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DETERMINACION ENZIMATICA DEL ALMIDON

DETERMINACION ENZIMATICA DEL ALMIDON

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10/04/2013

 
DIGESTIÓN ENZIMÁTICA DEL ALMIDÓN1.OBJETIVO
Determinar la actividad enzimática de la alfa amilasa salival e identificar los productos de la digestión delalmidón.
2.PROCEDIMIENTO
Preparar una batería de tubos como sigue: Tubo 1Tubo 2Tubo 3Almidón al 1% (mL.)1.01.01.0Buffer Fosfato (mL.) pH=6.80.50.5---HCL 0.5N (mL.)------1.2Agua destilada (mL.)---1.20.5NaCL 0.9% (mL.)1.2------NaCL: activador de la enzima alfa amilasa salival. Tubo 1,2: pH óptimo Tubo 3: pH ácidoLlevar a baño maría de 37ºC por 5’ y luego agregarAlfa amilasa (mL.)0.50.50.5 Tubo 1 + Alfa amilasa salival: digerido I Tubo 2 + Alfa amilasa salival: digerido II Tubo 3 + Alfa amilasa salival: digerido III
3.FUNDAMENTO
Reacción del Lugol
El lugol o solución de Lugol es unasolucióndeI
2
(1%) en equilibrio conKI(2%) enagua destilada. Fue nombrada en honor alfísico francés J. G. A. Lugol. El Lugol colorea las micelas de almidón de color azul intenso casi negro. El almidón es una mezcla (en diferentes proporciones según las especies) de lospolisacáridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidón es coloreado de azul en presenciade Lugol, debido a una adsorción o fijación del I
-3
sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda amantener su estructura. Al calentar hasta ebullición, desaparece la estructura ternaria (incoloro) yreaparece al enfriar (azul-violeta). Tubo 1Tubo 2Tubo 3Digerido I1.0------Digerido II---1.0---Digerido III------1.0HCL 0.5N0.50.50.5Lugol2.02.02.0
Reacción de Benedict
La reacción o prueba de Benedict identificaazúcares reductores(aquellos que tienen su OH anoméricolibre), como ellactosa, laglucosa,lamaltosa,ycelobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu
2+
que tiene color azul a Cu
+
, que precipita de la solución alcalina comoCu
2
Ode color rojo-naranja. Elfundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, elioncúprico (otorgado por el sulfatocúprico) es capaz de reducirse por efecto delgrupo aldónicodel azúcar (CHO) a su forma de Cu
+
. Estenuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu
2
O).El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el azúcar en solución forma unanillo de piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su grupo aldehído puede reaccionarcon el ion cúprico en solución.En resumen, se habla de azúcares reductores cuando tienen su OH anomérico libre, y éstos son los quedan positivo en la prueba de Benedict. Tubo 1Tubo 2Tubo 3Digerido I0.5------Digerido II---0.5---Digerido III------0.5Rvo. de Benedict0.50.50.5

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