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Université Saad Dahleb, Blida
 
Faculté des Sciences Agro-Vétérinaires
 
Département de Biologie
 
Compte rendu du TP Nº 03 demicrobiologie
Qu¶est qu¶un milieu de culture ?Les différents types de milieux de culture.Examen macroscopique.Les techniques d¶isolement.Année scolaire :2008 /2009
 
*
Pour un diagnostic bactérien, on prélève du patient un prélèvement a fin de trouver l¶agentcausal de la maladie, puis on fait un isolement des bactéries (sépare les bactéries du reste del¶échantillon) qu¶on souhaite traiter cet isolement exige l¶utilisation des milieux de culture.
Qu¶est qu¶un milieu de culture ?
C¶est un support pour les bactéries, qui contient des éléments nutritifs indispensables à lacroissance et la survie des bactéries. Les éléments nutritifs abandons dans les milieux sont :
 
D
es ions métalliques : phosphore, azote, soufre et des ions en traces : magnésium,cuivre«etc.
 
S
ource d¶énergie :le glucose comme source de carbone.
 
L¶eau.
 
T
ampon pH(règle le pH adéquat pour le développement de la bactérie,généralementl¶optimum de croissance des bactéries est de 7 ).
 
Parfois on trouve des facteurs de croissance tel que des vitamines , chocolat ,uf .Les ingrédients apportés au milieu de culture dépendent des exigences et besoins nutritifs dechaque espèce bactrienne ce qui explique les différents types de milieux de cultures.
 L
es différents types de milieu de culture selon leur composition :1.
 
 M 
ilieu synthétique :
Préparés exclusivement avec des produits chimiques purs. Le milieu synthétique decomposition bien définie, constitue le milieu de culture idéal. Ce type de milieu permetd'obtenir des résultats comparables et de déceler avec précision les modifications qu'il subit aucours du développement microbien. Il n'en est généralement pas de même avec les milieuxnon synthétiques qui sont constitués par des éléments complexes de composition variable. Lesmilieux synthétiques conviennent surtout aux moisissures (champignons microscopiques)mais fort peu aux bactéries.
2.
 
 M 
ilieu complexe
:
 
Milieu dont on ne connaît que partiellement la composition. Ces milieux de culture peuventcontenir des extraits de levure (cellule de levure déshydratée et lysées) qui fournissent unesource d'acide aminé de vitamine et d'azote, des extraits de malt apportant une source decarbone, des peptones (protéine animale, de poisson, de caséine de lait) source d'azoteorganique qui intéresse les individus hétérotrophes. (Ex. bouillon nutritif, bouillon au soja.).
 
Et on a plusieurs types :
 
 M 
ilieu simple ou général :
Les composants chimiques +gélose (sucre ajouté a un solidifient). Le milieu simple, c¶est unmilieu minimal +gélose.
 
 M 
ilieu enrichi :
C¶est un milieu simple +des facteurs de croissance (uf, vitamines, chocolat, extrait deviande«etc.).Ce milieu sert au développement de certaines bactéries auxotrophes quinécessitent des facteurs de croissance.
 
 M 
ilieu sélectif :
F
avorise le développement d¶une espèce bactérienne -permet de sélectionner un type bactérien parmi plusieurs- et inhibe les autres bactéries, ce milieu
contient des facteurs
 
inhibiteurs comme l¶antibiotique, poison ou des colorants comme la fuchsine. La gélose
macConky
est utilisée pour détecter E.coli et d¶autres bactéries apparentées. Les sels biliaires ou les colorants comme le
Crystal violet
et le
rouge neutre
favorise la croissancedes bactéries gram-négatifs et inhibe celle des bactéries gram-positifs.La gélose
Chapman
est un milieu sélectif a gram positif.
 
 M 
ilieu spécifique :
C¶est un milieu d¶identification de la bactérie, ce milieu donne l¶exactitude de la bactérie déjàisolée.
D
ifférentiation des colonies bactériennes (examen macroscopique) :
S
ur ces milieux de culture une cellule bactrienne nous donne des millions de descendantss¶accumulent sous une masse appelée colonie », on a deux types de colonies : une colonie
pur
qui contient la même espèce,et une colonie
mixe
ou
poly
 
microbienne
qui contient deuxou plusieurs types de bactéries.Après isolement et incubation on effectue un examen macroscopique qui constitue adifférentier les bactéries selon la taille, la couleur, la forme : lisse, irrégulière ou bien bombésou plate.
 EXAMEN 
 
 MACROSCOPI 
QU 
 E 
D
 ES 
 
C 
U 
 LT 
U 
 RES 
 
L'examen macroscopique des cultures est le premier examen effectué à partir del'isolement après incubation. L'aspect des colonies dépend du milieu utilisé de la durée et de latempérature de l'incubation.Il ne pourra être décrit convenablement qu'à partir de colonies bien isolées : lescolonies sont d'autant plus petites qu'elles sont rapprochées. La colonie peut apparaître à lasurface du milieu de culture pour les germes aérobies, ou être en profondeur pour les germesanaérobies
1. 
 A
spect de colonies en surface sur milieu solide
 
1.1.
 L
a taille
 
Elle peut être mesurée à l'aide d'une règle graduée pour les grandes colonies. Il est possibleaussi d'utiliser le microscope au grossissement le plus faible pour mesurer la taille des petitescolonies en utilisant de micromètres oculaires.
.
1.2.
 L
a forme
 
Allure de contours : lisse, dentelés, déchiquetés, irréguliers
 
R 
elief : surface bombée, demi-bombée, plate.
 
Centre : parfois surélève, parfois ombiliquée (en creux)
1.3.
 L' 
aspect de la surface
La surface d¶une colonie bactérienne peut être lisse, rugueux, renvoyer la lumière de façon àleur donner un reflet métallique ou un aspect irisé.
1.4.
 L
a consistance
Au moment du prélèvement il est possible d'apprécier si les colonies sont grasses, crémeuses(on obtient facilement des suspensions homogènes), sèches ou encore muqueuses (on obtientdifficilement des suspensions homogènes).
1.5.
 L
a couleur et/ou pigment 
Plusieurs colonies n¶ont pas une couleur bien définie (blanc, gris). Par contre, certaines bactéries produisent un pigment insoluble qui donnent un aspect bien caractéristique à la
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