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Laboratorio de Microbiolog\u00eda
PR\u00c1CTICA NO.6
ANALISIS MICROBIOLOGICO DE HECES ( COPROCULTIVO)
OBJETIVO.
El
alumno
manejar\u00e1
los

procesos microbiol\u00f3gicos para la realizaci\u00f3n de coprocultivos. Comprender\u00e1 los momentos en los cuales debe como m\u00e9dico recurrir a \u00e9sta t\u00e9cnica. Identificar\u00e1

y
diferenciar\u00e1 las bacterias pat\u00f3genas de la flora normal
del tracto gastrointestinal.
FUNDAMENTO TE\u00d3RICO.
El tracto gastrointestinal contiene una flora
normal muy diversa, pero pertenecen a una sola
familia de bacterias, las Enterobacterias.

A). Recolecci\u00f3n de la muestra: Para enfermedades gastrointestinales es preferible el examen de heces frescas o tambi\u00e9n un raspado del ano con hisopo. La muestra debe ser refrigerada si no se va a cultivar enseguida.

B).
Examen
directo:
No
es
muy
recomendable antes del cultivo, debido a que la

morfolog\u00eda microsc\u00f3pica de las Enterobacterias es muy similar entre ellas y no permitir\u00eda una diferenciaci\u00f3n entre ellas.

C).Cult iv o: Se deposita la muestra con un asa sobre un medio s\u00f3lido y se procede por estr\u00eda m\u00faltiple, se incuba a 37oC por 24 a 48 horas

D). Medios de cultivo: Agar sangre, Agar
desoxicolato, EMB, Mac Conkey, SS, etc.
.La t\u00e9cnica de coprocultivo que aqu\u00ed se
describe es un procedimiento de rutina para aislar
Salmonella, Shigella, y cepas comensales y pat\u00f3genas
de Escherichia coli.(en \u00e9sta pr\u00e1ctica no analizaremos
crecimiento de Yersinia enterocol\u00edtica .

Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable a\u00f1adir una placa de agar sal y manitol, y para aislar Candida albicans otra de agarSabourau d.

E). Flora normal y pat\u00f3gena.
FLORA NORMAL
FLORA PAT\u00d3GENA

Bacteroides fragilis.
Lactobacilus spp.( anaerobios).
Clostridium perfringens
Peptostreptococcus spp.
Proteus spp.
Candida spp.
Pseudomona spp.

Salmonella typhi
Salmonella spp.
Shigella spp.
Escherichia coli (enterotoxina).
Klebsiella spp.
Yersinia enterocol\u00edtica.
Vibrio cholerae.

CASO CLINICO

Paciente de 35 a\u00f1os de edad, sexo masculino, serolog\u00eda positiva para VIH conocida desde 4 a\u00f1os antes, el motivo de la consulta fue por fiebre y repercusi\u00f3n general. Ingres\u00f3 al hospital relatando una historia de 1 mes de evoluci\u00f3n caracterizada por anorexia, decaimiento, p\u00e9rdida progresiva de peso, sensaci\u00f3n febril, diarreas l\u00edquidas intermitentes, sin sangre ni moco, no acompa\u00f1adas de dolor abdominal. Al realizar tinci\u00f3n de Gram encontramos bacilos gram negativos y el crecimiento del coprocultivo en agar SS fue positivo presentando colonias circulares de coloraci\u00f3n negra.

PREGUNTAS EXPLORATORIAS:
1.- \u00bfCu\u00e1les son los microorganismos que
selectivamente crecen en el agar SS?
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
______
2.- \u00bfC\u00f3mo se manifiesta cl\u00ednicamente la salmonelosis
no tifoidea?
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
__________________
3.- \u00bfTiene algo que ver para la salmonelosis no
tifoidea el echo de que el paciente tenga VIH?
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
__________________
Escuela de Medicina Universidad Xochicalco
Laboratorio de Microbiolog\u00eda
4.- Investiga \u00bfc\u00f3mo se manifiesta la gastroenteritis
aguda en un paciente?
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
___________________________________________
__________________
MATERIAL.

RECIPIENTE ESTERIL DE BOCA ANCHA ( O HISOPO ESTERIL CON MEDIO DE TRANSPORTE)
Cajas Petri con Agar Sangre.
Cajas Petri con Agar Salmonella-Shigella (SS).
Cajas Petri con Agar MacConkey.
Tubos de ensaye con rosca conteniendo un hisopo est\u00e9ril.
Mecheros Meker.

Mechero Bunsen.
Asa de Nicromo.
Equipo de Tinci\u00f3n de Gram.
Portaobjetos.
Material Biol\u00f3gico.
Muestra de materia fecal.
T\u00c9CNICA.
1. M\u00e9todo para el aislamiento de
microorganismos en material fecal.

A). Toma con el asa est\u00e9ril un poco de materia fecal y depositarla cerca de la orilla de cada una de las placas.

(Agar sangre, , MacConkey, SS)
B). Proceder al aislamiento por el m\u00e9todo de
estr\u00eda cruzada (m\u00faltiple).
C). Incubar a 37oC por 24 a 48 horas.

D). Interpretar los resultados , anotando las caracter\u00edsticas morfol\u00f3gicas de cada colonia diferente que haya

crecido.
E). Hacer un frotis de cada colonia diferente,
y te\u00f1irlo con Gram.
OBSERVACIONES:
\ue000

Las muestras para coprocultivo deber\u00edan tomarse antes de administrar antibi\u00f3ticos y preferentemente

antes
de
tomar
antidiarreicos.
\ue000

Indicar siempre el juicio diagn\u00f3stico de presunci\u00f3n y si el paciente es menor de un a\u00f1o.

\ue000
Solicitar las investigaciones especiales,
especialmente para(S. aur eus ).
\ue000
En el caso de b\u00fasqueda de portadores de
Salmonella,
se
deber\u00e1

fundamentar adecuadamente el pedido y se necesitan 3 muestras negativas para asegurarse que el paciente no es portador.

EXAMENES DE LOS CULTIVOS.
Agar MacConkey:
Caracter\u00edsticas:
Es
un

medio moderadamente selectivo. Las sales biliares y el cristal violeta inhiben a la mayor\u00eda de las bacterias Gram-positivas y a alg\u00fanas Gram- negativas. La fermentaci\u00f3n de lactosa hace virar el indicador a rojo.

Aspecto de las colonias:Los
fermentadores t\u00edpicos de lactosa ( E. coli,
Klebsiella y Enterobacter ) dan colonias rosas

o rojas rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. Las fermentadoras d\u00e9biles o lentas de lactosa (Citrobacter, Serratia) pueden dar colonias incoloras a las 24 hrs. Y rosadas a las 48 hrs. Proteus, Salmonella,

Shigella y Yersinia, dan colonias incoloras.
Enterococcus forma peque\u00f1as colonias.
Agar Salmonella \u2013Shigella (SS):
Caracter\u00edstsicas: Es un medio

selectivo para Salmonella y Shigella. La alta concentraci\u00f3n de sales biliares y citrato inhibe todas las bacterias Gram- positivas y

Escuela de Medicina Universidad Xochicalco
Laboratorio de Microbiolog\u00eda

muchas Gram- negativas, incluidos los coliformes. La fermetaci\u00f3n de lactosa hace virar el rojo neutro a rojo. El SH2 formado a partir del tiosulfato da un precipitado negro al reaccionar con hierro.

Aspecto de las colonias.Los

fermentadores de lactosa est\u00e1n bastante inhibidos y dan colonias rojas. Las colonias deSalmonella aparecen sin inhibir, transparentes con el centro negro. Las especies deShigella son mas o menos inhibidas y dan colonias transparentes sin centro negro. Las colonias deProteus son similares a las deSalm onella.

Agar EMB (eosina y azul de metileno):
Caracter\u00edsticas:
Es
un
medio
selectivo, utilizado para aislar bacilos

ent\u00e9ricos Gram Negativos permite la diferenciaci\u00f3n de bacterias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. Este medio permite diferenciarSalmonella y otros organismos lactosa negativos de organismos coliformes. Las colonias deSalmonella y

Shigella son trasl\u00facidas, de color \u00e1mbar o
incoloras.

Los coliformes que utilizan lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul o negro con centros oscuros y brillo met\u00e1lico. Otros

coliformes
como
Enterobacter

presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de Enterococcus faecales son parcialmete inhibidas.

RESULTADOS.
1. Morfolog\u00eda macro y microsc\u00f3pica de bacterias aisladas de materia fecal.
Mac Conkey
SS
CARACTER\u00cdSTICA
RESULTADO
CARACTAR\u00cdSTICA
RESULTADO
TAMA\u00d1O
TAMA\u00d1O
FORMA
FORMA
ELEVACI\u00d3N
ELEVACI\u00d3N
MARGEN
MARGEN
COLOR
COLOR
SUPERFICIE
SUPERFICIE
DENSIDAD
DENSIDAD
CONSISTENCIA
CONSISTENCIA
OLOR
OLOR
PIGMENTACI\u00d3N
PIGMENTACI\u00d3N
EMB
CARACTER\u00cdSTICA

RESULTADO
TAMA\u00d1O
FORMA
ELEVACI\u00d3N
MARGEN
COLOR
SUPERFICIE
DENSIDAD
CONSISTENCIA
OLOR
PIGMENTACI\u00d3N

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