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disociacion de aminoacidos

disociacion de aminoacidos

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04/17/2014

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B. TITULACION DE LA ALANINA1. Disociación del grupo carboxilo:La curva de titulación de un aminoácido puede ser analizada de la misma maneradescrita para el ácido acético. Porejemplo considere a la alanina, la cual contiene ambos, un grupo carboxilo y ungrupo amino. A un pH bajo (ácido ), ambos deestos grupos son protonados (ver figura 1.9 en el libro ). A medida que el pH de lasolución se eleva el grupo COOH de laforma I puede disociarse donando un protón al medio. La liberación de un protónlleva a la formación de un grupocarboxilato, COO
-
. Ésta estructura es mostrada como forma II la cual es la formadipolar de la molécula. Ver figura en el libro2.9. (nota: esta forma es también llamada un zwitterion y esta forma es la forma dela alanina esto es que tiene una carga netade 0 ).2. Aplicación de la ecuación de Henderson-Hasselbalch:La constante de disociación de un grupo carboxilo es llamada K 
1
, no Ka, porque lamolécula contiene un segundo grupotitulable. La ecuación de Henderson-Hasselbalch puede ser usada para analizar ladisociación del grupo carboxilo de laalanina de igual manera como se describió para el ácido acético.K1= [H+] [II][I]donde I (ver figura 1.9 en el libro) es la forma totalmente protonada de la alanina, yII es la forma isoeléctrica de la alanina.Esta ecuación puede ser reorganizada a:pH = pK 
1
+ log [II][I]3. Disociación del grupo amino:El segundo grupo titulable de la alanina es el grupo amino ( -NH3 ) .Ver libro figura1.9. este en un ácido mucho másdébil que el grupo COOH y por tanto tiene una constante de disociación máspequeña (K 
2
). Nota: su pKa es, por tanto, másgrande. La liberación de un protón a partir de un grupo amino protonado de laforma II resulta en la forma totalmentedeprotonada de la alanina, la cual es la forma III. Ver figura 1.9 del libro.4. pKs de la alanina:Las disociaciones secuenciales de protones a partir de los grupos amino y carboxilode la alanina están resumidos en lafigura 1.9. Cada uno de los grupos titulables tiene un pKa que es numéricamenteigual al pH al cual exactamente la mitad delos protones han sido removidos de ese grupo. El pKa para el grupo más ácidoCOOH es el pK 
1
, el pKa para el gruposiguiente más ácido (NH3+) es el pK2.5. Curva de titulación de la alanina:Aplicando la ecuación de Henderson Hasselbalch a cada grupo ácido disociable, esposible calcular la curva de titulacióncompleta del ácido débil. La figura 1.10 (ver libro) muestra el cambio en el pH queocurre durante la adición de una base a laforma totalmente protonada de la alanina (I) para producir la forma completamentedeprotonada (III). Note lo siguiente:a. par buffer: el par COOH/COO
-
puede servir como un buffer en la región de pHcerca del pK1 y el par NH3
+
/NH2puede amortiguar en la región cerca del pK 
2
.b. Cuando el pH es igual al pK: cuando el pH es igual al pK 
1
(2.3) iguales cantidadesde las formas I y II de la alanina existenen la solución. Cuando el pH es igual al pK 
2
(9.1), iguales cantidades de las formas IIy III están presentes en la solución.c. Punto isoeléctrico: a pH neutro, la alanina existe predominantemente en la formadipolar II en la cual los grupos amino y
 
carboxilo están ionizados, pero la carga neta es cero. El punto isoeléctrico (pl) es elpH al cual un aminoácido eseléctricamente neutro, esto es, donde la suma de las cargas positivas iguala lasuma de las cargas negativas. Nota: para unaminoácido como la alanina el cual sólo tiene dos hidrógenos disociables (uno delgrupo carboxilo alfa y otro del grupoamino alfa), el pl es el promedio de pK1 y pK2: pl= [2.3 + 9.1 /2 =5.7. ver figura1.9. El pl es el punto medio entre pK1(2.3) y pK2 (9.1). este punto corresponde al pH donde la estructura II (carga neta decero ) predomina, y en dondeexisten también iguales cantidades de la forma I (carga neta de +1) y de la forma III(carga neta de –1).6. CARGA NETA DE LOS AMINOACIDOS EN PH NEUTRO:A pH fisiológico, todos los aminoácidos tienen un grupo cargado negativo COO
-
y ungrupo positivamente cargadoNH3
+
. Ellos son entonces iones bipolares (zwitterion ). Nota: las sustancias como losaminoácidos que pueden actuar tantocomo un ácido o como base son definidos como anfotéricos y son referidas comoanfolitos (electrolitos anfotéricos).C. TITULACION DE LAS HISTIDINALa histidina es un ejemplo de un aminoácido que contiene 3 grupos químicos loscuales pueden reversiblementeganar o perder un protón : el grupo carboxilo, el grupo imidazol de la cadenalateral, y el grupo alfa amino. Ver figura 1.11 enel libro. Nota: el grupo R o sustituyente de la histidina tiene un pK2 de 6.0 y puedeservir como un buffer a pH fisiológico.1. Curva de titulación de la histidina:La adición sostenida de una base a la histidina totalmente protonada resulta en laliberación secuencial de protones delgrupo carboxilo (pK1= 1.8), el grupo imidazol (pK2= 6.0), y el grupo amino(pK3=9.2). La curva de titulación es mostrada enla figura 1.2.2. Punto isoeléctrico de la histidina:El punto isoeléctrico (pl) para la histidina es calculado primero identificando laforma isoeléctrica ( la cual tiene una carganeta de cero) del aminoácido ( forma III de la figura 1.11) y luego promediando losvalores de los pKs más cercanos.Pl= (pK2 +pK3) = (6.0 + 9.2) = 7.62 2Este cálculo requiere que la forma isoeléctrica sea identificada. Esto depende enconocer el orden en el cual los protones sepierden a partir de un aminoácido en particular, porque este orden determina loscambios de las formas intermediarias. Losvalores de pKa para los grupos sustituyentes de algunos de los 20 aminoácidos máscomúnmente encontrados son mostradosen la figura 1.2 y 1.5.
PAtron electroforetico:
ELECTROFORESIS EN ACETATO DECELULOSA
 
Se usa para la separación y caracterización de proteínas y otrasmoléculas. El soporte consiste en tiras delgadas de acetato decelulosa, con propiedades de adsorción mínimas, por lo que se evita
 
la formación de colas y los solutos pueden ser separados en bandasbien definidas. Otras ventajas son:
 
1) La separación es muy rápida
 
2) Se pueden analizar cantidades de muestra pequeñas
 
3) Las tiras pueden hacerse transparentes4) La tira se puede disolver, recuperando los componentesseparados5) Presentan un fondo bajo cuando se separan compuestosradiactivos
 
Entre sus desventajas figuran que captan poca agua y son mássusceptibles a la evaporación que el papel. Son también mássusceptibles al flujo electro-endosmótico.
 
Las
proteínas de suero
se pueden separar mediante estatécnica. Sus puntos isoeléctricos están entre 4,9 (Albúmina) y 7,4(Gamma-globulinas). Al realizar la electroforesis con un tampón depH = 8,6, todas las proteínas del
suero
tendrán carga
negativa.
Laalbúmina, al tener el punto isoeléctrico más alejado del pH, tiene máscarga negativa y avanza más rápido, quedando más cerca del polopositivo que las gamma-globulinas, que migran muy poco por ser elpH próximo a su pI. Las restantes proteínas séricas quedan situadasentre estas dos.
 
En
suero
humano la composición
normal
es:
 
Albúmina ........... 54-62%
 
α
- globulinas ....... 9-15%
 
β
- globulinas ....... 8-13%
 
γ 
- globulinas ....... 14-19%
 
En el
suero
de rata la distribución de bandas es diferente,separándose sólo las
β
- y
γ 
-globulinas, la albúmina y una bandaproteica de mayor movilidad electroforética que la albúmina,denominada prealbúmina.
 
La disminución de la proteína total puede indicar:

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