Professional Documents
Culture Documents
2.Care sunt componentele de baza ale unui cromatograf de gaze? Desenati schema bloc. Descrieti fiecare
componenta.
3.De ce este necesara purificarea eluentilor in cromatografia de gaze si in ce scop se face aceasta purificare ?
Cu cat puritatea eluentului este mai mare, cu atat sensibilitatea detectorului este mai ridicata. De aceea, este
necesar un eluent cat mai pur. Purificarea eluentului se realizeaza prin trecerea acestuia prin coloane cu granule de
cupru sau prin filtre cu site de silicagel sau de carbune activ.
Astfel, se retin impuritatile pe umplutura coloanei.
Eluentul trebuie sa nu prezinte urme de apa deoarece acestea pot scadea sensibilitatea detectorului. De asemenea,
urmele de oxigen pot oxida lent faza stationara.
5. Azotul este mult mai ieftin decat heliul. De ce nu este utilizat azotul drept gaz purtator atunci cand se foloseste un
detector de conductibilitate termica?
Detectorul de conductibilitate termica are un principiu de lucru bazat pe masurarea diferentei dintre
conductibilitatea termica a probei si cea a eluentului. Astfel, azotul nu poate fi folosit ca eluent atunci cand se
foloseste detectorul de conductibilitate termica deoarece conductibilitatea termica a azotului este apropiata de cea
a multor substante organice gazoase (detectorul nu va fi capabil sa isi indeplineasca functia).
In
camera de ionizare, atomii sau moleculele neutre se transofrma in ioni care mai departe vor fi accelerati in camp
electric de intensitate ridicata; acest camp se obtine prin aplicarea unei tensiuni de 400-4000V intre electrozi. La
final, datele sunt inregistrate si interpretate. Spectrometrul de masa are urmatoarea schema bloc:
Ionizarea in spectometrul de masa poate fi chimica, termica, in scanteie electrica, in camp electric, bombardare cu
electroni,laser si bombardate cu atomi rapizi.Dupa accelerare, ionii ies sub forma unui fascicul colimat.Viteza de
deplasare a ionilor este data de relatia: 1 1 1
eV m1v12 m 2 v 22 m 3 v 32 .............
2 2 2
e- sarcina unui electron; V –tensiunea de accelerare; m- masa ionilor, v-viteza ionilor. Dupa ce ionii ies din sistemul
de accelerare, ajung in sistemul de separare (analizor).
Timpii de zbor diferiti ai ionilor asigura separarea acestora.Separarea se poate realiza in campuri electrostatice si/sau
magnetice, in campuri suprapune sau succesive.
4
Cele mai utilizate spectrometre de masa cuplate cu cromatograf de gaze sunt spectrometrul de masa cu sector
magnetic si cel cu cuadrupol.
In campul electromagnetic,separarea se realizeaza prin actiunea campului magnetic asupra particulelor incarcate
electric. Acest camp actioneaza perpendicular pe directia de miscare a ionilor;astfel ionii vor capata o traiectorie
curbilinie cu raza de curbura r.
H 2r 2
Ecuatia fundamentala a spectrometriei: m / z
2V
m- masa compusului, z- sarcina, H- intesitate, r- raza de curbura, V- tensiunea de accelerare.
Singurele fragmente ionice care vor parcurge tubul analizorului sunt cele care respecta aceasta ecuatie, restul ionilor
se vor ciocni de peretele tubului si se vor descarca.
Spectrometrul cu cuadrupol este caracterizat prin simplitate in operare, simplitate in intretinere si pret relativ
scazut.Se poate asemana cu un “filtru” de masa (forma patratica) realizat din patru bare metalice. Barele opuse sunt
conectate la o sursa de curent continuu si radio frecventa. Ionii care sunt extrasi sunt orientati pe axa longitudinala a
campului cuadrupol si sufera oscilatii.Frecventa va fi mentinuta constanta,iar raportul dintre tensiunea campului
continuu si tensiunea radio-frecventa va avea o valore fixa.Ionii care vor ajunge la detector au oscilatii stabile prin
camp si o valoarea a raportului m/z adecvata raportului dintre tensiunea campului electric si tensiunea radio-
frecventa.
Aplicatii: diagnosticarea medicala a unor boli, analize de mediu, studierea unor metaboliti ai medicamentelor
15.Care este diferenta dintre cromatografia conventionala si cromatografia de lichide de inalta performanta?
In cromatografia conventionala elutia se desfasoara prin curgere normala a eluentului la presiune atmosferica sau
cu 1-2 atm mai ridicata, pe cand in cromatografia de inalta performanta elutia este realizata sub diferenta de
presiune ( poate ajunge la 400 atm).
16.Care sunt componentele de baza ale unui cromatograf de lichide? Schema bloc. Descrieti fiecare component
Rezervorul de solventi: - contine solventii ce constituie faza mobila; acestia trebuie sa fie purificati prin filtrare si api
degazati prin baie cu ultrasunete, barbotare de heliu sau filtrare; dupa degazare solventii trebuie utilizati deoarece
dupa 15 min procedura de degazara va trebui sa fie repetata
Pompa :- are rolul de a transporta eluentul la coloana ; pentru presiune normala pana in 2 atm se utilizeaza pompa
peristaltica, iar la presiuni inalte se utilizeaza pompe cu debit constant si cu presiune constanta; acestea doua din
urma se pot folosi doar cuplate cu detectori foarte sensibili
Injectorul:- este de fapt o valva sub forma de o bucla cu volum cunoscut ce lucreaza in sistem by-pass, pozitia ei
modificandu-se pentru ca o parte din eluent sa curga de la pomapa la bucla
Coloana cromatografica:- aici se gaseste faza stationara si aici are loc separarea in functie de constantele de
repartitie K1 si K2 ; in cromatografia lichida clasica coloana poate fi confectionata din sticla sau poliacrilat, iar in
cromatografia lichida de inalta performanta coloana este realizata din otel inoxidabil rezistent la presiuni mari
Detectorul: este cel mai important element al cromatografului deoarece identifica analitii prin recunoasterea unei
proprietati diferite de a eluentului; cei mai folositi detectori in LC sunt: detectori de absorbanta UV, IR,
spectrometrul de masa, detectori electromichimici, s.a
Calculatorul: are soft specializat si asigura comanda operatiilor (inceputul si sfarsitul elutiei, volumul de
eluent,ordinea in care probleme sunt injectate. Calculatorul preia semnale de la detector si le transforma in rezultate
sub forma de cromatograme; rezultatele sunt trimise la imprimanta si printate
b) Liquid light scattering - sesizeaza moleculele solutului prin masurarea luminii dispersate
23.Cromatografia de schimb ionic
Cromatografia de schimb ionic are avantajul folosirii pe post de faza mobila solutii tampon apoase, care se pot
automatiza si se pot aplica la separarea ionilor mici si anorganici, aminoacizilor inaintea de derivatizarea post-
coloana cu diferiti reactivi, separarea peptidelor si proteinelor,separarea carbohidratilor.
Cromatografia se bazeaza pe interactiile electrostatice dintre componentii probei si un selector de ioni depus pe faza
stationara. Separarea este facuta de faza stationara, care este un schimbator de ioni de tip cationit (R cu minus sus)
sau anionit (R cu plus sus).
7
( R Cl ) Aproba
( R A ) Cl sol
In cromatografia pe hartie se folosesc pe post de faza mobila amestecuri de solventi, solutii de saruri sau solutii
tampon, iar prezinta dezavantaje ca timpii mari de developare, zonele nu se disting bine intotdeauna, exactitate
redusa.
In schimb cromatografia pe strat subtire este simpla si ieftina, separarile sunt rapide, sensibilitate mare, se pot
adapta analiti in concentratii mai mari. Stratul subtire este constituit dintr-un liant (amidon,sulfat de calciu,bioxidul
de siliciu hidratat) si un suport activ ca silicagelul, alumina, celuloza, polimeri organici.
In procedeul experimental se urmeaza cativa pasi :
a) Tratamentul pregatitor – pentru placi – se activeaza suportul
- Pentru hartie – se introduce faza stationara lichida
b) Aplicarea probei – se aplica pe marginea inferioara a hartiei/stratului subtire la distante de 1-2cm
c) Developarea – se face intr-un pahar unde atmosfera este satura cu faza mobila
- Este etapa in care proba se deplaseaza pe suprafa hartiei sau a stratului subtire
cu o viteza determinata de coeficientul de distributie intre cele doua faze
i. Developare ascendenta – faza mobila urca pe hartie sau pe stratul subtire
ii. Depelovare descendenta – faza mobila coboara din rezervor
-ea poate fi multipla in cazul componentilor cu polaritati diferite; se usuca hartia sau placa cu strat
subtire si se schimba faza mobile (fazele mobile se folosesc in sensul cresterii puterii de elutie)
- developarea bidimensionala – amestecuri complexe; se faze pe directii ortogonale
-developare radiala – proba se pune in mijlocul hartiei/placii
d) Vizualizarea – punerea in evidenta a spoturilor pe baza culorii lor ( vizibila/fluorescenta) sau prin reactii de
culoare.
distanta parcursa de solut (analit)
e) Evaluarea rezultatelor – se insemneaza spoturile si se calculeaza R f Rf
i. Analiza calitativa – compararea cu valorile unor compusi cunoscuti distanta parcursa de faza mobila
ii. Analiza cantitativa – consta in separarea spotului de placa, dilutia lui la V si masurarea ariei spotului
Aplicatii: separarea flavonoidelor din apa, detectarea urmelor de pesticide din apa, identificarea otravurilor,
stabilirea unui diagnostic clinic.