2.

2 Analisis Kandungan Total Gula

Sebagai senyawa kompleks, karbohidrat mengandung cukup
heterogen, berbeda dalam struktur primer (ukuran dan bentuk cincin),
derajat polimerisasi (mono vs oligo vs
polisakarida), karakteristik makromolekul (struktur linear vs bercabang
struktur kompak), linkage (yaitu, atau linkage glikosidik, posisi
linkage).
Dari perspekti analitis, situasi yang paling sederhana adalah di mana
ada
hanya satu jenis karbohidrat hadir dalam sampel dapat dicampur
minimal
senyawanya. !ontohnya mengukur oligomer glukosa dalam sirup
jagung, misalnya. di
hal ini reaktivitas yang berbeda dari gula berdasarkan struktur
(misalnya, ketosa
atau bentuk heksosa), biaya, dan jenis (misalnya, glukosa vs
arabinosa) tidak hadir
masalah.
2.2.1 Penyiapan Sampel
Sebelum menganalisis untuk setiap kelas karbohidrat, apakah itu
monosakarida
atau bahan selulosa tidak larut, sampel harus dipersiapkan agar
menghilangkan "at yang dapat mengganggu analisis. #ntuk sampel
yang
sudah dasarnya larutan gula (jus, madu) sangat sedikit persiapan
sampel
diperlukan. #ntuk sampel lainnya, seperti minyak biji, sereal atau
makanan utuh,
lemak, protein, pigmen, vitamin, mineral, dan berbagai senyawa
lainnya
harus dihapus sebelum analisis.
$etode kimia berlaku untuk gula netral, enol%sulat
uji asam dan uji anthrone, metode klasik dengan sejarah panjang
dari menggunakan, meskipun uji asam enol%sulat mungkin lebih
populer
dari dua. Sebuah metode kimia untuk analisis asam uronic juga
diuraikan.
$etode en"imatik, sementara banyak digunakan dan tersedia,
umumnya
khusus untuk hanya satu atau lebih gula dalam sampel.
2.2.2 Uji Fenol-Asam Sulfat
2.2.2.1 Reaksi Teoi
Di asam kuat dan panas, karbohidrat menjalani serangkaian reaksi
yang mengarah pada pembentukan derivati uran seperti
uranaldehyde dan hydro&ymethyl uraldehide.
2.2.2.2 Prosedur Operasi
'enol, dalam larutan ( atau )*+ ditambahkan ke tabung reaksi yang
berisi gelas yang jelas larutan sampel. ,sam sulat pekat ditambahkan
dalam aliran cepat langsung ke permukaan cairan dalam tabung tes.
!ampuran tersebut adalah benar%benar ikombinasikan menggunakan
$i&ter vorte& dan kemudian dii"inkan untuk berdiri waktu yang cukup
untuk memungkinkan pengembangan warna. Solusi absorbansi dibaca
pada -.* atau -)* nm menggunakan spektrootometer, tergantung
pada jenis gula ini.
/encampuran dan berdiri waktu harus disimpan sama untuk semua
sampel untuk memastikan hasil direproduksi.
2.2.2.! Kuanti"kasi
0urva kalibrasi dibangun dengan menggunakan gula yang diuji. tabung
, 1 mg 2 larutan standar gula berair ml digunakan untuk menyiapkan (
atau 3 standar mulai dari 1* hingga 1** 4g 2 ml. Setiap standar
dikenakan reaksi prosedur yang diuraikan di atas, dipindahkan ke
kuvet, dan absorbansi yang dibaca pada -)* atau -.* nm. ,bsorbansi
kosong harus dikurangkan dari absorbansi standar manual, atau
kosong harus digunakan untuk nol spektrootometer. Sebuah gra5k
absorbansi vs konsentrasi dibangun
dan jumlah analit berasal dari kurva kalibrasi
2.2.2.# Peneapan
$etode enol%sulat banyak digunakan untuk menentukan konsentrasi
total
karbohidrat dalam sampel. 6al ini dapat digunakan pada ekstrak bebas
lipid dari
sereal, biji%bijian, dan tanaman, disediakan sampel adalah dalam
larutan, dan sesuai
untuk kedua mengurangi dan nonreducing gula. 6al ini
menguntungkan dalam bahwa
reagen yang murah dan tersedia, peralatan yang dibutuhkan adalah
minimal,
dan uji sederhana. Selain itu, dapat digunakan untuk mengukur
monosakarida,
oligosakarida, dan polisakarida. 0urva absorpsi karakteristik
untuk gula yang berbeda7 8leh karena itu, metode ini memberikan
yang paling akurat
terjadi ketika diterapkan pada sampel yang mengandung hanya satu
jenis karbohidrat.
2.2.! Uji aton Asam Sulfat
2.2.!.1 Reaksi Teoi
Serupa dengan uji asam enol%sulat, metode antron didasarkan pada
kondensasi derivati uraldehide, yang dihasilkan oleh karbohidrat
dalam kehadiran asam kuat, dengan reagen, dalam hal ini antron (.,1*
% dihidro%.%o"oanthracene), untuk menghasilkan senyawa berwarna.
9eaksi karbohidrat dalam lingkungan asam kuat dengan hasil anthrone
dalam :arna biru%hijau dan absorbansi dibaca pada 3;( nm.
2.2.3.2 Prosedur
!ampuran didinginkan dari ;+ anthrone dalam asam sulat pekat
dicampur dengan
sebuah ali<uot dari larutan sampel yang jelas mengandung gula yang
diuji.
Setelah inkubasi dalam lingkungan suhu yang dikendalikan untuk
waktu yang cukup
untuk memungkinkan pengembangan warna, larutan dituangkan ke
dalam yang sesuai
cuvette spektrootometri dan absorbansi diukur pada 3;(nm
2.2.!.! Kuanti"kasi
Serupa dengan uji asam enol%sulat, reaksi anthrone adalah
nonstoichemetric
dan karena itu memerlukan pembangunan kurva standar untuk
tujuan kuantitati.
2.2.!.# Peneapan
$etode anthrone%sulat yang paling berlaku untuk larutan yang
mengandung satu
jenis heksosa karena bahkan gula dengan struktur serupa
menghasilkan yang berbeda
tari dan jumlah pembangunan warna. =ula lain, seperti pentosa
dan asam he&uronic, juga akan bereaksi untuk menghasilkan senyawa
berwarna yang
menyerap pada panjang gelombang yang sama, tapi ini hanya menjadi
masalah jika mereka hadir dalam larutan di atas tingkat tertentu.
,ssay ini juga dapat digunakan untuk analisis kuantitati oligo%dan
polisakarida yang disediakan hanya satu jenis
hadir dalam larutan.
2.2.4 Analisis Uronic Asam
$etode kolorimetri untuk menentukan asam uronic mirip dengan enol%
asam sulat dan uji anthrone dalam bahwa mereka didasarkan pada
reaksi
dari reagen dengan turunan karbohidrat yang terbentuk dalam asam
pekat. itu
dasarnya melibatkan pencampuran sampel mengandung asam uronic
dengan asam sulat pekat, pemanasan pada 1** > !, pendinginan dan
kemudian bereaksi dengan *,1+ karba"ol dalam etanol. setelah cukup
waktu untuk pengembangan warna, absorbansi dibaca pada (?( nm
2.2.#.1 Teoi eaksi $ m-%ydo&ydip'enyl (et'od
Sementara semua karbohidrat bereaksi asam pekat membentuk
senyawa berwarna,
asam uronic bereaksi dengan m %6ydro&ydiphenyl dalam asam kuat
lingkungan untuk membentuk kompleks berwarna pink. pengukuran
absorbansi baca di (;* nm meningkat secara linear dengan
konsentrasi asam uronic dari * sampai 1** @g 2 ml.
2.2.#.2 Posedu )peasi
Sebuah solusi sampel dicampur dengan asam sulat yang mengandung
tetraborat
dalam tabung reaksi dan ditempatkan dalam bak air mendidih selama
( menit. setelah
pendinginan cepat dalam air es,m%6ydro&ydiphenyl ditambahkan ke
masing%masing
sampel uji tabung dan vorte&ed untuk memastikan pencampuran yang
memadai. absorbansi untuk setiap sampel dibaca setelah
memungkinkan warna untuk mengembangkan selama ;* menit.
Sebuah sampel kosong (yang mengandung pelarut sampel) harus
disiapkan pada saat yang sama sebagai sampel.
2.2.#.! Kuanti"kasi
Suatu larutan standar asam uronic yang sesuai (yaitu, asam
galacturonic) adalah
digunakan untuk menyiapkan beberapa pengenceran dan ini
digunakan untuk mempersiapkan standar kurva. Sebuah gra5k
konsentrasi vs absorbansi dibangun dan sampel membaca absorbansi
diplot sepanjang kurva untuk mendapatkan nilai konsentrasi. 0urva
standar biasanya berkisar dari 1* hingga 1** 4g 2 ml.
2.2.#.# Peneapan
m%6ydro&ydiphenyl assay dapat mentolerir adanya asam nonuronic
gula, hingga A ;** @g 2 ml telah dilaporkan, tetapi konsentrasi yang
lebih tinggi dari
gula netral mungkin arti5sial meningkatkan pembacaan absorbansi.
Selain itu,
adanya protein dalam sampel dapat mengganggu absorbansi. $etode
ini sesuai untuk kuanti5kasi bahan pectic dalam buah%buahan dan
sayuran dan telah diadaptasi untuk digunakan dengan micro%plate.