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DERRAMES DE CRUDO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOLOGÍA
BUCARAMANGA, 2.001
FITOBACTORREMEDIACION DE SUELOS CONTAMINADOS POR
DERRAMES DE CRUDO
Directora
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOLOGÍA
BUCARAMANGA, 2.001
Nota de aceptación
______________________
______________________
______________________
______________________
Presidente del Jurado
______________________
Jurado
______________________
Jurado
Doctora Graciela Chálela Álvarez, MSc. Dr. Rer. Nat. Directora del Centro de
Barrancabermeja.
Dra. Rosa María Higuera Directora del Laboratorio de suelos y aguas de la Corporación
A todas las personas que de una u otra forma hicieron posible el desarrollo de esta
investigación.
CONTENIDO
INTRODUCCION
1. FUNDAMENTO TEORICO 6
1.1 SUELOS 6
1.1.1 Tipos de organismos del suelo. 7
1.1.1.1 Tipos de organismos según la fuente de energía . 7
1.1.1.2 Tipos de organismos según el tamaño 8
1.1.2 Componentes del sistema suelo 8
1.2 PLANTAS 10
1.2.1 Características fisiológicas 10
1.2.2 Principales procesos fisiológicos 11
1.2.3 Exigencias y factores de crecimiento 12
1.2.4 Sistema radicular 13
1.2.4.1 Funciones 13
1.2.4.2 Rizosfera 14
1.2.4.2.1 Microbiota de la rizosfera 14
1.2.4.2.2 Productos de excreción del macroorganismo 16
1.2.4.2.2.1 Exudados 16
1.2.4.2.2.2 Tejidos muertos 17
1.2.4.2.2.3 Detritus 17
1.2.4.2.2.4 Secreciones 17
1.2.4.2.2.5 Mucigeles 17
1.2.4.2.2.6 Lisatos 17
1.3 DINAMICA DEL SISTEMA SUELO – PLANTA 18
1.4 BACTERIAS 19
1.4.1 Características generales 19
1.4.2 Crecimiento microbiano 19
1.4.3 Condiciones del suelo que afectan al crecimiento de las bacterias 20
1.5 RELACIONES ENTRE PLANTAS Y BACTERIAS 21
1.5.1 Acciones de las plantas sobre los microorganismos 21
1.5.2 Acciones de los microorganismos sobre las plantas 22
1.6 RELACIONES ENTRE SUELO – PLANTA – BACTERIAS 23
1.7 CONTAMINACION DE LOS SUELOS 25
1.7.1 Criterios para evaluar la contaminación 26
1.7.2 Efectos del contaminante en el suelo 26
1.7.3 Tipos de contaminación 27
1.8 DEPURACION DE SUELOS CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS 28
1.8.1 Factores relevantes en la limpieza de sitios contaminados con hidrocarburos 28
1.8.1.1 Características del contaminante que influyen en su persistencia 28
1.8.1.1.1 Tipos de contaminantes 28
1.8.1.1.2 Concentración inicial de los contaminantes 28
1.8.1.1.3 Estado físico del contaminante 28
1.8.1.1.4 Propiedades físico – químicas del contaminante 29
1.8.1.1.4.1 Solubilidad del material 29
1.8.1.1.4.2 Relación entre la estructura física de productos del petróleo y su 29
biodegradación
1.8.1.1.4.3 Relación entre la estructura química de productos del petróleo y su 29
biodegradación.
1.8.1.2 Características del suelo que influyen en la persistencia del hidrocarburo. 34
1.8.1.2.1Factores físicos – químicos del suelo y persistencia de las sustancias tóxicas 34
1.8.1.3 Historia del sitio contaminado 36
1.8.2 Técnicas de limpieza por tratamiento ex – situ 37
1.8.2.1 Extracción / Clasificación usando agentes extractores acuosos 37
1.8.2.2 Tratamiento térmico 38
1.8.2.3 Biodegradación 38
1.8.2.3.1 Landfarming 38
1.8.2.3.2 Las técnicas de biorreactor 38
1.8.3 Tecnologías de biodegradación “On situ” 39
1.8.4 Tecnologías de biodegradación “In situ” 39
1.8.4.1 Extracción in-situ 39
1.8.4.2 Ventilación del suelo (extracción vaporosa del suelo) 39
1.8.4.3 Biorrestauración 39
1.8.4.3.1 Bioestimulación 40
1.8.4.3.2 Bioaumentación 40
1.8.4.3.2.1 Biorreactores para crecimiento microbiano 43
1.8.4.4 Fitorremediación 45
1.8.4.4.1 Fitoestabilización 46
1.8.4.4.1.1 Procesos naturales que involucran la fitoestabilización 47
1.8.4.4.1.1.1 Humificación 47
1.8.4.4.1.1.2 Lignificación 47
1.8.4.4.1.1.3 Ligamento irreversible (envejecimiento) 47
1.8.4.4.1.2 Procesos de las plantas que benefician la estabilización 47
1.8.4.4.1.3 Procesos del suelo que benefician la estabilización 47
1.8.4.4.2 Fitodescontaminación 48
1.8.4.4.2.1 Procesos naturales que involucran la fitodescontaminación 48
1.8.4.4.2.1.1 Fitoextracción 48
1.8.4.4.2.1.2 Fitovolatilización 49
1.8.4.4.2.1.3 Bombeo orgánico 50
1.8.4.4.2.1.4 Fitodegradación 50
1.8.4.4.2.1.5 Biodegradación intensificada de la rizosfera Rizos(fera)degradación 51
1.8.4.4.2.2 Procesos de las plantas que benefician la destrucción del contaminante 52
y/o extracción.
1.8.4.4.2.3 Procesos del suelo que benefician la destrucción del contaminante y / o 52
extracción
1.8.4.4.3 Ventajas y desventajas de la Fitorremediación 53
1.8.4.4.3.1 Ventajas 53
1.8.4.4.3.2 Desventajas 54
1.8.4.4.4 Requisitos para iniciar una fitorremediación 55
1.8.4.4.5 Requerimientos para todo proceso de biodegradación y fitodegradación 56
1.8.4.4.5.1 Requerimientos de Oxigeno 57
1.8.4.4.5.2 Aceptor de electrones 57
1.8.4.4.5.3 Requerimiento de nutrientes 57
1.8.4.4.5.4 pH 58
1.8.4.4.5.5 Temperatura 58
1.8.4.4.5.6 Humedad 58
1.8.4.4.5.7 Anhídrido carbónico 59
1.8.4.4.5.8 Luz 59
1.8.4.4.6 Las plantas como estructuras de remediación contra contaminantes 60
orgánicos
1.8.4.4.5.9 Captación de los contaminantes en la raíz 60
1.8.4.4.5.9.1 Fase vapor 60
1.8.4.4.5.9.2 Fase liquida 60
1.8.4.4.5.9.3 Fase sólida 61
1.8.4.4.6 Aplicación xenobiotica en un sistema planta 61
1.8.4.4.6.1 Transporte dentro de la planta 61
1.8.4.4.6.2 Metabolismo dentro de la planta 63
1.8.4.4.6.2.1 Efectos enzimáticos en el interior de la planta 63
1.8.4.4.7.2.2 Efectos enzimáticos en el exterior de la planta a nivel de suelos y 65
sedimentos
2. METODOLOGIA 68
2.1 ESQUEMA GENERAL DE TRABAJO 68
2.2 SUELO 70
2.2.1 Área de estudio 70
2.2.2 Ensayos preliminares 71
2.2.2.1 Caracterización físico – química 71
2.2.2.1 pH 71
2.2.2.1.2 Textura 71
2.2.2.1.3 Composición 71
2.2.2.2 Caracterización microbiológica 71
2.2.2.2.1 Recuento y caracterización de bacterias presentes en el suelo 71
2.2.2.2.2 Aislamiento de bacterias presentes en el suelo 73
2.3 CRUDO 73
2.3.1 Caracterización físico - química 73
2.3.1.1 Tipo de crudo 74
2.3.1.2 Propiedades físicas 74
2.3.1.3 Rendimiento y composición química del crudo 74
2.3.2 Ensayo de penetrabilidad 74
2.3.3 Ensayo de evaporación 75
2.3.4 Caracterización microbiológica 75
2.4 PLANTAS 75
2.4.1 Selección de plantas para las pruebas de biodegradación 75
2.4.1.1 Factores que se tuvieron en cuenta en el momento de la selección de especies 76
vegetales.
2.4.2 Selección de plantas resistentes a la contaminación con crudo cusiana 79
2.4.2.1 Pruebas de germinación al nivel de laboratorio en un medio nutritivo 79
bioaumentación
2.5.2.1 Aclimatación de los microorganismos aislados para la bioaumentación en 86
sales.
2.5.3 Identificación de bacterias para el proceso de biodegradación 'in situ' 88
2.5.4 Optimización de la biodegradación dentro de las condiciones de laboratorio 88
2.5.4.1 Determinación del porcentaje de biodegradación 88
2.5.4.2 Crecimiento y recuento de las cepas bacterianas bioaumentadas en agar 91
bacterias.
2.6.2.2.1 Efecto de las plantas en el crecimiento poblacional de las bacterias nativas 102
bioaumentadas presentes en las diferentes eras con suelos contaminados con crudo
Cusiana.
2.6.2.2.2 Efecto de las plantas en el crecimiento poblacional de las bacterias nativas 103
presentes en las diferentes eras con suelos contaminados con crudo Cusiana.
2.6.2.2.3 Efecto de la biodegradación, fitodegradación, fito-bacto-degradación y 104
degradación natural del crudo Cusiana contenido en cada una de las eras
2.6.2.2.4 Efecto del crudo en el desarrollo de las plantas en cada una de las eras. 105
2.6.2.2.5 Efecto de la población bacteriana en el desarrollo de las plantas cultivadas 108
30%.
3.3.1.3.2 Pruebas de crecimiento para semillas vegetativas 'Cepas' en suelo y suelo 120
los
3.4 BACTERIAS 125
3.4.1 Selección de bacterias para el proceso de biorremediación in situ' por 125
bioaumentación
3.4.1.1 Aclimatación de los microorganismos aislados para la bioaumentación en 126
sales.
3.4.2. Identificación de bacterias para el proceso de biodegradación 'in situ' 127
3.4.3 Optimización de la biodegradación y aclimatación dentro de las condiciones 141
de laboratorio
3.4.3.1 Determinación del porcentaje de biodegradación. 141
3.4.3.1.1. Influencia del surfactante y del medio de sales en la Biodegradación. 142
3.4.3.1.1.1 Influencia del surfactante en la Biodegradación utilizando el medio de 142
sales C.
3.4.3.1.1.2 Influencia del surfactante en la Biodegradación utilizando medio de sales 143
D
modificado.
3.4.3.2.1.1. Influencia del medio nutritivo y medio nutritivo modificado con crudo al 147
sales.
3.4.3.3.1 Influencia del medio de sales D y medio de sales D modificado con crudo 157
3.5.1.1 Tratamientos 'In situ' para determinar la interrelación entre crudo- plantas - 174
bacterias.
3.5.1.1.1 Efecto de las plantas y bacterias en la biodegradación del crudo cusiana en 174
bioaumentadas presentes en las diferentes eras con suelos contaminados con crudo
3.5.1.1.3 Efecto de las plantas en el crecimiento poblacional de las bacterias nativas 187
presentes en las diferentes eras con suelos contaminados con crudo Cusiana.
3.5.1.1.4. Efecto del crudo en el desarrollo de las plantas 188
3.5.1.1.4.1 Efecto del crudo en el desarrollo Brachiaria sp 188
3.5.1.1.5 Efecto de la población bacteriana en el desarrollo de las plantas cultivadas 197
anoxigenicos.
Figura 6. Degradación general de compuestos aromáticos bajo condiciones oxigenicas 33
Figura 7. Diferentes tipos de adsorción sobre una partícula de suelo 35
Figura 8. Configuración de un reactor “Air lift” 45
Figura 9 Procesos generales de la fitorremediación 46
Figura 10. Captación de metales (níquel) por fitoextracción. 48
Figura 11. Destrucción de contaminantes orgánicos por fitodegradación 51
Figura 12. Propuesta para la degradación de TNT por la nitroreductasa y lactasa 66
encontradas en las plantas (los hongos también son una fuente de lactosa).
Figura. 13 Diagrama del esquema general del trabajo de investigación 68
Figura. 14 Esquema operativo del proceso de producción de biomasa microbiana 95
Figura. 15 Vista general de los biorreactores utilizados para el cultivo de los diferentes 96
tipos microbianos.
Figura. 16 Vista general de los semilleros usados para la fito – bacto - remediación 98
Figura. 17 Vista general del suelo homogenizado manualmente con crudo cusiana al 99
30 % P/P
Figura. 18 Esquema general del trabajo de fito – bacto - remediación 111
Figura 19. Estructura aterronada y compacta del suelo con el hidrocarburo 108
Figura 20. Bacterias aisladas del crudo 113
Figura 21. Resultados obtenidos del porcentaje de germinación en un medio de Jensen 115
10% y 30%
Figura 25 Prueba de crecimiento de Gliricidia sepium en un sustrato con crudo al 120
30%
Figura 26 Resultados de los porcentajes de Mortalidad y cobertura de las especies 121
vegetales en estudio con tres réplicas en suelo y suelo contaminado con crudo al 10%
y 30%.
Figura 27 Crecimiento de semillas vegetativas 'Cepas' en suelo y suelo contaminado 122
con crudo.
Figura 54 Montajes para el recuento de Bacilos en medio nutritivo y medio nutritivo 150
crudo al 10%
Figura 59. Representación del recuento del consorcio Bacilos, Cocos y Cocobacilos 157
Figura 61 Montajes para el recuento del consorcio Bacilos, Cocos y Cocobacilos en 160
Figura 62. Gráfica comparativa de la variación del pH como consecuencia del 161
biorreactor
Figura 66 Concentración del consorcio y variación del pH en el biorreactor 171
biorremediación
fitorremediación
rizos(fera)rremediación.
Figura 72 Gráfica comparativa de los Porcentajes de biodegradación logrados por fito 180
diferentes eras.
Figura 75 Gracia comparativa de las variaciones del pH en las diferentes eras de los 186
Figura 84. Tratamientos en campo de los diferentes semilleros que visualizan los 211
Pág.
% y 15%.
Cuadro 8. Resultados de las pruebas de germinación con tres replicas al nivel de 117
30%.
Cuadro 9 Resultados de los porcentajes de mortalidad de Helianthus annuus y de las 119
semillas vegetativas (Estacas) Gliricidia sepium, con tres réplicas en suelo y suelo
Cuadro 26. Porcentaje de Biodegradación en medio de sales D, sin surfactante y con 143
surfactantes
Cuadro 27. Recuento de Bacilos (UFC / ml). en medio nutritivo y medio nutritivo 148
Cuadro 28. Recuento de Cocos y Cocobacilos (UFC / ml). en medio nutritivo y 152
biorreactor.
Cuadro 32. Recuento del consorcio Cocobacilos, Cocos y Bacilos y medición del pH 172
en el biorreactor.
Cuadro 37. Resultados agronómicos de altura y diámetro del vástago, cobertura y 190
cada tratamiento.
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Métodos analíticos utilizados para obtener la composición inicial del suelo 72
objeto de estudio
Tabla 2. Métodos utilizados para la determinación de las propiedades físicas del 74
del ensayo.
Tabla 7. Composición del crudo cusiana. 111
Tabla 8. Rendimiento del crudo cusiana. 112
Tabla 9. Propiedades físicas del crudo cusiana suministrado como sustrato 112
contaminante.
Tabla 10. Dimensiones de operación de los biorreactores para el crecimiento de la 164
biomasa microbiana
Tabla 11 Precipitaciones en el período de experimentación 212
Tabla 12 Análisis de varianza del porcentaje de biodegradación bajo dos efectos 1 – 215
Cada día se hacen más evidentes los problemas de contaminación en el ambiente como
resultado de la actividad industrial. Uno de los medios que resultan más impactados por el
el cual por su tiempo de formación cercano a 1 cm de espesor en 100 o más años, se le debe
El suelo es un medio receptivo por excelencia, puesto que interacciona químicamente con
la litosfera, hidrosfera y la atmósfera, y sobretodo, recibe el impacto de los seres vivos que,
hombre de cara al siglo XXI. En particular, el petróleo constituye una de las principales
fuentes de contaminación del medio ambiente, ya que la mayor parte de sus componentes
incineración y la desorción térmica. Algunas de estas técnicas solo se dan para soluciones
encontrara la estrategia más efectiva de limpieza, esta solo removería una parte del aceite
derramado. Sin embargo, la biodegradación ha sido reconocida como una de las mejores
Para tal fin, el suelo posee una microbiota autóctona con capacidades degradativas que, con
30%, debido a la pérdida de los nutrientes por fijación o por lixiviación en el suelo, a la
que se vienen llevando a cabo desde el inicio de la vida en el planeta, es una salida
económica de bajo costo y con un impacto regenerativo que busca explotar las
metabolismo.
A menudo, se piensa en las plantas como una fuente de madera, de alimentos, de fibra y de
medicina; en segundo lugar se puede considerar su presencia por razones estéticas así como
por la necesidad de proporcionar un hábitat altruista para otras especies. Sin embargo, hoy
económica.
Las plantas emplean la energía solar disponible y los procesos biológicos, químicos y
han evolucionado y han metabolizado una amplia gama de toxinas naturales y se han
ellas eran capaces de aportar una mayor cobertura y biomasa para poder ejercer los
algunos casos a CO2 más agua. En línea con el primer principio, el Centro de Innovación
autóctonos y foráneos en medios contaminados con crudo Cusiana, para una posterior
biodegradación.
1.1 SUELOS.
El suelo no debe ser visto como una estructura estable formada por componentes minerales
y orgánicos. Mas que eso, es un ecosistema muy complejo, en el cual están en permanentes
interacciones tanto factores físicos y químicos, como clima, organismos del suelo y
equilibrio dinámico. A los organismos del suelo les corresponden en este complejo sistema
de los trabajos efectuados por los organismos del suelo se resume como ‘actividad del
suelo’. (3).
esta forma, el suelo se compone de un material materno, del substrato geológico o mineral
entremezclados con las partículas finamente divididas del material en cuestión. Los
espacios entre las partículas están llenos de gases y de agua. La textura y la porosidad del
hacen parte integrante de la actuación del complejo ecológico como un todo. Las acciones
pueden ser simultaneas (efecto sinérgico) o ser acciones sucesivas, en las que unos
organismos utilizan los productos residuales de los que han actuado en la etapa anterior de
que obtienen energía y carbono para sus funciones metabólicas, los organismos pueden
ejemplos: algas, bacterias fotosintéticas y plantas superiores, que dependen del suelo para la
absorción de nutrientes y agua, interaccionan con el propio suelo como factor formador y
de carbono y energía. Descomponen los restos orgánicos por acción mecánica. Pueden
segregar enzimas que actúan sobre los compuestos orgánicos fuera de la célula, provocando
anoxigénico las sustancias orgánicas sufren una fermentación, con una liberación de
Simbióticos: Obtienen energía y nutrientes a partir de los seres vivos con los que se
Macrofauna (de 6 a 200 mm) Vertebrados, por lo general zapadores, tales como
Mesofauna (200 a 6000 µm) Pequeños invertebrados, tales como artrópodos, anélidos,
nemátodos y moluscos.
general, por cuatro fases a saber: a) Fase sólida; b) Fase líquida; c) Fase gaseosa y d) Fase
biológica. (59).
Fase sólida. La fase sólida del suelo está formada por partículas minerales y compuestos
orgánicos de naturaleza compleja. Los minerales pueden ser primarios o secundarios. Las
partículas gruesas del suelo, tales como: arena, grava y gravillas representan los primarios,
en tanto que, las arcillas constituyen principalmente los secundarios. Los sólidos orgánicos
están constituidos, bien por tejidos vegetales o animales frescos, o bien por complejos
Fase líquida. La solución del suelo constituye realmente el componente liquido del suelo,
integrado por agua y sales en ella disueltas. Por consiguiente, en esta fase los nutrimentos
se encuentran en forma simple y en estado iónico, susceptibles a ser absorbidos por los
organismos edáficos. La solución del suelo está ocupando parte del espacio poroso, y en
concentración en que se encuentran en la fase sólida y en la cambiable. Por ello, esta fase
no puede ser considerada una reserva nutricional. Además, los iones en solución pueden
Fase gaseosa. La fase gaseosa comprende sobre todo el aire, si bien pueden estar presentes
otros gases (anhídrido carbónico, etc.). La capa viscosa del agua adsorbida que presenta
propiedades intermedias entre la fase sólida y la líquida, suele incluirse en esta fase, pues es
Fase biológica. La fase biológica del suelo se caracteriza por poseer una población muy
acción en procesos tales como: la fijación del nitrógeno atmosférico, la acción de las
llegan al suelo. Esta fase biológica edáfica constituye una entidad indispensable para el
refiere comúnmente al aumento en la masa total de las células más que a cambios en un
El modo en que se expresa el crecimiento vegetal puede variar según el interés particular de
el peso de la materia seca formada a lo largo del ciclo vegetativo, lo que de algún modo
brinda un resultado integrado de dicho crecimiento. En otros casos, pueden ser la longitud,
microorganismos. (Cinco fases constituyen la curva, cada una de las cuales describe un
Una fase de adaptación durante la cual ocurren cambios internos, preparatorios para el
(a)
‘crecimiento equilibrado’. Las células se duplican (se dividen) a ritmo constante; (b)
Una fase estacionaria. Para los vegetales es un punto en el que las plantas alcanzan la
de muerte se acelera, haciéndose la fase exponencial. Para las bacterias esta muerte se
1.2 PLANTAS._
Entre sus adaptaciones están una cutícula cérea, poros a través de los cuales intercambian
gases, capas protectoras de células que rodean a las células reproductoras, y retención del
A partir de un antecesor común, divergieron dos linajes principales: los briofitos y las
plantas vasculares.
y de fijación. Son determinantes para la formación del suelo ya que apresuran los procesos
Traqueofitas o plantas vasculares. Son plantas que se caracterizan por tener un sistema
conductor especializado. Pueden agruparse informalmente en plantas vasculares sin
semillas. Las plantas con semillas pueden agruparse en gimnospermas, o plantas con
Las angiospermas o plantas con flores, son las más complejas así como las más familiares
de todas las plantas, además son las dominantes en nuestra era geológica actual. Se dividen
Las angiospermas presentan gran variedad de plantas útiles para el hombre en cuanto a la
una serie de procesos fisiológicos y metabólicos, entre los que se destacan los siguientes:
de compuestos orgánicos, los cuales a su vez son vitales para la constitución de los tejidos y
proceso puramente físico, controlado por la presión osmótica generada por las células y el
gradiente de tensión de vapor de agua creado por la evaporación de la misma en las hojas.
(19).
libera la energía necesaria para realizar otros procesos tales como la absorción de elementos
nutritivos o la síntesis de todos los productos del metabolismo vegetal: hidratos de carbono,
serie de elementos y unos factores ambientales que deben combinarse de la manera más
El agua y los elementos minerales o nutritivos son absorbidos del suelo por el sistema
aunque este ultimo es necesario en el suelo para asegurar la respiración de las raíces. La
luz y la temperatura son, junto con el agua, los principales factores climatológicos que
determinan la adaptación de las diferentes especies vegetales a las diversas áreas
geográficas.
1.2.3.1 Funciones.
• Producción de fitohormonas.
de una manera fuerte pero selectiva, por medio de sus exudados. Las algas y los
Las bacterias que reaccionan a la presencia de las raíces pertenecen a varios grupos
los bacilos cortos Gram negativos que, casi invariablemente, ocupan el mayor porcentaje de
la rizosfera comparado con la microbiota normal del suelo, que en su mayoría, resultan ser
comunes.
nutrientes contenidos en la materia orgánica o fijan nitrógeno del aire, ya sea simbiótica o
1. Exudados. Son compuestos de bajo peso molecular, varían de planta a planta, escapan
de las células por los espacios intercelulares y pasan al suelo gracias a las uniones entre
células o directamente por las paredes celulares epidérmicas. Estas son sustancias que
marchitamiento temporal, el daño a la raíz, los nutrientes orgánicos disponibles, los niveles
plantas muy jóvenes los microorganismos responden a las excreciones de las raíces más
molecular. Se liberan activamente tanto por la cofia de la raíz como por las células
epidérmicas. (44)
electrónico. Esta formado por mucílagos, células bacterianas y sus productos metabólicos,
Fase
sólida
Minerale
s
Primarios
Otros
mine rale s
se cundario
s
En la Figura 4 se observa la dinámica existente entre el suelo y la planta, que establece una
serie de interrelaciones entre los componentes o fases del sistema. Estas interacciones son
(Planta)
(e )
(a) (d)
N (Sólido) N (Solución) N (Raíz)
(b)
(c)
(c)
N (Cambiable)
(a) Solubilización y mineralización, (b) Fijación e inmovilización, (c) Intercambio iónico,
1.4 BACTERIAS._
1.4.1 Características generales. Las células bacterianas son muy pequeñas, de menos de
1 micra hasta 10 micras de longitud, y de 0,2 a una micra de ancho. Casi todas las especies
bacterianas son unicelulares, aunque las hay filamentosas o con cierto grado de unión, se
En ellas existe una menor diversidad morfológica, menor número de estructuras celulares
especializadas y tipos de agrupación; las especies bacterianas, sin embargo, cuando crecen
sobre un medio de cultivo sólido, difieren unas de otras en forma, disposición, estructura
interna de sus células y en su metabolismo; estas diferencias son las que nos permiten
Las células bacterianas esféricas o elipsoidales se denominan cocos. Las células cilíndricas
o alargadas se denominan bacilos.
Ciertas especies de bacterias muestran patrones de ordenamiento de sus células tales como
1.4.2 Condiciones del suelo que afectan al crecimiento de las bacterias. Muchas
condiciones del suelo afectan al crecimiento de las bacterias. Entre las más importantes
orgánica del suelo y la concentración de iones H+ en la solución del suelo, así como la
sistema. (50).
♦ Por medio de sus raíces proporcionan a las bacterias una humedad menos variable que
(45)
de crecimiento tales como el ácido indolacético, las giberelinas, las citoquininas y otras
asociados a las raíces, como las micorrizas. (13), (45), (68), (79).
disminuye el contenido de oxigeno disponible para los microorganismos. (19), (21), (50).
La Resistencia física: Las raíces y las bacterias oxigénicas solamente pueden crecer
en suelos que tengan un adecuado número de canales con lo que se asegura una buena
Humedad del suelo: Los suelos con alto contenido de materia orgánica y los de
textura fina (arcillosos) tienen una gran capacidad de retención de agua y nutrientes
Aireación: El sistema radicular y las bacterias oxigénicas sólo crecen en suelos bien
fluidos y gases.
♦ Aportan CO2 y otros componentes como el ácido láctico, el ácido acético e incluso el
♦ Los organismos del suelo aumentan tanto la materia orgánica como la forma y la
♦ Las plantas actúan como filtros frente a la radiación solar; además, regulan la
♦ Proporcionan información acerca de las condiciones del medio (suelo y clima). (50)
♦ Las plantas frenan la erosión eólica e interceptan el material transportado por el viento.
(50).
♦ Las plantas aumentan la infiltración y disminuyen la erosión por escorrentía superficial
♦ Las plantas interceptan las gotas de lluvia con lo que se evita el impacto directo y se
♦ Intervienen en el ciclo de numerosos elementos, C, N, P, Ca, Fe, Mn, entre otros. (13),
♦ Las raíces de especies herbáceas absorben agua en los primeros centímetros del suelo,
Las plantas pueden actuar como depuradores naturales frente a ciertos vertidos gracias a la
El suelo es un medio receptivo por excelencia, puesto que interacciona químicamente con
la litosfera, hidrosfera y la atmósfera y sobretodo, recibe el impacto de los seres vivos que,
reciente y hoy en día, la tecnología le confiere una importancia sin precedentes. Los
tecnología, han traído sin duda beneficios a la humanidad, pero igualmente crean la
El uso de hidrocarburos fósiles en todos los niveles de la actividad humana, los sitúa entre
residuos que alcanzan niveles críticos o que exceden los límites establecidos por las
relación inversa entre éstos en función del tiempo. (18), (50), (54).
1.7.1 Efectos del contaminante sobre el suelo. Según Genout et als. 1992, los efectos
nocivas para las especies vivas. No obstante, las situaciones más problemáticas ocurren en
NOEC Concentración máxima que puede existir en el medio sin que se produzcan
Los estudios de contaminación del suelo se pueden llevar a cabo por dos vías diferentes: 1)
realizando análisis químicos de los suelos o de las plantas, lo cual permite evaluar el nivel
suelo que se supone contaminado. El uso de especies indicadoras pueden proporcionar una
hidrocarburo puede persistir, produciendo efectos drásticos al ecosistema. Es por esto, que
hidrocarburos implicados.
Según las características químicas del crudo, este puede producir toxicidad a los
En general, los efectos tóxicos están asociados con los componentes de bajo punto de
tiempo debido a que las fracciones responsables del daño se evaporan afectando la
composición inicial del producto derramado, aumentando de esta manera su densidad y
Las cadenas cortas son más difíciles de degradar que las cadenas más largas, sin embargo,
hidrocarburos con menos de 10 carbonos, tienden a ser tóxicos por su alta solubilidad, sin
embargo, la mayor parte de ellos se pierde por volatilización más que por biodegradación.
Los n- alcanos y los n- alquilaromáticos, entre Cl0 y C22 son considerandos los menos
En la Figura 5, seDegradación
observan la biodegradación de n – Degradación
alcanos donde se inicia por la
Oxigénica Anoxigénica
modificación monoterminal del alcano hacia un alcohol primario, seguido por la oxidación
H C – (CH2)n – CH2 – CH3 H3C – (CH2)n – CH3 –
secuencial hacia3 el correspondiente aldehído y ácido monocarboxílico. La degradación de
CH2
los ácidos carboxílicos continúa por la vía de β-oxidación con la formación de unidades de
acetato como acetil – CoA; así, los ácidos carboxílicos se dividen sucesivamente en dos
carbonos. Las unidades divididas de acetato de los alcanos se metabolizan en las vías
Los alcanos cíclicos insustituibles, componentes principales del petróleo crudo, son
ambiente. Aunque éstos se extienden en el ambiente debido a los procesos naturales y a las
actividades humanas, pocos microorganismos son hábiles para utilizar los cicloalcanos para
cíclicos por poblaciones mezcladas en el ambiente inicia con el cometabolismo y sigue con
Los compuestos aromáticos también son biodegradables, aunque lo son menos a medida
que aumenta el número de anillos aromáticos. Los alcanos, los alquilaromáticos y los
aromáticos por encima de C22 presentan baja toxicidad, pero sus características físicas,
del Catecol y subsecuente clivaje del anillo bajo condiciones oxigénicas se muestran en la
Figura 6b). Los Procariotes introducen el oxígeno molecular completo mediante una
6b). En ambos tipos de organismos el anillo aromático del Catecol se abre por cualquiera
puede incrementar o disminuir la tasa de bioconversión. Los grupos funcionales como nitro
compuesto en el ambiente; los grupos hidroxilo, metoxilo y carboxilo son atacados más
hay que tener en cuenta que un crudo típico contiene decenas de miles de compuestos que
diferentes. (46).
Propiedades físicas de los hidrocarburos que determinan su persistencia sobre el
Para que el crudo y sus metabolitos puedan ser degradados por los organismos y disminuya
su persistencia en el suelo, éstos deben estar disponibles en fase liquida, proceso que se
dificulta cuando intervienen mecanismos de retención o inmovilización por parte del suelo,
y entre ellos el más importante es el de adsorción, fenómeno mediante el cual una sustancia
contaminante entre 1-octanol y agua (Kow) y que determina el grado de adsorción del
contaminante por parte del suelo. Los compuestos de moléculas pequeñas y polares
presentan bajos valores de Kow que indican alta solubilidad de agua y poca tendencia a
adsorberse en los suelos; por el contrario, compuestos con moléculas grandes y poco
polares o apolares, presentan altos valores de esta constante y están asociados con los
(77).
Tamaño de las partículas. Habrá mayor adsorción cuanto más pequeñas sean las
partículas del suelo. Esto se debe a que las partículas pequeñas aportan una gran área
superficial para la adsorción de los productos químicos. La arcilla es el nombre dado a las
partículas más pequeñas del suelo (aproximadamente 0,002 mm de diámetro). (18), (24).
Superficie disponible. Los suelos con mucha materia orgánica y que se caracterizan por
su extensa superficie, adsorberán, y con ello inactivarán más contaminantes que otros
Probablemente los dos componentes inanimados más importantes del suelo en relación con
orgánica consiste principalmente en compuestos húmicos que presentan una alta capacidad
de intercambio de cationes. Los grupos carboxilo, amino y fenol aportan centros para que
se formen enlaces de hidrógeno con las sustancias tóxicas. El humato de sodio presenta
a los coloides del suelo, los cuales pueden adsorber sustancias tóxicas reduciendo de esta
Existen en la actualidad diferentes metodologías que pueden utilizarse para eliminar los
del tipo de suelo, de la naturaleza química y física de los contaminantes y del horizonte del
Situ, el suelo es excavado y tratado en el mismo terreno y, finalmente, off Site o ex Situ,
adecuado en un lugar distinto de donde se encuentra el suelo afectado. (1), (18), (33), (35),
(53).
1.8.1 Técnicas de limpieza por tratamiento “ex – Situ”. Las técnicas se pueden
clasificar como:
• Tratamiento térmico. Es la incineración con la cual se lleva a cabo una combustión
suelo contaminado sobre una geomembrana para evitar el escape de lixiviados, airearlo
mezcla para promover un mejor contacto entre los microorganismos, los contaminantes, el
oxígeno y los nutrientes, controlando los factores bióticos y abióticos. Una forma especial
celdas aireadas y llevar a cabo un sistema de control de pérdidas de lixiviados. (1), (34),
(58).
arcilloso, con el fondo recubierto de una capa de plástico de polietileno, que dispone de
drenaje para tratar el agua de percolación. Por encima de la capa de polietileno se coloca
arena limpia para proteger la capa de plástico y para ajustar el drenaje. El sistema dispone
de rociadores, con los que se va añadiendo agua, nutrientes y microorganismos (18). (33)
1.8.3 Tecnologías de biodegradación 'in Situ'. Las técnicas se pueden clasificar como:
agentes acuosos dentro del sitio contaminado. Los contaminantes solubles del suelo se
1.8.3.3. Bioestimulación. Es una de las tecnologías más empleada por los científicos del
mundo. En ella se introducen los nutrientes necesarios al sistema para que los
Los procesos que conducen de una manera natural a la biodegradación son bastante lentos,
por este motivo se suele aumentar la temperatura, añadir oxígeno, agua o nutrientes, así
como también ajustar el pH, brindándole a los microorganismos las condiciones adecuadas
las que los procesos biológicos naturales no son suficientes para llevar a cabo la
que se utilizan en el proceso pueden ser obtenidos por aislamiento a partir del suelo a
rehabilitar y pueden ser 'autóctonos' o exógenos, es decir, son traídos de otro ecosistema y
degradar el sustrato.
expensas de la habilidad del microbio para producir otras enzimas. Por lo tanto al ser
embargo, cuando los sustratos preferidos están presentes, los microorganismos adaptados
serán la especie dominante sobre las poblaciones microbianas nativas. (1), (33), (85).
pared celular del microorganismo, que introducen uno o más átomos de oxígeno en el
compuestos aromáticos, que tienen como función la oxidación inicial del anillo aromático.
(8), (46)
Los microorganismos emplean el sustrato como fuente energética para cumplir con sus
actividades catabólicas, pero también requieren que el sustrato proporcione los materiales
suficientes para la síntesis del material celular, tales como protoplasma, ácidos nucleicos,
crecimiento de las bacterias que esté dirigido por una serie de parámetros como lo son: la
temperatura, la relación de oxigeno, el pH, la energía, el agua, las sustancias tóxicas y las
el cultivo y su diseño debe ser tal que asegure un ambiente uniforme y adecuado para los
manera:
Mantener las células uniformemente distribuidas en todo el volumen del cultivo a fin de
Diseñar el biorreactor de tal forma que permita mantener el cultivo axénico o libre de
contaminantes, una vez que todo el sistema haya sido esterilizado y posteriormente
Hay dos tipos de biorreactores de uso muy difundido: a) el tipo tanque agitado y b) el tipo
tanque y es distribuido por una corona que posee pequeños orificios espaciados
regularmente. El chorro de aire que sale de cada orificio es 'golpeado' por las paletas de la
turbina inferior generándose de este modo miles de pequeñas burbujas de aire, desde las
cuales difunde el Oxígeno hacia el seno del líquido. El sistema de agitación se completa
con cuatro o seis deflectores que tienen como fin cortar o romper el movimiento circular
que las turbinas imprimen al líquido, generándose de este modo mayor turbulencia y mejor
En los reactores de tipo 'Air Lift' es el mismo aire inyectado al cultivo lo que promueve la
agitación. Consiste de dos cilindros concéntricos; por la base de uno de ellos, por ejemplo
en el interior, se inyecta aire. De este modo se genera una circulación del líquido
El aire se inyecta solo en una parte de la sección transversal del tanque, llamada ''riser'. La
presión de gas y la disminución de la densidad del líquido en ese punto, hacen que el
líquido fluya hacia arriba. El aire abandona al líquido en el tope del reactor, dejando un
líquido pesado y libre de burbujas que recircula por el ''dowcomer''. La circulación del
el ''dowcomer''
a b c
interior del tanque en las figuras 8(a) y 8(b), tanto el ‘riser’ como en el ''dowcomer'' están
separados por un bafle interno. En el asa externa de la figura 8(c) los tubos verticales de
separación están conectados por una sección horizontal en el tope y en el fondo. (2), (25)
puedan limpiar, corregir, atrapar y retener distintas sustancias químicas del medio ambiente
o que sustente una población específica de bacterias capaces de llevar a cabo la degradación
2) Fitodescontaminación
En general, estos procesos están bien documentados y ocurren naturalmente, pero son
El proceso con contaminantes orgánicos, sin embargo, está sólo empezando a ser un factor
que no ocurre con los sitios contaminados con inorgánicos (13), (15), (16).
Humificación. Las enzimas de las plantas y las bacterias incorporan los contaminantes
(13).
Lignificación. Los componentes tóxicos son atrapados irreversiblemente por la pared
1.8.3.5.1.1 Procesos de las plantas que benefician la estabilización. Estos procesos son:
(lignificación). (15).
siguientes:
• Fijación física: fase sólida, difusión dentro de las estructuras del suelo (arcillas,
Fitovolatilización
Fitodegradación
Fitoextracción
Fitoestabilización
Se selecciona una o varias de este tipo de plantas y de acuerdo a los metales presentes y a
las características del lugar se plantan en un sitio. Después de un tiempo, cuando las
plantas han crecido, se cortan y este tejido fino, rico en contaminantes acumulados es
Este procedimiento se puede repetir la cantidad de veces que sea necesario para reducir a
plantas, las cenizas deben colocarse en un vertedero para desechos peligrosos; el volumen
de basura tóxica producida por la cantidad de ceniza será solo alrededor del 10% del
volumen de los desechos que habría que eliminar si se excavara el suelo contaminado para
volatilización ocurre tanto desde los retoños de la planta o raíces, como desde la superficie
absorben agua junto con contaminantes orgánicos. Cuando las plantas toman los
contaminantes tienen dos vías para la degradación, a) los acumula porque no le son tóxicos
b) los elimina porque le son tóxicos; estos contaminantes pueden llegar hasta las hojas y
Bombeo orgánico. Una planta se puede comparar a una bomba dirigida por energía
solar. Los árboles pueden realizar una acción de bombeo orgánico cuando sus raíces bajan
hacia la capa freática, formando una masa densa de raíces que absorben gran cantidad de
agua.
Así mismo, los árboles plantados en vertederos como sustitutos orgánicos de la tradicional
capa de arcilla o de plástico absorben agua de lluvia que, de lo contrario, se filtraría por el
simples se usan para acelerar el crecimiento de las plantas. Las plantas tienen enzimas que
degradan solventes clorados y otras que degradan herbicidas. (Figura 9) (13), (14), (23).
las raíces de las plantas, su microbiota asociada y / o los productos excretados, destruyen el
Las sustancias naturales liberadas por las raíces de las plantas estimulan la degradación de
Además, la interacción sinérgica entre los microorganismos y las plantas puede ser
Las micorrizas aumentan el área de superficie del suelo y proporcionan una capacidad
enzimática adicional.
detoxificación.
extracción. Se identifican:
Es una tecnología ‘in Situ’ que incluye menor perturbación del lugar, y emisiones
ser modificada para aumentar su capacidad y selectividad extractivas. (71), (73), (75).
biodegradación. (13).
condición de las plantas son fácilmente monitoreados. Una mirada casual puede decir que
ellas existen, que están creciendo o si necesitan agua o fertilizante. (13).
Alcanzan únicamente la profundidad hasta la cual llegan las raíces y pueden usar
suelos, cursos de agua y agua subterránea poco profundos. (13), (14), (23), (73).
Todas las raíces de las plantas requieren oxígeno para la respiración, así, las raíces no
pueden penetrar bajo condiciones, donde la textura del suelo, el volumen del agua o las
que una especie resistente sea seleccionada o que el suelo sea pre-tratado para reducir la
fitotoxicidad. (13).
Comparada con otras tecnologías empleadas para eliminar residuos peligrosos, esta
El suelo está desnudo y sujeto a erosión durante las fases tempranas de establecimiento
de la planta. (13).
Puede ocurrir que los compuestos solubles sean liberados de la textura del suelo a través
Las variedades deben adaptarse al clima de la región. Sin embargo, la selección final
orgánicos.
Deben aplicarse prácticas agronómicas tales como, cultivos de las semillas o trasplantes
rendimiento.
requerirá agregar a las plantas mucho más nitrógeno y fósforo de los necesarios.
iniciar el proceso Fitocorrectivo. Por ejemplo, las estructuras fibrosas de la raíz en las
superficie más grande de colonización y un mejor contacto suelo / raíz. Además las plantas
que utilizan el sistema fotosintético C4 son más eficaces en el uso de CO2 y pueden tolerar
el calor y la sequía mejor que las plantas con sistema C3, por consiguiente, sería importante
una comparación de las plantas C3 con C4. Algunas plantas dicotiledóneas poseen raíces
más profundas y tienen mayor capacidad para pasar grandes cantidades de solución
medio de la Fitovolatilización. (13), (48), (51), (52), (61), (72), (73), (78).
exudados de la raíz son uno de los componentes más importantes de las interacciones planta
dramáticamente según la edad, el estado nutritivo y las especies de plantas. Los factores
micorrizas.
Requerimientos de Oxígeno. Casi todos los organismos necesitan oxigeno para utilizar
la energía contenida en los alimentos orgánicos. Este gas se libera durante la fotosíntesis y
y aromáticos por parte de las bacterias y las plantas involucran la oxidación del sustrato por
oxigenasas.
La disponibilidad del oxígeno edáfico depende del tipo de suelo, de su saturación y de las
acciones de los organismos sobre él. El contenido de aire en el suelo disminuye cuando el
las condiciones óptimas de humedad en el suelo proporcionadas en este caso por las
que sean aceptoras de electrones. Los aceptores de electrones más comunes presentes en el
suelo son: O2, NO3, S042- y CO2. El aceptor de electrones establece el tipo de metabolismo
ésta es, por término medio, la relación elemental en las células. En suelos altamente
contaminados su concentración es muy baja. Debe señalarse que también son necesarias
pequeñas cantidades de otros elementos como K, Mg, Ca, Fe, Na, Co, Zn, Mo, Cu y Mn.
pH. El pH afecta la habilidad de los organismos para dirigir sus funciones celulares, el
cuando los valores de pH están comprendidos entre 4 y 9. (2), (4), (5), (50).
temperatura decrece la actividad microbiana y las reacciones bioquímicas de las plantas así
organismos vivos. Cuando la temperatura está comprendida entre 21º y 38ºC (70º a 100º F),
superficie del suelo está controlada por la disponibilidad de humedad más que por cualquier
internos como el agua afecta el crecimiento de las células. El nivel óptimo de humedad
para las plantas superiores suele ser el mejor para casi todas las bacterias. El contenido de
humedad del suelo afecta tanto el valor como el nivel tóxico efectivo de los contaminantes,
Los niveles de humedad inferiores al 40% disminuyen, la actividad de las plantas y de las
bacterias ya que limita tanto el movimiento celular como las reacciones metabólicas y, por
encuentra en la atmósfera en cantidades muy pequeñas; sólo constituye el 0.030% del aire
(300 ppm.) por volumen, o sea 1/700 del 02 presente en la atmósfera. Se necesita una
llamada oxidación fotoquímica, que puede implicar la degradación diaria de 0.1% del
derrame por día. Esta reacción viene limitada por la ausencia de luz solar una vez
raíces de las plantas captan rápidamente contaminantes de cada una de las siguientes fases
del suelo:
Fase gaseosa. La captación de los contaminantes volátiles encontrados en la fase
gaseosa del suelo, por medio de las raíces de las plantas, es un mecanismo importante para
algunos compuestos (como el naftaleno), incluso para aquéllos con presión de vapor
Fase líquida. Los contaminantes encontrados en la fase líquida del suelo, son captados
por las raíces de las plantas por difusión y flujo de masa. Sin embargo, los compuestos
muy solubles con afinidad pequeña para los sólidos del suelo también están sujetos a
lixiviar fuera de las zonas de la raíz y pueden ponerse físicamente indisponibles para la
captación de la raíz.
La lipofilicidad es “el equilibrio entre la afinidad del producto químico para las fases
de la planta.
Los compuestos solubles en agua (un Kow bajo) son fácilmente transportados a la rizosfera
por difusión y flujo de masa. Además, para su absorción, las moléculas no solamente
dependen de la Kow sino que generalmente deben estar en tamaños moleculares menores a
la dispersión coloidal; las moléculas muy grandes tienen poca probabilidad de entrar a la
Fase sólida. Las raicillas y pelos están, en muchos casos, en íntimo contacto con las
superficies coloidales del suelo. En efecto, esa relación es tan estrecha que se cree que los
contaminantes adsorbidos pasan de los sólidos del suelo a la planta sin la influencia
coloidal. Sin embargo, comparando el área de un suelo con el área de una raíz, es difícil
disuelta en la fase liquida del suelo con valores por debajo del log K ow, es transportada a
células porosas del espacio libre de la raíz, por medio del flujo de masa. Este movimiento
inducido por la transpiración. Si la planta realiza una absorción de la solución del suelo
La solución contaminante disuelta que entra a la raíz debe atravesar primero la epidermis y
solución por la presencia de una barrera xerosa llamada banda de Caspary. Una vez se
dividen los compuestos dentro de las membranas lipofílicas, de la banda de Caspary estos
necesitan ser desorbidos en una solución acuosa para poder entrar en los vasos de xilema
Se estima una cantidad insignificante de flujo total vía apoplástica, disponible sólo cerca de
la punta de la raíz donde la banda de Caspary aún no se ha desarrollado bien, a menos que
Caspary, b) la desorción fuera de esta membrana. El primer paso favorece más a los
compuestos lipofílicos; el segundo paso para la desorción favorece más a los compuestos
hidrófilos. (13).
Una vez que la sustancia entra en el tejido vascular, puede ser transportada con rapidez
desde las raíces hasta las hojas a través de la corriente de transpiración por el xilema o más
lentamente desde las hojas hacia abajo por el floema. El transporte a través del floema es
complejo y no se comprende por completo, pero parecen existir pocas dudas de que las
sustancias tóxicas que entran en el floema pueden ejercer un efecto adverso severo en la
planta. La absorción de sustancias a partir del sistema vascular varía a lo largo de la planta,
estudios usan el análisis por compuestos radioetiquetados. Tales estudios siempre son
(13).
Aun se desconocen receptores específicos en las raíces para la toma de estos contaminantes,
sedimentos.
los tipos de metabolismo xenobiótico que ocurren en el hígado del mamífero mediante
ataque enzimático que produce compuestos más solubles en agua. En los sistemas de
mamíferos la disposición final termina a menudo en rutas excretoras con las cuales la planta
no cuenta. En principio, tanto en la planta como en los sistemas metabólicos del hígado se
pueden dividir en las mismas tres fases: transformación, unión, y disposición final. (13),
(75).
especializados responsables de los procesos de detoxificación del hígado con formas muy
similares a estas enzimas (isoformas) en varias especies de plantas, a saber:
células vivas. La hidrólisis ácida parcial del glutatión produce dos dipéptidos y cada uno
posee un sitio activo compuesto del sitio GSH (sitio G) de atadura constante y uno más
variable (sitio H) para los co-substratos hidrófobos. La GSTs también puede actuar
ligando hidrófobos a otros espacios del sitio – H. La GSTs de las plantas son
sorprendentemente diversas, pero puede agruparse como Tipo I o de Tipo IV basados en las
los sistemas metabólicos de la planta se opacan comparado con sus análogos microbianos.
ilustrarse fácilmente comparando respectivamente las habilidades de las plantas con las de
los microbios. En las plantas, hay quizás cuatro reacciones de ruptura de enlaces de C bien
documentadas. En los microbios hay tal vez una docena. Este tipo de comparación ha
Algunas enzimas provenientes de los exudados radiculares o de raíces muertas, son activas
en el exterior de la raíz y están localizadas en el suelo. Entre ellas están: (13), (75).
dicotiledóneas); reduce los grupos nitrato de los compuestos nitroaromáticos, para obtener
Lacasa Otras
Clivaje del anillo reacciones
y
productos
Figura 10. Propuesta de biodegradación de TNT por la Nitroreductasa y la Lacasa
encontradas en las plantas (Tomado de Steven 1999)
Cetona.
suelo. (13).
oxidasa, la fenol - oxidasa, la oxidasa del ácido ascórbico y la peroxidasa que dan
resistencia a las plantas para las sustancias tóxicas con las cuales tenga contacto. (20).
2. METODOLOGIA.
físicas, químicas y microbiológicas del suelo y del crudo, las cuales fueron utilizadas
valoró su germinación y crecimiento en dicho suelo. Una vez valorada cada especie
modificado con crudo y su adaptación a un medio nutritivo modificado con crudo Cusiana.
Una vez valorada cada cepa, se escogieron los microorganismos que presentaron una mayor
especificas como: a) Cinéticas para cada uno de los microorganismos, usando como
de biosurfactante.
biodegradación.
Una vez valoradas las especies vegetales tolerantes al crudo y las condiciones óptimas de
Para estimar si existieron relaciones antagónicas o sinérgicas, que influyeron sobre los
cultivadas, d) Efecto del crudo en el desarrollo de las plantas. Con estos cuatro análisis se
determinó, si la relación antagónica o sinérgica era aportada por las plantas, por las
Caracte
Las variables estudiadas para observar rización
las relaciones plantas – bacterias fueron: a)
Físico-química y
microbiológica
Población bacteriana (se estimó por recuentos en cámara Neubauer), b) Altura del vástago,
c) Diámetro del tallo, d) Cobertura de las plantas, e) Biomasa de la raíz, f) Biomasa total de
De rrame
las plantas, g) Análisis nutricional, h) Indice de tolerancia. inducido
Biorremediación
Suelo Suelo
De crudo
Por medio de un análisis del tejido foliar de las plantas cultivadas, se valoró la
Aislamiento y Inte mpe rism
selección o
de pesados (Ni) aportados
contaminación inorgánica por metales por el hidrocarburo Cusiana.
bacterias
Cinética microbiana
Control flujo de aire
Valoración
2.2 ESQUEMA capacidad
GENERAL DE TRABAJO.
biodegradativa Biorre actor para Estudio de los
cre cimie nto e fe ctos de l crudo
bacte riano e n las plantas
Selección
Fitobactorremediaci Fitorremediaci
Plantas
ónRecuento bacteriano ón
Porcentaje de degradación resistentes al
Crecimiento de plantas (Variables crudo Cusiana
agronómicas)
Fitobactorremediación
2.3 SUELO
2.3.1 Área de estudio. La presente investigación se realizó con el apoyo del CENTRO
300 m2.
Del área del terreno asignada se tomaron 600 Kg. de suelo; 400 Kg. de este suelo se
mezcló, tamizó, homogeneizó y contaminó con crudo Cusiana al 30 % p/p. Los 200 Kg.
cantidades iguales de 500 gramos, los cuales se utilizaron para el análisis físico – químico y
microbiológico.
de estudio.
Se utilizó el método de recuento de colonias por agar (‘Plate count’) para determinar el
erlenmeyer que contenían 95 mL. de agua peptonada, se agitaron durante dos horas cada 20
cada tratamiento una alícuota de 1 mL. con el fin de preparar la batería de diluciones en dos
tubos de ensayo que contenían 9 mL. de solución salina estéril. Se prepararon diluciones
dilución se tomó 1 mL.. con pipeta serológica para ser sembrados por extensión en cajas de
petri con agar recuento; Las cajas se incubaron a temperatura ambiente de manera invertida
de 24 -36 horas. En la cámara de Quebec se contaron las UFC (Unidades formadoras de
colonias / mL.) en las cajas que presentaron un crecimiento entre 30 y 300 colonias.
2.3.2.2.2 Aislamiento de bacterias presentes en el suelo. Para aislar las bacterias, se llevó
gramo en 20 recipientes con 20 mL. de agua peptonada al 2.5 % p/v cada uno. Se
sembraron por agotamiento en varias cajas de Petri con un asa de punta redonda. Las cajas
2.4 CRUDO.
2.4.1.1 Tipo de crudo. El crudo que se utilizó para la realización de este proyecto fue
2.4.1.2 Propiedades físicas. Las principales propiedades físicas del crudo utilizado se
profundidad máxima a la cual el crudo penetró en el suelo. Para ello se tomaron muestras
del suelo a 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 y 80 cm de profundidad, las cuales fueron diluidas en
agua y dejadas en reposo durante 24 horas. Pasado este tiempo, se procedió a la búsqueda
porcentaje de evaporación del crudo Cusiana. Para tal efecto, se depositaron por triplicado
50 mL. de crudo en tres frascos abiertos a condiciones de campo bajo techo por 20 días. Se
evaporación.
2.4.4 Caracterización microbiológica. Para el aislamiento de bacterias, se sembraron por
agotamiento (la cantidad de crudo tomada por un asa de punta redonda), en varias cajas de
Petri que contenían medios de cultivo selectivos: agar nutritivo modificado (agar nutritivo
resultantes.
2.5 PLANTAS.
campo
2.5.1 Selección de plantas para las pruebas de biodegradación. Los siguientes factores
semillas, tallos, rizomas, bulbos y raíces; desarrollo rápido de raíces y partes aéreas.
biodegradación.
El tipo de reproducción seleccionado para obtener mejores resultados en corto tiempo fue el
Nombre
Especie Familia Características. Reproducción
Vulgar
Especie perenne que crece en matojos, muy
Hyparrhenia Pasto adaptado al clima cálido, resistente a la Sexual
Gramíneas
rufa puntero sequía, a las quemas y al pisoteo, no es muy vegetativa
exigente en suelos
Especie perenne de crecimiento erecto, tiene
Dichanthium Pasto gran macollamiento; resistente a la humedad y Sexual
Gramíneas
aristatum angleton a la sequía. Se adapta a diferentes tipos de vegetativa
suelos.
Especie perenne de crecimiento en matojo,
Brachiaria
está muy bien adaptada al clima cálido, es
decumbens. Pasto Sexual
Gramíneas resistente a la sequía, a las quemas, soporta
Brachiaria braquiaria vegetativa
bien las condiciones de suelos ácidos y pobres
brizantha
en nutrientes
Puede ser Brachiaria radicans o Brachiaria
plantaginea es una especie de muy reciente
Brachiaria introducción. Son plantas perennes, con
vegetativ
spp. Gramíneas Braquipará estolones duros que emiten raíces en los
a
nudos y dan origen a nuevas plantas. Tallos
decumbentes, nudos densamente pilosos,
vainas pubescentes de 10 a 20 cm de longitud.
Especie perenne de crecimiento en macollas,
crece en una amplia variedad de suelos, desde
Andropogon fértiles hasta infértiles; se caracteriza por Sexual
Gramíneas Andropogon
gayanus tolerar suelos de muy baja fertilidad, ácidos, vegetativa
de textura suelta y tolerante a veranos
prolongados
Especie perennes de crecimiento en matojos.
Saccharum Caña vegetativa
Gramíneas Se adapta a gran diversidad de suelos,
officinarum forrajera (Cepas)
resistente a la sequía.
Crece bien hasta las alturas de 1.800 metros
sobre el nivel del mar, las temperaturas más
Cajanus
Fabáceas Guandul favorables están entre 20 y 30º C, se Sexual
cajan
desarrolla en suelos pobres con buenos
resultados en suelos sueltos o francos
Anual, trepadora, de crecimiento rápido.
Canavalia
Fabáceas Canavalia Tiene raíces profundas y es resistente a la Sexual
ensiformis
sequía
Las plantas son postradas o rastreras,
Desmodium Sexual
Fabáceas Amor seco subarbustos erectos Crece en un amplio rango
spp vegetativa
de climas y son resistentes a las sequías.
Cuadro 1B Plantas seleccionadas para las pruebas de Fitobactoremediación (II parte)
Nombre
Especie Familia Características Reproducción
Vulgar
Crece en forma de enredadera, de duración
perenne, raíces profundas, abundantes y ricas
Pueraria
Kudzu en nódulos. Crece bien en climas cálidos, es
Fabáceas Sexual
tropical tolerante a la sequía moderada a la alta
phaseoloides
humedad del suelo, es poco exigente en
suelos.
Se adapta bien desde el nivel del mar hasta
3.200 m.s.n.m. se produce bien en clima
Medicago
Fabáceas Alfalfa cálido y medio, exigen suelos fértiles, bien Sexual
sativa
drenados, raíz profunda lo que le da
resistencia a la sequía
Crotalaria Especie erecta, anual y magnifica fijadora de
Fabáceas Crotalaria Sexual
juncea nitrógeno.
Vigna
Fabáceas Caupi Leguminosa anual, de crecimiento vigoroso. Sexual
ungiculata
Leguminosa arbórea y perenne cuya rusticidad
y reproducción vegetativa le permite
desarrollarse en condiciones adversas. Con
Gliricidia Vegetativa
Fabáceas Matarratón raíces profundas, se desarrolla en una amplia
sepium (estacas)
variedad de suelos, incluyendo los ácidos y
los erosionados, soporta bien la sequía,
prefiere los suelos livianos y profundos.
Leucaena Mimosáceas Leucaena Se comporta bien en suelos de baja fertilidad, Sexual
pedregosos y pesados. Tiene la propiedad de
leucocephala profundizar fácilmente su raíz pivotante en
corto tiempo.
Mimosa Mimosáceas Dormidera Leguminosa de baja talla, altamente invasora. Sexual
pudica Especie resistente a condiciones adversas. Vegetativa
Requiere suelos profundos, bien drenados y
Boehmeria ricos en materia orgánica, susceptible a la Vegetativa
Urticáceas Ramio
nivea sequía. Posee gran capacidad para extraer (Cepas)
minerales del suelo.
Arbol ornamental de más de 5 mts de alto,
origen desconocido, bastante ramificado
desde su base, hojas alternas compuestas
Swinglea trifoliadas, imparipinadas, el foliolo central Sexual
Rutáceas Swinglea
glutinosa más grande, oblongo a lanceolado, siempre vegetativa
verde oliva, brillante. Fruto similar a un
limón, grande, poco jugoso cascara bastante
gruesa. (74).
Planta erecta y anual, de 90 cm a 2.5 mts de
Helianthus Semilla
Asteraceas Girasol alto, hojas en espiral, fruto recorrido por
annuus L. sexual
rayas. Se adapta bien a diferentes climas. (74)
vegetativa y sexual con lo que se evitó dar resultados desalentadores como lo es la baja
tratamiento pregerminativo. Además, todas las semillas se desinfectaron con agua destilada
hidropónico de Jensen con crudo / sin crudo. En esta prueba se utilizaron 50 semillas por
especie las cuales fueron puestas en cajas de petri que contenían algodón y medio de Jensen
modificado con crudo al 0%, 3%, 7%, y 15% durante una semana.
Medio de Jensen.
H3BO3 0.31 g
NaMoO4 0.01 g
CuSO4.5H2O 0.01 g
KCl 0.041 g
CaCL2 0.001g
Agua destilada 250 mL.
CaHPO4 1.0 g
K2HPO4 0.2 g
MgSO4. 7H2O 0.2 g
NaCl 0.2 g
FeCl3 0.1 g
Solución ‘Stock’ 5 mL.
Agua destilada 1000 mL.
contaminados.
y sustrato de arena modificada con crudo al 10% y 30%. En esta prueba se sembraron 100
(con agua caliente) y en germinadores de arena esterilizada más crudo al 10% p/p y al 30%
p/p, a una profundidad de 1 cm, con riego constante, a fin de mantener el valor de humedad
óptimo para la germinación. Posteriormente para su elección se tomaron las semillas con
Se efectuó un registro diario de las plantas germinadas hasta seis días después, fecha que se
tomó como fin de la germinación e inicio del período de crecimiento (tiempo cero).
2) Crecimiento de las plantas de estudio en un sustrato contaminado con crudo Cusiana.
de arena y sustrato de arena modificada con crudo al 10% y 30%. En esta prueba se hizo el
cultivadas en un suelo sin crudo y un suelo con crudo al 10% y 30%. En esta prueba se
longitud y 1.5 cm de diámetro a la circunferencia media del tallo, de madera suave (verde)
humedecieron y se les depositó una capa delgada de hormonagro, luego fueron sembradas
en suelos patrón y suelos contaminados con crudo. Se efectuó un registro diario de las
crudo y un suelo con crudo al 10% y 30%. En esta prueba se tomaron cepas provenientes
del área de estudio con raíces desnudas y desinfectadas con hipoclorito de sodio al 5%;
pruebas de crecimiento se realizaron por un período de tres meses en el cual las plantas
brizantha con Mimosa pudica en el suelo contaminado con crudo y en otro sin crudo
(patrón).
2.6 BACTERIAS.
modelos:
agar nutritivo modificado con crudo Cusiana. Con este modelo se buscó la influencia de
las Bacterias en el desarrollo fisiológico de las plantas, para que éstas últimas se encargaran
de la fitorremediación.
Los microorganismos que se utilizaron en este tratamiento fueron obtenidos por aislamiento
‘foráneas’ crecieron inicialmente por separado en agar nutritivo modificado (ANM), el cual
Este medio se modificó adicionando extracto de raíces al 10%, suelo (10 g/L) proveniente
de los semilleros y crudo (0.5, 1 y 2%) con el fin de estimular la memoria metabólica y
conseguir su adaptación.
microscópico al cultivo obtenido y además se tomaron muestras con montaje en placa para
su posterior identificación.
2) Adaptación de los microorganismos para la bioaumentación en medio con sales. . Con
Los microorganismos 'autóctonos' que se utilizaron en este proceso fueron obtenidos por
pruebas de crecimiento.
vidrio de 300 mL. que contenían 120 mL. del medio con sales (A) modificado con crudo al
1% en cada uno de ellos, pasada una semana se tomó 1 mL. de este medio y se inoculó en
un medio con sales (A) modificado con crudo al 3%, este procedimiento se repitió a
concentraciones crecientes del contaminante hasta llegar a una concentración del 10%.
Estos frascos fueron sellados con un tapón de caucho a través de los cuales se introdujeron
dos mangueras de plástico: una para suministro de oxígeno, la siguiente para salida de
siguiente: (24).
posterior identificación.
El fundamento teórico de las pruebas realizadas para las bacterias se presenta en el AnexoB
un medio nutritivo y medio nutritivo modificado con crudo al 10% dentro de las
a) Medio nutritivo A, modificado con crudo (1 g/L, y 10 g/L) y extracto de raíces de las
b) Medio de agar avena (AAC) modificado con concentraciones progresivas de crudo (0.5,
Inicialmente las cepas crecieron en un medio nutritivo A y en agar avena. Debido a las
altas contaminaciones con hongos en este último, se decidió cultivar y aislar las cepas en el
agar nutritivo. Estas cepas fueron aisladas por sus características morfológicas y se
inocularon individualmente en dos frascos de vidrio de 300 mL. que contenían el medio
de 350 mL. de: a) Pool de Bacilos + medio A + crudo al 10%, b) Pool de Bacilos + medio
los inóculos y se diluyeron por separado en cuatro frascos que contenían 19 mL. de
solución salina estéril, de cada uno de ellos se tomó 1 mL. para realizar la valoración del
recuento inicial de UFC / mL. y los 19 mL. restantes se adicionaron a cuatro frascos que
contenían 2500 mL. del medio nutritivo A. El cultivo se mantuvo a temperatura ambiente y
Cada 24 horas se retiró de cada cultivo una alícuota de 1 mL. con el fin de preparar la
batería de diluciones en tubos de ensayo con 9 mL. de solución salina estéril. Para
desde 1/10 hasta 1/100.000.000. De cada dilución se tomó 1.0 mL. con pipeta serológica
para ser sembrados por extensión en cajas de petri que contenían agar de recuento “Plate
Las cajas fueron incubadas de 24 a 36 horas a una temperatura ambiente. En las cajas se
contaron las UFC / mL. que presentaron un crecimiento entre 30 y 300 colonias. Los datos
fueron tabulados y graficados. Cada una de estas pruebas se procesó por triplicado.
adaptado a un medio sales y medio sales modificado con crudo al 10% dentro de las
utilizaron en este proceso fueron obtenidos por aislamiento del medio de mantenimiento
(Medio de sales B). Las variables definidas para las pruebas de biodegradación fueron:
sales con una concentración de nutrientes alta (C) y medios de sales con una concentración
Medio de sales D.
seleccionado (Consorcio I, II, III y IV), incubados durante 24 horas en 600 mL. del medio
diluyeron en 180 frascos de vidrio de 300 mL., que contenían los siguiente tratamientos:
(Cuadro 2).
Cuadro 2. Tratamientos utilizados para realizar las curvas de biodegradación en un medio
Tratamientos 110 mL. del 110 mL. del Crudo Biosurfactante 1 mL. de
c/u con 30 frascos Medio sales C Medio sales D 10% 0.2 % v/v inóculo
1 + + + +
2 + + +
3 + + + +
4 + + +
5* + +
6* + +
+ Indica presencia.
* Indica el tratamiento patrón (Sirvió para determinar las perdidas por evaporación).
controlado y estuvieron sellados con tapones de caucho a través de los cuales se introdujeron
dos mangueras: una para suministro de oxígeno y otra para la salida de gases.
Para obtener las curvas de biodegradación se tomaron tres frascos por tratamiento cada 14
horas durante seis días y cada una de estas muestras fueron llevadas a un pH ácido por la
un embudo de decantación.
El cálculo de la cantidad de crudo total remanente en cada uno de los frascos se dio por la
ecuación (3).
Cr − Wf
(3)
V
Donde,
(peso del vaso con crudo remanente - peso del vaso seco)
V = Volumen de muestra en L.
(4).
Donde,
medio de sales modificado con crudo Cusiana. Después de los análisis de los porcentajes
suelo, las variaciones de pH, los beneficios económicos y los aportes de una población
bacteriana bioaumentada necesaria, se decidió seguir trabajando con el medio D y con los
(UFC / mL.) en el medio de sales D, modificado con / sin crudo para establecer, por
biodegradación.
crecimiento microbiano fue acrílico, éste soporto las condiciones de operación (baja presión
microbiana
Dimensión Valor
Diámetro del biorreactor, m 0.2
Altura del biorreactor, m 0.5
Volumen total de biorreactor, m3 1.5708 x 10-2
Volumen de operación, m3 1.2083 x 10-2
Altura del liquido, m 0.3846
Relación H/D 2.5
Bafles Deflectores. Se utilizaron dos bafles deflectores ubicados en la pared del tanque
formación de vórtices dentro del líquido, facilitar la transferencia de potencia sobre éste en
inoxidable, evitando de esta forma la posible corrosión causada por los microorganismos y
sus metabolitos.
Tubería y accesorios de flujo. Para su diseño se utilizó tubería de PVC de 1/2 pulgada
un compresor centrífugo de una etapa con una potencia nominal de 3/4 HP, y un caudal de
2.25 SCFM (pies cúbicos estándar por minuto). Su flujo de salida se controló con una
destinados para el tratamiento 'in Situ'. Las ocho horas de descanso fueron reemplazadas
pasos:
Calentamiento del agua con resistencias por dos horas, luego se dejó enfriar y se
repitió tres veces por día durante tres días el mismo procedimiento.
siguientes parámetros:
1) Medio. Para el crecimiento del Pool bacteriano ‘Bacilos’ y del Pool bacteriano
caracterizaron por ser medios muy utilizados por el Centro de Innovación en Biotecnología
Industrial (CINBIN) con buenos resultados y bajos costos. Todos los cultivos se llevaron a
cabo en condiciones de total asepsia con el fin de medir los efectos de los inóculos usados
A cada biorreactor se le adicionó un volumen de 9500 mL. del medio fresco y estéril.
2) Preparación del inóculo. Se tomó con un asa de punta redonda un raspado suave de las
cajas de Petri correspondientes a cada una de las cepas elegidas, diluyendo por separado la
biomasa tomada con el asa en su correspondiente preinóculo, a) Pool de Bacilos más 2500
mL. de medio nutritivo B, b) Pool de Cocobacilos - Cocos más 2500 mL. de medio
nutritivo B, c) consorcio I, II, III y IV más 2500 mL. del medio de sales D.
de incubación, se tomó 1 mL. de cada preinóculo para la valoración del recuento inicial de
UFC / mL. y el restante se adicionó a tres biorreactores que contenían cada uno de ellos
9500 mL. del medio nutritivo B destinado para la producción a gran escala del Pool de
Bacilos, 9500 mL. del medio nutritivo B destinado para la producción a gran escala del
Pool de Cocobacilos - Cocos - Pseudomonas putida y 9500 mL. del medio de sales D
destinado para la producción a gran escala de los consorcios I, II, III y IV. Durante todo el
tiempo del tratamiento ‘in Situ’ se mantuvo bajo condiciones oxigénicas en el laboratorio
El volumen de operación de cada biorreactor fue del 80%, es decir 12 litros; dicho volumen
operación:
soportar presiones muy altas, se debió trabajar a bajas presiones. Por consiguiente, solo fue
• pH. Se mantuvo en entre 4.5 - 7.8 óptimo para cada uno de los cultivos celulares.
reactor 'Air - Lift' o agitado por aire, fuera el mejor modelo para el desarrollo del proyecto.
4) Condiciones de escalado. Teniendo en cuenta las condiciones básicas para el escalado,
• La función del sistema considerado fue muy compleja, ya que albergó consorcios de
• Similitud dinámica, para ello se utilizó el mismo medio de cultivo en los biorreactores de
laboratorio como para los biorreactores de mayor tamaño, es decir, un medio de cultivo
para cumplir con las mismas propiedades reológicas; igualmente se colocó como punto de
nivel de campo, se hizo un diseño experimental basado en semilleros, a los que se les
inoculó 700 mL. de biomasa microbiana obtenida de los biorreactores por bioaumentación.
adicionó cada tres días a cada una de los semilleros durante los treinta días que duró el
Limpieza y esterilización
A los 15 días
Mantenimiento y monitoreo
del crecimiento microbiano
a cada uno de ellos se les añadió 40 centímetros (49 kg) de suelo agrícola previamente
homogeinizado y contaminado con crudo Cusiana al 30% p/p. Los 4 semilleros restantes
no se les adicionó crudo Cusiana, obteniéndose de este modo uno de los tratamientos
20 cm
Semilla
vegetativa
37 cm
Croquis: Tratamie ntos
191
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
1 Brachiaria spp + Consorcios I, II, III y IV 15 Brachiaria spp, sin crudo, sin inóculo
2 Suelo + crudo + Consorcios I, II, III y IV 16 Swinglea glutinosa, sin crudo, sin inóculo
3 Swinglea glutinosa + Pool de Cocobacilos – 17 Swinglea glutinosa + Pool de Cocobacilos –
Cocos. Cocos.
4 Swinglea glutinosa + sin inóculo + Crudo 18 Brachiaria spp+ Pool de Cocobacilos – Cocos.
5 Brachiaria spp+ Pool de Cocobacilos – Cocos. 19 Brachiaria spp + Consorcios I, II, III y IV
6 Suelo con crudo, sin inóculo, sin plantas. 20 Swinglea glutinosa+ Consorcios I, II, III y IV
7 Suelo + crudo+ Pool de Cocobacilos – Cocos. 21 Swinglea glutinosa + sin inóculo + crudo
8 Swinglea glutinosa + Consorcios I, II, III IV 22 Brachiaria spp + sin inóculo + crudo
9 Brachiaria spp + Pool de Bacilos 23 Brachiaria spp + Pool de Bacilos
10 Swinglea glutinosa, sin crudo, sin inóculo 24 Suelo con crudo, sin inóculo, sin plantas.
11 Brachiaria spp, sin crudo, sin inóculo 25 Swinglea glutinosa + Pool de Bacilos
12 Swinglea glutinosa + Pool de Bacilos 26 Suelo + crudo + Consorcios I, II, III y IV
13 Brachiaria spp + sin inóculo + crudo 27. Suelo + crudo+ Pool de Cocobacilos – Cocos.
14 Suelo con crudo más Pool de Bacilos 28 Suelo con crudo más Pool de Bacilos.
Biodegradación.
La Figura 15 muestra el aspecto del suelo después de la adición del crudo Cusiana al 30%
p/p y su homogeinización.
A B
Figura 15 (A) vista general y (B) acercamiento del suelo homogeinizado manualmente
Las plantas se cultivaron siete días después de haber contaminado el suelo con crudo
consorcios dos días después del cultivo de las plantas, permitiendo de esta manera una corta
Debido a la alta efectividad de las bacterias edáficas para usar el Nitrógeno se hizo
Aminoácidos 20 g/L
Nitrógeno total 60 g/L
Nitrógeno amoniacal 5 g/L
Nitrógeno nítrico 15 g/L
Nitrógeno ureico 40 g/L
Nitrógeno (alfa-aminico) 2 g/L
Nitrógeno proteico 2 g/L
Materia orgánica total 20 g/L
Fósforo soluble (P2O5) 30 g/L
Potasio (k2O) 50 g/L
El día del transplante, se añadió una única aplicación de 7 mL. de fertilizante por planta con
plantas se estimo una unidad experimental de siete plantas o siete cepas con alturas
cm.
La inoculación bacteriana sobre los tratamientos se hizo dos días después de la siembra, y
Para lograr los objetivos propuestos respecto a estos bioprocesos, se establecieron 3 fases
experimentales.
crudo Cusiana contenido en cada uno de los semilleros. El objetivo de este análisis fue
examinar el efecto de las plantas, de las bacterias y de las bacterias junto con las plantas en
los bioprocesos de biodegradación de suelos contaminados por derrames inducidos de
crudo Cusiana.
Cada diez días y hasta el final del tratamiento, a cada uno de los semilleros se les tomó
distribuidos aleatoriamente sobre la superficie del terreno, con el fin de determinar los
métodos analíticos que se describen a continuación (estos estudios fueron realizados por la
GC 14 A, marca Shimadzu, Kyoto, ajustado a una columna capilar con sílice fundida para
modelo QP 2000 A, marca Shimadzu, ajustado a una columna capilar de sílice fundida. El
compuestos analizados son: n-alcanos (C12 a C32), derivados del naftaleno (C1 a C4),
derivados del fenantreno (C1 a C21) y derivados del dibenzotiofano (C0 a C2).
En el Cuadro 3 se observan cada uno de los tratamientos realizados para el análisis de la
Semillero
TRATAMIENTOS Inóculos Crudo Plantas
(Figura 14)
Biodegradación natural
1 --- Si --- 6 y 24
(control 1)
2 Biorremediación Si Si --- 2, 7, 14, 26, 27 y 28
3 Fitorremediación --- Si Si 4, 13, 21 y 22
1, 3, 5, 8, 9, 12, 17,
4 Fitobactorremediación Si Si Si
18, 19, 20, 23, 25.
en arreglo factorial 3 x 4 (tres tratamientos con plantas y cuatro tratamientos con inóculos),
Cuadro 4. Tratamientos aplicados para medir los efectos de las plantas, de las bacterias y
Tratamiento patrón.
derrames inducidos de crudo era ‘normal’ (comparado con el tratamiento patrón sin crudo
Fitobactorremediación
Cuadro 5. Tratamientos in Situ para observar los efectos del crudo en el desarrollo
Semilleros
TRATAMIENTOS Inóculos Crudo Plantas
(Figura 14)
1 Control simple 1 --- --- Si 10, 11, 15 y 16
2 Fitorremediación --- Si Si 4, 13, 21 y 22
En el Cuadro 5 se observan los dos tratamientos realizados para examinar los efectos del
crudo Cusiana en el desarrollo fisiológico de las plantas en cada uno de los semilleros.
Diseño experimental. El diseño experimental de campo usado para cada especie vegetal
spp.
En el Cuadro 6 se observa cada una de las combinaciones realizadas para el análisis de los
Cuadro 6. Tratamientos aplicados para medir el efecto del crudo Cusiana en el desarrollo
de las plantas
Componentes Tratamientos
Plantas Brachiaria spp (C2) Swinglea glutinosa (C1)
Sustrato S0 (Suelo) S1 (Suelo crudo) S0 (Suelo) S1 (Suelo crudo)
Combinación c2 d0 s0 c2 d0 s1 c1 d0 s0 c1 d0 s1
** d0 Sin inóculo.
La altura, el diámetro del tallo y la cobertura de la planta están dados por la ecuación 5.
♦ Altura del vástago: Por medio de un flexómetro, se tomó la medida desde la zona
marcada (a dos centímetros del cuello de la raíz, que es la zona de enlace entre la raíz
♦ Diámetro del tallo: Con la ayuda de un calibrador, se tomó el diámetro inicial y final
Cc
IT = Cn (6)
Donde,
IT : Índice de tolerancia.
luego, se procedió a pesarla en una balanza analítica para calcular el peso seco de la raíz.
48 horas, luego, se pesaron en una balanza analítica y se sumaron al peso seco de la raíz.
♦ Análisis nutricional de las especies vegetales. Se realizó el análisis foliar para Potasio,
Calcio, y Magnesio en porcentaje (%), para Hierro, Boro, Cobre, Zinc, Manganeso,
Aluminio y Níquel en partes por millón (ppm), siguiendo las técnicas del Centro Nacional
Níquel en el crudo Cusiana, se realizó el análisis foliar de dicho elemento siguiendo las
técnicas del Centro Nacional de Investigaciones del Café (Cenicafé, 1994) (Anexo C).
vegetales y el contenido de metales pesados (Ni) en los tejidos foliares, se analizaron con
objetivo de este análisis fue examinar si las bacterias inoculadas aportaron un efecto
sinérgico o antagónico sobre las plantas cultivadas en suelos contaminados con derrames
inducidos de crudo (comparado con el tratamiento patrón sin inóculo ‘Cuadro 7’), para
Para un total de 8 tratamientos para Swinglea glutinosa y 8 tratamientos para Brachiaria spp
En el Cuadro 7 se observa cada una de las combinaciones realizadas para el análisis de los
Componentes Tratamientos
Plantas Swinglea glutinosa (c1) Brachiaria spp (c2)
Inóculo d0 d1 d0 d2 d0 d3 d0 d1 d0 d2 d0 d3
Combinación c1 d0 c1d1 c1d0 c1d2 c1d0 c1d3 c2d0 c2d1 c2d0 c2d2 c2d0 c2d3
Semilleros 12, 13, 13, 13, 5,
(Figura 14)
4, 21 4, 21 8, 20 4, 21 3, 17 9, 23 1, 19
25 22 22 22 18
d0: Sin inóculo; d1: Pool de Bacilos; d2: Consorcio I, II, III Y IV, d3: Pool de Cocobacilos,
inoculadas en los diferentes semilleros con suelos contaminados con crudo Cusiana. El
objetivo de este análisis fue examinar, sí las plantas cultivadas en suelos contaminados con
derrames inducidos de crudo aportaban un efecto sinérgico o antagónico sobre las bacterias
inoculadas (comparado con el tratamiento patrón sin plantas ‘Cuadro 7), para determinar su
uno de los semilleros a 20 cm de profundidad cada tres días, antes de realizar la inoculción
cada cinco días. El pH se determino por el método del potenciometro de vidrio en relación
En el Cuadro 8 se observa cada una de las combinaciones realizadas para los análisis
multiplicación poblacional de las bacterias inoculadas en cada uno de los semilleros con un
Componentes Tratamientos
Inóculo Pool de Bacilos (d1) Consorcios I, II, III y IV (d2) Cocos-Cocobacilos (d3)
Plantas C0 C1 C2 C0 C1 C2 C0 C1 C2
Combinación c0d1 c1d1 c2d1 c0d2 c1d2 c2d2 c0d3 c1d3 c2d3
Semilleros
14, 28 12, 25 9, 23 2, 26 8, 20 1, 19 7, 27 3, 17 5, 18
(Figura 14)
ETAPA III. Efecto de las plantas en el crecimiento poblacional de las bacterias nativas
presentes en los diferentes semilleros con suelos contaminados con crudo Cusiana. El
objetivo de este análisis fue examinar, sí las plantas cultivadas en suelos contaminados con
derrames inducidos de crudo aportaban un efecto sinérgico o antagónico sobre las bacterias
‘autoctonas’ (comparado con el tratamiento patrón sin plantas y sin inoculo), para así
determinar si el crecimiento de las bacterias inoculadas era influenciado por las plantas
cultivadas o por el crudo Cusiana. (comparado con la etapa II) y de esta manera observar su
Las muestras de suelo para su análisis siguieron el procedimiento anterior (etapa II).
fue completamente aleatorio por duplicado, y se usaron tres tratamientos para un total de 6,
estos fueron:
sin inóculo.
♦ Brachiaria spp cultivadas en un suelo contaminado con crudo Cusiana al 30 % p/p sin
inóculo.
♦ Patrón: Suelo contaminado con crudo Cusiana al 30 % p/p sin inóculo y sin plantas.
experimental para los tratamientos de laboratorio y de campo para cada uno de los
bioprocesos.
Suelo Aislamiento de Aislamiento bacterias Cultivo y
Identificación Identificación
Variable s Variable s
Medio C Medio D
Bloqu e s 10, 11, 15 y Bloques 14, 28, 2, 26, 7, 27 Se m ille ros 6, 24. Bloque s 4, 13, 21 y
16 Patrón 2 22
Biorre m e diación Intemperismo Fitorre m e diación
Patrón 1 (sin cru do)
Bloques 12, 25, 8, 20, 3, 17.
Fitobactorre m e diació
Figura 16. Esquema general del trabajo de Fitobactoremediación.
especies vegetales tratadas y en la degradación del crudo Cusiana contenido en cada una de
3.1 SUELO.
Cuadro 9. Caracterización físico- química del suelo con crudo y sin crudo.
aterronada de forma irregular en su superficie, lo cual promovió una degradación física del
La textura del suelo (Franco Arenosa) se conservó al agregar el contaminante y mantuvo las
2. Reacción del suelo (pH). Es un suelo casi neutro o neutro, con buena disponibilidad de
Ca. Está entre los rangos adecuados para el crecimiento de la mayoría de las plantas y
microorganismos.
♦ Niveles adecuados de Calcio, Potasio y Fósforo, que evitaron una fertilización química
♦ Niveles adecuados del catión divalentes (Ca ++), que permiten el buen desarrollo de las
♦ Niveles adecuados del catión (K+) y niveles altos del catión (Na+), que permiten el buen
monovalentes.
♦ Niveles bajos de Hierro y medios de Magnesio.
enzimas.
que conlleva. b) Utilización de niveles altos por las características físicas del suelo como
fertilidad potencial pobre y buena infiltración c) Las plantas escogidas eran plantas que se
fertilidad.
En cuanto a la caracterización microbiológica, en el suelo contaminado con crudo de
ensayo.
Tratamiento UFC/ mL
Suelo con crudo 65 x 104
Suelo sin crudo 44 x 105
3.2 CRUDO.
condiciones ambientales de campo durante una semana y se observó una evaporación del
durante 24 horas, se halló la presencia de aceite sobrenadante en las muestras a 10, 20, 30,
tipo de aceite y del tipo de suelo; el crudo de Cusiana como es de baja viscosidad penetró
contaminante *
hidrocarburo de Cusiana.
A B
spp
Las bacterias encontradas en el crudo de Cusiana fueron, Bacillus spp, Corynebacterium
3.3 PLANTAS.
3.3.1.1 Pruebas de germinación. Para esta prueba se realizaron los siguientes ensayos:
ecuación 2 para las pruebas de germinación en medio de Jensen realizadas durante una
Al aplicar la ecuación 2 para obtener los porcentajes de germinación, se observó que las
semillas de Helianthus annuus ‘Girasol’ (muestra número 15 de la Figura 19) fueron las únicas
bajos entre el 0 y 20%, observándose niveles altos de fitotoxicidad ocasionada por el crudo
de Cusiana al 15%.
En el Cuadro 10 y la Figura 19 se observa que los porcentajes de germinación disminuían
con crudo al 3%, 12 al 32% con crudo al 7% y 0 al 20% con crudo al 15%).
0 Crudo 15%
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Número de muestra
1 Hyparrhenia rufa
2 Dichanthium aristatum 9 Medicago sativa
3 Brachiaria decumbens. 10 Canavalia ensiformis
4 Brachiaria brizantha 11 Leucaena leucocephala
5 Andropogon gayanus 12 Crotalaria juncea
6 Cajanus cajan 13 Vigna ungiculata
7 Desmodium spp 14 Swinglea glutinosa
8 Pueraria phaseoloides 15 Helianthus annuus L
Figura 19. Resultados del porcentaje de germinación en un medio de Jensen como patrón
1 2 3 4
5 7 8
6
9 10 11 12
modificado con crudo al 10% y 30%. Los resultados obtenidos aplicando la ecuación 2
Cuadro 11 Resultados de las pruebas de germinación con tres réplicas a nivel de campo
con arena como sustrato sin modificar y modificado con crudo al 10% y al 30%.
0 Crudo 30%
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Número de muestra
1 Hyparrhenia rufa.
2 Dichanthium aristatum 9 Medicago sativa
3 Brachiaria decumbens. 10 Canavalia ensiformis
4 Brachiaria brizantha 11 Leucaena
leucocephala
5 Andropogon gayanus 12 Crotalaria juncea
6 Cajanus cajan 13 Vigna ungiculata
7 Desmodium spp 14 Swinglea glutinosa
8 Pueraria phaseoloides 15 Helianthus annuus L
Al aplicar la ecuación 2 para obtener los porcentajes de germinación, se observó que las
semillas de Helianthus annuus ‘Girasol’ (muestra número 15 de la Figura 21) fueron las únicas
bajos entre el 1% y 9%, observándose niveles altos de fitotoxicidad ocasionada por el crudo
de Cusiana al 30%.
En el Cuadro 11 y la Figura 21 se observa que los porcentajes de germinación disminuían
cuando los niveles del crudo se incrementaban. (porcentajes de germinación de 10% al 33%
con crudo al 10% y 1% al 9% con crudo al 30%), indicando, un efecto tóxico del
presentando así resistencia a la contaminación, por tal motivo fue la única especie
seleccionada para realizar una prueba posterior de crecimiento. Las demás semillas
sustrato.
En las Figuras 23, 24 y 25 se observan porcentajes de germinación muy bajos, para las
Leguminosas, para las Gramíneas y para Swinglea glutinosa cultivadas en arena como
1 4
8
2 5
6 7 9
3
1 Cajanus cajan
2 Desmodium spp 6 Leucaena leucocephala
3 Pueraria phaseoloides 7 Vigna ungiculata
4 Medicago sativa 8 Mimosa pudica
5 Crotalaria juncea 9 Canavalia ensiformis
3
2
Figura 24 Procesos de germinación de 1) Brachiaria decumbens, 2) Brachiaria brizantha
y 3) Andropogon gayanus a nivel de campo con arena como sustrato modificado con
crudo al 30 %.
Gliricidia sepium en suelo y suelo contaminado con crudo al 10% y 30%. En el Cuadro 12
y las Figuras 27 y 28 se observan los resultados obtenidos mediante la ecuación 2 para los
cultivadas en suelo y suelo contaminado con crudo al 10% y 30% después de tres meses de
experimentación.
semillas vegetativas (Estacas) Gliricidia sepium, con tres réplicas cultivadas en suelo y
% Mortalidad
Seguimiento de la Estacas
Número de germinación
Especie Plantas Crudo Crudo
iniciales Patrón 10%
Crudo 30% Patrón 10%
Crudo 30%
Réplicas
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
Gliricidia sepium 50 Estacas 20 16 22 92 94 98 96 100 100
Helianthus 2 6 2 92 94 96 98 96 100
50 Plántulas
annuus
120
Patrón 'Gliricidia sepium'
100
% Mortalidad
Helianthus annuus utilizando como sustrato suelo sin contaminar y modificado con crudo
Cusiana al 10 % y al 30 %
Figura 28 Prueba de crecimiento para Gliricidia sepium en un sustrato con crudo al 30%
Como se observa en el Cuadro 12 y las Figuras 27 y 28, las semillas vegetativas 'Estacas'
Gliricidia sepium fueron examinadas por un período de tres meses, tiempo en el cual no se
presentaron al igual que Helianthus annuus una mortalidad del 100% en un sustrato
contaminado.
plántulas) en suelos contaminados con crudo al 10% y 30% y suelos sin contaminar. En
en un suelo como sustrato no modificado y un suelo contaminado con crudo al 10% y 30%,
% Mortalidad de plántulas
Cobertura
y'cepas'
Plantas Patrón Crudo 10% Crudo 30% Inicial Final
Especie
Iniciales
Réplicas
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
Hyparrhenia rufa 50 Cepas 20 14 18 50 36 40 70 58 70 71 70 75 3 9 6
Dichanthium aristatum 50 Cepas 14 18 20 44 38 48 78 80 94 71 68 78 10 10 8
Brachiaria decumbens. 50 Cepas 10 14 10 12 14 12 12 10 18 95 96 98 50 50 65
Brachiaria brizantha 50 Cepas 12 16 10 16 16 10 18 12 16 90 95 96 56 60 63
Brachiaria spp 50 Cepas 4 6 4 8 6 4 6 6 8 61 65 56 78 98 95
Andropogon gayanus 50 Cepas 18 16 12 48 36 46 82 80 88 59 71 62 10 14 16
Pennisetum hybridum 50 Cepas 18 16 10 34 30 50 82 78 90 61 66 65 8 11 13
Saccharum officinarum 50 Cepas 12 8 16 44 50 54 76 84 78 65 67 52 4 16 10
Desmodium spp 50 Cepas 14 10 12 46 42 50 76 70 98 68 71 82 1 6 8
Swinglea glutinosa 50 Plántulas 8 6 8 10 12 10 10 10 8 59 65 62 84 76 89
Boehmeria nivea 50 Plántulas 18 16 16 42 50 58 82 86 94 80 75 80 2 9 7
100 100
80
% Mortalidad
80
60
Cobertura
60
40
40
20
0 20
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0
Número de la muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Patrón Crudo 10% Crudo 30% Núm ero de m ues tra
(A) (B)
1 Hyparrhenia rufa
2 Dichanthium 7 Pennisetum hybridum
3 Brachiaria 8 Saccharum spp
4 Brachiaria brizantha 9 Desmodium spp
5 Brachiaria spp 10 Swinglea glutinosa
6 Andropogon gayanus 11 Boehmeria nivea
vegetales en estudio con tres réplicas en suelo y suelo contaminado con crudo al 10% y al
Como se observa en el Cuadro 13 y la Figuras 29, la mayoría de las cepas y de las plántulas
y del 58 a 94% en un suelo con crudo al 30% y se presentó una cobertura del 2 al 16% en
Brachiaria decumbens y Brachiaria brizantha fueron de las pocas especies que tuvieron
D se aprecian las raíces de color blanco responsables del crecimiento longitudinal de la raíz
56%, motivo por el cual se descartó su uso para las aplicaciones de Fitobactorremediación
(A) (B)
(C) (D)
crudo al 30%. (A) Parcelas donde fueron extraídas las cepas cultivadas, (B) Transplante
de las cepas un mes después de su cultivo, (C) Transplante de las cepas un seis meses
(A) (B)
(C) (D)
crudo al 30%. (A) Parcelas donde fueron extraídas las cepas cultivadas, (B) Transplante
de las cepas una semana después de su cultivo, (C) Transplante de las cepas un mes
Otra especie vegetal aceptada fue Brachiaria spp ‘Braquipara’, debido a los resultados en
desarrollo de sus raíces (Figura 33 B). En el transplante Brachiaria spp presentó muerte
celular en los tallos largos y viejos pero hubo proliferación de sus raíces y aumentó en el
fotosíntesis, motivo por el cual fue una de las especies seleccionadas para realizar las
Figura 33. Pruebas de crecimiento de las semillas vegetativas ‘Braquipara spp’ en un suelo
contaminado con crudo al 10% y 30% un mes después de su cultivo. (A) Semillero
de la cepa, 30 días después de su cultivo con crudo al 30% y (B) Aspecto de las raíces
30 días después.
Otra especie vegetal seleccionada fue Swinglea glutinosa con un porcentaje de mortalidad
requerimientos nutricionales bajos (Figura 34 A). Es una especie dicotiledónea con raíz
lenta que las plantas anteriores, lo que determinó pocas variaciones visuales en su altura
contaminado con crudo al 30%, 30 días después de su cultivo. (A) Semillero con crudo
En general los efectos ecotoxicológicos del contaminante al 30% para la mayoría de las
especies vegetales estudiadas fueron de tipo LC50 (Concentración letal para el 50% de la
del contaminante al 10% fueron de tipo EC 50 (Concentración que produce efecto observable
en un 50% de la muestra.).
3.4 BACTERIAS.
nutritivo modificado con crudo de Cusiana. En el Cuadro 14. se observan los géneros y
las especies de bacterias seleccionadas (‘foráneas’ y ‘autóctonas’) para la bioaumentación
CEPA
TIPO MICROBIANO FAMILIA BIOREACTOR
N.
presencia de las raíces más marcadamente son los bacilos cortos Gram- negativos, que casi
Fitobactorremediación.
A excepción de Edwuarsiella spp., Hafnia spp., Enterobacter spp, y Pseudomonas putida
caracterizadas como Bacterias pleomórficas Gram negativas las demás son Gram positivas,
desarrollo y crecimiento celular en el medio con sales B. El Cuadro 15 muestra los géneros
No todas las bacterias aisladas del suelo que tuvieron la capacidad de crecer en medios
modificados con crudo Cusiana fueron utilizadas como inoculantes, se seleccionaron solo
las Gram positivas porque mostraron características fisiológicas especiales para soportar
las bacterias, las pruebas bioquímicas de las 12 cepas utilizadas para los reactores 1 y 2 y
los consorcios enumerados en el cuadro 15 aislados del suelo en estudio, suelo rizosférico
Dominio: Bacteria
Filum: Gracilicutes
Orden XII: Enterobacteriales
Familia I: Enterobacteriaceae
Genéro: Edwuarsiella
Hafnia
Enterobacter
crema, forma irregular, elevación plana, margen ondulado, superficie brillante traslúcida y
una consistencia blanda. En agar McConkey toman un color rojizo (Lactosa positiva).
V P = Voges Proskauer.
(A) (B)
Genéro: Hafnia
forma irregular, elevación media, margen ondulado, superficie opaca y una consistencia
V P = Voges Proskauer
(A) (B)
Genéro: Enterobacter
♦ Descripción macroscópica: Las colonias en agar nutritivo toman un color crema, forma
ancho por 1.2-3.0 µ de largo, Gram negativos, móviles por flagelos peritricos.
V P = Voges Proskauer
(+) L= Licuefacción lenta.
Dominio: Bacteria
Filum: Firmicutes
Genéro: Micrococcus
blanda.
V P = Voges Proskauer
Figura 39 Características macroscópicas (Izquierda) y microscópicas (Derecha) de
Streptococcus spp.
Dominio: Bacteria
Filum: Gracilicutes
Clase I: Zymobacteria
Familia I: Pseudomonadaceae
Genéro: Pseudomonas.
Especie: putida
♦ Descripción macroscópica: Las colonias en agar nutritivo toman un color café, de forma
irregular, elevación plana, margen entero, superficie opaca y una consistencia blanda.
diámetro aproximado de 0.5-1.0 µ, Gram negativos, móviles por un único flagelo polar o
múltiples.
Azucares Movilidad:+
Rx + + -
No fermentados Indol : -
Agar
Hidrólisis Hidrólisis Malonato-
PRUEBA Nitratos
Gelatina Almidón Fenilalanina.
McConkey
Malonato: - No degradación
Rx +
+ + FenilAlanina:- de lactosa
Dominio: Bacteria
Filum: Firmicutes
Clase I: Bacilli
Orden I: Bacillales
Familia I: Bacillaceae
Genéro: Bacillus
Especie: polymyxa
subtilis
circulans.
• Bacillus polymyxa.
♦ Descripción macroscópica: Las colonias en agar nutritivo toman un color blanco, de
forma circular, elevación plana, margen ondulado, superficie mate opaca y una consistencia
V P = Voges Proskauer
(+) L= Licuefacción lenta d = débil
♦ Descripción macroscópica: Las colonias en agar nutritivo toman un color blanco, una
forma irregular, elevación plana, margen ondulado, superficie mate opaca y una
V P = Voges Proskauer
Figura 42 Características macroscópicas (Izquierda) y microscópicas (Derecha) de
Bacillus subtilis
Bacillus circulans
cremoso, una forma irregular, elevación plana, margen entero, superficie mate opaca y una
V P = Voges Proskauer
Figura 43 Características macroscópicas (Izquierda) y microscópicas (Derecha) de
Bacillus circulans
Dominio: Bacteria
Filum: Firmicutes
Orden V: Actinomycetales
Familia I: Corynebacteriaceae
Genéro: Corynebacterium
Especie: spp.
glutamicum
♦ Descripción macroscópica: Las colonias en agar nutritivo toman un color crema, una
forma puntiforme, elevación media, margen entero, superficie brillante y una consistencia
blanda.
(A) (B)
• Corynebacterium glutamicum.
♦ Descripción macroscópica: Las colonias en agar nutritivo toman un color blanco crema,
una forma irregular, una elevación media, un margen entero, una superficie brillante y una
consistencia blanda.
♦ Descripción microscópica: Bacilos Gram positivos, no forman endosporas, las células
chinas
Glucosa Movilidad:+
Rx + + +
fermentada Indol : +
Agar
Hidrólisis Hidrólisis Malonato-
PRUEBA Nitratos
Gelatina Almidón Fenilalanina.
McConkey
Malonato: - + No degradación
Rx + -
FenilAlanina:- de lactosa
(A) (B)
glutamicum.
Dominio: Bacteria
Filum: Firmicutes
Orden V: Actinomycetales
Familia V: Nocardiaceae
Genéro: Nocardia
♦ Descripción macroscópica: Las colonias en agar nutritivo toman un color blanco crema,
una forma irregular, elevación plana, margen ondulado, característica opaca y consistencia
blanda.
Glucosa Movilidad:-
Rx + + -
fermentada Indol : -
Agar
Hidrólisis Hidrólisis Malonato-
PRUEBA Nitratos
Gelatina Almidón Fenilalanina.
McConkey
No
Malonato: -
Rx + + + degradación de
FenilAlanina:-
lactosa
Figura 46 Características macroscópicas (Izquierda) y microscópicas (Derecha) de
Nocardia spp.
CONSORCIO I:
consorcio I.
CONSORCIO II:
A B
CONSORCIO IV:
Corynebacterium + Micrococcus
A B
cada uno de los Pool bacterianos bioaumentados (Pool de Bacilos y Pool de Cocos -
modificado con crudo al 10%. Las pruebas para establecer la capacidad de adaptación de
las bacterias bacilares como: Bacillus polymyxa, Bacillus subtilis, Corynebacterium spp,
experimentos con tres réplicas para cada uno, con un total de 6 pruebas, en 11 días de
ensayo.
Cada 24 horas de cada cultivo se tomó 1 mL con el fin de preparar las diluciones para
En el Cuadro 28 se observan las variaciones del pH como consecuencia del crecimiento del
pool de formas bacilares en un medio nutritivo sin crudo y un medio nutritivo modificado
medio nutritivo modificado con crudo fue homogéneo, sin diferencias significativas. El pH
máximo fue de 6.58 hacia el día 10 para el crecimiento sobre sustrato no modificado y de
medio sin crudo y de 4.29 al día 17 en medio modificado con crudo al 10%
crecimiento del pool de tipo bacilares y los valores del pH consecuentes al crecimiento.
Cuadro 28. Recuento del Pool de formas bacilares (expresado como UFC / mL). en medio
nutritivo y medio nutritivo modificado con crudo al 10% y los valores de pH al cabo de 11
días.
2,5 1,4
1,2
Log (UFC / mL)
Log (UFC / mL)
2
1
1,5 0,8
1 0,6
0,4
0,5
0,2 Medio con crudo
Medio sin crudo
0 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tiempo (Días) Tiempo (Días)
(A) (B)
Figura 51. Curva de recuento de bacterias bacilares (A) en medio nutritivo sin crudo y (B)
del Pool bacteriano de formas bacilares presentó un corto período de latencia seguido de la
fase de crecimiento logarítmico con una duración de 3 días, tiempo en el cual se alcanzó el
Una vez alcanzado el primer pico poblacional, se presentó una fase estacionaria hasta el
décimo día, donde se formó un segundo y último pico población, finalizando con un
logarítmico con una duración de 4 días tiempo en el cual se alcanzó el primer pico
poblacional.
Una vez alcanzado el primer pico poblacional, se observaron dos picos mas, manifestados
hacia los séptimo y noveno días, donde se inició la última fase del crecimiento bacteriano
En la Figura 52 se hace una comparación del crecimiento celular del Pool bacteriano de
formas bacilares en un medio nutritivo con crudo y en un medio nutritivo sin crudo..
2,5
Log (UFC / mL)
1,5
0,5
Medio sin crudo Medio con crudo
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tiempo (Días)
Figura 52. Comparación en el crecimiento del Pool de formas bacilares en medio nutritivo
Medio
Medio
nutritivo
nutritivo
Sin
Con
crudo
crudo
Figura 53. Montajes para el recuento de Bacilos en medio nutritivo y medio nutritivo
modificado con crudo al 10%. Las pruebas para establecer la capacidad de adaptación de
las bacterias escogidas en las pruebas preliminares Edwuarsiella spp , Hafnia spp ,
sobre el crudo al 10%, se efectuaron tomando como medio de cultivo al medio nutritivo A.
Se realizaron dos experimentos con tres réplicas para cada uno con total de 6 pruebas, en un
crecimiento del pool Cocos - Cocobacilos y los valores del pH consecuentes al crecimiento.
Cuadro 29. Recuento del pool de tipos Cocos - Cocobacilos (expresado como UFC / mL).
en medio nutritivo y medio nutritivo modificado con crudo al 10% y los valores de pH al
cabo de 11 días.
1000 350
Log (UFC / mL)
400 150
100
200 50
Sin crudo 0 Con crudo
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tie mpo (Días) Tiempo (Días)
(A) (B)
Figura 54. Curva de recuento del pool de tipos Cocobacilos - Cocos (A) en medio
nutritivo sin crudo y (B) en medio nutritivo modificado con crudo al 10%
medio nutritivo sin crudo, el comportamiento poblacional del pool microbiano presentó un
corto período de adaptación durante los dos primeros días, seguido de la fase de
estacionaria’) hasta el noveno día momento en el cual empezó la fase final de la curva de
En el medio nutritivo modificado con crudo se observó una fase de adaptación larga por la
presencia del hidrocarburo y un crecimiento inicial lento en los seis primeros días,
momento en el cual dio inicio a la fase logarítmica bajo las condiciones presentes de
1000
Log (UFC / mL)
800
600
400
200
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Figura 55. Curvas comparativas del recuento del pool Cocobacilos - Cocos en medio
En la Figura 55 se hace una comparación del crecimiento celular del pool bacteriano en un
medio nutritivo con crudo y en un medio nutritivo sin crudo. El comportamiento de los
estas condiciones de experimentación fue alcanzado de los 7 al 11 días. Esta curva indica
de Cocobacilos y Cocos en medio nutritivo y medio nutritivo modificado con crudo al 10%
crecimiento del pool Cocos - Cocobacilos en un medio nutritivo sin crudo y un medio
en medio nutritivo y medio nutritivo modificado con crudo fue homogéneo, sin diferencias
significativas. El pH máximo fue de 6.49 hacia el día 10 para el crecimiento sobre sustrato
15 día en un medio sin crudo y de 4.71 al día 16 en medio modificado con crudo al 10%
7
6
5
pH 4
3
2
1 Medio sin crudo Medio con crudo
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tiempo (Días)
Figura 57 Comparación en las variaciones del pH como consecuencia del crecimiento del
pool de Cocos y Cocobacilos en medio nutritivo y medio nutritivo modificado con crudo al
10%
crecimiento del pool Cocos - Cocobacilos y se presentan curvas similares con una pequeña
variación, a partir del noveno día, en un medio nutritivo sin crudo, donde hay un leve
aumento de pH llegando a ser 4.8 respecto a 4.4 del medio con crudo.
medio nutritivo sin control del pH presentaron curvas similares que iniciaban con un pH
bioaumentación en medio con sales fueron: Consorcio I Micrococcus spp + Bacillus spp,
(expresado como UFC / mL). en medio con sales y medio de sales modificado con crudo al
10%
basaron tomando como variables experimentales los nutrientes (medio con sales C y medio
60
%Degradación
50
40
30
20
10
0 Sin Tween 80 Con Tween 80
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tie m po (Horas )
comparada con una degradación del 50% en un medio de sales C sin Tween 80 al cabo de
126 horas.
En las etapas de biodegradación se pudieron distinguir dos fases: una fase inicial de
una fase de degradación lenta donde quedan los compuestos difíciles de degradar.
Con los dos experimentos se logró una disminución de la concentración del crudo, por
sales D.
60
%Degradación
40
20
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tie m po (Horas )
Sin tween 80 Con tween 80
Figura 59 Curva comparativa de biodegradación en medio de sales D con surfactante y
contaminante original).
Figura 60
para obtener una curva de biodegradación del crudo Cusiana, teniendo en cuenta el medio
crudo Cusiana por consorcios microbianos (A) Montaje con surfactante y (B) Montaje sin
surfactante.
Influencia del medio con sales en la Biodegradación por los consorcios bacterianos.
En todos los tratamientos se logró una disminución de la concentración del crudo por medio
de los consorcios I, II, III y IV, se obtuvo los mejores resultados en el medio de sales D,
60% al medio de sales sin surfactante. Respecto al medio de sales C se alcanzó una
medios, favoreciendo al medio D, preparado sin extracto de levadura; cuando existe aporte
orgánico adicional al medio las bacterias optan por hacer uso de ellos disminuyendo el
porcentaje de biodegradación.
70
60
%Degradación
50
40
30
20
10
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tie m po (Horas )
Medio C Medio D
sales C y D.
(b) Recuento de los consorcios I, II, III y IV (expresado como UFC / mL). en medio
con sales D y medio con sales D modificado con crudo al 10% Para estas pruebas se
descartó al medio con sales C por su mayor contenido de sales, mayor costo y menor efecto
Cuadro 32. Resultados del recuento de los consorcios bacterianos I, II, III y IV como UFC
7 1000
6
Log (UFC / mL)
800
Log (UFC / mL)
5
600
4
3 400
2 200
1 Medio D sin crudo Medio D con crudo
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 -200
Tiempo (Días) Tiempo (Días)
(A) (B)
Figura 62. Representación del recuento de los consorcios I, II, III y IV como UFC (A) en
medio con sales D y (B) en medio con sales D modificado con crudo al 10%
cultivo. Cuando la población bacteriana creció en un medio con sales sin crudo el
primer y máximo pico poblacional al tercer día. Una vez alcanzado el primer pico
poblacional, se manifestó una fase estacionaria corta hasta el quinto día, momento donde
que se mantuvo hasta el décimo día, instante en el cual se inicio la ultima etapa del
el segundo día Una vez alcanzado el primer pico poblacional, se presentó una disminución
población presentándose dos picos poblacionales mas en el tiempo ocho y trece; este último
La forma atípica de las dos curvas de crecimiento de los consorcios se explica porque cada
depresiones diauxicas.
En la Figura 63 se hace una comparación del crecimiento celular de los consorcios I, II, III
y IV en un medio con sales D sin modificar y un medio con sales D modificado con crudo
sustrato orgánico en el crecimiento celular fue muy significativa, obteniéndose una alta
1000
Log (UFC / mL)
100
10
1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Tiempo (Días)
Medio D s in crudo Medio D con crudo
Figura 63. Comparación del recuento de los consorcios I, II, III y IV en medio de sales D
del crecimiento del consorcio numero I, II, III y IV en el medio D y medio D modificado
con crudo al 10%. El pH máximo fue de 7.32 hacia el día 16 para el crecimiento sobre el
crudo al 10%.
8
7
6
5
pH
4
3
2
1
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Tiempo (Días)
Medio D s in crudo Medio D con crudo
Figura 64. Gráfica comparativa de la variación del pH como consecuencia del crecimiento
del consorcio Numero I, II, III y IV en el medio D y medio D modificado con crudo al
10%.
medios de cultivo usados para el crecimiento de microorganismos a gran escala fueron: (a)
Medio nutritivo B para el pool de formas bacilares (pool I), bioaumentado en el biorreactor
(1) y para el pool de tipos Cocobacilos - Cocos (pool II) bioaumentado en el biorreactor (2),
(b) Medio con sales D para el consorcio I, II, III y IV bioaumentado en el biorreactor (3)
(Figura 65).
Consorcios
(3)
Pool
Pool I
11
(1)
(2)
Cocobacilos y (C) Biorreator 3 para el crecimiento de los consorcios I, II, III y IV.
Los biorreactores sirvieron como sistemas que proveían de masa bacteriana al proceso
biodegradativo, por tal motivo se realizaron cinéticas de crecimiento celular de los pool 1 y
2 y de los consorcios I, II, III y IV para saber el momento logarítmico del crecimiento.
el Cuadro 33.
Cuadro 33. Recuento de los microorganismos del pool de formas bacilares y medición del
Nº de Células Nº de Células
Día Biorreactor 1 adicionadas pH
(Células/mL x 105) (Células / mL x 10-5)
1 98 7.60
2 110 7.68
3 259 7.81
4 620* 240 7,83
5 790 7.81
6 2010 7.89
7 1210 240 7.90
8 1980 7.88
9 2980 7.85
10 4500 240 7.83
11 2450 7.80
12 5500 7.80
13 8200 240 7.77
14 4500 7.70
15 3100 7.72
16 4200 240 7.69
17 83** 7.65
18 139 7.69
19 320 7.71
20 520 240 7.74
21 622 7.78
22 510 7.84
23 700 240 7.84
24 798 7.85
25 871 7.85
26 1050 240 7.80
27 970 7.79
28 1970 7.84
29 2210 240 7.87
30 3600 7.98
31 4500 7.95
32 9100 240 7.91
* El fondo azul claro corresponde al número de células bacteriana el día de su primera
inoculación.
**El día 17 en todos los tratamientos se comenzó con un nuevo inóculo y un nuevo medio
de cultivo iniciándose nuevamente el crecimiento celular de los microorganismos.
Como se puede apreciar en el Cuadro 33 y en la Figura 66 B, Las variaciones del pH fueron
mínimas, el pH máximo fue de 7.98 hacia el día 30 y un pH mínimo 7.6 hacia el día 1, el
pH tuvo un valor inicial de 7.6 con un valor final de 7.91, al final de la etapa experimental
de 32 días.
10000 8,1
8
8000
7,9
(pool Bacilos/mL)
6000
Concentración
7,8
pH
4000 7,7
2000 7,6
7,5
0
7,4
1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31
-2000 1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31
Tiempo (Días) Tiempo (Días)
(A) (B)
Figura 66. (A) Concentración del pool de formas bacilares en el biorreactor 1, y (B)
Variaciones del pH iniciadas por el crecimiento celular del pool de forma bacilar
experimental de 32 días
98 x 105 para el día 1 y 83 x 10 5 para el día 17 (Se obtuvo los mínimos crecimientos al
el Cuadro 34.
Cuadro 34. Recuento de los microorganismos del pool de Cocobacilos - Cocos y medición
mínimas, el pH máximo fue de 8.31 hacia el día 14 y un pH mínimo 7.57 hacia el día 2, el
pH tuvo un valor inicial de 7.65 con un valor final de 8,01 al final de la etapa experimental
de 32 días.
6000 8,4
5000 8,2
8
4000
7,8
pH
3000
7,6
2000 7,4
1000 7,2
0 7
-1000 1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31
(A) (B)
Figura 67. (A) Concentración del pool de Cocos - Cocobacilos en el biorreactor 2, y (B)
Variaciones del pH iniciadas por el crecimiento celular del pool de Cocos - Cocobacilos
experimental de 32 días.
En cuanto al desarrollo microbiano del pool de Cocos - Cocobacilos, se observaron en la
pool de Cocos - Cocobacilos (células / mL) de 5600 x 105 hacia el día 32 y un mínimo
crecimiento de 82 x 105 para el día 1 y 72 x 10 5 para el día 17 (Se obtuvo los mínimos
el Cuadro 35.
Cuadro 35. Recuento de los microorganismos de los consorcios I, II, III y medición del pH
mínimas, el pH máximo fue de 7.87 hacia el día 20 y un pH mínimo 6.41 hacia el día 26, el
pH tuvo un valor inicial de 7.47 con un valor final de 7.24 al final de la etapa experimental
de 32 días.
2500 10
(consorcio I,II,III,IV / mL)
2000 8
Concentración
1500 6
pH
1000 4
500 (A) 2
(B)
0 0
1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31
-500
Tiempo (Días) Tiempo (Días)
Figura 68. (A) Concentración de los consorcios I, II, III y IV en el biorreactor 3, y (B)
Variaciones del pH iniciadas por el crecimiento celular de los consorcios I, II, III y IV
experimental de 32 días.
En cuanto al desarrollo microbiano de los consorcios I, II, III y IV, se observaron en la
variado y gran variabilidad en los recuentos microbianos con notables fases intermedias de
de los consorcios I, II, III y IV (células / mL) de 1970 x 105 hacia el día 14 y un mínimo
crecimiento de 56 x 105 para el día 1 y 61 x 10 5 para el día 17 (Se obtuvo los mínimos
evitar el golpe directo de las gotas de lluvia y disminuir las perdidas por lixiviación.
y de Fitobactorremediacion 'in Situ'), que determinó cuál de ellos era el más económico y
tenía los más altos porcentajes de biodegradación del crudo Cusiana en suelos
contaminados por derrames inducidos de crudo, al igual que la influencia del crudo y de la
diez días, durante un mes, con lo cual se determinaron los porcentajes de degradación
presentan los porcentajes de degradación logrados por cada uno de estos bioprocesos.
Cuadro 36 Resultados de los porcentajes de degradación logrados por Biorremediación,
microorganismos y plantas), realizados durante un mes sobre un sustrato con crudo al 30%.
Porcentajes de biodegradación
Crudo en gramos / 100 g de suelo
Tratamientos
10 Días 20 Días 30 Días
Jul 11/00 Jul 21/00 Jul 31/00
c0d0 0 4,05 11,15
c0d1 20,95 51,69 70,66
c0d2 10,47 57,43 78,04
c0d3 7,09 30,41 62,84
c1d0 6,08 23,65 41,22
c1d1 14,19 37,84 57,77
c1d2 12,84 44,59 64,19
c1d3 8,78 33,78 59,46
c2d0 4,05 33,78 47,3
c2d1 19,59 34,46 57,43
c2d2 4,05 52,03 67,57
c2d3 12,16 35,81 64,19
* C0 = Sin plantas C1 = Swinglea glutinosa C2 = Brachiaria spp.
** d0 = Sin inóculo microbiano, d1 = pool de formas bacilares,
d2 = Consorcio I, II, III y IV, d3 = pool de Cocos – Cocobacilos.
Los efectos de las plantas (Fitorremediación), de las bacterias (Biorremediación) y de las
60
50 51,69
40
30
20 20,95
10
0 0
0 10 20 30
Tiempo (Días)
(A)
50
40
30 30,41
20
10 7,09
0 0
0 10 20 30
Tiempo (Días)
(B)
80 78,04
60 57,43
40
20
10,47
0 0
0 10 20 30
Tiempo (Días)
(A)
Tratamiento patrón
12
11,15
10
biodegradación
Porcentaje de
8
6
4 11,15%
2 4,05%
0%
0
-2 0 10 20 30
Tiempo (Días)
(B)
consorcios, I, II, III y IV, e (B) patrón (sin plantas y sin inóculo).
Tratamiento de biorremediación
90
P at ró n
80
Porcentaje de biodegradación
70
60 Sin p lan t as +
p o o l 'Bacilo s'
50
40
Sin p lan t as +
30 Co n so rcio s I,
20 II, III, IV
10 Sin p lan t as +
p o o l Co co s -
0
Co co bacilo s
-10 0 10 20 30
Tiempo (Días)
obtuvo un porcentaje de biodegradación más alto (78.04%) siendo este el mejor resultado.
días del ensayo, con curvas iniciales de biodegradación bajas, seguida de una fase de
nivel de campo.
Patrón. Suelo + crudo + consorcios I, II, Suelo + crudo + pool de Cocos y Suelo + crudo + pool de Bacilos .
Intemperismo. III, IV Cocobacilos
Figura 73. Tratamientos en campo de los diferentes semilleros que visualizan los efectos de los inóculos bacterianos en la
biodegradación
Etapa 2. Fitorremediación. Se determinaron los porcentajes de degradación logrados en
40 41,22
Porcentaje de
30
23,65
20
10
6,08
0 0
0 10 20 30
Tiempo (Días)
(A)
47,3
Porcentaje de
40
33,78
30
20
10
4,05
0 0
0 10 20 30
Tiempo (Días)
(B)
60
biodegradación
Porcentaje de
50
En la Figura 75 y en30el Cuadro 38 se observan que a los 30 días en los tratamientos
57,77
de
40 Swinglea
37,84
30 20 glut inosa sin
Fitorremediación
20
(con porcentajes mayores de remoción, comparado con el tratamiento inóculo
14,19
10 10
patrón 11.15%),
0 0
utilizando Swinglea glutinosa se obtuvo el porcentaje de remoción más Brachiaria
0 spp sin
0 10 20 30 inoculo
bajo (41.22%), y utilizando
0 Brachiaria sppTiempo
se obtuvo
10 el porcentaje
(Días) 20 de remoción más
30alto
Figura A -10
(47.3%) siendo este el mejor resultado. Tiempo (Días)
Swinglea glutinosa y Consorcios I, II, III. IV
70
Etapa 3. Fitobactorremediación. Se determinaron los porcentajes de degradación
64,19
60
biodegradación
Porcentaje de
50
logrados en los semilleros con plantas y con inóculo microbiano44,59
(Figuras 76 y 77).
40
30
20
10 12,84
0 0
0 10 20 30
Figura B Tiempo (Días)
50 59,46
40
30 33,78
20
10
8,78
0 0
0 10 20 30
Figura C Tiempo (Días)
Figura 76 Porcentajes de remoción logrados por Fitobactorremediación mediante
Swinglea glutinosa y (A) pool de formas bacilares. (B) Consorcios I, II, III y IV, (C) pool
de Cocos - Cocobacilos.
Brachiaria spp y pool de formas bacilares
biodegradación 70
60
Porcentaje de
50 57,43
40
30 34,46
20 19,59
10
0 0
0 10 20 30
Tiempo (Días)
(A)
60
Porcentaje de
67,57
52,03
40
20
0 0 4,05
0 10 20 30
-20
Tiempo (Días)
(B)
60
Porcentaje de
50 64,19
40
35,81
30
20
10 12,16
0 0
0 10 20 30
Tiempo (Días)
(C)
Figura 77 Porcentajes de remoción logrados por Fitobactorremediación mediante
Brachiaria spp y (A) pool de formas bacilares. (B) Consorcios I, II, III y IV, (C) pool de
Cocos - Cocobacilos.
80
Patrón
Tratamiento de Fitobactorremediación
70
Swinglea
glutinosa +pool
60 de formas
Porcentaje de biodegradación
bacilares
Swinglea
50 glutinosa +
consorcios I, II,
III, IV.
40 Swinglea
glutinosa +pool
de Cocos -
Cocobacilos
30
Brachiaria spp +
pool de formas
bacilares
20
Brachiaria spp +
consorcios I, II,
10 III, IV
Brachiaria spp +
0 pool Cocos -
0 10 Tiempo (Días) 20 30 Cocobacilos
-10
Figura 78. Curvas comparativas de los Porcentajes de biodegradación logrados mediante el
obtuvo el porcentaje de remoción más bajo (57.43%), y utilizando Brachiaria spp y los
consorcios I, II, III, IV se obtuvo el porcentaje de remoción más alto (67.57%) siendo este
el mejor resultado.
Las mejores relaciones para obtener ventajas biodegradativas fueron donde se involucraron
las especies de plantas con el inóculo de los consorcios I, II, III, IV observándose
porcentajes de biodegradación entre 67.57% para Brachiaria spp y 64.19% para Swinglea
glutinosa y donde se alterno Brachiaria spp con el pool de Cocobacilos y Cocos donde se
observó un porcentaje de biodegradación del 64.19%. Ventajas que fueron obtenidas por el
La Figura 79 muestra el cuadro junto con las curvas comparativas de los resultados
70
60
50
40
30
20
10
0
-10 0 10 Tiempo (Días) 20 30
Patrón Swinglea glutinos a + pool de bacilos
Swinglea glutinos a + Cons orcios I, II, III, IV Swinglea glutinos a + pool Cocos - Cocobacilos
Brachiaria s pp + pool bacilos Brachiaria spp + cons orcios I, II, III IV
Brachiaria s pp + Cocos - Cocobacilos pool de formas bacilares
Cons orcios I, II, III, IV Pool de Cocobacilos - Cocos
Swinglea glutinos a Brachiaria spp
*Valores comparativos máximos y mínimos en los porcentajes de biodegradación.
Figura 79 Curvas comparativas de los Porcentajes de biodegradación logrados mediante el diseño experimental de
Fitobactorremediación, Fitorremediación y Biorremediación.
• Se observó que para la mayoría de los semilleros se presentó un período de latencia,
donde el porcentaje de biodegradación fue bajo. En los primeros diez días se obtuvo un
porcentaje de biodegradación menor al 20%, este período esta relacionado con el previo
En los semilleros donde estaban presentes las inoculaciones de los consorcios I, II, III, IV
derrames de crudo.
se observó que en las eras donde estaban presentes todos los grupos de organismos a
tuvo los resultados más favorables, respecto a este inóculo, indicando los efectos sinergicos
• Efecto del crudo en el desarrollo Brachiaria spp. Los valores agronómicos de altura del
vástago, diámetro del tallo, biomasa de la raíz, longitud de la raíz, biomasa total, cobertura,
Cusiana y Brachiaria spp cultivadas en suelo no contaminado fue la muerte de los tallos
rastreros más largos y el aumento de la necromasa en la base del vástago; quince días
después aparecieron tallos nuevos cortos, erectos, con hojas de color verde claro y mayor
cobertura y crecimiento.
Los valores agronómicos de altura del vástago, diámetro del tallo, longitud de la raíz, y
esquematizado en la Figura 80 notándose una respuesta positiva del cultivo Brachiaria spp
longitud de la raíz logrados en plantas de Brachiaria spp y Swinglea glutinosa crecidas durante un mes en dos sustratos experimentales.
ToleranciaIndice de
Tratamientos Raíz Tallo Planta
Longitud Biomasa Longitud Diámetro Biomasa Cobertura
(cm) (g) (cm) (cm) (g) (%)
Final Final Inicial Final Inicial Final Final Inicial Final
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
18,0 20,5 3,7 4,0 41,0 39,0 55,0 53,0 0,4 0,6 0,5 0,7 30,3 15,4
13,0 11,3 3,5 4,1 32,0 34,0 43,0 48,0 0,6 0,5 0,7 0,6 32,2 26,1
C1d0s0 44 47 80 82
14,5 13,0 3,1 3,6 26,0 21,0 30,0 38,0 0,4 0,5 0,6 0,6 25,1 28,6
25,5 18,0 3,0 3,8 36,0 22,0 51,0 37,0 0,5 0,5 0,6 0,6 27,2 35,8
0.146
15,0 17,5 3,0 1,9 36,0 35,0 39,0 36,0 0,4 0,5 0,5 0,5 21,9 18,4
11,0 12,7 2,3 1,7 32,0 43,0 35,0 44,0 0,4 0,5 0,4 0,5 33,9 20,7
c1d0s1 60 63 70 73
11,0 13,5 2,7 2,3 23,0 34,0 25,0 35,0 0,4 0,5 0,5 0,5 12,4 23,3
15,0 9,8 2,7 1,9 34,0 33,0 37,0 34,0 0,5 0,5 0,6 0,5 8,5 14,2
38,0 36,0 4,4 5,3 35,0 37,0 63,6 101,3 0,5 0,6 0,7 0,7 18,3 26,3
39,0 41,0 4,6 4,9 31,0 38,0 56,6 115,3 0,6 0,7 0,7 0,8 47,9 41,9
C2d0s0 35 31 80 86
28,0 33,0 4,4 4,7 32,0 35,0 61,0 102,0 0,6 0,7 0,8 0,9 25,3 29,7
25,0 26,0 5,0 5,3 30,0 42,0 51,6 134,5 0,5 0,5 0,7 0,7 50,1 43,3
1.04
32,0 31,0 7,0 6,9 29,0 37,0 68,3 75,8 0,4 0,5 0,5 0,6 72,4 75,9
33,0 26,0 6,4 6,3 34,0 36,0 80,1 68,5 0,5 0,7 0,6 0,9 44,5 47,3
c2d0s1 25 36 90 92
35,0 30,0 6,9 5,4 31,0 43,0 66,6 168,3 0,6 0,8 0,7 0,9 53,1 40,4
31,0 32,0 6,0 5,0 37,0 41,0 76,6 107,0 0,5 0,6 0,6 0,8 29,7 31,0
* C1 = Swinglea glutinosa. C2 = Brachiaria spp, d0 = sin inóculo.
** S0 = suelo sin crudo, S1 = suelo con crudo
Brachiaria spp
54
Suelo
53
sin
52 crudo
51 Suelo
50 con
crudo
49
Tiem po (30 Días )
Figura 80 Crecimiento del tallo de Brachiaria spp en un sustrato con crudo y otro sin
Brachiaria spp sin crudo (inicial) Brachiaria spp con crudo (inicial)
Brachiaria spp sin crudo (Final) Brachiaria spp con crudo (Final)
cada una de las variables estudiadas, obteniéndose los siguientes resultados (Cuadro 41):
Cuadro 41. Resultados finales de cada una de las variables estudiadas en plantas de
Con estos resultados se observa una tendencia a desarrollar biomasa aérea ‘ Vicio de
en un suelo sin contaminar. Los semilleros cultivados con Brachiaria spp en suelos no
Día
S0 C2 S1 C2
1 2 1 2
6 6.0 6.3 6.1 6.0
11 6.4 6.2 6.2 6.4
16 6.1 6.4 6.4 6.3
21 6.0 6.6 6.6 6.4
26 6.3 6.1 6.7 6.7
31 6.4 6.3 6.4 6.5
En cuanto a los nutrientes para Brachiaria spp (Cuadro 43) la disponibilidad relativa de los
micronutrientes (excepto el Boro) para las plantas y la microbiota del suelo esta debajo de
de este pH, por lo tanto como observamos en los Cuadros 42 y 43 el pH del suelo incentivó
En este sentido como se observa en el Cuadro 43 los análisis foliares resultaron ser
adecuados o superiores a los niveles aceptados (Anexo C) en cuanto a K+, Mg++ y Ca++ e
Cuadro 43 Resultados del análisis foliar para los elementos Ca, Mg, K, Al, Cu, Zn, Fe,
Tratamiento Ca Mg K Al Cu Zn Fe Mn B Ni
Brachiaria spp % ppm
Suelo sin crudo + plantas sin
1,6 0,9 2,2 1,8 5 15,5 81,7 13,3 2,4 0,06
inóculo
Suelo + crudo + plantas sin
1 0,8 1,6 1,2 6,4 18,1 140 21,5 3,6 0,09
inóculo
Estos resultados son dependientes de los nutrientes que aporta el suelo a los
Pero esta disponibilidad de los nutrientes no solo esta afectada por su presencia en el suelo
población bacteriana, que son más eficaces para tomar los nutrientes, por ello los niveles
bajos de los micronutrientes (Cu, Zn, Fe, Mn y B) son aun más bajos en el análisis foliar de
las plantas desarrolladas en un suelo sin contaminar, respecto a las plantas cultivadas en un
medio contaminado.
primarios y secundarios (Ca y K) para las plantas, por ello, los niveles adecuados de los
nutrientes primarios y secundarios de Brachiaria spp cultivada en suelos contaminados
están en los valores bajos del intervalo de los niveles aceptados, comparado con los valores
altos del intervalo de los niveles aceptados en Brachiaria spp cultivadas en suelos sin
contaminar.
El Boro se mantiene en niveles deficientes, el Zinc y el Manganeso están bajos. Los demás
En el Cuadro 43 se aprecian los datos del análisis foliar para los metales pesados,
(0.09 ppm), comparado con el valor del análisis foliar para las muestra vegetales de plantas
cultivadas en un suelo sin contaminar (0.06 ppm). El valor encontrado en el análisis foliar
aceptados para esta especie vegetal, con lo que se determinó que no existió un flujo de
altura del vástago, diámetro del tallo, biomasa de la raíz, longitud de la raíz, biomasa total,
cobertura, nutrición de las plantas e índice de tolerancia se indican en los Cuadros 40 y 46.
El transplante de Swinglea glutinosa no tuvo efectos adversos: el 97 % de las plantas
se observaron hojas de color verde oscuro, hojas caídas durante el transcurso del
experimento con un peso seco de 3.06 gramos, un gran número de retoños que aumentó de
durante el transcurso del experimento con un peso seco de 3.06 gramos y un buen número
respuesta negativa del cultivo Swinglea glutinosa al sustrato suelo – crudo al 30% .
Swinglea glutinosa
14
12 Suelo
Altura del tallo (cm)
10 sin
8 crudo
6
Suelo
4 con
2 crudo
0
Tiem po (30 Días)
Swinglea glutinosa sin crudo (inicial) Swinglea glutinosa con crudo (inicial)
Figura 82 Crecimiento del tallo de Swinglea glutinosa en un sustrato con crudo y otro sin
Swinglea glutinosa sin crudo (final) Swinglea glutinosa con crudo (final)
Figura 83. Tratamientos en campo de los diferentes semilleros que visualizan los efectos
claras en cada una de las variables estudiadas, obteniéndose los siguientes resultados
(Cuadro 44):
Cuadro 44. Resultados finales de cada una de las variables estudiadas en plantas de
La comparación de los datos determina una notable disminución de cada uno de los
parámetros de medida. Notándose una tolerancia baja por parte de Swinglea glutinosa al
hidrocarburo.
Variación del pH
Swinglea glutinosa
Día
S0 C1 S1 C1
RÉPLICAS
1 2 1 2
6 6.1 6.3 6.0 6.0
11 6.5 6.5 6.3 6.4
16 6.4 6.4 6.5 6.2
21 6.2 6.7 6.9 6.8
26 6.3 6.4 6.8 7.1
31 6.1 6.2 7.0 6.7
* S0 = Suelo sin crudo, S1 = Suelo con crudo.
** C1 = Swinglea glutinosa.
en un suelo sin contaminar. Los semilleros cultivados con Swinglea glutinosa en suelos no
para de las plantas y bacterias. Se presentaron niveles adecuados o superiores a los niveles
aceptados en cuanto a K+, Mg++ y Ca++ e inferiores para los microelementos. (Anexo C).
Cuadro 46 Resultados del análisis foliar para los elementos Ca, Mg, K, Al, Cu, Zn, Fe,
Tratamiento Ca Mg K Al Cu Zn Fe Mn B Ni
Swinglea glutinosa % ppm
Suelo sin crudo + plantas
4,5 0,5 0,9 3,2 3,6 20,2 87,6 17,9 4.72 0,08
sin inóculo
Suelo + crudo + plantas sin
6,3 0,65 1,25 4,6 3,5 23,8 148 16,3 6 0,09
inóculo
Se encontró que la presencia del crudo en el suelo disminuyó la población bacteriana, que
son más eficaces para tomar los nutrientes, por ello se observó en el análisis foliar de las
plantas, que los niveles bajos de los micronutrientes (Cu, Zn, Fe, Mn y B) y los niveles
En el Cuadro 46 se aprecian los datos del análisis foliar para los metales pesados y no se
(0.09 ppm), comparado con el valor del análisis foliar para las muestra vegetales de
Swinglea glutinosa cultivadas en un suelo sin contaminar (0.08 ppm). Este valor determinó
Se observo que el crudo ejerció un efecto positivo en la fertilidad del suelo y en la nutrición
suelo; lo mismo que el Cobre, Zinc y Manganeso, que están a concentraciones bajas.
Brachiaria spp
Variables
Raíz Tallo Planta
Tratamientos
Longitud Biomasa Longitud Diámetro Biomasa Cobertura
(cm) (g) (cm) (cm) (g) %
Patrón 31.25 6.24 52.9 0.125 81.79 60.5
Consorcio I, II, III, IV 36,5625 9,3 65,85 0,1125 52,4125 53
Pool Bacilos 32,625 6,2875 56,3375 0,1375 55,5375 40.5
Pool Cocos - Cocobacilos 30,79 8,2 66,5 0,175 78,5 70
* El fondo de color gris corresponde a los valores que son menores al tratamiento patrón
Cuadro 48 Efectos de los inóculos en la altura del vástago, cobertura, diámetro del tallo, densidad de la raíz y biomasa en Brachiaria
spp crecidas durante un mes en un sustrato experimental de suelo - crudo.
Raíz Tallo Planta
Tratamientos
Longitud Biomasa Longitud Diámetro Biomasa Cobertura
(cm) (g) (cm) (cm) (g) (%)
Final Final Inicial Final Inicial Final Final Inicial Final
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
32 31 7 6,9 29 37 68,3 75,8 0,4 0,5 0,5 0,6 112,4 105,9
33 26 6,4 6,3 34 36 80,1 68,5 0,5 0,7 0,6 0,9 104,5 107,3
C2d0s1 25 36 90 92
35 30 6,9 5,4 31 43 66,6 168,3 0,6 0,8 0,7 0,9 93,1 80,4
31 32 6 5 37 41 76,6 107 0,5 0,6 0,6 0,8 19,7 31
32 36 7,9 5,4 33 34 46,3 78,3 0,4 0,6 0,5 0,7 82,3 69,4
28 33 8 5,1 31 35 47,5 125 0,8 0,4 0,9 0,5 60 66,1
C2d1s1 23 33 67 70
34 35 7,1 4,4 39 37 76,3 122,5 0,4 0,9 0,5 1,1 54,7 44,4
31 32 7,6 4,8 34 36 58,8 175 0,9 1 1 1,3 31,6 35,8
38 30 7,7 12,7 28 31 69,3 85 0,7 0,7 0,8 0,9 50,2 24,6
38,5 36 6,9 10,1 26 27 63,4 102,9 0,7 0,9 0,8 1 70,9 32,4
C2d2s1 21 29 76 80
38 39 7,3 10,9 33 34 73 127,1 0,8 0,6 0,9 0,7 50,7 57,7
36 37 6,9 11,9 38 33 88,6 167,5 0,9 0,7 1 0,8 59,7 73,1
34 29 8,3 9 31 35 60,2 117,5 1 0,8 1,1 0,9 94,1 89,1
34,5 27 7,4 8,9 35 32 76,6 118 1 1 1,3 1,3 96,9 88,1
C2d3s1 26 31 97 100
31,8 32 6,8 8 27 41 58,8 175 0,7 1,1 0,8 1,3 60,8 69
24 34 7,7 9,3 29 38 64,8 129 0,8 0,8 0,9 1 62,3 67,4
* C2 = Brachiaria spp. S1 = suelo con crudo. ** d0 = sin inóculo, d1 = pool bacilos, d2 = Consorcio I, II, III, IV, d3 = pool de Cocos – Cocobacilos.
El fondo de color gris del Cuadro 47, indican los resultados de los parámetros que son
menores al tratamiento patrón y con esto se aprecia que los inóculos microbianos
aérea de la planta.
En el tratamiento Brachiaria spp más los consorcios I, II, III y IV se observó un buen
número de tallos largos y viejos, hojas de color verde, algunos tallos jóvenes y necromasa
en su vaina foliar, aquí se vio favorecida la variable raíz al obtenerse los mayores valores
apariencia, con muchos tallos jóvenes erectos con hojas de color verde y un apreciable
desarrollo de la planta.
El tratamiento Brachiaria spp más el pool de bacilos fue muy parecido al patrón,
presentaron muchas hojas muertas en su vaina foliar, las hojas fueron de color verdoso y
En el tratamiento Brachiaria spp sin inóculo (‘Patrón’) se observaron muchas hojas muertas
en su vaina foliar, y hojas de color verdoso, presentó los valores más bajos para las
variables tallo (52.9 cm) y raíz (31.25 cm) y los mas altos para la biomasa de la planta
Cuadro 49 Resultados del análisis foliar para los elementos Ca, Mg, K, Al, Cu, Zn, Fe, B
Ca Mg K Al Cu Zn Fe Mn B Ni
Tratamiento
% ppm
Brachiaria spp
Suelo con crudo, sin inóculo 1,6 0,9 2,2 1,8 5 15,5 81,7 13,3 2.4 0,06
Suelo con Pool de bacilos 1,3 1,2 2,2 1,1 6,3 16,7 78,6 32 2.8 0,06
crudo y Consorcio I, II, III, IV 1,3 1,1 2,3 1,6 5,1 15,5 71,4 26,6 3.26 0,04
Con Pool de Cocos- 1,7 1,5 2,2 0,7 4 16,3 152 39,3 2.8 0,01
Inóculo. Cocobacilos
niveles altos de Hierro, que no llegaron a ser tóxicos para Brachiaria spp, pues este fue el
En el Cuadro 49 se observan valores adecuados para Ca, Mg, K y Fe, valores bajos para los
Brachiaria spp + pool Cocos Brachiaria spp + Consorcios I, II, Brachiaria sin inóculo Brachiaria spp + pool bacilos
y Cocobacilos (Final) III, IV) (Final) (Final) (Final)
Figura 84. Tratamientos en campo de los diferentes semilleros que visualizan los efectos de los inóculos bacterianos en el desarrollo
concentración en el suelo.
En todos los tratamientos se observaron niveles de Ni aceptados para los tejidos vegetales
(0.06 ppm, 0.04 ppm, y 0.01 ppm) sin efectos negativos para los productores secundarios.
En general, se presentó un efecto positivo en la nutrición de Brachiaria spp por parte de los
inóculos bacterianos.
agronómicos de altura del vástago, diámetro del tallo, biomasa de la raíz, longitud de la
El fondo de color gris del Cuadro 50, indican los resultados de los parámetros que son
menores al tratamiento patrón y con esto se aprecia que los inóculos microbianos
cm).
Cuadro 50. Resultados de las variables estudiadas para Swinglea glutinosa en cada
tratamiento.
Swinglea glutinosa
Variables
Raíz Tallo Planta
Tratamientos
Longitud Biomasa Longitud Diámetro Biomasa Cobertura
(cm) (g) (cm) (cm) (g) %
Patrón 13,1875 2,3125 1,75 0,038 19,2 10
Pool de bacilos 18,325 2,5 1,95 0,038 14,8 10.5
Consorcios I, II, III, IV 16,45 2.85 3,413 0,025 22,6 28.5
Pool Cocos - Cocobacilos 14,9 1,85 2,088 0,038 15,8 -14.5
color verde claro, pequeños retoños, aumentando de manera discreta la cobertura (10.05%),
muy pocas hojas inferiores de color amarillo y hojas caídas durante el transcurso del
experimento con un peso seco de 0.9 gramos, se presentó el mayor valor para la longitud de
la raíz (18.325 cm) Se obtuvo una planta muerta en las dos réplicas (Figura 85).
En el tratamiento Swinglea glutinosa más los Consorcios I, II, III, IV, se presentaron los
longitud del tallo, 22.6g para la biomasa total de la planta y 28.05% en el aumento de la
cobertura. Se observaron hojas de color verde claro, buen número de retoños, hojas caídas
Cuadro 51 Efectos de los inóculos en la altura del vástago, cobertura, diámetro del tallo, densidad de la raíz
y biomasa en Swinglea glutinosa crecidas durante 30 días en un sustrato experimental de suelo - crudo.
afectado; se presentaron hojas de color verde amarillento, algunas tenían puntos redondos
de color amarillo, muy pocos retoños y una disminución de la cobertura del (-14.5%), hojas
caídas durante el transcurso del experimento con un peso seco de 4.5 gramos. Se
En el tratamiento Swinglea glutinosa sin inóculo (‘Patrón’), las hojas superiores nuevas
fueron grandes, de color verde claro con un buen número de retoños que no aumentaron
mucho la cobertura (10%) porque sus ramas no se extendieron, hojas caídas durante el
transcurso del experimento con un peso seco de 3.06 gramos. No se obtuvo ninguna planta
Cuadro 52 Resultados del análisis foliar para los elementos Ca, Mg, K, Al, Cu, Zn, Fe,
tratamiento.
Ca Mg K Al Cu Zn Fe Mn B Ni
Tratamiento
% ppm
Swinglea glutinosa
Patrón 4,5 0,5 0,9 3,2 3,6 20,2 87,6 17,9 4.72 0,08
Suelo con Pool bacilos 5 0,5 0,8 4,5 4,35 31,5 103 13,5 4.8 0,1
crudo y Consorcio I, II, III, IV 5,2 0,6 1 3,2 3,75 26,4 96 17 5.56 0,1
Con
Pool Cocos- Cocos 3,8 0,55 0,75 1,95 4,5 19,1 87,6 18,2 3.9 0,06
Inóculo.
En cuanto a los nutrientes (Cuadro 52) se apreciaron niveles bajos para los microelementos,
En todos los tratamientos se observaron niveles de Ni aceptados para los tejidos vegetales
(0.1 ppm, 0.1 ppm, y 0.06 ppm) con un flujo nulo de elementos tóxicos para los
productores secundarios.
Se observó para todos los tratamientos cultivados con Brachiaria spp y Swinglea glutinosa
• Niveles altos de Ca, y Mg, observación vista en el análisis de suelos contaminados con
crudo (Cuadro 9). Existe poca información disponible sobre los síntomas de toxicidad de
estos elementos
Swinglea glutinosa + pool Cocobacilos y Swinglea glutinosa + Swinglea glutinosa sin inoculo Swinglea glutinosa + pool bacilos
Cocos. Tratamiento Consorcios I, II, III, IV (Final)
(Final) (Final) (Final)
Figura 85. Tratamientos en campo de los diferentes semilleros que visualizan los efectos de los inóculos bacterianos en el desarrollo
Colombia; el Cu y el Zn son cationes metálicos pesados que son fácilmente adsorbidos por
inóculadas presentes en los diferentes semilleros con suelos contaminados con crudo
Cusiana. Los valores del crecimiento celular durante el transcurso del experimento se
RÉPLICAS
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
0 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8
3 20 25 950 980 33 38 15 19 42 52 19 27 29 38 82 98 950 990
6 350 380 2200 2900 250 280 201 250 320 360 121 150 720 670 650 690 2950 3100
9 850 730 4100 4200 610 600 450 310 700 780 261 220 1110 1690 910 870 5700 5300
12 1210 1550 7100 7900 980 910 530 690 1000 1100 650 590 970 980 1200 1350 6800 7100
15 2130 2500 9400 9900 1920 1200 820 880 1510 1600 880 950 1500 1750 1900 1400 8900 8100
18 3800 3900 11900 11700 2900 2600 1100 1210 1800 1950 1250 1300 2200 2500 2900 2400 9100 9900
21 4800 4000 12600 13000 3800 3500 1450 1300 2500 2100 1300 1500 3100 2800 2700 2900 10500 10800
24 5700 5400 13400 13900 4900 4100 1500 1650 2400 2800 1400 1700 3800 3600 3400 3800 11700 11100
27 6900 6200 14000 14200 4200 4500 1700 1650 3200 3100 1850 1950 4200 3800 4100 4700 11900 12400
N bacterias (Cel/g)
6,E+08 Pool bacilos I, II, III, IV
1,E+09 1,E+09
5,E+08
1,E+09 1,E+09
4,E+08
8,E+08 8,E+08
3,E+08 6,E+08
6,E+08
2,E+08 4,E+08 4,E+08
1,E+08 2,E+08 2,E+08
0,E+00 0,E+00 0,E+00
-1,E+08 0 6 12 18 24 0 6 12 18 24 0 6 12 18 24
Tiempo (Días) Tiempo (Días)
Tie m po (Días )
Bacilos sin plantas Consorcio sin plantas Cocobacilos sin plantas
Bacilos con S. glutinosa Consorcio con S. glutinosa Cocobacilos + S. glutinosa
Bacilos con Brachiaria spp Consorcio con Brachiaria sp Cocobacilos + Brachiaria sp
Figura 86. Crecimiento de los inóculos bacterianos presentes en los diferentes semilleros.
(A) pool de bacilos, (B) pool de los Consorcios I, II, III, IV, (C) pool de cocos -
cocobacilos.
sin plantas (6500 x 105 cel / g), un crecimiento medio para Brachiaria spp (4000 x 10 5 cel /
g) y un crecimiento mínimo para el tratamiento con Swinglea glutinosa (1700 x 105 cel / g),
Con esto se observó que la presencia de plantas no estimuló el crecimiento del pool de
crecimiento de los consorcios I, II, III, IV; obteniéndose crecimientos bajos para los
tratamientos con Swinglea glutinosa (3150 x 105 cel / g) y Brachiaria spp (4300 x 105 cel /
g) con curvas similares. El tratamiento sin plantas presentó una curva de pendiente
(14100 x 105 cel / g). Al igual que la anterior gráfica estas plantas no presentaron
pendiente pronunciada para el tratamiento con Brachiaria spp (12100 x 10 5 cel / g), a
diferencia de los otros dos tratamientos que presentaron crecimientos bajos (4300 x 10 5
cel / g para el patrón y 1900 x 105 cel / g para Swinglea glutinosa), indicando con esto un
población bacteriana inóculada. Observándose los mínimos valores para la especie vegetal
Swinglea glutinosa (1650 x 105 cel / g para el pool de bacilos, 3150 x 10 5 cel / g para el
inóculo de los consorcios I, II, III, IV y 1900 x 10 5 cel / g para el pool de Cocos -
Cocobacilos) indicando con ello un efecto antagónico entre las plantas y los inóculos
bacterianos bioaumentados.
16000
Sin plantas + Bacilos
14000
Sin plantas + Consorcio
12000
Sin plantas + Cocos y Cocobacilos
10000
Swinglea glutinosa + Bacilos
8000
Swinglea glutinosa + Consorcio
6000
S. glutinosa + Cocos - Cocobacilos.
4000
Brachiaria spp + Bacilos
2000 Brachiaria spp + Consorcio
0 Brachiaria spp + Cocos - Cocobacilos
0 3 6 9 12 15 18 21 24 27
-2000
Tiempo (Días)
microorganismos. (14100 x 105 cel / g), indicando con esto una efectividad en los procesos
biodegradativos.
La especie vegetal Brachiaria spp presentó las mayores poblaciones bacterianas (12100 x
105 cel / g) frente al pool de Cocos – Cocobacilos mostrando con esto una relación de
sinergismo.
Los valores mas altos del crecimiento bacteriano los tuvieron los tratamientos sin plantas
Variación del pH
c 0 d1 c o d2 c 0 d3 C1 d1 c 1 d2 c1 d3 c 2 d1 c2 d2 c2 d3
Día
RÉPLICAS
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
0 6,5 6,5 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52 6,52
5 6,5 6,48 6,54 6,51 6,47 6,42 6,53 6,41 6,47 6,41 6,42 6,53 6,46 6,39 6,21 6,36 6,52 6,49
10 6,1 6,38 6,47 6,32 6,32 6,35 6,41 6,36 6,45 6,25 6,31 6,23 6,45 6,35 6,18 6,28 6,48 6,51
15 6,04 6,1 6,14 6,18 6,28 6,32 6,4 6,37 6,2 6,25 6,21 6,25 6,35 6,4 6,19 6,22 6,44 6,55
20 6 6,09 6,22 6,2 6,22 6,14 6,45 6,34 6,21 6,25 6,17 6,29 6,32 6,41 6,15 6,19 6,47 6,46
25 6,2 6,07 6,12 6,21 6,18 6,21 6,35 6,3 6,25 6,21 6,19 6,31 6,23 6,39 6,03 6,18 6,43 6,4
En el Cuadro
6,1 54 y la Figura 88 se observan las variaciones de pH registradas de cada uno
S. glutinosa + Cocobacilos y Cocos
6
de los 5,9
semilleros, obteniéndose un rango aceptable de 6.05 Brachiaria
- 6.53spppara
+ Bacilos
el crecimiento
Brachiaria spp + Consorcios
celular 5,8
de cada uno de los consorcios bacterianos y de las especies vegetales
Brachiaria cultivadas.
spp + Cocobacilos y Cocos Se
5,7
en el suelo en los diferentes semilleros con suelos contaminados con crudo Cusiana. Los
valores del crecimiento celular durante el transcurso del experimento se indican en la
800
Log células / mL
600
400
200
0
0 3 6 9 12 15 18 21 24 27
Tiempo (Días)
Crudo sin plantas sin inoculo Crudo Sw inglea glutinosa Crudo Brachiaria spp
Figura 89. Crecimiento de las bacterias nativas presentes en los diferentes semilleros
contaminados
En la Figura 89 se observa una fase de adaptación de las bacterias nativas al crudo
crecimiento en Brachiaria spp 721 x 105 (cel / g), el nivel medio en Swinglea glutinosa
615 x 105 (cel / g) y el nivel mas bajo en el tratamiento patrón 388 x 10 5 (cel / g).
y en la Figura 89 se observan las precipitaciones que se presentaron durante los treinta días
Mes Precipitación
Julio. 1 / 00 0,0
Julio. 2 / 00 0,0
Julio. 3 / 00 0,4
Julio. 4 / 00 0,6
Julio. 5 / 00 0,0
Julio. 6 / 00 28,5
Julio. 7 / 00 0,4
Julio. 8 / 00 0,0
Julio. 9 / 00 0,0
Julio. 10 / 00 0,0
Julio. 11/ 00 2,1
Julio. 12 / 00 7,8
Julio. 13 / 00 0,1
Julio. 14 / 00 2,3
Julio. 15 / 00 5,6
Julio. 16 / 00 0,3
Julio. 17 / 00 0,1
Julio. 18 / 00 0,0
Julio. 19 / 00 1,2
Julio. 20 / 00 0,1
Julio. 21 / 00 0,2
Julio. 22 / 00 0,0
Julio. 23 / 00 0,0
Julio. 24 / 00 4,7
Julio. 25 / 00 0,0
Julio. 26 / 00 0,9
Julio. 27 / 00 1,9
Julio. 28 / 00 2,5
Julio. 29 / 00 15,3
Julio. 30 / 00 20,6
Julio. 31 / 00 0,0
TOTAL 95,6
Fecha
lluvias.
En general las precipitaciones o los riegos tuvieron influencia sobre los resultados del
de una interfaz agua – aceite en los espacios intersticiales del suelo, sumado al aire
1) Para datos finales con homogeneidad de varianzas (P > 0.05) se aplico una prueba
2) Para datos al azar de un factor con dos niveles independientes y varianzas homogéneas
3) Cuando se obtuvieron datos al azar de un factor con mas de dos niveles independientes y
aplico Kruskall – Wallis. Con base en los cálculos anteriores se elaboro una tabla del
general e indican que existen diferencias entre los tratamientos, pero no dice entre cuales.
4) Para definir cuáles tratamientos ocasionan rechazo se usó unas pruebas complementarias
o pruebas múltiples de promedios llamadas Post Anova (Test Tukey) y post Kruskal –
Wallis (Test Nemenyi), que señalan qué tan diferentes son los grupos.
5) Para datos al azar de dos factores con niveles independientes y varianzas homogéneas se
aplico Kruskall – Wallis con su posterior análisis de post Anova/ Kruskall. Con el análisis
H0: σ2 = σ2
HA: σ2 ≠ σ2
Si el valor calculado era mayor que el valor critico y si la probabilidad era menor a 0.05 se
Biodegradación.
Se favoreció al medio D, por sus bajos costos, por el aporte mínimo de sales a los suelos y
3.6.2 Determinación de la influencia del medio y del medio modificado con crudo al
* S e rechaza la H0
Los ensayos que se realizaron sobre el crecimiento poblacional del pool de bacilos en un
medio nutritivo con ó sin crudo se evalúan por el test de Wilcoson y la H0 (no existen
con lo que se observa en las gráficas del comportamiento poblacional del pool de bacilos en
Con este test se pudo determinar que el pool de bacilos presentó un mayor crecimiento
6
poblacional en un medio nutritivo sin crudo (102 x 10 al día 9) comparado con su
crecimiento en un medio nutritivo con crudo (15.1 x 10 6 al día 9), que era lo esperado.
permite concluir que el crudo afectó el crecimiento del pool de formas bacilares.
Determinación de la influencia de la variación del pH en el crecimiento del pool de
bacilos.
Pool de Medio
Test estadístico
Bacilos nutritivo
F(1,df) 0.452360
Medio Levene
Probabilidad 0.503638
Nutritivo
fo 0.106614
Con crudo ANOVA
Probabilidad 0.745097
0.106614 y una P = 0.745097. Se corrobora la similitud química presentada entre los dos
Esta semejanza en el pH de los dos medios determinó que no existió un efecto favorable o
Los ensayos que se realizaron sobre el crecimiento de la población microbiana del pool de
seleccionados.
* S e rechaza la H0
Con este test se determino que el crecimiento del pool Cocos - Cocobacilos en ausencia de
6
crudo (1290 x 10 al día 7) presentó los niveles mas altos de crecimiento medido como
UFC/mL, comparado con su crecimiento en un medio nutritivo con crudo (370 x 10 6 al día
11)
permite concluir que el crudo afectó el crecimiento del pool de Cocos - Cocobacilos.
El pH en los medios nutritivos con ó sin crudo no presentó diferencias significativas, para
Cocobacilos.
Cocobacilos Medio
Test estadístico
Cocos nutritivo
Medio F(1,df) 0.765400
Levene
Probabilidad 0.384915
Nutritivo
fo 0.005715
ANOVA
Con crudo Probabilidad 0.939975
Esta semejanza en el pH de los dos medios determinó que no existió un efecto favorable o
desfavorable sobre la influencia del medio en el crecimiento del pool microbiano Cocos –
Cuadro 61 Determinación del efecto del crudo en el crecimiento de los consorcios I, II, III, IV.
* S e rechaza la H0
Los análisis estadísticos determinan que el crecimiento de las bacterias en presencia de
crudo (823 x 10 6 ) alcanzan los niveles mas altos, comparado con su crecimiento en un
medio sin crudo (2.5 x 10 6 ), presentándose diferencias estadísticas significativas con una P
= 0, confirmándose que en efecto, los consorcios I, II, III, IV fueron adaptados al crudo
III, IV.
consorcios I, Medio de
Test estadístico
II, III, IV sales
Medio de F(1,df) 7.702782
Levene
Probabilidad 0.006828
Sales con
Kruskal - H 57.7779
crudo Wallis Probabilidad 0.0000
* S e rechaza la H0
de cultivo, para confirmarlo se aplicaron las pruebas estadísticas, Kruskal -Wallis con una
inoculados.
del pool de bacilos en los tratamientos con presencia de plantas 'Fitorremediación' (1650 x
5 5
10 en Swinglea glutinosa y 4000 x 10 en Brachiaria spp) y en ausencia de plantas
* S e rechaza la H0
c > b > a.
Los análisis indican que se presentaron diferencias estadísticas en los tres tratamientos, con
el mayor crecimiento poblacional de los consorcios I, II, III, IV en los tratamientos donde
crecimiento en los tratamientos donde se cultivo Swinglea glutinosa, (4400 x 105 al día 27)
'Fitorremediación', observándose con esto una relación negativa aportada por la plantas
en los diferentes suelos, con una P = 0.003149 y por medio de un test post anova (Tukey)
se observo que la diferencia estaba dada por el tratamiento que poseía el pool ‘Cocobacilos
– Cocos’ + cultivo Brachiaria spp con un mayor crecimiento poblacional del consorcio
bacteriano.
Los análisis indican que existió un efecto sinergico por parte de Brachiaria spp hacia el
pool de ‘Cocobacilos – Cocos’ (12100 x 105 células/mL) Confirmando que las bacterias
que reaccionan con las raíces pertenecen a corresponden más marcadamente a los bacilos
cortos Gram negativos (Edwuarsiella spp, Hafnia spp, Enterobacter spp, Pseudomonas
inóculos bioaumentados. Efecto causado por la presencia del suelo contaminado con crudo
Cusiana que aporto a esta especie vegetal condiciones adversas para su desarrollo.
bacilos’
de bacilos.
inoculados con el pool de bacilos. Determinados por el test Kruskal –Wallis con una
probabilidad de 0.1341.
consorcios I, II,
III, IV
Test estadístico Inóculo sin plantas
S. glutinosa y F(1,df) 1.359505
Levene
Probabilidad 0.270794
Brachiaria spp fo 1.103580
ANOVA
con inóculo Probabilidad 0.343612
inoculados con los consorcios bacterianos I, II, III, IV, determinados por el test Anova con
(Nemenyi).
Cuadro 68 Determinación de las variaciones del pH en el crecimiento poblacional del
Cocobacilos
Test estadístico Inóculo sin plantas
Cocos
F(1,df) 6.585688
S. glutinosa y Levene
Probabilidad 0.003920
Brachiaria Kruskal - H 8.897574
Wallis Probabilidad 0.0117
spp C0 a
Nemenyi C1 a
con inóculo
C2 b
tratamiento sin plantas (6.18 - 6.52) y con Swinglea glutinosa (6.17 - 6.52) presentó las
mismas variaciones de pH con una ligera acidez, el tratamiento con Brachiaria spp presentó
una variación de pH entre 6.43 - 6.55. Estas variaciones bajas de pH permitieron comparar
semilleros con suelos contaminados con crudo Cusiana. En el Cuadro 69 se aprecian las
cultivo de ellas.
bacterias nativas presentes en cada uno de los diferentes semilleros con suelos
Los tratamientos con cultivo de Brachiaria spp presentaron un leve aumento de la población
bacteriana nativa con respecto a los otros tratamientos. Pero esta diferencia no fue
experimento, donde se hace necesario una adaptación inicial de las plantas después del
Cuadro 71. Resultados finales de cada una de las variables estudiadas en plantas de
crecimiento en cada una de las variables estudiadas (Longitud del tallo, diámetro del tallo,
biomasa de la raíz, biomasa total y cobertura) por la presencia de crudo Cusiana en el suelo.
Resultados vistos por el bajo índice de tolerancia obtenido (0.144). (Figura 91)
Cuadro 72. Resultados finales de cada una de las variables estudiadas en plantas de
Figura 92 Figura comparativa del desarrollo de las distintas variables en Brachiaria spp
diferencias significativas en las variables que determinan la parte aérea de la planta (tallo,
92)
esta condición química no es un punto de partida para las diferencias presentadas en cada
uno de los tratamientos. Estas condiciones indican la actitud buffer del suelo al presentarse
un contaminante en su medio.
plantas cultivadas en los diferentes semilleros con suelos contaminados con crudo
Cusiana.
Cuadro 75 Determinación del efecto de la población bacteriana en el desarrollo de las plantas cultivadas en los diferentes
estadístico Longitud (cm) Biomasa (g) Longitud (cm) Diámetro (cm) Biomasa total (g)
Pool 1 Consor Pool 2 Pool 1 Consor Pool 2 Pool 1 Consor Pool 2 Pool 1 Consor Pool 2 Pool 1 Consor Pool 2
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
F(1,df) 3.22672 8.93551 2.88117 1.03254 4.01902 0.89427 0.25925 3.64867 0.01907 0.33689 0.02621 0.00 4.21408 0.02295 3.42267
Levene 0.09404 0.00975 0.11172 0.32680 0.06472 0.36035 0.61856 0.07681 0.89212 0.57085 0.87368 1.00000 0.05927 0.88173 0.08552
P
-2,7605 -1,1265 -1,5412 -1,3120 2,99127 -0,4386 -2,1175 -0,7092 -1,8E- 0,35675 0 1,68608 -0,8385 1,16129
t
Swinglea
Student' t 16
P 0,02807 0,2970 0,16714 0,23090 0,02018 0,67411 0,07198 0,50107 1 0,73178 1 0,13564 0,42940 0,28358
crudoBrachiaria
Wilcoxon T 7.000
P 0.236
Test Brachiaria spp + Crudo + Inóculos
estadístico
F(1,df) 0.02258 0.03232 2.13629 0.00 23.9085 0.34372 2.01348 0.26721 1.26384 1.14545 1.57657 5.72727 3.64342 4.00495 4.45489
Levene
P 0.88269 0.85988 0.16593 1.00000 0.00023 0.56701 0.17778 0.61327 0.27983 0.30260 0.22980 0.03127 0.07700 0.06514 0.05327
t -0,9816 -4,4045 0,39498 -0,1144 -4,1891 -0,2355 -1,1819 -1,5789 -0,5516 0,55167 3,39967 1,73785 0,34281
Student' t
P 0,35898 0,00313 0,70461 0,91206 0,00409 0,82054 0,27580 0,1583 0,59833 0,59833 0,01144 0,12580 0,74180
• Pool 1 = Bacilos.
• Consorcio 1 =I, II, III, IV.
• Pool 2 = Cocos – Cocobacilos.
* La hipótesis nula se rechaza
En la mayoría de los resultados no se encontraron diferencias significativas para las
Cuadro 76 Valores que dieron diferencias significativas en cada una de las variables
Brachiaria spp
Variables Sin inóculo Con inóculo
Pool Consorcios Pool Cocos Pool Consorcios Pool de Cocos -
Estudiadas. bacilos I, II, III, IV Cocobacilos bacilos I, II, III, IV Cocobacilos
Biomasa total 81.75 g 55.5 g
Longitud de la raíz 31.25 cm 36.56 cm
Biomasa de la raíz 6.24 g 9.3 g
Biomasa de la raíz 6.24 g 8.175 g
Diámetro del tallo 0.125 cm 0.175 cm
Brachiaria spp, con un aporte importante para la raíz, también se observo un efecto
de Brachiaria spp.
Los datos muestran que no se presentaron diferencias estadísticas significativas en cuanto al
desarrollo de Swinglea glutinosa con ó sin inóculo bacteriano, con dos excepciones en
formas bacilares.
El análisis de costos se llevó a cabo teniendo en cuenta dos fases consecutivas del proyecto.
microbiana en cada uno de los tratamientos durante un periodo de treinta días por medios
a. COSTOS FIJOS-
Biorreactores $ 900.000=
Depreciación de los Biorreactores $ 11.100=
Mantenimiento del biorreactor $ 22.500=
Compresor 3/4 HP $ 350.000=
depreciación del compresor $ 4.316=
Mantenimiento del biorreactor $ 22.500=
Material de vidrio $ 350.000=
Bombas de Oxigeno $ 126.000=
Depreciación de las bombas de Oxigeno $ 1.554=
Nevera $ 380.00=0
Depreciación de la nevera $ 4686=
Inóculo $ 23.000=
Agar nutritivo $ 25.000=
Medio nutritivo $ 134.000=
Medio de sales $ 10.000=
Servicios públicos (Agua y energía) $ 50.000=
a. COSTOS FIJOS
a. COSTOS FIJOS.
b. COSTOS VARIABLES.
Costos agronómicos
Semillas $ 20.000=
Plantas $ 33.000=
Agua $ 5.000=
Costos de análisis
a. COSTOS FIJOS.
b. COSTOS VARIABLES.
Costos agronómicos
Semillas $ 20.000=
Plantas $ 66.000=
Agua $ 23.000=
Costos de análisis
medios nutritivos, donde estaba presente el hidrocarburo más los pool bacterianos (el Pool
presencia del contaminante y en los medios con sales, donde estaba presente el
hidrocarburo más los Consorcios bacterianos I, II, III y IV, las adaptaciones fueron altas.
Número células / mL x 10 6
Tipos bacterianos en los
Sin crudo Con crudo al 10%
diferentes medios de cultivo
Agar nutritivo
Pool de Bacilos 102 18
Pool de Cocos y Cocobacilos 1020 370
Consorcios bacterianos I, II, Medio con sales D
III y IV 7.29 860
Durante el bioproceso de biodegradación, el pH no presentó grandes variaciones para
los diferentes tipos microbianos en los 24 tratamientos (Cuadro 78), observándose que no
Cuadro 78. Variaciones del pH en los diferentes tratamientos como consecuencia del
los consorcios bacterianos I, II, III y IV bajo condiciones de laboratorio, se obtuvieron los
sin surfactante 50 %
Medio con sales C
con surfactante 58 %
sin surfactante 68 %
Medio con sales D
con surfactante 75 %
Encontrándose los mejores resultados para el medio con sales D (medio económico, bajo en
La biodegradación del crudo de Cusiana tuvo dos etapas: una inicial rápida, donde
valores del 21% y una segunda más lenta, donde quedaron compuestos difíciles de degradar
o recalcitrantes.
Para la mayoría de las semillas y plantas cultivadas en suelos contaminados con crudo
(30%). Helianthus annuus fueron las únicas semillas que tuvieron altos porcentajes de
germinación (80%) en suelos contaminados con crudo de Cusiana al 30%, pero finalmente
y Fitobactorremediación.
con bacterias que poseían inducción enzimática (consorcios I, II, III, IV con 78.04%),
comparado con los tratamientos inoculados con bacterias adaptadas al crudo Cusiana (pool
en su cobertura:
mejor contacto suelo- raíz en la especie vegetal Brachiaria spp, fueron características que
aportaron ventajas a los procesos de Fitorremediación (47%), obteniéndose los mejores
resultó afectada en cada una de las variables estudiadas. A diferencia, Brachiaria spp
fertilización (cobertura del 92%), indicó que ésta era una especie vegetal poco exigente en
suelos y nutrientes, con una alta resistencia a la presencia de contaminantes y por ende, un
Cuadro 80 Análisis foliar para los elementos Ca, Mg, K, Al, Cu, Zn, Fe, Mn, B y Ni en
Swinglea glutinosa y Brachiaria spp.
Tratamientos Ca Mg K Al Cu Zn Fe Mn B Ni
S. glutinosa más Suelo + crudo 6,3 0,65 1,25 4,6 3,5 23,8 148 16,3 6 0,09
Brachiaria spp más Suelo + crudo 1 0,8 1,6 1,2 6,4 18,1 140 21,5 3,6 0,09
105 cel/g), encontrándose ningún efecto de las plantas hacia las bacterias nativas.
células/mL) comparado con el tratamiento patrón (4350 x 105 células/mL). Esto confirmó
que las bacterias que reaccionan a la presencia de las raíces pertenecen o corresponden de
forma más marcada a los Bacilos cortos gram negativos (Edwuarsiella spp, Hafnia spp,
beneficios significativos a las especies vegetales Swinglea glutinosa y Brachiaria spp, salvo
biorremoción (11.15%) y en el número poblacional inferior (403 x 105) del bloque control,
105) el pool de Cocos - Cocobacilos (4900 x 105) y los consorcios I, II, III, IV (14200 x
105).
La presencia de una población bacteriana bioaumentada, poco frecuente en la rizosfera
de plantas (pool de bacilos y consorcio I, II, III, IV), hizo que los aportes nutritivos por
Usar un tiempo mayor para los procesos de Fitorremediación para así permitir a las
colonizadoras en zonas afectadas por este tipo de contaminación, para facilitar la tarea de
1993. Contaminated Soil’ 93. Remediation of contaminated soil: State of the art and
Colombia. pp 544.
compounds - putting microbial metabolism to work. Tibtech Volume 11: 360 - 37.
Press. pp 33 - 54.
17. CURL, E.A., & B. TRUELOVE. 1986. The Rhizosphere. Springer - Verlag Berlin.
pp. 9 - 13, 30 - 45, 52 - 55, 79 - 90, 93 - 102, 113 - 124, 141 - 150.
18. DOMENECH, X. 1995. Química del Suelo. ‘El impacto de los contaminantes’.
22. EPA. November 1997. Phytoremediation of Organics Action Team. EPA 542 – F – 97
23. EPA. August 1998. A Citizen’s Guide to Phytoremediation. EPA 542 - F - 98 - 011
intensivo de suelos biorremediados en reactor Airlift. Proyecto ENV 21: Intensive soil
198
29. GARCIA, D. R. & R. A. LIZARAZO. 1995. Diseño de una estación móvil para el
30. GOLA, G., G. NEGRI & C. CAPPELLETTI. 1965. Tratado de Botánica. 2ª ed, Labor,
31. GOMEZ, L.H. 1997. Estadística Experimental con aplicaciones a las ciencias agrícolas.
Universidad Nacional de Colombia. Medellín. Primera edición. pp 170 - 191, 290 - 300.
32. GREULACH, V. A. & J.E. ADAMS. 1970. Las Plantas. Limusa. México. pp 135 - 138
pp 25 – 32.
38. KRACAUER, E., A. BENZECRY & F. KAYLOR. 1994. Mala hierba común podría
pp 30
39. LEON, C. G. 1998. Análisis del tejido vegetal - aspectos importantes. Universidad
Grupo Editor, Zaragoza, España. Segunda edición. pp 159 - 167, 303 - 317.
49. PEREZ, C., 1997. Análisis Estadístico con STATGRAPHICS. Técnicas básicas.
50. PORTA, C. J., LÓPEZ, A. C. & C. ROQUERO. 1994. Edafología para la agricultura y
el medio ambiente, Mundi - Prensa. Madrid. pp 203 - 207, 403 - 427, 489 - 493, 695 - 707,
739 - 753
51. PRADO, M. A., M. LÓPEZ & J. BOISSIERE. 1994. Recuperación de suelos
52. PRADO, M. A.; A. QUILICI & F. ORTEGA. 1994. Estudio descriptivo y funcional
54. RESTREPO, M.R. 1993. Implicaciones ecológicas en la fauna y la flora del suelo por
55. RUSSELL, R. S. 1977 Plant root systems: Their function and interaction with the soil.
13 - 18.
57. SANCHEZ, H; G. ARENAS & D. ZULUAGA. 1992. Estudio bioedafologico del
área petrolera de caño limón (Arauca - Colombia). Tesis de pregrado. Universidad Nacional
59. SILVA, M.F. 1980. Memorias del curso Fertilidad de Suelos. Sociedad Colombiana de
60. SILVA, M.F. 1991. Memorias del seminario Fundamentos para la interpretación de
análisis de suelos, plantas y aguas para riego. Comité regional de Cundinamarca y Boyacá
pp 275 - 286.
61. VANEGAS, F. C; & C.P. CASTILLO. 1997 Evaluación y caracterización del daño
65. WANG, T. C., et al. 1995. Bioremoval of Toxic Elements with Aquatic Plants and
66. ZAR, J. H. 1984 Biostatistical Analysis. Prentice Hall, INC. USA. pp 179 - 303.
Mayo 46 - 47.
68.http://www.ciencias.uma.es/publicaciones/encuentros/ENCUENTROS61/pseudomonas.
69.http://lbewww.epfl.ch/COST837/WG1_abstracts.html#Edwards EDWARDS, R.
University of Durham.
IMA-USACh. Chile pp 1 - 4.
77.http://www.iztapalapa.uam.mx/iztapala.www/cemanahu.ac/numero31/saga.htm
79. http://www.ipd.anl.gov/biotech/publications/phyto/phyto1.html#chelation
Energy.
Approaches ‘The vital role of plant biochemistry in cleaning up organic compounds’. U.S.
Este estudio presenta los resultados de un ensayo de campo realizado sobre semilleros
petrolizados en el cual se compararon las eficiencias de tres bioprocesos, con respecto a la
remoción de hidrocarburos totales durante un periodo de 30 días, con el fin de restablecer
suelos contaminados con crudo Cusiana al 30 % P/P: 1) Biorremediación: Se
seleccionaron bacterias nativas presentes en el suelo (pool 1 = Bacillus, Corynebacterium y
Nocardia; pool 2 = Edwuarsiella, Hafnia, Enterobacter, Micrococcus, Streptococcus y
Pseudomonas; y consorcios = Bacillus, Micrococcus, Streptococcus, Enterobacter y
Corynebacterium) y se adaptaron al hidrocarburo para iniciar los procesos de
biodegradación por bioaumentación. 2) Fitorremediación: Se estudió la vegetación
cultivada y se seleccionaron aquellas con mayor tolerancia y rápida cobertura en suelos
contaminados por hidrocarburos (Swinglea glutinosa y Brachiaria spp). 3)
Fitobactorremediación: Las bacterias nativas adaptadas se inocularon en la rizosfera de las
plantas seleccionadas y se describieron las relaciones planta - bacteria, que se manifestaron
en el crecimiento de los microorganismos y de las plantas, para determinar su influencia en
la biorremoción. Las mediciones de las variables de crecimiento (número de bacterias /
mL, longitud y biomasa de la raíz, diámetro y altura del tallo, biomasa total y cobertura) se
sometieron a un análisis de varianza empleando un diseño completamente al azar. Se
encontró que a) la Biodegradación (70.5%) es más eficiente que la Fitorremediación
(44.26%) y que la Fitobactorremediación (62%), b) la Fitorremediación es un bioproceso
lento y económico con buenos aportes para la biorremoción y c) el empleo de entes
biológicos ausentes de sinergismo, 'Fitobactorremediación', no aportó resultados mayores
en procesos de biorremoción respecto a los presentados en biorremediación, exceptuando el
tratamiento Brachiaria spp inoculada con el pool 2, que mostró diferencias significativas en
el número poblacional de microorganismos (P = 0.00315) entre todos los tratamientos, y el
mayor porcentaje de biorremoción entre los tratamientos inoculados con el pool 2 (64.19%)
d) a diferencia de Brachiaria spp (índice de tolerancia 1.04), Swinglea glutinosa fue
afectada por el crudo Cusiana (índice de tolerancia 0.144) y mostró diferencias
significativas para las variables de crecimiento en los siguientes niveles de probabilidad:
Biomasa de la raíz (0.000032), longitud del tallo (0.000002), diámetro del tallo (0.0277),
biomasa total (0.030).