EMBRIOLOGA MODERNA

Charles W. Bodemer

Prefacio

EMBRIOLOGIA MODERNA fue concebida como una breve introduccin a los principios
generales de la Embriologa y una perspectiva panormica de la anatoma y fisiologa del
desarrollo. El objetivo seguido en su preparacin ha sido presentar sin adornos excesivos el
material terico y real necesario para la comprensin del desarrollo embrionario y la
apreciacin de su biologa. Intencionalmente no tiene carcter enciclopdico aun cuando el
estudiante avanzado puede encontrarlo til como una revisin actualizada de los procesos
del desarrollo.
El presente volumen se basa en la segunda (1953) edicin de Embryology del Dr. Lester G.
Barth. El libro ha sido reescrito en su totalidad para incluir los mltiples avances del
conocimiento sobre desarrollo embriolgico que han tenido lugar en los ltimos 15 aos.
Se han incluido ms de 80 nuevas fotografas y se han adaptado de Embryology muchas de
las ilustraciones. Se ha mantenido, sin embargo, la organizacin general como un tributo a
la Clara percepcin y discernimiento del Dr. Barth.
Reconozco agradecido los consejos y la asistencia ofrecida por el Dr. James D. Ebert, y las
numerosas y tiles sugerencias y la preparacin del Glosario de trminos tcnicos de la
Dra. Dorotea Rudnick. Mi reconocimiento a la Dra. Jeanne Powell como lectora y por su
inmensa contribucin en la preparacin, direccin y coordinacin del trabajo artstico. El
Sr. Russell Peterson ejecut todos los dibujos. Mi reconocimiento tambin por su
contribucin en la preparacin y correccin de manuscritos hecho por las Sras. Eileen
Harris, Mary Adams y la Srta. Deborah J. Vacca quien ayud tambin en la preparacin del
ndice. Mi felicitacin al Sr. Ian Baldwin, Jr., Srta. Holly Detgen, y personal de Holt,
Rinehart and Winston por su organizacin y eficiencia en la produccin de este libro. Final-
mente a los residentes del Chateau, mi agradecimiento por su asistencia y tolerante
comprensin.

Seattle-Washington Enero .1968

CHARLES W. BODEMER

Prlogo de la versin castellana

I
A PARTIR de A. Brachet y de su escuela, la embriologa causal es tema que apasiona a los
investigadores de Biologa Animal. En pocas recientes las hiptesis del trabajo de Jacob y
Monod abrieron amplio campo a la especulacin cientfica y, en consecuencia, a los
trabajos experimentales que de ella derivan.
Basado en los mismos criterios y apoyndose en estas hiptesis de trabajo, Ch. Bodemer
analiza en Embriologa Moderna los conocimientos actuales sobre induccin y
diferenciacin, referidos a cada captulo y a cada tema especial, discriminando los aspectos
que pueden considerarse definitivamente probados de aquellos que dan margen a nuevas
especulaciones y ensayos experimentales.
La versin castellana presenta estos temas en forma sencilla y accesible a quienes se inician
en la especialidad, sin descuidar las descripciones morfolgicas que completan el
conocimiento.
Agradezco a la Nueva Editorial Interamericana, S. A. de C. V. haberme facilitado la
posibilidad de contribuir de esta manera a la difusin de tales conocimientos entre los
estudios de habla espaola.
A la Asistente de Investigaciones, Dra. Susana I. Barberis y Secretaria Candida P. de Lpez
su valiosa colaboracin.

GUILLERMO C. LUCAS


Naturaleza y objeto de la embriologa

EMBRIOLOGA ES EL ESTUDIO del origen y desarrollo del organismo. Desde el
momento en que se forman organismos en desarrollo por la unin del vulo y del
espermatozoide, hasta su consumacin final en un adulto completamente crecido e
integrado, revelan un apasionante ciclo vital que combina una multitud de fenmenos
biolgicos bsicos. La embriologa trata de develar y clarificar los mltiples mecanismos
interrelacionados que tienen lugar para la progresin del desarrollo ordenado, desde el
huevo hasta el adulto.
Todos los estudiantes pueden apreciar la complejidad estructural de los organismos
animales. El sistema nervioso, por ejemplo, se presenta maravillosamente complicado, con
gran nmero de clulas y muchas conexiones entre ellas, formando todas un sistema
integrado. Coexistiendo con esta complejidad estructural hay una complejidad qumica y
funcional comparable, aunque menos bien comprendida. El objetivo del anlisis del
desarrollo es interpretar y comprender la derivacin de esta complejidad estructural
funcional y bioqumica a partir de una clula, el vulo fecundado o clula huevo.

Es razonable reconocer la inmensidad de esta tarea. Considrese en primer trmino el
aumento de tamao durante el desarrollo. El huevo humano tiene aproximadamente un
dimetro de 0.15 mm y es fertilizado por una clula espermtica que mide
aproximadamente 0.005 mm de dimetro y pesa alrededor de 5 X 10-9 gramos. El huevo
frtil por un proceso de multiplicacin genera un nio, que al nacer pesa entre 2800 y 4500
gramos. Sobre la base de su volumen el peso del huevo puede calcularse en tres
millonsimas de gramo. El peso medio de un nio al nacer se aproxima a 3200 gramos. En
consecuencia, el desarrollo a partir de un, huevo para llegar a un nio recin nacido
representa un aumento en peso de aproximadamente mil millones de veces. Un aumento
similar ocurre en el nmero de clulas a partir de una hasta posiblemente billones. En el
cerebro solamente, es posible calcular la multiplicacin de una sola clula en billones de
veces. El aumento en ambos parmetros, tamao y nmero de clulas durante el desarrollo,
oscila entre estas magnitudes.

Aun cuando obviamente es imposible cuantificar el aumento en complejidad estructural que
tiene lugar durante el desarrollo de una sola clula, para lograr un organismo
completamente formado, este aumento puede ser ilustrado.

El ojo es una de las estructuras individualizables mas complicadas del adulto. El ojo del
embrin de los anfibios puede ser presuntivamente identificado en una regin del huevo
que no aparenta tener estructuras especiales o distintivas. Las clulas derivadas del
protoplasma de esta regin no muestran al principio, organizacin visible distinta de los
organoides citoplasmticos comunes a todas las otras clulas. Sin embargo, de una mera
fraccin del protoplasma de esta regin del huevo, se derivan todas las partes del ojo. De un
punto donde no hay estructuras visibles se desarrollan las muy complicadas de la retina,
cristalino, cornea y nervio ptico (fig. 1-1). Y tngase en cuenta que los cambios qumicos
y fsicos durante el proceso de diferenciacin del ojo no son menos sorprendentes que los
cambios en el tamao y nmero de clulas durante el desarrollo del embrin entero.

PROGRESO DEL DESARROLLO
Como preludio a un examen mas profundo de sus varias fases, la naturaleza del desarrollo
embrionario en general debe ser brevemente sintetizada. La figura 1-2 servir como
referencia para la identificacin de los diferentes estados del desarrollo usando anfibios
como modelo.
La fertilizacin inicia el proceso del desarrollo. La penetracin de un espermatozoide en un
vulo es un fenmeno altamente complicado que ocurre en segundos, e involucra una
variedad de procesos fisicoqumicos, provocando dentro del vulo diversas respuestas
espectaculares.
El complejo conjunto de acciones definido como fertilizacin, origina el huevo frtil o
cigoto.
El huevo recientemente fertilizado muestra muy poca o ninguna evidencia de las estructuras
que desarrollaran a partir de sus distintos sectores.
Despus de la fertilizacin el huevo experimenta segmentacin. Esto es una serie de
divisiones celulares que dividen el gran huevo en un gran nmero de pequeas clulas. El
proceso de segmentacin da origen a una blstula multicelular. No hay todava estructuras
organizadas, aparentes, en el organismo en desarrollo.
Siguiendo divisiones celulares en serie, y reordenndose las clulas, la blstula se convierte
en una gstrula. Las migraciones celulares y los movimientos celulares en masa a travs de
los cuales ocurre esta conversin se conocen como gastrulacin. En el estado de gstrula es
evidente una definida polaridad y se forma un intestino primitivo o arquenteron, pero no
hay rganos internos aparentes. El estado de neurula muestra la aparicin del sistema
nervioso al formarse una placa neural. La porcin ms ancha de esta placa desarrolla el
cerebro y la ms estrecha formara principalmente la medula espinal. Por ello es posible
distinguir las partes de la neurula que darn origen a las estructuras craneales de las que
desarrollaran el tronco y cola.

El desarrollo posterior de la cadera y tronco se visualiza en el embrin donde la cabeza,
tronco y cola estn definidos y pueden distinguirse rganos rudimentarios.

En los vertebrados inferiores (por ejemplo, anfibios) el embrin madura para convertirse en
larva; en los anuros la larva se llama renacuajo. El estado larvario no ocurre en el desarrollo
de los vertebrados superiores y durante su evolucin ulterior el organismo se llama feto. En
el desarrollo del hombre, por ejemplo, el estado fetal se considera que comienza a finalizar
al segundo mes de gestacin.

A partir de la gastrulacin el desarrollo embrionario se caracteriza en forma creciente por la
diferenciacin progresiva de regiones especficas, rganos, tejidos y clulas.

El establecimiento de funciones y la integracin de sistemas funcionales es el hecho ms
trascendente de las ltimas etapas del desarrollo. En su progreso general entonces, el
desarrollo representa una serie sucesiva y ordenada de cambios que transforman
gradualmente una clula aparentemente indiferenciada en un organismo funcional que
comprende una multitud de tipos celulares. Es en otras palabras el desarrollo progresivo de
la complejidad y de la especificidad.

PROCESOS DEL DESARROLLO

Los procesos del desarrollo embrionario han retado a la imaginacin del hombre desde la
antigedad clsica. La interpretacin de estos procesos ha variado en el curso de la historia
de la embriologa y el estudio del desarrollo ha pasado a travs de diferentes fases
caracterizadas por los mtodos utilizados para su investigacin. Por siglos la observacin y
descripcin fueron las bases primarias para la interpretacin del desarrollo. El uso del
microscopio en investigacin embriolgica, comenzado en el siglo xvii, transform la
embriologa descriptiva y permiti el establecimiento de una embriologa mas avanzada
durante la primera mitad del siglo xix. Con el advenimiento de la teora de la evolucin de
Carlos Darwin, el mtodo comparativo se constituye en el enfoque dominante para el es-
tudio del desarrollo. El final del siglo xix fue testigo del origen de la embriologa
experimental. La manipulacin directa del embrin y el anlisis experimental de los
factores que controlan el desarrollo de la forma, caracterizaron la embriologa durante la
primera mitad del siglo xx.

Las embriologas descriptiva, comparada y experimental, estn representadas en la
embriologa moderna.

En aos recientes, el estudio del desarrollo se ha hecho ms restringido y la manifestacin
ms moderna de la embriologa es referida a menudo como biologa del desarrollo. Forman
legin el nmero de problemas planteados por los procesos del desarrollo y en estos,
nuestros tiempos, es general la aplicacin de conceptos y tcnicas asociadas con las mas
diversas disciplinas cientficas.

La biologa del desarrollo es verdaderamente una encrucijada cientfica, es el punto de
contacto de ciencias como fsica, qumica, zoologa, botnica, microbiologa, gentica,
matemticas y psicologa
.
Los estudios sobre desarrollo pueden utilizar procedimientos tan diversos como la
difraccin de rayos X y el condicionamiento ambiental; pueden ser descriptivos o
experimentales y pueden tener como sujetos de trabajo mohos del limo o primates. La
biologa del desarrollo es una ciencia apasionante pues son apasionantes todos los
problemas que en ella se presentan.
La preocupacin o problema central de la embriologa es el proceso de diferenciacin. No
hay razones para dudar de que cada una de las clulas derivadas de un huevo en trance de
divisin, esta provista del mismo aparato gentico y sin embargo, estas clulas dan origen a
los tipos celulares heterogneos del adulto. Esto implica la existencia de una influencia
ambiental sobre las clulas embrionarias como el hecho bsico del desarrollo y adems que
las clulas embrionarias cambien constantemente en respuesta a un cambio constante del
medio que las rodea. Las clulas embrionarias son en primer trmino maravillosamente
lbiles y capaces de orientarse en diversas y variadas lneas de diferenciacin. Un simple
experimento permitir ilustrar sobre las posibilidades de respuesta de las clulas
embrionarias a su ambiente inmediato y la muy lbil organizacin existente dentro del
huevo frtil.

Es posible dividir un huevo de erizo de mar en dos mitades y observar como cada una de
estas mitades desarrolla hasta convertirse en un embrin completo. En algunos huevos es
posible obtener cuatro embriones completos de la separacin de las primeras cuatro clulas
(fig. 1-3). A la inversa, dos huevos pueden ser fusionados reunindolos para formar un solo
embrin (fig. 1-4). En estados ligeramente posteriores, una clula aislada es incapaz de
formar un embrin completo, pero partes del embrin temprano pueden ser intercambiadas
sin que resulten anormalidades en su desarrollo. En los anfibios, por ejemplo, al comienzo
del periodo de gstrula es posible intercambiar partes destinadas a transformarse en piel con
partes destinadas a transformarse en sistema nervioso (fig. 1-5). La piel de adulto es un tipo
de estructura; el sistema nervioso adulto es absolutamente otro. Las clulas poseen
suficiente labilidad, sin embargo, en una etapa temprana del desarrollo, como para poder
ser intercambiadas.

Un importante objetivo de la embriologa moderna es lograr una mayor comprensin de los
mecanismos por los cuales las clulas pueden influenciarse entre si, ya sea individualmente
o en grupos. El mecanismo por el cual grandes lminas o capas de clulas se mueven en
forma coordinada para establecer un modelo esencial en una etapa sucesiva particular del
desarrollo, plantea exactamente este problema. Se necesita obtener mucha mayor
informacin, por ejemplo, con respecto a los factores que gobiernan la agregacin de las
clulas, su disposicin en una capa y la forma en que se coordinan los movimientos de esta
capa como una unidad coherente.

Tomando como premisa que hay una restriccin en las capacidades de las clulas
embrionarias, y que la elaboracin de nuevas propiedades especificas aparece en relacin a
las influencias ambientales, es razonable considerar las interacciones de las clulas
embrionarias en su medio ambiental, como un proceso critico del desarrollo y su estudio
como de vital importancia. Las variadas interacciones que configuran la diferenciacin de
las clulas embrionarias pueden eventualmente ser reducidas a fenmenos moleculares y a
interacciones en un microambiente. El conocimiento de las interacciones de las clulas
embrionarias con sus clulas vecinas, el medio ambiente intercelular, y, finalmente, las
interacciones que ocurren dentro de la clula misma, son fundamentales para el
conocimiento de la diferenciacin. Un momento de reflexin esclarecer la trascendente
presencia de la diferenciacin celular en los sistemas biolgicos y la importancia de la
comprensin de sus mecanismos y su control. La diferenciacin es un rasgo saliente del
desarrollo embrionario, pero no esta restringida a los procesos embriolgicos; ocurre en el
organismo adulto a travs de toda su vida. El reemplazo de clulas, fcilmente reconocible
en el reemplazo sistemtico y regulado de las clulas de la sangre y de la piel, involucra
diferenciacin celular. Condiciones o estados patolgicos pueden resultar de procesos de
diferenciacin no regulada o indcil en adultos, como sucede en el cncer. El anlisis de la
diferenciacin celular durante el desarrollo embrionario, mantiene en consecuencia, directa
relacin con procesos normales y anormales de los adultos. En consecuencia los hallazgos y
objetivos de la biologa del desarrollo, conciernen a los objetivos de varias ciencias
biolgicas y a los propsitos de la medicina moderna.

En aos recientes se han hecho notables avances en el anlisis de los cidos nucleicos y su
papel biolgico. Las interacciones del cido desoxirribonucleico (DNA), el material
gentico crtico y el citoplasma circundante, se encuentran al frente en los temas de
investigacin embriolgica. Debe admitirse que hasta la fecha tan solo se ha logrado iniciar
el anlisis de este aspecto de la diferenciacin pero es casi imposible exagerar el significado
potencial de la investigacin en este terreno de la biologa del desarrollo. El objetivo es un
conocimiento del modo de expresin del material gentica y del control de la diferenciacin
celular.

Reside aqu el punto crucial de muchos problemas fundamentales, biolgicos y mdicos. El
anlisis y la comprensin de los aspectos genticos del desarrollo promete caminos hacia la
comprensin y el control de procesos normales y anormales tanto en organismos
embrionarios como adultos. Considrense, por ejemplo, defectos congnitos, todos ellos
tragedias frecuentes resultantes de aberraciones de los procesos del desarrollo. Una vez que
los mecanismos que sustentan la expresin del material gentico y la diferenciacin celular
estn definidos, dista mucho de ser una teora imposible, la prediccin de la prevencin o
por lo menos del mejoramiento de los defectos congnitos en sus varias manifestaciones
morfolgicas, metablicas y fisiolgicas. La capacidad del hombre para controlar no
solamente la ocurrencia sino tambin la naturaleza y caractersticas de su descendencia es
una pavorosa pero genuina posibilidad que tambin surge de esta vigorosa rea de la
investigacin embriolgica.

En ausencia de crecimiento el organismo nunca llegara a ser ms grande que un huevo
fertilizado. El proceso de crecimiento embriolgico puede ser considerado como la sntesis
de protoplasma nuevo que tiene lugar simultneamente con el desarrollo, dando en
consecuencia una masa total aumentada. El crecimiento incluye, naturalmente, la
proliferacin de nuevas clulas. Es, sin embargo, mas que la simple e indiscriminada
adicin de ms clulas en el interior del organismo en crecimiento; involucra un sostenido
desequilibrio metablico que favorece los procesos de sntesis, la captacin de agua y el
dep6sito de substancias intercelulares.

No todas las partes del organismo crecen en la misma proporcin ni al mismo tiempo. En
realidad, la uniformidad del crecimiento a travs del desarrollo impedira la manifestacin
de la forma y proporciones corporales caractersticas de un organismo en particular. En el
ser humano recin nacido la cabeza representa aproximadamente el 32 por 100 del volumen
corporal total, mientras que las piernas ocupan aproximadamente el 15 por 100 del volumen
total. Un crecimiento uniforme durante el periodo fetal del desarrollo (tres a nueve meses)
producira un recin nacido en el cual la cabeza y las piernas ocuparan 45 y 2 por 100 del
volumen corporal total respectivamente. Es obvio que la proporcin de crecimiento de la
regin craneal se reduce en relacin con la proporcin de crecimiento de la regin de las
piernas durante el periodo fetal. Una variacin similar en las proporciones de crecimiento
es evidente en el desarrollo de las alargadas mandbulas del pez espada. En el pez joven las
mandbulas y maxilas son iguales y cortas; luego el maxilar inferior se alarga y finalmente
el maxilar superior crece hasta alcanzar una longitud igual a la del maxilar inferior. El
crecimiento diferencial puede explicar tambin la reduccin de estructuras durante el
desarrollo (por ejemplo, la cola del embrin de mamfero y los brotes podales del lagarto
carente de extremidades). Es claro que la diversidad de formal de los grupos animales
deriva de la accin de proporcionalidad del crecimiento diferencial de diferentes regiones
del cuerpo en diferentes etapas del desarrollo.

El crecimiento diferencial es parte integrante de todo desarrollo. Las interrelaciones de las
varias proporciones de crecimiento son estables y especificas para cada especie animal.
Estas proporciones pueden ser objeto de un anlisis matemtico. La relacin entre el
crecimiento de todo el organismo y el de una parte y aumentando o disminuyendo en su
valor relativo, puede ser expresada por la ecuacin y = bxk en la cual x es la medida de
magnitud del organismo entero, medida por alguna unidad lineal estndar o su peso, y b y k
son constantes.

La constante b tiene poca significacin biolgica y solamente indica el valor de y cuando x
es igual a 1. Por otra parte, k; tiene un importante significado pues indica que por encima
de los valores dentro de los cuales la formula tiene vigencia, la relacin de la proporcin de
crecimiento de la parte, con relacin a la proporcin de crecimiento del todo, permanece
constante. La constante k puede ser determinada para cada rgano lo mismo que para todo
el organismo, y en consecuencia la diferencia de constante de relacin de crecimiento
permite el anlisis de los crecimientos relativos durante el desarrollo. Los valores x y y, de
cualquier estructura pueden ser comparados para valorar el grado de desproporcionalidad
del crecimiento de un rgano con respecto a otro o al cuerpo en conjunto. En el caso de las
cabezas de ciertas hormigas, la relacin entre el tamao de la cabeza y el del cuerpo
aumenta cuando aumenta el tamao del cuerpo; esto significa que el tamao mximo que
logra la cabeza en su desarrollo, se alcanza relativamente ms rpido que el del cuerpo (fig.
1-6) . La proporcin de crecimiento relativo de la cabeza y del cuerpo permanecen
constantes durante un largo periodo. Aplicando la expresin y = bxk, en la cual x es el
tamao del cuerpo y el tamao de la cabeza, se encuentra que la relacin de crecimiento es
de 1.62 indicando en consecuencia el valor en que, el crecimiento de la cabeza, excede al
del cuerpo. Los fenmenos qumicos pueden igualmente ser objeto de este tratamiento
matemtico (fig. 1-7). Todos los embriones pierden agua cuando aumenta su edad; la
aplicacin de la formula revela que dentro de cualquier grupo de animales todos ellos
disminuyen su contenido de agua en la misma proporcin absoluta. Los mamferos, por
ejemplo, muestran todos un valor k de 1.23 aproximadamente; tomando todo el periodo de
crecimiento del hombre (desde menos de 1 hasta 66 000 gramos de peso neto) se mantiene
esta relacin. El carcter especifico, estable, del crecimiento diferencial revela entonces un
molde de crecimiento total, exquisitamente coordinado, el cual se integra en todos sus
aspectos dentro del desarrollo coordinado del embrin.

Es conocido, que una variedad de factores afecta el crecimiento, y la investigacin de estos
factores y el papel relativo de la herencia, edad, nutricin, vita-minas, hormonas, etc.,
constituye un importante aspecto de la embriologa. Un tema que recibe actualmente mucha
atencin, es la regulacin gentica de la sntesis enzimtica y el control del metabolismo
celular. Segn con un concepto moderno los genes regulan y son regulados por procesos
bioqumicos. El sistema, que define este concepto de regulacin gentica del metabolismo
celular se basa en evidencias logradas en microorganismos y queda todava por ser
demostrado con claridad en los tejidos embrionarios, aun cuando ofrece muchas
posibilidades y provee un fuerte incentivo a investigaciones ulteriores. Afirma la existencia
de diversas variedades de genes, que se definen segn su funcin. En consecuencia, genes
estructurales son los que determinan el orden sucesivo de los aminocidos de las protenas
sintetizadas dentro de la clula y genes reguladores son los que controlan o regulan la
funcin del DNA. De este concepto se deduce que un gen regulador (operador) ejerce un
control inmediato sobre un conjunto de genes estructurales estrechamente vinculados
(opern).

Cuando este gen operador es activo los genes estructurales bajo su control sintetizan cido
ribonucleico mensajero (RNA) ; cuando es inactivo los genes estructurales son inactivos.
La actividad del gen operador es controlada mediante la accin de otro gen, el gen
regulador. Este gen regulador produce represores especficos que pueden combinar con el
gen operador e inactivarlo. El represor es el elemento a travs del cual el medio y el
material gentico se influencian. La presencia de metabolitos especficos en el citoplasma
celular determina la accin de los represores producidos por genes reguladores; activando o
inactivando los represores, los metabolitos regulan la actividad del gen operador y del
opern. Este concepto proporciona un mecanismo basado en la interaccin dinmica entre
los productos de los sistemas metablicos de las clulas y los factores que las controlan.
Este sistema de retroalimentacin regulado internamente y tan equilibrado como se muestra
en el proceso de la sntesis enzimtica, es evidentemente un posible mecanismo de
regulacin del crecimiento.

Muchas preguntas sin respuesta continan preocupando a los embrilogos. Se desconoce
todava que es lo que estimula el desarrollo y que es lo que, a la inversa, lo detiene en un
punto predecible.

Hay ciertas evidencias que los tejidos pueden producir y liberar substancias que, regulan el
crecimiento de otros tejidos. Experimentos realizados con estructuras de mamferos, en
trance de regeneracin, como glndulas y riones han conducido a la hiptesis segn lo
cual estos factores entran en la circulacin y provocan fenmenos de recrecimiento o
hipertrofia en estructuras intactas. Aun en cultivo de tejidos en los cuales las clulas no
estn vinculadas entre si a travs de un sistema circulatorio, la poblacin celular parece
tener ciertos recursos que provocan el crecimiento, cuando una parte de la poblacin es
cambiada de lugar y detienen el crecimiento cuando esta parte es devuelta a su lugar y
posicin primitiva.

Muchos animales inferiores son capaces de reemplazar partes de su organismo perdidas.
Una lombriz planaria decapitada regenara una nueva cabeza conteniendo todas las
estructuras presentes originariamente en la cabeza intacta.

Las salamandras regeneran nueva cola y miembros inferiores cuando pierden cualquiera de
ambas estructuras (fig. 1-8) . Algunos animales pueden ser cortados en una docena o ms
de pedazos y cada uno de ellos regenera un animal entero. Con todo, en los vertebrados
superiores la regeneracin es muy limitada. El aspecto ms interesante del crecimiento es la
posibilidad de que a travs del anlisis de los fenmenos de regeneracin en animales de
alto poder regenerativo, pueda ser encontrado un medio para inducir la regeneracin de
partes perdidas en animales superiores, incluyendo al hombre.

Esta claro que el anlisis del desarrollo se encuentra lejos de ser completo y que hay
lagunas significativas en nuestra comprensin de sus mecanismos fundamentales. En los
captulos siguientes, consideraremos en la forma ms detallada los principios del desarrollo
embrionario y la interpretacin contempornea de los mecanismos a travs de los cuales se
cree que ocurren procesos primarios como la diferenciacin, crecimiento y morfognesis.

Gametognesis y ovulacin

EN LOS ANIMALES, el elemento germinal funcional macho, o gameto macho es el
espermatozoide y el rgano que da origen a este es la gnada masculina o testculo. El
gameto funcional femenino es el 6vulo, y el rgano que da origen a los vulos es el ovario.
La morfologa de estos rganos vara segn la especie animal, pero las gnadas de todos los
vertebrados tienen caractersticas comunes. Ambas, el testculo y el ovario tienen dos
funciones primarias. Producir los gametos y secretar las hormonas sexuales propias del
macho y de la hembra. Daremos consideracin en primer trmino a su papel cardinal en la
produccin de los gametos.

ESPERMATOGNESIS

En la mayor parte de los vertebrados el testculo se compone de tubos seminferos
enclavados dentro del tejido conectivo y separados por tejido intersticial. Muchos
investigadores sostienen que clulas especiales localizadas en el tejido intersticial secretan
hormonas de las que depende el desarrollo y la conservacin de los caracteres sexuales
secundarios masculinos. Otros investigadores creen sin embargo, que estas secreciones son
producidas por los conductos seminferos o por ambos, los tbulos y las clulas del tejido
intersticial. Independientemente de su posible papel en la elaboracin de las hormonas
masculinas, los conductos seminferos producen ciertamente los espermatozoides. Estos
conductos seminferos comunican a travs de una serie de conductillos, con el conducto
deferente que transporta los espermatozoides al exterior.

Los espermatozoides se forman en el espacio interior de los conductos seminferos. Estos
conductos muestran al microscopio una organizacin que se relaciona claramente con su
funcin de producir un gran nmero de espermatozoides. Contienen gran variedad de tipos
celulares que incluyen las clulas espermticas en diferentes etapas de su desarrollo. Las
ms importantes son las clulas germinales o clulas primordiales, localizadas en una capa
celular aplicada hacia la periferia de los conductos. Es muy posible que todos los
espermatozoides producidos dentro del testculo deriven de las clulas primordiales. Las
otras clulas que se encuentran en el interior del conducto sirven o de soporte o cumplen un
papel nutricional, pero no forman elementos germinales de ninguna clase. Para nuestros
propsitos no nos detendremos en disquisiciones con respecto a estos elementos no
germinales del testculo sino que consideraremos los acontecimientos ms importantes de la
espermatognesis propiamente dicha.

En un determinado momento una clula germinal primordial comienza a agrandarse
revelando una creciente actividad interna. Mientras esto sucede tiende a desplazarse desde
la periferia hacia el interior del conducto hacindose progresivamente basfila, es decir
tindose fcilmente con colorantes bsicos, y experimentando finalmente una divisin
mittica. Las clulas hijas de esta divisin se conocen como espermatogonias. Las
espermatogonias pueden sufrir una divisin que produce dos espermatocitos. La divisin de
una espermatogonia, producto a su vez de una divisin mittica, para formar dos
espermatocitos primarios es otra divisin mittica. Los espermatocitos, no obstante,
experimentan dos divisiones que son caractersticas de las clulas sexuales en un proceso
denominado meiosis. La caracterstica que distingue a estas divisiones meiticas es la
reduccin del nmero normal de cromosomas a la mitad. Las espermatogonias de los seres
humanos contienen normalmente 46 cromosomas. Este nmero se designa como nmero
diploide. En una divisin mittica ordinaria, las dos clulas hijas que se originan de la
divisin son iguales a las clulas que les dieron origen, en el sentido que contienen el
nmero diploide de 46 cromosomas Esto es verdad para los espermatocitos primarios
derivados de las espermatogonias por cuanto son el producto de una divisin mittica.
Despus de las divisiones meiticas de los espermatocitos, las espermtides resultantes
contienen la mitad del nmero cromosmico normal, la serie haploide. De este modo cada
espermatocito diploide genera cuatro espermtides haploides. No necesitamos detenernos
acerca de la mecnica de este proceso; la comprensin del orden sucesivo de los
acontecimientos puede obtenerse de la fig. 2-1.

Obviamente la reduccin del nmero cromosmico en la gametognesis, es responsable de
la constancia de los nmeros cromosmicos y del mantenimiento de las especies. Cuando
un espermatozoide haploide se une eventualmente con un vulo, tambin haploide, el
huevo fertilizado resultante es una clula diploide. Una consecuencia adicional de la
divisin durante la espermatognesis es la posibilidad de modificaciones del material que
transmite las caractersticas hereditarias a travs de varias formas de intercambio
cromosmico. La meiosis es similar y comparable en el macho y en la hembra (fig. 2-1).

MORFOLOGIA DEL ESPERMATOZOIDE

El espermatozoide maduro y completo puede mostrar grandes variaciones en las distintas
especies animales, pero evidencia poseer un plan morfolgico bsico que se relaciona con
el aspecto funcional de la viabilidad del espermatozoide y de la fertilizacin. Estudios
llevados a cabo durante la ltima dcada nos permiten llegar a la siguiente descripcin de
su organizacin general. El espermatozoide puede ser dividido en cuatro partes; cabeza,
cuello, segmento intermediario y cola (fig. 2-2). Estudios de microscopia electrnica
revelan que la cabeza se compone de un acrosoma y de un gran ncleo. Derivado del
aparato de Golgi de la espermtide, el acrosoma, forma en adicin de una masa compacta
por encima del ncleo, una membrana doble que cubre la superficie externa del propio
acrosoma y se extiende hacia abajo a lo largo de la superficie exterior del ncleo para
formar el capuchn ceflico. El acrosoma evidencia poseer un papel importante en la
penetracin y en estimular o activar el huevo para su posterior desarrollo. En muchas
especies, la mayor parte de ellas invertebrados marinos, libera un filamento acrosmico
cuando toma contacto con el vulo. El ncleo del espermatozoide contiene el material
hereditario masculino en forma de cromatina densa, que parece ser
desoxirribonucleoprotena condensada, liberada de toda otra substancia durante la
formacin del gameto masculino a partir de la espermtide.

El cuello del espermatozoide es, en primer termino, el lugar donde se encuentran los
centriolos proximal y distal. Los dos centriolos se encuentran en Angulo recto, uno con
respecto al otro. El centriolo distal forma y sirve de punto de apoyo al filamento axial de la
cola del espermatozoide; el centriolo proximal asume su mayor importancia en la primera
divisin del huevo fertilizado.

El segmento intermediario se compone casi enteramente de mitocondrias. Las mitocondrias
en algunos animales forman grupos compactos aislados a lo largo del segmento
intermediario y en muchos otros forman una cubierta compacta que rodea el centriolo distal
y la parte proximal del filamento axial. Las mitocondrias son portadoras de las enzimas
oxidativas y de las enzimas de las cuales depende la fosforilacin oxidativa. Ellas, y en
consecuencia el segmento intermediario del espermatozoide, estn fundamentalmente
relacionadas con los aspectos metablicos y energticos de la funcin del espermatozoide.
El filamento axial forma el elemento principal de la cola del espermatozoide. Est, rodeado
de una pequea cantidad de citoplasma y de la membrana celular. El espermatozoide de los
mamferos contiene pequeos filamentos adicionales rodeando el filamento axial. Una
membrana ondulatoria puede estar presente en algunos animales (por ejemplo, peces) . La
cola provee la base para la movilidad del espermatozoide. Este debe atravesar distancias
variables para encontrar un vulo; su medio de locomocin es un movimiento ondulante o
chasqueante, como ltigo, de la cola. Debe notarse, no obstante, que algunos invertebrados
poseen espermatozoides sin flagelo.

FACTORES QUE CONTROLAN LA ESPERMATOGENESIS

Los cambios morfolgicos que acabamos de describir ocurren en forma regular y ordenada
y aun cuando puede parecer que los factores que los dirigen son intrnsecos del testculo,
muchas funciones testiculares se encuentran bajo el control de influencias que emanan de
territorios externos a la gnada.

Entre las influencias exteriores sobre el testculo de los vertebrados est en primer trmino
la de las glndulas endocrinas, en particular la glndula pituitaria o hipfisis. Esta glndula
esta localizada en la base del cerebro unida por un pednculo al hipotlamo que es el
territorio ventral de la porcin de cerebro anterior conocida como diencfalo. La hipfisis
se compone de dos 1bulos principales, el lbulo anterior o adenohipfisis y el 1bulo
posterior o neurohipfisis. Ambas porciones de la hipfisis secretan una variedad de
hormonas que afectan a la mayor parte de los rganos. Un importante grupo de hormonas
secretadas por el 1bulo anterior (adenohipfisis) es el de las hormonas gonadotrficas.
Entre otros efectos las gonadotrofinas conservan a las gnadas en un nivel de funcin
ptima. El comienzo de la espermatognesis y su declinacin se cumplen bajo la influencia
de gonadotrofinas producidas en la hipfisis.

Es interesante reconocer que la hip6fisis propiamente dicha esta sujeta a influencias
externas. Se conoce de antiguo que la luz ejerce un profundo efecto sobre esta glndula y
los niveles de actividad gonadotrfica. Se reconoce hoy sin dudas, que en las aves y
roedores, entre otros vertebrados, la secrecin de gonadotrofinas y la actividad gonadal
estn directamente influenciadas por la longitud del da. La activacin de las gnadas por
incrementos de luz se demostr hace varias dcadas por los experimentos de Rowan sobre
el junco, una avecilla migratoria de Amrica del Norte. Ejemplares atrapados en septiembre
durante su perodo de migracin hacia el sur fueron mantenidos a la intemperie bajo las
severas temperaturas del invierno canadiense. Mediante aumento de la iluminacin de los
aviarios se simul el diario aumento del largo de los das que caracteriza el comienzo de la
primavera. Bajo este rgimen al llegar diciembre los juncos desarrollaron gnadas que se
aproximaron en tamao a los testculos normales del periodo de cra de mayo.

Resultados comparables se han obtenido desde entonces sobre gran variedad de
vertebrados. Algunos invertebrados tambin revelan influencia de fotoperiodicidad y hay
casos en que la luz juega un papel importante en el proceso de gametognesis y en la
liberacin efectiva de gametos.

En los vertebrados la influencia de la luz sobre la actividad gonadal se lograra mediante una
serie de estructuras neurales que comienzan en la retina. Dispositivos nerviosos de relevo
en la porcin basal del cerebro anterior (telencfalo y diencfalo) en particular el
hipotlamo, culminan en un proceso activo de neurosecrecin. Elementos neurohormonales
liberados de grupos localizados de neuronas, denominados ncleos hipotalmicos obran en
la secrecin y liberacin de las hormonas gonadotrficas de la adenohipfisis y por ende en
la actividad gonadal. El mecanismo aparente a travs del cual el hipotlamo regula la
funcin hipofisaria es discutido en la seccin de este captulo dedicada a la fotoperiodicidad
sexual.

En los conductos seminferos de los mamferos, "ondas" rtmicas de espermatognesis
atraviesan el eje longitudinal del conducto. De este modo parece haber una ordenacin por
debajo de la que es visible o aparente, lo que sugiere que hay otras formas de regularidad y
regulacin todava no bien conocidas. Estas y otras facetas de la funcin testicular que se
encuentran ms all del objetivo de este volumen, proporcionan un tpico esplndido para
lecturas adicionales.

ORIGEN DE LAS CLULAS GERMINALES

Recordemos que las clulas que dan origen a los vulos y los espermatozoides son
denominadas clulas germinales primitivas. El origen de las clulas germinales ha dado
motivo a considerables controversias desde el ltimo cuarto del siglo xix. Ain ahora este
problema esta lejos de estar resuelto. El punto en discusin es, como Augusto Weismann lo
sugiriera originariamente, si un plasma germinal se separa tempranamente en el desarrollo
embriolgico, para dar origen a todas las clulas germinales primitivas que emigran luego
a la gnada en desarrollo o si hay clulas germinales funcionales que se desarrollan en
intima asociacin dentro de la gnada en diversos estados posteriores del ciclo vital. El
problema ha sido investigado en una gran variedad de animales y aun cuando la respuesta
final no se ha logrado todava, hay ciertos indicios del origen de las clulas germinales.

En los invertebrados el origen primario o la segregacin de las clulas germinales
permanece obscura en los anlidos y celenterados. En otros invertebrados, especialmente en
los insectos dpteros y en los vermes ascaridios, hay una separacin precoz de las clulas
germinales. Segregacin de las clulas germinales ha sido tambin descrita en los peces
ciclstomos y elasmobranquios. Numerosos investigadores han afirmado que en los peces
telesteos las clulas germinales se separan tempranamente durante el desarrollo a partir del
endodermo (la capa germinativa mas profunda) y emigran desde all a travs del
endodermo y el mesodermo que lo cubre, hasta su ubicacin final en la gnada en
desarrollo. As en Fundulus las clulas germinales han sido precozmente identificadas en el
endodermo lateral en la mitad posterior del cuerpo. De esta localizacin emigran hacia el
punto de instalacin mesodrmico en la gnada. Un proceso similar ha sido descrito para el
Lebistes, un pececito tropical.

La mayor parte de las investigaciones indican que en los anfibios las clulas germinales
tienen origen precoz y extragonadal. El sitio especifico de origen varia con el orden
taxonmico. En los anfibios urodelos las clulas germinales se originan en la parte
posteroventral del mesodermo lateral, emigrando posteriormente hacia la gnada. En los
anfibios anuros el citoplasma germinal parece originarse antes de la segmentacin, en el
rea subcortical de la parte vegetativa o polo inferior del huevo; durante la segmentacin
estas clulas emigran por el endodermo del embrin pasando de all al mesenterio dorsal y
a la gnada. Evidencias experimentales recientes sostienen que en los anuros los gametos se
organizan a partir de clulas germinales identificables en el endodermo en la etapa de
mrula. La mayor parte de las clulas en el embrin normal del sapo sudafricano Xenopus
laevis llevan dos nuclolos por ncleo. Mediante un apropiada acoplamiento de sapos
normales y mutantes es posible obtener embriones de Xenopus en los cuales las clulas
constituyentes contienen solamente un nuclolo por ncleo. Este es un marcador nuclear,
que proporciona un criterio morfolgico para distinguir clulas derivadas de un embrin
normal y clulas derivadas de un embrin marcado. Un marcador natural de estas
caractersticas facilita grandemente el diseo experimental y el estudio del destino de las
clulas. Marcadores artificiales, radioistopos, por ejemplo, tienen generalmente ciertas
desventajas y los embrilogos conocen que deben aprovechar un marcador natural tantas
veces como puedan. En Xenopus, luego de trasplantar tejidos de un embrin normal (dos
nuclolos por ncleo) a un embrin marcado (un nuclolo por ncleo) cualquier clula que
surja o se desprenda del material trasplantado sin tener en consideracin su ubicacin puede
ser identificada por la presencia de los dos nuclolos en el ncleo.

Usando este mtodo ha sido demostrado que si el endodermo posterior conteniendo clulas
germinativas primordiales es trasplantado de una neurula de Xenopus normal al mismo sitio
en una neurula de Xenopus marcada, las clulas germinativas emigran al interior de la
gnada y producen luego gametos funcionales.

En aves y reptiles a las clulas germinales tambin se les asigna un origen extragonadal. En
las aves se dice que las clulas germinales se originan en la capa endodrmica de la porcin
extraembrionaria del blastodermo inmediatamente anterior a la regin craneal del embrin.
Se cree que estas clulas emigran a la gnada en desarrollo por la va de los vasos
sanguneos. Experimentos en los cuales estas clulas germinales han sido destruidas por
cauterizacin o irradiadas con antelacin a su emigracin, revelan que, en esas
circunstancias, la gnada completamente desarrollada, no contiene clulas germinales
primordiales.

Se han llevado a cabo estudios similares en varios mamferos. Al comienzo se sostuvo que
las clulas germinales del ratn se originaban a partir del epitelio germinal de la gnada,
pero estudios recientes sugieren que en el ratn como en otros vertebrados, las clulas
germinales se originan en el endodermo para emigrar posteriormente a la gnada.
Utilizando la capacidad de marcador natural del alto contenido en fosfatasa alcalina de las
clulas germinales, fue posible determinar su ubicacin en el endodermo caudal y su
subsecuente emigracin a la gnada en desarrollo. Utilizando en forma similar esta tcnica
histoqumica se ha intentado el anlisis de la emigracin de las clulas germinales en los
seres humanos, desde el epitelio endodrmico extraembrionario hacia la gnada en
formacin (fig. 2-3).

Hay pues evidencia substancial para afirmar el origen extragonadal de las clulas
germinales y su migracin o transporte hacia la gnada. Esto no indica necesariamente, sin
embargo, que todos los gametos funcionales de cada individuo nacen de estas clulas
germinales de origen precoz. Ms aun, ciertos estudios demuestran que los tejidos de las
gnadas continan formando nuevas clulas germinales en cada estacin de cra. Estos
hechos sugieren la posibilidad que nuevas clulas germinales surjan durante la vida adulta.
No es, por lo tanto, sorprendente que ciertos embrilogos consideren que las clulas
germinales que aparecen muy precozmente en el desarrollo embrionario regeneren y que
nuevas clulas germinales aparezcan de los tejidos ovrico o testicular. La degeneracin de
las clulas embrionarias antes que ellas den origen a estructuras funcionales es comn en el
desarrollo; el rin primitivo del embrin de ave, por ejemplo, degenera y el rin
funcional se forma a partir de otras clulas. Similarmente los vasos sanguneos de ciertos
arcos articos degeneran en el embrin. A pesar del impresionante nmero de
investigaciones realizadas, hay todava muchas reas de conocimiento impreciso. Hechos
evidentes autorizan la conclusin que por lo menos algunos de los gametos funcionales,
aparecen a partir de las clulas germinativas primordiales desplazadas durante los primeros
estados del desarrollo.

El nmero de gametos funcionales producidos no es necesariamente muy grande. En el
ovario de una nia, por ejemplo, hay de 100 000 a 1 000 000 de ovocitos, y se estima que
en 30 aos tiles de Vida reproductora, un mximo de 390 de estos vulos es realmente
ovulado.

Futuros experimentos, aprovechando diversos marcadores celulares y estudios que
comprendan el trasplante de clulas germinales individuales, contribuirn a. establecer el
linaje de los gametos y a la clarificacin de una posible correspondencia directa de las
clulas germinales con el nmero total de gametos funcionales.

Cierta profundizacin de conocimientos puede obtenerse a travs de una ms adecuada
comprensin del comportamiento y de las posibilidades de desarrollo demostradas en
cultivo de tejidos por clulas germinales extradas de embriones en diversos estados de
desarrollo.

Cualquiera que sea el enfoque y las tcnicas experimentales aplicadas, es de desear sean
definidas con prioridad la naturaleza de las clulas germinales, las bases de su segregacin
precoz, las causas y los factores que influyen en su emigracin y su entrada dentro de la
gnada, y los aspectos cuantitativos de la historia de su desarrollo en relacin con los
gametos funcionales.

OVOGENESIS

Es de notar que por algunas de sus caractersticas la formacin temprana de los vulos es
comparable a la del espermatozoide. Sin embargo, si bien puede compararse la formacin
del vulo a partir de una clula primordial germinativa y sus modificaciones cromosmicas
durante la meiosis, la evolucin ulterior del huevo no fecundado es muy diferente.

En los animales vertebrados del sexo femenino la ovulacin constituye parte de un proceso
estacional, rtmico, en el cual el vulo es liberado del ovario, dentro de la cavidad corporal.
De all es transportado al oviducto y entonces con la ayuda de movimientos ciliares,
movimientos peristlticos o de ambos, del oviducto es llevado al tero o al exterior. El
vulo preovulatorio se desarrolla en el ovario a partir de un muy pequeo oogonio hasta un
vulo de gran tamao, el cual en la ovulacin puede encontrarse en diferentes estados de
maduracin de acuerdo con la especie que se considere. Estos procesos de maduracin
comprenden en primer termino una reduccin en el nmero de cromosomas del vulo (fig.
2-1). Acompaando esta reaccin en el nmero cromosmico hay, como en el esper-
matozoide, una segregacin de las unidades hereditarias, un fenmeno que asegura que
vulos de diferente composicin gentica sean producidos dentro de la misma especie. En
algunas especies los cromosomas sexuales se separan durante la maduracin dando origen a
dos tipos de vulos, uno determinante de machos y otro de hembras. En otras especies esta
forma de segregacin sucede en el espermatozoide dando en consecuencia dos tipos de
espermatozoides.

El crecimiento del vulo es e: fenmeno ms impresionante de la maduracin. La mayor
parte de las clulas germinales primitivas tienen aproximadamente .10 micrones (0-.01 de
milmetro) de dimetro, es decir, el tamao de una clula somtica promedia. En los
mamferos estas clulas aumentan hasta alcanzar en algunas especies 200 micrones de
dimetro. En la rana el aumento supera un dimetro de 2 000 micrones; en las aves el
dimetro del vulo puede llegar hasta 40 000 micrones. Este tremendo aumento de tamao
resulta en primer trmino del depsito de vitelo, que por su riqueza en grasas, carbohidratos
y protenas constituye una fuente til de energa y de materias primas para la sntesis del
citoplasma. El gran tamao de los huevos refleja, entonces, no tanto una cantidad
aumentada de protoplasma como una cantidad aumentada de materiales alimenticios de
reserva.

La organizacin del vulo se estudia en el captulo 3. En este captulo solamente
consideraremos el vitelo y estudiaremos el mecanismo de su formacin.
El vitelo es el medio de almacenar alimento en el huevo. La mayor parte de los huevos
contienen algo de vitelo que es de composicin similar al de la gallina. El vitelo esta
compuesto primariamente de protenas, fosfolpidos y grasas neutras bajo la forma de
grnulos o laminillas.) En los huevos maduros de anfibio, por ejemplo, la protena del
vitelo representa aproximadamente el 45 por. 100 del peso seco del huevo, lipoides el 25
por 100 y glucgeno aproximadamente el 8 por 100. El vitelo puede presentarse en el
interior del citoplasma del huevo como sucede en muchos invertebrados cordados inferiores
y anfibios o puede estar ms o menos separado del citoplasma como en los peces seos,
reptiles y aves.

No hay seguridad con respecto a los organoides celulares responsables de la formacin del
vitelo. En arios recientes el microscopio electrnico ha permitido una comprensin ms
adecuada de la formacin del vitelo en los oocitos de animales tan diversos como insectos,
moluscos, anfibios y mamferos. De acuerdo con diversos estudios, parece claro .que una
variedad de granulo de vitelo, probablemente representativo de todos, se forma adentro o en
estrecha asociacin con mitocondrias modificadas del oocito.

El vitelo mismo en muchos casos, o quiz en todos, no se sintetiza dentro del oocito. Los
componentes del vitelo se producen en un lugar externo al oocito y son transportados en
forma soluble, por medio de la corriente sangunea, al oocito, donde son convertidos,
mediante la actividad de enzimas mitocondriales, en grnulos de vitelo insolubles. Hay
buena evidencia en vertebrados, por ejemplo, que las protenas del vulo y los fosfolpidos
se sintetizan en el hgado y son luego transportados al oocito. Experimentos cuantitativos
en aves, con radioistopos, revelan que la incorporacin de precursores radiactivos es alto,
inicialmente en el hgado y ms bajo en el oocito. Despus de 12 horas de la inyeccin de
los compuestos marcados con radioistopos, la radiactividad del hgado decrece aproxima-
damente en 40 por 100, mientras que la de los oocitos aumenta en ms del 80 por 100,
indicando que el proceso de sntesis inicial se cumple en el hgado y posteriormente estos
compuestos se transfieren a los oocitos. Este esquema se complica ligeramente por la
estrecha relacin existente entre los oocitos y las clulas foliculares que los rodean. En la
mayor parte de los animales, emergen microvellosidades de la superficie del oocito, que se
interdigitan con microvellosidades que derivan de las clulas foliculares vecinas. Estas
ltimas representan un intermediario a travs del cual puede ocurrir la transferencia
intercelular de materiales. En algunos invertebrados (ciertos insectos, anlidos y moluscos)
clulas nodrizas especiales, actuando en conjuncin con clulas foliculares, juegan un papel
importante en la provisin de alimento para el oocito en crecimiento. Varios materiales de
elaboracin pasan a el, desde las clulas nodrizas y las clulas foliculares. Estas clulas
deben, por lo tanto, ser consideradas parte integral en el aparato metablico del oocito.

OVULACION Y TRANSPORTE OVULAR

Despus que el vulo ha depositado todo su' vitelo y ha atravesado todas las fases
necesarias de maduracin, esta listo para la ovulacin, y en los animales superiores, para
ser transportado a lo largo del oviducto. El momento de ovulacin esta directamente
relacionado con el ciclo de cra del animal que se considere y en consecuencia el control de
la ovulacin y su regulacin en el tiempo son problemas biolgicos importantes. En
general, parece haber dos sistemas bien deferentes de control de la ovulacin. Uno es un
control ambiental, coma resultado del cual los animales ovulan durante un breve perodo
una vez por ao de acuerdo con la estacin. El otro es un control interne que establece un
ritmo independiente de la estacin en forma tal que los animales ovulan una vez por da o
una vez cada cinco dial, o una vez por mes, o una vez por un periodo determinado. Hay
pocas excepciones a esta norma de ovulacin rtmica espontanea; las hembras del hurn,
gato y conejo, por ejemplo, ovulan poco despus de copular con el macho. En estos casos el
control esta dado por un estmulo particular, la copulacin, que desencadena la liberacin
del vulo desde el ovario.

El fenmeno de la ovulacin y del transporte del vulo en la rana se bosqueja
esquemticamente en la fig. 2-5. El gran ovario que contiene aproximadamente 2 000
huevos esta sujeto por una membrana a la pared del cuerpo. Los vulos en el ovario tienen
casi 2 mm de dimetro y descansan encerrados dentro de membranas que forman un
folculo. Despus de haber logrado su tamao mximo, los vulos se abren paso a travs
del folculo que los retiene y caen en la cavidad del cuerpo o celoma. El celoma este,
tapizado de peritoneo, una capa celular delgada con cilios cubriendo su superficie. Una
accin rtmica de batido sincronizado de los cilios, barre literalmente los vulos desde la
vecindad del ovario hacia adelante a la abertura del oviducto que se encuentra detrs del
pulmn, Los vulos atraviesan una gran seccin de la cavidad general antes de entrar en la
abertura (ostium) del oviducto. Mientras circulan a travs del oviducto, los vulos se
cubren de varias capas de gelatina para finalmente reunirse y descansar en las dilataciones
del oviducto que llamarnos tero.

Cada huevo sufre este proceso hasta que aproximadamente 2 000 vulos se acumulan en el
tero. La masa de vulos es liberada al mismo tiempo que el macho libera esperma y la
fertilizacin tiene lugar, externamente, en el agua. Despus de la ovulacin en el ovario las
pequeas clulas germinales comienzan a crecer y se forman as los vulos del ciclo anual
venidero.

Los procesos generales de la ovulacin y transporte ovular en los mamferos (fig. 2-6),
pueden compararse con estos fenmenos descritos en la rana (fig. 2-5). En los mamferos,
cada huevo madura dentro de un folculo compuesto de clulas epiteliales cbicas (fig. 3-
13). A medida que el folculo crece, se desarrolla una cavidad o antrum en el interior del
folculo, y el vulo rodeado por clulas foliculares se desarrolla creciendo en una amplia
cavidad llena de lquido (figura 2-6, B). Cuando los folculos ovricos maduros alcanzan un
tamao tal que hacen protrusin en la superficie del ovario, se presentan cambios
apreciables en una o varias pequeas reas de su superficie. Un rea pequea de la pared
folicular pierde su aporte vascular e inmediatamente despus, la pared se rompe en este
punto (el estigma) (fig. 2-6, C) dejando salir el vulo que cae al celoma, rodeado todava
de algunas clulas foliculares (fig. 2-6, D). En los mamferos la abertura del oviducto
(trompas de Falopio), esta en la cercana del ovario. Cuando se aproxima el momento de la
ovulacin el oviducto despliega una movilidad creciente, en forma tal que se aproxima a la
superficie del ovario. El vulo de los mamferos es liberado como el de la rana,
directamente en la cavidad corporal o celoma, aun cuando la distancia del ovario a la
abertura del oviducto es considerablemente menor. Los cilios de la superficie interna del
oviducto juegan un importante papel en el transporte a lo largo de la trompa de los vulos
ovulados. La motilidad peristltica creciente del oviducto asegura su paso al tero. La
fertilizacin en los mamferos es interna y sucede generalmente en el oviducto. Despus de
la ovulacin el folculo ovrico colapsado se retrae y el espacio es llenado por clulas que
forman un cuerpo slido, el cuerpo progestativo o cuerpo lteo. En ausencia de preez el
cuerpo lteo aumenta de tamao por un tiempo, pero finalmente degenera y un nuevo
folculo ovrico comienza a crecer en alguna otra regin del ovario. Este nuevo folculo
crece, desarrolla la cavidad central o antrum, forma un estigma y finalmente tiene lugar una
nueva ovulacin. Este ciclo se repite regularmente, pero si el vulo es fecundado y
comienza la preez, el cuerpo lteo se mantiene y el ciclo ovulatorio se suspende hasta
despus del parto.

REGULACION HORMONAL DE LA OVULACION

Es razonable preguntar el origen de los mecanismos de control de sucesos tan ntimamente
integrados y tan bien adaptados a las normas de reproduccin de las ms diversas especies
animales. Muchas etapas de la ovulacin no estn bien comprendidas, y probablemente ni
siquiera conocidas. Sin embargo, algunos mecanismos de regulacin han sido analizados y
estudiados experimentalmente y justifican una descripcin.

Uno de los agentes ms importantes de regulacin de la funcin ovrica y de la ovulacin
en los animales vertebrados, es la hipfisis o glndula pituitaria. La extirpacin de esta
glndula en la rana previene la ovulacin, el ciclo se detiene y los vulos ni se producen ni
se liberan. La reimplantacin de la hipfisis o- la inyeccin de extractos de la glndula a un
animal hipofisectomizado induce, no obstante, la ovulacin. Esto es cierto en muchos otros
vertebrados. La influencia de la hipfisis es entonces, necesaria para la ovulacin. De las
hormonas gonadotrficas depende la funcin ovrica y la ovulacin en los vertebrados, y el
factor primario para establecer el ciclo ovrico e inducir la ovulacin, parece ser la
secrecin regulada de estas hormonas por la hipfisis. Corresponde averiguar la relacin
entre las hormonas gonadotrficas y los acontecimientos especficos del ciclo ovrico y la
ovulacin en los mamferos.

Hay dos procesos diferentes en el ciclo ovrico de los mamferos: 1) un crecimiento del
folculo que culmina en la ovulacin, y 2) la formacin del cuerpo lteo. Esos dos procesos
estn, segn se cree, controlado por tres hormonas gonadotrficas producidas por la
hipfisis.

Una hormona llamada foliculoestimulante (HFE) induce el crecimiento folicular ovrico en
las hembras inmaduras o hipofisectomizadas de los mamferos como tambin en el animal
adulto intacto. Una segunda hormona, luteinizante (HL), cuando acta sola tiene poco o
ningn efecto sobre el tamao ovrico o el crecimiento folicular, pero cuando acta
sinrgicamente con una pequea dosis de HFE desencadena la maduracin folicular, la
ovulacin y la formacin de los cuerpos lteos. De una tercera hormona, luteotrpica
(HLT), depende la secrecin lctea y el mantenimiento del cuerpo lteo en estado funcional
secretorio.

La naturaleza rtmica de la actividad ovrica no puede explicarse en base nicamente a la
dominacin hipofisaria. La hipfisis en cambio recibe la influencia de dos hormonas
ovricas, ''estrgeno y progesterona. La relacin entre las hormonas hipofisarias y ovricas
aclara admirablemente la estrecha interdependencia de los elementos orgnicos que regulan
las funciones de reproduccin. La forma en que las dos hormonas ovricas y las tres
hormonas gonadotrficas actan recprocamente y en forma conjunta para establecer el
ritmo cclico, no es acabadamente conocida, pero se cree que ocurre de acuerdo con el
siguiente esquema general. La hormona hipofisaria HPE, especialmente con el efecto
sinrgico de una pequea cantidad de HL, estimula el crecimiento folicular v la produccin
de estrgeno en el ovario. El estrgeno actita sobre la hipfisis para estimular la secrecin
de cantidades crecientes de HL y HLT, y originar una disminucin de secrecin de HFE.
Baja estas condiciones ocurre la ovulacin y formacin de cuerpos lteos. Los cuerpos
lteos que producen la progesterona son activados y mantenidos por la HLT. Cuando los
cuerpos lteos comienzan a regresar, las cantidades de hormona ovrica son reducidas
dando por resultado que la hipfisis produce nuevamente HFE para iniciar la repeticin del
ciclo ovrico. Durante la preez, cuando el cuerpo lteo persiste debido a la presencia de un
embrin, no hay crecimiento folicular u ovulacin, y las hormonas placentarias reemplazan
a las ovricas. Este esquema es por lo menos una aproximacin de la situacin general;
cualesquiera sean las condiciones exactas hay ciertamente una relacin reciproca entre la
hip6fisis y el ovario, mediante la cual cada una de ellas ejerce un control sobre la otra para
producir un ciclo rtmico.

FOTOPERIODICIDAD SEXUAL

Es conocido que un cambio en las condiciones climticas da como resultado variaciones en
el tiempo de ovulacin de los mamferos domsticos. Animales que se llevan de uno a otro
hemisferio a travs del ecuador, ajustan su ciclo de reproduccin a las nuevas condiciones,
es decir, trastrocando invierno y verano. De la misma manera, ratas y ratones iluminados
durante toda la noche y mantenidos en la obscuridad todo el da, cambian sus hbitos y en
lugar de ovular cerca de media noche ovulan cerca de medioda. La exposicin continua a
la luz puede tener como consecuencia inhibicin de la ovulacin. Debe recordarse que
variaciones en la cantidad de luz son importantes en la regulacin de la actividad de la
gnada masculina. Parece ser que una situacin similar existe en el animal hembra. En
consecuencia, siguiendo el mismo procedimiento empleado en el estudio del testculo del
junco, se encontr que el tiempo de ovulacin en el coat puede ser anticipado en dos meses
mediante aumento cada da de la relacin luz/obscuridad. El aumento diario de la cantidad
de luz en relacin con la cantidad de obscuridad es en este caso el factor primario que
controla el tiempo de ovulacin. Esta periodicidad en la cantidad de luz que tiene efecto de
control sobre el ciclo sexual se denomina periodicidad sexual.

Experimentos con hurones y aves son tiles para el anlisis posterior de los efectos de la luz
sobre los ritmos de reproduccin.

En el hurn se ha demostrado que en adicin a la duracin de la relacin luz/obscuridad,
hay tambin un punto ptimo de longitud de onda luminosa. El estado sexual inactivo del
hurn hembra durante los meses de septiembre a febrero en el hemisferio norte es mas
fcilmente cambiado a un estado sexual activo si los animales son expuestos a 16 horas de
luz por da con longitudes de onda entre 3 650 y 6 500 angstroms. En varias especies de
aves se ha demostrado tambin que una longitud de onda luminosa produce efectos ptimos
sobre el ciclo sexual demostrado en varias aves.

El efecto de la luz sobre los ciclos sexuales no parece ser resultado de una accin directa
sobre el ovario, sino de su influencia indirecta sobre la hipfisis. La extirpacin de esta
glndula elimina cualquier efecto de aumento de luz sobre las gnadas. Los ojos son muy
importantes en este proceso (fig. 2-7). 'Panto en mamferos como en aves los ojos son la va
de recepcin del estmulo luminoso que produce la activacin sexual. Bajo circunstancias
normales, el nervio ptico es necesario para que la luz ejerza su influencia sobre la funcin
hipofisaria. La seccin de estos nervios elimina el efecto de la luz sobre el ritmo de
reproducci6n. La evidencia disponible sugiere que el estmulo de la luz inicia un reflejo
nervioso a travs de los ojos, los nervios pticos y centros cerebrales, que excita la
liberacin de las hormonas gonadotrficas y da como resultado una actividad ovrica
elevada. El mismo mecanismo es responsable segn se supone del mismo efecto sobre la
actividad testicular. Debe indicarse que la fotoperiodicidad no es caracterstica de todos los
animales. Muchos animales (el conejillo de indias y el hombre, por ejemplo) tienen ciertos
controles internos que son independientes de la luz y en cierto modo de otras condiciones
ambientales.

CONTROL NEURAL DE LA OVULACION

El sistema nervioso esta profundamente implicado en la regulacin de la actividad
hipofisaria. Se reconoce que fibras nerviosas que emanan de los ncleos hipotalmicos
progresan dentro del tallo hipofisario hasta la porcin de la neurohipfisis que esta
involucrada con funciones especiales diferentes de la mera secrecin de hormonas
gonadotrficas. No hay demostraciones satisfactorias de que el 1bulo anterior de la
hipfisis (adenohipfisis) reciba ninguna fibra desde el hipotlamo. Hay, sin embargo, una
buena evidencia que conexiones venosas (un sistema portal hipofisario) establecen una
relacin funcional entre estas dos estructuras (fig. 2-8). Esto ha sido comprobado mediante
experiencias de trasplante, las cuales muestran que antes que se establezcan funciones
gonadotrficas normales la adenohip6fisis debe establecer una relacin vascular con el
hipotlamo.

El sistema hipofisario portal provee la base estructural para la regulacin humoral de la
funcin hipofisaria.

La secrecin de HFE y HL y sus fases de secrecin que se han establecido con notable
precisin parecen ser controladas por una actividad hipotalmica neurohumoral. Centros
hipotalmicos especficos se vinculan con la estimulacin de secrecin de HFE, otros con la
secrecin de HL y otros finalmente con la inhibicin de la secrecin de HL.

Estos centros hipotalmicos, a su vez, estn afectados por diversas hormonas, circulantes,
algunas de ellas ovricas, y diversos metabolitos.

Gran cantidad de evidencias derivadas de estudios realizados utilizando estimulaci6n
elctrica, lesiones (destruccin de reas localizadas de tejido cerebral), y tcnicas qumicas,
indican que los centros hipotalmicos regulan no solamente la secrecin, sino tambin la
liberacin de hormonas gonadotrficas. Hay evidencias muy claras del control
neurohumoral de la liberacin de HL por centros hipotalmicos especficos. Un factor
liberador de hormona luteinizante (FLHL ) que acta directamente, capaz de inducir
ovulacin en ratas anovulatorias, ha sido aislado del hipotlamo de la oveja y de la vaca. Se
ha investigado tambin la existencia de un centro directamente relacionado con la
inhibicin del factor de liberacin de HL y existen indicaciones sobre existencia de un
centro para el factor
liberador de HFE.

La ovulacin sucede en condiciones normales, inmediatamente despus de la copulacin en
los conejos, hurones, gatos y algunas otras especies animales. El estmulo excitatriz en
estos animales es en parte neural, por cuanto el semen no contiene factores inductores de la
ovulacin. La estimulacin neural en relacin con la cpula no involucra los ovarios
directamente. Ovarios trasplantados privados de su inervacin normal pueden ovular; el
estmulo directo de la inervacin ovrica, por otra parte, no provoca ovulacin. El estmulo
de copulacin acta en consecuencia sobre la hipfisis para liberar una hormona
estimulante de la ovulacin. Evidencias que soportan estos hechos pueden extraerse de la
siguiente demostracin: la extirpacin quirrgica de la hipfisis de una coneja una hora
despus de la copulacin no suprime la ovulacin, mientras que la eliminacin de la
glndula inmediatamente despus de la copulacin impide la maduracin folicular y la
rotura de los folculos. En adicin a estos hechos se ha demostrado en conejos y gatos que
el estmulo elctrico del hipotlamo puede producir ovulacin. Hay buenas evidencias que
el estmulo del sistema nervioso central resultante de la excitacin de la cpula provoca la
liberacin de un neurohumor hipotalmico, el cual llegando al 1bulo anterior de la
hipfisis, estimula la secrecin de HL en cantidad suficiente para provocar la ovulacin.
Dos agentes neuroqumicos han sido implicados en este proceso (fig. 2-8) . La aplicacin
de acetilcolina a las hipfisis de ratas dan como resultado seudopreez y la inyeccin de
adrenalina en la hipfisis de la coneja induce ovulacin. En adicin a estos hechos
experimentales, la inyeccin de drogas que inhiben la actividad adrenrgica, inhiben en las
conejas la ovulacin que debe producirse consecuentemente a la cpula.

Las lesiones neurales pueden modificar el comportamiento sexual como tambin otras
funciones reproductoras. Ciertos experimentos sugieren que las lesiones neurales pueden
producir modificaciones profundas en millares de facetas del comportamiento reproductor
de una gran variedad de animales, desde los roedores hasta los primates.

Es tambin claro que muchos aspectos del papel del sistema nervioso central en la
reproduccin merecen atencin, estudio e investigaciones en el futuro.

DIAGNOSTICO DE LA GESTACION

Los estudios sobre el control de la ovulacin dieron como resultado aplicaciones practicas
para el diagnstico de la gestacin en la especie humana. Segn se ha visto, hormonas no
hipofisarias estimulan los ovarios y muchas de ellas inducen ovulacin. Durante los
primeros tiempos de la gestacin o preez, especialmente en la especie humana, aparece
una hormona en la orina que inoculada en el ratn hembra inmaduro estimula la
maduracin de los ovarios. Esta hormona gonadotrfica es elaborada en el corion formado
por el embrin en desarrollo.
La inoculacin de orina de una mujer en gestacin en un animal inmaduro constituye la
base de una reaccin diagnstica de preez que en su forma original es conocida como la
reaccin de Aschheim y Zondek.
Una modificacin de esta reaccin en la que se utiliza la coneja como animal de
experiencia se conoce como reaccin de Friedman.
La reaccin a las hormonas gonadotrficas es una reaccin general y es por lo tanto posible
utilizar diversas especies animales para los diagn6sticos de gestacin. El sapo sudafricano
Xenopus, cuya hembra ovula luego de ser expuesta a orina de mujer embarazada, es usado
a menudo. La rana leopardo comn puede tambin ser usada. Se han planeado ensayos en
los que se utilizan peces, etc., confirmando as que cualquier especie animal puede ser
usada para reconocer la presencia de hormonas de gestacin. Estos ensayos han sido y son
de la mayor utilidad para determinar la gestacin en el primer mes siguiente a la
fertilizacin, porque el ciclo menstrual humano es muy variable.

El anlisis de la ovulacin y de sus mecanismos revela una gran interdependencia de
hechos y de factores. La hipfisis, por ejemplo, contiene las hormonas, pero un estmulo
como la luz actuando sobre la retina desencadena la liberacin de las hormonas de la
glndula. En la rana los vulos estn en el ovario completamente maduros pero esperan su
liberacin por el estmulo de una hormona hipofisaria a muy baja concentracin. Estos
conceptos pueden servir de ejemplo, en sentido general, de la premisa que el desarrollo
representa una sucesin de cambios en los que cada uno esta vinculado en algn aspecto al
que le precede. El resultado es una cadena de reacciones interdependientes que se extiende
desde la liberacin de las hormonas gonadotrficas hasta un organismo adulto
completamente formado.

El vulo maduro y su organizacin para el desarrollo

LA UNION del espermatozoide y del vulo en la fertilizacin inicial la compleja serie de
hechos y procesos que culminan con la formacin de un organismo adulto. Antes de
describir el proceso de fertilizacin, sin embargo, es importante analizar una de las
incognitos ms formidables y ms antiguas de la embriologa: la naturaleza ntima del
vulo virgen y su organizacin en relacin con el desarrollo de las estructuras de un adulto.
El vulo, recientemente liberado, se parece mucho a las clulas de otras partes del cuerpo.
Es cierto que presenta diferencias significativas y substanciales en la cantidad de ciertos
compuestos como los cidos nucleicos, pero no parecen existir a ese respecto mayores
diferencias cualitativas entre el vulo y las otras clulas. La constitucin del vulo es no
solamente similar a la mayora de las clulas bajo el punto de vista fisicoqumico, sino que
adems su apariencia es tan simple que decepciona. No hay en el vulo nada que permita
presuponer la compleja estructura del animal adulto. Sin embargo, cuando se examina la
potencialidad de sus diferentes partes para desarrollar distintas estructuras debe reconocerse
y admitirse que entre ellas hay enormes diferencias.

ARQUITECTURA DEL VULO MADURO

Todos los vulos estn rodeados por una membrana celular o plasmalema. Con muy pocas
excepciones llevan una membrana adicional, producida en el ovario, que se conoce como
membrana vitelina; en los mamferos se conoce como membrana o zona Pelacida (figs. 3-7
y 3-13). Pueden presentarse otras membranas secundarias, secretadas por los conductos,
como el corion de los insectos o la cobertura gelatinosa de los vulos de anfibios, pero no
tienen importancia en el tema que estamos analizando. El citoplasma por su parte contiene
naturalmente varios organoides, grnulos de yema o vitelo, y a menudo grandes cantidades
de pigmento. Para el desarrollo ulterior tiene considerable importancia una capa de
citoplasma gelificado, imprecisamente definida, de aproximadamente dos a tres micrones
de espesor, que se encuentra inmediatamente por dentro de la membrana celular.
Esta capa citoplasmtica, junto con la membrana celular, se denomina cortex o capa
cortical del vulo. Su importancia ser discutida ms adelante. En la mayor parte de los
animales el cortex contiene grnulos de mucopolisacridos cuyo tamao varia de menos de
un micrn hasta aproximadamente dos micrones. Puede tambin contener cantidades
variables de pigmento. Mientras el vulo esta en contacto con las clulas foliculares,
pueden penetrar prolongaciones foliculares en la capa cortical; este hecho parece tener
importancia para determinar el carcter especfico de la capa cortical en algunos animales.
Un anticipo de organizacin en el vulo esta dado por su polaridad, ya que todos los
vulos animales tienen estructura polar.
Se reconocen dos polos opuestos que se denominan polo animal y polo vegetativo, y la
lnea imaginaria que une ambos polos se denomina eje mayor o eje animal-vegetativo del
vulo.
Puede a menudo reconocerse la polaridad por la disposicin de sus inclusiones
citoplasmticas. En muchos vulos la yema o vitelo no esta distribuida uniformemente y a
menudo su densidad aumenta del polo animal al polo vegetativo con los correspondientes
cambios estructurales. En algunos casos hay diferencias substanciales en el grado de
pigmentacin; en muchos anfibios, por ejemplo, la superficie de la regin animal del vulo
est fuertemente pigmentada mientras que la regin vegetativa no tiene pigmento.
En adicin a una polaridad evidente, muchos vulos de especies animales poseen simetra
bilateral. Esta puede manifestarse en la forma del vulo, como en los insectos, o, como
sucede en otros casos, no se evidencia hasta despus de la fertilizacin (fig. 3-1, B).
Por diversas razones puede creerse que la polaridad se origina durante el crecimiento del
vulo en el interior del ovario. Es en consecuencia, importante investigar hasta que punto
la polaridad u otra evidencia de organizacin, se encuentra presente en el vulo antes de la
fertilizacin y hasta donde esta condicin es ndice de potencialidad de desarrollo o
predestinacin.
El pigmento, especialmente en los anfibios, es un indicador fcilmente reconocible de
asimetra citoplasmtica (fig. 3-1, C). No esta claro, sin embargo, que la distribuci de
pigmento en el vulo de anfibio predetermine destinos de desarrollo. El pigmento se
localiza en mayor cantidad en la periferia del hemisferio animal del vulo por dentro de la
capa ms profunda de la corteza y no se extiende hacia el hemisferio vegetativo. No hay
evidencias de una diferencia de otros componentes citoplsmicos en el vulo de rana, en
correspondencia con esta diferencia, si bien es interesante notar que durante las etapas de
desarrollo inmediatamente anteriores al depsito de los grnulos de vitelo en el oocito, la
mayor concentracin de cido ribonucleico coincide con la mayor localizacin de
pigmento. La distribucin de pigmento en algunos moluscos y en los vulos del erizo de
mar tiene cierto valor de diagnstico presuntivo que ser estudiado ms adelante. Puede ser
til mientras tanto hacer una breve revisin de otros signos de organizacin en el interior de
los huevos no fertilizados.
La localizacin selectiva de componentes citoplsmicos, como indicio de organizacin,
puede ser analizada, por ejemplo, en moluscos, anlidos y ascidias (figura 3-1). En la
mayor parte de los moluscos la porcin superficial de la clula vulo est formada por una
capa delgada de citoplasma libre de vitelo. Pueden observarse engrosamientos locales de
esta capa en la vecindad de los polos animal y vegetativo formando polo-plasmas (fig. 3-1,
A). Tambin hay evidencias de organizacin interna.

En ciertos moluscos gasterpodos, por ejemplo, durante las fases de maduracin previas a
la fertilizacin se reconocen movimientos de material ovular y como resultado de los
mismos, estas substancias se concentran en determinados territorios dentro del vulo. Estos
procesos, denominados de segregacin ooplsmica, determinan como consecuencia que
diferentes partes del vulo tengan en mayor o menor grado diferencias de composicin
citoplsmica. El glucgeno, por ejemplo, tiende a desplazarse y concentrarse hacia el polo
animal; el cido ribonucleico tiene tambin mayor concentracin en el polo-plasma en
relacin con el resto del citoplasma. La vitamina C vinculada presumiblemente a los
cuerpos de Golgi, tiende a concentrarse en una banda anular cerca del ecuador del vulo.
Estos desplazamientos y acumulaciones selectivas de componentes citoplsmicos se
suceden en forma continua durante las primeras etapas del desarrollo, pero es de notar que
estos procesos tan importantes para el desarrollo posterior, se encuentran ya encaminados
en el vulo sin fecundar.
En los vulos de animales superiores hay escasa evidencia de distribucin asimtrica de
componentes citoplsmicos. En los vulos de los mamferos se aprecia una fuerte
concentracin de cido ribonucleico en uno de los polos. No hay razn, sin embargo, para
suponer que el esquema de distribucin de pigmento o quizs otros sugestivos esquemas de
distribucin representen una forma de preorganizacin en la mayor parte de los huevos de
las especies animales. De cualquier manera, esta perfectamente aclarado que los vulos de
las especies animales no se pueden considerar como sistemas completamente homogneos.
Tanto la polaridad como la simetra consideradas aisladamente, son difciles de explicar sin
aceptar que existen diferencias locales en la composicin interna del vulo que se
manifiestan en algunas especies antes que en otras.

ORGANIZACION DEL HUEVO
Hay dos posibilidades extremas a considerar con respecto a la organizacin funcional del
huevo. Puede ser que cada rgano del adulto este representado en el huevo por alguna
composicin qumica o fsica especial, o que el huevo contenga protoplasma sin
organizacin que se cambie gradualmente en estructuras organizadas en el embrin
formado. El primer concepto (preformacin) implica un mosaico o un esquema de
substancias formadoras de rganos de tal naturaleza que cada una determina cada uno y la
totalidad de los rganos. El segundo concepto (epignesis) esboza la idea de un
protoplasma sin organizacin que requiere la accin o interaccin de varios agentes para
que lo conviertan en las varias estructuras de un organismo adulto.

Antes de considerar las deducciones adicionales de estas dos posibilidades es de utilidad
revisar el comportamiento experimental del huevo de erizo de mar. Una raza local dentro
de las especies de erizos mediterrneos muestra polaridad definida que se reconoce por una
banda pigmentada, compuesta de gran nmero de pequeos puntos rojos (fig. 3-2). Las
partes esenciales para el anlisis de este huevo son la delgada corteza exterior, el
protoplasma interno fluido y la banda roja de grnulos de pigmento, la banda pigmentada.
El ncleo en esta clula puede encontrarse en cualquier posicin.

La fig. 3-2 ilustra las primeras etapas del desarrollo del huevo de erizo de mar. La banda de
pigmento proporciona un marcador natural para una regin especfica del huevo no
fertilizado; observando esta banda durante el desarrollo, es posible determinar que elemento
se desarrolla a partir del protoplasma de cada regin especfica. El mtodo para referencia
de estructuras se indica en la figura 3-2. La banda de pigmento se encuentra
inmediatamente por debajo del ecuador del huevo, hacia el polo vegetativo. La primera
segmentacin a lo largo del eje animal-vegetativo divide la banda de Pigmento en dos
partes, y durante todas las etapas de la segmentacin, esta banda se mantiene en la misma
posicin en relacin con los polos animal y vegetativo.

En los momentos finales de la etapa de ocho clulas, la banda de pigmento es todava
visible, si bien esta repartida entre las cuatro clulas inferiores del hemisferio vegetativo.
Mantiene su posicin inmediatamente por debajo del ecuador durante la etapa de blstula,
que consiste en una capa simple de clulas que forman una pared de contencin a una
esfera llena de lquido. La fig. 3-2 muestra un corte de la blstula que interesa la banda
pigmentada y esboza el destino de la banda de pigmento durante el proceso de gastrulacin.
Para nuestro objetivo esta etapa puede ser definida como proceso de plegamiento que
convierte la blstula monoblstica en una gstrula diblstica formando el intestino primitivo
o arquenteron. Durante la gastrulacin las blastmeras que contienen el pigmento se
repliegan para formar las paredes del arquenteron, el cual forma el aparato digestivo de la
larva (plteo). Este intestino primitivo esta compuesto de endodermo, y por esa razn
puede afirmarse que la regin del huevo que contiene la banda de pigmento esta destinada
en el desarrollo normal a convertirse en el endodermo de la larva plteo.

El desarrollo de la regin del extremo del polo vegetativo puede ser seguido de la misma
manera. Esta regin se conserva en la misma posicin relativa durante la segmentacin. En
el estado de blstula es todava una regin sin pigmento por debajo de la banda pigmentada.
Al comienzo de la gastrulacin las blastmeras no pigmentadas se desplazan hacia la
cavidad de la blstula tomando posicin en ambos lados del arquenteron en formacin.
Estas blastmeras dan origen al mesodermo que forma finalmente el esqueleto de la larva.
En consecuencia la regin vegetativa del huevo forma el mesodermo de la larva.
La regin por encima de la banda pigmentada puede tambin ser seguida directamente
durante la etapa de blstula del desarrollo. Forma una masa de blastmeras en la mitad
animal de la blstula que permanecen en la parte exterior formando ntegramente la capa
externa del embrin. El destino normal es en consecuencia ectodermo. De este modo, un
marcador natural seguido a travs de su recorrido durante un desarrollo normal permite el
anlisis de la arquitectura general del huevo y revela su organizacin en regiones, que dan
origen a las tres hojas blastodrmicas: ectodermo, mesodermo y endodermo. El destino de
cada una de estas partes se sintetiza en la fig. 3-3.
Procedimientos citoqumicos proveen otro medio de investigar el curso del desarrollo
normal. La tincin especfica de ciertos componentes citoplsmicos (mitoocondrias, por
ejemplo), ya sea por tinciones vitales o por medio de sus asociaciones qumicas con
enzimas, lpidos u otros, puede permitir investigar, de la misma manera que el marcador
natural del huevo de erizo de mar, el destino de ciertas regiones del huevo durante el
desarrollo. En las ascidias, por ejemplo, se ha demostrado que las mitocondrias y las
enzimas oxidantes asociadas se distribuyen en forma desigual dentro del huevo durante la
segmentacin.
Las mitocondrias son muy importantes en el desarrollo de los msculos (mesodermo) en los
huevos de ascidia. En consecuencia, es interesante observar que las reas formadoras de
msculo en las primeras etapas de la segmentacin contienen altas concentraciones de
mitocondrias.

CAPA CORTICAL Y ORGANIZACION DEL HUEVO

Volviendo al huevo de erizo de mar, considerado como el paradigma de la organizacin en
materia de huevos, es til revisar los datos obtenidos mediante intervenciones quirrgicas.
La microdiseccin es una tcnica mediante la cual el huevo es dividido en partes para
seguir luego el desarrollo de las partes aisladas. Es posible seccionar un vulo de erizo de
mar a la altura del ecuador con una aguja de vidrio muy fina. Realizada esta operacin, las
dos mitades separadamente cambian de forma y se redondean hasta formar dos esferas que
representan, una, la mitad animal, y otra, la mitad vegetativa del vulo original. Tal como
se ye en la fig. 3-4 cada una de estas mitades puede ser fertilizada. La mitad animal, luego
de la fertilizacin, experimenta segmentacin y se desarrolla dando una blstula estable o
permanente que se denomina dauerblastula, usando una palabra alemana. Esta mitad no
contina el desarrollo mas adelante y nunca forma endodermo. La blstula desarrolla cilios,
nada durante varios das y finalmente muere. La mitad vegetativa por su parte sufre
tambin segmentacin y forma una larva parcial que contiene un aparato digestivo
compuesto de endodermo, algo de ectodermo y un esqueleto formado por clulas
mesodrmicas. El ectodermo desarrolla cilios pero no presenta evolucin ulterior.

Ninguno de estos tipos de larva puede sobrevivir, pues a ambas les falta algo. La ubicacin
del ncleo en el vulo en el momento de la operacin no hace diferencias en este tipo de
intervenciones. Puede encontrarse en la mitad animal o en la mitad vegetativa sin que se
modifiquen los resultados; esto significa que un solo juego de cromosomas es suficiente
para iniciar el desarrollo y que un segundo juego no agrega nada ms. El experimento
confirma el comportamiento de la banda de pigmento observado durante el desarrollo del
huevo completo y muestra nuevamente que la mitad animal forma el ectodermo, pero no
mesodermo ni endodermo. La mitad vegetativa forma principalmente mesodermo y
endodermo, y puede formar algo de ectodermo.

Estas observaciones sugieren inmediatamente una pregunta. Cmo se puede establecer en
el interior del huevo la organizacin relativa a las tres capas germinativas y de que partes
del huevo depende tal organizacin? Alguna informacin pudo lograrse mediante
experimentos de centrifugacin a alta velocidad. Si un vulo no fecundado de erizo de mar
se somete a una fuerza centrifuga elevada, los grnulos de pigmento pueden desplazarse a
cualquier parte de la clula. En la fig. 3-5 la fuerza centrifuga C, C1, ha desplazado el
pigmento hacia un lado del vulo. Bajo estas condiciones el resto del material ovular se
estratifica en varias capas protoplasmticas. Los grnulos, ms pesados que el resto del
protoplasma, se mueven centrfugamente, mientras que las partculas ms livianas, como
los grnulos adiposos que contienen lpidos, se acumulan en el rea centrpeta. Las gotitas
de grasa se encuentran entonces en el polo ms liviano del vulo, los grnulos de pigmento
en el mas pesado, mientras que grnulos de diversas clases y tamaos ocupan el territorio
intermedio. El ncleo se ubica en la mitad liviana del vulo junto con los lpidos, dejando
una regin ecuatorial de protoplasma muy claro (protoplasma hialino o hialoplasma)
desprovisto de partculas microscpicamente visibles.

La centrifugacin provee un medio para desplazar fuera de su posicin original la mayor
parte de los constituyentes microscpicamente visibles del vulo. Si estos constituyentes
tienen que ser considerados para la organizacin futura del huevo, se puede sacar en
conclusin que el resultado de un vulo centrifugado debe ser una larva distorsionada. El
hecho real, sin embargo, es que un vulo de erizo de mar fuertemente centrifugado,
desarrolla, una vez fertilizado, una larva completamente normal. Otros experimentos
confirman esta observacin. Los vulos pueden ser fragmentados exponindolos a fuerzas
centrfugas elevadas. Estos fragmentos, prcticamente libres de cualquier clase de grnulo
microscpicamente visible, pueden desarrollar en una larva perfecta. En consecuencia,
segn se deduce, la organizacin del huevo depende de alguna estructura ms delicada del
protoplasma que la centrifugacin no modifica.

Una cantidad creciente de evidencias indica que la capacidad de organizacin de la clula
huevo reside en su capa cortical. La capa cortical o cortex es de una substancia
relativamente rgida, de alta viscosidad. La centrifugacin que desplaza los grnulos
contenidos en el endoplasma, no desplaza los grnulos de la capa cortical y el cortex del
vulo no se modifica por centrifugacin.

Frente a la importancia que el cortex tiene en materia de organizacin se explica el
desarrollo normal de huevos despus de desplazamientos espectaculares de los materiales
en el endoplasma. Si el cortex imparte la organizacin al vulo, la localizacin de los
elementos internos de la clula es un hecho secundario. Sugiere tambin el papel
organizador del cortex, el hecho que los elementos internos desplazados, pueden, si se
retarda la segmentacin, volver a sus posiciones normales despus de ser desplazados por la
fuerza centrifuga. Parece ser que el cortex organiza el material del huevo, de acuerdo a su
propio esquema de organizacin especifica. Entre otras cosas, la capa cortical debe tener
entonces, los factores de la organizacin del huevo, entre las substancias que dan origen a
las tres capas germinativas (fig. 3-6). As, en una representacin esquemtica, la capa
externa del hemisferio animal del vulo de erizo de mar contiene los factores responsables
de la formacin del ectodermo; inmediatamente por debajo del ecuador del vulo, contiene
una forma de organizacin de la cual depende la formacin del endodermo, y en el polvo
vegetativo una capa de protoplasma en la corteza que origina la formacin del mesodermo.

Una capa cortical esta presente en todos los vulos, incluyendo los de los mamferos (fig.
3-7). El cortex esta involucrado en muchos aspectos del desarrollo es fisiolgicamente
activo tanto en vertebrados como en invertebrados. Los mecanismos a travs de los cuales
obtiene su propia organizacin y su modo de actuar son problemas importantes para
investigar.


NATURALEZA LABIL DE LA ORGANIZACIN

Se indic anteriormente que las mitades separadas de un huevo de erizo de mar dividido a
lo largo de su piano ecuatorial desarrollan larvas defectuosas. No obstante, cuando se hace
la divisin a lo largo del eje animal-vegetativo, ambas mitades forman embriones pequeos,
pero completos (fig. 3-8). De esta manera puede obtenerse hasta cuatro embriones. Segn el
corte sea hecho paralelo, o a lo largo del eje mayor del huevo, se forma un embrin
completo a partir de un fragmento de huevo. Esta es una forma lbil de organizacin y el
huevo es a menudo llamado plstico o regulativo. Es interesante hacer notar que segn el
plan de organizacin del vulo descrito en la fig. 3-6, puede predecirse que cortes verticales
formarn un embrin entero, por cuanto las partes resultantes incluyen presumiblemente,
material cortical a partir del cual se forman las tres hojas germinativas. Existen evidencias
directas de la labilidad de organizacin del huevo.

La animalizacin o vegetativizacin del huevo de erizo de mar puede producirse por
medios mecnicos. Un experimento con mitades animal y vegetativa de vulos obtenidos
como se indic precedentemente, por corte de vulos de acuerdo al plano ecuatorial, puede
ilustrar al respecto. Si alguna de las mitades se coloca en agua de mar a la que se agrega
cloruro de litio, LiCe, se formar una larva con intestino, esqueleto y ectodermo (fig. 3-9).
Por 1o contrario, los controles, colocados en agua de mar normal, no formarn mesodermo
ni endodermo. El solo agregado de litio, en consecuencia, ha convertido la regin del huevo
que normalmente da origen a ectodermo, en formadora de cierta cantidad de endodermo y
ha efectuado la vegetativizacin del huevo. A la inversa; las regiones mesodrmica y
endodrmica pueden ser transformadas en ectodermo (animalizacin) por tratamiento del
huevo con sulfocianuro de potasio, SCNK.

No se conocen con exactitud ni claridad los mecanismos mediante los cuales actan los
agentes que animalizan o vegetativizan en forma tan significativa el esquema de
organizacin del huevo. Agentes tan diversos como litio, fenazona, cinc, derivados
sulfonados orgnicos y varias enzimas pueden producir cambios fsicos y qumicos de
diverso tipo en el citoplasma. Gran nmero de estudios sobre el huevo de erizo de mar se
han concentrado en los procesos de sntesis y abastecimiento de energa. Las observaciones
realizadas sugieren que las acciones morfogenticos de los agentes animalizantes o
vegetativizantes derivan de acciones sobre la formacin de protenas enzimticas
probablemente por medio de inhibicin directa o indirecta.

La interconversin de ectodermo, mesodermo y endodermo mediante tratamientos
qumicos, sin considerar por el momento su mecanismo, indica una organizacin original
muy lbil en el huevo de erizo de mar. Esta labilidad puede tambin reconocerse en los
huevos de otras especies de invertebrados y vertebrados. Las primeras etapas del desarrollo
de moluscos, gusanos y ascidias, sin embargo, orientan en forma definida hacia una
interpretacin basada en una organizacin estable. Revisando la bibliografa embriolgica
se trasluce en grandes rasgos la diferencia entre los huevos regulativos, como el del erizo de
mar, y los huevos en mosaico como los de los moluscos. En consecuencia, es necesario
considerar las diferencias posibles entre moluscos, gusanos y ascidias, y los huevos de otras
especies animales en materia de flexibilidad de organizacin.

En los huevos de muchos gusanos y moluscos un plasma polar especial se acumula en el
polo vegetativo (fig. 3-1, A). Tan pronto como aparece en el huevo el surco de la primera
segmentacin, el polo plasmtico se separa parcialmente del resto del huevo formando un
lbulo polar. Permanece conectado con una de las otras blastmeras, fundindose
finalmente con ella, de manera tal que todo el polo plasmtico se integra en una de las
clulas. Si se elimina completamente el lbulo polar, se obtienen embriones defectuosos a
los que les faltan ciertos rganos. Se ha podido demostrar una localizacin de material
comparable en los huevos de gusanos y de ascidias (fig. 3-1, B). Durante la segmentacin
las diversas substancias citoplsmicas quedan localizadas en diferentes blastmeras que
mediante desarrollo posterior dan origen a diferentes tejidos y rganos embrionarios.

Varios experimentos indican que en los huevo tipo mosaico, diversos tipos de protoplasma
tienen diferente potencialidad de desarrollo. Blastmeras aisladas de una blstula producen
casi exclusivamente las estructuras a las que deberan dar origen en el desarrollo normal; si
se extraen las blastmeras que contienen un tipo particular de protoplasma el embrin
carecer de ciertos rganos. Si se centrifuga uno de estos huevos inmediatamente antes de
comenzar la segmentacin, pueden obtenerse embriones en los que varios tejidos y rganos
aparecen dispuestos en forma absolutamente anormal. Es cierto, sin embargo, que se han
producido mellizos en huevos de gusano mediante tratamientos qumicos y que
intervenciones quirrgicas en huevos de ascidia muy jvenes, dan como resultado dos
fragmentos, cada uno de los cuales origina un embrin completo. La capa cortical ha
demostrado ser tan importante en los huevos de este grupo como en los otros, y se supone
que controla la segregacin ooplsmica y el esquema de segmentacin. Afirmar que el
cortex del huevo es un mosaico capaz de controlar algunos procesos del desarrollo
primario, no es necesariamente afirmar que el destino futuro de las partes del huevo y las
primeras blastmeras este fijado irrevocablemente por este mecanismo temprano. La
organognesis y la histognesis, parecen requerir factores causales nuevos e indefinidos.
Bajo cualquier circunstancia, no hay argumentos suficientes para aferrarse a la definicin
clsica de huevo en mosaico.

En primer termino, como resultado de los estudios de linajes celulares iniciado en 1878, por
el embrilogo norteamericano C. 0. Whitman, surgi la idea que los huevos tipo "mosaico"
de los moluscos gusanos y ascidias difieren fundamentalmente de los huevos "regulativos"
del erizo de mar y de la rana, teniendo en cuenta la prelocalizacin en el huevo de
territorios o partes embriolgicas. En la primer dcada de este siglo, cuando E. B. Wilson y
E. G. Conklin demostraron que las mitades separadas de huevos de moluscos y ascidias se
desarrollan con defectos especficos, pareci justificarse una distincin neta entre huevos en
mosaico y regulativos. Sin embargo, un estudio mas completo y la mejor comprensin del
papel fisiolgico de la corteza y de la importancia de substancias citoplsmicas en la
diferenciacin logrados en los ltimos anos barrio la distincin entre el huevo en mosaico
de los moluscos y el huevo regulativo de los batracios, al punto que no parece razonable
que exista una diferencia fundamental entre los dos tipos de huevos. La diferencia parece
ser solamente temporal. El modo de desarrollar y el mecanismo de desarrollo en un huevo
de tipo mosaico no parece ser diferente o especial, sino que este tipo de huevo pierde la
flexibilidad de organizacin en una etapa mas temprana de lo que lo hace el huevo
regulativo. La diferencia fundamental entonces entre un huevo en mosaico y un huevo
regulativo estriba, pues, en el periodo o momento del desarrollo en el cual la capacidad del
huevo de responder a influencias exteriores se restringe y las regiones del huevo quedan
determinadas para diferenciarse de acuerdo a ciertas lneas.

ORIGEN DE LA POLARIDAD DEL HUEVO

Se indic anteriormente que ciertos huevos tienen una evidente polaridad aun antes de ser
fertilizados. El origen de esta polaridad no esta aclarado completamente, y es interesante
investigar si los huevos estn polarizados desde su origen o si algn factor o factores
ambientales les impone una polaridad antes de la ovulacin.

El huevo del alga marrn Fucus, permite obtener considerable informacin sobre los
factores que determinan la polaridad (fig. 3-10). En el momento en que el huevo de Fucus
es liberado en agua de mar no hay signos de polaridad. La primera indicacin aparece
despus de la fertilizacin, cuando en uno de los polos (fig. 3-10) , aparece una
protuberancia. Esta formacin se denomina protuberancia rizoide, porque parte de su
protoplasma formar estructuras delgadas que semejan raicillas. El protoplasma del
hemisferio opuesto forma la mayor parte del tallo foliceo del alga joven. En esta forma se
establece inmediatamente despus de la fertilizacin una polaridad rizoide-tallo.

El anlisis de los factores que contribuyen a la polarizacin del huevo del Fucus muestra
que es determinado por la direccin de la luz incidente. De la misma manera, la polaridad
de muchos tipos de huevo se establece por la accin de la luz. Otros experimentos
realizados sobre huevos de Fucus revelan un fenmeno ms general que es conocido como
el efecto de grupo. Cuando cinco huevos de Fucus se mantienen en la obscuridad, forman
un grupo cerrado (fig. 3-11); en ese caso se determina en cada uno polaridad de tal manera
que la protuberancia rizoide en todos los huevos se dirija hacia el centro donde convergen
los otros rizoides. Cuando se les coloca dispersos, estos huevos desarrollan rizoides al azar,
sin relacin con sus vecinos, pero cuando se les aproxima acta un factor desconocido que
determina la polaridad de cada uno de ellos hacia el centro del grupo. Experimentos
adicionales revelan que la polaridad del huevo de Fucus es determinada por un pH
diferencial o por una diferente concentracin de CO, (fig. 3-12). En consecuencia,
gradientes qumicos pueden inducir polaridad en los huevos. Como veremos mas adelante,
la polaridad celular puede vincularse a una especie de "relacin de contacto" con otras
clulas. Este hecho combinado con el reconocimiento de que las membranas celulares son
estructuras extraordinariamente activas; capaces de funcionar como mecanismos de
transporte de material hacia dentro o fuera de las clulas, sugiere que una transferencia de
material de una clula a otra puede jugar un papel importante en el establecimiento de
polaridad. El oocito se encuentra en ntimo contacto con las clulas foliculares que lo
rodean, y las microvellosidades de ambos, oocito y clulas foliculares, se encuentran en
intima relacin (figs. 3-7 y 3-13).


Es posible que el paso de materiales, incluso de grandes molculas, de los alrededores hacia
el interior del oocito en desarrollo, pueda tener importancia para su polaridad. En la
mayora de los casos la polaridad de un vulo se determina probablemente mientras se
encuentra todava en el ovario. Si ocurre como consecuencia de un tipo de efecto de grupo,
de gradientes qumicos diferenciales dentro del mismo ovario, del paso de materiales al
interior del oocito a travs de la membrana, o de una combinacin de estos y de otros
mecanismos an no conocidos, constituye tema para futuras investigaciones.

MELLIZOS Y DUPLICACION DE LAS ESTRUCTURAS

La posibilidad de que ocurran duplicaciones o desdoblamientos en el desarrollo
embrionario es otra evidencia de la naturaleza lbil de la organizacin del huevo. Sin entrar
a considerar el mecanismo, el fenmeno de duplicacin exige una organizacin lbil.
Mellizos idnticos pueden resultar de la divisin de un huevo simple o de su posterior
duplicacin. Es relativamente fcil aceptar este punto, por cuanto es posible crear dos
organismos separados mediante la divisin quirrgica de un huevo.

Una duplicacin menos completa es la que ocurre en los mellizos siameses de los
vertebrados, en los que los dos embriones quedan unidos por algunos puntos. Duplicacin
menos completa aun puede dar como resultado dos cabezas unidos a un solo cuerpo o la
inversa. Algunos animales desarrollan miembros inferiores dobles o aun triples.
Finalmente, partes de una estructura, como un dedo, por ejemplo, pueden desdoblarse
durante el desarrollo para dar dos o ms estructuras.

En algunas especies animales no es rara la duplicacin de la regin ceflica, incluso en un
ambiente normal (fig. 31-14). En otras especies, el armadillo, por ejemplo, cada embrin se
divide normal y regularmente, en una etapa temprana de su evolucin para dar cuatro
embriones completos normales. Este proceso de replicacin es, por lo tanto, tan normal
como anormal.

Pueden producirse duplicaciones por alteraciones profundas del medio, por ejemplo, como
enfriamiento, radiaciones o tratamientos qumicos. Es necesario, sin embargo, exponer los
huevos a estos tratamientos mientras se encuentran en una etapa lbil de su desarrollo.
Cualquier agente capaz de retardar drsticamente o detener temporalmente el desarrollo
puede producir este efecto, aun cuando, en condiciones normales, la gemelaridad y las
duplicaciones no son necesariamente el resultado de influencias ambientales adversas. En la
especie humana, por ejemplo, la duplicacin de uno o ms dedos, la polidactilia, se hereda
como gen dominante.

Los compuestos qumicos ejercen generalmente un efecto diferencial sobre los huevos.
Algunas regiones son afectadas mucho ms profundamente que otras. Por ese motivo, si
una regin es gravemente afectada y las regiones vecinas a ambos lados son ligeramente
retardadas o alteradas, los dos lados pueden continuar su desarrollo y formar un embrin
cada uno de ellos. Este es un tipo de desdoblamiento inducido por tratamiento qumico (fig.
3-15).

Todos los rganos, en un momento de su desarrollo, atraviesan fases en las que presentan
alguna forma de labilidad en el desarrollo. Por eso es posible que la duplicacin de una
extremidad inferior pueda ser inducida por tratamiento con un agente lesivo, siempre que
este agente acte sobre el miembro en ese momento crtico de su desarrollo.

Las consideraciones precedentes significan que a lo largo del desarrollo la determinacin de
las diferentes estructuras es lbil, como lo es la determinacin dentro del huevo. Cuando un
miembro se inicia en el embrin, debe ser lo suficiente lbil como para poseer la capacidad
de dividirse en dos miembros. El fenmeno de formacin de mellizos ilustra,
especialmente, sobre la posibilidad general del desarrollo que comienza en el huevo y se
extiende hasta la formacin de estructuras especficas.

Los mellizos y la duplicacin de estructuras nos permiten generalizaciones a especies o
formal biolgicas que no son susceptibles de tratamiento experimental. Los experimentos
con vulos o huevos, o embriones humanos, son muy raros pero la presentacin espontanea
y natural de mellizos idnticos y de mellizos siameses, sugiere que la organizacin del
huevo y del vulo humano es comparable a la del huevo de erizo de mar. La posibilidad
que esto sea realmente as es afianzada por la demostracin de que en el ratn, la rata y el
conejo, la divisin y separacin de un huevo por medios mecnicos o qumicos segn el
primer plano de divisin, da origen a dos embriones normales. Estos huevos de mamfero
deben poseer la misma labilidad de organizacin en las primeras etapas, revelada por
experiencias similares sobre erizo de mar.

En aos recientes varios compuestos orgnicos naturales y sintticos usados por motivos
teraputicos o como anticonceptivos se han relacionado con nacimientos humanos
mltiples. Estos compuestos actan generalmente sobre el mecanismo de la ovulacin.
Algunos agentes esteroides inhiben la ovulacin por interferencia con los procesos
hipotalmicos que gobiernan la sntesis y la liberacin de las gonadotrofinas.

Otros inhibidores de la ovulacin, principalmente combinaciones de progesterona y
estrgenos, actan primariamente suprimiendo el crecimiento folicular, aun cuando hay
evidencias que suprimen tambin la hormona luteinizante, HL. Con considerable xito se
han usado hormonas esteroides para activar el mecanismo ovulatorio en mujeres no
ovulatorias y en consecuencia estriles. Estos estrgenos promotores de la ovulacin
parecen estimular la liberacin de HL, incrementar la sensibilidad ovrica a la HL
endgena, o ambas cosas a la vez. Partiendo de la premisa que la accin de los agentes
estimuladores o inhibidores de la ovulacin es promover o suprimir respectivamente el
desarrollo folicular, parece probable que los nacimientos mltiples que se observan luego
de tratamientos con estimuladores o supresores de los inhibidores de la ovulacin son el
resultado de la liberacin y fertilizacin de ms vulos que los usuales en Lugar de la
duplicacin de un huevo simple. El huevo humano es, sin embargo, capaz de desarrollarse
en varios embriones luego de una separacin qumica de las blastmeras, y es
perfectamente concebible que en algn momento pueda suceder un fenmeno de este tipo.

DIFERENCIAS CITOPLASMICAS REGIONALES Y GRADIENTES

No se ha logrado una comprensin completa de las causas y de los mecanismos que
originan la organizacin del huevo, pero las varias teoras que se esbozaron como
explicacin, merecen un breve comentario.

Las diferencias citoplsmicas regionales del huevo deben ser interpretadas como
diferencias cualitativas en la composicin qumica de las partes que lo integran. El destino
de una porcin o parte del huevo durante el desarrollo puede ser determinado por la
naturaleza de los materiales contenidos en esa parte del huevo. Estos materiales son a
menudo denominados substancial- morfogenticas, aun cuando este termino es genrico y
en .realidad no define nada. Las diferenciaciones regionales del citoplasma pueden
relacionarse o vincularse a la reunin de materiales especficos que hacen que esa parte del
huevo desarrolle de una manera especifica. Debe recordarse que es evidente una alta
organizacin en huevos de ascidias, anlidos y moluscos, y que en estas formas animales, el
citoplasma esta regionalmente diferenciado desde el comienzo. Si en el caracol se extrae el
1bulo polar, la larva resultante no tiene estructuras mesodrmicas. Puede deducirse, en
consecuencia, que el lbulo polar contiene materiales que son esenciales para la formacin
de estas estructuras mesodrmicas. Este argumento gana fuerza si se observa que en
algunos ctenforos ciertas clulas que contienen grnulos, localizados en la capa cortical
del huevo, no pueden ser extradas sin que se produzcan defectos especficos en el
desarrollo ulterior. Recurdese que la capa cortical esta directamente comprometida en la
organizacin precoz del huevo. El papel limitado del 1bulo polar y de otras blastmeras
que se identifican en los primeros estados de desarrollo nos lleva a una interpretacin
basada en diferencias cualitativas del citoplasma ovular.

Otra interpretacin de la organizacin del huevo se deduce de la idea de los gradientes. Los
experimentos con huevos de erizo de mar demuestran que los hemisferios animal y
vegetativo difieren substancialmente en su capacidad de desarrollo. La diferenciacin
regional del citoplasma en las primeras etapas coincide aparentemente con el eje animal-
vegetativo del huevo. Una interpretacin de la organizacin del huevo de erizo de mar se
basa en diferencias cuantitativas en el citoplasma (fig. 3-16). Una hiptesis de dos factores
con respecto a la organizacin del huevo considera que desde las primeras etapas hay dos
gradientes. Segn este concepto, un gradiente animal, cuyo centro esta en el hemisferio ani-
mal, y un gradiente vegetativo, con centro en el hemisferio vegetativo, son requisito
indispensable para el desarrollo del erizo de mar. Estos gradientes se basan en diferencias
fisicoqumicas. Se piensa que sistemas metablicos opuestos tienen su centro de mayor
intensidad en los polos opuestos del huevo y ejercen su efecto en cantidad decreciente a lo
largo del eje animal-vegetativo. La interaccin gradual de estos sistemas antagnicos,
soporta todo el desarrollo normal. La ablacin de los hemisferios animal o vegetativo da
como resultado una larva defectuosa, mientras que la separacin segn el eje meridional
que conserva el sistema equilibrado de gradientes da origen a dos embriones normales. De
acuerdo con este concepto de gradientes, la influencia animalizante o vegetativizante de
varios agentes qumicos dan como resultado la represin de los sistemas metablicos que
derivan de los gradientes opuestos y, en consecuencia, resulta el desarrollo desordenado de
uno de los gradientes.

Como se vera mas adelante los conceptos de diferencias cualitativas y cuantitativas del
citoplasma del huevo no se excluyen entre si. Bajo cualquier circunstancia, sea cual sea la
organizacin fundamental del huevo, se necesita un estmulo para convertir esta
organizacin en las estructuras del adulto. Esta estimulacin es el proceso de activacin, el
comienzo del desarrollo, el cual es normalmente inducido por el espermatozoide.






Fertilizacin: naturaleza del estmulo para el desarrollo

LA UNIN del espermatozoide y del vulo inicia el proceso del desarrollo embriolgico.
La accin del espermatozoide sobre el vulo estimula a este ltimo para desarrollar su
organizacin; por lo tanto, la fertilizacin ejerce funciones de activador sobre el vulo. La
adicin de cromosomaspaternos es otro aspecto totalmente diferente.

En este captulo dedicaremos ms atencin a los problemas de activacin, que a los
aspectos genticos de la fertilizacin.

VIABILIDAD DEL VULO Y DEL ESPERMATOZOIDE

El tiempo de vida del vulo y del espermatozoide es muy limitado. La duracin de la vida
del vulo y la de su capacidad de fertilizacin varan segn la especie animal que se
considere. La mayor parte de los vulos de invertebrados y de los de vertebrados acuticos
deben ser fertilizados casi inmediatamente despus de la ovulacin. Es muy difcil
establecer el lapso durante el cual un vulo puede ser fertilizado despus de haber sido
liberado del ovario, pero en general se puede limitar aproximadamente a 24 horas. Este
tiempo no refleja necesariamente el perodo que el espermatozoide necesita para recorrer el
aparato genital de la hembra. En el ratn y en el criceto, por ejemplo, el espermatozoide
puede llegar al oviducto y fertilizar el vulo a los pocos minutos de ser puesto en la vagina.

Es relativamente fcil determinar la viabilidad del espermatozoide mediante evaluacin de
la motilidad o de la motilidad potencial, pero debe hacerse notar que el lapso de vida de un
espermatozoide no es un ndice de su poder de fertilizacin. Un espermatozoide puede ser
activo y aparentemente normal y sin embargo, ser incapaz de fertilizar un huevo. Los
espermatozoides del erizo de mar pueden vivir varios das pero su capacidad de
fertilizacin se pierde en unas 12 horas. Tambin se mide en horas la conservacin de la
capacidad de fertilizacin de un espermatozoide de mamfero en el aparato genital de la
hembra. El rpido envejecimiento de ambos, el espermatozoide y el vulo, impone severas
exigencias, en cuanto han sido liberados, para que se logre fertilizacin. Por el mismo
motivo no debe sorprender que en algunas especies de animales marinos el desove de la
hembra estimule la liberacin de espermatozoides por parte del macho. Esta situacin
aumenta la probabilidad de lograr la fertilizacin al asegurar que la liberacin de vulos y
espermatozoides se .realice en el agua casi simultneamente. En otras especies la emisin
simultnea de gametos es estimulada por la luz o la falta de luz, corrientes de agua u otros
factores ambientales. Se cree que la autoinactivacin de los espermatozoides por sus
propios extractos, prolonga la vida de los espermatozoides mantenindolos en estado
quiescente hasta que son activados por la presencia del vulo. Este mecanismo hace menos
asombrosa la supervivencia de los espermatozoides del murcilago en el aparato genital de
la hembra durante el periodo invernal de hibernacin, o la retencin prolongada de
espermatozoides en los aparatos reproductores masculinos y femeninos de peces y anfibios
sin perdida de motilidad ni de capacidad de fertilizacin.

El tiempo de vida de un espermatozoide y su capacidad o poder de fertilizacin es funcin
de un nmero de variables, muchas de las cuales son todava desconocidas. Una variable
conocida es la concentracin del esperma. Los espermatozoides deben encontrarse
concentrados en una suspensin espesa, para sobrevivir por un tiempo apreciable; si se los
diluye con cualquier lquido pierden su capacidad de fertilizacin. Otro factor importante
en la supervivencia del espermatozoide es la concentracin de hidrogeniones del medio; si
el pH del medio es alcalino el espermatozoide se activa, pero gasta sus reservas de energa
y muere ms pronto.

La inseminacin artificial es una prctica comn en animales domsticos y a travs de
estudios conducidos por veterinarios y zootecnistas se ha obtenido gran caudal de
informaci6n sobre metabolismo de los espermatozoides. Mientras permanecen
concentrados en sus propios lquidos seminales, los espermatozoides se mantienen activos
por varias horas, y para prolongar su actividad se han ideado varios lquidos artificiales. A
travs de estudios de inseminacin artificial se identific como otro factor de importancia,
la temperatura a la cual el espermatozoide debe ser mantenido. Aun los espermatozoides de
los animales de sangre caliente y en ms tiempo a baja temperatura. La forma de enfriar
tiene importancia; a ese respecto, ha sido mencionada la importancia del pH o
concentracin de hidrogeniones del medio. La concentracin de bixido de carbono es
tambin importante. El espermatozoide produciendo bixido de carbono (CO2) tiende a
reducir su propia actividad, prolongando de esta manera su vida. Se reconoce que la edad
del espermatozoide es un factor que determina si la fertilizacin ser o no normal. La
concentracin es tan importante para la fertilizacin como para la supervivencia de los
espermatozoides. Si el nmero de espermatozoides por unidad de volumen cae por debajo
de ciertos limites, la fertilizacin no tiene lugar, aun cuando estn presentes millones de
espermatozoides.

Para la prctica actual de la fecundacin artificial en los mamferos, los espermatozoides se
recogen en un tubo de goma bajo la forma de una vagina artificial. Despus de recoger el
semen se enfra gradualmente hasta una temperatura de aproximadamente 5C para su
conservacin o su envi. El semen puede ser inoculado en el oviducto o en el tero de la
hembra, previa dilucin, y la fertilizacin debe efectuarse dentro de la semana de obtenido
el eyaculado. En los ltimos aos se han logrado xitos notables, manteniendo viables
espermatozoides de mamferos y de aves a temperaturas extremadamente bajas. El semen al
que se le ha agregado glicerina en concentraciones del 10 al 20 por ciento, se ha
almacenado por perodos variables a temperaturas de 79 a 196C. Espermatozoides
de toro se han conservado exitosamente de esta manera, por periodos de seis aos. La
inseminacin artificial con espermatozoides descongelados despus de haber sido
conservados por congelacin intensa ha dado como resultado nacimientos de carneros
viables en gran nmero de animales. Se conocen muchos casos de embarazo en mujeres
inseminadas con espermatozoides tratados de esta manera. La interminacin artificial tiene
gran importancia econmica y significacin clnica. La economa de esta prctica puede
destacarse citando un caso en el cual con un solo carnero se lograron 2 500 corderos en una
sola estacin de cra. Los conocimientos adquiridos mediante el estudio de la biologa del
espermatozoide y la practica de la inseminacin artificial tienen en medicina humana
importancia clnica. La inseminacin artificial se ha practicado, en numerosas ocasiones, en
matrimonios sin hijos por infertilidad parcial o esterilidad total del hombre.



SECUENCIA DE LA FERTILIZACION

Es caracterstico de la reproduccin en todas las especies, la liberacin de un nmero de
espermatozoides excesivo en relacin al nmero de vulos. La eyaculacin de un hombre
frtil normal, por ejemplo, contiene un total aproximado de 350 millones de
espermatozoides. Si la concentracin es menor de 60 millones de espermatozoides por
milmetro cbico o la cantidad total es de 150 millones o menos, la capacidad de
fertilizacin es drsticamente reducida. El exceso de espermatozoides es, entonces, solo un
despilfarro aparente, por cuanto guarda relacin con la capacidad de fertilizacin. Las
razones para que esto sea as, no estn perfectamente claras. Es cierto que el ambiente que
los rodea, incluyendo el interior del aparato genital de la hembra, es a menudo agresivo y
que millones de espermatozoides mueren sin haberse siquiera aproximado al vulo. El
nmero de espermatozoides que finalmente llega al lugar de fertilizacin, aun en animales
con fertilizacin interna, es impresionantemente bajo. En la rata, por ejemplo, aproxi-
madamente 70 millones de espermatozoides son eyaculados en la copula, pero 12 horas
despus, solo pueden encontrarse menos de 50 espermatozoides en el sitio de fertilizacin
en el oviducto. En algunas especies animales inferiores, se ha sugerido la teora de que el
vulo emite una substancia que atrae y gua el espermatozoide hacia el vulo
(quimiotaxis) pero las evidencias experimentales que apoyan esta teora no son fehacientes.
Los movimientos del espermatozoide se realizan segn parece al azar, y la unin efectiva
del espermatozoide y el vulo es el resultado de encuentros casuales, poco frecuentes en el
caso de animales que desovan en mar abierto, y muy frecuentes en los animales con
fecundacin interna. El gran nmero de espermatozoides en relacin con el nmero de
vulos favorece la probabilidad del encuentro fortuito entre un vulo y un espermatozoide
(fig. 4-1). Sin tener en cuenta cualquier otro significado, el nmero desproporcionado de
espermatozoides es por estas razones muy necesario para aumentar las probabilidades de
fertilizacin.

Hay considerable evidencia que en algunas especies animales (equinodermos, moluscos,
anlidos, tunicados y vertebrados) el vulo esta provisto de un mecanismo que hace que el
espermatozoide se adhiera a su superficie.

Esta substancia qumica se demuestra mejor en el erizo de mar (fig. 4-2). La capa
gelatinosa del vulo de erizo de mar contiene una glucoprotena formadora de gel con un
peso molecular de aproximadamente 300 000.

Esta substancia posee la propiedad de originar la adhesin o aglutinacin de los
espermatozoides de su propia especie, y en consecuencia, en presencia de vulos o de agua
en la que estos se mantuvieron, los espermatozoides de una especie animal no se adhieren o
penetran en los vulos de otras especies. Esta especificidad y el descubrimiento de la
aglutinacin de los espermatozoides de algunas especies de animales marinos despus de la
adicin del sobrenadante de una suspensin de vulos de la misma especie, son los que
permitieron a F. R. Lillie formular hace 50 aos la primera teora moderna sobre el tema.
Lillie denomin a la substancia, aglutinante fertilizina _y le asign un papel principal en su
teora de la fertilizacin, basada en analogas inmunolgicas. Segn la versin moderna de
esta teora, la fertilizina en el agua donde han estado vulos es multivalente, y cada sitio
molecular adhiere a un espermatozoide. La fertilizina en la capa de gelatina origina nor-
malmente una unin especfica de especie al espermatozoide. Hay evidencias que la
fertilizina se encuentra tambin ubicada en la membrana plasmtica del vulo y que acta
como un receptor pare la antifertilizina, protena cida localizada en la superficie del
espermatozoide. Es la unin de la fertilizina con la antifertilizina la que explica la fijacin
inicial del espermatozoide y constituye el acontecimiento funcional de la fertilizacin. La
reaccin entre las dos molculas es considerada similar a la de tipo llave-cerradura entre
antgeno y anticuerpo, y el encadenamiento de las dos substancias complementarias se
supone deriva de la disposicin espacial de los tomos sobre ciertas partes de las molculas
de fertilizina y antifertilizina. Se tienen evidencias claras de la existencia de varias
fertilizinas especficas en varias especies; la evidencia para las antifertilizinas es mucho
menos clara por cuanto diversas protenas que llenan los criterios funcionales de las
antifertilizinas se han extrado del espermatozoide. Debe tenerse en cuenta que la
fertilizina, aun cuando debe considerarse de importancia para la unin del espermatozoide y
el vulo en muchas especies animales, puede no ser un requerimiento absoluto para la
fertilizacin propiamente dicho. Por tal motivo es prematuro sacar en conclusin que la
teora de la fertilizina y antifertilizina expresa un proceso crtico en la fertilizacin que
puede ser aplicado sin discriminacin en toda la escala zoolgica.

Recurdese que con muy pocas excepciones los vulos de todos los animales estn
rodeados por una envoltura anhista por fuera del plasmalema ovular. La zona pelcida de
los mamferos y la gelatina del vulo del erizo de mar ya estudiados, representan esas
membranas. La presencia de estas capas externas a la superficie del huevo implica que el
espermatozoide, una vez que se ha unido a la superficie ms externa del vulo, debe
penetrar las envolturas que lo rodean. En la mayor parte de las especies animales el
espermatozoide debe encontrar su camino a travs de las envolturas del vulo sin disponer
de una estructura especial que lo facilite, pero en algunas especies, en su mayor parte,
aunque no exclusivamente, invertebrados marinos, un filamento acrosmico (o filamentos)
rgido y recto, perfora las envolturas hasta llegar al vulo propiamente dicho y el esper-
matozoide penetra por este camino creado por el filamento (cf. captulo 2). Se sabe que los
espermatozoides de varias especies de vertebrados y de invertebrados contienen, agentes
lticos, capaces de provocar la disolucin de estas membranas externas. Estos agentes,
llamados espermolisinas, se encuentran localizados en la porcin del espermatozoide
conocida como acrosoma. En los mamferos el espermatozoide debe penetrar a travs de un
nmero variable de 'capas de clulas de la granulosa adheridas al 6vulo (cumulus
oophorus), fig. 2-6, A, como tambin la zona pelcida y el vitelo. Se cree que una enzima
del grupo de las hialuronidasas facilita la penetracin mediante despolimerizacin e
hidrlisis del cemento intercelular que une las clulas de la granulosa. Se ha sugerido que el
acrosoma es el portador de esta enzima, pero hasta la fecha no ha sido localizada con
precisin dentro del espermatozoide. De cualquier modo se considera razonable que la
enzima sea parte integral de la clula, que se libera por una regin relativamente localizada,
mientras el espermatozoide progresa a travs del cumulus.

Los hechos generales de la fertilizacin estn representados en la fig. 4-3. Los detalles finos
de la penetracin en el vulo se muestran en la fig. 4-4. Cuando el espermatozoide toma
contacto con la membrana exterior del vulo, una serie de cambios entran en accin.
Estudios recientes indican que el extremo del acrosoma se desintegra en el punto que toma
contacto con la envoltura externa del huevo, y a partir de ese momento la membrana
acrosmica se integra en forma continua con Ta membrana plasmtica del espermatozoide
(figs. 4-4, B, y 4-5) . Mientras progresa a travs de la envoltura del vulo, el granulo
acrosmico del espermatozoide desaparece gradualmente. Su desintegracin se asocia
presumiblemente con la liberacin de enzimas lticas. Cuando el espermatozoide o el
filamento acrosmico toma contacto con la membrana plasmtica del vulo, esta hace
protrusin hacia la cabeza del espermatozoide, formando un cono de fertilizacin. Se
funden entonces las membranas del vulo y del acrosoma y se inicia el proceso por el cual
el interior del vulo y del espermatozoide se hacen continuos.

No ha sido descrito todava en todas las especies animales un cono de fertilizacin bien
definido. En los mamferos, por ejemplo, el espermatozoide aparenta invadir el vulo sin
haber sido activamente englobado por el ooplasma_ de un cono de fertilizacin. Cualquiera
sea el caso, a travs de una serie de hechos preciosamente coordinados, los gametos
separados se combinan en una clula en solamente unos segundos. Despus que la cabeza y
el segmento intermediario (y notablemente en los mamferos, la cola) del espermatozoide
penetran en el vulo los ncleos de ambos se aproximan, y mientras en algunas especies se
forma un ncleo de fusin, en otras el ncleo del espermatozoide pierde su membrana y se
aproxima al ncleo ovular, mientras sus cromosomas, junto con los del ncleo ovular, se
ordenan en un huso formado por la accin de los centrosomas del espermatozoide (fig. 4-3).
Cuando se efecta esta unin del material nuclear, la fertilizacin es completa y se ha
formado un cigoto diploide, listo para emprender, comenzando por la segmentacin, el
largo y complejo proceso del desarrollo en un organismo adulto.


CAMBIOS EN LA FERTILIZACION

La penetracin del espermatozoide en el vulo, inicia una serie de procesos en los cuales
los componentes del vulo y del espermatozoide se interaccionan para que se lleve a cabo
el desarrollo del huevo.

La cadena de reacciones inducidas en el huevo por la penetracin del espermatozoide y por
ciertos otros estmulos se conoce como activacin del huevo.
Uno de los primeros ndices de activacin es la reaccin cortical y la formacin de la
membrana de fertilizacin (figs. 4-3 y 4-6). La reaccin cortical se ha estudiado
profundamente en los equinodermos. En el vulo de erizo de mar se visualizan grnulos
dentro de la capa cortical inmediatamente por debajo de la membrana ovular.

Luego de la penetracin del espermatozoide a travs de la membrana ovular se manifiesta
un cambio en la superficie del huevo que irradia a partir del punto de penetracin del
espermatozoide. Los grnulos corticales parecen desintegrarse, y se reconoce un cambio de
color progresando por la superficie del huevo. Concomitantemente con este cambio
cortical, la membrana vitelina se eleva de la superficie cortical del huevo, creando el
espacio perivitelino. Al mismo tiempo un material laminar denso derivado de los grnulos
corticales se acumula a lo largo de la superficie interior de la membrana vitelina. Esta
membrana, que ya tiene 500 a 900 angstroms de espesor, se denomina membrana de
fertilizacin. A lo largo de la superficie externa del huevo se forma una capa hialina
extracelular delgada. La reaccin cortical, esto es, la desintegracin de los grnulos
corticales, se extiende sobre la superficie del huevo en una onda de progresin que dura de
10 a 20 segundos; la membrana de fertilizacin se forma entre 1 y 3 minutos despus de la
inseminacin. Se han descrito adems otros varios fenmenos en asociacin con la reaccin
cortical. Se reconocen cambios en la birrefringencia de la corteza y de la membrana de
fertilizacin durante la reaccin cortical. Se ha demostrado una creciente viscosidad de la
corteza y un aumento de la permeabilidad al agua y al potasio. Hay adems un cambio
rpido en el potencial de membrana de la clula. La diferencia de potencial entre la parte
interna y el exterior de la clula es de 30 a 60 milivoltios antes de la fertilizacin, e
inmediatamente despus de la inseminacin este potencial desciende alrededor de 10
milivoltios retornando a su valor original en 20 segundos aproximadamente. En los huevos
de peces tambin se ha comprobado una despolarizacin de la membrana celular como
consecuencia de cambios corticales. Otros cambios se asocian tambin a la reaccin
cortical, pero la breve nmina enunciada debe ser suficiente para mostrar la intensidad y
amplitud de los cambios inducidos en el vulo por la influencia activadora de la
penetracin del espermatozoide.

En los moluscos, reptiles y aves, entran regularmente varios espermatozoides en el vulo;
en la mayora de las especies animales, sin embargo, luego que un espermatozoide ha
logrado entrar al vulo se bloquea aparentemente la penetracin de espermatozoides
adicionales. Se ha asignado a menudo papel importante a la reaccin cortical en la
prevencin de la polispermia, pero hay varias razones, sin embargo, para dudar que sea as.
La reaccin cortical y la formacin de la membrana de fertilizacin no son similares en
todos sus aspectos a lo largo del reino animal. Las membranas de fertilizacin son
caractersticas de los equinodermos, peces y batracios, pero en la fertilizacin de los
mamferos no se forman nuevas membranas. En otras especies (insectos, por ejemplo), los
grnulos corticales no existen y en los vulos no hay aparentemente reaccin cortical
comparable a la de los equinodermos.

Adems, los grnulos corticales presentes en el vulo del criceto desaparecen despus de la
fertilizacin, pero probablemente no se hallan asociados con el bloqueo de la polispermia.
Se duda en cuanto a si la velocidad de la reaccin cortical es suficiente para provocar el
bloqueo efectivo de la polispermia. En ausencia de una informacin mas adecuada, es
mejor enfocar la reaccin cortical como una expresin substancial de las profundas
alteraciones del vulo que acompaan a su activacin, sin tener en cuenta su relacin con
un posible bloqueo de la polispermia.

SIGNIFICADO DE LA ACTIVACION

La activacin provocada por su fertilizacin ocasiona algunas alteraciones profundas en el
metabolismo del vulo. Inmediatamente despus de la fertilizacin es posible descubrir en
algunos huevos, como el de erizo de mar, si bien no en todos, un aumento espectacular del
ndice de captacin de oxgeno y de produccin de calor. Otros cambios demostrables de la
activacin incluyen aumento del consumo de fsforo y de la utilizacin de glucgeno, y
una incorporacin aumentada de aminocidos y de sntesis de protenas. Hay tambin
evidencias que por lo menos tres enzimas proteolticas son fuertemente a activadas durante
la fertilizacin. As, en muchos casos, en adicin a los cambios fsicos conocidos, hay
aumento significativo de la actividad metablica del vulo.

Las observaciones anteriores representan una fraccin de las mltiples alteraciones en el
metabolismo del huevo como consecuencia de la fertilizacin.
Se ha insistido en el aumento de la actividad metablica, pero a ese respecto es muy
importante hacer notar que inmediatamente antes de la fertilizacin, el vulo es una clula
con caracteres muy especiales.

El consumo de oxgeno del vulo cae substancialmente durante su fase de maduracin,
hasta el punto que el consumo de este gas por parte del vulo maduro es aproximadamente
un tercio del correspondiente al ovocito primario. La fertilizacin restablece los niveles
respiratorios caractersticos del vulo antes de la maduracin. El considerable aumento
inicial de consumo de oxgeno refleja, en consecuencia, por lo menos en parte, el regreso de
un ndice respiratorio anormalmente bajo. El aumento substancial de consumo de oxgeno
consecuente a la fertilizacin en el huevo del erizo de mar no es un fenmeno universal, En
muchos peces y anfibios (Bufo y Fundulus) el consumo de oxgeno no cambia y en
invertebrados (Chaetopterus) el nivel de consumo se reduce drsticamente durante las
primeras horas que siguen a la fertilizaciOn (fig. 4-7) . Analizando este hecho, parece haber
una relacin entre el consumo de oxgeno posfertilizacin y el grado de maduracin del
vulo en el momento en que es fertilizado. Es as que el vulo de erizo de mar ha
completado su maduracin en el momento de la fertilizacin, el vulo de Bufo se
encuentra en la segunda divisin de maduracin y el de Chaetopterus en la primera divisin
de maduracin.

El vulo no fertilizado del erizo de mar es capaz de algunos procesos de sntesis, pero
aunque posee capacidad para captar aminocidos, parece que hay poca o ninguna
incorporacin de aminocidos en sus protenas. Experimentos con aminocidos marcados
revelan una captacin aumentada y una incorporacin de aminocidos en las protenas
totales y en las fracciones subcelulares del vulo en los pocos minutos que siguen a la
fertilizacin, indicando de esta manera la iniciacin de la sntesis y recambio de protenas.

El metabolismo acelerado del vulo activado puede ser en parte una recuperacin de un
estado metablico depresivo. Se ha sugerido que un bloqueo metab6- lico establecido
dentro del huevo en algn momento durante la maduracin es eliminado por el estmulo de
la fertilizacin. De acuerdo con este punto de vista, la fertilizacin constituye un
mecanismo de liberacin mediante el cual los elementos fisiolgicos del vulo son
desenmascarados o liberados de su inhibicin. La activacin puede representar entonces la
liberacin de enzimas o de sistemas enzimticos que se encontraban presentes en el vulo,
pero en estado inactivo o de inhibicin. La penetracin del espermatozoide podra, por
ejemplo, eliminar un complejo inhibidor enzimtico de la corteza ovular y las enzimas
liberadas de esta manera podran iniciar una cadena de reacciones produciendo los muchos
y diversos cambios asociados con la activacin.

Se acepta generalmente que la sntesis de nuevas protenas se realiza por un mecanismo
relativamente complejo que vincula DNA, RNA, trifosfato de adenosina, enzimas
activadoras especiales, aminocidos y los ribosomas en el citoplasma celular. El papel de
DNA ser estudiado en forma integral mas adelante, pero es apropiado hacer en este
momento un breve resumen de los esquemas conceptuales corrientes en materia de sntesis
protenica.

Segn este esquema, DNA es el material gentico de la clula, que especfica la estructura
de una forma de RNA que sirve de modelo o plantilla, de acuerdo al cual los
mononucletidos de RNA se renen en una cadena molecular continua. Esta forma de RNA
que lleva informacin transcripta por DNA se conoce como RNA mensajero. Al pasar al
citoplasma, el RNA mensajero se asocia con los ribosomas, partculas intracelulares de 150
a 250 angstroms de dimetro, compuestas de partes iguales, aproximadamente, de protenas
y de otra forma de RNA llamado RNA ribosmico. Los ribosomas, o grupos de ellos
denominados polirribosomas, estn generalmente asociados con las membranas del retculo
endoplsmico, aunque en las clulas embrionarias se hallan generalmente libres.

Los ribosomas y el RNA mensajero colaboran en la sntesis de las protenas, formando o
reuniendo una molcula segn el modelo estructural determinado por el DNA nuclear.

Cada cido nucleico se compone de tres tipos principales de molculas: un azcar, la
desoxirribosa en el DNA, o la ribosa en el RNA; un grupo fosfato y bases nitrogenadas, ya
sean de doble anillo, purinas, o de anillo simple, pirimidinas. DNA contiene las purinas
adenina y guanina, y las pirimidinas citosina y timina; el RNA contiene adenina, guanina y
citosina, pero urcilo en lugar de timina. La molcula que contiene una molcula de azcar,
un grupo fosfato y una de las cuatro bases posibles constituye un nucletido; estos
nucletidos unidos forman DNA o RNA. Las formulas estructurales simplificadas
siguientes ilustran la disposicin de las molculas dentro de un nucletido que contiene
adenina, y la forma en que estos se unen para formar la cadena molecular continua de un
cido nucleico. La secuencia exacta de las bases a lo largo de la molcula de DNA es
transcripta a la molcula de RNA mensajero, y esta secuencia determina la estructura de la
protena particular o especial sintetizada. Las protenas se sintetizan a partir de 20
aminocidos distintos, unidos entre si, extremo a extremo, en diversas combinaciones, para
formar las largas cadenas de polipptidos de la molcula protenica. Cada protena tiene una
secuencia de aminocidos que le es caracterstica. Esta secuencia se establece durante la
sntesis de las cadenas de polipptidos, mediante la especificacin de un conjunto de tres
bases, que se denomina cdigo de tripleto o codn, en la cadena molecular de RNA
mensajero.

Adems de RNA mensajero y los ribosomas, otros elementos participan tambin en este
proceso. Una variedad de RNA llamado de transferencia, juega un papel crtico en la
sntesis protenica. Enzimas activadoras especiales, una para cada uno de los aminocidos,
en conjuncin con trifosfato de adenosina, preparan cada aminocido para su unin con
RNA de transferencia, el cual transporta entonces ese aminocido al ribosoma. Cada
molcula de RNA de transferencia es una tira corta de mononucletidos de RNA, portadora
de sus propias bases de tripleto llamada anticodn, que forma un enlace temporal con la
secuencia complementaria del codn en el RNA mensajero. El ribosoma posiblemente
funcione poniendo en posicin las molculas de RNA de transferencia que llegan y soste-
niendo la cadena de polipptidos a medida que se van sintetizando. Los aminocidos son
transferidos de esta manera del RNA de transferencia al sitio apropiado en la protena
sintetizada segn el modelo especificado por el RNA mensajero.

La activacin puede reflejar una alteracin en el mecanismo de la sntesis protenica del
vulo. El aumento de sntesis protenica, el recambio en el huevo, o ambos despus de la
fertilizacin sugiere que el mecanismo esquematizado anteriormente es o ya activado o
liberado de inhibicin. Probablemente el RNA mensajero se produce durante la orognesis
y existe en estado inactivo antes de la fertilizacin. De alguna manera el RNA mensajero
puede ser liberado de inhibicin o llevado a un estado activo en la fertilizacin. Puede ser
tambin posible que exista alguna peculiaridad estructural en los ribosomas del vulo no
fertilizado que los incapacita para interrelacionarse con el RNA mensajero.

Se ha demostrado experimentalmente que el RNA purificado extrado de 61,-ulos de erizo
de mar no fertilizados, puede estimular la incorporacin de aminocidos a las protenas por
parte de los ribosomas del hgado de rata; y que por lo contrario, el mismo RNA, o RNA
del hgado de rata, muy activo frente a ribosomas del hgado, no estimula la incorporacin
de aminocidos por ribosomas provenientes de vulos no fertilizado. Debe suceder
entonces que algn reordenamiento estructural de los ribosomas despus de la fertilizacin,
los capacita para funcionar coordinadamente con RNA mensajero e iniciar as la
incorporacin activa de aminocidos a protenas. Es un hecho significativo que el vulo no
fertilizado no contenga aminocidos activados. Los aminocidos activados aparecen in-
mediatamente despus de la fertilizacin y adems, aparecen en proporcin relativa a la
incorporacin aumentada de aminocidos y a la sntesis protenica. La fertilizacin
actualiza la formacin de aminocidos activados, poniendo en funcionamiento de esta
manera la compleja cadena de reacciones que caracterizan la sntesis protenica y la
iniciacin del desarrollo.

La fertilizacin es uno de los fenmenos ms complejos. Es obvio que mucho mas debe
investigarse en cuanto a este proceso y sus muchos efectos antes que sea posible brindar
una explicacin completa de la activacin. El estudio de los cambios qumicos asociados
con la fertilizacin y el anlisis continuado de sus modificaciones metablicas ofrecen un
promisorio panorama para una mayor y ms completa comprensin.

PARTENOGENESIS ARTIFICIAL

Los cambios que se despiertan en el vulo por la penetracin del espermatozoide pueden
ser producidos artificialmente en los vulos de muchos animales incluyendo mamferos. La
partenognesis es la reproduccin por desarrollo de un huevo, sin que haya sido fertilizado
por un espermatozoide. El desarrollo de un vulo no fertilizado por medios artificiales,
como estmulos mecnicos o qumicos, se conoce como partenognesis artificial. Se
obtienen fcilmente la reaccin cortical y la elevacin de una membrana de fertilizacin,
mediante tratamiento de un vulo no fertilizado con una gran variedad de agentes. Se ha
provocado, con xito, desarrollo embriolgico completo en vulos de diversos grupos
animales por medio de amplia variedad de tratamientos artificiales. vulos de erizo de mar
sumergidos durante pocos minutos en agua de mar hipertnica, colocados luego en agua de
mar normal, desarrollan a menudo larvas normales. Ranas normales se obtienen de manera
similar, desarrollando a partir de vulos punzados con una aguja humedecida en suero
sanguneo.

En una variedad de animales invertebrados (rotferos, fidos, abejas, avispas y hormigas) el
desarrollo partenogentico es normal (partenognesis natural). El huevo partenogentico
desarrolla generalmente machos, mientras el huevo fertilizado desarrolla hembras. Ha sido
descrita partenognesis natural en algunas especies de vertebrados, especialmente en el
pavo domstico. Aproximadamente el 40 por 100 de los huevos puestos por hembras
aisladas del macho, siguen en desarrollo hasta la maduracin. Todas las cras son machos.
Debe hacerse notar que los huevos no siempre se mantienen haploides despus de la
partenognesis; algunas formas de partenognesis natural y la mayor parte de la artificial
son seguidas por duplicacin de los cromosomas, dando origen a un adulto diploide.

Cualquiera que sea el mecanismo y los ajustes posteriores del contenido cromosmico, la
partenognesis artificial destaca el hecho que todos los factores necesarios para el
desarrollo residen en el huevo. El huevo debe ser considerado como un sistema de reaccin
que se encuentra listo para operar; necesita solamente un estmulo externo. Evidentemente
el estmulo que significa la penetracin del espermatozoide no es especfico; el mismo
resultado puede obtenerse por muy diversos y dispares estmulos externos.

El desarrollo partenogentico muestra que los cromosomas del vulo son suficientes en
muchas instancias para llevar el huevo hasta el estado adulto. Puede preguntarse, entonces,
por qu esta clase de reproduccin no es ms comn? Casi todos los organismos han
desarrollado alguna forma de reproduccin sexual, y aun aquellas especies en las cuales
predomina la reproduccin por yemas o brotes, muestran tambin reproduccin sexual. La
unin de dos juegos de cromosomas de individuos diferentes da como resultado grandes
posibilidades de variacin en las estructuras y funciones del producto resultante si se lo
compara con el desarrollo haploide. Estas posibilidades de variacin constituyen la gran
oportunidad para que acten los factores de evolucin y probablemente incrementen la
supervivencia de las especies.

Considerado a largo plazo, parecen existir ventajas reales en la fertilizacin cruzada. Aun
las especies en las que ambos sistemas reproductivos, macho y hembra, esta"' presente en el
mismo individuo, se desarrollan mecanismos por los cuales se hacen autoestriles,
permitiendo la fertilizacin cruzada.

Interacciones nucleocitoplsmicas

Es obvio que la unin de dos individuos de caracteres morfolgicos diferentes da origen a
un producto que rene caractersticas de sus progenitores. El espermatozoide contribuye
con material nuclear y, por lo tanto, es evidente que el material gentico del ncleo
reacciona en alguna manera con los constituyentes del citoplasma para producir el resultado
final en el individuo. La importancia de la comprensin de las interacciones del ncleo y el
citoplasma y la, eficacia probada de tcnicas refinadas son de tener en cuenta como factores
determinantes de la vigorosa corriente de investigaciones realizadas, sobre las interacciones
nucleocitoplsmicas durante el desarrollo.
El anlisis del papel del ncleo y del citoplasma y de sus interacciones en el desarrollo son
un hecho trascendente pero no peculiar o caracterstico de nuestro tiempo. Evaluaciones
experimentales de las relaciones nucleocitoplsmicas en el desarrollo, se iniciaron a partir
de los primeros periodos de la disciplina Hamada embriologa analtica causal, o tambin
mecnica del desarrollo (Entwicklungamechanick) por su fundador, Wilhelm Roux. Los
esfuerzos iniciales de Theodor Boveri, Hans Driesch, Oscar y Richard Hertwig y August
Weismann durante la ltima parte del siglo xix fueron continuados por los estudios
experimentales de Hans Spemann y otros al comienzo de este siglo. Caracterizaron esos
estudios la manipulacin directa de los gametos o de los embriones. Spemann coloc liga-
duras en un huevo fertilizado de lagartija, dividindolo casi por completo en dos mitades,
de las cuales solamente una contena ncleo. nicamente la mitad nucleada inici la
segmentacin, pero por accidente, durante una de las ltimas divisiones un ncleo hijo de la
blastmera en divisin se desliz a travs del delgado puente protoplasmtico que
conectaba las dos mitades, incitando la mitad anucleada a dividirse y formar un embrin
completo. Este experimento y los de Driesch y Oscar Hertwig contradijeron el postulado de
Weismann en el sentido de que la heterogeneidad del embrin es el resultado de la
distribucin espacial ordenada de sucesivas generaciones de ncleos producidos por
divisiones calificadas y desiguales durante la segmentacin. Dieron buena evidencia que las
generaciones sucesivas de ncleos son intercambiables, o equivalentes. Muchos estudios
con diversas tcnicas, siguieron las investigaciones clsicas de los primeros embrilogos
experimentales, y si bien el conocimiento actual de las interacciones nucleocitoplsmicas
son incompletas, se ha logrado un impresionante avance en las ltimas dcadas.

INDISPENSABILIDAD DEL NUCLEO

Tanto el ncleo como el citoplasma son necesarios para el desarrollo. El citoplasma de la
clula funcionalmente hablando no puede hacer mucho en ausencia del ncleo. Esto ha sido
demostrado en forma concluyente en 1950 por experimentos, cuando I. J. Lorch y J. F.
Danielli generalizaron los primeros ensayos de J. Commandon y P. de Fonbrune sobre
amebas enucleadas y trasplante de ncleos de una ameba a otra. Una ameba nucleada
sobrevive en estado latente alrededor de dos semanas pero finalmente muere. Si se
reintroduce un ncleo dentro del animal durante los primeros das, se recupera y puede
reasumir sus funciones normales, pero si el ncleo se reintroduce seis das despus de la
enucleacin el individuo no se recupera. Los cambios inducidos por la enucleacin si bien
al principio son reversibles, se hacen luego irreversibles. Estas experiencias indican que el
ncleo es necesario para el mantenimiento de la vida en la clula adulta.

Experimentos similares a los de la ameba pueden llevarse a cabo con vulos o huevos en
desarrollo. Generalmente los huevos anucleados inician la segmentacin pero son
anormales y no se diferencian. Experimentos con huevos de anfibio han demostrado que en
ausencia de ncleo se puede iniciar una especie de segmentacin y se desarrollan
parcialmente blstulas, pero la diferenciacin no tiene lugar y el huevo muere pronto. De
acuerdo con todos los experimentos llevados a cabo con huevos privados de ncleo, se
puede generalizar que en los huevos en desarrollo las actividades de sntesis, la divisin
celular y la diferenciacin requieren la presencia de un ncleo.


NUCLE0 Y MORFOGENESIS

Como resultado de los experimentos clsicos de J. Hammerling se ha demostrado en el alga
unicelular Acetabularia, una relacin directa entre ncleo y morfognesis. Esta clula en su
forma definitiva o desarrollada consiste en un capelo amplio, un tallo y una raz basal o
rizoide. En la etapa de su ciclo vital que nos interesa aqu considerar, la clula tiene un solo
ncleo ubicado en el rizoide. La capacidad que tiene Acetabularia de regenerar tallo y
capelo da buenos elementos de juicio para estudiar el papel del ncleo en los procesos
morfogenticos.

El ncleo es necesario para la regeneracin del capelo. Un tallo anucleado puede regenerar
un nuevo capelo solamente una vez, muriendo la clula luego de CMS pocos das. Trozos
de tallo que contengan el ncleo pueden por lo contrario .regenerar repetidamente un nuevo
capelo. Las regeneraciones repetidas requieren un abastecimiento continuo de materiales y
por este motivo, segn se supone, se requiere un ncleo. La regeneracin nica que es
capaz de llevar a cabo un tallo anucleado o un fragmento de tallo anucleado es, segn se
cree, realizable a expensas de materiales de reserva y de energa acumuladas en el tallo
antes de la enucleacin. Bien puede ser que uno de los materiales crticos acumulados sea
RNA mensajero estable.

Otro rol del ncleo surge de estos estudios sobre Acetabularia. En el alga reside en el
ncleo, segn parece, el control de las caractersticas morfolgicas del capelo, tal como se
desprende de resultados experimentales (fig. 5-1). Cuando un rizoide conteniendo el ncleo
de una especie B, se injerta en lugar del rizoide de un tallo de otra especie A, es posible
evaluar el efecto morfogentico del ncleo, seccionando d capelo y observando la
regeneracin. El primer capelo regenerado tiene caractersticas intermedias entre las
especies A y B, pero todos los capelos que se regeneran subsecuentemente, tienen
caracteres tpicos de la especie B. La morfologa intermedia del primer capelo regenerado
puede ser explicada tambin esta vez como una consecuencia del efecto o accin de
materiales presentes en el tallo antes del trasplante nuclear.

De estos experimentos se puede sacar en conclusin que el ncleo controla las actividades
morfogenticas en Acetabularia, dirigiendo presumiblemente la sntesis de substancias
especificas que determinan los caracteres del capelo regenerado.
La importancia del material gentico del ncleo en los varios procesos morfogenticos del
desarrollo puede ser identificada a travs de varias investigaciones experimentales, en las
cuales tanto la calidad como la cantidad de los materiales nucleares es alterada. La
necesidad de la presencia actual del ncleo se ha puntualizado, y esta perfectamente
aclarado que la completa eliminacin del material gentico nuclear, detiene el desarrollo.
Es conveniente analizar ahora el efecto de las variaciones cualitativas y cuantitativas del
material nuclear.

La manipulacin experimental de la fertilizacin, que se iniciara con los experimentos de T.
Boveri hace ms de 60 aos, ha sido muy til en la estimacin de los efectos de las
variaciones cualitativas del material gentico sobre el desarrollo embrionario. La influencia
de cromosomas forneos en el desarrollo de huevos de vertebrados ha sido estudiada en
forma muy intensa en anfibios en los cuales es posible obtener embriones hbridos
diploides mediante fertilizacin de vulos de una especie con espermatozoides de otra
especie (por ejemplo, Triton taeniatus y T. cristatus, Rana pipiens y R. sylvatica). La
introduccin de cromosomas extraos en el vulo produce diversos efectos que oscilan
entre cambios no perceptibles hasta la muerte del embrin en la etapa de, blstula comienzo
de la gstrula. Un hbrido andrognico, producido por un vulo al que se le quitaron los
cromosomas maternos, pero que contiene los cromosomas de espermatozoides de otra
especie, fracasa en su supervivencia, como el hbrido diploide correspondiente, ni se
desarrolla tan bien como el haploide formado por un ncleo y un citoplasma de la misma
especie. Los efectos de material nuclear extrao se manifiestan antes y con mas intensidad
en ausencia de material nuclear del husped.

Pueden tambin tener efecto sobre el desarrollo embriolgico variaciones cuantitativas del
material nuclear. El efecto de una reduccin del material gentico en el desarrollo, se ha
evaluado mediante la produccin artificial de embriones haploides en equinodermos,
anfibios y otras especies. Los embriones contienen solamente la mitad de la cantidad
normal de cromosomas, pero la actividad del material gentico se revela por el hecho que
estos embriones haploides continan hasta etapas de desarrollo ms avanzadas que los
embriones anucleados y pueden alcanzar la forma adulta. Desde el comienzo, sin embargo,
estos embriones se muestran a menudo anormales y retardados y raramente sobreviven a
trmino.

El exceso de material gentico produce resultados variables. Se ha observado desarrollo
normal en embriones triploides, tetraploides y pentaploides, es decir, en embriones cuyo
ncleo contiene respectivamente tres, cuatro o cinco series completas de cromosomas.

La poliploida, cuando es balanceada, no interfiere con el progreso del desarrollo
embriolgico. A la inversa frecuentemente ocurre desarrollo anormal, en casos de
poliploida no balanceada (aneuploida) cuando los ncleos contienen cromosomas en
nmero que no es un verdadero mltiplo del nmero bsico del genoma. El sndrome de
Down o mongolismo es un ejemplo del efecto nocivo del exceso de material gentico en la
especie humana. El mongolismo es un complejo de anormalidades caracterizado por varias
aberraciones fsicas y qumicas y por significativo retardo mental. Dos tercios de los casos
de mongolismo parecen vinculados a madres de edad avanzada. De acuerdo con estudios
estadsticos que abarcan cifras significativas, se sabe que en la poblacin general la
frecuencia de la enfermedad es de un caso cada 670 nacimientos, pero para madres mayores
de 45 aos o ms, las probabilidades aumentan a uno en 40. Examinando familias en las
cuales se ha presentado mongolismo se comprueba, tanto en los casos en que la edad
materna es elevada, como en los de madres jvenes, que se produce la transmisin de una
aberracin cromosmica. Un punto crucial en las largas investigaciones sobre el origen de
la enfermedad fue el descubrimiento de que la misma depende de la presencia de un
cromosoma adicional, el nmero 21, o del exceso de material que de l se deriva. La
trisoma es una condicin citolgica en la cual el ncleo es portador de sus dos series
completas de cromosomas, ms un cromosoma adicional, y como en este cuadro esta
involucrado un cromosoma 21 extra, el mongolismo se denomina a menudo trisoma 21.
Hay ciertos indicios de que la edad y la herencia paterna pueden ser factores etiolgicos,
pero en la mayor parte de los casos conocidos a la fecha, es la transmisin materna de la
condicin cromosmica la que lleva consigo la enfermedad. Cuando se presenta transloca-
cin cromosmica se reconocen varios orgenes a la condicin de trisoma o su equi-
valencia. Se han determinado dos tipos posibles de transmisin familiar. En uno, la madre
de un nio mongoloide es ella misma parcial o completamente afectada; en el otro es
portadora de una translocacin cromosmica en forma balanceada. En ambos casos la edad
materna no parece ser un factor significativo.

La no disyuncin de ambos- miembros de un par de cromosomas homlogos durante la
meiosis da origen a gametos, de los cuales la mitad contiene un cromosoma adicional. La
no disyuncin durante la gametognesis puede establecer la situacin por la cual un gameto
con una serie de cromosomas desbalanceada, producida por un progenitor normal, crea en
la fertilizacin un producto trismico mongoloide.

En los casos de mongolismo relativo a no disyuncin materna por edad, puede ser que la
trisoma 21 sea una consecuencia del deterioro gradual de los centrmeros del vulo,
durante su largo perodo de reposo desde el nacimiento hasta la ovulacin. De estos
ejemplos se extrae claramente el concepto que variaciones cuantitativas significantes en el
material gentico, dan a menudo origen a anormalidades o a muerte del embrin.

Los efectos de genes mutantes ofrecen evidencia adicional sobre el importante papel del
material gentico en el desarrollo, indicando que no es necesario que los cambios 'de este
material sean masivos para que se produzcan alteraciones significativas en el desarrollo.
Todas las partes del cuerpo pueden ser modificadas por la introduccin de genes mutantes.
La fig. 5-2, por ejemplo, muestra un embrin avanzado de polio al que le faltan las alas. En
la gnesis de esta condicin los brotes de las alas se forman y comienzan su desarrollo; es
entonces que la membrana ectodrmica de cobertura que controla la morfognesis y el
desarrollo del mesodermo interior degenera frenando el desarrollo ulterior del ala. En este
caso depende del gen mutante la perdida de capacidad inductiva en el complejo ectodermo-
mesodermo de esa extremidad. La polidactilia, dedos supernumerarios en las manos o en
los pies, puede representar tambin otro ejemplo de la influencia de un gen mutante sobre
las actividades inductoras del embrin. En este caso el gen acta presumiblemente
afectando la distribucin del factor mesodrmico del cual depende el mantenimiento del
ectodermo cubriendo la punta de la extremidad (cap. 10).

Genes mutantes pueden producir cambios dispersos o altamente especficos en el
desarrollo. El material gentico puede controlar especficamente el carcter del ojo o del
ala, o incluso fenmenos locales como el carcter de las cerdas o pelos de Drosophila. Por
otra parte, pueden resultar efectos mltiples de la accin de un solo gen (pleiotropia). No
solamente las facetas de los Ojos, sino tambin las uas tarsales son afectadas por algunos
alelos (losange) en Drosophila. Efectos pleiotrpicos pueden derivar secundariamente de
una accin gentica primaria, como en el ratn mutante letal gris homocigoto, en el que
resultan deformaciones esquelticas mltiples por el efecto inhibidor de un solo gen
recesivo sobre la hormona o las glndulas paratiroides. La evidencia indica que la accin
del material gentico se ejerce en diferentes momentos del desarrollo. Puede afectar la
morfognesis en sus primeras etapas o ms tarde; en ciertos casos, durante la vida posnatal.
Los efectos de la accin gentica pueden manifestarse inmediatamente o a distancia en
relacin a los tiempos de desarrollo. Puede ser tambin que el carcter de los materiales
nucleares cambie durante el desarrollo, y por esos motivos, es pertinente una revisin de los
experimentos programados para evaluar los cambios del ncleo durante el desarrollo.

RECOMBINACIONES NUCLEOCITOPLSMICAS

Una manera de determinar los cambios en la funcin gentica en las clulas somticas y de
estimar la estabilidad de la organizacin nuclear, es mediante recombinaciones de ncleo y
citoplasma en diferentes tipos de clulas somticas. La transferencia artificial del ncleo en
el alga unicelular, Acetabularia, ha sido ya ==entada. Es interesante ahora analizar los
experimentos de trasplante en embriones de anfibio, destinados a descubrir cambios en las
propiedades del ncleo durante el desarrollo. En las experiencias de R. Briggs y T. J. King,
se extrae el ncleo de una clula de embrin de rana (Rana pipiens) en una de sus ltimas
etapas de desarrollo y se trasplanta a un vulo anucleado, cuyo desarrollo partenogentico
se ha estimulado mediante puncin con una aguja de vidrio (fig. 5-3, A). Cuando los
ncleos de las blastmeras del hemisferio animal de una blstula en desarrollo avanzado, se
trasplantan a vulos anucleados de rana, 40 a 80 por 100 de los vulos experimenta
segmentacin y la mayora de ellos desarrolla normal=ente hasta etapa larvaria o mas
avanzada. Una pequea cantidad de citoplasma estimada en 1/40 000 a 1/500 000 del
volumen del citoplasma del huevo receptor,
Es trasplantada junto con el ncleo, pero experimentos de control indican que ese
citoplasma trasplantado por s solo no produce desarrollo. En consecuencia, estos
experimentos de trasplante nuclear dan apoyo a la conclusin de que los ncleos de
blstulas avanzadas en su evolucin, son esencialmente invariables a partir de su estado al
comienzo del desarrollo.

'Videos obtenidos de diversas regiones de gstrulas tempranas fueron sometidos al mismo
mtodo experimental. Para la exposicin de los resultados de estos experimentos las
referencias del captulo 7 pueden ayudar en la identificacin de las partes del embrin de
anfibio que se mencionan, Se trasplantaron a huevos anucleados, ncleos de 1) el polo
animal, 2) labio dorsal y 3) endodermo, incluyendo el piso del blastocele y la regin
existente entre el polo vegetativo y el labio dorsal, con los siguientes resultados:

Estas cifras tan irregulares, no proporcionan pruebas definidas respecto a diferencias entre
los ncleos de las distintas regiones de la gstrula, y sugieren que todos los ncleos en la
gstrula temprana son equivalentes.

Hay alguna evidencia, sin embargo, en el sentido de que los ncleos experimentan cambios
durante la etapa de neurula. Comparados con ncleos trasplantados de gstrula de cierta
edad, los ncleos del endodermo y de la mitad de la neurula, dan origen con menos
frecuencia a segmentacin normal y a la formacin de blstula. Adems, una mayor
proporcin de las blstulas obtenidas quedan detenidas en las etapas de blstula y gstrula,
y los embriones que gastrulan presentan mayor cantidad de anormalidades. Ncleos
endodrmicos de la misma regin, extrados de un embrin que ya ha desarrollado esbozo
de cola, tiene todava menos capacidad para promover segmentacin en los huevos
receptores. Esto sirve de indicacin que a medida que avanza la diferenciacin, el nmero
de ncleos indiferenciados disminuye y que algunos de ellos pierden su capacidad de
promover segmentacin.

El trasplante de ncleos en serie provee ms informacin respecto a la posible restriccin
progresiva de la capacidad de los ncleos del endodermo, para promover la necesaria
diferenciacin coordinada para el desarrollo de un embrin normal. El procedimiento de
trasplantes seriados se ilustra en la fig. 5-3, A. El primer trasplante a un huevo anucleado se
realiza como en los experimentos precedentes; de la blstula resultante se trasplantan
ncleos a otra serie de huevos anucleados, y las blstulas resultantes de estas series de
huevos sirven como donadoras para otra serie de huevos anucleados. Todos los embriones
son descendientes del primer ncleo, y por lo tanto, deben demostrar la estabilidad del
ncleo. La fig. 5-3, B, revela que los trasplantes en serie de ncleos de blstula confirman
la retencin de la equivalencia demostrada en una transferencia nuclear aislada.
Comparando los resultados de las experiencias de trasplante en serie de ncleos de
endodermo gastrular tardo, y ncleos de blstula (fig. 5-4), se revela que los huevos que
reciben ncleo de endodermo de gstrula madura llegan en menor nmero a la etapa de
larva normal. Este es un ndice cierto de que las condiciones nucleares responsables de las
deficiencias de desarrollo son irreversibles.

Los cambios-irreversibles en el ncleo que indican las precedentes investigaciones pueden
ser solo aparentes. Hay evidencia, por ejemplo, de que algunas (cerca del 2 por 100) de las
clulas endodrmicas en diferenciacin en la larva de Xenopus, llevan ncleos que
trasplantados son capaces de sostener diferenciacin de clulas de todo tipo. Ms aun, el 70
por 100 de las clulas intestinales, totalmente diferenciadas, en renacuajos de Xenopus,
sostienen diferenciacin en clulas musculares y nerviosas.

La discrepancia entre la capacidad aparente de los ncleos endodrmicos en Xenopus y
Rana, puede probablemente relacionarse a una diferencia de especificidad de especie pero
es ms probablemente un fenmeno de significado general. Es posible la existencia de una
restriccin progresiva de las posibilidades nucleares, pero los muchos casos conocidos de
labilidad celular y el hecho de que las condiciones experimentales pueden influir en los
resultados, aconseja cautela. Ciertas alteraciones que incidentalmente modifican el
citoplasma del huevo receptor pueden, por ejemplo, alterar profundamente el
comportamiento del huevo trasplantado. Esta posibilidad es notable en estudios de
trasplante nuclear que se realicen sobre huevos receptores cuyo citoplasma ha sido tratado.
Los huevos de anfibio, por ejemplo, inician la segmentacin despus de una breve
exposicin a soluciones de mostaza nitrogenada, a concentraciones dbiles como 2.5 X 10-
6 M, pero el desarrollo se detiene en la gastrulacin. Cuando un huevo es tratado de esta
manera, enucleado, y provisto de un ncleo extrado de una blstula normal, sucede la
misma inhibicin blstula-gstrula. Esta inhibicin es el resultado de una lesin nuclear
producida por el citoplasma tratado, ya que una transferencia nuclear de segunda
generacin a un huevo de citoplasma normal desde una blstula tratada, muestra
generalmente la misma detencin de desarrollo. El tratamiento del huevo receptor con
mostaza nitrogenada no puede ser calificado como una modificacin intrascendente de las
condiciones experimentales, pero muestra que pueden ser inducidas lesiones nucleares a
travs de alteraciones de las substancias citoplsmicas que participan normalmente en los
intercambios nucleocitoplsmicas, durante la segmentacin, en este caso quiz
desoxinucletidos o polinucletidos precursores. Es aconsejable cierta cautela en la
interpretacin de los estudios sobre trasplantes nucleares, y, por el momento, antes que
considerar en forma definitiva y excluyente que todo se debe a una restriccin progresiva
de las posibilidades nucleares, es probablemente ms lgico y juicioso subrayar la
evidencia respecto a labilidad nuclear.


ACCION GENETICA DIFERENCIAL

De conformidad con cuanto acabamos de exponer parece lgico deducir que el ncleo esta
directamente vinculado a la diferenciacin. Esto es particularmente evidente en el papel
demostrado por el ncleo de Acetabularia en la morfognesis y en los efectos de genes
mutantes sobre el desarrollo. En efecto, la idea de un ncleo actuando independientemente
del citoplasma es difcil de sostener. Casi todas las pruebas al respecto apoyan la hiptesis
de trabajo de que la constitucin gentica de una clula permanece sin cambios a lo largo
del desarrollo. Es posible que el material gentico (DNA) sea el mismo en todas las clulas
del organismo, pero la expresin de un solo gen o de un grupo coordinado de genes es
controlada por su ambiente qumico especfico. As, un gen mutante que afecta el color de
los ojos en Drosophila, se encuentra tambin en otras clulas del cuerpo pero causa cambio
de color solamente en el ojo. Este gen se expresa solamente en presencia de un ambiente
qumico que es especfico del gen, y que existe solamente en el ojo. Esta situacin provoca
inmediatamente la bsqueda de los factores que hacen el ojo diferente del resto del cuerpo
y crean el ambiente qumico especfico para la accin especfica del gen. El argumento
pierde fuerza si se considera que una accin gentica o gnica previa ha hecho el ojo
diferente del resto del cuerpo, restringiendo de esta manera el efecto del gen mutante
exclusivamente a la regin del ojo. Esta accin gnica previa debe haber sido expresada
tambin en medio de un ambiente qumico diferente, pues de no ser as habra ojos en todas
partes del cuerpo. Este razonamiento lleva directamente a las primeras diferencias en el
Nuevo, porque si el material gnico o gentico es el mismo en el ncleo de los embriones
ms jvenes, tal como se deduce de los estudios sobre trasplante nuclear, las diferencias
que se desarrollan deben derivar de reacciones nucleocitoplsmicas.

Las interacciones nucleocitoplsmicas llevan involucrada la idea de accin gnica
diferencial como la base del desarrollo y de la diferenciacin celular. Esta idea incluye la
premisa que en cualquier momento que se considere, un gen o grupo de genes puede
funcionar activamente, mientras otros estn inactivos. Consecuentemente, la ordenada
expresin diferencial de la accin gnica debe en concordancia vincularse a la ordenada
secuencia de diferenciaciones que caracterizan el progreso del desarrollo.

Debe existir un mecanismo a travs del cual el ncleo ejerce su influencia sobre el
desarrollo y la diferenciacin. Se dirige atencin actualmente hacia el sistema DNA-
protena de la clula como el mecanismo posible para la secuencia de interacciones
nucleocitoplsmicas que tienen valor y significado en el control de la diferenciacin.

Recurdese que el DNA, material esencial de la herencia, sirve como plantilla para la
sntesis del RNA mensajero. El RNA mensajero sirve, entonces, como molde para la
sntesis de protenas especficas. El orden de los nucletidos en el DNA representa la base
del cdigo gentico, y este cdigo es transcrito en la sntesis de las copias complementarias
de RNA mensajero.

La informacin gentica, entonces, codificada en el orden de nucletidos del RNA
mensajero es modificada segn la secuencia de aminocidos de la protena sintetizada por
el aparato que forman el RNA mensajero y el ribosoma. Se cree que a travs de este
mecanismo la informacin gentica se transmite del DNA nuclear a las protenas
citoplsmicas, es decir, actuando directamente en la sntesis de protenas especificas de la
clula (hemoglobina y queratina, por ejemplo). Es de notar que este mecanismo es mucho
mejor conocido en microorganismos y que su aplicacin a clulas animales entra en el
terreno de las hiptesis.

Hay varias preguntas que todava no tienen respuesta, pero esta hiptesis ofrece el enfoque
ms prometedor respecto al conocimiento de las interacciones nucleocitoplsmicas y la
base de la accin gnica durante la diferenciacin y el desarrollo.

El DNA y las protenas especficas sintetizadas bajo su direccin, pueden ser considerados
como los dos extremos del sistema geno-protena con el complejo RNA-ribosoma
interpuesto en el proceso de transporte. Los genes dirigen la sntesis de las protenas
especficas, las cuales a su vez crean el medio ambiente qumico especfico y en conjunto
explican el estado de diferenciacin celular. La accin gnica diferencial puede concebirse
por la sntesis de diferentes protenas en diferentes momentos. Si es la activacin y
supresin de la actividad de los genes la que controla la expresin gnica, el mecanismo a
travs del cual ciertos genes se activan y otros se hacen inactivos, es el elemento critico; las
posibilidades que presentan son diversas.

Unos genes controlan a otros directamente o a travs de substancias no cromosmicas. Este
tipo de control ha sido descrito en la bacteria, Escherichia coli, en la cual la sntesis de la
/3-galactosidasa se debe a la presencia de varias genes. Segn el concepto generalmente
aceptado, un gen regulador controla la actividad de un gen operador, el cual a su vez ejerce
control inmediato sobre un conjunto de genes estructurales ntimamente unidos, conocidos
como opern. Los genes estructurales del opern determinan el orden de aminocidos en
una protena; si su actividad es bloqueada, no pueden servir como plantilla para la sntesis
de RNA mensajero. El gen regulador actita produciendo represores especficos que regulan
el estado de actividad del gen operador y por ende del opern. El ambiente celular y el
material gentico interaccionan a travs del represor. Un represor debe ser de tal carcter
que sea activado por un metabolito especfico y reaccione entonces con el gen operador
para producir la inactividad de su opern; o un represor puede ser inactivado por un
metabolito especfico en la clula, dando como resultado la actividad del gen operador y de
los genes estructurales que estn bajo su control. La sntesis de una enzima, por ejemplo,
puede ser controlada a travs de la represin que ejercen sus productos terminales, o puede
tambin ser controlada por la presencia de su substrato; es decir, se formara solamente en
presencia de su substrato. Este ltimo proceso, conocido como induccin, es el caso de la
f3-galactosidasa de E. coli.

Otro mecanismo posible para el control de la actividad de los genes se encuentra en el otro
extremo del sistema DNA protena. Es posible que las protenas sintetizadas puedan actuar
alterando el medio ambiente y la expresin del material gnico. Es indudable, adems, que
cuanto influya el aparato RNA-ribosoma, en su sentido ms estricto, puede originar una
accin diferencial del gen.

Muchos genes reguladores han sido descubiertos en microorganismos, pero su funcin en
los animales superiores es todava incierta. Es obviamente de importancia capital conocer si
el mecanismo de accin gnica descubierto en las bacterias es operativo en clulas
animales.

En este momento no hay informacin definitiva, pero algunas observaciones sugieren que
en los microorganismos y en los animales hay mecanismos comparables de accin del gen.
As es que se han descrito enzimas inducibles en rganos de mamferos, como
triptofanopirrolasa y transaminasa de tirosina en el hgado de la rata. Otras observaciones
son compatibles con la idea de que la hormona del crecimiento estimula la liberacin de
RNA mensajero, actuando as como inductora, tal como se especifico en los prrafos
anteriores.

La posibilidad de una accin diferencial de gen en los animales es sugerida por el
fenmeno de la dilatacin cromosmica (anillos de Balbiani). Esto es bien conocido y ms
fcilmente estudiado en los cromosomas gigantes de las glndulas salivales de insectos
dpteros como Drosophila y Chironomus. La observacin microscpica de estos
cromosomas revela que en etapas especficas de su desarrollo en la mayor parte de los
sectores cromosmicos aparecen como bandas, mientras que otras regiones se caracterizan
por dilataciones o ensanchamientos amplios y difusos que algunos investigadores
denominan "puffs". Estos ensanchamientos son tiras separadas de DNA, y estudios con
precursores radiactivos revelan que incluyen sitios de sntesis rpida de RNA (fig. 5-5).
Este RNA difiere del RNA ribosmico y bien puede ser RNA mensajero. Estos hechos
sugieren que los ensanchamientos cromosmicos representan el lugar donde los genes son
activos y estn produciendo RNA mensajero.

Estos lugares son muy sensibles a los cambios del medio ambiente celular. En Chironomus
la inyeccin de una hormona (ecdisona) que estimula la pupacin, altera en forma muy
significativa el esquema de ensanchamientos (anillos de Balbiani) adoptando una
disposicin tpica de la pupa. Concuerda esta observacin con la idea que los
ensanchamientos representan los lugares o puntos de actividad del gen y con observaciones
que indican una secuencia especifica de ensanchamientos en relacin con la etapa del
desarrollo del animal. Estas observaciones, combinadas con indicaciones sobre la presencia
de genes transitorios en los anfibios en desarrollo, impulsan la creencia que una accin
gnica diferencial, operando a travs de mecanismos como los descritos en las bacterias,
prevalece en los embriones animales en desarrollo.

Una pregunta importante y no resuelta es la condicin en que funciona el sistema de
sntesis de cidos nucleicos-protena en la fertilizacin. Hay evidencias en la mayor parte
de los animales, que sugieren que este sistema existe en el vulo maduro en estado de
inhibicin, del cual es liberado por el estmulo de la fertilizacin (captulo 4). La presencia
de un sistema funcional esta implcito en la incorporacin de aminocidos luego de la
fertilizacin, y particularmente la captacin de aminocidos por huevos de erizo de mar
anucleados estimulados por desarrollo partenogentico. Es muy probable que una forma
relativamente estable de RNA mensajero se produce durante la oognesis. Esta comprobado
que en la mayora de los casos el RNA mensajero, a diferencia de los RNA ribosmico y de
transferencia, tiene corta vida en la clula; en E. coli, por ejemplo, el RNA mensajero
persiste alrededor de tres minutos. Sin embargo, se conoce la existencia de formas
relativamente estables de RNA mensajero en mamferos (el RNA mensajero de la
hemoglobina en los reticulocitos, por ejemplo) y una clase relativamente estable de RNA,
que se cree incluye el RNA mensajero, se ha descrito en el embrin de anfibios. El huevo
no fertilizado de Xenopus contiene RNA de transferencia y una forma de RNA mensajero,
pero predomina el RNA ribosmico, y no se alcanza hasta un desarrollo ulterior la
proporcin del adulto en estas tres dales de RNA. El aparato de sntesis protenica es
aparentemente inmaduro, pero el RNA ribosmico es capaz de cubrir las necesidades del
embrin durante las primeras etapas del desarrollo. D. D. Brown y J. B. Gurdon han
demostrado que un mutante anucleado de Xenopus es incapaz de sintetizar RNA
ribosmico. Sin embargo, el RNA ribosmico elaborado durante la oognesis persiste,' y
los embriones desarrollan normalmente hasta el estado de renacuajo nadador. El RNA no es
el nico cido nucleico presente en el citoplasma del vulo maduro. DNA citoplsmico se
encuentra en el vulo no fertilizado de muchos animales, desde los equinodermos hasta los
mamferos. Segn I. B. Dawid, los huevos de anfibio (Rana y Xenopus) contienen 300 a
500 veces mas DNA que las clulas somticas de estos animales y por lo menos dos tercios
del DNA total del huevo son de origen mitocondrial.

Distribuidas entre las clulas recientemente formadas durante el desarrollo, las
mitocondrias, como los ribosomas de Xenopus, pueden satisfacer las necesidades del
embrin en desarrollo por algn tiempo. El papel del DNA mitocondrial en el huevo es
incierto. Puede vincularse a la herencia citoplsmica o a la replicacin mitocondrial. Sin
embargo, cada mitocondria de anfibio contiene te6ricamente suficiente DNA para codificar
aproximadamente 150 protenas de tamao medio. Recurdese a esos efectos, la evidencia
de actividad gentica citoplsmica en el oocito en desarrollo y las posibilidades diversas de
captacin de materiales de las clulas vecinas que tiene el oocito (fig. 3-13). El medio
ambiente intracelular o extracelular puede ser el vehculo inicial para expresar la accin
gnica diferencial y puede dar explicacin a los primeros fenmenos de diversidad cito-
plsmica. La localizacin citoplsmica de materiales crticos dentro del huevo y su posible
significacin fue estudiada anteriormente (captulo 3) ; el RNA ribosmico y el DNA
mitocondrial aparecen calificados como materiales significativos para el desarrollo,
localizados dentro del citoplasma del vulo antes de la fertilizacin.

Se cree que el sistema de accin gnica comprende tres categoras de RNA y por lo menos
24 aminocidos diferentes. Estos componentes son especificados por segmentos especficos
de DNA, o genes. El progreso del desarrollo y de la diferenciacin en varios tipos de
clulas puede muy bien derivar de una accin gnica diferencial. Esto puede ser
consecuencia de controles especficos ejercidos sobre la sntesis de RNA por los genes y
del use subsecuente de estos mensajes genticos para la sntesis y actividad de las protenas.
Un ejemplo de la regulacin de este sistema se ve en la regulacin citoplsmica de la
sntesis de RNA en los embriones de Xenopus, que sealan recientemente Gurdon y
Brown. En sus experimentos, ncleos de clulas embrionarias o larvales fueron
trasplantados a vulos no fertilizados anucleados conteniendo fsforo radiactivo, y la
cantidad de RNA sintetizada por los embriones se determin posteriormente por valoracin
radiolgica cuantitativa. Se encontr que el trasplante de un ncleo que sintetiza activa-
mente RNA ribosmico a un huevo anucleado da como resultado la cesacin de la sntesis
de RNA ribosmico en ese ncleo y en sus descendientes, hasta que se alcanza el estado de
desarrollo en el que la sntesis normal comienza. De esta manera, aun cuando el RNA
ribosmico es sintetizado activamente en las clulas del endodermo de la neurula, esta
sntesis no sucede durante la segmentacin promovida por ncleos trasplantados de estas
clulas. En consecuencia, la sntesis del RNA ribosmico recomienza durante la
gastrulacin, etapa durante la cual se inicia normalmente en embriones derivados de huevos
fertilizados. Este estudio demuestra claramente que la sntesis del RNA es regulada por el
tipo de citoplasma en el cual se sita el ncleo, y sugiere que los genes que especifican los
componentes del sistema de accin del gen estn sujetos a regulacin. Este concepto de
accin gnica diferencial es todava hipottico, y el mecanismo supuesto no ha sido aun
demostrado en forma inequvoca. Este aspecto de las interacciones nucleocitoplsmicas es,
sin embargo, un tema intensamente estudiado en la frontera de la biologa del desarrollo, y
se estn acumulando rpidamente pruebas en apoyo de este concepto general. La
apreciacin de esta hiptesis ayudara a interpretar observaciones futuras sobre las bases
moleculares de los cambios del desarrollo y su control.

Segmentacin y gastrulacin: revisin comparativa

EL CAPTULO 1 esboza las etapas del desarrollo de los anfibios, considerndolos ndice
del lineamiento general del desarrollo de los vertebrados. Despus de la fertilizacin el
huevo experimenta segmentacin, dividindose, todo o parte de el, en entidades cada vez
mas pequeas, y mediante una serie de diversiones mitticas que al comienzo pueden ser
sincrnicas, el cigoto o huevo se divide en gran nmero de clulas o blastmeras. La
segmentacin da como resultado una blstula que contiene normalmente una cavidad o
blastocele; la blstula esta a menudo representada por una capa o masa de clulas, el
blastodermo. La blstula constituye la culminacin de procesos operativos durante la
segmentacin y es la etapa inmediatamente anterior a la gastrulacin. La gastrulacin por
su parte es el proceso dinmico mediante el cual las reas componentes de la blstula son
reordenadas y reorganizadas para servir de base al desarrollo del plan corporal. Antes de
proceder a una revisin ms extensa del desarrollo del embrin de anfibio, y a un anlisis
del significativo y de mecnica de la gastrulacin, una breve revisin comparativa de las
caractersticas salientes de la segmentacin y de la gastrulacin proveer informacin de los
hechos generales y comunes de estos procesos entre individuos representativos de varios
grupos animales.

SEGMENTACION Y BLASTULA

Si bien se presentan distintos esquemas para su realizacin entre los diferentes grupos
zoolgicos, la segmentacin es un fenmeno universal entre los animales multicelulares.
Sobre la base de sus modelos geomtricos posible definir ciertos tipos de segmentacin. La
segmentacin es caracterstica de Vertebrata, Equinodermata, Porifera y posiblemente
Cnidaria, si bien estos ltimos tienen un esquema relativamente irregular. El modelo radial
ha sido descrito en los huevos de erizo de mar (fig. 3-3). En este tipo de segmentacin, los
pianos sucesivos de divisin pasan a travs del huevo perpendiculares entre s y dispuestos
simtricamente alrededor del eje polar del huevo. La segmentacin bilateral se presenta en
Ctenophora, Tunicata y Cephalochordata. En este caso, un tamao desigual de las primeras
blastmeras, que se mantiene durante las segmentaciones subsiguientes, establece un piano
aparente de bisimetra en el embrin en desarrollo. La segmentacin en espiral se encuentra
en los huevos de Nemertea, Annelida y la mayor parte de Mollusca. En esta segmentacin
se observa un movimiento rotatorio de partes celulares alrededor del eje del huevo (fig. 6-
1). El piano de segmentacin, en lugar de pasar exactamente a travs del huevo, se hace
oblicuo en relacin tanto al eje como al ecuador del huevo. Los pianos vertical (meridional)
y horizontal (ecuatorial) se convierten en espirales o segmentos de espirales, y las
blastmeras no se disponen en hileras regulares sino alternando una con otra. En todos los
casos la segmentacin espiral se transforma en segmentacin bilateral en algn momento de
su desarrollo. La sorprendente regularidad de la segmenta: den espiral se ilustra en varios
estudios de linaje celular, demostrando, entre otras cosas, que en los gasterpodos y
anlidos el ectodermo deriva de tres cuartetos de blastmeras que proceden a su vez,
mediante sucesivas segmentaciones oblicuas, de las primeras cuatro blastmeras. La
segmentacin en Nematoda sigue un modelo preciso y nico que le es propio.

La cantidad y distribucin del vitelo explica, al menos en parte, otras variedades de
segmentacin. En Amphioxus y anfibios el surco de segmentacin divide el huevo en dos
partes (fig. 7-1). Se trata de una segmentacin Completa, que recibe el nombre de
holoblstica. En los huevos de peces telesteos, reptiles y aves, que contienen gran
proporcin de vitelo, el embrin se desarrolla a "partir de una masa restringida de
protoplasma localizada en el polo animal. Durante la segmentacin en estos animales el
vitelo no se divide. Esta variedad de huevos Se caracteriza por segmentacin incompleta o
meroblstica (fig. 6-2). Solamente el disco protoplasmtico en polo"-animal es afectado por
los surcos de segmentacin que pasan a travs de l, superficialmente o en su casi totalidad.
Se observa segmentacin en algunos invertebrados, especialmente insectos (fig. 6-3). Un
rasgo distintivo de la segmentacin superficial es la serie inicial de divisiones nucleares sin
particin del citoplasma. Pequeas cantidades de citoplasma se asocian rpidamente con
estos ncleos y forman "islas". Estas islas emigran de su posicin central original, hacia la
periferia del huevo y se fusionan all con el citoplasma superficial. El citoplasma se divide
luego formando masas equivalentes a blastmeras.

La cantidad y distribucin del vitelo guarda obviamente cierta relacin con el tipo de
segmentacin y con la configuracin de la blstula. Esto no es, sin embargo, suficiente para
explicar las diferencias en cuanto al tipo. En algunos animales, por ejemplo, la sincrona e
igualdad de las divisiones puede predecirse actuando el vitelo como nico factor
determinante y sin embargo, las desviaciones son muy frecuentes y en apariencia sin
relacin alguna con la distribucin de vitelo. En forma similar, en el huevo de anfibio el
alto contenido en vitelo de las blastmeras del polo vegetativo parece estar directamente
relacionado con su bajo ndice mittico y gran tamao, aunque en otros casos los ndices
variables de segmentacin no concuerdan con una correlacin tan directa. La desigualdad
de tamao de las blastmeras hijas en los anlidos no puede explicarse fcilmente
basndose en la distribucin de vitelo, y el tipo de segmentacin espiral debe ser impuesto
por variables ajenas en absoluto al vitelo.

Se conocen varios factores que influyen en el tipo de segmentacin. Uno de
Ellos es el aparato mittico de la clula. Los movimientos cromosmicos caractersticos de
la divisin celular se realizan en asociacin con el huso acromtico y las steres. El eje
mayor del huso coincide, generalmente, con el dimetro mayor del rea citoplsmica en la
cual descansa y el surco de segmentacin pasa a travs del centro del huso, perpendicular a
su eje. La constancia relativa de esta relacin sugiere que los factores que influyen en la
orientacin del huso dentro del huevo, quiz influyan tambin en el tipo de segmentacin.
El surco de segmentacin se forma generalmente en ngulo recto en relacin al eje de
alargamiento celular, y en la mayora de los casos el alargamiento celular depende del
estiramiento del huso. El alargamiento no asegura un surco, pero su supresin impide la
divisin celular. Cuando se impide el estiramiento del huso en su eje mayor, puede exten-
derse lateralmente, alargando la clula en una direccin perpendicular a su eje normal.
Entonces aparece un surco de segmentacin verticalmente a la nueva direccin de
elongacin, indicando una relacin directa entre la orientacin del huso y la localizacin del
piano de segmentacin. La orientacin del huso puede tambin relacionarse con el tamao
de las blastmeras producidas durante la segmentacin. Cuando el huso se encuentra en el
centro del huevo, se forman blastmeras de igual tamao, mientras que un huso situado
asimtricamente da como resultado blastmeras desiguales. Esto ha sido demostrado
experimentalmente hace tiempo. E. G. Conklin mostr en huevos de moluscos, que la
segmentacin que sigue al desplazamiento del huso de maduracin, por centrifugacin,
produce dos cuerpos polares gigantes. Adems del huso, otros elementos pueden afectar el
tipo de segmentacin. En las blastmeras de huevos en los cuales las steres son muy
grandes, el alargamiento mittico y la segmentacin pueden ocurrir en ausencia del huso.
La corteza del huevo debe tambin ser considerada como factor que influye en el tipo de
segmentacin. Segn varios investigadores, la viscosidad de la corteza aumenta antes de la
segmentacin, formndose un surco de segmentacin en forma de espesamiento localizado,
de aspecto gelatinoso, de la capa cortical. La corteza parece por lo tanto, esencial para la
citocinesis; solamente pueden dividirse huevos o fragmentos de los mismos que contengan
material cortical. La formacin del surco puede ocurrir independientemente del huso y de
los steres. En el huevo de erizo de mar el desplazamiento del ster hacia un lado no afecta
la posicin del surco de segmentacin. La independencia de la capa cortical en la formacin
del surco de segmentacin se manifiesta tambin por experimentos con huevo de rana, que
demuestran que un surco aislado del interior del huevo por una tira de celofn contina
creciendo y profundizando. No solamente factores mecnicos sino tambin la distribucin
de materiales dentro del ooplasma puede posiblemente determinar el tipo de segmentacin.
La posibilidad, si no el mecanismo, es fcilmente comprobado analizando las
segmentaciones regulares y rgidamente definidas que se observan en los huevos de
moluscos, donde existe desde etapas tempranas una segregacin precoz de substancias
citoplsmicas y potencialidad desigual de desarrollo. En huevos de otro tipo una extensiva
redistribucin de substancias que puede guardar relacin con la localizacin de los surcos
de segmentacin se percibe desde el comienzo del desarrollo. Es difcil, con estos
elementos, decidir respecto a los mecanismos que presiden los tipos de segmentacin, pero
definitivamente dichos tipos no son resultado del capricho, particularmente en ciertos in-
vertebrados, donde representan en ltima instancia adaptaciones a las necesidades de la
futura larva.

La significacin de la segmentacin merece un comentario. Hay muy poco crecimiento
durante la segmentacin; es una fase caracterizada por divisin celular que origina una
masa de pequeas blastmeras y un aumento espectacular en el nmero total de clulas.
Como podra anticiparse a la luz de los conocimientos actuales relativos a los aspectos
bioqumicos de la mitosis, durante la segmentacin hay un aumento geomtrico en el
contenido total y en la sntesis de DNA y en consecuencia, de la relacin de materiales
nucleares con respecto al citoplasma. Adems, como se mencion anteriormente, la
divisin en blastmeras permite la segregacin de materiales citoplsmicos y el desarrollo
continuado de diferenciaciones regionales del citoplasma del huevo.
Sin segmentaci6n, puede tener lugar un desarrollo limitado. As, huevos de Chaetopterus en
los cuales se suprimi experimentalmente la segmentacin desarrollaron cilios externos y
revelaron cierta segregacin de su contenido interno. Este desarrollo fue muy limitado, sin
embargo, y quiz resultante de la organizacin citoplsmica presente en el huevo antes de
la divisin. El conjunto de los acontecimientos asociados con la segmentacin que va desde
la simple divisin del huevo en unidades manuables de edificacin, hasta la evolucin de
complejos grupos de clulas de propiedades fisicoqumicas diferentes y potencialidades
divergentes, parece ser necesario para el desarrollo normal.

La configuracin de las blstulas vara tanto como los tipos de segmentacin, pero, a pesar
de la ausencia de blastocele en muchos casos, la anatoma bsica de la etapa de blstula
durante el desarrollo es equiparable en las distintas especies fig. 6-4). En muchos animales
es una esfera hueca de blastmeras cohesivas, mientras en otras las blastmeras estn
dispuestas con bastante laxitud. La forma de la blstula recibe la influencia de factores
mecnicos. La capa hialina extracelular, cuando presente, como en los equinodermos, es sin
duda necesaria para la formacin normal de la blstula. Cuando no existe esta capa,
localizada habitualmente en la superficie protoplsmica del huevo, la blstula es
anormalmente aplanada. Una funcin comparable en cuanto al refuerzo de la unin de las
clulas de la blstula ha sido sugerida para la capa de "gel superficial" y "corteza" de los
huevos de anfibios y telesteos, respectivamente. Puentes intercelulares citoplsmicos
(plasmodesmos), restos de husos que quedan por un tiempo despus de completarse una
mitosis y cemento intercelular, proveen otros medios conocidos a tener en cuenta para la
cohesin de la blstula y su configuracin.

GASTRULAC ION

La gastrulacin representa una serie de movimientos morfogenticos que sitan los
presuntos tejidos del individuo en su lugar apropiado de acuerdo con el plan estructural.
Solamente el proceso general, tal como ocurre en diversos tilos, ser estudiado ahora, como
base para exposicin mas detallada de sus muy importantes fases en animales
seleccionados.

El proceso de gastrulacin ms simple parece ser el de los erizos de mar y el del
cefalocordado Amphioxus. Los aspectos esenciales de la gastrulacin se revelan en los
huevos de estos animales como un proceso relativamente simple. En el erizo de mar la
iniciacin de la gastrulacin esta indicada por una muesca en el polo vegetativo de la
blstula (fig. 3-3). En este punto, ciertas clulas se desprenden del epitelio para emigrar al
blastocele y formar el mesnquima primario. La muesca profundiza para formar el
arquenteron que se abre al exterior por el blastporo. Las blastmeras de la pared del
arquenteron son el endodermo y las que quedan en la superficie el ectodermo. Cuando el
arquenteron adquiere aproximadamente la mitad del dimetro de la blstula las blastmeras
ubicadas en su extremo emiten largas prolongaciones que se fijan a la superficie
interna del ectodermo en el polo animal; la contraccin de estos seudpodos arrastra el
arquenteron hacia el polo animal. Al mismo tiempo, las clulas portadoras de seudpodos
emigran desde la pared del arquenteron para formar mesnquima secundario, estableciendo
as un embrin con tres capas germinativas.
La gastrulacin en Amphioxus, si bien es comparable a la del erizo de mar, se diferencia en
algunos aspectos. El proceso comienza con la invaginacin del presunto endodermo cerca
del polo vegetativo (fig. 6-5). Esta invaginacin, el arquenteron, que se abre en el
blastporo, llega finalmente a aplicarse a la superficie interna de las blastmeras del
hemisferio animal. Se forma as una gstrula cupuliforme que consta de un ectodermo
externo y un endodermo interno. Las blastmeras mesodrmicas y notocordales que
originariamente forman parte del borde de la copula, emigran hasta una position a lo largo
de la pared dorsal interna (techo del arquenteron) de la gstrula. Mas tarde, el notocordio se
pliega dorsalmente a partir del techo del arquenteron y los segmentos del mesodermo se
evaginan en somitas individuales. Las somitas se expanden para formar segmentos
musculares y las paredes del celoma o cavidad corporal. Por encima del notocordio, el
ectodermo experimenta una serie de cambios que dan por resultado la formacin del tubo
neural. Por lo tanto, inmediatamente despus de haberse completado la gastrulacin queda
establecido el plan bsico del organismo de los cordados (fig. 6-6).

Los detalles de la gastrulacin en los anfibios sern estudiados en el captulo 8; por lo tanto,
tan solo un somero boceto del proceso ser comentado aqu. En el embrin de anfibio (fig.
7-4), se forma un blastporo en el lado dorsal de la blstula en el campo vegetativo, y, a
medida que profundiza esta invaginacin, se forma un arquenteron. Como- resultado de la
invaginacin, el material que originariamente se encuentra en la superficie de la blstula es
transportado hacia el interior al blastporo. La invaginacin se extiende lateralmente, y a
todo lo largo del borde del blastporo el material marginal se desplaza hacia el interior. Por
ltimo, los lados del blastporo se aproximan y se fusionan. Simultneamente el material
no invaginado de la mitad animal de la blstula se dilata para cubrir la superficie exterior de
la gstrula, y se forma un embrin con tres hojas blastodrmicas.

Los peces telesteos, durante la gastrulacin, ponen de manifiesto un tipo morfolgico poco
comn (fig. 6-7). Durante la segmentacin el blastodermo de los telesteos es un
conglomerado de blastmeras, sin estructura, encima de una gran masa de vitelo. El
blastodermo esta anclado al vitelo por el periblasto, continuacin perifrica de su envoltura
celular epitelial sobre el sincitio de la yema o vitelo. La blstula de los telesteos esta, as
compuesta de un casquete celular apical, el blastodermo, y de un periblasto por debajo,
ntimamente asociado a la yema. A medida que se aproxima la gastrulacin el blastodisco
adelgaza y su borde externo aumenta de espesor para formar un "anillo germinal". En el
borde caudal del blastodermo es ms pronunciado el engrosamiento del anillo germinal,
extendindose por alguna distancia en la porcin central hacia el polo animal en la parte
media del blastodermo. Este ensanchamiento posterior del anillo germinal es conocido
como escudo embrionario. Cuando comienza la gastrulacin, un espesamiento caudal del
blastodisco, el hipoblasto, es identificable como una lengua de blastmeras que se extiende
hacia adelante entre el blastodisco y el periblasto.

Al continuar la gastrulacin, el anillo germinal y exteriormente, las regiones
extraembrionarias del blastodisco se extienden gradualmente por encima y envuelven la
masa de vitelo. Los bordes del anillo germinal convergen gradualmente fusionndose, por
Ultimo, en la regin caudal del tronco del embrin. Expresado en trminos de sus
relaciones temporales y sus implicaciones funcionales con la gastrulacin, la oclusin del
anillo es el equivalente del cierre del blastporo de los anfibios.

El carcter de los movimientos morfogenticos y el origen del hipoblasto en los telesteos
no es claramente conocido. Los embriones de telesteos son difciles de estudiar con
tcnicas experimentales, y gran parte de las primeras investigaciones se han limitado a
ensayos bsicamente descriptivos y a comparaciones con los movimientos de la
gastrulacin en diferentes vertebrados. La mayora de las primeras investigaciones llevaba
implcita la premisa de que en los embriones de telesteo los rudimentos de la placa
paracordal, el notocordio y el mesodermo, alcanzan su destino en el eje del embrin por
movimientos de giro hacia dentro a partir de la superficie en el borde del blastodisco en
forma comparable a la invaginacin de la cuerda mesodrmica en los anfibios.
Investigaciones experimentales recientes, sugieren, sin embargo, que no hay ni un giro
hacia dentro, ni un desprendimiento de blastmeras para producir el hipoblasto en Salmo;
los estudios de Ballard indican que el hipoblasto se origina de una emigracin hacia afuera
de blastmeras centrales profundas localizadas dentro del blastodisco, asociada con de todo
el disco. La formacin del eje es la resultante de una emigracin afuera y convergencia
axial de las capas profundas de blastmeras. Es probable que investigaciones adicionales
sobre gastrulacin en telesteos, susciten una revaloracin de los conceptos tradicionales.
Revisando las reas de inseguridad de cambios posibles en la interpretacin de los detalles
de la gastrulacin y de fenmenos que a ella se asocian, debe recordarse que el primer
resultado de la gastrulacin en peces seos, como en otros animales, es el reordenamiento
de las blastmeras para establecer las tres hojas blastodrmicas y crear las condiciones para
el desarrollo posterior.

Tal como se ha visto en la breve resea precedente, el tipo general de gastrulacin,
admitiendo ciertas limitaciones para los telesteos, consiste en que clulas superficiales se
mueven hacia el interior del embrin hacia un blastporo relativamente circunscrito. La
situacin es a la inversa en aves y mamferos. No existe en estos animales un blastporo
abierto, pero en cambio las clulas superficiales se mueven hacia el interior a travs de una
estra primitiva alargada. Los detalles se explicaran en el captulo 12. La gastrulacin de los
mamferos no ha sido todava observada experimentalmente, pero la situacin parece ser
equiparable a la de las aves, a pesar de la menor cantidad de yema o vitelo.

Esta revisin muestra grandes similitudes en los acontecimientos de la gastrulacin entre
diversos grupos de animales. Es posible que se insista demasiado en las similitudes, pero,
sin embargo, la gastrulacin implica en todas las clases una reorganizacin estructural
masiva del embrin, por medio de movimientos celulares, asociaciones selectivas, y en los
equinodermos por lo menos, contractilidad celular. En cada acontecimiento hay una fase
altamente crtica del desarrollo de la cual depende el establecimiento del tipo estructural
bsico de las capas germinativas que conducen al desarrollo del embrin.

Con los conocimientos bsicos generales que acabamos de estudiar es posible proceder a la
exposicin del desarrollo del embri6n de anfibio.



Desarrollo de los anfibios

QUED CLARAMENTE establecida, en los captulos precedentes que despus de la
fertilizacin se suceden fenmenos morfolgicos y fisiolgicos profundos y variados que
culminan en la formacin de un embrin en el que las principales estructuras del cuerpo se
encuentran presentes en alguna forma visible. El anlisis de los factures responsables de las
primeras etapas del desarrollo se ha logrado en gran parte por estudios experimentales en
huevos de anfibio y es, por lo tanto, aconsejable bosquejar ahora la embriologa normal de
estos huevos.

El huevo de rana no tiene mecanismos de regulacin trmica y la velocidad de su desarrollo
depende de la temperatura del medio que lo rodea. Por este motivo el huevo alcanza
cualquier etapa desde casi tres veces antes, cuando se le conserva a 20C que a 10C. El
aumento del ritmo de crecimiento es una manifestacin del fenmeno general de
incremento de la velocidad de las reacciones qumicas cuando aumenta la temperatura. Aun
cuando la temperatura puede ser usada para controlar el ritmo del desarrollo, existen lmites
a la gama de temperaturas que puede resistir el huevo de rana. Los huevos de Rana pipiens
desarrollan normalmente a temperaturas entre 3 y 24C, pero fuera de estas temperaturas
el desarrollo es anormal.

Otros factores ambientales cambian el curso del desarrollo. El huevo de rana debe
cultivarse en agua con tonicidad apropiada. Soluciones salinas como la de Ringer, que es
isotnica con los tejidos expuestos de la rana adulta, causa siempre muerte rpida de los
huevos, mientras que soluciones salinas diluidas o agua de pozo son muy adecuadas. El
volumen de agua en el que los huevos desarrollan es muy importante. El huevo consume
oxgeno continuamente, excretando anhdrido carbnico, amoniaco y urea. Si los huevos
estn amontonados en un pequeo volumen de agua mueren como consecuencia del efecto
combinado de la falta de oxgeno y de la acumulacin de productos de desecho.

Las fases del desarrollo normal de diversos anfibios se denominan segn etapas definidas
basadas primariamente sobre criterios de forma exterior. Estas etapas estndar se usan para
indicar el estado de desarrollo del embrin sin tener en cuenta la edad, temperatura u otras
variables posibles, con objeto de evitar ambigedades. Este captulo incluye las etapas en el
desarrollo normal de R. sylvatica preparadas por A. W. Pollister y J. A. Moore; etapas
comparables en el desarrollo de R. pipiens han sido presentadas por W. Shumway. P. D.
Nieukoop y J. Faber desarrollaron tablas normales para Xenopus laevis, y las etapas de
desarrollo de R. G. Harrison para Amblystoma punctatum son usadas sistemticamente por
los investigadores del desarrollo de los urodelos. Algunas de estas tablas sobre desarrollo
de anfibios son mencionadas como referencia entre las lecturas recomendadas y
bibliografa.

FERTILIZACION Y SEGMENTACION TEMPRANA

En el momento oportuno, la hembra deposita sus huevos en el agua en una masa nica que
se mantiene reunida por una gelatina. El macho vierte sus espermatozoides y la fertilizacin
tiene lugar en escasos minutos. Poco despus de la fertilizacin la membrana vitelina se
eleva de la superficie del huevo y este flota libremente dentro de la gelatina. El hemisferio
vegetativo (blanco vitelino), es ms pesado que el hemisferio animal (obscuro), y los
huevos por ese motivo giran dentro de la gelatina hasta que el polo animal se encuentra en
posicin superior. Si la masa de huevos fertilizados es invertida, cada huevo gira para
recuperar su posicin original. La orientacin del huevo en relacin con la gravedad parece
ser un hecho importante. En algunas ranas, por ejemplo, el desarrollo es anormal si los
huevos se conservan invertidos por algn tiempo durante la primera segmentacin. Se
pueden producir monstruos dobles si se invierten los huevos cuando ocurre una
segmentacin.

La segmentacin y el desarrollo hasta la etapa de larva temprana progresa dentro de la
gelatina y de la membrana de fertilizacin. La gelatina se hincha hasta varias veces su
volumen original por imbibicin de agua, lo que separa los huevos entre s, proporcionando
un ambiente ms favorable para cada huevo en el interior de la masa. Llegada la
maduracin, la membrana y parte de la gelatina son atacadas por una enzima segregada por
el embrin; se rompe la membrana y el embrin sale de la gelatina, y comienza de
inmediato a nadar.

La figura 7-1 ilustra los cambios en el huevo desde la fertilizacin hasta la etapa de 16
blastmeras. Se omiten la gelatina y la membrana. Estos cambios tienen lugar en cinco
horas a 18C. En la fertilizacin los espermatozoides penetran en el hemisferio animal, y en
trmino de una hora en los huevos de la mayora de anfibios, un reordenamiento de material
causado por corrientes localizadas da como resultado un ligero desplazamiento del eje polar
con aparicin de la semiluna gris en el lado opuesto del huevo. Varios experimentos
indican que la semiluna gris es una diferenciacin regional temprana de la corteza que
marca el futuro labio dorsal del blastporo. Aproximadamente dos horas despus de la
fertilizacin un surco o canal aparece en la superficie superior del huevo. Este surco cruza a
travs polo animal y profundiza en forma progresiva. Al mismo tiempo el surco se extiende
desde el polo animal, siguiendo el meridiano del huevo, partiendo en dos mitades la
semiluna gris hasta que se completa el corte en el polo vegetativo. Este surco de
segmentacin, por constriccin del huevo, llega a tomar contacto en el centro, dando como
resultado dos clulas o blastmeras completas del mismo tamao (fig. 7-2).

Esta primera segmentacin es descrita tcnicamente como 1) hipoblstica; es decir, hay una
divisin completa del huevo, en contraste con la divisin parcial, o segmentacin
meroblstica; 2) igual, esto es, que las clulas resultantes tienen igual tamao, en contraste
con la segmentacin desigual, en la cual una blastmero es mayor que la otra, y 3)
meridional, esto es, el surco de segmentacin forma un meridiano a lo largo del huevo, en
contraste con la segmentacin horizontal, en la cual el surco se forma a largo del ecuador
como un paralelo del huevo.

La segunda segmentacin tiene lugar alrededor de hora despus de la primera, y las dos
primeras blastmeras se dividen en forma simultnea; como la primera segmentacin, esta
es tambin hipoblstica, igual y meridional. El surco de la segunda segmentacin forma
ngulos rectos con el de la primera y pasa tambin por el polo animal. La figura 7-3 ilustra
el punto en el cual los surcos se entrecruzan a nivel del polo animal.

La tercera segmentacin es horizontal, siguiendo un piano paralelo al ecuador del huevo. D
origen a ocho blastmeras, cuatro animales y cuatro vegetativas, de las cuales las ltimas
son definitivamente mayores (fig. 7-3). Por lo tanto, la tercera segmentacin es hipoblstica
y horizontal.

La cuarta segmentacin del huevo de rana pasa a travs del eje animal-vegetativo, y puede
aunque con menos precisin seguir los meridianos del huevo. El resultado es un
agrupamiento de ocho blastmeras relativamente pequeas en hemisferio animal y de ocho
relativamente grandes en el vegetativo.

SEGMENTACION TARDIA DURANTE LA GASTRULACION

La serie inmediata de cambios, resumida en la fig. 7-4, tiene lugar durante el periodo
comprendido entre la sexta y la vigesimoactava hora del desarrollo. Desde las seis hasta las
16 horas, contina la segmentacin y las blastmeras del polo animal se hacen muy
pequeas; las blastmeras vegetativas son mayores que las del hemisferio animal y suelen
verse fcilmente a las 16 horas (fig. 7-5). Durante la segmentacin se forma una cavidad
interna, el blastocele, principalmente en el hemisferio animal (fig. 7-8). Alrededor de 19
horas despus de la fertilizacin aparece el labio dorsal del blastporo como hendidura de
tono obscuro, inmediatamente por debajo del ecuador del huevo (figs. 7-4 y 7-6). Las
blastmeras comienzan a emigrar hacia el interior y surge el arquenteron muy pequeo al
principio, pero que con la continua migracin celular al interior y el gran crecimiento de
blastmeras sobre el hemisferio vegetativo aumenta de tamao _28 horas. A cada lado del
labio dorsal, mas y mas clulas se incorporan este proceso de gastrulacin, y el labio del
blastporo se extiende lateralmente do un semicrculo (figs. 7-4 y 7-7). Los labios laterales
se extienden en sentido ventral y se unen entre si para formar el labio ventral del blastporo
(fi7-4 y 7-7). El blastporo comunica con el arquenteron, pero los labios se cien al vitelo
con tal fuerza que no existe una abertura real del arquenteron hacia el exterior en este
momento. El vitelo comprimido forma un tapn que ocluye firmemente el blastporo.
Mientras el arquenteron aumenta de tamao, M blastocele se hace progresivamente ms
pequeo, es desplazado hacia adelante, finalmente se oblitera.

Durante el periodo de desarrollo entre las seis y las 28 horas hay poco cambio en la forma
de la gstrula, casi esfrica. Se observa cierto incremento de tamao como resultado de la
formacin del blastocele y del arquenteron, pero el desarrollo morfolgico en esta etapa, es
primariamente un problema de divisiones y migraciones celulares. Externamente por el
momento no hay diferenciacin visible de estructuras; sin embargo, este periodo es
altamente crtico, tal como puede deducirse por el simple hecho de que huevos lesionados
en distintas formas, detienen a menudo su desarrollo en esta etapa. Es indispensable un
conocimiento cabal de las relaciones morfolgicas y de los procesos involucrados en las
diversas etapas de la gastrulacin para la comprensin del anlisis experimental del des-
arrollo.

CAMBIOS INTERNOS DURANTE LA GASTRULACION

La anatoma interna de una gstrula temprana es bosquejada en la fig. 7-8, e interpretada a
partir de secciones o cortes de 10 micrones de espesor, aproximadamente, preparadas y
coloreadas segn las tcnicas histolgicas estndar. Las disecciones de las gstrulas tardas,
que se muestran en las figs. 7-9 y 7-10, proporcionan una imagen ms natural.
Procede recordar que el blastocele interno, lleno de lquido, se hace bastante grande en la
gstrula temprana (fig. 7-8); el blastocele se oblitera durante la gastrulacin cuando
desarrolla el arquenteron (gastrocele), o intestino primitivo (fig. 7-10). Un corte sagital
medio de una gstrula joven muestra el proceso de formacin del labio dorsal del
blastporo. Tcnicamente hablando la pequea escotadura esbozada por las estras de
pigmento es la primera manifestacin del arquenteron.

El comienzo de la emigracin interna de clulas se inicia en el hemisferio vegetativo, por
debajo del ecuador de la gstrula. All las blastmeras mayores vegetativas, llenas de vitelo,
se reducen gradualmente a blastmeras cada vez ms pequeas, caractersticas del
hemisferio animal. Esta diferencia del tamao celular da como resultado un gradiente en el
nmero de ncleos por unidad de rea; en consecuencia, aun cuando son visibles pocos
ncleos en un corte del polo vegetativo, hay muchos cerca del polo animal. Este es un
gradiente morfolgico animal-vegetativo evidente y notable, que se corresponde con los
gradientes observados en la respiracin, actividad enzimtica y otros indicadores
metablicos.

El labio del blastporo contina su progresin sobre el hemisferio vitelino. Los labios
laterales se desarrollan (fig. 7-9) y unen (fig. 7-10), para formar el labio ventral del
blastporo. El tamao del blastocele se reduce a medida que aumenta el del arquenteron. En
la fig. 7-10 las dos cavidades tienen aproximadamente, el mismo tamao; en la fig. 7-11
existe un blastocele muy pequeo que no se muestra en la gstrula que se ilustra.

Durante la gastrulacin el ectodermo se estira para cubrir la superficie total de la esfera, y
en compensacin a este aumento del rea de superficie, cambia de una capa gruesa, como la
de la gstrula temprana, a una capa delgada al final de la gastrulacin (captulo 8). Sin
embargo, incluso en la etapa de gstrula tarda fig. 7-11) el espesor del ectodermo es tan
solo de dos blastmeras, pero un poco ms tarde (fig. 7-12), se engruesa en el lado dorsal
para formar una placa neural. Al mismo tiempo que se forma esta placa, el tapn vitelino
desaparece en el interior. El blastporo aparece entonces como una abertura pequea en el
arquenteron, y sus labios laterales se renen, formando por coalescencia un surco con
aberturas dorsal y ventral. Estas aberturas se cierran finalmente por fusin del ectodermo
quedando en la parte ventral una depresin, el proctodeo. A esta depresin se incorpora ms
tarde una excrecencia endodrmica para formar una nueva abertura llamada cloacal, que a
menudo recibe el nombre de ano.

El arquenteron forma mas tarde, hacia adelante, una faringe y de ella se extiende una
excrecencia, la evaginacin oral, hacia la epidermis anterior. Una invaginacin de la
epidermis, denominada estomodeo, se une y fusiona con la evaginacin endodrmica oral
para formar la placa oral. En la etapa de renacuajo la placa oral se perfora para formar la
boca.

DE LA NEURULA TEMPRANA AL EMBRION CON BROTE CAUDAL

La serie de 36 a 58 horas (fig. 7-13), se caracteriza por la aparicin de la placa neural y su
transformacin en tubo neural y cerebro primitivo. La formacin de la placa neural como
un espesamiento ectodrmico, la elevacin de sus bordes laterales como crestas neurales, y
su ulterior fusin produce un tubo neural hueco como se ilustra en las figs. 7-13 y 7-14. En
la fig. 7-13 (etapa 16) el tubo neural, largo y estrecho, se ha ensanchado en su porcin
anterior para formar parte del cerebro primitivo.

CAMBIOS INTERNOS DURANTE LA NEURULACION

Al final de la gastrulacin no hay estructuras internas claramente visibles, pero con el
desarrollo de la placa neural aparecen en el techo del arquenteron un notocordio medio y
masas laterales de mesodermo. Un corte transversal de una etapa de placa neural bien
formada, muestra notocordio como un bastn bien neto y diferenciado, con mesodermo en
cada uno de sus lados (fig. 7-15). El sistema nervioso primitivo se diferencia de las
blastmeras ectodrmicas durante la neurulacin La fig. 7-16 muestra la formacin de las
crestas neurales a partir de la placa neural engrosada y su fusin en la lnea dorsal media
para formar el tubo neural. Una diseccin de la neurula (fig. 7-17) muestra la relacin entre
el notocordio y la placa neural. Cuando la placa neural se reorganiza para formar un tubo,
el mesodermo ha sido separado del endodermo y sus alas laterales han crecido ventralmente
entre el ectodermo y el endodermo para encontrarse en la lnea ventral media. La figura 7-
16 muestra, esquemticamente, la separacin del notocordio, el mesodermo y el endodermo
en esta etapa. Los detalles del desarrollo del sistema nervioso sern estudiados mas
adelante; es importante sealar ahora, sin embargo, las relaciones espaciales del ectodermo
que forma la placa neural con el notocordio y el mesodermo, y llamar la atencin sobre las
clulas del Angulo dorsal de los pliegues neurales que muestra la fig. 7-15. Estas clulas
forman la cresta neural que posteriormente emigran a diversas partes del cuerpo y con muy
diferentes destinos. El notocordio y el mesodermo, derivan de la regin que rodea el labio
dorsal del blastporo (semiluna gris) en la gstrula muy temprana y se encuentran en
contacto firme con la placa neural futura durante el proceso de gastrulacin. Esta estrecha
relacin es de la mayor importancia en las interacciones crticas entre el techo del
arquenteron y el ectodermo suprayacente, a travs de la cual el ectodermo es inducido a
evolucionar dando la placa neural.

EMBRION

Despus de la oclusin de los pliegues neurales, de la formacin del mesodermo y de la
diferenciacin temprana del notocordio, la neurula se alarga y comienza la formacin de la
cabeza (figs. 7-13 y 7-18). Estas dos etapas del desarrollo no estn netamente delimitadas,
pero alrededor de la etapa 17, la neurula se convierte en embrin. El embrin temprano se
caracteriza por aumento de las estructuras reconocibles, tal Como una cabeza diferente del
cuerpo y el comienzo de formacin de la cola. La superficie dorsal del embrin adquiere
tambin una forma que guarda relacin con la formacin del tubo neural y de las somitas
mesodrmicas.


La figura 7-19 muestra tres etapas en el desarrollo del embrin. Ntese el aumento en la
longitud del brote caudal, la creciente diferenciacin de la regin ceflica, y los cambios en
la forma de la placa bronquial. El ectodermo se cubre de cilios (que no se muestran), y el
embrin se mueve dentro de la jalea que an lo envuelve. El embrin es capaz de contraer
sus msculos si se le estimula.

Pueden verse los cambios tardos por comparacin de dos etapas, en el desarrollo del
embrin de salamandra (fig. 7-20). En el de mas edad se nota el aumento de la longitud
total, la cabeza mejor desarrollada, las marcas en la regin dorsal del tronco causadas por
las somitas mesodrmicas y el aumento de la longitud de la cola.

ESTRUCTURA DEL EMBRION A LA SALIDA DEL CASCARON

En la fig. 7-21 se muestra el embrin en el momento de su salida al mundo
exterior. La cola y la cabeza son prominentes. El corazn ha comenzado a latir y la sangre
circula por el interior de las branquias en desarrollo. Se ven en la
cabeza prominentes ventosas ventrales, que segregan moco destinado a fijar el embrin
recin nacido a las plantas acuticas. En esta poca aproximadamente el embrin sale de la
jalea previamente ablandada y disuelta por una enzima especial. Se forma el estomodeo y la
boca continua su desarrollo. Surgen tambin movimientos reflejos, y ya desde el
nacimiento el embrin es capaz de nadar. La estructura interna del embrin de rana al
nacimiento es mejor definida por anlisis de cortes progresivamente seriados del extremo
anterior al posterior del embrin. En los prrafos siguientes se bosquejara el origen de cada
estructura, su condicin en el momento de nacer y su destino y funcin subsiguiente.

El elemento mas notable presente en el primer corte (fig. 7-22), es el cerebro anterior,
amplio, de paredes gruesas (prosencfalo). Deriva de la regin mas anterior de la placa
neural y con el tiempo da origen, entre otras estructuras a 1) los lbulos olfatorios; 2) los
hemisferios cerebrales pares; 3) la epfisis, que se transforma en glndula pineal,
probablemente una glndula de secrecin interna; 4) las vesculas pticas; 5) el tlamo, y 6)
el infundbulo, estructura que forma el tallo y el 1bulo nervioso de la hipfisis que mas
tarde secreta una hormona que produce constriccin de los vasos sanguneos.

Dos plcodas ectodrmicas engrosadas, anterolaterales con respecto al cerebro anterior, se
invaginan para formar las freas olfatorias, las cuales comunican finalmente con la faringe;
sus gruesas paredes contienen los neuroblastos que dan origen a las fibras nerviosas del
nervio olfatorio.

El corte siguiente (fig. 7-23), pasa a travs de la cabeza a nivel de los ojos. El cerebro
medio (mesencfalo) de gruesas paredes, es ms prominente en direccin dorsal. En el
adulto las paredes ventrales del cerebro medio dan origen a varias vial nerviosas motoras y
a cordones que conectan los hemisferios cerebrales con las regiones posteriores del sistema
nervioso. La pared dorsal se diferencia en lbulos pticos que reciben conexiones de los
nervios pticos. El ojo ocupa posicin lateral con respecto al cerebro anterior. Tiene su
origen en una evaginacin de dicho cerebro anterior, la vescula ptica, que forma una
estructura en dos capas, designada, por virtud de su forma, copula ptica cuya capa interna
da origen a la retina que posee conos y bastoncillos y a neuroblastos que dan lugar al nervio
ptico. La capa retiniana externa, en una etapa ulterior, deposita pigmento negro. La copula
ptica permanece unida al cerebro anterior por el tallo ptico que forma
el substrato para el crecimiento del nervio ptico. El cristalino se forma como un
engrosamiento de la capa profunda de la epidermis donde toman contacto con ella los
bordes de la copula ptica. Las clulas del cristalino forman las fibras del cristalino, que
pronto pierden su opacidad. La epidermis sobre el cristalino, se torna tambin transparente,
diferencindose parcialmente en crnea.

Ventral a los cerebros anterior y medio, se encuentra el rudimento de la hipfisis anterior.
Este grupo de clulas nace de un engrosamiento de la epidermis del estomodeo; se separa
despus de esta epidermis, emigrando entre la faringe y el cerebro anterior para unirse con
el infundbulo y formar la hipfisis. Esta invaginacin del estomodeo forma as los 16bulos
anterior o intermedio de la hipfisis del adulto (adenohipfisis). Su funcin es muy amplia,
y sus hormonas guardan relacin con muchas y muy diferentes funciones corporales que
incluyen: crecimiento, reproduccin y control de las glndulas tiroides y suprarrenales y de
la dispersin de pigmento.

Dos vasos sanguneos llamados races articas dorsales se encuentran a cada lado de la
hipfisis. Estos vasos se continan hacia adelante como arterias cartidas internas y se unen
posteriormente para formar la aorta dorsal. En el embrin temprano las races articas
dorsales se unen a las races aorticas ventrales por medio de los arcos articos (fig. 7-24)

La faringe, tapizada de endodermo, se encuentra por delante de la hipfisis. Una
excrecencia que parte del suelo de la faringe la evaginacin oral (que no se muestra en el
corte), se dirige hacia una invaginacin epidrmica, el estomodeo. Estas dos bolsas se
fusionan y una abertura forma la boca. Las ventosas orales son estructuras puramente
embrionarias y larvarias.

La fig. 7-24 ilustra un corte transversal del odo y del corazn. Los vasos sanguneos y el
coraz6n se muestran en forma esquemtica. El cerebro posterior (rombencfalo) tiene
paredes laterales muy gruesas y un techo muy delgado. Derivan del mismo el cerebelo, el
bulbo raqudeo y los elementos motores de los nervios craneales asociados con la faringe.
A cada lado del cerebro posterior se encuentra una vescula piriforme, el otocisto, que
comienza como un espesamiento ectodrmico, la plcoda auditiva en la que surge una
depresin, para convertirse finalmente en una cavidad cerrada que se separa de la
epidermis. Un brote dorsal del otocisto forma el conducto endolinftico. Las paredes del
otocisto formaran el laberinto membranoso del odo interno: Sculo, utrculo, conductos
semicirculares y caracol, que funciona como un rgano del equilibrio, junto con, una papila
sensitiva que es el rgano de la audicin. El nervio auditivo tiene su origen en una masa de
clulas derivadas, en parte, de la cresta neural y en parte de la plcoda auditiva. La plcoda
craneal mas posterior (vago) emite una prolongacin hacia atrs por debajo de la epidermis
corporal lateralmente hasta la punta de la cola. A cada lado de estos cordones se desarrollan
clulas sensitivas que penetran en la epidermis para quedar expuestas a los lados del cuerpo
constituyendo el sistema de lnea lateral. Estas clulas sensoriales ciliadas son sensibles a
las vibraciones del medio acutico circundante. El nervio vago es el nervio principal de la
lnea lateral, si bien a nivel de la cabeza las prolongaciones del sistema son inervadas
tambin por los pares craneales VII y IX. El sistema de lnea lateral es un aparato sensorial
ente en los peces; en los anfibios anuros desaparece durante la metamorfosis. Un poco antes
del corte que se ilustra, se origina la glndula tiroides a partir del de la amplia faringe. El
arco artico se encuentra en el mesnquima lateral, la faringe y el ectodermo.

La circulacin comienza aproximadamente en esta etapa del desarrollo. En la 7-24 se
muestra esquemticamente el corazn, con la aorta ventral emitiendo y dando origen a los
arcos articos que se extienden en direccin dorsal, alrededor de la faringe, para unirse a las
races de la aorta dorsal. Sin embargo, cierta cantidad de sangre directamente a travs de los
arcos articos, ya que mayor parte de la misma circula por las asas secundarias en los
filamentos branquiales externos donde tiene lugar el intercambio de oxgeno y anhdrido
carbnico. El recorrido de la circulacin comenzando en la aorta ventral, se hace a travs de
la arteria branquial aferente, situada en las asas vasculares de las branquias, y de all por la
arteria branquial eferente hacia la raz de la aorta dorsal.
este punto, parte de la sangre fluye hacia la parte anterior por las cartidas hacia los
capilares desde los cuales retorna al corazn por las venas cardinales anteriores. El resto de
la sangre arterial fluye en direccin posterior por la aorta dorsal hacia el cuerpo y vsceras
en desarrollo. De las vsceras, la sangre regresa corazn a travs del hgado y las venas
suprahepticas, y del resto del cuerpo par las venas cardinales posteriores.

La fig. 7-25 representa un corte a la altura del rin primitivo o pronefros. E pronefros, que
ya funciona al nacimiento, se forma a partir de una serie de excrecencias derivadas de la
parte del somita mesodrmico conocido como nefrotomo, en el segundo, tercero y cuarto
segmentos. Esta regin se sita en el borde dorsolateral de la cavidad celmica que se
forma entre las hojas del mesodermo lateral cuando estas se separan. Un extremo de cada
elemento nefrotmico gira hacia arras y se fusiona con el siguiente para formar un conducto
pronfrico que contina creciendo en direccin posterior hasta entrar en la cloaca. El otro
extremo se abre en el celoma por medio de un nefrostoma o embudo ciliado. Los cilios del
nefrostoma, transportan lquidos desde la cavidad cel6mica al tbulo, de donde pasan,
probablemente, despus de una resorcin selectiva, al interior del conducto pronfrico. El
tbulo se hace largo y contorneado. En la fig. 7-25 se muestran las estructuras en forma
esquemtica, para hacer hincapi en sus relaciones funcionales.

En oposicin al nefrostoma, la aorta dorsal desva arteriolas a un bolsn del mesodermo
celmico para formar un cuerpo vascular, el glomo. La vena cardinal posterior se divide en
una red de vasos ms pequeos a medida que discurre entorno a los tbulos pronfricos,
formando un plexo. Un sistema como el representado esquemticamente en la fig. 7-25
permite que los productos filtrados de la sangre pasen de la aorta dorsal al glomo, de aqu al
celoma, para luego llegar al nefrostoma por accin ciliar y despus al tbulo pronfrico. De
esta manera los productos de excrecin son reunidos por el conducto pronfrico y dirigidos
hacia la cloaca y el exterior. El pronefros es una estructura temporal que degenera mas
tarde hacindose cargo de su funcin el mesonefros, o rin permanente de los anfibios. El
desarrollo ulterior del rin de los vertebrados es analizado en el captulo referente al
mesonefros y metanefros de las aves.

En el mismo corte transversal (fig. 7-25) se ven la medula espinal y la cresta neural, de la
cual derivan entre otros diversos tipos celulares los ganglios autnomos espinales o
raqudeos. Los somitas se dividen en dermatoma, miotoma y esclerotoma. La miotoma
forma los msculos natatorios, que tienen capacidad de contraccin desde el nacimiento; la
esclerotoma emigra alrededor de la medula espinal y del notocordio para participar en la
formacin de las vertebras y la dermatoma se supone que forma las capas profundas de la
piel.
En la etapa del desarrollo que se muestra en la fig. 7-25, el celoma es continuo y se
distinguen dos capas de mesodermo lateral, la somtica que se superpone al ectodermo
lateral, para formar la somatopleura, y la capa esplcnica que de la misma manera, se une al
endodermo, formando la esplacnopleura. El intestino comienza a diferenciarse a partir de la
masa de vitelo, y ventralmente, en cortes ms anteriores, surge una especie de bolsa del
futuro duodeno que constituye el primordio del hgado.

En esta etapa, el embrin de rana muestra la organizacin tpica de los embriones de
vertebrados. Los cambios internos subsecuentes son complicados y pueden estudiarse
mejor siguiendo el desarrollo de los diversos sistemas del organismo. Para este tipo de
investigacin se utilizar el pollo, que ha sido estudiado muy minuciosamente al respecto.

En este momento, sin embargo, la descripcin del desarrollo de los anfibios se completara
con un breve resumen de los cambios que se suceden entre el nacimiento y la formacin de
la rana adulta joven.

LARVA Y METAMORFOSIS

La etapa larvaria temprana se ilustra en la fig. 7-26. Se caracteriza por la aparicin de una
cola ancha, transparente y de branquias externas ramificadas. La boca comienza a tomar
forma y los ojos estn bien desarrollados. En una etapa tarda (fig. 7-27) la larva tiene
aspecto de "renacuajo". Las ventosas se encuentran en proceso de resorcin, esta formada
la boca, y las branquias parcialmente cubiertas por un pliegue cutneo, el oprculo. Por
ltimo, el oprculo cubre completamente las branquias, formando una cmara con una
abertura en la superficie y comunicaciones internas con la faringe.

Durante el desarrollo de la larva, clulas que en el embrin son prcticamente
indiferenciales experimentan notable diferenciacin histolgica. La variedad de tipos
celulares es fcilmente discernible en un corte horizontal de larva de salamandra (fig. 7-28)
as como la composicin microscpica de sus diversas estructuras (fig. 7-29).

La larva crece durante un periodo de pocos meses y entonces experimenta metamorfosis
para transformarse en rana. Este proceso se encuentra bajo el control de la glndula tiroides
e implica resorcin de la cola, salida de los miembros anteriores de la cmara branquial,
cambios en la forma de la cabeza, perdida de las branquias y otros muchos cambios. La
metamorfosis precoz del renacuajo de rana puede ser obtenida agregando tiroxina al agua
en que viven; una cantidad mnima, esto es, una parte de tiroxina en 1 000 000 de partes de
agua, acelerara la metamorfosis.

De esta manera se completa el estudio de la anatoma macroscpica del embrin de anfibio.
Ms detalles sern presentados en el captulo 21.

Significado y mecnica de la gastrulacin

Los PROCESOS del desarrollo pueden agruparse, por conveniencia, en dos categoras
generales. Uno es el proceso de diferenciacin mediante el cual las clulas embrionarias o
sus descendientes se transforman en tipos celulares diferentes en el adulto. Esto es
desarrollo propiamente dicho, es decir, un cambio en la estructura celular en relacin con
funciones especializadas en un sistema complejo y diversificado. Coincidente con este
proceso de diferenciacin esta el proceso de crecimiento. El tamao del embrin aumenta
enormemente durante el curso del desarrollo. Este aumento significa que tiene Lugar
sntesis de nuevo protoplasma ya sea a expensas de las reservas alimenticias almacenadas o
por utilizacin de fuentes externas. El crecimiento incluye no solamente divisin celular,
sino tambin reduplicacin o multiplicacin de todos los elementos presentes en la clula
original. El fenmeno de crecimiento y la reduplicacin de elementos celulares sern
estudiados en el captulo 18. La diferenciacin, probablemente el proceso bsico del
desarrollo embriolgico, implica el medio por virtud del cual las partes de un huevo se
tornan diferentes durante el curso del desarrollo. El anlisis del proceso de diferenciacin
puede ser enfocado, mediante la investigacin del momento en que surge la primera
diferencia en el huevo en desarrollo; una vez hecho esto, salta a la vista que el proceso de
gastrulacin es un acontecimiento de primera magnitud. Se han llevado a cabo gran nmero
de experimentos sobre huevos de anfibio, y estos trabajos servirn como referencia
primaria para el estudio de la gastrulacin.

Es de notar que aproximadamente 30 minutos despus de la fertilizacin aparece en el
huevo de anfibio la semiluna gris o un rea equivalente, en un punto del huevo opuesto al
de penetracin del espermatozoide (fig. 7-1). Las relaciones entre la semiluna gris y la
primera segmentacin son variables. El piano de segmentacin pasa siempre a travs de los
polos, pero puede cruzar la semiluna gris " a cualquier nivel o bien puede no cortarla. Estas
variaciones en la posicin del piano de segmentacin no implican normalmente diferencias
posteriores y el huevo desarrolla, en cualquier caso, dando un embrin normal. Esto podra
interpretarse como que la semiluna gris es un accidente del desarrollo, sin ningn
significado verdadero en la mecnica del mismo, pero no es as.

La semiluna gris fue descrita por primera vez en 1888 por Wilhelm Roux. A partir de
entonces y por algunos aos la semiluna gris se consider como una manifestacin de
diferenciacin en el citoplasma del huevo, antes de la segmentacin y se insisti sobre su
relacin con el punto de penetracin del espermatozoide en el Ovulo y el establecimiento
de simetra bilateral en el embrin. Durante el primer cuarto de este siglo, se sospech que
la semiluna gris se hallaba estrechamente relacionada con la cuerda mesodrmica, el
presunto notocordio y el material mesodrmico que se invagina a travs del labio dorsal del
blastporo para dar origen al techo del arquenteron y provocar la formacin del sistema
nervioso. Los experimentos de Ruud y Spemann fueron los primeros en establecer el papel
vital de la semiluna gris en el desarrollo de los anfibios, e investigaciones ulteriores con-
firmaron y ampliaron sus hallazgos. Esta hoy perfectamente aclarado, que la semiluna gris,
es necesaria para el desarrollo normal de los anfibios. Este concepto surge de los resultados
obtenidos cuando el huevo se separa quirrgicamente en las dos blastmeras resultantes de
la primera segmentacin (fig. 8-1). Cuando la primera segmentacin divide en partes
iguales la semiluna gris en la forma ilustrada, cada una de las dos primeras blastmeras
contiene una mitad de la semiluna gris. En estas circunstancias, si las blastmeras se
separan y aslan, cada una de ellas desarrolla dando un embrin completo. Si, por lo
contrario, se lleva a cabo la misma operacin en un huevo en el cual la semiluna gris queda
en un blastmero tan solo, la que contiene la semiluna gris forma un embrin completo. El
blastmero sin semiluna gris forma un simple saco ectodrmico conteniendo endodermo o
"pieza ventral". Pueden obtenerse resultados similares mediante extirpacin quirrgica de
la semiluna gris en un huevo entero. Cuando se extrae la semiluna de un huevo fertilizado,
tiene lugar la segmentacin, pero no la gastrulacin.

Experimentos recientes ilustran que la actividad fisiolgica de la semiluna gris reside en la
corteza del huevo en la regin de la semiluna gris. La extirpacin de la corteza en dicha
regin en el huevo fertilizado de Xenopus no afecta la segmentacin pero impide la
gastrulacin. Una demostracin mas espectacular de la importancia de este material
cortical, es la comprobacin de que si se extirpa la corteza en la regin de la semiluna gris
de un huevo fertilizado, no segmentado, se injerta en el lado opuesto de otro huevo de
Xenopus, este formara dos semilunas grises y producir dos sistemas nerviosos centrales.
Es por lo tanto evidente, que en la corteza celular, y en la semiluna gris o en sus cercanas
estn localizados Iras factores necesarios para la gastrulacin y el desarrollo del embrin
normal. De hecho, incluso la mitad de la semiluna gris contiene cantidad suficiente de estos
factores como para sostener el desarrollo de un eje.

VALORES PRESUNTIVOS DE LA GASTRULA TEMPRANA

Para cerciorarse de como opera la semiluna gris en la formacin del embrin es necesario
determinar que sucede a la misma durante el desarrollo normal y su relacin con otras
partes del huevo. Es por lo tanto necesario disponer de un mapa del huevo mostrando la
posicin futura de cada parte. Esto pudo hacerse mediante teido de varias regiones del
huevo con colorantes vitales y siguiendo luego las clulas teidas hasta su destino final en
el embrin. El mtodo de la coloracin vital fue creado por Vogt en 1920. Otras tcnicas de
marcado, como por ejemplo, las partculas de carbn han sido tambin utilizadas para este
propsito. El marcado radiactivo de clulas se ha utilizado ms recientemente con
resultados satisfactorios. La fig. 8-2, muestra la tcnica de la coloracin vital en la semiluna
gris. Cuando desarrolla el labio dorsal del blastporo, la localizacin del colorante muestra
que la semiluna gris del huevo, da origen al labio dorsal del blastporo de la gstrula
temprana.

Cuando la gstrula desarrolla en embrin, el material teido de la semiluna, queda
localizado en el endodermo de la regin anterior del arquenteron.
Otras partes del huevo pueden ser seguidas en el embrin por este procedimiento. La fig. 8-
3 (vase tambin fig. 8-4) es un esquema de una gstrula temprana y de un embrin en el
que se han sealado solamente las principales estructuras. Grupos celulares en el meridiano
sagital medio de la gstrula temprana se hallan teidos alternativamente en rojo y azul,
comenzando por el labio dorsal, y las reas teidas se localizan ulteriormente en el
embrin. En esta forma se encuentra que la regin a, inmediatamente por encima del labio
dorsal del blastporo, forma el endodermo de la cabeza; la regin b contribuye al
notocordio; la regin c, se localiza en el sistema nervioso posterior; la regin d, cerca del
polo animal de la gstrula, forma gran parte del cerebro; y las regiones e, f, g e i, con-
tribuyen a diversas reas de la epidermis y del proctodeo. En la fig. 8-4 se muestra una
experimentacin con coloracin vital. Ocho regiones de una gstrula temprana han sido
teidas, y pueden seguirse a travs de las etapas tardas del desarrollo en el embrin.

Todas las regiones de la gstrula pueden as ser identificadas con respecto a su desarrollo
futuro. El procedimiento consiste en la representacin grfica, en un mapa de los valores
presuntivos de las partes de la gstrula. El valor presuntivo de una parte o territorio es
simplemente la estructura o regin que esa parte llegara a ser, en el curso del desarrollo
normal. Las figuras 8-5 y 8-6 muestran un mapa de destinos o valores presuntivos para la
gstrula temprana de anfibio. Los mapas de diferentes especies de anfibios varan en cuanto
al tamao y lmites de las reas presuntivas, y por lo tanto estas figuras esquemticas
muestran simplemente relaciones generales. Con este mapa de destinos es posible
contemplar la gstrula viva Fes. 8-7) y conocer las perspectivas de desarrollo de las
diferentes regiones. De esta forma es posible trasplantar partes cuyo destino presuntivo sea
conocido o cultivar aislamiento un rea presuntiva, para estudiar su comportamiento
cuando se la para de las partes vecinas.

Mapas de este tipo se han confeccionado para diversos cordados. Estos mapas muestran
variacin, pero generalmente se mantienen dentro de un modelo comn y general (fig. 8-8).
En todos los casos las reas presuntivas de la gstrula cambian de forma radicalmente
cuando se desplazan a su nueva posicin. Mientras la placa neural presuntiva es una placa
de clulas ancha y corta, el tubo neural es una estructura larga, estrecha y hueca. Es
evidente entonces que debe tener lugar una extensiva migracin y reordenamiento de
blastmeras de la gstrula con objeto de que puedan lograr sus posiciones finales en el
embrin.

REORDENAMIENTO DE LAS ESTRUCTURAS PRESUNTIVAS DURANTE LA
GASTRULACION

Aun antes de que tengan lugar los cambios drsticos en la posicin de las blastmeras
durante la gastrulacin en los anfibios, las blastmeras del hemisferio vegetativo emigran
de la superficie al interior y toman nuevas posiciones (fig. 8-9). En otros animales pueden
tambin verse formas de esta actividad pregastrular. En los peces telesteos, substanciales
migraciones celulares anticipan la puesta en marcha de la gastrulacin, y las blastmeras
del polo vegetativo del huevo de erizo de mar despliegan creciente actividad de superficie,
inmediatamente antes de la gastrulacin.

Durante el proceso de gastrulacin, algunas de las reas presuntivas son desplazadas hacia
el interior, para formar las estructuras internas. Esto puede verse mejor revisando la
posicin de las estructuras antes y despus de la gastrulacin. Un diagrama de una gstrula
temprana (fig. 8-10) muestra el amplio blastocele v el comienzo de la gastrulacin a nivel
del labio dorsal del blastporo. Las regiones por encima del labio dorsal estn numeradas
de 1 a 5; las tetras a a f designan las reas por debajo del labio del blastporo. Al final de la
gastrulacin, la regin 1, inmediatamente por encima del borde blastoporal, queda
localizada internamente en posicin anterior, y las regiones 2, 3, 4 y 5 se extienden hacia
atrs a partir de ese punto. En forma similar la regin, a, originariamente inmediatamente
por debajo del labio dorsal, queda en la regin 'mas anterior del piso del arquenteron, y las
regiones b a e se extienden de ese punto hacia atrs. El proceso en sntesis consiste en
transportar el material exterior de los alrededores del ecuador de la blstula hacia una
cavidad, formando el piso y el techo del arquenteron.

Parece ser que mediante dobleces hacia adentro y movimientos convergentes de clulas
superficiales hacia y a travs del blastporo, la mitad, aproximadamente de la superficie
externa de la gstrula temprana se ha reubicado en el interior. resto de la superficie externa
del huevo, debe, en consecuencia, expandirse, para reemplazar estas partes que se han
desplazado hacia el interior. Como se vio en el captulo 7, esto se cumple por un
reordenamiento de las clulas en el ectodermo.

MECANICA DE LA GASTRULACION

El mecanismo de la gastrulacin en los anfibios es bastante complicado. El proceso se
muestra en las figs. 8,-11 a 8-14, El reordenamiento de todas las reas celulares durante la
gastrulacin en su conjunto, es bastante difcil de seguir, y la fig.8-15 detalla solamente los
cambios de forma del presunto notocordio y de la plaza neural presuntiva. Las flechas
indican la direccin del movimiento. Se ve en ambos casos que un rea presuntiva ancha,
relativamente extendida, se reordena en una forma alargada ms comprimida.

Los diversos reordenamientos de grupos de clulas durante la gastrulacin, representan tres
tipos distintos de movimientos morfogenticos. La formacin del pL.43 del arquenteron,
por un plegamiento hacia dentro de las clulas de vitelo, es el proceso de invaginacin. El
techo del arquenteron se forma por una combinacin de dos procesos. Primero, hay
migracin de blastmeras hacia. el borde del blastporo, de donde pasan al interior. Este
proceso se denomina, involucin. Segundo, labio blastoporal emigra sobre la superficie del
hemisferio vegetativo. Esta migracin sobre una superficie se denomina epibolia. La
gastrulacin en los anfibios, comprende entonces, los procesos de invaginacin, involucin
y epibolia. Esto es, sin duda alguna, una definicin ms que una explicacin que indica
solamente cmo se realizan en forma efectiva varios procesos obviamente integrados.

BASES DE LOS MOVIMIENTOS MORFOGENETICOS Y REORDENAMIENTOS
CELULARES

La descripcin precedente de la gastrulacin en los anfibios revela una serie
acontecimientos maravillosamente coordinados que implica movimientos de -des
poblaciones celulares y su reordenamiento en diferentes formas y relaciones. Es
obviamente muy importante investigar el mecanismo bsico subyacente a fenmenos tan
complejos. En esta bsqueda se ha avanzado poco desde sus comienzos, pero en particular,
despus de los trabajos iniciales de Holtfreter, han o algunos hechos que proyectaron cierta
luz sobre estos procesos.

La motilidad celular (capacidad de moverse) es un fenmeno biolgico que constantemente
a lo largo del desarrollo embriolgico. Sin definir si los movimientos celulares del embrin
son casuales o dirigidos, dan generalmente como resultado, la incorporacin de clulas a
alguna forma de organizacin. As es que durante la gastrulacin, grupos de clulas se
mueven desde la superficie y terminan colocndose en lugares internos definidos. Estos
movimientos tienen ms la apariencia de desplazamientos dirigidos que de movimientos
casuales. Son el resultado, sin embargo, de la integracin de movimientos celulares
individuales, y el proceso de gastrulacin deriva finalmente de ciertas actividades de las
clulas embrionarias. Los movimientos morfogenticos pueden ser descritos, entonces,
como resultado de las actividades y de los movimientos coordinados de clulas individuales
de la gstrula.

La motilidad celular juega un papel importante en la gastrulacin del huevo de erizo de
mar. Estudios cinematogrficos revelan que, en este equinodermo, las clulas que forman el
mesnquima primario son intensamente activas durante la invaginacin. El comportamiento
de estas clulas se ilustra en la fig. 8-16, dibujo que indica el comportamiento de una clula
mesenquimatosa tpica durante el proceso completo de la gastrulacin. Se ve que clulas
mesenquimatosas primarias se desprenden de la pared interna del polo vegetativo de la
blstula y emigran hacia el blastocele. Se muestran entonces muy activas en la emisin de
seudpodos, emigrando a lo largo de la pared interna de la blstula hacia el sitio donde for-
marn el esqueleto. Las clulas del mesnquima primario son seguidas, casi inme-
diatamente, por invaginacin de todo el polo vegetativo de la blstula, para formar el
principio del arquenteron. Estas clulas de invaginacin, se comportan en forma muy
semejante a las clulas mesenquimatosas primarias. En efecto, cambian de forma, se
contraen y se dilatan por algn tiempo, y luego, cuando ya se ha formado un pequeo
arquenteron, emiten seudpodos y se fijan finalmente a la pared interna del polo opuesto
(animal) de la blstula. Al contraerse, tiran del arquenteron hacia el blastocele, de forma tal
que se extienden casi hasta el polo animal. Por ltimo, estas clulas hiperactivas se
desprenden del arquenteron para transformarse en mesnquima secundario, el mesodermo
definitivo del adulto. As, en el erizo de mar, la motilidad de ciertas clulas constituye parte
intrnseca e importante del proceso de gastrulacin, bsica para la formacin del
mesodermo.

La migracin activa de clulas durante las etapas previas a la gstrula, se han comprobado
ya en los anfibios, y la motilidad celular, es una parte importante de la gastrulacin en los
peces telesteos y en las aves; en estas ltimas, las blastmeras emigran hacia la estra
primitiva, equivalente al blastporo, penetran en la misma y finalmente se desprenden de la
superficie para emigrar hacia fuera, desde su superficie inferior para formar el endodermo y
el mesodermo.

La motilidad celular es importante en los procesos de invaginacin y formacin del
arquenteron en los anfibios. Recordemos que las clulas superficiales convergen hacia el
blastporo para entrar al interior. Debe notarse que las clulas que convergen y penetran a
travs del blastporo no son simplemente empujadas y amontonadas en el interior por las
otras clulas de la superficie de la gstrula. Su paso hacia el interior sobre el labio del
blastporo no es comparable al del papel en el cilindro de una maquina de escribir, sino
que, por el contrario, las clulas parecen penetrar en el blastporo. Hay razones para creer
que la invaginacin y el movimiento hacia dentro de las blastmeras en el blastporo es una
manifestacin celular activa y no pasiva. Se han identificado las llamadas clulas en frasco
o redoma en la regin del blastporo de los anfibios como en la fig. 8-17 (y en la estra o
lnea primitiva de las aves). Estas clulas tienen una polaridad definida, y sus extremos
internos libres son ms anchos que los extremos afinados fijos a la superficie. Estas clulas
de figura tan peculiar pueden ser el resultado de una contractilidad celular intrnseca que las
empuja hacia el interior del huevo, invaginando la superficie externa a la que esta"' fijas, y
comenzando de esta manera la formacin del arquenteron. Una evidencia adicional del
papel activo de las clulas en la gastrulacin, es la aparente tendencia de especificidad de
tejido en cuanto a los movimientos celulares dirigidos en la gstrula. Diferentes tendencias
de migracin parecen ser inherentes a las clulas de las distintas regiones de la gstrula, y
reas aisladas de la gstrula siguen en muchos casos los movimientos que debieran cumplir
de haber sido mantenidas en su lugar. As, un fragmento ectodermo de una gstrula
temprana colocado encima de un trozo similar de endodermo se expande para encerrar la
superficie endodrmica. En contraste, el material del labio del blastporo colocado sobre el
endodermo prosigue su invasin en la masa endodrmica. En consecuencia, el movimiento
hacia dentro la invaginacin de las blastmeras puede representar la expresin de
tendencias inherentes de migracin, y en forma similar la extensin y reordenamiento
concurrentes de las clulas superficiales sobre la superficie de la gstrula, pueden derivar de
tendencias de movimiento especficas del ectodermo.

Las observaciones en erizos de mar, telesteos, anfibios y aves indican que la motilidad
celular, ya sea casual o direccional y la contractibilidad celular, son las bases de los
movimientos morfogenticos de la gastrulacin. Una tercera caracterstica de las clulas
embrionarias, la adhesividad selectiva, puede estar implicada en la gastrulacin. Las
blastmeras del mesnquima secundario en el erizo mar antes mencionadas, revelan esta
adhesividad selectiva. Sus seudpodos actan como dispositivo para fijar las blastmeras a
las clulas ectodrmicas del polo animal; su contraccin, despus de haberse fijado, ayuda
la invaginacin continuada del arquenteron y a su propio desprendimiento de las paredes de
ste. La selectividad de este proceso se demuestra por el hecho de que, coincidiendo con
adherencia de los seudpodos al ectodermo, el polo opuesto de la blastmera no se adhiere
a las clulas vecinas del arquenteron; las blastmeras mesodrmicas muestran una
asociacin preferencial con las clulas ectodrmicas y una disociacin activa con las
endodrmicas.

La adhesin de las clulas de anfibio, en relacin con las clulas en redoma y la
invaginacin, parece estar restringida al polo superficial de las blastmeras, factor que
explica la conservacin de la integridad de la superficie externa. Esta forma de adhesividad
selectiva no parece importante en las aves.

En resumen, la gastrulacin, con todos sus fenmenos asociados, es finalmente resultado de
las caractersticas y actividades de las clulas individuales que se encuentran en las
diferentes regiones del embrin. De esta manera, ciertos acontecimientos como la
invaginacin y la epibolia, pueden ser comprendidas como resultado de la integracin de la
motilidad celular, tendencias migracionales especficas y adhesin selectiva de las clulas.
La adhesin celular directamente en la interfase celular, o a coberturas superficiales de
cualquier clase, constituye presumiblemente el mecanismo por el cual los movimientos mas
o menos casuales de las blastmeras individuales, pueden ser transmitidos, coordinados, o
ambos.

GASTRULACION Y FORMACION DEL SISTEMA NERVIOSO

El significado de la gastrulacin es doble. En primer termino, mueve las estructuras
presuntivas de su posicin en la superficie externa de la blstula a sus posiciones normales
en el embrin. En segundo trmino, y no menos importante, la gastrulacin es necesaria
para la formacin del sistema nervioso. Esto queda demostrado de manera muy simple,
examinando embriones en los que no ocurre la gastrulacin normal. En algunos huevos de
anfibio, si se quitan las membranas externas protectoras, los huevos forman exogstrulas en
lugar de gstrulas normales, fenmeno que tambin puede producirse por otros mtodos. En
una exogstrula (fig. 8-18), la gstrula temprana parece normal, pero las regiones 1 a 5 y a a
f se evaginan, es decir, crecen hacia afuera en lugar de invaginar. Las regiones 1 a 5 se
extienden a lo largo del lado dorsal, y las regiones a a f se extienden a lo largo de la regin
ventral. En consecuencia, el mesodermo y el endodermo no estn cubiertos de ectodermo, y
este ltimo queda aislado del resto de los tejidos.

El aspecto importante de la exogastrulacin es que las estructuras endodrmicas y
mesodrmicas desarrollan en grado sumo, pero no forman estructuras nerviosas. No se
desarrolla ni la placa neural ni ninguna de las estructuras sensoriales que derivan del
ectodermo, ni las regiones 1 a 5 no se desplazan hacia dentro y toman contacto con el
ectodermo que normalmente forma la placa neural. En la gastrulacin normal (p. ej. fig. 8-
10), toda la regin representada por el rea 1 a 5 establece normalmente contacto con la
placa neural presuntiva y tiene lugar el desarrollo normal del sistema nervioso.
Comparando los resultados de la gastrulacin normal y de la exogastrulacin destaca el
hecho que el desarrollo de todas las estructuras sensoriales y el sistema nervioso dependen
del contacto normal entre la cuerda mesodrmica y el ectodermo.

Una comparacin de los movimientos de las blastmeras sometidas a coloracin vital
durante la gastrulacin normal y la exogastrulacin se ilustran en las figs. 8-19, A y B. Las
lneas y flechas indican el recorrido y la direccin de la migracin celular. La masa
irregular de clulas a la izquierda en la fig. 8-19, B, es la epidermis y la placa neural
presuntivas. No hay signos de diferenciacin de una placa neural. El alto grado de
diferenciacin del mesodermo y endodermo en una exogstrula se muestra en la fig. 8-19,
C, donde es posible notar especialmente, los somitas y el notocordio bien desarrollados.

De estos experimentos y observaciones se puede sacar en conclusin que la regin de la
semiluna gris que, como se recordara, contiene los factores de la gastrulacin y del
desarrollo normal, se transforma en el labio dorsal del blastporo en la gstrula temprana.
Por lo tanto, la semiluna gris indica donde tendr lugar la gastrulacin. Una segunda
conclusin, permisible a partir de estos datos, es que la gastrulacin es necesaria para la
formacin del sistema nervioso; esto es, que la cuerda mesodrmica presuntiva,
invaginando en el labio dorsal derivado de la semiluna gris, debe ponerse en relacin
correcta con el ectodermo para que se forme el sistema nervioso.

Las relaciones analizadas precedentemente, ilustran otro principio del des-o embrionario.
Cuando dos grupos de clulas estn tan vinculadas que la diferenciacin de un grupo (A)
depende del otro grupo (B) se dice que el primer (A) muestra diferenciacin dependiente.
Sin embargo, si este grupo de clulas capaz de diferenciarse sin la presencia del segundo
grupo, se dice que hay diferenciacin independiente. As, la diferenciacin de la placa
neural de la gstrula, de tipo dependiente, mientras que la del mesodermo y endodermo es
independiente del ectodermo. Por lo tanto, el desarrollo no es tan solo un problema de
diferenciacin independiente de partes del huevo. Hay gran cantidad de interaccin entre
las partes, y en la misma, unas partes ejercen un papel dominante con relacin a otras. En el
captulo 9 consideraremos estas interacciones.





Gastrulacin e induccin neural

EN EL CAPTULO 8 se pudo demostrar que cada regin de la gstrula temprana tiene un
valor presuntivo definido; esto es, cada regin durante el desarrollo normal da origen a una
estructura definida del embrin. Se revel adems que la gastrulacin es necesaria para la
formacin del sistema nervioso central. En consecuencia, cuando la gastrulacin tiene lugar
normalmente, el sistema nervioso se forma por encima del techo del arquenteron, y cuando
se impide o detiene no se desarrolla sistema nervioso. Es propsito de este captulo
investigar la naturaleza del proceso del cual depende la formacin del sistema nervioso. La
exposicin se basar una vez ms en los anfibios en los cuales las pruebas experimentales
son ms numerosas.

POTENCIALIDADES DEL ECTODERMO DE UNA GASTRULA TEMPRANA

La potencialidad de cualquier territorio embrionario puede definirse como su capacidad
para diferenciarse en diversos tipos de estructuras en distintas clases de ambientes. La fig.
9-1, ilustra la manera en que puede ser determinada la potencialidad de una regin muy
definida, la llamada ocular presuntiva. Para valorar su potencialidad, se extirpa esta rea
ectodrmica a tres gstrulas tempranas y se trasplanta en tres diferentes reas de un embrin
de ms edad. En cada uno de estos lugares, el ojo presuntivo estar en contacto con
distintos tejidos diferenciados del husped en la regin de la cabeza, de las branquias y
tambin del flanco. Como testigo se explanta una cuarta regin ocular presuntiva a una
solucin salina donde no es expuesta a ningn tejido extrao. Los trasplantes se funden con
los tejidos del husped y continan su desarrollo; los tipos de tejidos que desarrollan a
partir de la regin ocular presuntiva, varan sin embargo segn su localizacin en el
husped (fig. 9-1). La regin ocular presuntiva trasplantada en la n de la cabeza formar
epidermis, un ojo, una plcoda nasal y tejido ce. La misma regin, trasplantada en la regin
de las branquias desarrollara otocisto, un tubo neural, branquias y parte de un miembro
anterior, y la trastada en la regin del flanco formara tubo neural, notocordio, sornitas y
pro. La regin ocular presuntiva, explantada en solucin salina se comporta de modo muy
diferente del ectodermo trasplantado a un embrin de ms edad. No forma estructuras
reconocibles sino que se transforma en una masa irregular de clulas y finalmente muere.

Los experimentos descritos que pueden ser llevados a cabo con cualquier regin del
ectodermo, demuestran que el ectodermo de la gstrula temprana un tejido indiferenciado
con respecto a su potencialidad. No tiene por s mismo capacidad para desarrollar dando
origen a ninguna estructura, como se deduce su comportamiento al actuar aislado en una
solucin salina. En su posicin normal, el ojo presuntivo, por ejemplo, forma un ojo, Pero
en posiciones distintas formar muchas otras estructuras; en realidad, el ectodermo ocular de
una a temprana puede formar casi todas las estructuras del cuerpo.

Es importante reconocer que este estado indiferenciado del ectodermo es verdadero
solamente en la gstrula temprana. El ectodermo en ese momento es multipotente. Durante
las etapas inmediatamente subsecuentes, las potencialidades del ectodermo quedan cada
vez ms limitadas, de forma que, en la etapa de nurula, del mismo tejido ocular
presuntivo, formar solamente ojo. En consecuencia, entre el comienzo de la gastrulacin y
la etapa de neurula, la mirada de potencialidades ectodermo de la gstrula temprana ha
quedado reducida a una sola potencialidad.

La fig. 9-2 ilustra un caso de potencialidad nica. Trasplantada en la regin del flanco de
un embrin mayor, la seccin correspondiente de la placa neural de una neurula (fig. 9-3),
desarrolla dando un ojo y solamente un ojo. No hay desarrollo de somitas o de notocordio
como en el trasplante de regin ocular presuntiva de la gstrula temprana. El resto del
sistema nervioso se comporta de la misma manera, con el resultado de que cualquier parte
del cerebro de la neurula formar solamente cerebro cuando se trasplante. As, durante la
gastrulacin el sistema nervioso por entero queda limitado en sus potencialidades y no
puede desarrollar en adelante otras estructuras.

INDUCCION DEL SISTEMA NERVIOSO PRIMITIVO

Si se consideran las mltiples potencialidades del ectodermo, surge la pregunta: por qu
normalmente se desarrolla como lo hace? La fig. 9-4, ilustra un experimento que demuestra
que el elemento crtico para decidir que el ectodermo dorsal se convierta en placa neural es
la regin situada inmediatamente por encima del labio dorsal del blastporo (reas 1 a 5 en
la exposicin anterior). Esta regin, se denomina generalmente cuerda mesodrmica
presuntiva por cuanto normalmente se desarrolla en notocordio y mesodermo. Trasplantada
en el blastocele de otra gstrula temprana intacta, en forma tal que cicatrice en un lugar en
contacto con epidermis presuntiva del flanco, este tejido tiene la facultad de formar una
placa neural secundaria a partir de epidermis presuntiva. La formacin de esta placa neural
secundaria en respuesta al fragmento secundario de cuerda mesodrmica trasplantada,
ilustra un fenmeno bsico del desarrollo, la induccin embrionaria. Una vez que el
husped ha completado su desarrollo a embrin, surge de un lado del mismo haciendo
protrusin una segunda cabeza, conteniendo cerebro, ojo y otras muchas estructuras (fig. 9-
5). El notocordio de este embrin secundario se compone en parte de las regiones 1 y 2
trasplantadas originariamente. As las regiones 1 y 2 se han convertido en notocordio y al
hacerlo han inducido a la epidermis presuntiva para desarrollar, un sistema nervioso
secundario en primer trmino, y finalmente un embrin secundario. El trasplante original
solo una pequea parte de los tejidos del embrin secundario.

Recurdese que por las tcnicas de coloracin vital es posible marcar la semiluna gris, esa
rea del huevo de importancia critica en la gastrulacin, situada en labio dorsal del
blastporo. Reconociendo el papel inductor de esta ltima regin, recurdese que cuando se
trasplanta material cortical que represente la regin la semiluna gris de un huevo en
segmentacin temprana (dos a ocho clulas) un huevo no segmentado, haciendo que este
tenga dos semilunas grises en lados os, se desarrolla un sistema nervioso secundario. Esto
demuestra un desarrollo notablemente precoz de la organizacin necesaria para obtener
capacidad inductiva, lo que sugiere la existencia de alguna forma de organizacin cortical
data de las etapas mas tempranas del desarrollo, posiblemente anteriores a la fertilizacin.

En otros grupos de animales se ha demostrado un papel inductor equiparable
a cuerda mesodrmica. As que la cuerda mesodrmica presuntiva inducir asa sistema
nervioso a partir de epidermis presuntiva en telesteos y aves. En el ltimo caso estas
propiedades inductivas son demostrables en el extremo anterior de la lnea o estra
primitiva (fig. 9-6 y 9-7). Esta rea es en consecuencia homloga, morfolgica y
funcionalmente al labio dorsal del blastporo de los anfibios.

Por su propiedad de organizar el ectodermo en sistema nervioso, la regin por encima del
labio dorsal del blastporo, la cuerda mesodrmica, es a menudo llamada el organizador del
huevo de anfibio. El descubrimiento del organizador por Spemann, y el anlisis de su
accin, fue uno de los acontecimientos ms significativos, en la historia de la embriologa,
hasta el punto de que en 1935 le fue concedido a Spemann el premio Nobel de fisiologa y
medicina, lo que dio origen a una nueva era en embriologa experimental, y condicion a
partir de ese momento la direccin y el carcter de la investigacin en embriologa y el
contenido de la teora embriolgica. Esta realizacin es un ejemplo, a propsito de la natu-
raleza general de los descubrimientos cientficos. Ningn concepto cientfico substancial
aparece de novo; el concepto de Spemann de los "efectos organizadores", fue la
culminacin de 25 aos aproximadamente de investigacin y de estudio.

Spemann comenz sus progresos hacia el descubrimiento de los organizadores, mediante
experimentos sobre constriccin en 1901. Estas investigaciones sobre el comportamiento de
blastmeras aisladas de huevos de lagartija en el estado de dos blastmeras, revel que las
mitades separadas a lo largo del plano mediano, desarrollaron embriones completos,
mientras que de las dos blastmeras separadas a lo largo de un piano en Angulo recto con el
piano mediano, solamente form un embrin la mitad dorsal. Spemann sac en conclusin
que ya en la etapa de dos blastmeras la mitad dorsal del huevo difiere de la mitad ventral y
que solo ella posee la facultad de formar un embrin completo. Entre 1901 y 1912
Spemann demostr la dependencia de la formacin del cristalino, de la presencia de una
vescula ptica. Comprob este autor que si el rudimento presuntivo del ojo se extrae de un
embrin de rana, no se forma cristalino, y a la inversa, si una vescula ptica se trasplanta
debajo del ectodermo del abdomen origina la formacin de un cristalino en lugar de piel
abdominal. En 1912, ya Spemann desarrollaba probablemente conceptos de induccin
embrionaria.

En 1918 Spemann seal que pequeas porciones de placa neural presuntiva y ectodermo
de piel, intercambiados entre gstrulas tempranas de salamandra, desarrollaron segn su
nueva localizacin mientras que un trozo del labio dorsal del blastporo desarrollo
independientemente de su nuevo ambiente dando origen a un cuerpo con apariencia de
embrin. Sugiri que el labio dorsal deba representar un centro de diferenciacin" a partir
del cual se dispersa una influencia determinante del desarrollo del ectodermo gastrular. Los
elementos crticos del concepto de induccin estuvieron entonces al alcance de Spemann
quien reconoci que el organizador del labio dorsal podra estar relacionado con un efecto
del arquenteron sobre el ectodermo suprayacente comparable al de la vescula sobre el
ectodermo del "cristalino" tambin suprayacente. El trasplante labio dorsal de un embrin a
otro fue un paso lgico para probar una idea que ya haba aludido Spemann en 1921,
cuando se refiri al labio dorsal del blastporo como organizador. En 1924 Spemann y su
discpula Hilde Mangold, publicaron su trabajo, hoy clsico, aportando pruebas definitivas
de la accin organizadora del labio dorsal trasplantado, en la produccin de embriones
secundarios,estableciendo firmemente el concepto de induccin como un mecanismo del
desarrollo embriolgico.

El concepto de organizador no debe ser interpretado en el sentido de que la accin de la
cuerda mesodrmica sobre el ectodermo representa un proceso bsicamente distinto de los
otros muchos que tienen lugar durante el desarrollo. La induccin embrionaria, definida en
su sentido ms amplio como el proceso por del cual un grupo de clulas estimula la
diferenciacin de un segundo grupo fenmeno que se repite constantemente en el
desarrollo, y el organizador es tan solo un ejemplo de un sistema de induccin. Presente
siempre a travs del curso del desarrollo embriolgico, la induccin representa un viejo reto
a los investigadores de los fenmenos del desarrollo, y as aunque se desconocen los meca-
nismos han hecho notables progresos en la comprensin de la induccin embriolgica en
sus varias manifestaciones.

NATURALEZA DE LA INDUCCION NEURAL

El techo del arquenteron hace que el ectodermo suprayacente se transforme neural, lo que
sugiere una accin directa sobre las clulas ectodrmicas. Varias categoras de
posibilidades amplias y distintas, se presentan inmediatamente explicar por que medio se
ejerce esta accin. Una posibilidad es la internacin de superficie de las clulas en la
interfase de induccin. El contacto de las capas celulares puede proporcionar un dispositivo
por medio del cual el tipo estructural o arquitectura, o el comportamiento de las membranas
celulares ectodrmicas es alterado directamente por las clulas de la cuerda mesodrmica
subyacente. As, la configuracin espacial de esta ltima membrana inducira un cambio en
la configuracin espacial de las membranas celulares ectodrmicas y esto a su vez
producira cambios en el interior de la clula que determinaran su desarrollo en placa
neural. Elementos especficos de la superficie celular (probablemente ciertos grupos
acdicos ionizados podran ser cambiados por el nuevo ambiente Estudios con microscopia
electrnica indican la posibilidad de una continuidad de la membrana celular superficial
con otros elementos membranosos de la clula, incluyendo la membrana nuclear. Una
disposicin morfolgica de este tipo podra explicar la transmisin efectiva y rpida del
efecto inductor. Una segunda gran posibilidad es la mediacin qumica del efecto inductor.
As, una substancia o substancias qumicas producidas y liberadas por clulas inductoras
debla cuerda mesodrmica en la interfase arquenteron-ectodermo, puede actuar o penetrar
en la clula ectodrmica para iniciar actividades celulares que conduzcan al desarrollo
neural. Carecemos hoy de bases firmes para declarar categora general de los mecanismos
inductores implicados en la induccin pero la evidencia favorece la idea de un intercambio
de material entre c Procede insistir en que la mediacin qumica de la induccin, ni apoya
ni contradice, la existencia de una variedad de reacciones de superficie acompaantes
asociadas.

Buen nmero de pruebas abogan en pro de una substancia difusible puede actuar como
estmulo inductor eficaz. Esto, lgicamente, requiere algunas consideraciones sobre la
necesidad y naturaleza del contacto entre las c interactuantes en la induccin. En la
induccin neural, per se, no es esencial las partes normales de una relacin de induccin
estn en contacto fsico real v reacciones de induccin pueden tener lugar en ausencia de un
tejido inductor normal. Muy diversas substancias qumicas, suspendidas en un medio
inerte, la albmina, e introducidas en el blastocele de una gstrula temprana inducen
formacin de un tubo neural (fig. 9-8). El implante puede quedar en con las clulas
ectodrmicas, pero no contiene clulas, y la interaccin celular es por lo tanto, imposible.
L. Saxn presento prueba ms directa de substancias difusibles causando inducciones
neurales en ausencia de contacto celular. En experimentos, un trozo del labio dorsal del
blastporo se separ de un fragmento de ectodermo presuntivo de gstrula temprana
mediante un filtro de poros diminutos de 20 micrones de espesor, con un tamao de poro
promedio de 8 micrones. El ectodermo as tratado forme, una vescula con porciones
definidas de cerebro, incluyendo ojo. Bajo estas condiciones, los tejidos inductor y reactor
no estn en contacto fsico, pero las grandes molculas pueden atravesar el filtro. Adems
de la induccin neural las interacciones tisulares a travs de filtros han sido demostradas en
otros casos, y varios experimentos recientes utilizando sistemas de induccin natural y
artificial revelan que las reacciones de induccin pueden tener lugar a travs de espacios
intercelulares relativamente amplios. La diferenciacin del tejido pancretico, por ejemplo,
como el de otros muchos tejidos epiteliales, depende de interacciones con el mesnquima.
El epitelio solo, en cultivos de tejidos, no se diferencia; cuando se combina con
mesnquima, el epitelio se diferencia aun cuando los dos tejidos estn separados por una
delgada membrana filtrante porosa (fig. 9-9). No es preciso que el mesnquima sea
pancretico, ni es necesario que pertenezca a la misma especie; los dos tejidos deben, sin
embargo, ser mantenidos en interaccin por lo menos durante 30 horas. En este sistema
experimental, el filtro poroso impide el paso de clulas, pero permite la difusin de
compuestos de alto y bajo peso molecular, y de este modo un agente difusible realiza
evidentemente la induccin en ausencia de contacto celular. La interaccin epitelio-
mesnquima, en el caso del pncreas, es realizada por un
material de gran molcula, probablemente una protena, que puede cruzar un inter-
espacio de 20 micrones. Experimentos similares han demostrado que la medula espinal del
ratn puede inducir tbulos renales en el mesnquima a travs de un
filtro de 60 micrones de espesor con poros de tamao variable entre 0.4 y 0.8 micrones. El
material extracelular puede ser importante en la reaccin intercelular. Es as que C.
Grobstein ha demostrado la necesidad de un dep6sito de material (probablemente colgena)
en la superficie de las clulas que interaccionan en induccin.

Experimentos utilizando trazadores radiactivos han producido resultados algo
contradictorios, pero que sugieren claramente transferencia intercelular de mate-
riales. Cuando un inductor de anfibio (la cpula ptica, por ejemplo), marcado
con material (quiz, colgena) se explanta a la superficie de clulas que interactan
inductivamente, el istopo se transfiere preferente e intensivamente en el
cristalino inducido. Esto se interpreta como prueba de la transferencia de pequeas y
grandes molculas y de partculas citoplsmicas del inductor al tejido reactor.

Las inducciones que tienen lugar en las diferentes circunstancias que acabamos de
bosquejar, esclarece que pueden ocurrir inducciones sin contacto celular
real, y dan apoyo al punto de vista de que el agente efectivo de las inducciones
es qumico. De todas maneras la forma en que opera un agente inductor en el desarrollo
normal es obscura. Es incierto que el material inductor difunda del
tejido inductor a travs de la matriz intercelular hacia la clula reactiva, o que
Lava paso directo de substancia o substancias inductoras a travs de intercambio
citoplsmico mediante fusiones temporales de clulas, o bien difusin y captacin
del material mediante pinocitosis (bebida celular). Los conocidos y mltiples
medios posibles de transferencia intercelular de material y nuestro rudimentario
conocimiento de la induccin, niegan cualquier aseveracin acerca de los mecanismos de
transferencia que puedan operar en la induccin neural. Puede generalizarse, sin embargo,
que el mecanismo de la induccin neural parece ser comn a todos los vertebrados, y lo
mas probable es que implique la transferencia de materiales de los tejidos inductores a los
reactores.

Se mencion anteriormente que muchos productos qumicos incluyendo varios cidos
grasos, esteroles, protenas (especialmente nucleoprotenas), y algunos agentes
carcingenos sintticos (capaces de producir cncer y tumores) pueden inducir
formacin de tubo neural en el ectodermo de la gstrula temprana. Estos estimulantes
qumicos no imitan, no obstante, en forma completa, la accin del organizador. No se forma
un embrin secundario sino solamente un tubo neural' (figura 9-8). La transformacin
normal de la estructura (organizacin regional) fracasa, para continuar la induccin con
inductores anormales. Los experimentos con inductores anormales, sugieren as, que
normalmente todo lo que rebase la activacin del sistema reactivo es intrnseco a la
induccin y al desarrollo del sistema nervioso. Hay entonces la posibilidad de que la
induccin del sistema nervioso central sea un fenmeno bsico que implique activacin y
transformacin subsecuente. Y existe la posibilidad adicional de que la cuerda
mesodrmica no represente un sistema de induccin homogneo.

ORGANIZACION DE LA CUERDA MESODERMICA

Un simple experimento muestra que el organizador no es homogneo. La fig. 9-10 ilustra el
trasplante de dos porciones diferentes de la cuerda mesodrmica de una neurula, en los
blastoceles de dos jvenes gstrulas. La porcin craneal del techo del arquenteron induce la
formacin de una cabeza, mientras que la porcin posterior induce la de un tronco y cola
secundarios. Por esta razn, la porcin anterior del techo del arquenteron es a menudo
llamada organizador ceflico y la posterior. organizador del tronco. En la fig. 9-11, se
muestran fotografas de dos larvas jvenes de anfibio, una de ellas con cabeza adicional y la
otra con cola accesoria, producidas por estas dos regiones del techo del arquenteron. Debe
indicarse que en experimentos de esta clase hay con frecuencia prueba de una influencia
regional del husped, y embriones secundarios inducidos por un organizador del tronco en
la regin anterior del husped desarrollan en estructuras de aspecto ceflico y viceversa.
Ocasionalmente entonces, la formacin inducida se condiciona al carcter local de la regin
reaccionante, y no al injerto inductor.

En vista de la accin diferencial de la cuerda mesodrmica se liega a la conclusin lgica
de que en el desarrollo normal la regin anterior de la cuerda mesodrmica inducir al
ectodermo a desarrollar estructuras ceflicas a diferencia de la porcin caudal de la misma,
que propicia la formacin de estructuras del tronco. El origen y naturaleza de las
diferencias entre ambas regiones de la cuerda mesodrmica es difcil de comprender.
Muchas tentativas han sido hechas para explicar bis diferencias, basndose en diferencias
cualitativas y cuantitativas del techo del arquenteron. Ha sido as, sugerida la presencia de
gran nmero de diferentes inductores en la cuerda mesodrmica, dependiendo de cada una
de estas substancias; la induccin de una parte especfica del sistema nervioso. Otras teoras
han considerado la posibilidad de obtencin del mismo efecto a travs de un solo com-
puesto actuando dentro de la cuerda mesodrmica a diferentes concentraciones. Segn esta
interpretacin, las diferencias cualitativas en el sistema nervioso temprano surgen como
consecuencia de diferencias cuantitativas de un solo inductor (fig. 9-12).
En los ltimos aos ha habido una notable convergencia de opiniones respecto a la
organizacin de la cuerda mesodrmica en relacin con su capacidad de induccin, y como
sucede a menudo en las teoras biolgicas, el enfoque contemporneo de la induccin
neural contiene algunos puntos de vista antiguos, como los que acabamos de bosquejar. El
punto de vista moderno de la induccin neural postula ambas diferencias, cualitativas y
cuantitativas en el sistema de induccin. Se considera al ectodermo como una hoja
bidimensional con un par de dientes: gradientes en la intensidad de dos estmulos diferentes
que emanan de la cuerda mesodrmica y dispuestos de tal manera que proveen distintas
coordenadas para cada parte del ectodermo inicialmente especificada. Se considera que la
seal que pasa de los tejidos inductores a los reactores es muy simple en su modelo formal;
en las clulas ectodrmicas reside un adecuado grado de complejidad que explica la
complejidad del sistema nervioso desarrollado, sin postular gran complejidad en el estmulo
inductor. Esto es, desde luego, compatible con los resultados obtenidos en estudios con
inductores anormales. Recurdese que los mismos datos sugirieron una posible influencia
transformadora, en adicin a la activacin. Postulando la interaccin coordinada de dos
inductores diferentes en la cuerda mesodrmica, puede formularse un concepto tpico
moderno de induccin neural. Un inductor por si mismo, induce al ectodermo a
transformarse en cerebro anterior: este es el inductor de cerebro anterior. Bajo la influencia
independiente del otro inductor solo son inducidas estructuras mesodrmicas: este es el
inductor mesodrmico. Cuando el inductor mesodrmico acta conjuntamente con el
inductor de cerebro anterior el ectodermo forma estructuras neurales y mesodrmicas
caractersticas de las regiones del tronco y de la cola. Segn este esquema y sus diversas
variantes, las diferentes partes del sistema nervioso, derivan de combinaciones
cuantitativamente distintas de los dos diferentes inductores que emanan de la cuerda
mesodrmica. La fig. 9-13, sugiere la distribucin cuantitativa de estas dos substancias. El
inductor mesodrmico, esta distribuido segn un gradiente longitudinal, mas alto en el
extremo caudal de la cuerda mesodrmica y disminuyendo a cero a nivel del cerebro
anterior; por otra parte el inductor de cerebro anterior, es distribuido en concentracin
uniforme a lo largo del techo del arquenteron en su totalidad. Se cree que combinaciones
apropiadas de estos dos inductores explican los diferentes desarrollos especficos en los
tejidos inducidos. Un estudio de induccin artificial puede ilustrar sobre este punto. Ciertas
clulas carcinomatosas humanas (las clulas de HeLa), implantadas en un embrin joven de
salamandra, pueden inducir la formacin de cola, incluyendo mdula espinal y estructuras
mesodrmicas. Este complejo de tejidos indica que estas clulas contienen una cantidad
substancial de inductor mesodrmico, combinado con inductor de cerebro anterior, lo que
se revela por el hecho de formar medula espinal. El inductor mesodrmico es termolbil, y
esto hace posible la preparacin experimental de clulas que contienen solamente inductor
de cerebro anterior; estas clulas, calentadas o no, proveen un medio para valorar las pro-
piedades inductivas de diferentes combinaciones cuantitativas de los dos inductores.
Experimentos de esta clase revelan que mezclas de inductor mesodrmico y de cerebro
anterior, no producen una mezcla de los sistemas nerviosos de la cabeza y la cola, sino
estructuras nerviosas cualitativamente diferentes interpuestas normalmente entre la cabeza
y la cola (fig. 9-14).

El concepto contemporneo de induccin neural se ajusta generalmente al modelo descrito
anteriormente. No debe, sin embargo, olvidarse que estos inductores no han sido
claramente identificados, y que gran parte del edificio terico est basado en experimentos
que imitan, pero que no son idnticos, a la relacin inductora normal de la cuerda
mesodrmica y el ectodermo. Procede tambin subrayar que no todas las inducciones son
iguales. Algunas, como la induccin neural, pueden ocurrir mediante la transferencia de
una substancia inductora, mientras otras, por ejemplo las reacciones inductoras del
desarrollo de los miembros, pueden ser iniciadas por diferentes estmulos. Adems,
inducciones sucesivas estn implicadas en el desarrollo de estructuras embrionarias. El
embrin, es por sobre todas las cosas, un sistema dinmico en el cual las relaciones
topogrficas de las clulas y grupos de clulas se hallan en flujo constante. El orden
espacial y temporal de estas relaciones es crtico para el desarrollo normal y para la
naturaleza de las interacciones inductoras involucradas. Por ejemplo, el techo del
arquenteron original no queda en contacto con el mismo ectodermo a lo largo de toda la
gastrulacin, y tanto el, como el ectodermo cambian progresivamente de carcter. La
capacidad reactiva (competencia) del ectodermo presuntivo de la gstrula disminuye con el
tiempo, y su reactividad esta ciertamente condicionada por la exposicin a influencias
inductoras previas. Un tejido inicialmente reactor puede incluso adquirir capacidad
inductora. La placa neural, una vez inducida, es por si misma capaz de inducir ectodermo
de gstrula temprana para formar placa neural, y las vesculas ptica y tica desempean
tambin un papel inductor despus de su propia induccin.

Inducciones sucesivas son fcilmente reconocibles en el desarrollo de los rganos de los
sentidos de los anfibios (entre otros). El mesodermo de la gstrula tarda y neurula
temprana esta situado en relacin estrecha con el ectodermo del odo futuro, y es
importante en la induccin de la vescula tica. El bulbo se sita luego en relacin estrecha
con la epidermis en la regin del primordio del odo, y ejerce una influencia inductora que
estabiliza la determinacin del odo. Secuencia comparable de inducciones se yen en el
desarrollo del rgano del olfato, y la formacin del ojo implica un gran nmero de
interacciones tisulares sucesivas. Obviamente cada induccin modifica la condicin del
reactor y el carcter de la induccin siguiente, y de aqu, que la existencia de interrelaciones
espaciales temporales estrechas de grupos celulares, puede ser muy importante, sin tener en
cuenta la ubicacin final de esos grupos. El fenmeno de las inducciones sucesivas subraya
la multiplicidad y calidad diversa de las reacciones inductoras que deben ser tenidas en
cuenta en el anlisis terico de la induccin embrionaria. Las teoras aqu descritas no son
definitivas, pero si valiosas interpretaciones que permiten vislumbrar uno de los procesos
ms crticos del desarrollo y sirven de gua para continuar investigando.

NATURALEZA DE LAS SUBSTANCIAS INDUCTORAS

La principal pregunta sin respuesta en el proceso de la induccin embrionaria se refiere a la
naturaleza de los inductores y a su modo de accin. Algunas investigaciones sobre sistemas
de induccin artificial e inductores anormales servirn para ilustrar respecto a la direccin
de las investigaciones modernas y los agentes ms sospechosos. Evidencia de casos de
induccin en ausencia de contactos celulares y una sugestin sobre el agente involucrado se
conoce por experimentos in vitro con pequeos grupos de clulas embrionarias. En uno de
tales experimentos una pequea porcin del labia dorsal del blastporo de una gstrula de
anfibio es 'da y colocada en una pequea cantidad de un medio conveniente. Despus siete
a 10 das estas clulas se extraen y se descartan., El medio en el que se mantenido las
clulas se conserva y se denomina "medio condicionado". Para paso siguiente del
experimento un pequeo fragmento (10 a 20 clulas) de ectodermo extrado de una gstrula
temprana se coloca en el medio condicionado. Luego de mantenerlo en ese medio durante
una a tres semanas, las clulas ectodrmicas desarrollan dando clulas nerviosas y clulas
pigmentarias. As, ha ocurrido una induccin apropiada en ausencia de clulas, inductoras.
Se considera esta induccin ha sido producida por macromolculas existentes en el medio
condicionado. Al principio de su permanencia en el medio las clulas de la cuerda
mesodrmica elaboraron una substancia inductora, la que, permaneciendo en el
condicionado, indujo at ectodermo a desarrollar, dando tejido neural. Anlisis qumicos
indican que la substancia inductora tiene las caractersticas de una nucleoprotena.

Investigaciones conducidas con inductores anormales muestran que el componente
protenico de las ribonucleoprotenas puede producir inducciones neurales. As, material
aislado por fraccionamiento qumico de tejidos como rin e do de cobayo y puesto en
contacto con ectodermo de gstrula temprana de anfibio, induce una gama de tejidos
neurales mesodrmicos caractersticos de la induccin efectuada por la cuerda
mesodrmica. Anlisis espectrofotomtricos y electroforticos de esta fraccin revelan que
los elementos de la fraccin activa son macromolculas, predominantemente
ribonucleoprotenas. Anlisis adicionales indican que la mitad protenica de las
ribonucleoprotenas es el agente inductor efectivo. Esto se ilustra al demostrar que el
tratamiento de la fraccin ribonuclea52- que destruye la integridad del RNA no lesiona
gravemente su capacidad de induccin; el tratamiento de la fraccin con enzimas
proteolticas, como pepsina y tripsina, no obstante, reduce el nmero de inducciones
neurales casi en un 80 par 100 (fig. 9-15). La integridad de las protenas es, por lo tanto,
necesaria para la induccin, y las mismas indudablemente representan los agentes efectivos
en los inductores anormales. No hay naturalmente razones para suponer que esta condicin
es aplicable en el curso del desarrollo normal, pero el experimento destaca que las
macromolculas pueden desempear un papel determinante en el proceso.

Interacciones inductoras y determinacin progresiva

ESTA AHORA perfectamente aclarado que muchas reas ectodrmicas presuntivas en la
gstrula temprana no experimentan diferenciacin independiente. Como dependen del
proceso de induccin, no se hallan determinadas para desarrollar segn su destino
presuntivo normal. Sin embargo, en la etapa de neurula casi toda estructura importante esta
determinada y localizada, aun cuando no hay signos vitales visibles de estructura. Esta
determinacin en la etapa de neurula puede ser demostrada por varios experimentos sobre
nurulas de anfibio.

AUTODIFERENCIACION DE LAS PARTES

La capacidad de un tejido para desarrollar segn su valor presuntivo, independientemente
de otras estructuras, se conoce como auto diferenciacin. Esta diferenciacin deriva de
factores existentes en el propio tejido lo cual revela que el tejido esta determinado. En la
fig. 10-1, se ilustra la demostracin experimental de la autodiferenciacin de un miembro.
Un disco de tejido que contiene ectodermo y mesodermo se extrae de la regin presuntiva
del miembro anterior de una neurula y se trasplanta al medio indiferente del flanco de otro
embrin. Se comprueba entonces que dicho disco se convierte en un miembro anterior per-
fecto y si se establecen conexiones nerviosas, funcionara normalmente. Se diferencian los
msculos, huesos, cartlago y piel del miembro, aun cuando no hay diferencias visibles
entre las clulas de esta regin y las de alguna otra adyacente. Este disco de tejido esta
incuestionablemente determinado para formar un miembro anterior en cualquier medio que
se preste para ello, y as formar un miembro anterior si se trasplanta al vrtice de la
cabeza, a la espalda, o evidentemente a cualquier lugar donde reciba nutricin y tenga
libertad de crecimiento a partir de una base. La fig. 10-2, muestra una rana joven que
recibi un trasplante de un disco de miembro anterior al comienzo de su desarrollo. Este
miembro se desarroll en el lugar del miembro posterior normal y mostr funcionamiento
perfecto. Las pruebas de capacidad de auto diferenciacin muestran que cada estructura
principal (ojo, odo, corazn o miembros, por ejemplo), esta determinada desde la etapa de
neurula del desarrollo. El problema surge cuando se desea establecer el momento en que las
estructuras presuntivas adquieren esta propiedad de autodiferenciacin. Buen nmero de
experimentos de trasplante han demostrado que diferentes estructuras adquieren la
propiedad de autodiferenciacin en distintos momentos del desarrollo. Mas aun, esta
propiedad no se adquiere bruscamente; una estructura presuntiva si se trasplanta muy
pronto, da origen a una estructura incompleta o anormal, pero si el trasplante es ms tardo
se obtiene una estructura cada vez ms normal. La capacidad de expresin plena de la
autodiferenciacin, aparece, por lo tanto, en forma progresiva.

La autodiferenciacin de partes, ilustra sobre el importante fenmeno del desarrollo
embrionario, esto es, un sistema evidentemente homogneo que se convierte en una
estructura compleja, altamente organizada. Es conveniente, entonces, analizar experimentos
que demuestren el tipo de organizacin que poseen las estructuras individuales en la etapa
de neurula.

CAMPOS Y SUS PROPIEDADES

Lo primero que se advirti6 en el huevo fue su polaridad, que implica una diferencia entre
los polos animal y vegetativo. Una polaridad es tambin caracterstica de los miembros de
anfibio. En un embrin joven que comienza a mostrar un brote caudal, el rea del miembro
puede ser localizada por su relacin con los somitas mesodrmicos, y si se trasplanta una
cierta rea del mesodermo lateral del tamao aproximado de tres somitas, se autodiferencia
en un miembro. En el desarrollo normal, el miembro crece a partir del disco, en direccin
posterior y toman forma los dedos; la direccin del crecimiento del miembro indica una
polaridad anteroposterior, y se puede reconocer por el codo y la posicin del dedo largo
ventral del miembro anterior una polaridad dorsoventral (fig. 10-3). La estabilidad de esta
polaridad presuntiva es fcilmente comprobada mediante rotacin del brote del miembro
180 grados en forma tal que el brote del miembro crezca en direccin anterior. Este
experimento demuestra que en esta posicin rotada, el miembro crece hacia adelante, pero
el dedo largo se encuentra siempre en el lado ventral.

Esto significa, que la polaridad anteroposterior del brote del miembro esta determinada,
mientras que la polaridad dorsoventral no lo esta. En una etapa mas avanzada tanto la
polaridad anteroposterior como la dorsoventral, se encuentran determinadas. Obviamente
hay una cierta labilidad en la organizacin de la regin del miembro, y durante las primeras
etapas del desarrollo del mismo, clulas que normalmente se habran diferenciado en
tejidos de una parte del miembro, pueden alterar el curso de su desarrollo.

La labilidad de la regin del miembro, es indicada con ms detalle por el tipo de
experimento que muestra la fig. 10-4. Se extrae un disco de tejido de un embrin y se
trasplanta a otro. El disco de miembro trasplantado desarrollara dando un miembro; en
realidad cualquier mitad del disco, puede formar un miembro. Como dato significativo cabe
sealar que el donador del cual se extrae un disco de miembro desarrollara tambin un
miembro anterior perfecto y funcional a partir de las clulas que se desplazan a ocupar el
espacio dejado por la intervencin. Para impedir esta reconstruccin debe tambin
extirparse considerable cantidad del material adyacente al rea presuntiva del miembro. De
esta manera, se pueden obtener dos o tres miembros a partir de una sola regin miembro
anterior. Otros experimentos permiten comprobar que dos discos de miembro pueden
fusionarse para formar juntos un solo miembro.

Los experimentos antes mencionados revelan una similitud sorprendente con
investigaciones llevadas a cabo sobre huevos; la regi6n del miembro puede ser considerada
como si fuera el germen del miembro, de la misma forma que el huevo e ser considerado el
germen del individuo entero (fig. 10-5). El mismo tipo organizacin lbil se encuentra en
ambos sistemas en desarrollo. De la misma a que no estn rgidamente determinados en el
huevo de erizo de mar el esqueleto y el intestino, as no estn determinados en detalle los
elementos esquelticos y los msculos del miembro. Las clulas pueden ser reordenadas y
formarn todava un miembro perfecto. Esta regin con potencialidad tan lbil ha designada
"campo embrinico", por analoga con los fenmenos electromagnticos.

El campo del miembro no es un caso aislado de campo embrinico. Otras reas de la
neurula se comportan de la misma manera; as, puede fcilmente lograrse el desarrollo de
dos corazones separados mediante el artificio de impedir la fusin normal de dos masas de
mesodermo para formar un solo corazn (fig. 10-6). En la neurula existen cierto nmero de
estos campos de rganos; en el mesodermo hay un campo de miembro anterior, otro de
miembro posterior y un campo cardiaco; en el ectodermo hay un campo para la plcoda
olfatoria, otro para el cristalino y otro para el odo. De todos estos campos, se ha puesto de
manifiesto en los examinados la labilidad de organizacin ya apreciada en los ejemplos
precedentes.

Los campos poseen ciertas caractersticas cuantitativas. Varios estudios han demostrado
que varan su potencialidad en forma cuantitativa; as, el trasplante de porciones del campo
del odo a la regin auditiva de otro embrin formar siempre otocistos cuando el trasplante
es del centro del campo; pero la frecuencia de otocistos que desarrollan disminuye
progresivamente a cero, a medida que los trasplantes son extrados de reas
progresivamente distantes del centro del campo.

Un campo es mayor que la estructura que se forma dentro de el. Los campos de diferentes
estructuras, generalmente se superponen de modo que el tejido que normalmente forma un
cristalino puede formar tambin una plcoda nasal. Existe un gran campo para cada una de
estas estructuras, de manera que deben existir ciertos factores para seleccionar determinada
estructura dentro del campo. La formacin del cristalino dentro del campo del cristalino es
un ejemplo bien conocido que facilita la bsqueda de estos factores. Como se muestra en la
fig. 10-7, la cpula ptica, establece normalmente, relacin de contacto con la epidermis
que la cubre (ectodermo), la cual engruesa para formar una plcoda y finalmente el
cristalino. La formacin del cristalino dentro del campo del cristalino ilustra que la
induccin embriolgica es un mecanismo operativo en el desarrollo de una estructura
especfica a partir de un gran campo. El contacto entre los dos elementos interactuantes es
estrecho y puede muy bien incluir transferencia de material. La fig. 10-8 es una micrografa
electrnica de la interfase de la vescula ptica y el ectodermo del cristalino separados por
un espacio interepitelial de aproximadamente 400 angstrom. Ntese que en este espacio hay
partculas densas de 100 a 150 angstrom de dimetro en una masa epitelial.

DETERMINACION PROGRESIVA DENTRO DE UN CAMPO

Las caractersticas de un campo cambian a medida que avanza el desarrollo, y a medida que
las partes de una estructura se determinan con detalle creciente. Para ilustrar este punto es
conveniente orientar la exposicin hacia el embrin de polio. Cuando el mesodermo del
miembro posterior comienza a proliferar y forma un brote perceptible en el costado del
embrin de pollo, es posible cortar el miembro en dos fragmentos, uno proximal y otro
distal. Estas dos secciones del brote del miembro pueden ser trasplantadas al territorio
altamente vascularizado de la membrana corioalantoidea de un embrin de pollo mayor de
ms edad (fig. 10-9). All estn aisladas de influencias inductoras embrionarias externas.
En estas circunstancias, la regin proximal forma una masa alargada de tejido compuesta de
musculo y un fmur muy Bien definido. La mitad distal del brote del miembro, desarrolla
msculo y los elementos esquelticos caractersticos de la porcin distal del miembro
posterior. En los trasplantes originales no hubo indicaciones de estas estructuras, sino
meramente mesodermo indiferenciado que creci a partir del disco del miembro original
pero, trasplantado en esta etapa a partir del brote 1 miembro, se diferenciaran una gran
cantidad de detalles. Debe notarse que esta autodiferenciacin sucede solamente si hay
suficiente masa de clulas, tanto ectodrmicas como mesodrmicas.

A medida que avanza el desarrollo es determinado en el miembro un detalle da vez mayor.
En una etapa posterior, por ejemplo, el miembro crece y aparece el primer dedo como una
excrecencia derivada del resto de los dedos. Si corta el extremo del miembro sin incluir el
primer dedo la porcin distal desarrollar en un pie que carece del primer dedo.
Desarrollarn las falanges del segundo, tercero, cuarto y quinto dedos, pero no las del
primero. Por lo tanto, una estructura menor como el primer dedo esta ahora determinada, y
el resto del tejido incapaz de formar otra.

La morfognesis de la pata del polio ha sido estudiada muy extensamente y proporciona un
excelente modelo para demostrar la determinacin progresiva dentro de un campo y los
mecanismos que actan en semejante esclarecimiento progresivo de los destinos en el
desarrollo. Es sabido que el campo de un miembro, originalmente equipotencial, se va
haciendo determinado, en forma progresiva, a lo largo de su eje longitudinal en direccin
proximodistal. Mapas del destino del ala (fig. 10-10), revelan que en etapas tempranas casi
todo el brote del miembro consta de materiales para la futura extremidad superior y cintura
torcica. A medida que el brote se alarga, se definen en su extremo, en forma progresiva,
los tejidos para el antebrazo primero y para la mano despus. Experimentos de marcacin
demuestran que las clulas que progresivamente forman las reas futuras de las partes
distales del ala, estn localizadas en el mesodermo en el vrtice del brote, inmediatamente
subyacente, a un borde ectodrmico engrosado o caperuza fig. 10-11).

El reborde o lomo apical de ectodermo es un elemento de la mayor importancia en la
determinacin de la progresin del desarrollo proximodistal del miembro, dependiendo del
mismo el crecimiento distal de la extremidad. J. W. Saunders Jr. y otros han demostrado
que la extirpacin del reborde ectodrmico apical, antes de que se forme el miembro por
completo, impide el desarrollo de elementos adicionales, y el miembro es deficiente en
aquellas partes distales que se habran formado normalmente durante periodos
subsiguientes del desarrollo (figura 10-12). En consecuencia el mesodermo elabora en
forma seriada, las estructuras distales del miembro por influjo de la prominencia
ectodrmica apical. Esto ha sido tambin indicado por un experimento en el cual el
mesodermo de un brote de miembro es desprovisto de su cubierta ectodrmica y sus bordes
cubiertos con prominencias ectodrmicas procedentes de otros dos brotes de miembros.
Cuando se hace esto, se detiene el crecimiento del extremo distal del brote original del
miembro, pero en cambio desarrollan dos grupos de estructuras distales, una de cada lado -
de la superficie lateral, en asociacin directa con cada reborde ectodrmico injertado.

Existe un sistema de dependencia reciproca entre el ectodermo y el mesodermo en la zona
apical del brote del miembro en desarrollo. Esta relacin parece establecerse
inmediatamente despus que el mesodermo es estabilizado en la direccin del desarrollo del
miembro. El origen de esta interrelacin es obscuro, pero hay indicios, por estudios en
anfibios, de que el mesodermo inicia la formacin la caperuza ectodrmica en una etapa
muy temprana del desarrollo. En renacuajos de Xenopus, la epidermis de la cabeza,
regenerando sobre el pice mesodrmico expuesto de un brote de miembro implantado,
forma una caperuza apical a su vez induce la proliferacin de las clulas mesodrmicas y la
subsecuente formacin de las partes distales del miembro. As, en Xenopus, e
indudablemente ten en el pollo, el mesodermo del miembro futuro provee al ectodermo de
cualidades inductoras las cuales a su vez reaccionan sobre el mesodermo.

Las cualidades propias del miembro, parecen ser propiedad del mesodermo. Esto se
demuestra por el hecho de que trocitos aislados de mesodermo del muslo
implantados inmediatamente por debajo de la prominencia ectodrmica apical en el brote
del ala del pollo, forman frecuentemente partes tpicas del pie en el extremo del ala. Esto
sucede solamente cuando el mesodermo esta en contacto con la prominencia apical. As
pues, esta prominencia ejerce una accin inductora sobre el mesodermo subyacente del
miembro dando origen a la formacin de partes terminales del miembro incluso en
mesodermo de un muslo presuntivo. El hecho que las estructuras formadas en el
experimento sean pata y no ala,, indica que el ectodermo influye en el carcter regional de
la diferenciacin morfolgica en relacin con el eje proximodistal del miembro, pero el
ectodermo no afecta la calidad especifica de pata o de ala.

Se ilustra la reciprocidad de las influencias mesodrmica y ectodrmica por h evidente
dependencia de la influencia ectodrmica sobre algn factor residente, en el mesodermo. La
persistencia del reborde o lomo ectodrmico apical como gala influencia activa sobre la
elaboracin continuada de elementos distales del miembro, parece requerir un factor de
mantenimiento asociado con el mesodermo de la extremidad. El lomo apical se aplana si se
le separa del mesodermo por medio de una delgada hoja de mica durante horas. En forma
similar el reborde ectodrmico degenera si el mesodermo del miembro es reemplazado por
mesodermo que no sea de miembro. Parece haber un elemento temporal en esta relacin; el
ectodermo apical expuesto a mesodermo de miembro de embriones de ms edad regresa, de
la misma manera que cuando se la pone en contacto con mesodermo que no sea de
miembro.

Cabria preguntarse si el mesodermo del miembro puede hacer algo mas, con respecto a su
influencia sobre el ectodermo. Los miembros no son estructuras simtricas. Esto es
evidente si se considera el eje mayor de un ala separando los dos huesos largos del
antebrazo con sus anexos carpales y digitales; la mitad radial, de ningn modo refleja la
mitad cubital. Esta asimetra existe desde el principio en la forma del brote, y se refleja en
asimetra manifiesta del reborde apical, el cual esta colocado en forma tal como para dirigir
el crecimiento en direccin oblicua hacia atrs. Parecera lgico que cambiando la posicin
del reborde se afectara el modelo integro del miembro. Sin embargo, si el ectodermo del
miembro se extrae, se gira 180 grados y se sita de nuevo sobre su mesodermo, el miembro
continuar creciendo como si nada hubiera sucedido; el reborde apical original, dirigido
ahora hacia delante se aplana, y aparece un nuevo engrosamiento, que se amolda al
mesodermo. Si el ectodermo del miembro de un embrin genticamente polidctilo es
reemplazado por el ectodermo correspondiente de un embrin normal, el ectodermo normal
colaborara en la produccin de dedos supernumerarios segn las instrucciones del
mesodermo polidctilo.

Es evidente que ni el ectodermo ni el mesodermo actan en forma pasiva en la
morfognesis del miembro. El ectodermo es esencial, pero su actividad parece ser orientada
o definida en forma considerable por el mesodermo subyacente. La zona apical del brote
del miembro, es decir, el ectodermo y el mesodermo comprendido dentro de los lmites del
reborde ectodrmico, constituyen la unidad morfogentica ms importante. Interacciones
reciprocas de esta clase no estn restringidas al desarrollo del miembro; interacciones
comparables estn bien documentadas en el desarrollo del ojo y de varias estructuras
tegumentarias. Cabe concluir, que interacciones dependientes y la reciprocidad de acciones
del tipo de las desplegadas por el sistema ectodermo-mesodermo del miembro son
fenmenos comunes en el desarrollo embrionario.

Se ha insistido respecto a la determinacin del miembro en las ltimas etapas del
desarrollo. Sin embargo, esta determinacin no debe ser considerada final ni irreversible,
pues incluso en el estado adulto, plenamente diferenciado, sobre todo, en los anfibios
urodelos, los miembros pueden regenerar. Esto ser considerado posteriormente; por ahora
es suficiente indicar que estructuras completamente formadas pueden no estar
definitivamente fijadas, y que algunos animales retienen potencialidad que permite la
regeneracin y el reemplazo de partes perdidas.

INTERPRETACION DE LA DETERMINACION PROGRESIVA

Desde el momento que la determinacin no es fenmeno final y terminante. algunos
embrilogos objetan, y con razn, el use del termino. Hay por lo menos cuatro maneras de
describir los cambios que ocurren en el huevo en desarrollo en relacin con el tiempo de
vida. La serie completa de etapas que tienen lugar durante la fase de desarrollo que
acabamos de revisar, puede ser sintetizada en el cuadro siguiente.

Subraya este cuadro la determinacin progresiva de estructuras en el embrin relacin con
el tiempo. Considerando en el embrin la determinacin en relacin con el aumento de
edad, puede decirse que en una etapa muy temprana (t1) lay muy poca o ninguna
determinacin. Es muy difcil hablar de determinacin las etapas tempranas de la
segmentacin, por cuanto muchos huevos son la: Posteriormente (t2), sin embargo, es
posible referirse a la determinacin en ciertos campos de rganos, porque fragmentos de
cada uno de estos campos colocados en un medio ambiente indiferente, se
autodiferenciarn en rganos perfectamente formados. Debe recordarse, no obstante, que
hay muy poca o ninguna determinacin dentro de un campo orgnico, propiamente dicho.
La determinacin de partes dentro del campo de un rgano tiene lugar en una etapa
posterior (t3).

El desarrollo puede ser tambin analizado en trminos de grado de diferenciacin. En la
etapa temprana (t1) el huevo es relativamente indiferenciado; en la mayor parte de los
animales no hay diferenciacin supramolecular visible y evidentemente muy poca a nivel
molecular. Posteriormente (t2) aparece cierta diferenciacin; los diversos campos que
existen en este momento no revelan diferenciacin supramolecular, pero difieren uno de
otro en ciertos aspectos que se expresan en experimentos de trasplante. La diferenciacin
que se supone existe en el interior de los campos es a menudo designada como
quimiodiferenciacin; se cree que entre los distintos campos existen diferencias qumicas
significativas. Estas diferencias, implicaran naturalmente, segn puede presumirse,
compuestos auracelulares especficos, as como diferencias en la ultraestructura de las
clulas sus membranas. Finalmente (t3), cuando los campos comienzan a mostrar cierta
estructura, es posible hablar de diferenciacin supramolecular, esto es, diferencia6On
visible de las partes.

El desarrollo puede tambin ser considerado en trminos generales de potencialidad de
tejidos. Recurdese que potencialidad, es, simplemente, la capacidad de los tejidos para
diferenciarse en diversas direcciones. En el huevo durante sus primeras etapas, hay
ciertamente muchas potencialidades. Cuando aparecen los campos (t2), las potencialidades
se restringen y disminuyen en nmero. En el periodo de diferenciacin estructural (t3) hay
tan solo una potencialidad. Hay as restriccin progresiva del nmero de tejidos que puede
formar, y la determinacin progresiva representa una restriccin progresiva de
potencialidades. Debe subrayarse, sin embargo, que es peligroso sobrepasar los hechos
experimentales y sostener, por ejemplo, que las partes del embrin completamente
desarrollado poseen potencialidades nicas. El fenmeno de la regeneracin, sin embargo,
arguye en contra de esta restriccin rgida de potencialidades; los tejidos adultos, estables,
sin duda poseen todava capacidad latente para diferenciarse en nuevos tipos celulares.

El desarrollo en ltimo termino deriva de los genes, y la determinacin progresiva puede
ser interpretada como la consecuencia de una accin gnica secuencial. Esta interpretacin
sugiere la activacin sucesiva de diferentes genes, represin de otros y accin gnica
diferencial en cualquier momento dado. La sntesis de protenas especficas coincide con
restricciones graduales de las potencialidades tisulares y la diferenciacin de caractersticas
especificas de tejido y de clula. Procede recordar segn dijimos en el captulo 5, que el
mecanismo de sntesis de protenas de la clula se halla bajo el control del material
gentico, DNA nuclear, y que el sistema celular para el control de la secuencia de
transcripcin translacin a partir del DNA gentico por va del RNA mensajero a una
protena especifica, constituye la base de la diferenciacin y del desarrollo embriolgico. Se
menciona esto de nuevo, para indicar que, aun cuando la regulacin del sistema de accin
gnica es someramente conocido y es muy difcil de estimar en el concierto de agregados
multicelulares, como por ejemplo, los campos, en el anlisis final del desarrollo
embriolgico, puede ser enfocado como una consecuencia de la accin gnica diferencial.

El proceso del desarrollo, por conveniencia descriptiva, es presentado en eta-pas. Sin
embargo, las etapas y pasos son puramente arbitrarios, ya que el desarrollo es gradual y
continuo. No existe momento netamente delimitado en el cual todas las estructuras quedan
determinadas en todas sus caractersticas; la determinacin es verdaderamente progresiva.
El embrin en la fig. 10-13, se halla en el proceso de transicin a partir de la neurula, en la
cual los campos estn determinados, al de larva (fig. 10-14) , en la que las partes estn
determinadas y diferenciadas dentro de los campos. Es as que en el embrin de la fig. 10-
13 el ojo muestra ya alguna diferenciacin estructural, mientras el miembro esta repre-
sentado simplemente por un campo mesodrmico. Algunas estructuras se diferencian antes,
otras aparecen tarde en el desarrollo, aun cuando generalmente las estructuras ceflicas
desarrollan antes que las del resto del cuerpo, siguiendo una encia anteroposterior.

Sera ventajoso en este momento hacer un resumen de las condiciones y procesados hasta
ahora, y valorar su aplicacin al proceso del desarrollo. Existe primer lugar la etapa de
organizacin lbil. La organizacin puede cambiarse ante tratamientos experimentales
diversos. Al estudiar la conversin de esta organizacin lbil en las estructuras reales del
embrin, se describi el proceso de induccin embrionaria. Alguna parte del huevo
contiene factores que inducen resto a diferenciarse en varios campos de rgano. Un campo
podr, bajo circunstancias apropiadas, experimentar autodiferenciacin o duplicacin,
exhibiendo de esta manera, una organizacin lbil similar a la de un huevo. Por ltimo,
como revela el anlisis de las interacciones del ectodermo y del mesodermo en el miembro
en desarrollo, las partes del campo se hacen determinadas por diversas interacciones
tisulares y celulares incluyendo la induccin embriolgica. El proceso total comprende una
serie de cambios progresivos tan relacionados entre si, que cada peso en la diferenciacin,
causa diferenciacin posterior, hasta que el proceso se completa. Esto semeja una reaccin
en cadena en la cual cada accin pone en marcha la siguiente. Por lo tanto, durante la
investigacin de las causas subyacentes al desarrollo de cualquier estructura, se debern
examinar con el mayor cuidado las etapas precedentes del desarrollo. El desarrollo
embriolgico representa un sistema dinmico en el cual las medidas usuales de tiempo, en
sentido analtico son relativas. En el embrin en desarrollo los acontecimientos presentes se
hallan tan relacionados con los pasados y futuros que solo pueden ser comprendidos en un
marco de continuidad ininterrumpida, pues los acontecimientos pasados determinan los
presentes, y estos el futuro.


Desarrollo de las relaciones estructurales y funcionales

EN EL CAPTULO 10 se delinearon las interacciones entre los diversos elementos que
participan en el establecimiento de los primordios de rganos. Sin embargo, las partes en
desarrollo no estn aisladas unas de otras. Un miembro, por ejemplo, requiere nervios y
vasos sanguneos que deben llegar al mismo desde otras regiones del embrin. As, adems
de las interacciones de diversos elementos para el desarrollo de primordios de rganos
existe una interaccin de diversos tejidos bsicos para la produccin de una estructura
funcional. En este captulo las interrelaciones del sistema nervioso y de un miembro, ambos
en desarrollo servirn como ejemplo de las interacciones implicadas en el desarrollo de las
relaciones anatmicas y funcionales.

ORIGEN Y DESARROLLO DE LAS CLULAS NERVIOSAS

Las clulas nerviosas primitivas (neuroblastos) se originan a partir de diversas fuentes. El
tubo neural es el manantial primario de neuroblastos (fig. 11-1). Contiene grandes
neuroblastos, redondeados, que formaran la mayor parte de las clulas y fibras nerviosas
del cerebro, medula y nervios motores. Derivan tambin los neuroblastos de las crestas
neurales y de las plcodas craneales. Estas forman las neuronas de los ganglios sensoriales.
Algunos neuroblastos de las crestas neurales emigran tambin ventralmente para formar los
ganglios autnomos. Las crestas neurales son as una segunda fuente de neuroblastos.
Finalmente se originan neuroblastos a partir de varias plcodas; por ejemplo, las plcodas
olfatorias, situadas delante del cerebro son elementos sensoriales que dan origen al nervio
olfatorio que crece luego en direccin al cerebro.

Consideremos ahora un apndice en desarrollo que recibe nervios del tubo neural y de los
ganglios espinales (fig. 11-1). El miembro en desarrollo es esencialmente un brote
mesodrmico de crecimiento rpido que se diferencia en msculos y huesos, cubierto por
ectodermo, a partir del cual se forma el tegumento. El problema radica en determinar los
factures de los cuales depende el desarrollo y crecimiento de nervios entre los ganglios y el
miembro, entre los ganglios y la medula espinal, y entre la regin ventral de la medula
espinal y el miembro. Este circuito neural, que comprende la forma ms simple de arco
reflejo, debe establecerse, para que el miembro pueda funcionar.

La forma en que una clula tan pequea que mide una fraccin de milmetro de dimetro,
desarrolla para dar una clula nerviosa con una prolongacin o fibra que se extiende de 60 a
90 centmetros de distancia del cuerpo celular, puede ser determinada observando el
comportamiento de neuroblastos aislados en cultivo de tejidos. Una pequea porcin del
tubo neural de un embri6n joven en el cual todava no se han desarrollado los nervios,
puede ser trasplantada a un cogulo sanguneo y cerrado hermticamente en una cmara
hmeda (fig. 11-2). El primer fenmeno observable en este cultivo de tejidos, es la
migracin celular; las clulas forman as, una delgada capa que permite la observacin
microscpica de cada clula individualmente. Este experimento comunicado por primera
vez por Ross G. Harrison en 1907 estableci que las fibras nerviosas son crecimientos de
neuroblastos aislados, y no los productos de numerosas clulas formando una vaina
alrededor de una fibra, o, alternativamente, las cristalizaciones de puentes protoplsmicos
preformados. El experimento de Harrison, decidi la larga controversia referente al origen
de las fibras de los nervios, e inici tambin el ciclo de estudio de tejidos de animales
viviendo fuera del organismo. Esta tcnica de cultivo de Midas es una de las armas de
investigacin ms poderosas en la biologa moderna.

La observacin de neuroblastos en cultivo de tejidos indica que inicialmente una delgada
tira de protoplasma sale de un lado del cuerpo celular (fig. 11-2). lie brote, que conserva su
conexin con el cuerpo celular, es de naturaleza amiboide y se desliza a lo largo del
cubreobjeto o de cualquier objeto slido, de la misma forma que lo hara una amiba. Este
brote llamado cono de crecimiento, a medida que emigra, extiende la tira de protoplasma
conectada con el cuerpo celular y forma as la fibra nerviosa, la cual puede mostrar
ramificaciones y tener dos conos de crecimiento.

El alargamiento de la fibra nerviosa no es un proceso simple de estiramiento. Se produce
nuevo protoplasma en el cuerpo celular que fluye en direccin distal hacia el ncleo central
de la fibra nerviosa. El flujo proximodistal de protoplasma a lo largo de la fibra a partir de
su lugar de sntesis en el cuerpo celular se revela por experimentos en los que la fibra
nerviosa es comprimida, lo que hace que el protoplasma se acumule en sentido, proximal a
la constriccin (fig. 11-3) .

Comnmente la fibra en desarrollo, sigue un trayecto sinuoso en el medio de cultivo de
tejido indicando la ausencia de un camino especfico y que puede cambiar de direccin
fcilmente. El cono de crecimiento en su progresin tiende generalmente a seguir objetos
slidos; esta ltima tendencia recibe el nombre de estereotropismo. La predisposicin
estereotrpica de la fibra nerviosa en crecimiento, se expresa en el desarrollo del nervio
ptico (fig. 11-4). Cuando se forma la cpula ptica, permanece unida al tallo ptico que la
conecta con el cerebro. El tallo ptico no es el nervio ptico, sino una conexin entre la
cpula ptica y el cerebro. El nervio ptico esta formado por un grupo de fibras que se
originan a partir de clulas de la capa interna de la cpula ptica. Estas fibras crecen a lo
largo de la pared ventral del tallo ptico, entran al cerebro y forman el nervio ptico.

REGENERACION DE LAS FIBRAS NERVIOSAS

El hecho que una fibra nerviosa en crecimiento tienda a seguir objetos slidos es muy
importante en regeneracin de nervios. Cuando un nervio es cortado con una seccin neta,
la porcin que queda separada del cuerpo celular degenera mientras que la que sigue unida
al mismo, regenera. En el proceso de regeneracin, la fibra tiende a crecer a lo largo de su
trayecto previo en casos de seccin con degeneracin del nervio (fig. 11-5).

Reconociendo que una fibra nerviosa sigue un camino al azar en ausencia de estructuras
preformadas, no es de sorprender que cuando existe un vacio substancial entre el extremo
de las fibras nerviosas en regeneracin y las vas formadas por la seccin en degeneracin,
la regeneracin del nervio no es normal (fig. 11-5). Si el espacio entre los dos extremos del
corte de un nervio puede ser cubierto por un puente y se presenta la oportunidad para las
fibras en regeneracin de crecer en forma paralela, el nervio puede lograr una estructura
casi normal.

Un artificio para crear esta situacin consiste en trasplantar en el vacio entre dos cabos un
fragmento de nervio desecado y congelado, el cual conserva gran de su estructura original.
Las fibras nerviosas en regeneracin tendern a vas idnticas a las de las fibras muertas en
el trasplante, cubriendo el vacio por formacin de un puente. Otra forma de proporcionar
crecimiento adecuado en el nervio en trance de degeneracin consiste en colocar los
extremos del nervio seccionado en un tubo lleno de plasma sanguneo y tratado de manera
que tenga las partculas orientadas de forma paralela (fig. 11-5). Por este medio y por altos
anlogos se evita el crecimiento catico de las fibras nerviosas y se logran regeneracin y
funcin ms normales.

EFECTO DE LOS CENTROS DE CRECIMIENTO SOBRE LAS FIBRAS NERVIOSAS

El nervio ptico, que dispone de una va preformada en el tallo ptico, no necesita
direccin para recorrer la distancia entre el ojo y el cerebro. Semejante no existe entre el
tubo neural y el miembro en desarrollo. Se interpone una masa de mesnquima y algunas
somitas, pero no hay nada que dirija el nervio hacia el miembro. Por lo tanto, debe suceder
una de estas dos cosas: o los nervios sensitivos y motores salen de la medula espinal con
una direccin predeterminada .e encuentran el miembro, o este ltimo atrae de alguna
manera el nervio hacia Los experimentos de trasplante permiten una eleccin entre estas
alternativas.

Como puede verse en la fig. 11-6, el miembro anterior de los anfibios recibe inervacin de
nervios originados en los segmentos medulares 3 a 5. Si antes de que los nervios hayan
salido de la medula espinal se trasplanta el disco del miembro en direccin posterior, frente
a los segmentos 5 a 7, los nervios 3 a 5 giran hacia atrs, se desvan de su camino normal, e
inervan el miembro (fig. 11-6). Si el disco del miembro se trasplanta a una posicin ms
posterior, frente a los segmentos 6 a 8, los nervios 6 a 8 entran en el miembro (fig. 11-7).
Hay por lo tanto, un lmite en la distancia hasta la cual se desvan los nervios de un
miembro normal para entrar en un miembro trasplantado.



Cabria preguntarse si la atraccin del disco del miembro por sus nervios es especifica,
originada en el mismo miembro, o si es una atraccin que se presenta en cualquier rgano
en crecimiento. Un experimento revelador al respecto consiste en el trasplante del miembro
hacia atrs como en la experiencia anterior mientras se coloca en su lugar normal, como
substitutivo, una plcoda olfatoria. En estas circunstancias los nervios del miembro crecen
en direccin a la plcoda olfatoria como si esta fuera un miembro. En consecuencia, quiz
exista un estmulo general, una atraccin general, que ejercen sobre los nervios todos los
rganos en crecimiento. No parece tener importancia el hecho que la atraccin sea ejercida
por un miembro o por una plcoda nasal.

Los nervios pueden potencialmente crecer hacia estructuras diferentes a las que
normalmente les corresponden. Es significativo que aun cuando las fibras nerviosas pueden
ser atradas por objetos extraos, no siempre entran en ellos. Parece existir una
especificidad que determina la penetracin, y que es independiente de las fuerzas de
atraccin. Esta especificidad no parece ser muy fuerte. Los nervios de un miembro anterior
pueden no entrar en una plcoda olfatoria, por ejemplo, pero un miembro trasplantado en el
lugar de un ojo recibe ramas del quinto y sptimo pares craneales. Sin embargo, en este
caso, el recorrido establecido para estos nervios en el miembro, solamente se aproxima al
tipo normal de distribucin nerviosa.

CONTROL DEL CRECIMIENTO DE LOS NERVIOS

Se han propuesto varias teoras para explicar la evidente atraccin ejercida por los
miembros en desarrollo sobre los nervios. Se ha postulado que una substancia especfica se
difunde hacia afuera desde el miembro y que el cono de crecimiento de la fibra nerviosa en
desarrollo se orienta hacia la regin donde esta substancia esta en mayor concentracin (fig.
11-8, A). Existe sin duda este fenmeno de quimiotaxis en los agregados celulares que
integran los mohos del limo pero carecemos de pruebas en cuanto a su existencia en el
sistema nervioso de miembro. Adems, disponemos de pruebas en el sentido de que la
quimiotaxis no acta como gua del crecimiento nervioso. El crecimiento de las fibras en
regeneracin en la porcin degenerada de un nervio es comparable con el crecimiento de
fibras nerviosas hacia un miembro, y se ha sugerido que substancias provenientes de la
porcin nerviosa en degeneracin proporcionan una gua quimiotctica para las fibras que
regeneran. Sin embargo, si se establece un sistema experimental que permita a las fibras en
regeneracin crecer en dos conductos, de los cuales tan solo uno posee un cabo de nervio
en degeneracin, las fibras en crecimiento lo harn igualmente bien en los dos conductos,
indicando que no existe preferencia alguna al respecto ni quimiotaxis manifiesta.

Otra hiptesis se apoya en el principio de galvanotaxis, u orientacin de las clulas por una
corriente elctrica, y deriva de la idea segn la cual una estructura en crecimiento, es
generalmente negativa en relacin con el resto del organismo (fig. 11-8, B). Se parte del
supuesto de que el nervio en desarrollo crece a lo largo 6- las lneas de flujo de una
corriente elctrica existente entre la espalda y el miembro. Carecemos de pruebas concretas
en el sentido de que este mecanismo acte en el desarrollo de la inervacin de un miembro.

Un concepto de "gua por contacto" postula que la direccin del crecimiento de una fibra
nerviosa hacia un miembro en desarrollo depende de medios mecnicos. Segn este
concepto las partculas coloidales en los lquidos del cuerpo embrin estn orientadas con
sus ejes mayores paralelos, y el cono de crecimiento sigue estas lneas de orientacin (fig.
11-8, C). La prueba confirmatoria esta teora deriva de experimentos en cultivo de tejidos,
comparando el crecimiento, de fibras nerviosas en un medio sin orientacin, con su
crecimiento en un -dio en el que las partculas estn orientadas. La orientacin de partculas
en medio puede lograrse por estiramiento de un coagulo, lo que permite su conversin de
sol a gel. Las fibras nerviosas crecen al azar a partir de un explante colocado en un medio
sin orientacin (fig. 11-9, A); sin embargo, en un medio orientado, crecen a lo largo de las
lneas de orientacin (fig. 11-9, B). Si dos cultivos de neuroblastos se colocan en el mismo
portaobjetos se observa que el crecimiento de estos cultivos orienta el medio entre ambos
de manera que cuando las fibras nerviosas comienzan a crecer, lo hacen en forma paralela
hacia el otro cultivo (fig. 11-9, C). Puede presumirse que el brote de miembro en
crecimiento (o de cualquier otro rgano) en el embrin produce una tensin o estiramiento
del medio existente entre el miembro y la medula espinal y de esta manera orienta las largas
y delgadas partculas coloidales en lneas paralelas. Una vez que estn orientadas las
partculas originalmente desorientadas, quedan disponibles una serie de lneas de
orientacin que representan los caminos de menor resistencia a los conos de crecimiento y
son seguidas por los nervios que emergen. Estos efectos de orientacin pueden explicar
tambin la formacin de plexos en la base de los miembros.

Se han formulado menos objeciones en contra de este concepto de "gua por contacto" que
en contra de las otras dos posibles explicaciones del crecimiento de las fibras nerviosas
hacia rganos en crecimiento. No obstante, no parece ser suficiente para explicar el
crecimiento completamente dirigido de las fibras nerviosas. Un substrato orientado puede
explicar el crecimiento de fibras en forma relativamente grosera, pero no es enteramente
adecuado para la tarea de dar cuenta de los muchos testimonios de posiciones sutiles o de la
adquisicin de relaciones funcionales especificas. El tallo ptico puede muy bien proveer
un medio mecnico para que los nervios entren en el cerebro, y la orientacin subcelular del
substrato puede ser muy bien explicar el crecimiento de nervios hacia el miembro, pero el
recorrido que estos nervios siguen una vez que han entrado en el cerebro o en el miembro,
respectivamente, sugiere la intervencin de otros mecanismos probablemente asociados.
Las clulas pigmentarias emigrantes, originadas en la cresta neural pueden seguir a lo largo
de lneas de orientacin, pero esto
explica el tipo de pigmentacin ordenado y regular que establecen. En cultivo de tejidos
estas clulas se disponen en intervalos regularmente espaciados, y es probable que este
distanciamiento y su migracin lejos de la cresta neural a lo largo de los flancos del animal
sea el resultado de una repulsin mutua. Es as que, aun cuando el principio de "gua por
contacto" puede actuar para establecer las vas principales que estas clulas siguen en rota
hacia su destino final, la concentracin de los productos metablicos de estas clulas puede
servir como estmulo para la migracin y explicar su distribucin y ordenamiento final.
Existen pruebas de otro tipo de especificidad que merecen comentario en este momento. En
general, una vez que los nervios correspondientes han alcanzado el miembro en desarrollo
se distribuyen segn una modalidad normal. Es sin duda significativo que un miembro
anterior bien desarrollado exento por completo de nervios, si se le proporcionan estos
nervios adquirir el mismo tipo de inervacin que un miembro joven en desarrollo; as,
cuando los nervios ingresan en un miembro anterior, ya sea temprana o tardamente, se
ramifican segn el mismo patrn. La tendencia de las fibras nerviosas a seguir a los vasos
sanguneos preexistentes puede significar que esta es la va que opone menos resistencia al
crecimiento. La determinacin del trayecto y disposicin detallada de los nervios en el
miembro puede depender de la interaccin de los msculos de desarrollo temprano con las
fibras nerviosas que tambin desarrollan tempranamente. Esta posibilidad es explorada
mejor mediante consideracin de la influencia del miembro sobre el sistema nervioso y del
concepto de especificidad neuronal.

EFECTOS DE LA PERIFERIA SOBRE LOS NERVIOS

El sistema nervioso en desarrollo es afectado profundamente por las estructuras con las
cuales establece relacin funcional. Esto se refleja en el tamao de nervios y ganglios. Los
nervios de los miembros que contienen fibras motoras y sensitivas, son mas anchos que los
otros nervios raqudeos, y los ganglios de -los nervios de los miembros son ms grandes
que los otros ganglios espinales. Si se extirpa el miembro de un lado del embrin y se deja
intacto el del lado contrario, es posible demostrar que el mayor tamao de los nervios y
ganglios es la expresin directa de la carga funcional perifrica del nervio.

Desde las primeras etapas del desarrollo, la medula espinal revela una diferenciacin
ventral-lateral en una regin motora, y las fibras de los neuroblastos de esta regin inervan
los msculos del cuerpo y de los miembros. Los ganglios espinales contienen los cuerpos
celulares de los nervios sensitivos, y el arco reflejo se completa a travs de la medula
espinal. Como se ilustra en la fig. 11-10, tanto la regin motora de la medula espinal como
los ganglios espinales son mas pequeos en el lado donde falta el miembro; el nmero de
clulas en los ganglios se reduce aproximadamente en 35 por 100, y el de neuronas motoras
en la medula espinal en 30 a 60 por 100. Existe pues, una relacin directa evidente entre la
cantidad de tejido inervado y la diferenciacin de clulas en el sistema nervioso. Esta
conclusin se confirma por los resultados del trasplante de un miembro a una nueva
posicin. En estos experimentos el miembro trasplantado recibe su inervacin de una nueva
serie de nervios. Como consecuencia aumenta el nmero de fibras de estos nervios de
manera tal que se aproxima al nmero normal en la regin del miembro.

La induccin de un nmero diferencial de neuronas motoras en la medula espinal y de
neuronas sensitivas en los ganglios espinales por accin de un miembro ha sido demostrada
en la mayor parte de los vertebrados. Se ha comprobado tambin la relaciOn cuantitativa
entre la carga perifrica y la diferenciacin neuronal en anfibios y aves; las ratas con
miembros amputados in tero, ostentan ganglios espinales en la regin del miembro
amputado con una reduccin del 66 por 100 en el nmero de clulas.

El efecto del miembro en desarrollo sobre la medula espinal y los ganglios es complejo. Su
presencia parece explicar el aumento en la proliferacin de las clulas y la conservacin de
clulas que ordinariamente experimentan degeneracin. Es un hecho cierto que la muerte
de las clulas es un fenmeno normal en diversos sistemas en desarrollo, incluyendo el
sistema nervioso central. La presencia de un miembro o de un miembro adicional impide la
degeneracin normal de algunas de las neuronas del sistema nervioso central. La ausencia
de un miembro o la disminucin de la zona perifrica aumentan el nmero de clulas que
degeneran. Estos factores actuando independientemente o juntos pueden explicar la
adaptacin del tamao de los centros nerviosos, a su conexin perifrica.

Los efectos de las reas perifricas sobre la diferenciacin de clulas en los centros
nerviosos son mediados probablemente por la fibra nerviosa propiamente dicha. En estos
casos cuando se extirpa el brote de una extremidad en desarrollo, los neuroblastos de la
medula emiten sus fibras protoplsmicas en forma normal.

Estas fibras crecen hacia el mun y se desplazan sin objeto a lo largo del tejido cicatrizal.
Varios das despus, estas fibras sin contacto ni enlace se, atrofian y los cuerpos celulares
que les corresponden en la regin ventral de la medula degeneran. Es evidente que el axn
de una fibra nerviosa en desarrollo debe establecer conexin para que la neurona desarrolle
normalmente. El cono de crecimiento de la fibra es sin duda el rea de contacto; si fracasa
en establecer una unin, la informacin es de alguna manera transmitida al cuerpo celular,
centro metablico y de sntesis de la clula, dando como resultado la detencin de la
diferenciacin o su degeneracin. El establecimiento de una conexin perifrica, es pues,
esencial para la conservacin de las clulas nerviosas en desarrollo. Las clulas nerviosas
quiz dependan tambin de algn otro factor para su conservacin y supervivencia. Un
proceso degenerativo puede pasar a travs de una neurona y a lo largo de su axn hasta la
sinapsis con otra clula nerviosa y producir degeneracin de la segunda neurona mediante
un proceso de degeneracin transneuronal. Esto es particularmente cierto en los sistemas
auditivo y visual. Por ejemplo, un rea mnima de lesin retiniana, causa atrofia susceptible
de medicin de los 1bulos pticos del cerebro medio a travs de degeneracin transneu-
ronal.

Adems de las influencias externas que actan por va de las fibras nerviosas sobre la
diferenciacin de las clulas en los centros nerviosos, existe tambin una influencia
humoral. Las dimensiones cualitativas y cuantitativas de los nervios en crecimiento son
alteradas espectacularmente en el embrin de polio expuesto a los agentes que emanan de
trasplantes intra o extraembrionarios o a inyecciones de ciertos tumores de ratn, veneno de
serpiente, y extracto de glndula salival. Las clulas de los ganglios sensitivos y simpticos
son estimuladas en cuanto a aumento de tamao, nmero, o produccin de fibras por una
substancia identificada como una protena, que existe en los tres agentes (fig. 11-11), y
tambin presente en el embrin. Estudios in vitro revelan que los agentes de crecimiento
actan sobre el cuerpo de la clula nerviosa, no sobre el axn. Se ha considerado tambin
que la accin sobre el cuerpo celular, es la base del aumento de desarrollo observado en las
clulas nerviosas, por influencia de la hormona tiroidea. En el desarrollo normal, agentes
humorales, como las hormonas, pueden ser distribuidos por el sistema vascular hacia el
sistema nervioso y al interior del mismo, para actuar all directamente sobre los
neuroblastos en desarrollo.

Queda mucho por esclarecer respecto a las relaciones de los centros nerviosos en desarrollo
con la periferia. Las influencias externas sobre la diferenciacin de las neuronas, cualquiera
que sea su modo de accin, destacan una vez ms la importancia de las interacciones
inductivas en el proceso de diferenciacin progresiva de los sistemas en desarrollo.

DESARROLLO DE RELACIONES FUNCIONALES

En la medula espinal del embrin, existe una organizacin lbil. Los anfibios estn
organizados de tal manera que de los segmentos 3 a 5 depende el desarrollo del miembro
anterior y de los segmentos 6 a 8 el de los msculos posteriores del miembro. Estas dos
regiones pueden ser intercambiadas en las primeras etapas del desarrollo y substituirse una
por otra. Como se muestra en la fig. 11-12, los segmentos 3 a 5 pueden ser extirpados de un
embrin colocndose en su lugar los segmentos 6 a 8 de otro embrin. En estas
circunstancias la funcin del miembro es completa, lo que indica que los segmentos 6 a 8,
en etapa temprana, son lbiles y pueden ser inducidos a funcionar como segmentos 3 a 5.

El principio de la organizacin lbil se aplica tambin a los nervios 3 a 5 en relacin con su
funcin en el miembro. Un miembro adicional trasplantado cerca del brote de miembro
normal, recibir a menudo, una rama del 5" nervio. En este caso el miembro funcionara
normalmente; si es inervado por los nervios 6 a 8 sin la rama del 5" nervio, la funcin no
ser normal. En realidad, una rama de cualquiera de los nervios 3 a 5 es suficiente para
producir funcin normal del miembro anterior. As, en el desarrollo temprano cualquier
diferencia en la organizacin de estos tres nervios debe ser lbil. Debe recordarse que los
nervios espinales forman un plexo en la base del miembro, en forma tal que los segmentos
que inervan el miembro tienden a funcionar como grupo.

La labilidad de los nervios se manifiesta en el fenmeno llamado de funcin homloga
(miotpica). Cuando un msculo de un miembro de larva de anfibio es trasplantado cerca
de un miembro normal y provisto de inervacin mediante una rama de un nervio de
miembro (por ejemplo, el 5" nervio espinal), el msculo trasplantado se contraer siempre
simultneamente con el msculo del mismo nombre del miembro normal. Si un miembro
entero es trasplantado de esta manera, cada m6sculo individual se contraer
simultneamente con su homlogo del miembro normal y los movimientos de ambos,
normal y supernumerario sern sincrnicos; todava etas sorprendente, si se trasplanta el
miembro adicional. de que se invierte su polaridad en relacin con la del miembro normal
del mismo lado, los movimientos de los miembros sern imgenes especulares. As, las
clulas nerviosas que inervan msculos homlogos, esto es, msculos de idntica
especificidad constitucional, se vinculan funcionalmente, aun cuando los efectos
funcionales puedan ser intiles o perjudiciales para el animal. El fenmeno de funcin
miotpica revela que un msculo responde a un tipo especifico de estmulo sea cual sea el
nervio especifico que lo inerva, y sugiere que el musculo, la periferia, son importantes para
establecer las relaciones funcionales especficas el sistema nervioso.

ESPECIFICIDAD DE LAS RELACIONES ENTRE EL CENTRO Y LA PERIFERIA

Un gran caudal de pruebas indica que durante la diferenciacin las neuronas eren un tipo de
especificidad bioqumica que brinda las bases para las complejas interrelaciones
funcionales de los centros neurales con la periferia. Este problema ha sido intensamente
investigado en el sistema visual de los anfibios urodelos Es posible extraer, girar y
reimplantar los ojos de estos animales tanto en as embrionarias como adultas con nuevo
crecimiento del nervio ptico. Sin los resultados obtenidos varan ms espectacularmente,
segn la etapa desarrollo durante la cual se practique la operacin. As, en las fases del des-
arrollo que preceden a la etapa tarda de "brote de cola" puede girarse el ojo 180 grados sin
trastorno manifiesto de la visin o de la coordinacin motora visual. Mas tarde, sin
embargo, la misma operacin afecta profundamente las reacciones visuomotoras del
animal. En la salamandra acutica de mas edad, la rotacin de 180 con respecto al eje
ptico, causa inversin de las reacciones opticocinticas (movimiento del ojo) (fig. 11-13).
As que, si se hace girar un tambor rayado alrededor de los animales en el sentido de las
agujas del reloj, el animal voltea su cabeza en direccin contraria e inversamente, en lugar
de seguir el movimiento del tambor como lo hara en condiciones normales. Estn tambin
invertidas las reacciones visuales de localizacin, en efecto, presentndole un cebo o
seuelo en el campo visual superior, inicia un ataque hacia la parte correspondiente del
campo inferior, y a la inversa en caso contrario. Se obtuvieron los mismos resultados
cuando se cort el nervio ptico en el momento de girar el ojo. Las fibras regeneradas
restablecieron sus relaciones sinpticas normales y ahora inapropiadas en el 1bulo ptico
del cerebro medio, manifestando as un tipo de afinidad selectiva, concordante con
especificidad celular. Este experimento y otros muchos similares revelan falta evidente de
plasticidad funcional; el sistema nervioso central parece incapaz de readaptarse a las
relaciones alteradas entre el ojo y el cerebro, una vez que las conexiones centrales se han
establecido. En las etapas de "brote de cola", antes que las fibras del nervio ptico
comiencen a crecer, puede invertirse la futura retina sin causar discordancia alguna.

El concepto de especificidad en las relaciones entre los centros sensoriales y la periferia se
apoya en otros ejemplos, adems del sistema visual, que en sentido estricto es un complejo
intracentral, por haberse originado la retina como parte de la placa medular. Un
experimento con nervios cutneos, ilustra bien la relacin especfica entre el nervio y la
periferia. Cuando se extirpa una tira de piel dorsoventral del cuerpo de un renacuajo de
rana, se gira 180 grados, y se reaplica sobre el animal, queda fija en el lugar por
cicatrizacin y experimenta autodiferenciacin en forma tal que despus de la
metamorfosis, se observa en el animal una placa de piel del abdomen ligeramente coloreada
sobre su dorso, y otra de piel del 'dorso de color obscuro sobre su vientre. Cuando se
estimula la piel obscura de la panza la rana responde frotndose el dorso, y roza su vientre
cuando se estimula la piel clara del dorso.

Los datos obtenidos en experimentos de este tipo representan un autentico reto y cualquier
explicacin en este momento ser eminentemente terica. Sin embargo, la interpretacin
que damos a continuacin concuerda con los hechos conocidos y puede servir como
indicacin de los tipos de acontecimientos que pueden estar involucrados en el
establecimiento de las muchos y variadas relaciones funcionales dentro del sistema
nervioso (fig. 11-14). Es muy probable que el tipo asociaciones sinpticas centrales
formadas por las fibras nerviosas es determinado, al menos parcialmente, por la calidad de
la periferia con la cual estn conectadas. En consecuencia, puede formularse con carcter
terico que una vez cono de crecimiento de una fibra en desarrollo ha llegado a la piel,
tiene lugar tipo de interaccin inductora en la interfase nervio-piel mediante la cual piel
imparte al nervio una especificidad bioqumica nica que acta en el establecimiento de
conexiones centrales a travs de efectos inductivos refinados a nivel neuronal. Aplicando
este punto de vista al aparato visual, es evidente que en alguna etapa del desarrollo la retina
se polariza, y que despus de esta etapa se fijan las relaciones entre cada parte de la retina y
el lbulo ptico. As, bien pudiera ser que durante el desarrollo, la retina se diferencie hasta
el punto de cada rea minscula de la misma sea dotada de cierta especificidad bioqumica
que le es propia. Una vez que las fibras de las clulas especficas de la a llegan al 1bulo
ptico, podran imponer una especificidad similar a las neuronas centrales. As los axones
que llegan a la porcin apropiada del 1bulo, podran inducir especificidad en el tejido
central y despus quedara fija en forma permanente la relacin lbulo-retina de la misma
forma que la relacin pielgo. Es importante recordar en este momento que la inadaptacin
de las reacciones visuomotoras despus de las rotaciones del ojo, indicando falta de
labilidad sistema retina-1bulo, se desarrollan en el momento que las primeras fibras
pticas comienzan a llegar al lbulo ptico.

La diferenciacin regional del sistema nervioso tiene lugar durante el desarrollo. Neuronas
de distintas partes del cerebro son frecuentemente diferentes en tamao y forma, en relacin
con neuronas de otras partes del cerebro. Hay una distribucin diferencial de colinesterasa y
de catecolaminas en el cerebro, y hay diferencias antignicas demostrables entre el tejido
nervioso central y el perifrico. El desarrollo de una especificidad bioqumica nica en las
relaciones entre el centro y la periferia no permite presuponer que la organizacin inherente
de las partes del sistema nervioso depende ntegramente de efectos inductores refinados que
implican especificidad de las neuronas, lo cual no elimina la necesidad de una gua para las
fibras en crecimiento, ni es independiente de factores como el correcto sincronismo de las
secuencias del desarrollo y de una apropiada relacin espacial.