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Extraccion y Purificacion de Dna de Celulas Eucariontes

Extraccion y Purificacion de Dna de Celulas Eucariontes

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Published by: Miguel Angel Rodas Herrera on Dec 08, 2009
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Universidad Autónoma de ChiapasFacultad de Ciencias QuímicasCampus IV
LABORATORIO DE GENETICA APLICADAPRACTICA NO. 5“EXTRACCION Y PURIFICACION DE DNA DE CELULASEUCARIONTES”TAPACHULA CHIAPAS A 15 DE OCTUBRE DEL 2009
 
INTRODUCCION
Todas las células, a excepción de las células anucleadas de los eritrocitos maduros enhumanos, contienen ADN en sus núcleos celulares. También podemos encontrar ADNdentro de otros compartimentos celulares diferentes al núcleo, como las mitocondrias ylos cloroplastos. La cantidad de ADN presente en algunos tejidos es muy pequeño; por este motivo no representa una fuente conveniente de extracción, aislamiento ypurificación, para ser empleado en diferentes estudios de carácter genético, biológico. y/obioquímico. Muchos tejidos contienen alta actividad de desoxirribonucleasa (DNAasa)que rompe la macromolécula en pequeños fragmentos. Para seleccionar un tejido comofuente de ADN debe reunir dos condiciones: contener gran cantidad de material genéticoy poseer baja actividad de DNAasa.El tejido linfoide, y en este caso el timo y el bazo representan materiales biológicos queson utilizados con mucha frecuencia como fuente de cantidades considerables de ADNpara diferentes estudios.Después de extraído el ADN suele ser rápidamente desnaturalizado y por lo tanto se debetener mucho cuidado en su remoción, aislamiento y purificación con el fin de obtener unproducto que conserve la identidad e integridad estructural con el ADN de la célula de lacual proviene. El estrés o tensión mecánica o físico química, que acompañan los procesosde purificación de las moléculas de ADN deben ser evitadas al máximo y las nucleasasinhibidas.Factores como los iones Ca2+ y Mg2
 
son importantes para la actividad del lasDNAasas .El citrato de sodio presente en las soluciones empleadas para la extracción ypurificación del ADN, atrapa estos iones e impide, de esta forma, la acción de las enzimasque digieren estas moléculas. Con el fin de eliminar en forma definitiva la actividad de lasnucleasas, las etapas de remoción de las proteínas deben ser llevadas a cabo tan rápidocomo sea posible y en frío.Las nucleoproteínas, son proteínas que aparecen asociadas con los ácidos nucleicos delas células eucariotas; son insolubles en agua y en soluciones de baja fuerza iónica perosolubles en soluciones de alta fuerza iónica; propiedad que debe ser tenida en cuentadurante los procesos de extracción inicial.El aislamiento de DNA genómico tiene diferentes aplicaciones. Estas incluyen la digestión deeste DNA con enzimas de restricción, así como el realizar estudios de diagnóstico deenfermedades genéticas, y el análisis de polimorfismos de DNA para la identificación deindividuos. Las técnicas de aislamiento de DNA se han hecho cada vez más rápidas ysimples, principalmente con el fin de realizar análisis de diagnóstico. De esta forma un DNAgenómico aislado por la técnica utilizada en este trabajo práctico, puede ser digerido conenzimas de restriccn y analizado por la cnica de "Southern", o tambn puedeamplificarse una zona específica de éste por la técnica de PCR, y analizar posteriormentepor electroforesis directa o por secuenciación.
 
RESULTADOS
Al agregar TSNT se puso color rojo fuerte después se agrego fenol saturado el color fuecafé (chocolate).Después se le agrego SEVAG no cambioy se agrego TE no cambio.

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