CAp - Pontuação Andrológica Por Pontos

CLASSIFICAÇÃO ANDROLÓGICA POR PONTOS E SUA RELAÇÃO COM O PERFIL
PROTÉICO DO PLASMA SEMINAL DE TOUROS NELORE
Rogério Fonseca Guimarães Peres1; Elmo Gomes Diniz2
RESUMO
O uso dos processos de avaliação e seleção andrológica baseados na Classificação

Andrológica por Pontos (CAP) demonstra que a performance de touros tem melhorado
anualmente. Nesse sentido, a busca por avaliações mais criteriosas que prediz a fertilidade
potencial individual de touros vem sendo sugerida através de provas complementares que poderia
atuar como marcadores para alta fertilidade, como o perfil protéico do plasma seminal. Portanto o
objetivo desse estudo foi verificar a relação entre a CAP e o perfil protéico do plasma seminal de
touros da raça Nelore.
Foram utilizados 56 tourinhos da raça Nelore de 25 a 36 meses. O sêmen de cada animal foi
colhido com auxílio de um aparelho de eletroejaculação e as avaliações físicas do sêmen foram
realizadas imediatamente após as colheitas e uma parte da amostra foi armazenada a -20oC.
Posteriormente o sêmen foi descongelado e centrifugado, as proteínas presentes no sobrenadante
foram precipitadas com acetona e em seguida foram submetidas a uma nova centrifugação e o
pellet obtido foi resuspendido em solução de Tris/HCl. As eletroforeses para a estimativa dos
pesos moleculares foram realizadas utilizando-se géis de poliacrilamida (SDS- PAGE). As
amostras foram preparadas e aplicadas ao gel. Após a corrida os géis foram corados numa
solução de Coomassie Brilhante Blue e descorados numa solução de ácido acético. A distância de
migração de cada padrão foi determinada de acordo com sua mobilidade relativa e a curva padrão
para a determinação do peso molecular foi traçada relacionando os logarítmos dos valores de
peso molecular dos padrões com as distâncias de migração.
Os resultados mostraram a diversidade de proteínas presentes no plasma seminal de touros,
sendo o peso molecular variável de 14 a 97 KDa. . Comparando-se os perfis eletroforéticos do
plasma seminal, não se percebe diferença entre os animais dos diferentes grupos. Os diferentes
valores de CAP não estão relacionados com diferentes perfis do plasma, não apresentando bandas
protéicas distintas. No presente trabalho, não houve correlação da fertilidade dos touros com
perfil protéico do plasma seminal.
PALAVRAS CHAVE: touros, proteínas do plasma seminal, fertilidade.

ABSTRACT
The use of avaluate process and andrologicy selection based in Andrologicy Spot
Classification (APC), to showed that performance of bulls has better annually. In this purpose
seek to more criterion avaluation that predict a individual potencial fertility of bulls has been
suggested across complementary tests that could act how marker to high fertility, how the profile
seminal plasma proteins. However the objective this study was analysis the relation among a
APC and profile seminal plasma proteins of Nelore breed bulls.
Were used 56 young bulls of Nelore breed between 25 to 36 months. The semen of each
animal has obtained across electron-ejaculation and the avaluation physiques of semen were do
immediat after crop and a portion of sample has stored - 200 C. After the semen has defrost and
centrifugation, the present proteins in the sobrenadante were precipitate with acetone and
submitted a new centrifugation and the pellet obtained was returned in solution Tris/ HCl. The
eletrophoresis to estimate of molecule weight were carried utilizing polyacrilamida gels (SDS-
PAGE). The samples were prepared and arrangement in gels. After race the gels were blushed in
solution of Comassie Brilhante Blue and discolored in solution acetic acid. The distance of
migration of each standard was determine of agreement with relative mobility and the standard
curve to determine of molecule weight was connected logaritques values of molecule weight of
standards with migration distante.
The results showed a several of present proteins in bull plasma seminal, where molecule weight
varied of 14 to 97 KDa. The comparative among plasma seminal electronphoretics profiles no
observed difference between several groups animals. The values differences no connected with
difference profiles of plasma, no showing protein band distinct. In present study no had
correspondence in fertility of bulls with profile seminal plasma proteins.
KEY WORDS: bulls, seminal plasma proteins, fertility.

INTRODUÇÃO seminal de bovinos e acharam a correlação
entre proteínas e fertilidade de touros.
O uso freqüente dos processos de
Utilizando-se da eletroforese, associaram
avaliação e seleção andrológica, baseada na
touros férteis de uma determinada
Classificação Andrológica por Pontos
população, com duas proteínas do plasma
(CAP), demonstra que a performance de
seminal, caracterizadas por apresentarem
touros tem melhorado anualmente (Salvador,
peso molecular de 26 KDa pI 6,2 e 55KDa
Andrade, Vale Filho, 2001). Ainda segundo
pI 4,5 como predominantes em touros de alta
esses autores, a busca por avaliações mais
fertilidade e duas proteínas, de peso
criteriosas e predição da fertilidade potencial
molecular 16KDa pI 4,1 e 16 KDa pI 6,7
individual de touros, vêm sendo sugerida
como predominantes em animais de baixa
provas complementares como testes
fertilidade. Um modelo de regressão foi
comportamentais e exames referentes à
desenvolvido para determinar a fertilidade
capacidade de fecundação do
usando essas quatro proteínas. Comparando-
espermatozóide, procurando-se medidas
se a fertilidade efetiva dos touros com o
associadas a esses eventos que pudessem
valor calculado, observou-se uma correlação
atuar como marcadores para alta fertilidade.
positiva. Num trabalho posterior, Killian,
Wolfe, Bradley e Riddel (1993)
Chapman e Cancel (1999), descrevem que
sugeriram que o conteúdo do plasma seminal
talvez as duas proteínas com maior
influi na fertilidade masculina, geralmente
prevalência em touros de baixa fertilidade
baseando-se na composição do plasma de
(16 KDa com pI 4,1 e 16 KDa com 6,7 pI)
animais férteis e inférteis.
poderiam estar associadas com Micoplasma
Alguns pesquisadores relataram a
genitalum. Após análise da proteína de 55
alta correlação entre perfil protéico do
KDa, Killian, Chapman e Cancel (1999)
plasma seminal com fertilidade de touros,
determinaram que ela é 86% homóloga ao
em trabalhos com raças européias (Bellin,
precursor da osteopontina-K bovina.
Hawkins e Oyarzo, 1998; Chacur et al.,
Estudos de Genera et al. (1998)
2003; Genera et al., 1998; Killian, Chapman
estabeleceram que a proteína associada à
e Rogowski, 1993; Killian, Chapman e
fertilidade 26KDa, descrita por Killian,
Cancel, 1999; Nass et al., 1990).
Chapman e Rogowski (1993), é 75%
Killian, Chapman e Rogowski
idêntica e 86% homóloga a do tipo lipocalin
(1993), estudaram proteínas do plasma
prostaglandina D Sintase (PGDS), uma das analisados continham no seu plasma seminal
proteínas mais prevalentes em touros de alta uma proteína de peso molecular de 30 KDa e
fertilidade. Entretanto, não se sabe o papel 12% não continham essa proteína. A taxa de
exato dessa proteína no trato genital do fertilidade foi de 88% e 79%
macho, mas observa-se uma atuação tanto respectivamente. Além disso, constatou-se
no desenvolvimento quanto na maturação que os touros mais férteis apresentaram
dos espermatozóides. proteínas de 2,5 KDa, 24 KDa e 30 KDa no
Bellin, Hawkins e Oyarzo (1998) plasma seminal.
identificaram no plasma seminal bovino Chacur et al (2003) estudaram a
algumas proteínas ligadoras de heparina correlação da fertilidade e proteínas do
(HBP) produzidas pelas glândulas plasma seminal em touros Limousin e
acessórias. Pesquisas do sêmen encontraram que proteínas de 55 e 66 kDa
reconheceram variantes da HPB, de estavam relacionadas com excelente quadro
aproximadamente 31, 24 e 21,5 KDa, espermático. No entanto, as proteínas com
associadas ao incremento da fertilidade de 16 e 36 kDa apareceram exclusivamente no
touros, sendo que a proteína de maior peso touro com pior quadro espermático.
molecular (31 KDa) é conhecida como o Assumpção et al (2003) verificaram
antígeno associado à fertilidade (FAA). Em grande variedade de bandas protéicas dentro
pesquisas posteriores, McCauley et al. e entre as amostras com intensidades
(1999) concluiram que a proteína FAA é diferentes entre elas. Não houveram
78% idêntica à proteína DNAase-like diferenças no perfil protéico dos touros de
humana, sendo consideradas da mesma alta e baixa fertilidade da raça Nelore.
família. Vale Filho (1988) demonstraram o
Nass et al. (1990) encontraram HBPs sistema CAP – Classificação Andrológica
com peso molecular de 14, 16, 24 e 30 kDa; por Pontos, baseado no BSE – Breeding
afirmaram ainda que animais castrados soundness evaluation. Na CAP, são
apresentam queda significativa nos níveis ponderados circunferência escrotal (40% do
dessas HBPs. valor total), percentual de espermatozóides
Em um estudo de Bellin; Hawkins; anormais (40% do valor total) e motilidade
Oyarzo.(1998) realizado com 2191 touros, espermática (porcentagem e vigor) valendo
determinou-se que 88% dos touros 20% do valor total.
O objetivo desse estudo foi verificar plasma seminal de touros da raça Nelore.
a relação entre a CAP e o perfil protéico do
MATERIAL E MÉTODOS 4ºC. As proteínas presentes no sobrenadante
foram precipitadas com 3,6 mL de acetona e
Foram utilizados 56 tourinhos da em seguida foram submetidas a uma nova
raça nelore de 25 a 36 meses. O sêmen de centrifugação a 10.000 x g durante 10 min.
cada animal foi colhido com auxílio de um O pellet obtido foi resuspendido em 2 mL de
aparelho de eletroejaculação e as avaliações 0,1M Tris/HCl, pH 7,5.
físicas do sêmen processadas imediatamente As eletroforeses para a estimativa
após as colheitas de acordo com a dos pesos moleculares foram realizadas
Classificação Andrológica por Pontos – segundo o método de Laemmli (1970),
CAP (Vale Filho, 1995) e as normas do utilizando-se géis de poliacrilamida com
CBRA (1998). Parte da amostra foi SDS (Dodecil Sulfato de Sódio) como
o
armazenada a -20 C. agente desnaturante. Na preparação,
Cerca de 2,0 mL de sêmen foram utilizou-se géis a 5% (empilhamento) e 14%
centrifugados a 1.500g durante 20 min a (separação) conforme exposto na Tabela 1.
Tabela 1 -Soluções que foram usadas para o preparo de gel poliacrilamida com SDS a 14% e 5%.
VOLUME (µ µL)
SOLUÇÕES ESTOQUES
Gel de separação Gel de empilhamento
(14%) (5%)
Tris-HCl 2M pH 8,8 1.170 -
Tris-HCl 2M pH 6,8 - 167
EDTA 200Mm 63 27
Acrilamida:bis (30: 0,8) 2.920 435
Água deionizada 2015 1.990
TEMED 7,5 2,5
Persulfato de amônio (10%) 37,5 18
A solução trizma base 0,1 M, EDTA cátodo e a mesma solução, porém sem
7,8 mM, glicina 0,77 M e SDS 0,3% (m/v) glicina, para o ânodo.
pH 8,3 foi utilizada como tampão para o As amostras foram dissolvidas em
água deionizada. Em seguida foi adicionado
50% do tampão de amostra (Tris-HCl 187 relacionando os logarítmos dos valores de
mM pH 6,8, SDS 6%, EDTA 6 mM, azul de peso molecular dos padrões com as
bromofenol 1% e glicerol 27%) e 10% de β- distâncias de migração. Os padrões de peso
mercaptoetanol. Posteriormente, as amostras molecular que foram utilizados: fosforilase b
foram aquecidas a 100 ºC durante 3 minutos (97.000), soroalbumina bovina (66.000),
e aplicadas ao gel de poliacrilamida. ovoalbumina (45.000), anidrase carbônica
A eletroforese foi realizada com uma (30.000), inibidor de tripsina (20.100) e α-
corrente constante de 25 mA (miliamperes) lactoalbumina (14.400), numa concentração
até o indicador azul de bromofenol alcançar de 3,5 mg/ml.
o final do gel (cerca de 50 minutos). As O peso molecular aproximado das
proteínas foram coradas por 30 minutos proteínas foi determinado traçando a curva
numa solução de 0,2 % (m/v) de Coomassie padrão (figura 1).
Brilhant Blue R-250 em água : metanol na
proporção de 1:1. O gel foi descorado numa
solução de ácido acético a 7 % (v/v).
A distância de migração de cada
padrão foi determinada de acordo com sua
mobilidade relativa e a curva padrão para a
determinação do peso molecular foi traçada
Reta Padrão para estimativa da massa molecular

das proteínas presentes no plasma seminal
bovino
5
Log do Peso Molecular
4
y = -0,0207x + 5,0327
3
R2 = 0,9745
2
0
0 10 20 30 40 50
Migração Relativa (m m )
Figura 1 - Determinação dos pesos moleculares das principais proteínas presentes no plasma
seminal de touros da raça Nelore, em gel de poliacrilamida pelo método de Laemmli (1990). A
curva padrão foi traçada relacionando os logaritmos dos valores de peso molecular dos padrões
com as distancias de migração em milímetros.
RESULTADOS E DISCUSSAO
Os dados obtidos após avaliação dos animais estão demonstrados na tabela 2.
Tabela 2 – Valores de Perímetro Escrotal (PE), Motilidade espermática (ME), Defeitos

Maiores (DM), Defeitos Totais (DT) e Classificação Andrológica por Pontos (CAP) de 56
touros da raça Nelore com diferentes idades, Uberlândia-MG, 2005.
Touro Meses PE ME DM DT CAP
1 34 37.4 65 10,5 24 60
2 27 36.7 50 27,5 36,5 60
3 28 35.2 70 2 6 90
4 28 34.2 75 2,5 18 90
5 26 34.2 65 4 5 90
6 27 36.2 65 0 6 90
7 28 33.3 75 3 6,5 74
8 35 34.2 60 1,5 8,5 60
9 25 35.1 75 4,5 12 90
10 26 32.2 80 4 6 74
11 27 34.1 90 6 7 90
12 26 30.6 80 2 5 64
13 27 34.1 70 3 22 90
14 27 34.4 80 2 8,5 90
16 26 31.1 80 0,5 5,5 74
17 25 33 70 1 2 74
18 27 33.6 75 8 18 74
19 26 36.7 60 1 2,5 80
20 27 33.9 70 2 8,5 74
21 27 34.3 65 1 2 85
22 25 32.6 70 7,5 10,5 74
23 26 32.6 90 9 10 74
24 26 31.8 75 1 2 74
25 28 34.3 75 7,5 9,5 90
27 27 34.1 75 0,5 6 90
28 27 34.6 80 5,5 11,5 90
29 27 35.1 55 14,5 23 60
30 25 37.9 70 2,5 5,5 90
42 30 37.1 75 14 21 74
43 28 34.7 60 7,5 12 82
44 28 32.1 70 34 38 47
45 27 40.7 50 27 61 53
46 27 35.1 70 15 36 75
49 27 33.9 70 29 80 42
50 25 38.3 70 20 33 60
51 27 35.6 75 19 21 75
52 26 32.3 75 8,5 11 74
53 29 35.4 60 6 18 82
54 25 37.2 70 18 24 78
55 27 31.2 85 7 28 60
56 25 41.1 70 4 7 90
57 28 35.2 55 13 15 80
58 25 33.6 75 5 50,5 50
59 25 33.4 60 54,5 72,5 30
60 28 37.2 80 8,5 13 90
61 26 33.3 20 20 41,5 30
62 27 34.1 20 4 25,5 60
63 25 33.2 90 3 8,5 74
64 27 35.8 70 11,5 26,5 75
165 27 33.1 75 10,5 16 75
66 27 31.1 55 3 64 37
67 27 35.2 30 8 10 70
68 28 34.7 70 5 6,5 90
69 25 33.2 25 11 54 37
70 28 39.8 10 78 91 46
71 28 35.6 60 6 24 80
Percebe-se uma grande variabilidade isoladamente, foi observada naqueles de

nos valores obtidos das características números 42, 46, 50, 51, 54 e 64. Os demais
analisadas. Vários animais (3, 4, 5, 6, 9, 11, obtiveram índices de CAP igual ou abaixo
13, 14, 25, 27, 28, 30, 56, 60 e 68) de 60 pela associação entre os fatores
apresentaram excelente desenvolvimento pontuados (Perímetro escrotal, Motilidade
testicular quando relacionado com a idade, espermática e Patologias). São eles: 1, 2, 8,
excelente motilidade e baixo índice de 29, 44, 45, 49, 55, 58, 59, 61, 62, 66, 69 e
patologias, obtendo o índice CAP de 90 70.
pontos. No entanto, outros demonstraram Nas figuras 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 e 9 estão
qualidade espermática inferior (19, 21, 43, demonstrados os resultados das eletroforeses
53, 57, 67 e 71). A CAP desses últimos foi em gel de poliacrilamida 14% em condições
de 80 a 89 pontos. desnaturantes das proteínas do plasma
Os animais 7, 10, 12, 16, 17, 18, 20, seminal de touros Nelore. A figura 2 refere-
22, 23, 24, 52, 63 e 65 apresentaram baixo se as amostras 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7
Perímetro Escrotal, obtendo entre 70 e 79
pontos na CAP. A presença de patologias
totais ou maiores em grande quantidade,
PM 7 6 5 4 3 2 1
97
66
45
30
20,1
14,4
Figura 2 – Eletroforese em gel de poliacrilamida a 14% com agentes desnaturantes das proteínas
do plasma seminal de touros Nelore. PM – Padrão de Peso Molecular LMW (Low Molecular
Weight): fosforilase b (97.000), soroalbumina bovina (66.000), ovoalbumina (45.000), anidrase
carbônica (30.000), inibidor de tripsina (20.100) e α-lactoalbumina (14.400). Colunas de 1 a 7,
refere ao número do animal. Condições: corrente: 25mA; tempo de corrida: 50 minutos; solução
fixadora: metanol 50% - ácido acético 10%; solução corante: 0,2% de Coomassie Brilhante Blue
R-250 em metanol 50%; solução descorante: ácido acético a 7%.
Na figura 3, estão representadas as amostras 08, 09, 10, 11, 12, 13 e 14.
PM 14 13 12 11 10 9 8
97
66
45
30
20,1
14,4
referem ao número do animal. Condições: corrente: 25mA; tempo de corrida: 50 minutos;
solução fixadora: metanol 50% - ácido acético 10%; solução corante: 0,2% de Coomassie
Brilhante Blue R-250 em metanol 50%; solução descorante: ácido acético a 7%.
Na figura 4 estão representadas as amostras 16, 17, 18, 19, 20, 21 e 22.
PM 22 21 20 19 18 17 16
97
66
45
30
20,1
14,4
As amostras 23, 24, 25, 27, 28, 29 e 30 estão demonstradas na Figura 5.

P M 30 29 28 27 25 24 23
97
66
45
30
20,1
14,4
As amostras 42, 43, 44, 45, 46, 49 e 50 estão na Figura 6.
PM 50 49 46 45 44 43 42
97
66
45
30
20,1
14,4
Na seqüência estão as amostras 51, 52, 53, 54, 55, 56 e 57 (Figura 7).
PM 57 56 55 54 53 52 51
97
66
45
30
20,1
14,4
Na Figura 8 estão as amostras 58, 59, 60, 61, 62, 63 e 64.

PM 64 63 62 61 60 59 58
97
66
45
30
20,1
14,4
Na Figura 9, estão as amostras 65, 66, 67, 68, 69, 70 e 71.
PM 65 66 67 68 69 70 71
97
66
45
30
20,1
14,4
Comparando-se os perfis CAP não estão relacionados com diferentes

eletroforéticos do plasma seminal, não se perfis do plasma, não apresentando bandas
percebe diferença entre os animais dos protéicas distintas.
diferentes grupos. Os diferentes valores de
Tabela 3 – Intervalos da Classificação Andrológica por Pontos (CAP) relacionado com os

touros que apresentaram tal CAP, Uberlândia – MG, 2005.
CAP Observação Animais
90 Bom 3, 4, 5, 6, 9, 11, 13, 14, 25, 27, 28, 30, 56, 60 e 68
80 – 89 Baixa motilidade 19, 21, 43, 53, 57, 67 e 71
70 – 79 Pequeno PE 7, 10, 12, 16, 17, 18, 20, 22, 23, 24, 52, 63 e 65
70 - 79 Muitas Patologias 42, 46, 50, 51, 54 e 64
< 60 Ruim 1, 2, 8, 29, 44, 45, 49, 55, 58, 59, 61, 62, 66, 69 e 70
Pela analise das figuras de 2 a 9, As proteínas do plasma seminal

podemos perceber que as amostras encontradas nesse estudo apresentam peso
apresentaram proteínas comuns. Essas molecular semelhante aos citados por outros
proteínas apresentam pesos moleculares autores, como: 70,8 KDa (CHACUR et al.,
aparentes de: 97, 70,8, 32,4, 27 e 15,6 KDa. 2003), 32,4 KDa (BELLIN, HAWKINS,
No presente trabalho, não houve OYARZO, 1998; NASS et al., 1990), 27
correlação da fertilidade dos touros com KDa (KILLIAN, CHAPMAN,
perfil protéico do plasma seminal, ROGOWSKI, 1993; BELLIN, HAWKINS,
concordando com Assumpção et al (2003), OYARZO, 1998; NASS et al., 1990) e 15,6
que também trabalharam com touros Nelore. KDa (KILLIAN, CHAPMAN, CANCEL,
1999; NASS et al., 1990; CHACUR et al., Os resultados mostraram a
2003). diversidade de proteínas presentes no plasma
Nenhum dos autores consultados seminal de touros, sendo o peso molecular
citaram a presença de proteínas de 32,4 variável de 14 a 97 KDa.
KDa e 97 KDa.
CONCLUSOES pontos em touros Nelore não apresentou
relação com o perfil protéico do plasma
Nas condições em que o trabalho foi seminal.
realizado, a classificação andrológica por
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CAp - Pontuação Andrológica Por Pontos

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CLASSIFICAÇÃO ANDROLÓGICA POR PONTOS E SUA RELAÇÃO COM O PERFIL

PROTÉICO DO PLASMA SEMINAL DE TOUROS NELORE

Rogério Fonseca Guimarães Peres1; Elmo Gomes Diniz2

O uso dos processos de avaliação e seleção andrológica baseados na Classificação

PALAVRAS CHAVE: touros, proteínas do plasma seminal, fertilidade.

KEY WORDS: bulls, seminal plasma proteins, fertility.

Reta Padrão para estimativa da massa molecular

Os dados obtidos após avaliação dos animais estão demonstrados na tabela 2.

Tabela 2 – Valores de Perímetro Escrotal (PE), Motilidade espermática (ME), Defeitos

Percebe-se uma grande variabilidade isoladamente, foi observada naqueles de

As amostras 23, 24, 25, 27, 28, 29 e 30 estão demonstradas na Figura 5.

As amostras 42, 43, 44, 45, 46, 49 e 50 estão na Figura 6.

Na Figura 8 estão as amostras 58, 59, 60, 61, 62, 63 e 64.

Na Figura 9, estão as amostras 65, 66, 67, 68, 69, 70 e 71.

Comparando-se os perfis CAP não estão relacionados com diferentes

Tabela 3 – Intervalos da Classificação Andrológica por Pontos (CAP) relacionado com os

Pela analise das figuras de 2 a 9, As proteínas do plasma seminal

CHACUR, M.G.M.; RABESQUINE, M.M.; PARRA, J.A.G.; MACHADO NETO, N.B.

COLÉGIO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL. Manual para exame andrológico e

KILLIAN, G.J.; CHAPMAN, D.A.; ROGOWSKI, L.E. Fertility-associated proteins in Holstein

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