Clase introductoria al curso de

Biología Molecular

martes 13 de abril de 2010

 Línea del tiempo en Biología Molecular

Pre-1933 1933-1964 1964-1986 1986-Presente

martes 13 de abril de 2010

 Pre-1933
De la “Teoría de las Especies” de Darwin hasta la “Teoría
  1859
Charles Darwin publica el “Origen de las Especies por Medio de la Selección Natural” .
Aunque la teoría de Darwin no explica el mecanismo por el cual las características son
heredadas, su premisa clave es que la evolución ocurre a través de la selección de
características inherentes y transmitibles, en lugar de ser adquiridas entre los individuos de
una especie.

1843-1868.
Gregor Mendel, considerado como el padre de la genética, realizó una serie de experimentos
de entrecruzamiento de chícharos estableciendo dos leyes que se anticiparon a la genética
moderna. La ley de la Segregación señala que existen “factores” (genes), determinantes de
características como color de ojos, o altura que se encuentran en pares, los cuales se
separan cuando las células germinales se reproducen por meiosis. Como resultado, cada
descendiente adquiere una forma, o alelo, de cada progenitor, lo que explica porque los
descendientes comparten características de cada padre. La Ley de Distribución
Independiente, propone que el par de alelos se separan de forma independiente durante la
meiosis. El trabajo de Mendel fue “ignorado” por 30 años.

martes 13 de abril de 2010

 1902
Walter Sutton crea el término de "gen" para describir a “factores” lozalizados en los
cromosomas : Observó el movimiento de los cromosomas durante la meiosis y desarrolló la
Teoría cromosomal de la herencia.  

1905-1908
William Bateson y Reginal Crudell Punnett demostraron la función de algunos genes
modificando la función de otros genes: se demostró por primera vez la regulación genética.

1910
Thomas Hunt Morgan fue el primero en reconocer que los genes se encuentran en los
cromosomas : la base de la genética moderna. Demostró también la existencia de genes
ligados al sexo .

1911
Alfred Sturtevant, mapeo la localización de varios genes de la mosca de la fruta,
estableciendo el primer mapa genético.

martes 13 de abril de 2010

 1933-1964
De la invención de la electroforesis a la elucidación del código
genético

1933
Desarrollo de una nueva técnica: electroforesis, por Arne Tiselius para separar proteínas en
solución.

1937
Frederick Charles Bawden descubrió el virus del mosaico del tabaco (retrovirus)

1944
Barbara McClintock reporteó la presencia de elementos transponibles "jumping genes"

1946
Edward Tatum y Joshua Lederberg descubrieron que las bacterias pueden intercambiar
material genético directamente a través de la conjugación. Max Delbruck y Alfred Day
Hershey descubrieron una combinación de material genético de virus: recombinación
genética.

martes 13 de abril de 2010

 1952
Rosalind Franklin y Maurice Wilkins realizaron estudios de cristalografía de rayos X del
DNA, proveyendo crucial que permitió la posterior elucidación de su estructura.

1953
James Watson y Francis Crick propusieron el modelo de doble hélice complementaria y
antiparalela del DNA.

1955
Frederick Sanger anunció la primera secuencia completa de una proteína: insulina bóvina y
Arthur Kornberg descubrió y aisló DNA polimerasa de E. coli .

1956
Francis Crick y George Gamov propusieron el “Dogma Central" para explicar la síntesis de
proteínas a partir del DNA: La secuencia de DNA codifica la secuencia de aminoácidos y la
información genética fluye en la dirección de DNA-RNAm –proteínas.

1959
Francois Jacob y Jacques Monod descubrieron el mecanismo de control de la regulación

martes 13 de abril de 2010

 De la primera publicación sobre Arabidopsis hasta la
introducción de la similitud de secuencias

1964
Aparece la primera publicación de Arabidopsis , the Arabidopsis Information Service.

1967
Mary Weiss y Howard Green desarrollan una técnica para combinar células humanas y céluas
de ratón: hibridación celular somática. Aparecen los primeros árboles evolutivos de
proteínas obtenidos por WM Fitch y E Margoliash.

1970
Howard Temin y David Baltimore aislan de forma independiente la enzima trancriptasa
reversa: síntesis de DNA a partir de RNA. Torbojorn Caspersson y Lore Zech descubrieron
técnicas para teñir cromosomas de mamíferos que revelaron su bandeo

1972
Paul Berg uso una enzima de restricción y una ligasa para cortar y ligar DNA y formar
así una molécula circular híbrida. Primer experimento exitoso de clonación molecular.

martes 13 de abril de 2010

   1974
Allan Maxam, Walter Gilbert (Harvard) y Frederick Sanger (U.K. Medical Research Council)
desarrollan de forma independiente diferentes técnicas de secuenciación de DNA.

1975
Georges Kohler y Cesar Milstein fusionaron células linfocitos B productores de anticuerpos
con cpeluas tumorales "immortales" para producir los primeros anticuerpos monoclonales.
Edwin Southern publicó los detallles experimentales de la técnica de Southern Blot para
identificar fragmentos de DNA

1977
Secuenciación del genoma completo del Bacteriofago FX-174 (5368 pb).   Richard Roberts y
Phil Sharp demostraron que los genes eucariontes poseen interrupciones llamadas intrones.

1978
Genentech produce insulina humana usando la tecnología del DNA recombinante en E. coli.
David Botstein descubrió que el uso de las enzimas de restricción produce fragmentos
dierentes de un individuo a otr: RFLP: restriction fragment length polymorphisms.

martes 13 de abril de 2010

 1981
Gordon y Ruddle (Ohio University) obtienen el primer ratón transgénico por inserción de
genes de otro animal por la micro-inyección de DNA. Secuenciación del DNA mitocondrial
humano (16569 pb)

1982
Secuenciación del genoma del Fago Lambda (48,502 pb)

1983
Creación de la primera planta genética modificada: tabaco resistente a antibiótico.

1984
Alec Jeffreys desarollan una técnica de tipificación de DNA “fingerprinting“. Chiron Corp
determó la secuencia completa de del genoma del HIV-1

martes 13 de abril de 2010

 Del secuenciador de fluorescencia a ala presentación del genoma
humano

1986
Applied Biosystems introduce el primer secueciador automático de fluorescencia. La
Environmental Protection Agency (EPA, USA) aprueba la liberación de plantas de tabaco
resistentes anherbicidas.

1987
Desarrollo de "Yeast artificial chromosomes", YACs, vectores de expresión de fragmentos
de gran tamaño, por David Burke.

1988
Se funda el National Centre for Biotechnology Information (NCBI) en la National Institutes
of Health/National Library of Medicine. Se introduce la red EMBnet para distribución d
ebases de datos. Se introduce el algoritmo Clustal multiple alignment (Higgins).

1990
Inicia el proyecto de secuenciación del genoma humano. Costo estimado de USD$13 billion

martes 13 de abril de 2010

 1991
EST: expressed sequence tag sequencing, descrito por Craig Venter y colaboradores: un
método para identificar genes activoos.

1992
The Institute for Genome Research (TIGR), forma asociaciones para explotar
comercialemente la secuenciación de genomas para identificación de genes y descubrimiento
de compuestos de interés biológico (drugs). Mel Simon introduce el uso de BACs con fines
de clonación.

1993
Se crea el Sanger Centre, un centro de investigación genómica Hinxton, Reino Unido. Se
establece el EMBL, European Bioinformatics Institute, un centro se investigación y servicio
bioinformático establecido en Hinxton.

1994
El tomate FlavrSavr es el primer alimento genéticamente modificado aprobado para su

martes 13 de abril de 2010

 1996
Secuenciación completa del genoma de levadura y de E. coli. Arranca la Arabidopsis Genome
Initiative. Patrick Brown de Stanford University presenta el 'gene chip' que contiene 6116
diferentes secuencias de genes del genoma de levadura.  Ian Wilmut de Scotland's Roslin
Institute presentan a "Dolly", una oveja clonada de una célula de glándula mamaría adulta

1998
Se secuencia el genoma completo de Caenerhabditis elegans, un nematodo de suelo (97Mb).

1999
Secuenciación del genoma completo de Drosophila melanogaster (mosca de la fruta) (175
Mb).

2000
• Se completa la secuencia del genoma de Arabidopsis thaliana (157 Mb). Se termina el
borrador del genoma (3200 Mb).

2002
Presentation del genoma humano por Celera Genomics y los grupos de laboratorios

martes 13 de abril de 2010

 Aisló el DNA de células blanca:
-Colectó células blancas a partir de pus.
-Lisis por medio de una base débil
-Nombró nucleína a la sustancia extraída
(mezcla de proteínas y DNA)
- Rica en P

martes 13 de abril de 2010

 Extracción y purificación de ADN

• Lisis celular
• Extracción de DNA
• Precipitación de DNA

martes 13 de abril de 2010

 Extracción con fenol cloroformo

• Permite la eliminación de proteínas por desnaturalización

• Uso de fenol o fenol cloroformo
• Fenol equilibrado con un buffer alcalino (pH 8.0)
• El uso de fenol ácido favorece la extracción de ARN ya que el ADN se
particiona en la fase orgánica
martes 13 de abril de 2010
 Precipitación del ADN

• Permite la concentración de ADN/ARN por precipitación

• Precipitación con isopropanol o etanol en presencia de sales (Na+, K+,
NH4+)
• Co-precipitación de sales  lavar con etanol 70%

martes 13 de abril de 2010

 Desnaturalización alcalina

ADN cromosomal

plásmido

• Utilizado para separar plásmidos de ADN cromosomal

• Desnaturalización del ADN cromosomal lineal en pH alcalino
• Un cambio a pH ácido permite la renaturalización del plásmido, pero no
del cromosomal (agregación en una matriz insoluble) .

martes 13 de abril de 2010

martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
 Dogma Central de la Biología Molecular

martes 13 de abril de 2010

martes 13 de abril de 2010
 Regulación del operón LAC en E. coli. Si no hay lactosa el represor está en su forma activa, y los genes
estructurales no se transcribe, con lo que la célula no tendrá los enzimas para metabolizarla.

Operón LAC

Regulador
Operador Gen x Gen y Gen a

ARNm

Si no hay lactosa los

Genes no se transcriben

Represor activo

martes 13 de abril de 2010

 Regulación del operón LAC en E. coli. Si hay lactosa, esta se une al represor y lo inactiva. El operador, al
estar libre, desencadena la transcripción de los genes estructurales, con lo que se sintetizarán las enzimas
necesarias para metabolizar la lactosa. Cuando haya desaparecido
Operón LACla lactosa el represor volverá a su estado
activo y dejarán de transcribirse los genes x, y y a.

Operón LAC

Regulador
Operador Gen x Gen y Gen a

ARNm

Transcripción

Represor
Traducción

Represor
inactivo

Lactosa
Enzimas para 
metabolizar la lactosa

martes 13 de abril de 2010

martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
 Traducción

martes 13 de abril de 2010

martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
 Generación de fragmentos de restricción

martes 13 de abril de 2010

 Generación de fragmentos de restricción por EcoRI

martes 13 de abril de 2010

martes 13 de abril de 2010
 Inserto Inserto

Ligasa

Vector Vector

martes 13 de abril de 2010

 Como clonar un gen

martes 13 de abril de 2010

 Clonación de un producto de PCR

Uso de
vectores
TOPO TA
cloning
Introducción de sitios TOPO Blunt
de restricción en el (Invitrogen)
primer
martes 13 de abril de 2010
 Relación estructura-función y continuidad
celular en E. coli K12 (www.ecocyc.org)

martes 13 de abril de 2010

 Análisis del genoma de Micobacterium genitalium:
• Los micoplasmas son parásitos obligados que viven en ambientes
poco cambiantes y requieren muy pocas capacidades adaptativas.

• M. genitalium, es un patógeno urogenital de humanos. Es la

manifestación más extrema de parsimonia genómica: posee solo
482 genes codificantes de proteínas y el tamaño de genoma más
pequeño de cualquier organismo de vida libre capaz de ser
cultivado:

– Identificación de 382 de los 482 genes que codifican

proteínas como esenciales.
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010
martes 13 de abril de 2010