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Micro Practicas Total

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todas las practicas de lab de microbiologia 4 año ing quimica
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Guía de Prácticas: Microbiología Industrial
PRÁCTICA1
MATERIAL DE LABORATORIO, ACONDICIONAMIENTO Y ESTERILIZACIÓN
I.OBJETIVOS
1)
Dar a conocer al estudiante las cnicas para el acondicionamiento yesterilización de materiales y equipos más empleados en un laboratorio demicrobiología industrial.2)Ejecutar con habilidad y destreza el acondicionamiento de materiales para elanálisis microbiológico.3)Justificar la importancia de los todos de esterilización para el controlmicrobiológico de los alimentos.
II.MARCO TEÓRICO
El acondicionamiento de los materiales así como la esterilización de los mismos esel primer paso en el control microbiológico de los alimentos, pues de él dependeráel éxito del análisis.
2.1.- METODOS DE ESTERILIZACION POR CALOR
El calor actúa desnaturalizando y coagulando las proteínas.2.1.1.- ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECOSe requiere temperaturas elevadas y un periodo más prolongado decalentamiento que la esterilización con vapor. Su uso está limitado primariamentea la esterilización de material de vidrio y aquellas sustancias que seanimpermeables al vapor.El mecanismo por el cual los organismos son destruidos se basa en los efectosletales del calor seco debido a la desecación en general, lesión por oxidación yefectos tóxicos de los niveles de electrólitos.En ausencia de agua, disminuye el número de grupos polares de la cadenapeptídica y se requiere más energía para abrir las moléculas, de allí la aparentemayor estabilidad del organismo.Se emplea el horno o estufa de esterilización, en la que se aplica una temperaturade 160-170ºC durante 1 hora.
a)
Flameo o Llama Directa.
Consiste en exponer los materiales aesterilizar (asas y agujas de kolhe, espátulas, pinzas, tijeras, etc.) al contacto de lallama de un mechero para eliminar rápidamente los microorganismos del entorno;Ejemplo: mechero de Bunsen.
b)
Aire Caliente.
Para ello se utiliza un horno bacteriogico u hornoPasteur, donde se esteriliza el material a temperaturas de 170º-180ºC por 2 horas.Es generalmente empleado para esterilizar material de vidrio.
 
Guía de Prácticas: Microbiología Industrial
2.1.2ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDOSe usa el vapor, tanto porque las bacterias se mueren más rápidamente cuandose encuentran húmedas como porque el vapor proporciona un medio de distribuirel calor uniformemente en todas partes del recipiente de esterilización, el vapordebe conservarse a una presión de 1000g/cm
3
sobre la presión atmosférica paraobtener una temperatura de 121ºC. Se produce también rupturas de cadena únicaen el ADN , y la pérdida de la viabilidad de las células expuestas a calor levepuede correlacionarse con la introducción de estas rupturas. La lesión de ADNparece ser enzimática, como resultado de activación o liberación de una nucleasa.El calor produce tambien una pérdida de la integridad funcional de la membrana yfiltración de pequeñas moléculas y material absorbente de 260 nm. Este materiales de origen ribosómico y aparentemente es resultado de la degradación de losribosomas por ribonucleasas activadas por el tratamiento con calor. Existetambien degradación del ARN ribosómico y la pérdida de viabilidad de las célulasexpuestas a temperaturas elevadas.
a)
Por Ebullición.
Se coloca el material a esterilizar en agua hirviendo(100ºC) por 15-35 minutos.
b)
Vapor de agua sin Presión.
Se coloca el material a esterilizar a laacción del vapor de agua y a temperatura no mayor de 100ºC; para ello puedehacer uso del autoclave con la espita abierta. Se utiliza para materialestermolábiles como es el caso de algunos medios de cultivo.
c)
Vapor de agua con Presión.
Se realiza en un autoclave a 15 libras depresión y 121ºC por 15-20 minutos. Se emplea para esterilizar medios de cultivo ytodos aquellos materiales que no pueden esterilizarse por calor seco. Se puedeusar; autoclave, pasteurización o tindalización.
c.1) Autoclave:
es un equipo construido en acero inoxidable, de forma cilíndrica,paredes resistentes, puede ser horizontal o vertical; consta de:
Caldera de material resistente, fondo cóncavo cubierta de unacamisa metálica cilíndrica.
Dispositivos para la instalación de la fuente calofica (gas,electricidad o vapor de agua).
Orificios superiores para purga de gases de combustión.
 Tapa con válvula de seguridad, espita, manómetro.
Canastilla para colocar el material a esterilizar.
2.3ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN
Consiste en hacer pasar las sustancias líquidas o gaseosas a esterilizar a travésde membranas porosas que retienen a los microorganismos; sirve para laesterilizacn de sustancias termolábiles. El material filtrante puede ser deporcelana, tierras de infusorios, acetato de celulosa, etc.
2.4ESTERILIZACIÓN POR RADIACIÓN ULTRAVIOLETA
Poseen efectos letales y mutagénicos en las bacterias presentando su mayorefectividad como agente bactericida en la región espectral de alrededor de los260 nm de longitud de onda, éste método presenta muchas dificultades técnicas.
 
Guía de Prácticas: Microbiología Industrial
III.MATERIALES Y EQUIPO
Material de vidrio: pipetas, palcas petri
Erlenmeyer, tubos de ensayo
Papel craff, algodón, gasa, tijeras
Mechero de Bunsen
Horno Pasteur de aire caliente
Autoclave
IV.PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL4.1PREPARACN DE MATERIAL A ESTERILIZARa)Preparación de tubos matraces
Los tubos, matraces y frascos antes de su esterilización debenllevar sus tapones de algodón respectivamente, los cuales deben cerrarsuavemente no muy flojos ni apretados, ni largos ni cortos, preparadossegún el método siguiente:
De acuerdo al tan a confeccionar se toma el pedazoconvenientemente de algodón de fibra, extendida, rectangular
Practicar un dobles de 1/3 a lo largo de la fibra.
Enrollar de un extremo, presionando sobre si mismo hastacompletar toda la longitud.
Rotar con los dedos el trozo confeccionado aplastando pararsele la forma de cono truncado, con el diámetro a la medida delrecipiente a taponar, el tapón debe entrar en el recipiente hasta la mitad, yel otro medio quedar fuera. Se pueden preparar los tapones envueltos engasa para evitar el hilachamiento.
Tubos de Ensayo
Formar un paquete de tubos de ensayo taponados,empaquetarlos con papel kraft y amarrarlos, en su defecto se le envuelvecon papel sólo la zona de las bocas.
Frascos y Matraces
Los frascos y matraces se taponan con algodón, se cubre conpapel kraft y se amarra con hilo pabilo.
Colocar el nombre del medio de cultivo
Rotular la fecha de preparación.
b)Preparación para proteger las pipetas
En el extremo de succn de cada pipeta introducir unaporción de algodón con auxilio de una aguja o puntero delgado, evitando quequede muy ajustado.
Cortar tiras largas de papel kraft de unos 3 cm. de ancho, ycolocar uno de sus extremos, en una de las puntas del papel envolver lapunta de la pipeta en forma oblicua y envolver toda la longitud de la pipetagirándose en espiral en forma ajustada y en la parte terminal de la boquillase remata con una torsión para protegerla y se rompe el resto de papelsobrante.
Anotar con un lápiz la medida de la pipeta y la fecha de suesterilización.

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