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Las pruebas de hemaglutinación se utilizan con patógenos que poseen esta capacidad, generalmente virus. El ejemplo más clásico es el diagnóstico de
la influenza.
La hemaglutinación es la aglutinación de los hematíes o glóbulos rojos. Se trata de una respuesta biológica común frente determinados
microorganismos, como los virus, y se emplea rutinariamente en técnicas de tipado de grupos sanguíneos o en la determinación de cargas virales. La
hemaglutinación se debe a la presencia de antígenos en los eritrocitos, antígenos capaces de reaccionar con anticuerpos o bien con proteínas
específicas de algunos microorganismos (entre las que destacan las hemaglutininas).1
Un ejemplo de sus aplicaciones se encuentra en la detección del grupo sanguíneo (sistema ABO). Para ello, se añade un antisuero anti- A, anti-B o
anti-AB a sangre tratada con heparina o EDTA tripotasico (dos anticoagulantes). Cuando los glóbulos rojos poseen el antígeno específico para el
antisuero empleado, se produce la aglutinación.
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Método directo
1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin
anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.
2.Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya
traía la muestra, y con el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B ó Anti-D. Ejemplo:1,
13, Anti-A; 1,13, Anti-AB, etc. El procedimiento se repite para las tres muestras
restantes.
3. En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de eritrocitos con agua destilada,
de cada muestra. La dilución tomara un color rojo tenue, similar a la sangría.
4. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de eritrocitos preparada y una
gota de antisuero, según corresponda.
5.Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo
(formación de unbotón).
Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los
datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.
Metodo inverso
1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin
anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.
2.Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la muestra, y con el tipo de eritrocitos con
antigeno conocido: A1, A2, B y O. Ejemplo: 1,13, A1; 1,13, A2; etc. El procedimiento se repite para las tres muestras restantes.
3. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según corresponda
y una gota de los eritrocitos con antigeno conocido.
4.Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo
(formación de unbotón).
5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los
datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.
Interpretación:
Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción antigeno- anticuerpo) quiere decir que los
eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con los anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan
aglutinación querrá decir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero, o que el antigeno esta ausente
en esos eritrocitos. De ahí que pueda observarse que una muestra sanguínea muestre un solo tipo de antígenos del sistema ABO
sobre su membrana (A o B), ambos antígenos (AB), o ninguno de ellos (O). lo mismo sucede para el sistema Rh ; al presentarlo (Rh +)
o no (Rh -).
Para el método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación delbotón (reacción antigeno-anticuerpo) quiere decir que el
plasma del paciente ensayado tiene los anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven de
reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos
con antígenos que reaccionarían con los anticuerpos de su plasma. De ahí que el método se le nombre inverso