Nota: Los contenidos del siguiente RESUMEN tienen como función servir como GUÍA para los alumnos.

Los temas deben ser

completados con lo dicho en clase y con la Bibliografía recomendada por la cátedra.

Enzimas
Michaelianas

Proteínas con estructura globular terciaria. Poseen un sitio activo que es donde se introduce el sustrato y donde es
catalizada la reacción.
Las enzimas son específicas para los sustratos. Éste se une al sitio activo REVERSIBLMENTE a través de interacciones
de tipo intermolecular (débiles).

Características del Gráfico “Velocidad en función de la concentración de Sustrato”:

Éstos gráficos representan una situación en la cual hay una cantidad determinada de enzima y se va aumentando la
concentración de sustrato. Para cada concentración de sustrato, se mide la Velocidad de reacción.

Fíjense que en éste gráfico, la velocidad de reacción va aumentando

proporcionalmente a medida que aumenta la concentración de sustrato, y llega un
momento en el que la pendiente empieza a disminuir hasta hasta el punto en que la
velocidad se hace constante. Ése es el punto de saturación. Por más que se aumente
la concentración de sustrato, las enzimas no pueden actuar más rápido que su
velocidad máxima (todos los sitios activos están ocupados).
En éstos gráficos, se define también la Km, que es la concentración de sustrato que
corresponde a la mitad de la velocidad máxima, y es una medida de la afinidad de
la enzima por el sustrato. A mayor afinidad, menor Km (porque hace falta una
MENOR concentración de sustrato para alcanzar la mitad del punto de saturación
de la enzima).

Inhibidores

Hay dos tipos de inhibidores para las enzimas:

Irreversibles: Se unen de forma covalente a la enzima e inhiben la actividad enzimática PERMANENTEMENTE.

Reversibles: Se unen con uniones débiles, que se pueden romper (por eso es que son reversibles: el inhibidor se une, y
luego puede separarse).
Hay 2 tipos:

Competitivos: Se unen en el SITIO ACTIVO impidiendo la unión del sustrato. En

el gráfico se observa que aumenta la Km (o sea, es como si disminuyera la afinidad
de la enzima por el sustrato) dado que parte de los sitios activos están “ocupados”
por el inhibidor. Pero aún así, la velocidad máxima se mantiene constante (porque
si aumento mucho la concentración del sustrato, llega un punto en el que la
cantidad de inhibidor es muy pequeña con respecto a la cantidad de sustrato, y el
efecto se revierte).

No Competitivos: En éste caso, el inhibidor se une a un sitio diferente del sitio

activo, impidiendo que la enzima actúe (ya sea porque cambia la conformación de
la misma o porque altera de alguna manera su capacidad catalítica).
La afinidad de la enzima por el sustrato no cambia (Km constante) ya que éste
puede seguirse uniendo a la enzima. Lo que sí cambia es la velocidad máxima
(porque en todo momento, es como si hubiera una menor concentración de enzimas
actuando, ya que algunas de ellas están unidas al inhibidor). Ésta inhibición NO SE
REVIERTE por agregado de sustrato:
Alostéricas
Proteínas con estructura globular cuaternaria. Poseen más de una subunidad globular, cada una con un sitio activo (vale lo
mismo que para el sitio activo de las enzimas michaelianas) y un sitio alostérico (donde se introducen distintos
moduladores alostéricos cuya función es la de modificar la actividad de la enzima según las necesidades de la célula).

Características del Gráfico “Velocidad en función de la concentración de Sustrato”:

En el caso de las enzimas alostéricas, no se define Km. Si se define la velocidad

máxima, que es el punto de saturación de la enzima, donde la velocidad se mantiene
constante (todos los sitios activos ocupados y la enzima está trabajando a su máxima
velocidad).
Otra característica de las enzimas alostéricas es el efecto cooperativo: Éstas enzimas
poseen más de un sitio activo, y a medida que se van ocupando los sitios, la proteína
cambia su conformación haciendo que los otros sitios activos queden más expuestos y
sea más fácil para el siguiente sustrato unirse. (A medida que se van uniendo los
sustratos a los sitios activos, aumenta la afinidad de la enzima por el siguiente
sustrato).
Esto se puede observar en la curva de velocidad en función de la concentración de
sustrato, que tiene forma sigmoidea (forma de S): A bajas concentraciones de sustrato
la enzima no actúa tan bien como lo hace a altas concentraciones (compárenlo con el
gráfico se michaelianas, si los superponen se van a dar cuenta que a bajas [S] la
enzima alostérica actúa a menor velocidad que la michaeliana).

Moduladores:

LOS INHIBIDORES LOS VEMOS SOLO PARA ENZIMAS MICHAELIANAS. PARA ENZIMAS ALOSTÉRICAS LO
QUE VEMOS ES EL EFECTO DE MODULADORES ALOSTÉRICOS.
La diferencia es que un modulador alostérico es una sustancia que se encuentra normalmente en la célula y es una de las
estrategias utilizadas normalmente para regular la actividad de las enzimas. En cambio un inhibidos es una sustancia
exógena (que viene de afuera de la célula) y que inhibe el funcionamiento de las enzimas.

Las actividad de las enzimas Alostéricas puede ser REGULADA por la célula. Esto se logra por la unión de moduladores
alostéricos positivos (aumentan la actividad) o negativos (disminuyen la actividad) que se unen en los sitios alostéricos de
la enzima.
El gráfico cambiaría de la siguiente manera:

Fíjense que la velocidad máxima no varía. Lo que varía es la afinidad de la enzima

por el sustrato.
El modulador negativo (azul) disminuye la afinidad de la enzima por el sustrato de
manera que hace falta más cantidad de sustrato para alcanzar la misma velocidad
que se alcanzaba sin modulador (negro).
Lo contrario ocurre con el modulador positivo (rojo). A bajas concentraciones de
sustrato se alcanza mayor velocidad que sin el modulador.
[Los moduladores no alteran la forma de la curva y el efecto cooperativo se
mantiene].

Las enzimas alostéricas suelen encontrarse al principio de vías metabólicas (que son reacciones enzimáticas
“encadenadas” en las cuales el producto de una reacción es el sustrato de la siguiente reacción:
Hay dos mecanismos de regulación de la actividad:

Feed-Back (o inhibición por producto final):

Lo que ocurre es que cuando se acumula uno de los últimos productos de la vía metabólica (D), éste actúa como un
modulador negativo sobre la enzima alostérica 1 (E1), disminuyendo su velocidad. De ésta forma, cuando se acumula
“D”en la célula, éste actúa disminuyendo la velocidad de su propia síntesis.
Activación por Precursor:

En éste caso, el primer sustrato actúa como modulador positivo de la enzima 1 (E1). Entonces, cuando se acumula dicho
sustrato en la célula, se une al sitio alostérico de E1 aumentando su actividad (aumenta la velocidad en que A se consume
para formar B en la reacción catalizada por la enzima 1).

Efectos del pH, y de la temperatura

Los efectos del pH y de la temperatura sobre la actividad enzimática son válidos para ambos tipos de enzimas. (Los
gráficos de Velocidad en función de la temperatura o del pH están en la guía de Actividades).

Temperatura:
Se observa que la actividad aumenta a medida que aumenta la temperatura, porque la velocidad de la mayoría de las
reacciones químicas aumenta con la temperatura (porque aumenta el movimiento térmico de las moléculas y la
probabilidad de choque entre ellas para que se produzca la reacción).
En el caso de las reacciones enzimáticas, esto ocurre hasta que se llega a los 37 grados (esto es aproximado para las
enzimas que actúan a nivel fisiológico en animales de sangre caliente). Ésta es la temperatura óptima de la enzima (la
temperatura a la que actúa de manera óptima). A temperaturas mayores, la enzima, como cualquier proteína, comienza a
sufrir los efectos de la temperatura: se rompen las uniones débiles que mantienen las estructuras cuaternaria, terciaria y
secundaria (desnaturalización), perdiéndose por ende la actividad biológica de la proteína (en éste caso la actividad
biológica es la capacidad de catalizar reacciones químicas específicas).

pH:
Dada las características de las proteínas y de los aminoácidos, el pH puede o no afectar a la estructura de las mismas.
Las variaciones de pH pueden alterar las cargas positivas o negativas de los aminoácidos, alterando las interacciones entre
ellos que son responsables de la ESTRUCTURA GLOBULAR (terciaria o cuaternaria) que adopta la proteína. Si la
estructura globular se altera (desnaturalización) se pierde la actividad biológica de la enzima.

Estrategias para regular la actividad enzimática en las células:

♦ Moduladores alostéricos: Mecanismos de Feed-Back y Activación por Precursor mencionados arriba. Se usan
como estrategia para mantener la homeostasis en la célula, y poder derivar los sustratos a distintas vías
metabólicas según sean necesarios.
Recuerden el ejemplo que les dí en clase: teniendo en cuenta las vías esquematizadas arriba, si “A” es la glucosa
y “D” es el ATP, la vía metabólica esquematizada sería la respiración celular. Cuando en la célula se acumula
glucosa, esta activa la vía de la respiración porque es un modulador alostérico positivo de la E1 (entonces todas
las reacciones de la vía se aceleran, porque la actividad de la primera enzima es mayor). Pero cuando se acumula
mucho ATP, este inhibe a la E1, de manera tal que la vía de la respiración se “frene”. Entonces la glucosa puede
ser utilizada para otra cosa, por ejemplo, para sintetizar polisacáridos de reserva (Glucógeno o Almidón) a través
de otra vía metabólica.

♦ Modificaciones covalentes: Por medio de la unión COVALENTE de ciertos grupos (por ejemplo el grupo fosfato)
se puede activar o desactivar una enzima. Entonces, cuando la célula necesita que una enzima determinada actúe
la puede activar (ya sea adicionándole o quitándole el grupo fosfato, según la enzima) y viceversa.
Vale aclarar que, dichas modificaciones, dado que conllevan la formación o ruptura de enlaces covalentes, SON
REACCIONES QUÍMICAS QUE ESTÁN CATALIZADAS POR OTRAS ENZIMAS.

♦ Proteólisis: Muchas veces, las enzimas son sintetizadas en una célula pero tienen que cumplir su función en otro
lugar (ejemplo: enzimas pancreáticas son sintetizadas por células del páncreas pero actúan en el intestino).
Entonces, se sintetizan en una forma inactiva ZIMÓGENO. En los zimógenos, a la estructura primaria de la
proteína le “sobra” una porción. Cuando el zimógeno llega al lugar donde debe actuar, hay enzimas que “cortan”
ésa porción sobrante de la cadena polipeptídica y de ésta manera lo activan.

♦ Regulación de la expresión: El mecanismo a largo plazo para regular la actividad enzimática es la inducción o
represión de su síntesis. Esto se logra a nivel genético: Las proteínas son sintetizadas gracias a que el ADN
“copia” a ARN una porción de la información que lleva almacenada. Luego, el ARN “lleva” dicha información
desde el núcleo hasta el citoplasma, y ésa información se “traduce” y se sintetiza la proteína.
La “inducción” o la “represión” acelera o inhibe el proceso EN EL ADN, induciendo o reprimiendo el copiado de
la información.
En definitiva, lo que se está regulando es la cantidad de enzimas presentes en la célula (En los mecanismos
anteriormente mencionados, se regulaba la actividad de las enzimas que ya estaban presentes en la célula).