9/30/2013

1
BIOTEKNOLOGI MIKROBA
Teknik dasar kultur mikroba
Perbaikan strain mikroba
Pembuatan inokulumpupuk hayati
Pertemuan ke 5
Mikroba = kel jasad hidup berukuran kecil dng kisaran
ukuran sel sekitar 0,1 10 m (1 m = 10
-6
)
Perbedaan mikroba dng jasad hidup lain<,
satu sel mikroba adalah satu individu.
Mikroba ada 3 kelompok utama :
- Prokaryot
- Eukaryot
- Archaea
Contoh prokaryot: bakteri Eschericia coli
Contoheukaryot: Khamir Saccharomyces
cerevisiae
TEKNIK DASAR KULTUR MIKROBA
Dapat ditumbuhkan dlm medium padat
(misal: tempe, tape, oncom, jamur konsumsi)
dan medium cair (misal: untuk menghasilkan
antibiotik, etanol, asam asam amino, nata de
coco).
Berdasarkan komposisi medium utk
menumbuhkan mikroba :
- medium lengkap
- medium minimal
Medium lengkap : bahan organik atau anorganik yg
dapat memenuhi kebutuhan mikroba utk pertumbuhan
dan aktivitas metabolismenya shg mikroba dpt tumbuh
scr optimum.
Contoh bahan organik: ekstrak daging, ekstrak taoge,
ekstrak kentang, dll
Medium minimal: suatu bahan kimia (umumnya bahan
anorganik) dng komposisi terbatas yg digunakan utk
pertmbhn mikroba.
9/30/2013
2
Contoh Medium lengkap
Komposisi media nutrien cair dan nutrien agar
untuk bakteri:
Nutrien cair:
2 g nutrien broth + aquades 250 ml
Nutrien agar:
2 g nutrien broth + aquades 250 ml + 3 g agar
Komposisi media taoge cair dan taoge agar
untuk jamur/khamir:
Taoge cair: 25 g taoge + 15 g gula pasir +
aquades 250 ml
Taoge agar: 25 g taoge + 15 g gula pasir +
aquades 250 ml + 3 g agar
Media cair steril
BAHAN MEDIUM BANYAK TERSEDIA, MUDAH DIDAPAT DAN MURAH
HARGANYA:
-SISA TANAMAN/HEWAN, LIMBAH ORGANIK, KOMPOS.
-Bahan medium dianalisis kandungan C, N, P, K, apabila kandungan unsur
tersebut kurang maka ditambah BAHAN KIMIA TEKNIS
- Kebutuhan C, N, P, K untuk pertumbuhan mikroba dapat diketahui dengan
perhitungan atau percobaan pendahuluan
Bahan medium: bahan kimia buatan pabrik atau bahan alami yang diproses untuk
memenuhi kebutuhan C, unsur makro dan mikro serta senyawa lain yang dibutuhkan
untuk pertumbuhan
TEKNIK KULTIVASI MIKROBA
1. KULTUR BATCH (sekali panen)
Mikroba ditumbuhkan dlm medium sampai mencapai
fase pertumbuhn maksimal kemudian dipanen
produknya (sel/biomassa atau produk metabolitnya)
2. KULTUR KONTINYU
Mikroba ditumbuhkan terus menerus pada fase paling
optimum (eksponensial) shg pemanenan produk
dapat dilakukan berulang ulang tanpa mengulangi
kultivasi dari awal.
KULTUR BATCH
Pola pertumbuhan SIGMOID
- fase pertmbhn lag / adaptasi
Belum ada penambhan jumlah sel
lamanya tergtg : status fisiologis mikroba,
macam mikroba, perbedaan kondisi pertumbhn
sebelum mikroba ditumbuhkan dlm medium
lengkap kemudian ke medium minimal.
9/30/2013
3
Grafik pertumbuhan mikroba dalam satuan bilangan logaritma
Kurva pertumbuhan mikroba dalam kultur tertutup (batch culture)
-Fase pertmbhn dipercepat
fase ini berlgs cepat karena mikroba kan masuk ke fase
berikutnya.
- Fase eksponensial
pertambahan jumlah sel berlgs secara logaritmik
mikroba mencapai status isiologis yg optimum.
- Fase pertmbhn diperlambat
nutrien berkurang karena digunakan untuk pertumbuhan
- Fase stationer
sebagian sel mengalami kematian shg rasio jumlah sel yg hidup
dan yg mati seimbang dan jd jml sel total tdk meningkat.
Skema dasar bioreaktor sistem
batch
9/30/2013
4
KULTUR KONTINYU
Ada 2 cara :
1. KEMOSTAT :
Menambahkan nutrien dlm suatu tangki shg
komposisi nutrien di dlm fermentor tempat
kultivasi mikroba selalu dlm keadaan tetap.
2. TURBIDOSTAT
Menambahkan nutrien secara kontinyu shg
kerapatan sel selalu dlm keadaan tetap.
Dlm turbidostat aliran medium diatur berdasarkan
kerapatan optik kultur mikrobia.
Contoh
bioreaktor
kultur cair
yang
digunakan
untuk kultur
kontinyu:
Fermentor skala
laboratorium
Kemostat untuk Bioreaktor sel kontinyu
PEMANFAATAN MIKROBA DALAM INDUSTRI
BIOTEKNOLOGI
1. Produk pangan yg dikonsumsi secara langsung
2. Produksi bahan baku utk pangan
3. Produksi bahan utk mendukung tahapan sebelum panen
(misal biofertilizer, biopestisida, bioaktivator kompos)
4. Produksi bahan bahan utk pengelolaan kesehatan
5. Produksi bahan bahan pendukung utk industri yg lain
Dlm industri bioteknologi semacam ini mikroba dapat
digunakan sbg :
1. agensia produksi (untuk produksi alkohol, asamsitrat, keju,
enzim, insulin, antibiotik, dll)
2. produk hasil akhir yang digunakan secara langsung (tempe,
yogurt, biofertilizer, biopestisida)
9/30/2013
5
PERBAIKAN STRAIN MIKROBA
PENINGKATAN KEMAMPUAN FISIOLOGIS MIKROBA:
1.Teknik Konvensional
a. Teknik mutagenesis secara acak
- mutagenesis dg mutagen kimia
- mutagenesis dg mutagen fisik
- mutagenesis secara terarah.
b. Fusi protoplas (dipelajari pada pertemuan ke 7)
2.Teknik modern (non-konvensional)
Dipelajari setelah DNA rekombinan, pada bioteknologi
mikroba penambat nitrogen (setelah mid)
PEMBUATAN PUPUK HAYATI
Merupakan sel mikroba yang dapat berfungsi
sebagai pupuk.
Sering disebut sebagai inokulum pupuk hayati
Produknya berisi sel-sel mikroba dengan
kemampuan khusus, misal:
- mikroba penambat nitrogen
- mikroba pelarut fosfat, dll
Teknik Konvensional Pembuatan
Pupuk Hayati Penambat Gas Nitrogen
Bisakah menanambakteri penambat N2? Jawabnya tentu bisa
Mau mencoba?
Caranyabagaimana?
Mulai dari isolasi, kultur & perbanyakan
Untukapa?
Untuk pupukhayati pengganti pupukN kimia
Produknya disebut apa?
Inokulumbakteri penambat nitrogen
PRINSIP PEMBUATAN INOKULUM
I. ISOLASI, PEMILIHAN, DAN
PEMELIHARAAN KULTUR
II. TEKNIK PERBANYAKAN MIKROBA
III. FORMULASI
IV. PACKING DAN PENYIMPANAN
9/30/2013
6
PEMILIHAN MIKROBA UNGGUL
METODE KIMIA:
-N15 UNTUK FIKSASI N2
-P TERLARUT UTK PELARUT RP.
-CO2 / HARA TERSEDIA UTK PEROMBAK BAHAN ORGANIK
-SULFAT UNTUK OKSIDASI SO,dll
METODE MIKROBIOLOGIS:
-MEDIUM BEBAS NITROGEN
-MEDIUM + BATU FOSFAT
-MEDIUM + BAHAN ORGANIK YANG DIUJI
-MEDIUM + SULFUR / Fe S (PIRIT)
-MEDIUM + Mn SO4, dll
PEMELIHARAAN KULTUR MIKROBA
UNGGUL
DIBUAT BIAKAN MURNI: -KULTUR STOK
-KULTUR SEDIAAN
PENYIMPANAN KULTUR:
1. JANGKA PENDEK/SEGERA DIGUNAKAN
BIAKAN CAIR/PASTA, PADA SUHU 5-15OC TAHAN SAMPAI 1 BULAN
BIAKAN AGAR MIRING/ DISIMPAN SUHU 5-15OC TAHAN 3-6 BULAN
BIAKAN AGAR MIRING + LAPISAN GLISEROL, PADA SUHU 5-15OC TAHAN SAMPAI
1 TAHUN
2. JANGKA PANJANG/ UNTUK STOK YG TAHAN HIDUP SAMPAI BEBERAPA
TAHUN
BIAKAN DALAM MEDIUM PASIR ATAU TANAH
BIAKAN LIOFILIK
TEKNIK PERBANYAKAN MIKROBA
PEMILIHAN MEDIUM PERBANYAKAN
MIKROBA
BAHAN MEDIUM BANYAK TERSEDIA, MUDAH
DIDAPAT DAN MURAH HARGANYA
MISAL SISA TANAMAN/HEWAN, LIMBAH
ORGANIK, KOMPOS, dll + BAHAN KIMIA
TEKNIS
Sistem Fermentasi untuk Perbanyakan
Sel
FERMENTASI PADAT:
DALAM NAMPAN/ KANTONG
FERMENTOR KOLOM
FERMENTOR DRUM PUTAR
FLUIDIZED BED DEVICES
FERMENTASI CAIR
KULTUR GOJOK (SHAKE CULTURE)
DALAM ALAT FERMENTOR KULTUR CAIR
9/30/2013
7
STERILISASI MEDIA DAN ALAT UNTUK KULTUR BAKTERI
AUTOCALVE
MEDIA: 121
O
C 15 MENIT
ALAT: 121
O
C 30 MENIT
SEMUA ALAT YANG DIGUNAKAN
DISTERILISASI
TEKNIK ISOLASI MIKROBA
TEKNIK KERJA ASEPTIS UNTUK
PENANAMAN BAKTERI
STERILISASI OSE SEBELUM
DIGUNAKAN
MENANAM BAKTERI PADA
PETRIDISH
di laminer air flow
Isolasi Bakteri
Penambat N2 Udara
Bintil akar disterilkan,
dipecah,
diambil cairannya
menggunakan jarum ose
Ose
digoreskan
di atas
media agar
Bintil
akar
Pengenceran sumber isolat dilakukan agar diperoleh
koloni yang tumbuh terpisah
Pengenceran untuk teknik isolasi taburan
Figure 6.15
Pada isolasi teknik goresan, sumber isolat bisa diencerkan terlebih dahulu
menggunakan air steril, agar diperoleh koloni terpisah.
9/30/2013
8
Koloni hasil kultur bintil
akar yang terpisah
diambil dengan ose
Simpan dalam refrigerator
(almari es tapi bukan di
freezernya)
DITANAM DI
MEDIA AGAR
MIRING
Pembuatan
kultur murni
Rhizobium
Isolasi Mikroba Pelarut Fosfat
Tanah risosfer dibuat seri pengenceran dengan air
steril
Masing2 pengenceran ditaburkan di medium yang
mengandung P tak larut /Pikovskaya med
Inkubasi suhu kamar selama 3-4 hari
Mikroba yang membentuk zona jernih dimurnikan
pada medium agar yg sama
Dibuat biakan dalam agar miring
CONTOH ISOLAT DARI TANAH VERTISOL
GADING GUNUNG KIDUL
Aspergillus
JAMUR PELARUT FOSFAT
(Sumarsih , 1986)
Pemilihan mikroba pelarut fosfat
a. Pelarutan P tidak larut pada medium agar
Inokulasi titik koloni yg membentuk zona jernih
pada medium pikovskaya agar dalam petri
Inkubasikan 4-5 hari pada suhu kamar
Ukur luas zona jernih di sekeliling koloni
Zona jernih yang terluas menunjukkan
kemampuan melarutkan P yg besar
9/30/2013
9
UJI PEMILIHAN MIKROBA
PENGOKSIDASI SULFUR
Uji kimia
:Media cair
yang diberi
bubuk Sulfur
berubah
menjadi
jernih
Uji mikrobiologis:
Zona jernih di
media tanda
mampu
mengoksidasi Sulfur
Sulfur yang
semula
ditandai
dengan keruh
menjadi jernih
di media cair
BAKTERI PETROFILIK (PEROMBAK
MINYAK BUMI) dapat membentuk
biomassa dengan sumber karbon minyak
bumi
Biomassa
bakteri/warna
minyak bumi
berubah
Minyak bumi
Uji Perombakan pati & selulosa
Uji Perombakan
pati
Perombakan
CMC
(Carboxy
Methyl
Cellulose)
Uji
perombakan
selulosa
mikrokristalin
Media diberi larutan
Yod.
Zona jernih
menunjukkan pati
telah terombak
Agar hasil lebih banyak
dari kultur gojokdipindah
ke fermentor
dipindah ke
fermentor sederhana
9/30/2013
10
TEKNIK
PRODUKSI /
PERBANYAKAN
MIKROBA
SECARA
SEDERHANA
Media
dari
bahan
yang
mudah
didapat
Skala
produksi
kecil
menggunakan
fermentor
sederhana
Kultur
murni
ditanam
dalam
media
cair
bifase
digojok
Skala
industri
PERBANYAKAN JAMUR MENGGUNAKAN
MEDIA PADAT
Perbanyakan mikroba menggunakan
fermentor skala laboratorium
KULTUR SEDIAAN
DIPERBANYAK DALAM FERMENTOR
STARTER
PERBANYAKAN
BAKTERI
DENGAN
TEKNOLOGI
MODERN
Starter
DIPERBANYAK DALAM
FERMENTOR MODERN
Kultur murni
9/30/2013
11
STARTER & PENGGANDAAN SKALA
FERMENTASI
STARTER UNTUK:
(a) MENGADAPTASI MIKROBA DARI MEDIUM AGAR KE
MEDIUM PERBANYAKAN
(b) MEMBUAT INOKULUM DARI SKALA KECIL (BIAKAN MURNI
DALAM TABUNG REAKSI) MENJADI SKALA YANG LEBIH BESAR
PENGGANDAAN SKALA UNTUK:
PRODUKSI SKALA LABORATORIUM SAMPAI SKALA PABRIK
PENGATURAN PRODUKSI DAN KONTROL KUALITAS
Kultur gojok dalam
erlenmeyer 250 ml
FERMENTOR SEDERHANA
volume 20 liter
Bioreaktor Skala Industri
volume 1000 liter
FORMULASI INOKULAN
INOKULAN:
CAMPURAN MIKROBA + CARRIER
SIFAT BAHAN CARRIER/PEMBAWA:
INERT
MUDAH DICAMPUR
MUDAH DIBENTUK
FORMULASI INOKULAN:
BAKTERI: INOKULAN UNTUK BIJI / TANAH, PADAT / CAIR
JAMUR : FORMULASI VERMICULITE, TEPUNG/BUBUK, TABLET, PRIL, GEL
PACKING DAN PENYIMPANAN
PACKING:
BENTUK CAIR / PADAT
KEDAP UDARA/ TIDAK KEDAP UDARA
INAKTIVASI/ LIOFILISASI / +ASAM
MASA AKTIF / KEDALUARSA
PENYIMPANAN:
SUHU RUANG / SUHU DINGIN / REFRIGERATOR
KELEMBABAN
AERASI
9/30/2013
12
Penggandaan skala produksi mikroba
Alur proses pembuatan inokulum bakteri secara industri
Beberapa
bentuk
produk
inokulum
Setelah
bakteri
diperbanyak
dicampur
dengan
carrier