c

   



  
    c    
c  

 

Emplear la técnica de c

    

   para poder identificar
proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre (metionina y cisteína).

c



Ôos 

 son las unidades más simples que componen las proteínas. Algunos de
ellos son esenciales, es decir, han de ser aportados diariamente a través de los alimentos
porque el organismo no es capaz de producirlos por sí mismo, mientras que otros no son
esenciales, puesto que el organismo sí es capaz de sintetizarlos a partir de otros
compuestos químicos.

En el grupo de los 

  
  se encuentra la metionina (un aminoácido
azufrado), mientras que la cisteína es un aminoácido no esencial, ya que se puede formar
a partir del anterior (no al revés). Ôos 

  se diferencian del resto en
que contienen azufre en su composición, de ahí su nombre. Tanto es así que la mayor
parte del azufre que se consume en la dieta se encuentra en los aminoácidos azufrados.

El azufre es un mineral necesario para la formación del colágeno y otros componentes

proteicos que forman parte del tejido conectivo, como la queratina y otros
mucopolisacáridos que componen los huesos, los cartílagos, los tendones y los
ligamentos. Por ello, un aporte adecuado de azufre a través de aminoácidos azufrados es
esencial para el buen mantenimiento de la piel, el cabello, así como los ligamentos y los
tendones.

 
 

PROTEÍNAS

Ôas proteínas son macromoléculas orgánicas formadas por cadenas lineales de

aminoácidos. El nombre proteína proviene de la palabra griega ("ssis"), que significa
"ona" o del dios proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar.

Ôas proteínas son los materiales que desempeñan un mayor número de funciones en las
células de todos los seres vivos. por un lado, forman parte de la estructura básica de los
tejidos (músculos, tendones, piel, uñas, etc.) y, por otro, desempeñan funciones
metabólicas y reguladoras (asimilación de nutrientes, transporte de oxígeno y de grasas
en la sangre, inactivación de materiales tóxicos o peligrosos, etc.). También son los
elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura
del código genético (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraños
en el sistema inmunitario.

Clasificación y estructura.
Ôa organización de una proteína viene definida por cuatro niveles estructurales
denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura
cuaternaria. Cada una de estas estructuras informa de la disposición de la anterior en el
espacio.

Estructura primaria

Ôa estructura primaria es la secuencia de aa. de la proteína. Nos indica qué a.a.

Componen la cadena polipeptídica y el orden en que dichos a.a. Se encuentran. la función
de una proteína depende de su secuencia y de la forma que ésta adopte.

Estructura secundaria

Ôa estructura secundaria es la disposición de la secuencia de aminoácidos en el espacio.

Ôos a.a., a medida que van siendo enlazados durante la síntesis de proteínas y gracias a
la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposición espacial estable, la
estructura secundaria.

Existen dos tipos de estructura secundaria:

0 la a(alfa)-hélice

0 la conformación beta

Estructura terciaria

Ôa estructura terciaria informa sobre la disposición de la estructura secundaria de un

polipéptido al plegarse sobre sí misma originando una conformación globular.

En definitiva, es la estructura primaria la que determina cuál será la secundaria y por tanto
la terciaria.

Esta conformación globular facilita la solubilidad en agua y así realizar funciones de

transporte, enzimáticas, hormonales, etc.

Esta conformación globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre

los radicales r de los aminoácidos. Aparecen varios tipos de enlaces:

Î el puente disulfuro entre los radicales de aminoácidos que tiene azufre.

Î los puentes de hidrógeno

 Î los puentes eléctricos

Î las interacciones hifrófobas.

Estructura cuaternaria

Esta estructura informa de la unión, mediante enlaces débiles ( no covalentes) de varias

cadenas polipeptídicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada
una de estas cadenas polipeptídicas recibe el nombre de protómero.

El número de protómeros varía desde dos como en la hexoquinasa, cuatro como en la

hemoglobina, o muchos como la cápsida del virus de la poliomielitis, que consta de 60
unidades proteícas.

ENÔACE DISUÔ URO

Dos cisteínas unidas por un puente disulfuro (s²s) para formar una cistina. un enlace
disulfuro, puente disulfuro o enlace ss (enlace azufre-azufre) es un enlace covalente
fuerte entre grupos tiol (-sh2) de dos cisteínas. Este enlace es muy importante en la
estructura, plegamiento y función de las proteínas.

El grupo sulfhidrilo (-sh2) de la cisteína es muy reactivo. la reacción más común es una
oxidación reversible que forma un disulfuro. la oxidación de dos moléculas de cisteína
forma cistina, una molécula que contiene un enlace disulfuro. cuando dos residuos de
cisteína forman un enlace así, se denomina puente disulfuro. el enlace puede producirse
en una única cadena para formar un anillo o entre dos cadenas separadas para formar un
puente intermolecular. los puentes disulfuro ayudan a estabilizar muchos polipéptidos y
proteínas.

   

Para aminoacidos asufrados utilizamos un medio alcalino y junto con sales de plomo
formamos un presipitado negro (pbs)

Reacción de los aminoácidos azufrados se pone de manifiesto por la formación de un

precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reacción en la separación
mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución
de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo

ovoalbúmina.- la ovoalbúmina es la principal proteína de la clara del huevo (60-65% del

peso de la clara de huevo. pertenece a la superfamilia proteínica de las serpinas, aunque
a diferencia de la mayoría de éstas la ovoalbúmina no es capaz de inhibir cualquier
peptidas. la función biológica de la ovoalbúmina es desconocida, aunque se presume que
sea una reserva de proteínas para la cria del ave. otros autores señalan la capacidad que
posee la ovoalbúmina de anular los enzimas digestivos y por esta razón señalan que es
un mecanismo protector contra las bacterias exteriores agresoras al huevo.
Desnaturalización de una proteína

En bioquímica, la desnaturalización es un cambio estructural de las proteínas o ácidos

nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su óptimo funcionamiento y
a veces también cambian sus propiedades físico-químicas.

Ôas proteínas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional

(conformación química) y así el característico plegamiento de su estructura.

Ôas proteínas son filamentos largos de aminoácidos unidos en una secuencia específica.
Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la
combinación requerida de aminoácidos por la instrucción genética. las proteínas recién
creadas experimentan una modificación en la que se agregan átomos o moléculas
adicionales, como el cobre, zinc y hierro. Una vez que finaliza este proceso, la proteína
comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontáneamente, y a veces con asistencia
de enzimas) de forma tal que los residuos hidrófobos de la proteína quedan encerrados
dentro de su estructura y los elementos hidrófilos quedan expuestos al exterior. Ôa forma
final de la proteína determina cómo interaccionará con el entorno.

Si la forma de la proteína es alterada por algún factor externo (por ejemplo, aplicándole
calor, ácidos o álcalis), no es capaz de cumplir su función celular. Éste es el proceso
llamado desnaturalización.

  c c


 Tubos de ensaye
 Gradilla
 Pinzas para tubo de ensaye
 Baño María
 Pipetas de 5 y 10 mÔ
 Agua destilada
 Solución de NaOH al 20%
 Solución Acetato de Plomo al 0.5%
 Clara de huevo

c
 

1. Extraer la clara de un huevo evitando la yema del mismo.

2. Verter 1 ml de la clara obtenida del huevo en un tubo de ensaye limpio y en otro
tubo añadir 1ml de H2O destilada.
3. Agregar 2 ml de solución de NaOH al 20% a cada tubo.
4. Someter a calentamiento en baño María. aproximadamente por 3 min
5. Después de transcurrido el tiempo retirarlos y enfriar.
6. Una vez fríos añadir 2 gotas de acetato de plomo a los tubos
7. Observar lo que sucede.

Nota: al calentar el tubo hay que evitar estrictamente la aspiración de los vapores que se
desprendan ya que son tóxicos.
 c
 

Durante esta práctica se tomaron en cuenta algunos factores en la manera de hacerla ya

que al quitarle la clara al huevo debíamos hacerlo con cuidado para no romperlo y
revolver la clara con la yema, al medir el mililitro de clara de huevo con la pipeta fue un
poco difícil ya que la clara es muy espesa y en este momento podemos cometer errores,
al tener listo el tubo de ensaye con la clara de huevo y agregarle el mililitro de hidróxido
de sodio se detecto un pequeño cambio en la coloración de la clara de huevo de
transparente a amarillento, al calentar en el baño maría nuestra clara empezó a formar
una pequeña capa blanca producido por el cocimiento de la clara, mientras calentamos
procuramos evitar por completo el aspirar los vapores ya que como se indica en la
práctica son tóxicos y muy dañinos para nosotros, cuando agregamos las gotas de
acetato de plomo, observamos como rápidamente se formo un color café-negro indicando
que reacciono con la clara de huevo y el hidróxido de sodio lo cual nos formó un
precipitado.




Ôa reacción del acetato de plomo con la clara de huevo (la cual previamente ya había
reaccionado con el hidróxido de sodio) funciono de manera favorable para la detección de
azufre en la clara de huevo. Teniendo en cuenta una reacción en la cual al agregar
hidróxido de sodio a la clara, la cual contiene aminoácidos que contienen azufre esta
actúa rompiendo estos enlaces de azufre y dando como resultado de la reacción un
sulfuro de sodio el cual al reaccionar con el acetato de plomo forma un precipitado de
sulfuro de plomo y el cual para identificación tiene una coloración obscura.

Ôa siguiente figura demuestra un ejemplo de una reacción de una bacteriocina que

reacciona de la misma forma que la ovoalbúmina para formar un precipitado.


 

 ! "#$%& #!! '()*

Gracias al desarrollo de esta práctica puedo concluir que debido a las propiedades del
hidróxido de sodio al reaccionar con la clara de huevo y por consiguiente al reaccionar
con el acetato de plomo se detecto mediante un cambio de color, la presencia de azufre
en la clara de huevo, por lo que la respuesta a nuestra hipótesis seria ³si se puede
detectar la presencia de azufre en la clara de huevo´.



 c

1. Escriba la formula de los aminoácidos azufrados que podemos encontrar en las

proteínas

Cisteína Metionina

2. ¿Cuál
es la diferencia entre cistina y cisteína?

El grupo tiol de la cisteína puede formar puentes disulfuro (S-S) con otro residuo de
cisteína, por medio de la oxidación de sus grupos tiol (-SH).

3. ¿En qué péptidos con función biológica encontramos cistina?

  ´  Tripéptido constituido por tres aminoácidos glicina, cisteína, y acido

glutamico, una Ȗ-glutamilcisteinilglicina. Es un antioxidante intracelular para lo cual
usa el grupo tiol de la cisteína como agente reductor. Actúa reduciendo especies
reactivas del oxígeno como peróxido de H gracias a la enzima glutatión peroxidasa
la cual cataliza la siguiente reacción:

H2O2 + 2GSH ------- GSSG + 2 H2O.

  Hormona antidiuretica: â       


 
      

Hace que los riñones conserven agua mediante la concentración de orina y la reducción
de su volumen, estimulando la reabsorción de agua y sal. También tiene funciones en el
cerebro y en los vasos sanguíneos.

Es una hormona pequeña constituida por los aminoácidos: Cys - Tyr - Phe - Gln - Asn -
Cys - Pro - Arg - Gly -NH2

  Oxitocina: Es una hormona relacionada con los patrones sexuales y con las
conductas maternal y paternal. También se asocia con la afectividad, la ternura y
el acto de tocar. Algunos la llaman la "molécula de la monogamia" o "molécula de
la confianza". Ô 
      
   


 
   



Ôa secuencia de aminoácidos es: Cys - Tyr - Ile - Gln - Asn - Cys - Pro - Ôeu - Gly -NH2.
 4. Escriba la reacción entre un aminoácido azufrado, el NaOH y el Acetato de plomo.

Ôos aminoácidos azufrados como la metionina, cisteína, y cistina se reconocen por la

formación de precipitados de sulfuro de plomo cuando reacciona con acetato de plomo en
medio alcalino.

R-SH + 2 NaOH ĺ R-OH + SNa2 + H2O

De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de
plomo

SNa2 + (CH3-COO) 2Pb ĺ 2 CH3-COONa + SPb (Precipitado)

5.-Diseñe un desarrollo experimental que le permita establecer si la presencia de azufre,

detectada en la proteína de la clara de huevo se debe a la presencia de puentes disulfuro.

El método que se propone es el detectar en la muestra la presencia de puentes disulfuro,

para lograr esto, elegimos la técnica de determinación de puentes disulfuro por oxidación,
la cual consiste en aplicar una electroforesis a la muestra problema, para observar hacia
que electrodo se desplaza la proteína, conociendo de esta forma la carga inicial de la
proteína, posteriormente se realiza la reacción de oxidación, esta reacción se lleva a cabo
para poder romper el puente disulfuro y así la cadena quede lineal. Esta reacción consiste
en agregar a la muestra ácido perfórmico lo que da como resultado que de un puente
disulfuro se forme 2 grupos sufonatos, posteriormente, se realiza otra electroforesis para
así conocer la carga que tiene la proteína después de todo el procedimiento, si hay un
cambio en el movimiento electroforético nos indicara la presencia de puentes disulfuro.

› + Acido Perfórmico
› ›

›


Cátodo ánodo

 

Oxidación

Cátodo ánodo

  Movimiento electroforético