Pruebas Bioqumicas

Lab. Bacteriologa Mdica

Prueba Positiva Negativa
Reactivos
adicionados
indicador Fundamento
KOH al 3%
Formacin de un hilo
viscoso
Sin cambios, no hay
ormacin del hilo
viscoso
!"# al $% &&&&&
La 'rueba de !"# es una 'rueba de
con(rmacin de la tincin de )ram.
Se utili*a !"# con el (n de disolver las
clulas.
Las )ram + 'oseen 'aredes celulares
gruesas de 'e'tidoglicano y 'or tanto no se
lisan.
La )ram & con sus 'aredes celulares m,s
delgadas y m,s 'orosas se lisan, 'or lo que
el -./ sale de las clulas, y la mancha
bacteriana se convierte en una masa
'ega0osa o viscosa.
Catalasa
Formacin de burbu0as1
eervescencia
Sin cambios
'er2ido de
hidrogeno al
$%
Se utili*a 'ara com'robar la 'resencia del
en*ima catalasa que se encuentra en la
mayora de las bacterias aerobias y
anaerobias acultativas que contienen
citocromo.
Oxidasa
"bservar si la *ona
im'regnada vira a un color
a*ul 3 violeta.
Sin cambios
4etrametil&'&
enildiamina
&&&&
La en*ima citocromoo2idasa en 'resencia de
o2geno o2ida el reactivo 5tetrametil&'&
enildiamina6 ormando un com'uesto
coloreado llamado indoenol.
Medio de
glucosa en
base rojo de
fenol
La 'resencia de un color
amarillo indica la una
reaccin 'ositiva 'ara la
ermentacin de la
glucosa.
Produccin de gas7 burbu0a
en la cam'ana de -urham.
Sin cambios en el
medio, conserva su
color original 5ro0o6.
&&&&
8o0o de
enol
9l medio 'rovee los requerimientos
nutricionales 'ara el crecimiento de los
microorganismos y contiene 8o0o de Fenol
como indicador de '#, virando de color ro0o&
naran0a a amarillo en 'resencia del ,cido
'roducido 'or la ermentacin del a*:car.
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OF
Medio !asal
de Hug" #
$eifson%
Microorganismos o2idativos de carbohidratos7
'roducen una reaccin ,cida solo en el tubo
;abierto<. Presentan 'oco o nulo desarrollo y
ausencia de 'roduccin de ,cido en el tubo
;cerrado<.
Microorganismos ermentadores de carbohidratos7
'roducen una reaccin ,cida en ambos tubos.
Microorganismos que no utili*an los carbohidratos7
no se 'roducen cambios en ninguno de los = tubos,
los cuales 'ermanecen verdes.
&&&&&&
/*ul de
bromotimol
Medio de cultivo, que al ser su'lementado
con hidratos de carbono, se usa 'ara
determinar el metabolismo o2idativo&
ermentativo de las bacterias )ram
negativas.
Medio de
movilidad
9nturbiamiento
homogneo del medio
>recimiento sobre la
lnea de 'icadura
&&&&& &&&&&&
Sirve 'ara determinar si un organismo es
mvil o inmvil.
9l medio de movilidad 'ermite la reali*acin
de esta 'rueba debido a que es semislido,
'or lo que las bacterias mviles 'roducir,n
un enturbiamiento homogneo del medio
debido a la distribucin aleatoria de los
microorganismos.
Por el contrario, las bacterias inmviles
'ermanecer,n en la misma lnea de la
'icadura en que se sembraron.
Medio &'(
)*gar de
+erro tri,le
a-.car/%
?Su'er(cie alcalina1'roundidad ,cida 5'ico
ro0o1ondo amarillo67 el microorganismo solamente
ermenta la glucosa. !1/
?Su'er(cie ,cida1Proundidad ,cida 5'ico
amarillo1ondo amarillo67 el microorganismo ermenta
glucosa, lactosa y1o sacarosa. /1/
?Su'er(cie alcalina1Proundidad alcalina 5'ico
ro0o1ondo ro0o67 el microorganismo es no
ermentador de a*:cares. !1!
?La 'resencia de burbu0as o la ru'tura del medio de
cultivo indican que el microorganismo 'roduce gas.
?9l ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo 'roduce ,cido sulhdrico.
&&&&& 8o0o de
enol
9s una 'rueba usada 'ara la ermentacin
de la glucosa, lactosa y sacarosa y la
'roduccin de #=S 'or 'arte de la bacteria
sum,ndole 'roduccin de gas.
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Rojo de
metilo 0 de
1oges
Pros2auer
Prueba del ro0o de metilo7
>olor ro0o.
>olor amarillo.
8.M 7ro0o de
metilo
8o0o de
metilo
Se 'uede evidenciar la ermentacin mi2ta,
en la cual se obtiene como 'roductos (nales
,cidos org,nicos como el ac. actico,
lactato , etc. /s como la ermentacin
butilen glicolica , en la cual 'or medio del @&
natol y del !"# creatina se identi(ca a la
acetoina como intermediario.
Prueba de Aoges
ProsBauer7
-esarrollo de un color ro0o
en 'ocos minutos des'us
de una com'leta agitacin
del tubo.
/usencia de color ro0o. A.P7 @&natol y
!"#
Medio de
base de
Moeller con
lisina3
arginina 0
ornitina
4ubo color 'ur'ura o
gris,ceo
4ubo color amarillo
P:r'ura de
bromocreso
l y el ro0o
de cresol
son
indicadores
del '#.
>uando el medio se inocula con una bacteria
ca'a* de ermentar glucosa, se 'roduce
,cido que disminuye el '# y cambia el color
del medio del ':r'ura al amarillo. La
condicin ,cida estimula la actividad
decarbo2ilasa. Si el organismo 'roduce la
en*ima a'ro'iada, es degradado el
amino,cido a su corres'ondiente amina.
La 'resencia de estas aminas, eleva el '#
del medio, cambiando el color del indicador
del amarillo al ':r'ura o violeta.
Si el organismo en estudio, no 'roduce la
en*ima decarbo2ilasa o dehidrolasa, el
medio 'ermanece ,cido 5amarillo6 'or
ermentacin de la glucosa.
Caldo urea
de 'tuart
Cn cambio de color 8o0o
ucsia indica que la urea
ue hidroli*ada 'or la
ureasa del
/usencia de cambio de
color indica reacciona
negativa
8o0o enol Los microorganismos que 'oseen la en*ima
Creasa tienen la ca'acidad de hidroli*ar la
urea contenida en el medio con 'roduccin
de amoniaco, 'ara esta 'rueba se utili*a el
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microorganismo.
caldo urea de stuart o agar urea de
christensen. 9l caldo sturat est, estabili*ado
con sales de osato a un '# de D.E. el
microorganismo en estudio debe 'roducir
cantidades relativamente grandes a (n de
su'erar el sistema estabili*ador del medio y
elevar el '# del medio los su(ciente como
'ara virar el indicador 5'or encima de E.F6
'(M
)'ulfuro4
indol4
movilidad/
?8o0o 5anillo6 3 'resencia
de indol 5tri'tano ue
degradado6.
?.egro 5'reci'itado6,
'roduccin de #=S
?4urbide*
?/marillo, la bacteria no
'uede degradar el
tri'tano
?.o hay 'reci'itado
negro
?La bacteria slo crece
en la lnea de
inoculacin
8eactivo de
!ovacs 5'&
dimetilamino
ben*aldehdo6
&&&&&&&
9l indol, es uno de los 'roductos de la
degradacin metablicas del amino acido
tri'toano. Las bacterias que 'roducen la
en*ima tri'toanasa son ca'aces de
hidroli*ar y desaminar el tri'toano con
'roduccin de Gndol, acido 'iruvico y
amoniaco. La 'rueba del indol est, basada
en la ormacin de un com'le0o ro0o cuando
el Gndol reacciona con el gru'o aldehdo '&
dimetilaminoben*aldehido. 9ste es el
'rinci'io activo del reactivo de !ovacs.
Fenilalanina
La 'resencia de ,cido
enil'ir:vico 5'rueba
'ositiva6 se mani(esta 'or
la a'aricin de un color
caracterstico verde oscuro
o verde&a*ulado.
Sin cambios
solucin de
cloruro rrico
al HF%
&&&&&
9sta 'rueba determina la ca'acidad de un
organismo 'ara desaminar el amino,cido
enilalanina en ,cido enil'ir:vico 'or su
actividad en*im,tica de enilalanina
desaminasa, con la consiguiente acide*
resultante.
Citrato de
simmons
>recimiento y vire del
indicador a color a*ul
.o hay crecimiento ni
vire
&&&&
/*ul de
bromotimol
Se basa en la ca'acidad de algunos
microorganismos ca'aces de utili*ar el
citrato como :nica uente de carbono y las
sales de amonio como :nica uente de
nitrgeno.
ONP5
o4nitrofenil4
6474
galact8sido
Formacin de una
coloracin amarilla
Sin cambios
5trans'arente6
&&&&& &&&&
9l o&nitroenil&I&-&galactsido 5".P)6 es un
com'uesto incoloro estructuralmente similar
a la lactosa. 9n 'resencia de I&
galactosidasa, el ".P) se rom'e en
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galactosa y o&nitroenil, un com'uesto color
amarillo.
Prueba del
mucato
Aire de a*ul&verdoso a
amarillo
9l tubo 'ermanece
a*ul&verdoso
&&&&&
/*ul de
bromotimol
Se utili*a 'ara determinar la ca'acidad de
los microorganismos de metaboli*ar el ,cido
m:cico como uente de carbono.
KCN
>recimiento 5turbide*6 en
el caldo 'e'etona.
Sin crecimiento &&&&&& &&&&&&
9l !>. inhibe la cadena de trans'orte de
electrones unindose a los citocromos
im'idiendo el crecimiento microbiano. Sin
embargo, algunas bacterias no son
inactivadas y 'ueden crecer.
$(*
-escarbo2ilacin 5+67 Pico
violeta1ondo violeta. 5!1!6
-esaminacin 5+67Pico
ro0i*o1ondo amarillo 581/6
Produccin de #=S 7
9nnegrecimiento del
medio 5es'ecialmente en
el lmite del 'ico y ondo6
-escarbo2ilacin 5&67
Pico violeta1ondo
amarillo. 5!1/6
-esaminacin 5&67 sin
cambio en la su'er(cie.
&&&&&&
Pur'ura de
bromocreso
l
Basada en la evidenciacin de las en*imas
que 'uede 'oseer un microorganismo 'ara
'oder descarbo2ilar o desaminar un
amino,cido, as como la 'roduccin de #=S.
M(O
)Movilidad3
indol 0
ornitina/
Movilidad7
Presencia de turbide* o
crecimiento m,s all, de la
lnea de siembra.
"rnitina decarbo2ilasa7
>olor ':r'ura.
Prueba del indol7
>olor ro0o al agregar el
reactivo revelador.
&8esultado negativo7 el
color del reactivo
revelador 'ermanece
incoloro&amarillento.
Movilidad7
>recimiento solamente
en la lnea de siembra.
"rnitina decarbo2ilasa7
>olor amarillo. / veces
se 'uede desarrollar un
color viol,ceo en la
su'er(cie del medio.
Prueba del indol7
el color del reactivo
revelador 'ermanece
incoloro&amarillento.
reactivo de
!ovacs 5'&
dimetilamino
ben*aldehdo6
P:r'ura de
bromocreso
l
Permite identi(car bacterias de acuerdo a su
movilidad, a la reaccin de Gndol y a la
descarbo2ilacin de la ornitina.
Medio urea
de
Cn cambio de color 8o0o
ucsia indica que la urea
/usencia de cambio de
color indica reacciona
8o0o de
enol
Medio utili*ado 'ara dierenciar
microorganismos en base a la actividad
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C"ristensen
ue hidroli*ada 'or la
ureasa del
microorganismo.
negativa
ure,sica.
/lgunas bacterias hidroli*an la urea 'or
medio de la en*ima ureasa liberando
amonaco y di2ido de carbono. 9stos
'roductos alcalini*an el medio haciendo virar
el ro0o de enol del amarillo al ro0o.
Hidr8lisis de
gelatina
)tubo/
Si des'us del
enriamiento el contenido
del tubo es liquido.
Si con el enriamiento
se solidi(ca el
contenido.
&&&& &&&&
Se basa en la ca'acidad del microorganismo
'ara 'oder hidroli*as las 'rotenas a
''tidos y a amino,cidos 'or medio de las
en*imas gelatinasas.
Reducci8n
de nitratos a
nitritos con
cam,ana de
7ur"am
4oma una coloracin ro0o&
ladrillo
Burbu0a de gas ne la
cam'ana de -urham
.o hay cambios
?.ota7 Si no a'arece
coloracin ro0a
5ausencia de nitritos6 se
aJade un 'oco de
*inc5'ara reducir
nitratos6 y se observa si
a'arece color
5quedaban nitratos6 o
'ermanece incoloro 5no
quedaban nitratos en el
cultiuvo6.
@ natil amina
y acido
sulanilico.
)ranalla de Kn
5
&&&&&&&&
9n esta 'rueba se detecta una res'iracin
anaerobia7 la que utili*a nitrato como
ace'tor (nal de electrones. Los nitratos se
reducen a nitritos y algunas bacterias
reducen los nitritos a 'roductos gaseosos
5.= y .="6. Las en*imas res'onsables de
ambas reducciones se denominan nitrato y
nitrito reductasa, res'ectivamente.
*rginina
de"idrolasa
)*7H/
4ubo color 'ur'ura o
gris,ceo
4ubo color amarillo
P:r'ura de
bromocreso
l y el ro0o
de cresol
son
indicadores
del '#.
La L&arginina, a la ve* que es cataboli*ada
'or una decarbo2ilasa, 'uede serlo tambin
'or una hidrolasa con el mismo (nal anterior,
que es la 'roduccin de alcalinidad, aunque
los com'uestos intermedios sean distintos.
/s, la L&arginina, 'or accin de arginina
dehidrolasa, 'roduce L&citrulina y amoniaco.
2ligler Fermentacin de la
glucosa7 amarillo en el
ondo.
Fermentacin de la
lactosa7 amarillo en el 'ico
de Lauta.
Sin cambios &&&&&& 8o0o enol Se basa en la ca'acidad del microorganismo
'ara utili*ar la lactosa como uente de
carbono as como a la glucosa, obteniendo
como 'roductos de la ermentacin ,cidos,
los cuales hacen que el medio vire. 9l
tiosulato de sodio es el sustrato necesario
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Produccin de gas.
/lcalini*acin7 vire de ro0o
a ':r'ura.
Produccin de #=S 7 '.'
negro
'ara la 'roduccin de #=S.
Producci8n
de acido a
,artir de
C&* con
diferentes
a-ucares
La 'resencia de un color
amarillo indica la una
reaccin 'ositiva 'ara la
ermentacin de la
glucosa.
Produccin de gas7 burbu0a
en la cam'ana de -urham.
Sin cambios en el
medio, conserva su
color original 5ro0o6.
8o0o de
enol
Medio nutritivo que 'ermite el desarrollo de
microorganismos e2igentes.
9n el medio de cultivo, la tri'teina es la
uente de nitrogeno, amino,cidos y
vitaminas. La cistina y el sul(to de sodio
avorecen el desarrollo bacteriano, el cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico. 9l
ro0o enol es el indicador de '#, y el agar se
encuentra en una concentracin 'tima 'ara
lograr un medio semislido, :til 'ara
evidenciar motilidad bacteriana y 'ara
mantener el 'otencial de o2ido&reduccin
que acilita el desarrollo de microorganismos
anaerobios 5es'ecialmente cuando se
em'lea con su(ciente 'roundidad6.
Prueba de
Por+rina
-esarrollo de Lorescencia
de color ro0o ladrillo a
naran0a ba0o lu*
ultravioleta.
Sin cambios de color en
la ca'a de reactivo ni
en el disco.
Solucin de
/L/ como
sustrato de la
en*ima.
-iscos /L/.
-etecta la ca'acidad de las ce'as de
Haemophilus 'ara sinteti*ar intermediarios
de 'roto'or(rina en la va metablica
biosinttica 'ara la hemina a 'artir del
'recursor /L/.