UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

“AISLAMIENTO, SELECCIÓN, IDENTIFICACIÓN Y

PRESERVACIÓN DE CEPAS QUERATINOLITICAS PARA LA
DEGRADACIÓN DE PLUMAS DE POLLO”

INTEGRANTES:

- BUSTIILLOS MA. BELÉN

- CARTUCHE DIANA
- ESPINOSA CAROLINA
- ESTRELLA MIGUEL
- FEIJOÓ TATIANA
- PORRAS DIEGO

NOVENO SEMESTRE ALIMENTOS

2009 - 2010
 INDICE

1. TEMA.......................................................................................................................................... 3
2. INTRODUCCIÓN ....................................................................................................................... 3
3. OBJETIVOS ................................................................................................................................ 4
3.1 OBJETIVO GENERAL ......................................................................................................... 4
3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS.................................................................................................. 4
4. MARCO TEORICO ..................................................................................................................... 4
4.1 Plumas de Pollo ...................................................................................................................... 4
4.1.1 Características ................................................................................................................. 4
4.1.2 Usos ................................................................................................................................ 4
4.2 Microorganismos.................................................................................................................... 5
4.2.1 Degradadores Queratinolíticos ......................................................................................... 5
4.2.2 Características Microbiológicas ....................................................................................... 5
4.2.3 Metabolismo de las Bacterias Queratinolíticas ................................................................. 5
4.2.4 Pares Oxido – Reducción ................................................................................................. 5
4.2.5 Reacción de Degradación de la Queratina ........................................................................ 6
4.2.6. Diagrama de Obtención de Harina de Plumas sin Aplicaciones Biotecnológicas ............. 6
4.2.7. Diagrama de Obtención de Harina de Plumas con Aplicaciones Biotecnológicas ............ 7
5. MARCO METODOLOGICO ...................................................................................................... 8
5.1 METODOS GENERALES DE ANALISIS ............................................................................ 8
5.1.1 Muestreo ......................................................................................................................... 8
5.2 METODOS ESPECIFICOS DE ANALISIS ......................................................................... 8
5.2.1 Diseño del Medio de Cultivo para Aislamiento y Selección de Cepas Queratinolíticas ..... 8
5.2.3 Aislamiento y Enriquecimiento de Cepas Degradadoras de Plumas.................................. 8
5.2.4 Selección de Cepas Queratinoliticas................................................................................. 8
5.2.4.1 Criterios de Selección ................................................................................................... 9
5.2.5 Producción de Biomasa ................................................................................................... 9
5.2.6 Preservación de los Microorganismos .............................................................................. 9
6. RESULTADOS ......................................................................................................................... 10
6.1 Tabla de Características de las Cepas Degradadoras de Queratina......................................... 10
6.2 Tabla de Variación de pH de las Cepas Degradadoras de Queratina ...................................... 11
6.3 Tabla de Variación de Temperatura de las Cepas Degradadoras de Queratina ....................... 11
6.4 Tabla de Variación de Concentración de Sustrato de las Cepas Degradadoras de Queratina .. 12
6.5 Gráfica de la Eficiencia de Degradación Queratinolítica con respecto a los Criterios de
Selección.................................................................................................................................... 12
6.6 Tabla de Resultados de las Pruebas Bioquímicas realizadas a la Cepa Seleccionada ............. 12
6.7 Curva de Crecimiento para el Bacillus spp. (Teórica) ........................................................... 13
7. DISCUSIONES ......................................................................................................................... 13
7.1 Discusión sobre los Resultados ............................................................................................. 13
7.2 Discusión sobre la Industrialización del Bioproceso ............................................................ 14
7.3 Discusión sobre las Modificaciones de Anteriores Investigaciones ....................................... 14
8. CONCLUSIONES ..................................................................................................................... 14
9. RECOMENDACIONES ............................................................................................................ 15
10. ANEXOS ................................................................................................................................. 16
11. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...................................................................................... 19
1. TEMA

“AISLAMIENTO, SELECCIÓN, IDENTIFICACIÓN Y PRESERVAC IÓN DE CEPAS

QUERATINOLITICAS PARA LA DEGRADA CION DE PLUMAS DE POLLO”

2. INTRODUCCIÓN

Es normal que en la mayoría de plantas avícolas, los subproductos obtenidos del procesamiento de
carne no son debidamente aprovechados, constituyendo un alto porcentaje de desechos que
producen daños al medio ambiente debido al aumento de la carga microbiana presente en los suelos,
constituyendo una fuente potencial de enfermedades que afectan tanto a los animales de granja como
a los humanos obreros y consumidores.

Generalmente las plumas, uno de estos subproductos, son destinadas a la elaboración de harinas
utilizadas como suplemento alimenticio para aves y otros animales de abasto. Este producto es
obtenido mediante la combinación de tratamientos térmicos (cocción a altas presiones) con
tratamientos químicos (ácidos o alcalinos); procesos que no solo impiden la fragmentación de los
enlaces disulfuro presentes en la queratina de la pluma, convirtiéndola en una proteína muy
resistente que dificulta la degradación enzimática por parte de las aves, sino que también
disminuyen el valor proteico de la harina a un 45% por la destrucción de algunos aminoácidos.

La producción nacional de aves de corral es de 19,595.058, de los cuales un 44% corresponde a la

producción de pollo. El rendimiento de carne obtenido por el procesamiento de esta ave es de
aproximadamente 75 %, lo que indica que el 25% restante pertenece a desperdicios o subproductos,
en donde las plumas constituyen la mayor parte. (5)

Dadas las tendencias actuales dirigidas hacia la búsqueda de procesos biotecnológicos aplicables al
tratamiento de los residuos agroindustriales y a la existencia de un alto potencial microbiano en la
naturaleza capaz de utilizar una amplia variedad de sustratos orgánicos, se sostiene que la
producción de harina de plumas puede ser llevada a cabo por medio de métodos más meticulosos a
través de tratamientos fermentativos con microorganismos queratinolíticos capaces de degradar la
queratina presente en la pluma, mejorando así la digestibilidad de este producto y la calidad
nutricional en un 67% debido a su enriquecimiento con proteína microbiana.

Aproximadamente, el total de plumas procesadas en el mundo es de 50,000 Ton/año, en donde Perú

es el principal exportador para Sudamérica, siendo uno de sus principales compradores el Ecuador.
La venta de 1Ton de harina de plumas cuesta aproximadamente 320 dólares, sin embargo,
comparando con las harinas que actualmente se comercializan en el mercado existe una marcada
diferencia en cuanto al costo; teniendo la harina de soya un costo de 450 dólares/Ton y la harina de
pescado 900 dólares/Ton. (14)

Por estas razones se desea conseguir una harina de plumas de alta calidad proteica y que a la vez
posea bajo costo, capaz de competir a nivel industrial con los diferentes tipos de harinas ya
mencionadas.
3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

· Aislar, seleccionar, identificar y preservar cepas queratinolíticas para la degradación de

plumas de pollo.

3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

· Obtener muestras de plumas blancas de pollo y muestras de suelo de los galpones avícolas.
· Seleccionar el medio de cultivo más adecuado para el crecimiento óptimo de los
microorganismos degradadores de queratina a partir de plumas de pollo.
· Aislar las cepas queratinoliticas utilizando el medio de cultivo adecuado.
· Seleccionar la cepa con mayor capacidad de degradación queratinolítica.
· Realizar pruebas bioquímicas para identificar género y especie de la cepa con mayor
velocidad de transformación.
· Realizar la medición del crecimiento de biomasa, y determinar los parámetros cinéticos.
· Realizar las gráficas de ln de biomasa (ln X), biomasa (X), velocidad específica (µ) y
velocidad instantánea (rx), para la cepa seleccionada en el medio seleccionado.
· Preservar las cepas puras mediante la técnica de crioconservación.

4. MARCO TEORICO

4.1 Plumas de Pollo

4.1.1 Características
Las plumas son estructuras queratinosas de la piel de la aves. Son fundamentales en el vuelo aviar,
pues forman la superficie sustentadora del ala. El conjunto de todas las plumas de un ave recibe el
nombre de plumaje, y forma una capa densa, aislante, que protege al animal frente al agua y el frío.

COMPONENTES %
Materia Seca 88.5
Proteína Cruda 54,5
Grasa 26
Fibra Cruda 1,0
Cenizas 4,5
Calcio 1,0
Fósforo 0,7

4.1.2 Usos

Las plumas pueden ser procesadas y utilizadas en decoración, acolchado y adornado, haciendo uso
de sus características de retención de calor y peso ligero. Pueden se tratadas en las manufactureras
de chaquetas, bolsas de dormir, colchas, almohadas, colchones, etc. Además se las emplea como
harina de plumas (HP) que sustituye a la harina de pescado en alimentos acuícolas. (12)
4.2 Microorganismos

4.2.1 Degradadores Queratinolíticos

BACTERIAS HONGOS
Bacillus spp Rhizopus oryzae
Bacillus licheniformes Arthroderma
Kocuria rosea Ctenomyces
Streptomyces fradiae Chrysosporium
Aphanoascus
Sporothrix

Los microorganismos citados son aquellos que presentan la mayor capacidad de degradación de
queratina. Sin embargo el grupo de las bacterias presentan una velocidad de transformación más alta
en comparación con los hongos.

Estudios realizados anteriormente demuestran que la cepas de Bacillus spp. degradan con mayor
eficiencia el sustrato queratina en comparación con el resto de bacterias ya indicadas.

4.2.2 Características Microbiológicas

Nivel de Bioseguridad 1
Bacterias / Firmicutes / Bacilos / Bacillales / Bacillaceae /
Taxonomía
Bacillus spp.
Tipo de Cepa Degradador de Queratina
Tipo de Enzima Queratinasa
Condiciones Aeróbicas Aerobio Estricto o Anaerobio Facultativo
Forma Bastón
Pared Celular Tinción Gram (+)
Movilidad Positiva - Flagelación perítrica
Esporulación Positiva
Temperatura: 4 – 55ºC Óptima: 50ºC
Condiciones de Vida
pH óptimo: 4,3 – 9,3 Óptimo: 7-7,5
Categoría Nutricional Quimioautótrofo
Fuente C, N, S, y Queratina
Energía
(6)

4.2.3 Metabolismo de las Bacterias Queratinolíticas

El proceso de Degradación de la Queratina se basa en el proceso de Sulfitólisis el cual provoca la

ruptura del enlace disulfuro presente en la cisteína, dando lugar al ácido cisteinsulfónico y a otro de
cisteina. A pH ácido puede tener lugar la reformación de un nuevo enlace disulfuro.

4.2.4 Pares Oxido – Reducción

-
Donador : NAD + / NADH ® E0 (- 0 .32 ) 2 e
-
Aceptor : NO3- / NO2- ® E0 (+ 0.42 ) 2 e
4.2.5 Reacción de Degradación de la Queratina

3C 6 H 8 O4 N 2 S 2 + 3O2 ® 2C 6 H 8 O7 + 6CO2 + 6 NO3 + 6 SO4 + 4 H 2 O

4.2.6. Diagrama de Obtención de Harina de Plumas sin Aplicaciones Biotecnológicas

INICIO

Lavado de plumas

Desecación al ambiente

Cocción con vapor húmedo

Cocción en seco Presión: 2-3 atm

Tiempo 1-2horas

Hidrólisis Acida HCl

Enfriamiento

Desecación

Trituración

Control de calidad

FIN
(13)
4.2.7. Diagrama de Obtención de Harina de Plumas con Aplicaciones Biotecnológicas

INICIO

Lavado de plumas

CONDICIONES DEL Desecación al ambiente

BIORREACTOR
-Aerobiosis
-pH: 7.5-8 Alimentación de sustrato
Degradación cada 12 horas/58 horas
-Medio de cultivo:
Medio Minimal con
20g/l de plumas. Temperatura 150ºC
-Microorganismo: Secado por Aspersión Tiempo 1-3 seg
Bacillus spp.
-Temperatura 35-37ºC
-Tiempo 26 horas Secado en estufa Temperatura: 60ºC
Tiempo: 24 horas

Molienda

Control de calidad

FIN
5. MARCO METODOLOGICO

5.1 METODOS GENERALES DE ANALISIS

5.1.1 Muestreo

El muestreo es no probabilístico intencionado; es decir que las plumas y suelo serán recogidos
de distintas plantas avícolas. Los criterios para obtener la muestra fueron:

} Las plumas seleccionadas debían presentar características similares (blancas, tamaño).

} Lugares: Las muestras se tomaron de tres avícolas ubicadas en la Provincia de Pichincha.
} El suelo tuvo que ser tomado de los mismos galpones de donde se tomaron las plumas.

5.2 METODOS ESPECIFICOS DE ANALISIS

5.2.1 Diseño del Medio de Cultivo para Aislamiento y Selección de Cepas Queratinolíticas

FUENTE COMPONENTE CANTIDAD (g)/L agua

Carbono y Energía Queratina

20
Nitrógeno y Azufre (Pluma de Pollo)

K2HPO4 1
MgSO4.7H2O 200mg
Nutrientes Inorgánicos
FeSO4.7H2O 10mg
(base mineral)
CaCl2 10mg
MnSO4.4H2O 20mg
Elementos Traza Mn, Mo, Cu, Co, Zn 0.02 – 0.5 mg/cada uno
(2)

5.2.3 Aislamiento y Enriquecimiento de Cepas Degradadoras de Plumas

Se toman muestras de suelo de diferentes áreas de los galpones de cría de pollos de engorde y se
inoculan en tubos de ensayo que contienen caldo nutritivo como medio de transporte. Después de 24
horas de incubación, se someten a un proceso de pasteurización a 80°C/15min a fin de seleccionar
los microorganismos esporulados.

Para el enriquecimiento de los microorganismos queratinolíticos y los ensayos cinéticos, se utiliza el

medio minimal más 20 g/l plumas esteriles. La presentación de las plumas varía dependiendo del
tipo de ensayo a ser realizado (polvo o troceadas con tijeras).

5.2.4 Selección de Cepas Queratinoliticas

Se realizan aislamientos en Agar Nutritivo y se seleccionan colonias morfológicamente diferentes.

Cada una de ellas se inoculará en tubos que contienen el medio diseñado fresco aplicados los
criterios de selección según los parámetros de determinación para evaluar su capacidad
queratinolítica.
5.2.4.1 Criterios de Selección

5.2.4.1.1 pH

El proceso de degradación de proteínas genera productos del metabolismo como gas amoniaco, el
cual eleva el pH desde 7 hasta 9 aproximadamente. Para la determinación de este suceso, se utilizó
una tira de papel indicador con el fin de comprobar la basicidad generada.
Las bacterias degradadoras de queratina crecen a un pH comprendido entre 4.3 – 9.3. Con motivo de
determinar el pH óptimo al que la bacteria tiene una mayor velocidad de crecimiento, se sometió a
los microorganismos a pH de 7.5, 8 y 9.
Cabe mencionar que el medio diseñado presenta un pH de 8 y para lograr variaciones de 7.5 y 9 se
utilizó Acido Nítrico al 5% e Hidróxido de Sodio al 10% respectivamente.

5.2.4.1.2 Temperatura

El bioproceso en mención emplea altas temperaturas con el fin de lograr la degradación completa de
la queratina de la pluma. Por otro lado, las bacterias degradadoras se desarrollan a una temperatura
comprendida entre 4 y 55ºC. Es por esto que se emplearon valores de 30, 35 y 37ºC, para así
establecer la temperatura a la que las cepas son capaces de resistir y generar altas velocidades de
crecimiento.

5.2.4.1.3 Concentración de Nutrientes

El sustrato sujeto a degradación tiene un porcentaje de 54.5 en la pluma de pollo, lo que corresponde
a una buena cantidad con respecto a fuente de carbono, nitrógeno y energía para las cepas
degradadoras. Es por esto que se pretendió variar el contenido de nutrientes, de 45%, 54% y 65%,
para determinar si se presenta represión frente a diferentes concentraciones de sustrato.

5.2.5 Producción de Biomasa

5.2.5.1 Propagación y Cultivo de las cepas Queratinoliticas

Inocular un medio precultivo en fiolas Erlenmeyer con 30ml de medio minimal con plumas (20g/L)
e incubar a 37°C/48h en el shaker orbital, con una velocidad de agitación de 150 rpm.
Para los ensayos cinéticos, los cultivos se realizaran durante 48h con una concentración de plumas
de 20g/L y una agitación de 150 rpm, que serán las condiciones óptimas para lograr una mejor
homogeneidad y baja viscosidad del medio.

5.2.5.2 Determinación de la Medida de Biomasa Microbiana

El contenido de un cultivo en Erlenmeyer con medio minimal con plumas, se filtra a través de un
micropore. El sobrenadante obtenido se descarta y el sedimento celular se lleva ala estufa a 115ºC
20 min aproximadamente, posteriormente se coloca en el desecador y finalmente se pesa.
Realizar esta medición hasta obtener peso constante.

5.2.6 Preservación de los Microorganismos

La conservación de las cepas aisladas se realiza a 37°C en estrías (cuñas) de medio sólido
previamente diseñado para cepas con actividad queratinolítica y suplementado con 20 g/L de harina
de plumas, previamente inoculadas e incubadas a 37°C. Añadir 10% de glicerol y mantener a -80ºC
6. RESULTADOS

6.1 Tabla de Características de las Cepas Degradadoras de Queratina

CÓDIGO DE LA CEPA FORM A COLOR

C1 Irregular Blanco
C2 Redonda grande Amarillo - Anaranjado
C3 Redonda pequeña Blanco
C4 Redonda grande Blanco
C5 Redonda grande Blanco
C6 Irregular Blanco
C7 Redonda grande Blanco
C8 Redonda pequeña Crema
C9 Redonda pequeña Blanco
C10 Redonda grande Blanco
C11 Redonda Pequeña Crema
C12 Redonda pequeña Blanco
C13 Irregular Crema
C14 Redonda pequeña Blanco
C15 Redonda pequeña Crema
C16 Ovalada Blanco
C17 Redonda grande Blanco
C18 Redonda pequeña Crema
C19 Redonda pequeña Crema
C20 Redonda grande Blanco
C21 Redonda pequeña Blanco
C22 Ovalada Blanco
C23 Redonda grande Crema
6.2 Tabla de Variación de pH de las Cepas Degradadoras de Queratina

pH
CÓDIGO DE LA CEPA
7,5 8,0 9,0

C1 +/- + +
C2 +/- + +
C3 - - +/-
C4 - +/- +/-
C5 - +/- +/-
C6 + + +/-
C7 + + +
C8 +/- + +
C9 + +/- +/-
C10 + +/- +/-
C11 - +/- +/-
C12 - +/- +/-
C13 + + +
C14 - +/- +/-
C15 + +/- +/-
C16 - +/- +/-
C17 - +/- +/-
C18 + +/- +/-
C19 - +/- +/-
C20 - +/- +/-
C21 + + +/-
C22 - +/- +/-
C23 +/- +/- +/-

6.3 Tabla de Variación de Temperatura de las Cepas Degradadoras de Queratina

Temperatura
CÓDIGO DE LA CEPA
30ºC 35ºC 37ºC

C1 +/- + +
C2 +/- + +
C6 +/- +/- +/-
C7 +/- +/- +/-
C8 +/- + +
C9 +/- +/- -
C10 - +/- +/-
C13 +/- + +
C15 +/- +/- -
C18 +/- +/- -
C21 +/- + +
C23 - +/- +/-
6.4 Tabla de Variación de Concentración de Sustrato de las Cepas Degradadoras de Queratina

Concentración de Sustrato
CÓDIGO DE LA CEPA
45% 55% 65%

C1 - + +
C2 +/- + +
C8 +/- + +
C13 + + +
C21 +/- + +

6.5 Gráfica de la Eficiencia de Degradación Queratinolítica con respecto a los Criterios de

Selección

Eficiencia de Degradación Queratinolítica

8,0

7,0

6,0

5,0

4,0

3,0 Pruebas
Resultado
Bioquímicas
2,0 Tinción Gram Bacilo (+)
Catalasa +
1,0
Oxidasa -
0,0 Manitol +
C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 C11 C12 C13 C14 C15 C16 C17 C18 C19 C20 C21 C22 C23

Cepas

6.6 Tabla de Resultados de las Pruebas Bioquímicas realizadas a la Cepa Seleccionada

PRUEBAS BIOQUIMICAS RESULTADO

Tinción Gram Bacilo (+)
Catalasa +
Oxidasa -
Manitol +
6.7 Curva de Crecimiento para el Bacillus spp. (Teórica)

µ 0.27
Tiempo de 5 horas
Generación

X vs t

6,000
5,000
4,000
X g/L

3,000
2,000
1,000
0,000
0,000 2,000 4,000 6,000 8,000 10,000 12,000 14,000
t, h

7. DISCUSIONES

7.1 Discusión sobre los Resultados

· La mayoría de cepas aisladas presentaban una misma morfología y coloración, probablemente

debido a que se trataba de un mismo microorganismo, razón por la cual tuvieron que ser
exoneradas en los siguientes procesos de selección.
· De acuerdo a la selección por variación de pHs se obtuvieron doce cepas, las cuales se
adaptaban de mejor manera a las nuevas condiciones, teniendo un mejor crecimiento a pH 7.5
y 8, lo que indica que las cepas pueden resistir las condiciones que demanda el bioproceso.
· De las doce cepas anteriormente seleccionadas por pH, se escogieron 5 cepas, las mismas que
crecieron adecuadamente a la temperatura de 37ºC, temperatura a la que se ajusta el birreactor
para el proceso de degradación.
· De las cinco cepas, se seleccionó la cepa C13, la misma que se adaptó muy favorablemente
tanto a las condiciones de pH, temperatura y sustrato. Posteriormente a esta cepa se le sometió
a pruebas bioquímicas, cuyo resultado indica que se trata de una cepa de Bacillus y que
gracias a la prueba positiva de manitol puede mencionarse que se trata de Bacillus
Licheniformis. Sin embargo hace falta una serie de reacciones tanto microbiológicas como
bioquímicas para asegurar este dato.
· Debido a la falta de tiempo la producción de biomasa de la cepa seleccionada, no pudo
realizarse por lo cual se ha creído conveniente añadir referencias teóricas sobre este proceso.
7.2 Discusión sobre la Industrialización del Bioproceso

· El método de obtención por el que tradicionalmente se obtiene harina de plumas, reduce el

porcentaje de proteína y por ende el valor nutritivo del alimento, así como ya se ha explicado
anteriormente y por lo tanto se cree que es inadecuado. Por esta razón se planteó una nueva
alternativa que genere harina con un mayor valor proteico por adición de la proteína
microbiana. Para esto se somete a la pluma a métodos menos rigurosos en cuanto a
temperatura y pH, además de que se realizan adiciones semi-continuas de sustrato con el fin
de que la bacteria no pierda viabilidad y productividad.

7.3 Discusión sobre las Modificaciones de Anteriores Investigaciones

Este trabajo de investigación esta fundamentado en un proyecto ya ejecutado en el exterior, sin

embargo se a realizado modificaciones que se describen a continuación:
· El medio de cultivo descrito en dicha investigación fue el MBS, el cual sirvió como
referencia para el diseño del nuevo medio de cultivo fundamentado en Stainer y
suplementado con la adición del 20% de pluma de pollo por ser la queratina el sustrato
primordial.
· Con respecto a la metodología empleada se variaron los criterios de selección ya que la
propuesta indicaba colocar una pluma entera con medio e inoculo para vizualizar la
degradacion, mientras que lo realizado fue variaciones de pH, temperatura y concentración
del sustrato y de esta manera determinar que cepa se adapta favorablemente a todos estos
cambios.

8. CONCLUSIONES

· Se obtuvieron muestras de plumas blancas y muestras de suelo sometidas ambas a

esterilización para eliminar la flora patógena y asegurar el aislamiento de microorganismos
esporulados queratinoliticos.
· El medio diseñado para el aislamiento de cepas queratinoliticas generó una alta
productividad microbiana ya que contribuyó con todos los requerimientos nutritivos para el
crecimiento de la cepa.
· Mediante los criterios de selección se obtuvo la cepa de Bacillus spp. la cual demostró alta
productividad y una mayor velocidad de crecimiento en comparación con las 4 cepas
queratinoliticas también seleccionadas.
· A la cepa C13 de Bacillus spp. se le sometió a diferentes pruebas bioquímicas cuyos
resultados indican que puede tratarse de la especie Licheniformis al ser una de las pocas
cepas que da positivo la prueba de manitol, sin embargo es necesario realizar mas pruebas de
confirmación.
· Al no ejecutarse en el laboratorio la producción de biomasa, la cepa seleccionada unicamente
fue purificada y finalmente preservada para mantener sus características biotecnológicas.
· El método de obtención de harina de pluma propuesto se basa en un proceso semicontinuo en
donde se añade medio de cultivo para evitar el agotamiento del sustrato, reducir la viscosidad
y la acumulación de sustancias toxicas.
9. RECOMENDACIONES

· Esta investigación esta dirigida a la mayoría de las avícolas en donde generalmente no le dan
un uso adecuado a los subproductos de las aves de corral como es el caso de las plumas, de
las cuales se obtiene harina como suplemento alimenticio para animales. Con este motivo se
pretende que la industria ecuatoriana dé aplicación a esta propuesta que hace uso de la
biotecnología para obtener un producto de calidad, competitivo y a menor costo que el ya
existente.
· Para medir la degradación de las plumas se recomienda determinar grupos amino libres en el
producto del bioproceso, según el método de la ninhidrina.
· Una forma de determinar si la cantidad de proteína ha aumentado en la harina, es realizar una
cuantificación de L-lisina por ser el aminoácido que se encuentra en mayor cantidad en la
queratina.
· Del mismo modo para determinar el mayor grado de digestibilidad de la harina puede
realizarse un estudio con animales de abasto.
10. ANEXOS

10.1 Aislamiento, Enriquecimiento y Selección de Cepas Queratinolíticas

Inocular < 0.5 g de muestra de

suelo diferentes áreas de
galpones de criadero de pollos

10 ml de caldo
nutritivo

Incubar por 24 horas Pasteurizar a 15 min.

Por 80 º C

Selección de
Microorganismos
esporulados

Inoculación

Enriquecimiento:Medio
minimal con 20g/L de
plumas
10.2 Selección de Cepas Queratinoliticas

Enriquecimiento:Medio
minimal con 20g/L de
plumas

Aislamiento en
Agar nutritivo

Selección de colonias morfológicamente diferentes

Pluma troceada y
Medio Diseñado
fresco
(5 ml)
Incubadas a 40 º C

Cepa que produce la mayor degradación en el tiempo más corto.

10.3 Producción de Biomasa

10.3.1 Propagación y Cultivo de las cepas Queratinoliticas

Medio Precultivo

30 ml de medio
minimal y 20g/L de
plumas troceadas, 37º
C/ 48h

Shaker orbital, con una velocidad de agitación de 150 rpm

Ensayos Cinéticos, 48
horas con 20g/L de
medio de plumas y una
agitación de 150 rpm

Condiciones óptimas para lograr para lograr homogeneidad y baja viscosidad del medio
10.3.2 Determinación de la Medida de Biomasa Microbiana

Medio Minimal con plumas

troceadas

Filtrar (micropore)

Sedimento
celular a 115ºC
en la estufa por
20 minutos

Colocar en el desecador y finalmente se pesa

Se realiza hasta peso constante

10.2.3 Preservación de los Microorganismos

Cepas a 37ºC por estriado

en Medio Diseñado con
harina de plumas (20g/L).
Previamente añadido 10%
CEPAS SELECCIONADAS de glicerol y mantener a –
80ºC
11. REFERENCI AS BIBLIOGRAFICAS

1. COLLINS AND LYNE’S. “Microbiologycal Methods”. Séptima Edición. Gran Bretaña. 1995.
Págs. 391-395.
2. STAINER, Roger. “Microbiología”. Págs. 20-49.
3. BROOK. “Microbiología de los Microorganismos”. Décima Edición. Págs.103-165.
4. http://74.125.47.132/search?q=cache:d2ANzFzz1KkJ:www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/2
7333/2/articulo7.pdf+aislamiento+bacillus+pluma+ave+corral&cd=2&hl=es&ct=clnk&gl=ec
5. http://www.sica.gov.ec/cadenas/maiz/docs/produc_avicolamod.html
6. http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx
7. http://es.wikipedia.org/wiki/Bacillus
8. http://www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/27333/2/articulo7.pdf
9. http://www.bioone.org/doi/abs/10.1642/0004-
8038(2004)121%5B0656:BDOBAW%5D2.0.CO%3B2
10. http://es.wikipedia.org/wiki/Pluma
11. http://turnkey.taiwantrade.com.tw/showpage.asp?subid=137&fdname=MISCELLANEOUS&pa
gename=Planta+procesadora+de+plumas+de+aves+de+corral
12. http://www.zoetecnocampo.com/foro/Forum35/HTML/000018.html
13. http://www2.uah.es/mapa/seminarios/activos/Seminarios%20biologia/aa10.pdf
14. http://www.rpp.com.pe/2009-03-28-peru-exporto-mas-de-1329-tm-de-harina-de-plumas-el-
2008-noticia_172583.html