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Capítulo 3. Las Curvas de Calibración

Capítulo 3. Las Curvas de Calibración

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Capítulo 3. Las curvas de calibración
por Celia E.Coto*Profesora Titular Consulta de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.UBAInvestigadora Superior del CONICET.
 
En el capítulo 1 nos hemos referido a la importancia del uso de un blanco ocontrol para darle validez al resultado de un experimento. Hemos explicadotambién que el resultado de una experiencia puede ser de tipo cualitativo ocuantitativo. En el segundo capítulo hemos visto que en ciertas situaciones esnecesario utilizar cantidades más pequeñas de una determinada sustancia ypara lograr preparar esas cantidades se hacen diluciones seriadas de unasolución original, una muestra o una solución de stock. En este capítuloelaboraremos una curva de calibración o curva patrón.
¿Qué se entiende por curva de calibración?
Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas deuna sustancia (por ejemplo la albúmina sérica bovina que vimos antes) que seutiliza para determinar la cantidad de esta sustancia (proteínas) presente enuna muestra incógnita.En muchas determinaciones se cumple una relación proporcional entre lamagnitud o
intensidad de color 
que da una reacción y la
cantidad delreactivo
que la provoca. Por ejemplo: si la presencia de 10 ug de proteínas enuna solución genera la aparición de un color azul pálido cuando es agregada auna mezcla reactiva, la presencia de 20 ug de proteína dará lugar a que lasolución se torne azul más oscuro y así sucesivamente.
 
 
 
Para realizar la experiencia debemos preparar unas diluciones seriadas dealbúmina sérica bovina como las que hicimos antes (será nuestro estándar opatrón) y dispondremos así de por lo menos 5 concentraciones, luegorealizaremos la reacción química correspondiente para desarrollar color ymediremos la intensidad de color de cada solución. Por ej., partiendo de unasolución madre de 1mg/ml, tendremos 6 tubos así:
 
 
La relación entre intensidad de color y concentración de la sustancia (unamedida de la cantidad de esa sustancia) es proporcional y así, si se grafica elvalor de intensidad de color medido con un aparato adecuado(espectrofotómetro o colorímetro) en función de las concentraciones crecientesde la sustancia se obtiene una recta. Es decir, a mayor cantidad de proteína,mayor cantidad de producto de reacción y por lo tanto, mayor intensidad decolor.
 
Curva de Calibración
Dado que se ha trabajado con datos reales, los gráficos que se obtienen no sontan ideales, pero esta situación no es un obstáculo ya que dentro de ciertosvalores es posible trazar la recta más probable que une una serie de puntos,con el uso de los programas de cálculo de las computadoras.

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