Introduccin

Objetivo

Procedimiento

Resultados

Observaciones

Bibliografa




INTRODUCCIN

La inoculacin de medios de cultivo y la manipulacin
de cultivos microbianos en el laboratorio de microbio-
loga, son procedimientos fundamentales e importan-
tes que deben realizarse tomando una serie de pre-
cauciones para evitar la contaminacin de la prepara-
cin con la que estamos trabajando y a la vez para
evitar la contaminacin del ambiente y del operador.
Esta serie de precauciones se conoce como tcnica
asptica; entre las principales podemos citar:

Trabajar siempre cerca del mechero.

Pasar la punta de los tubos que contienen el culti-
vo a travs de la llama del mechero, a este proce-
dimiento se le conoce como flameado.

Esterilizar el filamento o el asa colocndola en la
llama hasta que est al rojo vivo.



Trabajo Prctico N 3

TRANSFERENCIAS ASPTICAS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA TRANSFERENCIAS ASPTICAS
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3.2
OBJETIVO

Al finalizar el trabajo prctico el estudiante estar en capacidad de:

Ejecutar las tcnicas bsicas para la manipulacin de cultivos microbianos en for-
ma asptica.

PROCEDIMIENTO

TRANSFERENCIAS DE MEDIO LQUIDO A MEDIO LQUIDO

1. Marcar el tubo de caldo nutritivo estril con su nmero equipo y fecha.










2. Agitar el cultivo para resuspender la suspensin microbiana. Evitar mojar la
tapa del tubo con el cultivo.












3. Esterilizar el asa a la llama.










LABORATORIO DE MICROBIOLOGA TRANSFERENCIAS ASPTICAS
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3.3
4. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la
tapa se contamine colocndola sobre el mesn.












5. Insertar el asa estril en el cultivo y tomar un asa llena para transferirla al otro
tubo que contiene el medio de cultivo estril.












6. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar
en la gradilla.





7. Destapar el tubo que contiene el caldo nutritivo estril y flamear su punta. No
dejar que la tapa se contamine colocndola sobre el mesn.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA TRANSFERENCIAS ASPTICAS
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3.4

8. Introducir el asa que contiene el cultivo en el tubo de caldo nutritivo estril. An-
tes de sacar el asa del tubo tocar las paredes del mismo para eliminar cual-
quier exceso de caldo.





9. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar.





10. Esterilizar nuevamente el asa.










11. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5C por 24 horas.


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3.5
TRANSFERENCIAS DE MEDIO LQUIDO A MEDIO SLIDO

1. Marcar el tubo de agar nutritivo estril con su nmero de equipo y fecha.

2. Agitar el cultivo para resupender la suspensin microbiana. Evitar mojar la tapa
del tubo con el cultivo.

3. Esterilizar el asa a la llama.

4. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la
tapa se contamine colocndola sobre el mesn.

5. Insertar el asa estril en el cultivo y tomar un asa llena (la suspensin forma
una pelcula en el asa) para transferirla al otro tubo que contiene el medio de
cultivo estril.

6. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar
en la gradilla.

7. Destapar el tubo que contiene agar nutritivo estril y flamear su punta. No dejar
que la tapa se contamine colocndola sobre el mesn.

8. Para inocular el medio slido estril introducir el asa que contiene el cultivo en
el tubo de agar nutritivo estril hasta el fondo del tubo donde comienza el bisel
y diseminar el inculo sobre la superficie del mismo moviendo de lado a lado y
hacia arriba hasta llegar a la punta del bisel.

9. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar.

10. Esterilizar nuevamente el asa.

11. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5C por 24 horas.

TRANSFERENCIAS DE MEDIO SLIDO A MEDIO SLIDO

1. Marcar el tubo de agar nutritivo estril con su nmero de equipo y fecha.

2. Esterilizar el filamento a la llama.

3. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la
tapa se contamine colocndola sobre el mesn.

4. Introducir el filamento estril en el tubo, tocar el cultivo con la punta del filamen-
to para tomar una porcin y transferir a otro tubo que contenga el medio de cul-
tivo estril.

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA TRANSFERENCIAS ASPTICAS
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3.6
5. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar
en la gradilla.

6. Destapar el tubo que contiene el agar nutritivo estril y flamear su punta. No
dejar que la tapa se contamine colocndola sobre el mesn.

7. Para inocular el medio slido estril introducir el filamento que contiene el culti-
vo en el tubo de agar nutritivo estril hasta el fondo del tubo donde comienza el
bisel y diseminar el inculo sobre la superficie del mismo moviendo de lado a
lado y hacia arriba hasta llegar a la punta del bisel.

8. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar.

9. Esterilizar nuevamente el filamento.

10. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5C por 24 horas.

TRANSFERENCIAS DE MEDIO SLIDO A MEDIO LQUIDO

1. Marcar el tubo de caldo nutritivo estril con su nmero equipo y fecha.

2. Esterilizar el asa a la llama.

3. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la
tapa se contamine colocndola sobre el mesn.

4. Insertar el asa estril en el cultivo y tomar un asa llena (la suspensin forma
una pelcula en el asa) para transferirla al otro tubo que contiene el medio de
cultivo estril.

5. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar
en la gradilla.

6. Destapar el tubo que contiene el caldo nutritivo estril y flamear su punta. No
dejar que la tapa se contamine colocndola sobre el mesn.

7. Para inocular el medio lquido estril agite el asa dentro del tubo de caldo nutri-
tivo estril. Antes de sacar el asa del tubo tocar las paredes del mismo para
eliminar cualquier exceso de caldo.

8. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar.

9. Esterilizar nuevamente el asa.

10. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5C por 24 horas.


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3.7

RESULTADOS

Luego de la incubacin, observar el crecimiento en cada uno de los tubos inocula-
dos. Anotar lo observado.










OBSERVACIONES











BIBLIOGRAFA

Benson H. J . 1979. Microbiological Application. A Laboratory Manual in General
Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company Publishers. Dubuque, Iowa

Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos Ge-
nerales. Segunda edicin. Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezue-
la.

Seeley, H.W.I, J r and P.J . Van Demark 1972. Microbes in Action. W.H. Freeman
and Company.


Prof. Magaly Pedrique de Aulacio
Prof. Sofa Gutirrez de Gamboa
Noviembre 2001
Revisin 2008