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Electroforesis de Adn e. Coli

Electroforesis de Adn e. Coli

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Published by: Miguel Angel Rodas Herrera on Dec 08, 2009
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Universidad Autónoma de ChiapasFacultad de Ciencias QuímicasCampus IV
LABORATORIO DE GENETICA APLICADAPRACTICA NO. 4“CORRIMIENTO ELECTROFORÉTICO DE DNA DE E.COLI”CATEDRATICO:DR. KARINA TRUJILLO MURILLOTAPACHULA CHIAPAS A 05 DE NOVIEMBRE DEL 2009
 
INTRODUCCION
La electroforesis constituye parte importante del procedimiento rutinario del análisis delos ácidos nucleicos y proteínas. La electroforesis nos ayuda a observar los ácidosnucleicos y proteínas al final del procedimiento.El principio básico de la electroforesis consiste en la migración de las moléculas através de un gel, La agarosa que es un polisacárido, cuyas disoluciones (típicamentede 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados Cy formar un gel, semisólido al enfriarse. Este gel esta constituido por una matriz otrama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de mediolíquido, que retarda el paso de las moléculas, se usa usualmente para separamoléculas grandes de alrededor 20.000 nucleótidos, en el cual, por acción de uncampo eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño o peso molecular. Paracontrolar el avance de la separación de las moléculas en la matriz y establecer unpatrón de fragmentos, las moléculas deberán ser teñidas con diferentes colorantes.Estos pasos facilitan la visualización de las moléculas a manera de simples bandas lascuales serán posteriormente analizadas e interpretadas.La electroforesis en gel de agarosa es de las s utilizadas para analizar ycaracterizar ácidos nucleicos de distintas procedencias. Los geles se comportan comoun tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño yforma. Así, moléculas de DNA de diferente tamaño van a emigrar de forma distinta enuna electroforesis en gel de agarosa. Además, si en dicha electroforesis se aplicanmarcadores de peso molecular (fragmentos de DNA de tamaño conocido) se puedecalcular el tamaño aproximado del DNA en estudio.En biología molecular, la mayoría de los estudios básicos y aplicados requieren el usode la electroforesis; sin embargo, este procedimiento presenta variaciones de acuerdoal tipo de estudio que se piensa ejecutar. En la electroforesis de tipo vertical, seanalizan tanto moléculas de ADN como proteínas, mientras que en la electroforesishorizontal generalmente se trabaja con ADN o ARN.
DNA plasmidicoDibujo esquemático de un plásmido en una bacteria: en rojo, el ADN delcromosoma; en azul, los plásmidos.Los plásmidos, vectores o también llamados plasmidios, son moléculas de ADNextracromosómico circular o lineal que se replican y transcriben independientesdel ADN cromosómico. Están presentes normalmente en bacterias, y en
 
algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras, aparecen enel citoplasma de las bacterias. Su tamaño varía desde 1 a 250 pb. El númerode plásmidos puede variar, dependiendo de su tipo, desde una sola copia hastaalgunos cientos por célula.Determinan ciertos rasgos, que no son vitales, pero que de alguna maneradeterminan la capacidad del organismo para adaptarse. Estas moléculas deADN portan solamente unos pocos genes que en cierto modo están ligados alcromosoma bacteriano, de forma que se replican en números fijos, junto conlos cromosomas.Las moléculas de ADN plasmídico, adoptan una conformación tipo doble héliceal igual que el ADN de los cromosomas, aunque, por definición, se encuentranfuera de los mismos. Se han encontrado plásmidos en casi todas las bacterias.A diferencia del ADN cromosomal, los plásmidos no tienen protnasasociadas.Poseen información genética importante para las bacterias. Por ejemplo, losgenes que codifican para las protnas que las hacen resistentes a losantibióticos están, frecuentemente, en los plásmidos.Hay algunos plásmidos integrativos, es decir, que tienen la capacidad deinsertarse en el cromosoma bacteriano. Estos rompen momentáneamente elcromosoma y se sian en su interior, con lo cual, autoticamente lamaquinaria celular también reproduce el plásmido. Cuando ese plásmido se hainsertado se les da el nombre de episoma.Los plásmidos se utilizan en ingeniería getica por su capacidad dereproducirse de manera independiente del ADN cromosomal como así tambiénpor que es relativamente fácil manipularlos e insertar nuevas secuenciasgenéticas. Los plásmidos usados en Ingeniería Genética suelen contener uno odos genes que les confieren resistencia a antibióticos y permiten seleccionar clones recombinantes, los basados en fluorescencia o en proteínas quedestruyen las lulas sin uso de antibióticos. Los plásmidos a menudocontienen genes o paquetes de genes que le confieren una ventaja selectiva locual les da la habilidad de hacer a la bacteria, resistente a los antibióticos.Cada plásmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como unorigen de replicación u ORI (un punto inicial para la replicación del ADN), locual habilita al ADN para ser duplicado independientemente del ADNcromosomal. Los plásmidos de la mayoría de las bacterias son circulares, perotambién se conocen algunos lineales, los cuales reensamblan superficialmentelos cromosomas de la mayoría de eucariotes
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