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•Cinética enzimática
•Medición de la Actividad Enzimática (AE)
•Factores que afectan la AE
•Inhibición enzimática
•Regulación enzimática
•Problemas Pedro Coila
Cinética enzimática
Estudia la velocidad de las
reacciones enzimáticas y los
factores que la afectan.
La Velocidad o Actividad
Enzimática (AE) puede ser
determinado midiendo la
cantidad de S consumido
(o P formado) en una
unidad de tiempo bajo
condiciones adecuadas de
Tº y pH.
En la práctica es muy difícil determinar la cantidad de
enzima, ya que se encuentran en cantidades muy
pequeñas y por que la mayoría se encuentran
formando complejos. También pueden existir enzimas
que no estén catalizando.
Por eso es más fácil determinar la AE ya que es
directamente proporcional a su concentración.
Expresiones de Actividad Enzimática (AE)
La AE o velocidad de las enzimas puede ser expresado de
las siguientes formas:
Nomenclatura común Unidades Internacionales de AE
(UI o U).- Son los micromoles de S
transformado (o P formado) en un
minuto (μmol/min).
Nomenclatura SI Katal (kat).- Son los moles de S
transforma-do (o P formado) en un
segundo (mol/s). Se pueden usar
prefijos SI.
Problema: Cierta enzima cataliza a una velocidad inicial (vo) de
5,7 x 10-5 UI, exprese esta velocidad en katales y
microkatales.
Actividad molecular
ACTIVIDAD MOLECULAR = NUMERO DE RECAMBIO = CONSTANTE CATALITICA (Kcat)
Vmáx
de la enzima
Desnaturalización
Tº óptima
0 10 20 30 40 50 60 70
Temperatura (ºC)
A medida que aumenta la Tº
la AE también sube, pero
solo hasta cierto grado, más
allá de ese límite, la enzima
se desnaturaliza.
Vmáx
pH óptimo
4 5 6 7 8 9 10 11
pH
Cada enzima tiene
un pH óptimo, al
cual tiene máxima
actividad. Por
debajo y encima de
este pH la actividad
declina.
Bajo condiciones
Velocidad de reacción
saturantes de S,
150
la velocidad de
reacción, es
directamente
100
proporcional a la
[E].
50
0 10 20 30 40
0 10 20 30 40
Tiempo (min)
En los momentos iniciales, la
AE es directamente
proporcional al tiempo de
incubación, pero solo hasta
cierto límite.
VO α tiempo
0 1 2 3 4 5 6 7 8
S
+
80 E
↓
60
P
AE (UI)
40
20
0
0 2 4 6 8
Sustrato (μmol)
Inicialmente, la v aumenta proporcionalmente a la [S]
(cinética de primer orden), luego va disminuyendo
(cinètica de orden intermedio) hasta que la velocidad
se hace constante, así haya fuerte [S] (cinética de
orden cero).
Gráfica y ecuación matemática de la
hipérbola rectangular
Gráfica y ecuación enzimática de la
hipérbola rectangular Constante de
Michaelis-Menten
Curva de Michaelis-Menten
Ecuación de
Michaelis-Menten
Velocidad máxima (Vmáx)
Es la máxima velocidad de una reacción enzimática.
En este momento, todas las enzimas están
“trabajando” (no hay enzima disponible).
Constante de Michaelis-Menten (Km)
Funcionalmente, es la [S] al cual se alcanza el 50% de la Vmáx.
Es una medida de la afinidad de la enzima por un determinado S.
Todas las reacciones enzimáticas tienen su Km característico.
http://www.sbu.ac.uk/biology/enztech/determination.html
Ploteo de Lineweaver-Burk (1934)
También conocido como el ploteo del doble recíproco.
El método consiste en aplicar el recíproco (inverso) a la ecuación
de Michaelis-Menten (1/vo versus 1/[S]), obteniéndose una recta.
Ploteo del doble recíproco
Doble recíproco Ploteo directo
Vmax
1
vo vo
1/2
-1
Km 1
Vmax
1/S Km S
Ejemplo de cinética enzimática y ploteo de Lineweaver-Burk
1.0 2.0
Doble recíproco
Ploteo Directo
v 1/v 1.0
0.5 1.0
-3.8
0 0
0 1 2 -4 -2 0 2 4
[S]
Inhibición enzimática
Los inhibidores son sustancias (orgánicas o inorgánicas)
que al ser añadidos al medio donde está actuando una E
determinan su menor AE.
Modo de acción de los inhibidores
Los inhibidores se unen a la enzima lo que ocasiona la
pérdida parcial o total de la AE formando los complejos
EI o ESI
Aplicaciones
El estudio de los inhibidores es importante por que proporciona
información sobre:
El mecanismo de catálisis enzimática
La especificidad de la enzima
La naturaleza de los grupos funcionales del sitio activo
Aplicaciones del estudio de inhibidores:
I
E E I
S I
I
Compiten por S I
Inhibidor el sitio activo Diferente sitio
E + S→
←ES → E + P E + S→ ←ES → E + P E + S→
←ES → E + P
Ecuacíones y Descripciones
+ + + +
I I I I
↓↑ ↓↑ ↓ ↑ ↓↑
EI EI + S →EIS EIS
[I] sólo se une a [E] libre, [I] se une a [E] libre o al [I] sólo se une al complejo
y compite con el [S]; complejo [ES] ; aumentando [ES], aumentando la [S] se
incrementando la [S] se
la [S] no se revierte la inhib. favorece la inhibición.
revierte la Inhibición.
Inhibición enzimática (Ploteos)
Vmax’ Vmax’
I I I
Acido Acido
Precursor fólico tetrahidrofólico
Si la enzima posee:
-Un solo efector (+ ó -) = monovalente
-Dos o más efectores (+ ó -) cada uno con su
sitio = polivalente
Características de las enzimas
alostéricas
S
R Concertado
Sitio alostérico
[S]
R
(+) A
vo
T Heterotrópico
(+)
S S (+)
R Secuencial
X [S]
T
T = Tenso I
(inactivo) vo
T Heterotrópico
(-) X
(-) X (-)
T Concertado
[S]
2. Regulación covalente
Son enzimas que presentan 2 formas interconvertibles, con
diferente composición, lo que origina cambios
conformacionales en la molécula (estructura 3ria o 4ria).
OH P
Kinasa
(fosforilación)
Conformational
Protein Change
Fosfatasa
(defosforilación)
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