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EspectrofotometrÍa de AbsorciÓn Ultravioleta-Visible

EspectrofotometrÍa de AbsorciÓn Ultravioleta-Visible

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BIOQUIMICA I
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1
ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ULTRAVIOLETA-VISIBLE
-
Se basa en la absorción de radiación ultravioleta y visible por elanalito, originándose un estado activado que posteriormente eliminasu exceso de energía en forma de calor.
X + h
υ→
X
*
X + calor
Colorimetría.
Este término se refiere a la medida de la radiaciónabsorbida en la región visible del espectro electromagnético y seemplean aparatos que utilizan filtros.
 Espectrofotometría.
Se refiere a la medida de la radiación absorbidaen las regiones visible, ultravioleta e infrarroja, y además, se utilizanmonocromadores en lugar de filtros, asícomo sistemas de detecciónmás sensibles, como tubos fotomultiplicadores.
Leyes de la absorción de radiación
-Cuando un haz de radiación monocromática de una determinadalongitud de onda atraviesa una capa de disolución conteniendo unaespecie absorbente, la potencia (energía por unidad de tiempo yunidad de área) del haz
 ,
incidente
 P 
0
se atenúa, disminuyendo hasta
 P.
Se define la
transmitancia
, como la fracción de radiación incidenteque consigue atravesar la muestra.
P PT = ---; T = ---x
1
00P
o
P
o
-Un parámetro de mayor utilidad práctica es la
absorbancia,
 A
 ,
definida como
P
o
A = -log T = log -----P
 
2
-Normalmente, la concentración c de un analito absorbente estárelacionada linealmente con la absorbancia, de acuerdo con la ley deBeer:A =
ε
 b c
ε
es una constante que recibe el nombre de absortividad molar, esuna propiedad característica de la sustancia absorbente y depende dela longitud de onda.
 bes camino óptico en centímetros.
ces la concentración en moles/litro.
 
3
Desviaciones de la ley de Beer
-La proporcionalidad entre la absorbancia y la concentraciónúnicamente se cumple para disoluciones muy diluidas,observándose desviaciones más o menos acusadas al aumentar laconcentración
Figura 1. Desviaciones de la ley de Beer 
 
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