servicio de laboratorio cuente con una poltica integral de
seguridad, un manual de seguridad y programas de apoyo para su aplicacin. La
responsabilidad de todo ello incumbe normalmente al director o jefe del instituto o
laboratorio de que se trate, quien puede delegar ciertas funciones en un funcionario
de bioseguridad o en otros especialistas apropiados.
La seguridad de laboratorio incumbe asimismo a todos los supervisores y emplea-
dos del laboratorio; cada empleado deber ser responsable de su propia seguridad y
de la de sus colegas. Se espera de los empleados que lleven a cabo su trabajo en condi-
ciones de seguridad y comuniquen a sus supervisores cualesquiera actos, condiciones
o incidentes que atenten contra la seguridad. Conviene que personal interno o externo
realice evaluaciones peridicas de la seguridad.
Funcionario de bioseguridad
Siempre que sea posible se designar un funcionario de bioseguridad cuya misin con-
sistir en cerciorarse de que en todo el laboratorio se apliquen los planes y programas
de bioseguridad. Ese funcionario desempear esas funciones en nombre del director
del instituto o laboratorio. En las instituciones pequeas, el funcionario de biose-
guridad puede ser un microbilogo o un tcnico, miembro del personal, que se
encargue a tiempo parcial de las funciones de seguridad. Sea cual sea el grado de
participacin en las labores de bioseguridad, la persona designada deber poseer la
competencia profesional necesaria para sugerir, revisar y aprobar actividades concre-
tas que sigan los procedimientos apropiados de contencin biolgica y bioseguridad.
El funcionario de bioseguridad aplicar las normas, los reglamentos y las directrices
nacionales e internacionales pertinentes, adems de ayudar al laboratorio a elaborar
procedimientos normalizados de operacin. La persona designada deber tener for-
macin tcnica en microbiologa y bioqumica, as como en ciencias fsicas y biol-
gicas bsicas. Tambin es muy conveniente que tenga conocimiento de las prcticas
clnicas y de laboratorio y de la seguridad en esos entornos, incluido el equipo de con-
tencin, as como de los principios de construccin tcnica relacionados con el diseo,
el funcionamiento y el mantenimiento de las instalaciones. Tambin debe tener
capacidad para comunicarse de manera ecaz con el personal administrativo, tcnico
y de apoyo.
Entre las actividades del funcionario de bioseguridad deben gurar las siguientes:
1. Atender consultas sobre proteccin biolgica, bioseguridad y cumplimiento de las
condiciones tcnicas.
2. Realizar auditoras internas peridicas en materia de bioseguridad, en particular
de los mtodos, procedimientos y protocolos tcnicos, los agentes biolgicos, el
material y el equipo.
3. Examinar las infracciones de los protocolos o los procedimientos de bioseguridad
con las personas apropiadas.
4. Vericar que todo el personal ha recibido la capacitacin apropiada en materia de
bioseguridad.
5. Impartir formacin continua en materia de bioseguridad.
6. Investigar incidentes que entraen la posible fuga de material potencialmente
infeccioso o txico, y comunicar los resultados y las recomendaciones al director
del laboratorio y al comit de bioseguridad.
7. Coordinar con el personal mdico la atencin a posibles infecciones adquiridas en
el laboratorio.
8. Asegurar una descontaminacin apropiada tras los derrames u otros incidentes
con materiales infecciosos.
9. Garantizar la correcta manipulacin y eliminacin de los desechos.
10. Velar por una descontaminacin apropiada de cualquier aparato antes de su
reparacin o revisin.
11. Conocer las actitudes de la comunidad en relacin con consideraciones sanitarias
y ambientales.
12. Establecer procedimientos apropiados para la importacin y exportacin de mate-
rial patgeno por el laboratorio, de acuerdo con la reglamentacin nacional.
13. Revisar los aspectos de bioseguridad de todos los planes, protocolos y proce-
dimientos de operacin para el trabajo de investigacin con agentes infecciosos
antes de la puesta en prctica de esas actividades.
14. Instituir un sistema para hacer frente a las emergencias.
Comit de bioseguridad
Debe constituirse un comit de bioseguridad encargado de formular las polticas y
elaborar los cdigos de prcticas de la institucin en materia de bioseguridad. Ese
comit tambin examinar los protocolos de investigacin para el trabajo con agentes
infecciosos, animales, ADN recombinante y material genticamente modicado. Otras
funciones del comit pueden ser la evaluacin de riesgos, la formulacin de nuevas
polticas de seguridad y la solucin de controversias sobre cuestiones relativas a la
seguridad.
La composicin del comit de bioseguridad debe reejar las distintas esferas
ocupacionales de la organizacin, as como su experiencia cientca. La composicin
de un comit de bioseguridad bsico puede incluir a los siguientes especialistas:
130
1. Funcionario(s) de bioseguridad
2. Personal cientco
3. Personal mdico
4. Veterinarios (si se trabaja con animales)
5. Representantes del personal tcnico
6. Representantes de la direccin del laboratorio.
El comit de bioseguridad debe recurrir al asesoramiento de distintos especialistas en
seguridad y funcionarios de otros departamentos (proteccin radiolgica, seguridad
industrial, prevencin de incendios, etc.). A veces puede ser necesario solicitar aseso-
ramiento a expertos independientes en distintos campos anes, as como a las autori-
dades locales y a los organismos nacionales de reglamentacin. Los miembros de la
comunidad tambin pueden ser de ayuda si se trata de protocolos particularmente
polmicos o delicados.
19. EI FUNCIONARIO DE BIOSEGURIDAD Y EL COMIT DE BIOSEGURIDAD
131
132
20. Reglas de seguridad para el
personal de apoyo
El buen funcionamiento y la seguridad de un laboratorio dependen en gran medida
del personal auxiliar, por lo que es indispensable que ese personal est correctamente
capacitado en materia de seguridad.
Mecnicos y personal de mantenimiento del edicio
Este personal, dedicado al mantenimiento y reparacin de la estructura, las instala-
ciones y el equipo, debe tener algunos conocimientos sobre el tipo de trabajo que se
realiza en el laboratorio, as como de las normas y los procedimientos en materia de
seguridad. Las pruebas a las que hay que someter el equipo despus de las revisiones,
como la vericacin de la eciencia de las CSB tras la instalacin de nuevos ltros,
debe ser realizada por el funcionario de bioseguridad o efectuarse bajo la supervisin
de ste.
Los laboratorios o instituciones que no cuenten con servicios tcnicos de mante-
nimiento internos deben entablar buenas relaciones con los proveedores locales de ser-
vicios para que se familiaricen con el equipo y el trabajo que se hace en el laboratorio.
Los mecnicos del personal de mantenimiento solamente deben acceder a los
laboratorios de los niveles de bioseguridad 3 y 4 con la aprobacin y la supervisin
del funcionario de bioseguridad o del supervisor del laboratorio.
Personal de limpieza
Los laboratorios de los niveles de bioseguridad 3 y 4 deben ser limpiados por el per-
sonal del laboratorio. El personal de limpieza slo debe entrar en los laboratorios de
esos niveles de bioseguridad con la aprobacin y bajo la supervisin del funcionario
de bioseguridad o del supervisor del laboratorio.
133
21. Programas de capacitacin
Para que el personal, tanto tcnico como auxiliar, tenga siempre presentes las normas
en materia de seguridad es imprescindible organizar un programa de formacin
continua en el trabajo. Los supervisores del laboratorio, asistidos por el funcionario
de bioseguridad y otro personal conexo, desempean la funcin clave en esta labor de
formacin. La ecacia de la capacitacin en materia de bioseguridad, y desde luego
todo tipo de capacitacin sobre seguridad y salud, depende del compromiso del per-
sonal directivo, la motivacin, la capacitacin profesional inicial, la buena comuni-
cacin y, por ltimo, las metas y los objetivos de la organizacin. A continuacin se
enumeran algunos de los elementos fundamentales de un programa ecaz de capa-
citacin en bioseguridad:
1. Evaluacin de las necesidades. Este proceso incluye la denicin de las tareas, el
orden de importancia (frecuencia, carcter crtico, complejidad) y los pormenores
de los pasos necesarios para realizarlas.
2. Establecimiento de los objetivos de la capacitacin. Se trata de los compor-
tamientos observables que el personal capacitado debe demostrar durante el
trabajo, despus de la capacitacin. Los objetivos pueden reconocer las condi-
ciones en las que se realizan algunas actividades o comportamientos y el nivel
necesario de competencia.
3. Especicacin del contenido y los medios para la capacitacin. El contenido son
los conocimientos o las tcnicas que debe dominar el alumno para poder cumplir
los objetivos de comportamiento. Los encargados de denir el contenido del
programa de capacitacin en bioseguridad suelen ser quienes mejor conocen el
trabajo y sus exigencias. Tambin pueden usarse otros mtodos, como los basados
en los resultados de ejercicios de solucin de problemas o en el diseo de medidas
de aprendizaje para corregir errores cometidos al aplicar una nueva capacidad. No
est claro que un mtodo de enseanza (charlas, instruccin televisada, instruc-
cin por ordenador, vdeos interactivos, entre otros) sea superior a otros; en gran
medida depende de factores como las necesidades de capacitacin concretas o la
composicin del grupo de alumnos, entre otros.
4. Consideracin de las diferencias individuales de aprendizaje. Una capacitacin
ecaz debe tener en cuenta las caractersticas o los atributos de los distintos
alumnos. Las personas y los grupos pueden diferir en sus aptitudes, su grado de
instruccin y cultura, su manejo de la expresin verbal y su nivel de conocimien-
tos antes de la capacitacin. El criterio que se aplique puede depender de la forma
en que los alumnos ven el programa de capacitacin en lo que atae a la mejora
de su rendimiento en el trabajo o su seguridad personal. Algunos alumnos tienen
ms capacidad para el aprendizaje visual o de carcter prctico; otros aprenden
mejor a partir de material impreso. Tambin hay que tener en cuenta las posibles
necesidades especiales de algunos alumnos, por ejemplo por si fuera necesario
adaptar los cursos para los que tienen problemas de audicin. Adems de tener
presentes todos esos elementos, se recomienda que los encargados de elaborar un
programa de capacitacin en seguridad se familiaricen con los principios de la
enseanza de adultos.
5. Condiciones particulares del aprendizaje. El hecho docente (curso de capa-
citacin, cinta de vdeo, material impreso, entre otros) no debe entrar en conicto,
inhibir o no guardar relacin alguna con el dominio de la capacidad o el tema que
se est enseando. Por ejemplo, si el propsito de la instruccin es desarrollar la
capacidad para resolver problemas, el mtodo de enseanza debe hacer hincapi en
los criterios de pensamiento/razonamiento ms que en la memorizacin mecnica.
La instruccin proporcionada debe exigir un comportamiento productivo o una
respuesta apropiada (positiva/precisa/creble). Adems, cuando la capacitacin da
oportunidades de prctica en condiciones anlogas a las del trabajo, se favorece la
transferencia de la capacidad adquirida a las condiciones de trabajo reales.
6. Evaluacin de la capacitacin. Proporciona informacin que ayuda a determinar
si la instruccin ha tenido el efecto deseado. En general adopta cuatro formas:
Medicin de la reaccin de los alumnos a la instruccin ofrecida
Medicin de lo memorizado por los alumnos o de los resultados de los
alumnos
Evaluacin del cambio de comportamiento en el trabajo
Medicin de resultados tangibles en relacin con los objetivos o las metas de
la organizacin.
La evaluacin ms completa de una actividad de capacitacin es la que mide cada
una de las cuatro esferas. El mtodo menos eciente de evaluacin es el que se
limita a examinar las reacciones de los alumnos a la capacitacin, pues ello puede
guardar poca relacin con lo realmente aprendido, y no debe utilizarse como nica
medida de la ecacia de la capacitacin.
7. Revisinde la capacitacin. Las evaluaciones de la capacitacin raras veces indican
que un programa de capacitacin sea un xito o un fracaso completo, ya que se uti-
lizan mltiples criterios para medir los resultados. En general, los datos revelan una
mejor comprensin, retencin o aplicacin de algunas partes del material del curso
en comparacin con otras. Las variaciones o las deciencias en los conocimientos
o las competencias que se pretendan impartir con la capacitacin pueden reejar
la necesidad de dedicar ms tiempo a la capacitacin, de utilizar otras tcnicas de
instruccin o de recurrir a instructores mejor preparados.
La OMS dispone de varios mdulos de capacitacin en seguridad microbiolgica.
134
PARTE VIII
Lista de comprobacin
de la seguridad
22. Lista de comprobacin
de la seguridad
137
La presente lista de comprobacin tiene por objeto facilitar las evaluaciones de la
seguridad microbiolgica y el estado de seguridad de los laboratorios biomdicos.
Locales del laboratorio
1. Se han tenido en cuenta las directrices de puesta en servicio y certicacin en la
construccin de los locales o las evaluaciones posteriores a la construccin?
2. Cumplen las instalaciones los requisitos nacionales y locales en materia de
construccin, incluidos si es necesario los relativos a precauciones en caso de
desastres naturales?
3. Estn en general las instalaciones ordenadas, libres de material innecesario, y sin
obstculos?
4. Estn limpias las instalaciones?
5. Hay algn defecto estructural en los suelos?
6. Son los suelos y las escaleras uniformes y antideslizantes?
7. Es el espacio de trabajo suciente para realizar con seguridad todas las
operaciones?
8. Son sucientes los espacios de paso y los pasillos para el movimiento de personas
y de equipo voluminoso?
9. Estn en buen estado las mesas, el mobiliario y los accesorios?
10. Son resistentes las supercies de las mesas a los disolventes y a las sustancias
qumicas corrosivas?
11. Hay un lavabo en cada sala del laboratorio?
12. Estn construidos y mantenidos los locales de modo que se impida la entrada y
la presencia de roedores y artrpodos?
13. Estn recubiertas de material aislante o protegidas todas las tuberas no empo-
tradas de vapor o agua caliente para proteger al personal?
14. Hay algn medio independiente de suministro de energa en caso de fallo del
suministro elctrico?
15. Puede restringirse el acceso a las zonas de laboratorio al personal autorizado?
16. Se ha efectuado una evaluacin del riesgo para asegurar que se dispone del equipo
y las instalaciones apropiadas para el trabajo que se va a realizar?
Locales de almacenamiento
1. Se encuentran los locales de almacenamiento, estanteras, etc. dispuestos de modo
que el material no pueda resbalar, aplastarse o caer?
2. Se encuentran los locales de almacenamiento libres de material y objetos acu-
mulados y no deseados que puedan provocar cadas, incendiarse y albergar
roedores e insectos?
3. Pueden cerrarse con llave los frigorcos y las zonas de almacenamiento?
Instalaciones de saneamiento y destinadas al personal
1. Se mantiene limpio, ordenado y en buen estado de higiene el conjunto de los locales?
2. Se dispone de agua potable?
3. Se dispone de retretes (WC) limpios y apropiados y de lavabos para empleados
y empleadas?
4. Se dispone de agua caliente y fra, jabn y toallas?
5. Existen vestuarios separados para empleados y empleadas?
6. Hay sitio (por ejemplo, taquillas) para la ropa de calle de los miembros del personal?
7. Hay una sala donde el personal pueda comer o descansar?
8. Es tolerable el nivel de ruido?
9. Est bien organizada la recogida y eliminacin de basuras domsticas generales?
Calefaccin y ventilacin
1. Hay una temperatura de trabajo agradable?
2. Estn provistas de persianas las ventanas expuestas de lleno a la luz solar?
3. Es suciente la ventilacin, por ejemplo un mnimo de seis cambios de
aire por hora, especialmente en las salas que tienen ventilacin mecnica?
4. Est equipado el sistema de ventilacin con ltros HEPA?
5. Diculta la ventilacin mecnica el ujo de aire dentro y alrededor de las CSB y
en los extractores de humos?
Alumbrado
1. Es suciente la iluminacin general (por ejemplo, 300400lux)?
2. Estn equipadas las mesas de trabajo con iluminacin (local) adecuada para las
tareas realizadas?
3. Estn todas las zonas bien iluminadas, sin rincones oscuros o mal iluminados en
los locales y pasillos?
4. Hay lmparas uorescentes paralelas a las mesas de trabajo?
5. Est equilibrado el color en las lmparas uorescentes?
Servicios
1. Est cada sala del laboratorio provista de sucientes sumideros y tomas de agua,
electricidad y gas para trabajar con seguridad?
138
2. Existe un programa apropiado de inspeccin y mantenimiento de fusibles,
bombillas, cables, tuberas y otros elementos?
3. Se corrigen las deciencias en un tiempo razonable?
4. Se dispone de servicios internos de reparacin y mantenimiento, con mecnicos
y trabajadores capacitados que tambin tengan algn conocimiento acerca del tipo
de trabajo que se realiza en el laboratorio?
5. Se controla y documenta el acceso del personal tcnico y de mantenimiento a las
diversas zonas del laboratorio?
6. Si no se dispone de servicios internos de reparacin y mantenimiento, se ha
establecido contacto con mecnicos y constructores locales y se los ha familia-
rizado con el equipo y el trabajo que se realiza en el laboratorio?
7. Se dispone de servicios de limpieza?
8. Se controla y documenta el acceso del personal de limpieza a las diversas zonas
del laboratorio?
9. Se dispone de servicios de tecnologa de la informacin seguros?
Bioproteccin en el laboratorio
1. Se ha llevado a cabo una evaluacin cualitativa del riesgo para denir los riesgos
contra los que debe proteger un sistema de bioproteccin?
2. Se han denido los parmetros relativos al riesgo aceptable y la planicacin de
la respuesta ante incidencias?
3. Se cierra de forma segura todo el edicio cuando no est ocupado?
4. Son las puertas y ventanas a prueba de rotura?
5. Estn cerrados con llave los locales que contienen materiales peligrosos y equipo
costoso cuando no estn ocupados?
6. Se controla y documenta debidamente el acceso a esos locales, equipo y
materiales?
Prevencin de incendios
1. Existe un sistema de alarma para casos de incendio?
2. Funcionan debidamente las puertas cortafuegos?
3. Funciona bien el sistema de deteccin de incendios y se prueba con regularidad?
4. Estn accesibles los puntos de alarma de incendios?
5. Estn todas las salidas iluminadas y convenientemente sealizadas?
6. Est sealizado el acceso a las salidas en todos los casos en que stas no son
inmediatamente visibles?
7. Se encuentran todas las salidas expeditas, libres de decoraciones, muebles o mate-
rial de trabajo, y sin cerrar cuando el edicio est ocupado?
8. Se han dispuesto los accesos a la salida de manera que no sea necesario atravesar
ninguna zona peligrosa para escapar?
9. Conducen todas las salidas a un espacio abierto?
22. LISTA DE COMPROBACIN DE LA SEGURIDAD
139
10. Se encuentran los corredores, pasillos y zonas de circulacin expeditos y libres de
cualquier obstculo que pueda dicultar el desplazamiento del personal o de
material de extincin de incendios?
11. Se encuentran todos los dispositivos y material de lucha contra incendios iden-
ticados fcilmente por un color especial?
12. Estn completamente cargados y en estado de funcionamiento los extintores de
incendios porttiles y se encuentran siempre colocados en los lugares designados?
13. Estn equipados con extintores o mantas contra incendios todos los locales del
laboratorio expuestos a incendios para un caso de emergencia?
14. Si se utilizan en cualquier local lquidos y gases inamables, es suciente la
ventilacin mecnica para expulsar los vapores sin dejar que alcancen una con-
centracin peligrosa?
15. Est adiestrado el personal para responder en caso de emergencia por un
incendio?
Almacenamiento de lquidos inamables
1. Est el local para almacenar lquidos inamables a granel separado del edicio
principal?
2. Est claramente indicado como zona de riesgo de incendios?
3. Cuenta ese local con un sistema de ventilacin por gravedad o un sistema
mecnico de evacuacin del aire que sea distinto del sistema del edicio
principal?
4. Se encuentran los interruptores para el alumbrado cerrados hermticamente o
colocados fuera del edicio?
5. Estn cerrados hermticamente los dispositivos de alumbrado colocados en el
interior a n de evitar la inamacin de los vapores provocada por chispas?
6. Se almacenan los lquidos inamables en recipientes adecuados y ventilados,
construidos con materiales no combustibles?
7. Est correctamente descrito el contenido de todos los recipientes en las
etiquetas?
8. Se dispone de extintores apropiados o mantas contra incendios colocados fuera
del almacn de lquidos inamables, pero en sus proximidades?
9. Hay carteles de prohibido fumar colocados de modo destacado dentro y fuera
del almacn de lquidos inamables?
10. Existen slo cantidades mnimas de sustancias inamables almacenadas en los
locales del laboratorio?
11. Se utilizan armarios bien construidos para guardar los productos inamables?
12. Estn esos armarios debidamente rotulados con la mencin Lquidos inam-
ables riesgo de incendio?
13. Est adiestrado el personal para utilizar y transportar correctamente los lquidos
inamables?
140
Gases comprimidos y licuados
1. Est el contenido de cada recipiente porttil de gas marcado de forma legible y
con el debido cdigo de color?
2. Se comprueban regularmente las vlvulas de presin alta y reduccin de las bom-
bonas de gas comprimido?
3. Se revisan regularmente las vlvulas de reduccin?
4. Se conectan con un dispositivo de despresurizacin las bombonas de gas durante
su uso?
5. Estn todas las bombonas tapadas cuando no se usan o cuando se transportan?
6. Estn sujetas todas las bombonas de gas comprimido de manera que no se
puedan caer, en particular en caso de catstrofe natural?
7. Estn las bombonas y los depsitos de gas de petrleo licuados (GLP) separados
de las fuentes de calor?
8. Est debidamente adiestrado el personal para utilizar y transportar gases com-
primidos y licuados?
Peligros elctricos
1. Se aplican las normas nacionales del cdigo de seguridad elctrica en todas las
instalaciones elctricas nuevas y en todas las reparaciones, modicaciones o susti-
tuciones, as como en las operaciones de mantenimiento?
2. Se utilizan cables de tres hilos, es decir con toma de tierra, en toda la instalacin
elctrica interior?
3. Estn todos los circuitos del laboratorio equipados con disyuntores e interrup-
tores por fallo de la toma de tierra?
4. Estn aprobados todos los aparatos elctricos por el laboratorio de ensayos?
5. Son los cables exibles de conexin de todo el equipo lo ms cortos posible y se
hallan en buen estado, sin desgastes, daos ni empalmes?
6. Se utilizan siempre tomas de corriente de un solo enchufe en vez de tomas mlti-
ples (no hay que emplear adaptadores)?
Proteccin personal
1. Se facilita ropa protectora apropiada a todo el personal en las tareas habituales
(por ejemplo, batas, monos, delantales, guantes)?
2. Se facilita proteccin adicional para trabajar con sustancias qumicas peligrosas
y sustancias radiactivas y carcingenas (por ejemplo, delantales y guantes de goma
para las sustancias qumicas y para recoger los derrames, o guantes resistentes al
calor para descargar autoclaves y estufas)?
3. Se facilitan gafas y viseras de seguridad?
4. Existen medios para el lavado de los ojos?
5. Hay duchas de emergencia?
6. Se ajusta la proteccin contra las radiaciones a las normas nacionales e interna-
cionales, incluido el suministro de dosmetros?
141
7. Se dispone de mscaras respiratorias limpias, desinfectadas y comprobadas
regularmente, y almacenadas en buen estado de limpieza e higiene?
8. Se suministran ltros apropiados para los tipos correctos de mscaras respirato-
rias, por ejemplo ltros HEPA para microorganismos, y ltros apropiados para
gases o partculas?
9. Se comprueba el ajuste individual de cada mscara respiratoria?
Salud y seguridad del personal
1. Existe un servicio de salud ocupacional?
2. Existen botiquines de primeros auxilios colocados en lugares estratgicos?
3. Se dispone de socorristas capacitados para prestar primeros auxilios?
4. Estn esos socorristas capacitados para ocuparse de emergencias tpicas del
laboratorio, como el contacto con sustancias qumicas corrosivas, o la ingestin
accidental de venenos y material infeccioso?
5. Est instruido el personal que no trabaja en el laboratorio, por ejemplo el per-
sonal de limpieza o el personal administrativo, respecto de los riesgos posibles del
laboratorio y del material que en l se manipula?
6. Se han colocado de forma destacada avisos que den informacin sucinta sobre la
localizacin de los primeros auxilios, los nmeros de telfono de los servicios de
emergencia, etc.?
7. Se ha advertido a las mujeres en edad fecunda de las consecuencias de trabajar
con ciertos microorganismos, agentes carcingenos, mutgenos y teratgenos?
8. Se ha indicado a las mujeres en edad fecunda que, si estn embarazadas o tienen
sospechas de estarlo, deben informar al miembro correspondiente del personal
mdico/cientco de modo que se establezcan otras disposiciones de trabajo para
ellas en caso necesario?
9. Existe un programa de inmunizacin apropiado para el trabajo que se hace en el
laboratorio?
10. Existen pruebas cutneas y/o instalaciones radiolgicas para el personal que
trabaja con material tuberculoso u otro material que exija esos medios?
11. Se mantienen convenientemente los registros de enfermedades y accidentes?
12. Se utilizan carteles de advertencia y prevencin de accidentes para reducir al
mnimo los riesgos laborales?
13. Se adiestra al personal para que siga las prcticas apropiadas en materia de
bioseguridad?
14. Se alienta al personal del laboratorio para que notique las posibles exposiciones?
1. Posee todo el material un certicado de que es seguro para el uso?
2. Se dispone de procedimientos para descontaminar el material antes de las opera-
ciones de mantenimiento?
3. Se comprueban y revisan regularmente las CSB y los extractores de humos?
142
4. Se inspeccionan con regularidad las autoclaves y otros recipientes presurizados?
5. Se inspeccionan con regularidad los cestillos y rotores de centrifugadora?
6. Se cambian peridicamente los ltros HEPA?
7. Se utilizan pipetas en lugar de agujas hipodrmicas?
8. Se desecha sistemticamente, sin volverla a utilizar, la cristalera agrietada o
astillada?
9. Existen recipientes seguros para la cristalera rota?
10. Se utiliza plstico en lugar de vidrio siempre que es posible?
11. Estn disponibles y en uso recipientes de eliminacin de objetos punzantes y
cortantes?
Material infeccioso
1. Se reciben todas las muestras en condiciones de seguridad?
2. Se mantienen registros de los materiales recibidos?
3. Se desembalan las muestras dentro de la CSB, con cuidado y prestando atencin
a posibles roturas y escapes?
4. Se utilizan guantes y otras prendas de proteccin para desempaquetar las
muestras?
5. Se adiestra al personal para enviar las sustancias infecciosas de acuerdo con las
normas nacionales o internacionales vigentes?
6. Se mantienen limpias y en orden las mesas de trabajo?
7. Se retira diariamente, o con ms frecuencia, y en condiciones de seguridad, el
material infeccioso desechado?
8. Conocen todos los miembros del personal los procedimientos para tratar roturas
y derrames de cultivos y material infeccioso?
9. Se comprueba el rendimiento de los esterilizadores mediante indicadores qumi-
cos, fsicos y biolgicos apropiados?
10. Existe algn procedimiento para descontaminar peridicamente las
centrifugadoras?
11. Se dispone de cestillos de cierre hermtico para las centrifugadoras?
12. Se utilizan correctamente los desinfectantes apropiados?
13. Se da capacitacin especial al personal que trabaja en los laboratorios de con-
tencin nivel de bioseguridad 3y los laboratorios de contencin mxima nivel
de bioseguridad 4?
Sustancias qumicas y radiactivas
1. Estn efectivamente separadas las sustancias qumicas incompatibles cuando se
almacenan o se manipulan?
2. Estn correctamente etiquetadas con nombres y advertencias todas las sustancias
qumicas?
3. Se encuentran convenientemente destacados carteles de advertencia sobre el
riesgo qumico?
143
4. Se dispone de estuches especiales para la eliminacin de derrames?
5. Est capacitado el personal para tratar los derrames?
6. Estn almacenadas de modo correcto y seguro todas las sustancias inamables en
cantidad mnima en armarios aprobados?
7. Se dispone de carretillas para el transporte de bombonas?
8. Se dispone de un funcionario de proteccin radiolgica o de un manual de
referencia apropiado que se puedan consultar?
9. Est debidamente adiestrado el personal para trabajar de forma segura con
material radiactivo?
10. Se mantienen registros correctos de las existencias y el uso de sustancias
radiactivas?
11. Existen pantallas contra la radiactividad?
12. Se vigilan las exposiciones personales a la radiacin?
144
PARTE IX
Referencias, anexos
e ndice alfabtico
Referencias
147
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ADR applicable as from 1 January 2003. New York and Geneva, United
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51. Lewis RJ. Saxs dangerous properties of industrial materials, 10th ed. Toronto, John
Wiley and Sons, 1999.
150
ANEXO 1
Primeros auxilios
151
1
Garner JS, Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Guideline for isolation precautions
in hospitals. American Journal of Infection Control, 1996, 24:2452, (http://www.cdc.gov/ncidod/hip/
isolat/isolat.htm).
Los primeros auxilios consisten en la aplicacin experta de principios aceptados de
tratamiento mdico en el momento y el lugar en que se produce un accidente. Es el
mtodo aprobado para tratar a la vctima de un accidente hasta que se la pueda poner
en manos de un mdico para el tratamiento denitivo de la lesin.
El equipo mnimo de primeros auxilios consta de un botiqun, ropa protectora y
equipo de seguridad para la persona que presta los primeros auxilios, y equipo para
la irrigacin ocular.
El botiqun de primeros auxilios
El maletn propiamente dicho debe estar hecho de un material que mantenga el con-
tenido sin polvo ni humedad. Debe guardarse en un lugar bien visible y ser fcilmente
reconocible. Por convenio internacional, el botiqun de primeros auxilios se identica
mediante una cruz blanca sobre fondo verde.
El botiqun de primeros auxilios debe contener lo siguiente:
1. Hoja de instrucciones con orientaciones generales
2. Apsitos estriles adhesivos, empaquetados individualmente y de distintos
tamaos
3. Parches oculares estriles con cintas
4. Vendas triangulares
5. Compresas estriles para heridas
6. Imperdibles
7. Una seleccin de apsitos estriles no medicados
8. Un manual de primeros auxilios, por ejemplo publicado por la Cruz Roja
Internacional.
El equipo de proteccin de la persona que presta los primeros auxilios incluye lo
siguiente:
1. Una gasa para la boca para realizar la respiracin boca a boca.
2. Guantes y otras protecciones de barrera contra la exposicin a la sangre.
1
3. Un estuche de limpieza para los derrames de sangre (vase el captulo 14 del
manual).
Tambin debe disponerse de material para la irrigacin ocular; el personal estar
debidamente adiestrado en su utilizacin.
ANEXO 2
Inmunizacin del personal
152
Los riesgos que entraa trabajar con ciertos agentes deben explicarse de forma
completa a cada investigador. Antes de comenzar a utilizar posibles vacunas o agentes
teraputicos (por ejemplo, antibiticos) en caso de exposicin, deber evaluarse su
disponibilidad local, si estn aprobados y su utilidad. Algunos trabajadores pueden
haber adquirido inmunidad en una vacunacin o infeccin anteriores.
Si una vacuna o un toxoide particular estn aprobados y disponibles localmente,
deben ofrecerse despus de evaluar el riesgo de una posible exposicin y de proceder
a una evaluacin clnica de la persona afectada.
Tambin deben existir instalaciones para la gestin de casos clnicos particulares
despus de una infeccin accidental.
ANEXO 3
Centros colaboradores de la OMS en
materia de bioseguridad
153
Puede obtenerse informacin sobre la disponibilidad de cursos de formacin y
material didctico y auxiliar escribiendo a cualquiera de los siguientes centros:
Programa de Bioseguridad. Departamento de Enfermedades Transmisibles
(Vigilancia y Respuesta), Organizacin Mundial de la Salud. 20 Avenue Appia, 1211
Ginebra 27 (Suiza) (http://www.who.int/csr/).
Centro Colaborador de la OMS sobre Seguridad Biolgica. Instituto Sueco de
Lucha contra las Enfermedades Infecciosas, Nobels Vg 18, S-171 82 Solna (Suecia).
(http://www.smittskyddsinstitutet.se/English/english.htm).
Centro Colaborador de la OMS sobre Tecnologa de Bioseguridad y Servicios
Consultivos, Ocina de Seguridad en el Laboratorio. Health Canada.
100 Colonnade Road, Loc.: 6201A, Ottawa, Ontario K1A 0K9 (Canad)
(http://www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl).
Centro Colaborador de la OMS sobre Capacitacin y Programas de Bioseguridad
Aplicada. Ocina de Salud y Seguridad, Centros para el Control y la Prevencin de
Enfermedades. 1600 Clifton Road, Mailstop F05, Atlanta, GA 30333 (Estados
Unidos de Amrica) (http://www.cdc.gov/).
Centro Colaborador de la OMS sobre Programas de Bioseguridad Aplicada. Depar-
tamento de Seguridad y Salud Ocupacional, Ocina de Servicios de Investigacin,
Institutos Nacionales de la Salud. 13/3K04 13 South Drive MSC 5760, Bethesda,
MD 20892-5760 (Estados Unidos de Amrica) (http://www.nih.gov/).
Centro Colaborador de la OMS sobre Bioseguridad. Laboratorio de Referencia de
Victoria para las Enfermedades Infecciosas. 10 Wreckyn St., Nth Melbourne,
Victoria 3051 (Australia). Direccin postal: Locked Bag 815, PO Carlton Sth,
Victoria 3053 (Australia) (http://www.vidrl.org.au/).
ANEXO 4
Seguridad del material
154
Cuadro A4-1. Material y operaciones que pueden entraar riesgos
ELEMENTO DEL RIESGO CMO ELIMINAR O REDUCIR EL RIESGO
EQUIPO
Agujas Inoculacin No tapar de nuevo ni sujetar las agujas.
hipodrmicas accidental, Utilizar agujas con ajuste de bayoneta para evitar que
aerosol o la aguja se separe de la jeringuilla o utilizar un tipo
derrame de jeringuilla desechable en la que la aguja forme
parte integrante de la unidad de la jeringuilla.
Utilizar tcnicas correctas de laboratorio; por
ejemplo:
llenar con cuidado la jeringuilla para reducir al
mnimo la formacin de burbujas y espuma en el
material que se vaya a inyectar
evitar el uso de jeringuillas para mezclar lquidos
infecciosos; si se utilizan, asegurarse de que slo
entra la punta de la aguja en el lquido y de no
emplear excesiva fuerza
en los recipientes con tapn de caucho, envolver
aguja y tapn con un algodn empapado en un
desinfectante apropiado antes de retirar la aguja
expulsar el exceso de lquido y las burbujas de
aire de la jeringuilla sujetndola en vertical
en una torunda de algodn empapada en
desinfectante o en un frasquito lleno de
algodn.
Ciertos elementos del material de laboratorio pueden entraar riesgos microbiolgi-
cos durante su utilizacin. Otros elementos estn especcamente diseados para
evitar o reducir los riesgos biolgicos (vase el captulo 11 del manual).
Material que puede ser peligroso
En el cuadro A4-1 se enumeran el material y las operaciones que pueden crear riesgos
y se sugieren formas de eliminar o reducir esos riesgos.
Adems de los riesgos microbiolgicos, tambin es necesario prever y prevenir los
riesgos de seguridad asociados al equipo propiamente dicho. En el cuadro A4-2 se
enumeran algunas causas de accidentes.
ANEXO 4. SEGURIDAD DEL MATERIAL
155
Utilizar una CSB para todas las operaciones con
material infeccioso.
Sujetar a los animales mientras se los inocula.
Utilizar agujas romas o cnulas para inoculaciones
intranasales u orales. Utilizar una CSB.
Esterilizar el material en la autoclave despus de
usarlo y eliminarlo correctamente. Si se usan
jeringuillas desechables con aguja incorporada, no
separar las agujas antes del tratamiento en autoclave.
Centrifugadoras Aerosoles, Utilizar cestillos de cierre hermtico (de seguridad)
salpicaduras o rotores hermticos. Abrir los cestillos o rotores
y rotura una vez que se hayan depositado los aerosoles
de tubos (30 minutos) o en una CSB.
Ultracentrifu- Aerosoles, Instalar un ltro HEPA entre la
gadoras salpicaduras centrifugadora y la bomba de vaco.
y rotura de Llevar un registro de las horas de funcionamiento de
tubos cada rotor y aplicar un programa de mantenimiento
preventivo para reducir el riesgo de fallo mecnico.
Cargar y descargar los cestillos o rotores en una
CSB.
Frascos Explosin, Asegurar la integridad de la cpsula de alambre en
anaerbicos de material torno al catalizador.
dispersin
infeccioso
Desecadores Implosin, Colocar en una jaula de alambre fuerte.
dispersin de
fragmentos de
vidrio y material
infeccioso
Homogenei- Aerosoles, Utilizar y abrir el material en una cmara
zadores, fugas y de seguridad biolgica.
trituradores rotura de Utilizar modelos especiales que evitan las fugas de
de tejidos recipientes los cojinetes del rotor y las juntas tricas, o utilizar el
tipo Stomacher.
Antes de abrir la cazoleta del mezclador,
esperar 30 minutos a que se deposite la
nube de aerosol. Refrigerar para condensar
los aerosoles.
Si se utilizan trituradores manuales, sujetar
el tubo con un trozo de material absorbente.
EQUIPO
156
Desintegradores Aerosoles, Trabajar y abrir el material en una CSB o
ultrasnicos, lesiones unidad cerrada.
limpiadores auditivas, Asegurar el aislamiento para proteger contra
ultrasnicos dermatitis los sonidos subarmnicos.
Usar guantes para proteger la piel de los
efectos qumicos de los detergentes.
Dispositivos Aerosoles, Trabajar en una CSB o en un recipiente de
para remover salpicaduras contencin primaria diseado especialmente.
y agitar cultivos y derrames Utilizar frascos de cultivo resistentes con
tapn de rosca, oricios de salida protegidos
con ltros, en caso necesario, y bien sujetos.
Liolizadores Aerosoles y Utilizar juntas tricas para sellar
contaminacin perfectamente el aparato.
por contacto Utilizar ltros de aire para proteger el
directo circuito de vaco.
Utilizar un mtodo satisfactorio de
descontaminacin; por ejemplo, con
sustancias qumicas.
Disponer un colector de humedad totalmente
metlico y un condensador de vapor.
Inspeccionar cuidadosamente todos los
recipientes de vaco de vidrio para ver si
estn rayados. Utilizar slo cristalera
concebida especialmente para trabajar en
condiciones de vaco.
Baos de agua Proliferacin de Garantizar una limpieza y una desinfeccin
microorganismos. peridicas.
La azida No utilizar azida sdica para prevenir la
sdica forma proliferacin de organismos.
compuestos
explosivos con
algunos metales.
HEPA: ltracin de partculas areas de gran eciencia (del ingls High-Efciency Particulate Air). CSB:
cmara de seguridad biolgica.
EQUIPO
ANEXO 4. SEGURIDAD DEL MATERIAL
157
Cuadro A4-2. Causas comunes de accidentes relacionados con el material
ACCIDENTE CAUSA DEL ACCIDENTE FORMAS DE REDUCIR O ELIMINAR
EL RIESGO
Fallos de diseo o de construccin
Incendios elctricos Ausencia de termostato para el Cumplir las normas
en incubadoras sobrecalentamiento nacionales.
Choque elctrico Ausencia de toma de tierra apropiada
Uso indebido
Accidente de Fallos en el equilibrado de los cestillos Capacitar y supervisar al
centrifugadora en los rotores personal.
Explosin de la Uso de un gas inapropiado Capacitar y supervisar al
incubadora personal.
anaerbica
Adaptacin incorrecta
Explosin en frasco Transporte de nitrgeno lquido en Usar equipo especialmente
de vaco domstico condiciones incorrectas diseado.
Explosin en Sustancia peligrosa no almacenada en Almacenar disolventes y
refrigerador de recipiente a prueba de chispas o extractos con punto de
tipo domstico explosiones; por ejemplo, dietilter inamacin bajo slo en
con tapn de rosca no hermtico refrigeradores o armarios
a prueba de chispas/
explosiones.
Falta de mantenimiento apropiado
Fuego en fotmetro Ensamblaje incorrecto de piezas Capacitar y supervisar al
de llama durante el mantenimiento personal.
ANEXO 5
Sustancias qumicas:
peligros y precauciones
158
En el presente anexo se exponen informacin y datos bsicos sobre seguridad y
precauciones apropiadas para ciertas sustancias qumicas que normalmente se
encuentran en los laboratorios de atencin sanitaria y de investigacin. La lista no es
exhaustiva y la ausencia de determinada sustancia no signica que no sea peligrosa.
Todas las sustancias qumicas del laboratorio deben tratarse con precaucin y de
modo que la exposicin se reduzca al mnimo.
ANEXO 5. SUSTANCIAS QUMICAS: PELIGROS Y PRECAUCIONES
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202
almacenamiento
de ampollas que contengan material
infeccioso 81
sustancias qumicas 118
gases comprimidos y licuados 120, 141
locales de 138
lquidos inamables 140141
espacio del laboratorio 1214
amonaco, soluciones de 164
amnico, bicarbonato 97
ampollas que contengan materiales
infecciosas
apertura 80
almacenamiento 81
anaerbica, frascos-incubadora 155, 157
anilina 164
animalario nivel de bioseguridad (ABSL) 30
animalarios 3035
nivel de bioseguridad 1 31
niveles de contencin 30
invertebrados 34
animales
eliminacin de cadveres 32
no experimentales 11, 31
transgnicos y con genes inactivados
110111
antesala, vestbulo 22, 3233
antimicrobiano 89
antispticos 89
artrpodos 12
asas
desechables 16, 68, 69
microincineradores 68, 69, 70
seguridad en la utiilizacin 76, 77
abrasiones 86
abrigos, laboratorio 70
caros 35
acceso
animalarios 31, 32, 33
laboratorio 1011, 2223, 27
accidentes 11
relacionados con el material 157
vase tambin primeros auxilios;
lesiones; derrames
acetaldehdo 159
actico, cido 160
actico, anhdrido 160
acetileno 161
acetona 161
acetonitrilo 162
acrolena 162
ADN recombinante, tecnologa 109113
aerosoles
actividades que generan 55
cmaras de seguridad biolgica 16, 56
riesgos de pipeteo 4869
emisiones potencialmente infecciosas 86
equipo de seguridad 66
agente de puesta en servicio 3637
agitadores 69, 79
agua, abastecimiento 15, 23
agua, baos de 156
agujas hipodrmicas 11, 82, 154155
eliminacin 19
agujas hipodrmicas, accidentes causados
por 78
aire evacuado 28
alarmas 2265
alcoholes 9596
alergia, ltex 72
alimentos 11
ndice alfabtico
NDICE ALFABTICO
203
Asociacin de Aviacin Civil Internacional
(OACI) 102
Asociacin de Transporte Areo
Internacional (IATA) 102
auramina 165
autoclave 19, 9899
autoclaves 68, 9899
animalarios 32, 33
autoclaves de olla a presin calentadas
por combustible 99
desplazamiento por gravedad 99
cargar 99
prevaco 99
precauciones en el uso 100
validacin 16
azidas 118, 191
1,1-bifenil-4,4-diamina 166
bancos de trabajo de aire limpio 55
batas 7071
beber 11, 14, 32
bencidina 166
benzeno 165
bicarbonato de sodio 109
biocida 89
bioproteccin 4951
bioseguridad
gestin 12
bioproteccin en el laboratorio
49
botiqun de primeros auxilios 151
bromo 166
brotes de enfermedad de etiologa
desconocida 8
4,4-carbonoimidoilbis
(N,N-dimetilbencenamina) 165
cabinas de ujo de aire horizontal y
vertical 55
1-hidracino-2,4-dinitrobenceno 175
calcio hipoclorito 91
calefaccin, ventilacin y aire
acondicionado
sistema de 23
lista de comprobacin de la
seguridad 138
calor
desinfeccin y esterilizacin 99101
seco 98
hmedo 98
calzado 11, 21, 26, 70
cmara de extraccin total de aire 62
cmaras aislantes de material exible y
presin negativa 66, 67
conexiones de aire 6061
animalarios 32
certicacin 64
clase I 5657, 60
clase II 5660
tipo A1 5859
tipos A2 b1 y b2 59, 60
clase III 60
laboratorio 2629
descontaminacin 65, 97
aire de evacuacin 33
localizacin 23, 62
operacin y mantenimiento 63
contaminacin con prion 84
uso necesario 16, 22, 23
uso seguro 6265
seleccin 56, 62
capacitacin 133134
trabajadores de animalarios 3234
cmaras de seguridad biolgica,
uso de 65
bioproteccin 49
trabajadores de laboratorio 1718
carbonato sdico (bicarbonato sdico) 119
carbono tetracloruro 167
carbono, dixido de (slido, hielo seco) 167
catstrofes naturales 85, 87
catstrofes naturales 8588
centrfugas 7879
rotura de tubos 87
accesorios de contencin 24
uso indebido 157
centros colaboradores de la OMS en
materia de bioseguridad 153
certicacin 64
cmaras de seguridad biolgica 64
laboratorios/instalaciones 3940
ciangeno, bromuro de 168
cierres hermticos 29
204
circuito de vaco 23, 68
circuitos elctricos 122
clase III, laboratorio con CSB 27
sistema de vetilacin controlada 28
citocalasina 168
cloraminas 9293
clorhdrico, cido 169
cloro 9192, 170
compuestos que liberan 91
dixido de 93, 170
cloroformo 172
cloruro de hidrgeno 169
cobre 172
coccin 98
cdigo de prcticas
nivel de bioseguridad 1 y 2 912
comer 11, 14, 32, 7778
comit de bioseguridad 131
nivel de bioseguridad 1 1, 2, 920
animalarios 31
diseo del laboratoio 1215
formulario de encuestra sobre la
seguridad en el laboratorio
4143
vigilancia mdica y sanitaria 16
vase tambin laboratorio bsico
Comit de Expertos de las Naciones
Unidas en Transporte de
Mercancas Peligrosas
102
compuestos de amonio cuartenario 95
compuestos fenlicos 9495
congeladores 80
contencin primaria 27
contencin primaria en el nivel de
seguridad 4 27
contencin, niveles de, animalarios 30
contencin, sumideros 29
contingencia, planes de 85
cortes 86
cosmticos 11
Creutzfeldt-Jakob, enfermedad 83
crmico, cido 173
cromo VI, xido de 173
CSB-cmaras de seguridad biolgica 9
2,4 dinitrofenilhidracina 175
3,3-dimetil-(1,1-bifenil) 4,4diamina 197
delantales 7071
derrames
en cmaras de seguridad biolgica 64
sangre 82
sustancias qumicas 118119
materiales infecciosos 11, 86, 103105
descontaminacin
sangre, lquidos corporales 83
deniciones 89
euentes 11, 28
mano 98
espacios y supercies 96
materiales contaminados por priones 84
materiales de desecho 19, 23
vase tambin limpieza; desinfeccin
desecadores 155
desechos 1820
animalarios 3234
descontaminacin 19, 23
eliminacin 1920, 23, 101
instalaciones para invertebrados 34
contaminacin por priones 84
radioactivos 125
desechos radiactivos 125
desinfeccin 89161
qumicas 9096
limpieza previa 8990
deniciones 8990
calor 98101
derrames 104105
manipulacin de desechos 18
vase tambin descontaminacin,
esterilizacin
desinfectantes 89, 9097
desintegrantes ultrasnicos 69, 79, 75
dietil ter 174
dietileno, dixido de 175
dietileno, xido de 196
dimetilamina 174
dimetilbenceno 200
2,4 dinitrofenilhidracina 175
dioxano 175
NDICE ALFABTICO
205
diseo, laboratorio
nivel de bioseguridad 1 y 2 1215, 16
nivel de bioseguridad 3 2123, 24
requisitos para puesta en servicio y
3638
dispersin de material infeccioso, evitar la
7677
dispositivos para remover y agitar cultivos
156
duchas 27, 33
euentes, contaminados 11, 2829
emergencias 8588
planes de contingencia 85
procedimientos de laboratorio 8788
encefalopata espongiforme transmisible
83
encuesta, seguridad en el laboratorio 39,
40
formularios 4146
envases con tapn de rosca 16, 68
Escherichia coli k12 110
esporicida 90
esterilizacin 29, 89101
limpieza previa 8990
denicin 89
calor 98101
materiales contaminados con priones
84
vase tambin descontaminacin,
desinfeccin
etanol (2-amino-etanol) 176
etanol (alcohol etlico) 9596, 176
etanolamina 176
teres 118
excreciones, precauciones normalizadas
8182
extensiones y frotis para el examen
microscpico 82
extensiones y frotis para el examen
microscpico 82
extintores de incendio 122
fenol 177
ltros
animalarios 33
cmaras de seguridad biolgica 55,
5660
contaminacin por priones 8384
ujo de aire vase aire evacuado
animalarios 3222
cmaras de seguridad biolgica
55565960
laboratorio de contencin 2122
laboratorio de contencin mxima
2627
ujo direccional 22
alarmas 22, 65
animalarios 31, 32, 33, 34
cmaras de seguridad biolgica 57,
62
nivel de bioseguridad 4 27, 29
formol 93, 97
formaldehdo 93, 97, 178
fosfrico, cido 179
fsforo, pentxido de 179
fotmetro de llamas 157
frascos con tapn de rosca 16, 68
frascos de vaco domstico 157
friegas de alcohol para las manos 9596
fumar 11, 32
fumigacin 97
funcionario de bioseguridad 18, 129130
gafas de mscara 7071
gafas de seguridad 70
garrapatas 35
gas(es)
comprimidos y licuados 120, 141
suministros para laboratorio 15
gases, transferencia 109, 110
germicidas qumicos 82, 83, 9096
germicidas qumicos 9096
glutaraldehdo 94, 180
grupos de riesgos microbiolgicos
laboratorios bsicos 9
niveles de bioseguridad 24
clasicacin 12
guantes 11, 65, 70, 7172
206
1-hidracino-2,4-dinitrobenceno 175
homogeneizadores 69, 7980, 155
iluminacin, alumbrado 133, 138
inactivados, animales 110111
incendios 20, 122
causas 122, 157
prevencin y proteccin 139
incineracin 20, 101
incineradores 33, 92
ingeniera gentica 109
ingestin de material infeccioso 86
inmunizacin del personal 152
inoculacin, accidental 7879
insectos voladores 34
inspeccin, laboratorio 3940
instalaciones de comunicacin 26
instalaciones de enfriamiento, mosquiteras
34
instalaciones de saneamiento 138
instalaciones para auditora 40
instalaciones, laboratorio
nivel de bioseguridad 1 y 2 1215
designaciones de bioseguridad 1
interruptores por fallo de la toma de tierra
122
invertebrados 34
isopropanol (alcohol isoproplico) 95190
jaulas
animal 32, 33
insectos voladores 35
jaulas aisladas 33
jeringuillas 11, 19
laboratorio
bioseguridad 4950
certicacin 3940
puesta en servicio 3638
instalaciones vase instalaciones de
laboratorio
locales, lista de la comprobacin de la
seguridad 137
formularios para muestras sobre la
seguridad 4146
servicios, lista de comprobacin de la
seguridad 139
tcnicas 7584
zonas de trabajo 12
director del laboratorio 12, 129
supervisor del laboratorio 12, 129
papel de capacitacin 18, 133
vase tambin laboratorio bsico,
laboratorio de contencin,
laboratorio de contencin
mxima
laboratorio bsico
niveles de bioseguridad 1 y 2 1, 920
seguridad qumica, elctrica, radiolgica
y material de seguridad 20
cdigo de prcticas 9
diseo e instalaciones 12
material 1516
formularios de seguridad en el
laboratorio 41,45
capacitacin 1718
manipulacin de desechos 1820
(nivel de bioseguridad 3) 1, 3, 2124
cdigo de prcticas 2122
diseo e instalaciones 2223, 24
material de 23
formulario para encuesta de
seguridad 46
laboratorio de contencin mxima
(nivel de bioseguridad 4) 1, 2629
diseo e instalaciones 2629
lechos de los animales 32, 33
leja (hipoclorito sdico) 9192, 194
lentes de contacto 11
lesiones
animalarios, personal de 32
procedimientos de emergencia 85
prevencin 7879
limpiadores ultrasnicos 156
limpieza
domstica 132
materiales de laboratorio 90
refrigeradores y congeladores 80
NDICE ALFABTICO
207
limpieza previa 89
liolizado, ampollas que contengan material
infeccioso para abrirlas 80
liolizadores 156
lquidos contaminantes euentes 11, 28
lquidos corporales, precauciones
normalizadas 8183
lquidos inamables, almacenamiento de
140
lista, comprobacin de la seguridad
137144
luces ultravioleta 63
lugares para descansar 14
llamas desnudas 63
manos 7071
manos, descontaminacin de las 98
manos, friegas de alcohol para las 95, 98
manos, lavado de 11, 72, 90
animalarios, personal 32
instalaciones14, 22, 3233
materiales
laboratorio bsico 1516
laboratorios de contencin 24
emergencia 88
riesgos 154157
lista 142144
materiales contaminantes
vase materiales infecciosos
materiales infecciosos
autoclave y reutilizacin 19
evitar la dispersin 76
contacto con la piel y los ojos 77
eliminacin 20, 23
ingestin 86
lista de la comprobacin de la seguridad
143
derrames 11, 86, 103105
mecheros de Bunsen 7677
mercurio 181
metanol 182
metilbenceno (tolueno) 197
mezcladores 6970
microbicida 90
microincineradoras 68, 6970
microorganismos infecciosos, vase grupo
de riesgos microbiolgicos
microscopio, extensiones y frotis para el
examen 82
mobiliario de laboratorio 14
mosquiteras a prueba de insectos 34
muestras 75
recogida de 81
recipientes de 75, 81, 104
etiquetado 81
con informacin limitada 8
apertura de los envases 75
apertura de tubos de muestras y
muestreo del contenido 82
recepcin 75
precauciones normalizadas 81
transporte 75, 81
sistema de envasado triple 103
muestras etiquetadas 81
mujeres en edad fecunda 17, 142
naftilamina 182
N-fenil-a-naftilamina 182
N-fenil-b-naftilamina 182
ninhidrina 183
nios 10
ntrico, cido 183
nitrobenceno 184
animalarios 3132
diseo del laboratorio 1215
formulario de encuesta
sobre la seguridad en el laboratorio
4344
vase tambin laboratorio bsico
animalarios 3 3233
formulario de encuesta sobre la
seguridad en el laboratorio 46
vase tambin laboratorio de contencin
animalarios 3335
vase tambin laboratorio de contencin
mxima
niveles de bioseguridad 1
animalarios (NBSA) 30
208
requisitos de las instalaciones 4
grupos de riesgo microbiolgico y 13
objetos cortantes y punzantes 19
animalarios 3233
evitar heridas 7172, 7778, 82
eliminacin de recipientes 19, 48
OGM vase organismos genticamente
modicados
organismos genticamente modicados
otras consideraciones 112
evaluacin de riesgos 112113
tipos 110112
Organizacin Mundial de la Salud (OMS)
Centros colaboradores de la OMS en
materia de bioseguridad 153
Programa de bioseguridad 26
osmio, tetrximo de 185
oxlico, cido 185
oxgeno 186
pantallas contra salpicaduras 67
paraformaldehdo 93, 97
paredes 13, 22
peligros elctricos 20, 122, 157
lista de seguridad 142
percidos 96
perclrico, cido 118, 186
perodos de garanta,
laboratorios/instalaciones 36
perxido de hidrgeno (agua oxigenada)
96, 97, 163
personal
gestin de la bioseguridad 12
temas de bioseguridad 4951
instalaciones,
lista de la comprobacin de la seguridad
138
inmunizacin 152
objetos personales/ropa 14
responsabilidad por la propia seguridad
129
apoyo 132
personal de apoyo 132
personal de mantenimiento 132
personal de mantenimiento del edicio 132
pcrico, cido/picratos 118, 187
piel,
contacto con la 77
heridas punzantes, cortes y abrasiones 86
vase tambin lesiones
pipetas 16, 76
pipeteo 76
dispositivo de 16, 68, 76
boca 11, 68
piridina 187
plasmido pUC 18, 110
plata 188
plata, nitrato de 188
poliovirus, ratones susceptibles a 111
potasio, hidrxido de 189
potasio, permanganato de 189
potasio, telurito de 190
precauciones de seguridad 15, 139140
precauciones universales 8182
prevencin de reujo 15, 23
primates, no humanos 31
primeros auxilios 15, 151
priones 8384
procedimiento de limpieza, derrames
103105
propan-2- ol (propanol) 95, 190
proteccin auditiva 122123
proteccin de la cara (viseras) 11,
7071
proteccin de los ojos 11, 7071, 77
proteccin del producto 56
puerta en servicio de
laboratorio/instalaciones
3638
puertas
animalarios 30
radiacin, smbolo de peligro de 125
radiaciones ionizantes 123126
efectos perjudiciales 123
principios de proteccin 123124
lista de comprobacin de la seguridad
142, 143
zona de mesas de trabajo 124
radiaciones, zona de 124
radionclidos
NDICE ALFABTICO
209
sistemas seguros de trabajo 124125
sustitucin 124
recipientes
rotura de 89
desechos contaminados 1920
hermticos 67
eliminacin de objetos cortantes y
punzantes 19, 68
muestras 75, 82, 103
refrigeradores 80, 81, 157
regla de las dos personas 26, 33
reglamento de transporte internacional
102103
respiradores (equipo de proteccin
respiratoria) 22, 7071
riesgo microbiolgico, evaluacin de 2, 78
animalarios 3032
organismos genticamente modicados
111113
roedores, programa de control de 12, 32
ropa y equipo de proteccin personal
7072
animalario 32, 33
cmara de seguridad biolgica 65
lista 141
laboratorio de contencin mxima 26,
27
priones 84
ropas y equipo de proteccin personal 7072
ruido 122
sangre, precauciones normalizadas 8183
selenio 191
servicios de emergencia 88
servicios de mecnicos y personal 132
signo de peligro biolgico 10, 11, 31
sistema de envasado triple 103, 104
sistemas de embalaje 103
sistemas de expresin biolgica 110
sistemas de ventilacin
57, 58, 59
trajes protectores 27
sodio, azida de 191
sodio, biselenito de 192
sodio, cianuro de 192
sodio, dicloroisocianurato de 91, 92
sodio, hidrxido de 193
sodio, hipoclorito de (cloro) 84, 9193,
194
suero, separacin de 78
sulfrico, cido 195
sulfuro de hidrgeno 195
suministro de electricidad 15, 29
supercies de trabajo
animalarios 32
laboratorio 12, 13
sustancias qumicas (peligrosas) 20,
117120
explosivas 118, 157
incompatible, reglas generales 118,
119
vas de exposicin 117
lista de comprobacin de la seguridad
137138
especcos 158201
derrames 118120
almacenamiento 117
efectos txicos 117118
sustancias qumicas explosivas 118, 157
0-tolidina 197
2,4,6-trinitrofenol (cido pcrico) 118,
187
talio, acetato de 196
tarjeta de contacto mdico 2425
tcnicas microbiolgicas apropiadas 912,
7584
techos 13, 22
tejidos
que contienen priones 8384
tetrahidrofurano 196
tetrametileno, xido 196
tolueno 197
traje protector 27
sistema de ventilacin controlada 28
transgnicas, plantas 109, 111
transgnicos, animales 110111
transporte 12, 102105
210
lista 138
laboratorio de contencin mxima 26,
27, 28
vectores vricos 110
vidrios 82
quebrados, manipulacin
86
precauciones 78, 82
vigilancia mdica y sanitaria
lista 129
2425
xileno 200
yodo 96, 201
yodforos 96
zonas de trabajo de laboratorio
12
desechos contaminados 1920, 23
reglamentacin internacional 9497
muestras 75, 8082
sistema de envasado triple 103, 104
trituradores de tejidos 80, 155
tricloroactico, cido 198
triclorocetileno 199
triclosan 94
tubos
rotura en las centrifugadoras 8788
frascos y tubos con tapn de rosca 16
ultracentrifugadoras 155
validacin de equipo 16
vectores 110
vectores de expresin 110
ventanas
animalarios 29, 33
instalaciones para invertebrados 34
ventilacin, sistemas de
animalarios 30, 31, 32

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