ADN y su extracción en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMNº 11 Alte Brown6 de junio de 2008
La molécula que guarda todos los secretos…
El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucleótidos. Cadanucleótido, a su vez, está compuesto por un azúcar de 5 carbonos (desoxirribosa),un grupo fosfato y una base nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro:adenina (A), timina (T), citosina (C), y guanina (G), y siempre una A se enfrenta auna T y una C se enfrenta a una G en la doble cadena. Las bases enfrentadas sedice que son complementarias. El ADN adopta una forma de doble hélice, como unaescalera caracol donde los lados son cadenas de azúcares y fosfatos conectadaspor "escalones", que son las bases nitrogenadas. La molécula de ADN se asocia aproteínas, llamadas
histonas
, y se encuentra muy enrollada y compactada paraformar el cromosoma. Esta asociación de ADN y proteínas se conoce comocromatina. La cromatina puede estar enrollada en mayor o menor grado,dependiendo de la etapa en que se encuentra la célula; por ejemplo, cuando el ADNse ha duplicado antes de que la célula se divida, la cromatina se compacta en sumayor grado, y como resultado se pueden visualizar los cromosomas duplicados almicroscopio como corpúsculos con forma de X.
ADN y su extracción en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMNº 11 Alte Brown6 de junio de 2008
Extracción de ADN en el laboratorio
El ADN se encuentra presente en todos los seres vivos. Un “alfabeto” de 20 Aminoácidospuede escribir todas las proteínas que regulan la vida sobre la tierra.En el laboratorio extraeremos ADN de células vegetales y animales.
Protocolos de trabajo:
•
Extracción de ADN en células animales:
El objetivo del presente trabajo es la extracción de ADN presente en las células del hígadode pollo. Para ello debemos provocar la ruptura de los tejidos, el estallido de los núcleos y laseparación de las proteínas asociadas al ADN.Los diferentes pasos de esta técnica van cubriendo estas etapas.Materiales:Hígado de polloVarilla de vidrioMorteroVasos de precipitadoPipetaProbetaEtanolSolución de cloruro de sodio 10% m/VDetergente de color claro o champúArenaGasaHieloAgua destilada
1-
Colocar en un recipiente adecuado (conservadora de hielo o envase de helados)un vaso de precipitado con 50 cm
3
de etanol entre cubos de hielo. Preparar lasolución de cloruro de sodio2-Colocar el hígado pollo trozado en un mortero con un poco de arena y triturar (laarena favorece la ruptura de membranas)
3-
Agregar al triturado 50 cm
3
de agua destilada hasta formar una especie de papillao puré
ADN y su extracción en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMNº 11 Alte Brown6 de junio de 2008
4-Esta papilla se filtra colocando gasa en embudo varias veces hasta retener todos los posibles trozos de tejidos en suspensión. Medir el filtrado con probeta5-Agregar al filtrado igual cantidad de solución de cloruro de sodio 10% m/V con loque se consigue producir el estallido de los núcleos y la exposición de la fibrasde cromatina.6-Agregar 1 cucharadita de detergente o champú que formará un complejo con lasproteínas asociadas al ADN dejándolo libre. (Mezcla suavemente evitando laformación de espuma)
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